FI120538B - Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit - Google Patents
Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit Download PDFInfo
- Publication number
- FI120538B FI120538B FI20070677A FI20070677A FI120538B FI 120538 B FI120538 B FI 120538B FI 20070677 A FI20070677 A FI 20070677A FI 20070677 A FI20070677 A FI 20070677A FI 120538 B FI120538 B FI 120538B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- ester
- moiety
- ooc
- carboxylic
- Prior art date
Links
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 title claims description 61
- -1 4,6-dichloro-1,3,5-triazin-2-ylamino, pyridyldithio Chemical group 0.000 claims description 56
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 54
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 53
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims description 41
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 30
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 claims description 30
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 27
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 26
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 24
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 22
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 22
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims description 19
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims description 19
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 19
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 18
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 17
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 12
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 11
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 claims description 11
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Chemical class Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 7
- 229910021644 lanthanide ion Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 7
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 6
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 claims description 5
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N phosphonic acid group Chemical group P(O)(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052692 Dysprosium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052772 Samarium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KBQHZAAAGSGFKK-UHFFFAOYSA-N dysprosium atom Chemical compound [Dy] KBQHZAAAGSGFKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 150000003254 radicals Chemical group 0.000 claims description 4
- KZUNJOHGWZRPMI-UHFFFAOYSA-N samarium atom Chemical compound [Sm] KZUNJOHGWZRPMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 claims description 4
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 claims description 4
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 claims description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002103 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)(C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H])C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 101100294106 Caenorhabditis elegans nhr-3 gene Proteins 0.000 claims description 3
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 3
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 claims description 3
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 3
- 125000004309 pyranyl group Chemical group O1C(C=CC=C1)* 0.000 claims description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 3
- JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetamide Chemical compound NC(=O)CBr JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 2
- GSFVFRFSBSNYNG-UHFFFAOYSA-N O-azidohydroxylamine Chemical compound NON=[N+]=[N-] GSFVFRFSBSNYNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 2
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 2
- 125000003262 carboxylic acid ester group Chemical class [H]C([H])([*:2])OC(=O)C([H])([H])[*:1] 0.000 claims 4
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 3
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims 3
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 claims 2
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RSPISYXLHRIGJD-UHFFFAOYSA-N OOOO Chemical compound OOOO RSPISYXLHRIGJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000004106 butoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000005920 sec-butoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 52
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 44
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000001425 electrospray ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 27
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 19
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 19
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N picolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 16
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 16
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-M picolinate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- LNBHUCHAFZUEGJ-UHFFFAOYSA-N europium(3+) Chemical compound [Eu+3] LNBHUCHAFZUEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 12
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 11
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 11
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 10
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 7
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- OJCPLXMATFTJAT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(4-aminophenoxy)hexyl]propane-1,3-diol Chemical compound NC1=CC=C(OCCCCCCC(CO)CO)C=C1 OJCPLXMATFTJAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical group C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- OPRGEKRHMSUWBT-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(6-hydroxyhexyl)propanedioate Chemical compound COC(=O)C(C(=O)OC)CCCCCCO OPRGEKRHMSUWBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XBMAFXQXOQEULA-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(6-trityloxyhexyl)propanedioate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(OCCCCCCC(C(=O)OC)C(=O)OC)C1=CC=CC=C1 XBMAFXQXOQEULA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GFXIBCTZWFDFSX-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-[6-(4-nitrophenoxy)hexyl]propanedioate Chemical compound COC(=O)C(C(=O)OC)CCCCCCOC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GFXIBCTZWFDFSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 3
- ZLOUCFITKUBZDA-UHFFFAOYSA-N ethyl 6-(hydroxymethyl)-4-iodopyridine-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(I)=CC(CO)=N1 ZLOUCFITKUBZDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- UZGLIIJVICEWHF-UHFFFAOYSA-N octogen Chemical compound [O-][N+](=O)N1CN([N+]([O-])=O)CN([N+]([O-])=O)CN([N+]([O-])=O)C1 UZGLIIJVICEWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- DOSGOCSVHPUUIA-UHFFFAOYSA-N samarium(3+) Chemical compound [Sm+3] DOSGOCSVHPUUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AJJYHJOOPKXECZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-[4-[8-hydroxy-7-(hydroxymethyl)octoxy]phenyl]carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC1=CC=C(OCCCCCCC(CO)CO)C=C1 AJJYHJOOPKXECZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ITWBWJFEJCHKSN-UHFFFAOYSA-N 1,4,7-triazonane Chemical compound C1CNCCNCCN1 ITWBWJFEJCHKSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710178035 Chorismate synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710152694 Cysteine synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPCIHVVDMSLUOK-UHFFFAOYSA-N diethyl 4-iodopyridine-2,6-dicarboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(I)=CC(C(=O)OCC)=N1 OPCIHVVDMSLUOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IOIFRTZBJMZZFO-UHFFFAOYSA-N dysprosium(3+) Chemical group [Dy+3] IOIFRTZBJMZZFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006575 electron-withdrawing group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- STCBLHRJWCCQSC-UHFFFAOYSA-K europium(3+);2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [Eu+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O STCBLHRJWCCQSC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- QFWPJPIVLCBXFJ-UHFFFAOYSA-N glymidine Chemical compound N1=CC(OCCOC)=CN=C1NS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 QFWPJPIVLCBXFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- VVWRJUBEIPHGQF-MDZDMXLPSA-N propan-2-yl (ne)-n-propan-2-yloxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CC(C)OC(=O)\N=N\C(=O)OC(C)C VVWRJUBEIPHGQF-MDZDMXLPSA-N 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 2
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- HKCRVXUAKWXBLE-UHFFFAOYSA-N terbium(3+) Chemical compound [Tb+3] HKCRVXUAKWXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M tetrabutylazanium;iodide Chemical compound [I-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DPKBAXPHAYBPRL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000003577 thiophenes Chemical class 0.000 description 2
- DLQYXUGCCKQSRJ-UHFFFAOYSA-N tris(furan-2-yl)phosphane Chemical compound C1=COC(P(C=2OC=CC=2)C=2OC=CC=2)=C1 DLQYXUGCCKQSRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 1
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 1
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 1
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 1
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 1
- FJSKXQVRKZTKSI-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylfuran Chemical compound CC=1C=COC=1C FJSKXQVRKZTKSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFXXYKVSLHRBAA-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethylfuran-3-carboxylic acid Chemical compound CC1=COC(C)=C1C(O)=O JFXXYKVSLHRBAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyhexanenitrile Chemical compound CCCCC(O)C#N VKIGAWAEXPTIOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNJOEUSYAMPBAK-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzenesulfonic acid;hydrate Chemical compound O.CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O VNJOEUSYAMPBAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N 3-furoic acid Chemical compound OC(=O)C=1C=COC=1 IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- JVCWTTKJXQPITQ-UHFFFAOYSA-N 4-bromopyridine-2,6-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(Br)=CC(C(O)=O)=N1 JVCWTTKJXQPITQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical compound NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012448 Lithium borohydride Substances 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHSPJQZRQAJPPF-UHFFFAOYSA-N N-alpha-Methylhistamine Chemical compound CNCCC1=CN=CN1 PHSPJQZRQAJPPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 1
- 229910020667 PBr3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229940125907 SJ995973 Drugs 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 238000005598 Sharpless reaction Methods 0.000 description 1
- 241001231783 Teira Species 0.000 description 1
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 1
- SWSKYBRWRDKULI-UHFFFAOYSA-N [6-bromohexoxy(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(OCCCCCCBr)C1=CC=CC=C1 SWSKYBRWRDKULI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SDBCOOLMAMVEHT-UHFFFAOYSA-M [O-]C(C1=NC=CC=C1)=O.[Eu+3] Chemical compound [O-]C(C1=NC=CC=C1)=O.[Eu+3] SDBCOOLMAMVEHT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 125000005997 bromomethyl group Chemical group 0.000 description 1
- XTEOJPUYZWEXFI-UHFFFAOYSA-N butyl n-[3-[4-(imidazol-1-ylmethyl)phenyl]-5-(2-methylpropyl)thiophen-2-yl]sulfonylcarbamate Chemical compound S1C(CC(C)C)=CC(C=2C=CC(CN3C=NC=C3)=CC=2)=C1S(=O)(=O)NC(=O)OCCCC XTEOJPUYZWEXFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 1
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 1
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 1
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 1
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 1
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BEPAFCGSDWSTEL-UHFFFAOYSA-N dimethyl malonate Chemical compound COC(=O)CC(=O)OC BEPAFCGSDWSTEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- FSAYXJJXLGNURQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-bromo-6-(hydroxymethyl)pyridine-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(Br)=CC(CO)=N1 FSAYXJJXLGNURQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQDICYLHLGZWDC-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-iodo-6-(oxan-2-yloxymethyl)pyridine-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(I)=CC(COC2OCCCC2)=N1 GQDICYLHLGZWDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000005244 familial abdominal 2 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- UVRRIABXNIGUJZ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-methylfuran-3-carboxylate Chemical compound COC(=O)C=1C=COC=1C UVRRIABXNIGUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N n-[5-[2-(3-acetylanilino)-1,3-thiazol-4-yl]-4-methyl-1,3-thiazol-2-yl]benzamide Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC(NC=2SC=C(N=2)C2=C(N=C(NC(=O)C=3C=CC=CC=3)S2)C)=C1 XZMHJYWMCRQSSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- IPNPIHIZVLFAFP-UHFFFAOYSA-N phosphorus tribromide Chemical compound BrP(Br)Br IPNPIHIZVLFAFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-propan-2-yloxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CC(C)OC(=O)N=NC(=O)OC(C)C VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- ZDYVRSLAEXCVBX-UHFFFAOYSA-N pyridinium p-toluenesulfonate Chemical compound C1=CC=[NH+]C=C1.CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 ZDYVRSLAEXCVBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003458 sulfonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 125000006633 tert-butoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 1
- MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl-chloro-diphenylsilane Chemical compound C=1C=CC=CC=1[Si](Cl)(C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 MHYGQXWCZAYSLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229930192474 thiophene Natural products 0.000 description 1
- 238000001776 time-resolved fluorescence quenching Methods 0.000 description 1
- 238000001685 time-resolved fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 101150061972 zur gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
- C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
- C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/13—Labelling of peptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit
Esillä oleva teknologia koskee joukkoa kelatoivia aineita, kelaatteja, näillä kelaateilla tai kelatoivilla aineilla leimattuja biomolekyylejä kuin myös näillä kelaateilla, kelatoivilla 5 aineilla ja leimatuilla biomolekyyleillä konjugoituja kiinteitä kantajia.
Tässä keksinnön taustaa havainnollistamaan käytetyt julkaisut ja muut materiaalit ja erityisesti lisäyksityiskohtia käytön suhteen tarjoavat tapaukset on sisällytetty tähän viitteillä.
10
Pitkäkestoisesti emittoivien lantanidi(III)kelaattileimojen tai koettimien käyttö yhdessä aikaerotteisen fluorometrian kanssa detektoinnissa saa aikaan menetelmän herkkien bioaffiniteettimääritysten muodostamiseksi. Lantanidi(III)kelaatteihin perustuva aikaerotteinen fluoresenssi onkin tullut menestyksekkääksi detektointiteknologiaksi ja sitä 15 on käytetty in vzYro-diagnostiikassa yli kahden vuosikymmenen ajan. Aikaerotteisen fluoresenssin sammumisen määritystä, joka perustuu energiansiirtoon lantanidi(III)kelaatilta ei-fluoresoivalle sammuttajalle, on sovellettu erilaisissa hydrolysoivien entsyymien määrityksissä kuin myös nukleiinihappojen detektoinnissa. Europium-, terbium-, dysprosium- ja samariumkelaattien erilaiset valokemialliset • · 20 ominaisuudet ovat osoittautuneet sopiviksi moniparametristen homogeenisten määritysten • · • # kehitykseen.
• · · • · · • · · • · · • · • · .1” Pysyviin luminoiviin lantanidi(III)kelaatteihin sisältyy yleisesti ligandi, jolla on • · • · · *... reaktiivinen ryhmä kelaatin kovalenttiseksi konjugoimiseksi bioaktiiviseen molekyyliin, • · 25 aromaattinen rakenne, joka absorboi viritysenergian ja siirtää sen lantanidi-ionille sekä φ·#·# lisäksi kelatoivia ryhmiä, kuten karboksyyli- tai fosfonihappo-osia ja amiineja. Toisin kuin • · · • · .···. orgaaniset kromoforit, nämä molekyylit eivät kärsi ei-toivotusta Raman-sironnasta tai • m • · · .·. konsentraatiosammutuksesta. Täten useampia valoa absorboivia rakenneosia sisältävät • e · • · · I.I luminoivat lantanidi(III)kelaatit ovat käyttökelpoisia multipleksointiin.
• · **:*' 30 • · · · ·
Pysyvä luminoiva lantanidi(III)kelaatti on yleensä määritelty molekyyliksi, a) joka on • t *···’ valokemiallisesti pysyvä sekä perustilassa että virittyneessä tilassa, b) joka on kineettisesti pysyvä, c) joka on kemiallisesti pysyvä, d) jolla on suhteellisen korkea viritysaallonpituus, esimerkiksi yli 330 nm, e) jolla on korkea viritysvakio viritysaallonpituudella, f) jonka 2 energiansiirto ligandilta keskusionille on tehokas, g) jolla on suhteellisen pitkä luminesenssin elinikä ja h) joka on liukoinen veteen. Biologisten määritysten formaatteihin käytettynä valittu bioaktiivinen molekyyli olennaisesti säilyttää affiniteetin sitoutumispartneriin, kun se on kytketty pysyvään luminoivaan lantanidi(III)kelaattiin.
5
On tehty joukko yrityksiä aikaerotteisiin fluorometrisiin sovelluksiin sopivien kelaattien valofysikaalisten ominaisuuksien säätämiseksi. Näihin kuuluvat esim. pysyvät kelaatit, joiden energiaa välittävät ryhmät koostuvat pyridiinien [US-patentti 4.920.195, US-patentti 4.801.722, US-patentti 4.761.481, US-patentti 4.459.186, EP-patentti 0 770 610], 10 bipyridiinien[US-patentti 5.216.134], terpyridiinien [US-patenteista 4.859.777, US-patentti 5.202.423, US-patentti 5.324.825] tai erilaisten fenolisten yhdisteiden [US-patentti 4.670.572, US-patentti 4.794.191] johdannaisista ja joissa polykarboksyylihapot ovat kelatoivina osina. Lisäksi on tuotu esille erilaisia dikarboksylaattijohdannaisia [US-patentti 5.032.677, US-patentti 5.055.578, US-patentti 4.772.563], makrosyklistä kryptaatteja [US-15 patentti 4.927.923, EP-patentti] ja makrosyklisiä Schiffin emäksiä [EP-patentti 0 369 000].
On osoitettu, että europium(III)kelaatilla, joka perustuu 1,4,7-triatsasyklononaaniin, johon on kytkettynä kolme fenyylietynyylipyridinyylikromoforia, on hyvät luminesenssiominaisuudet: sen luminesenssisaanto (εΦ) on lähes kaksi suuruusluokkaa • · 20 korkeampi kuin yksittäisestä kromoforista koostuvalla kelaatilla [Heh. Chim. Acta, 1996, • · • # 79, 789]; sen kineettinen ja termodynaaminen stabiilisuus on myös suuri. Esitetty kelaatti • · · • · · ;** ei kuitenkaan ole sopiva biomolekyylien johdannaisten tekoon, koska siitä puuttuu • · • · .*** konjugoimiseen tarvittava reaktiivinen ryhmä. Lisäksi etynyyliryhmät vahingoittuvat • · • · · *... helposti suuren intensiteetin valon vaikutuksesta, mikä on ongelma erityisesti • · 25 fluoresenssimikroskopiaan perustuvissa sovellutuksissa. Alkynyyliryhmät saattavat myös #-t«t reagoida in vzYro-määrityksissä tarvittavien lisäaineiden, etenkin hyvin nukleofilisen atsidi- • · · .···. ionin, kanssa. Yllä mainitut ongelmat ratkaistiin myöhemmin korvaamalla »·· .·. fenyylietynyyliryhmät furyyli- ja trismetoksifenyylialayksiköillä, jolloin saatiin luminoivia • · · • · · eurooppium-ja samarium- [US-patenttihakemus 11/004.061] ja terbium-ja • · 30 dysprosiumkelaatteja [US-patenttihakemus 10/928.143].
• · · · · • · 3 helpommin käyttämällä tavallisia laitteistoja.Korkeampi viritysmaksimi myös vähentäisi taustaluminesenssia. Lisäksi aromaattisten kromoforien lyhyemmät aallonpituudet absorboituvat biologisiin materiaaleihin, kuten nukleiinihappoihin ja aromaattisiin aminohappoihin.
5
On myös ehdotettu atsamakrosyklien kytkemistä pitkän aallonpituuden herkistäjiin, kuten aromaattisiin heterosykleihin [esim. US-patentti 6.344.360, W02006/039505, W02007/055700, J. Chem. Soc. Perkin Trans 2, 2002, 348], Tämän tyyppisten kelaattien emissiospektri jakaantuu usein useisiin piikkeihin. Tämä puolestaan aiheuttaa ongelmia: 10 a) kvanttisaanto on suhteellisen alhainen, kun on käytettävä kapeita suotimia, kuten useamman leiman määrityksissä, b) emission lisäjuovat aiheuttavat taustasignaaleja aikaerotteiseen fluoresenssienergian siirtoon perustuvissa sovellutuksissa ja e) intensiiviset pitkän aallonpituuden emission juovat rajoittavat NIR-akseptorien käyttöä.
15 Vaikka orgaanisilla kelaattoreilla ja niiden substituenteilla on merkittävä vaikutus lantanidi(III)kelaattien valofysikaalisiin ominaisuuksiin, ei saatavilla ole mitään yleistä sääntöä näiden vaikutusten arvioimiseksi. US-patentissa 4.761.481 on ehdotettu, että fenyyli- ja naftyylisubstituoitujen 2,6-[N,N-di(karboksialkyyli)aminoalkyyli]pyridiinien aromaattisten fenyyli- ja naftyyliryhmien elektroneja vapauttavilla substituenteilla on • · I. ’1 20 hyödyllisiä vaikutuksia näiden molekyylien lantanidi-ionikelaattien valofysikaalisiin • · * . ominaisuuksiin. Minkäänlaista kokeellista näyttöä ei kuitenkaan annettu. Myöhemmin on • · · • · · osoitettu, että näin on erilaisilla terbium(III) ja dysprosium(III) kehäteillä [US- • · • · //’ patenttihakemus 11/004.061], mutta vastaavat europium(III)kelaatit ovat käytännöllisesti [... katsoen ei-luminoivia [Hemmilä et ah, J. Biochem. Biophys. Methods, 1993, 26, 283].
• · 25 Lisäksi toisin kuin US-patentissa 4.761.481 on ehdotettu, on osoitettu, että elektroneja . ·. ·. vapauttavia aminosubstituenttej a aromaattisissa rakenneosissa sisältävillä • · · .···. lantanidikelaateilla on huonot kvanttisaannot [Takalo et ah, Helv. Chim. Acta, 1993, 76, Λ 877], • · · • · · · • · T1 30 Useissa sovellutuksissa käytetään kelaattien kovalenttista konjugointia bioaktiivisiin • · · · · molekyyleihin. Tämä suoritetaan yleisimmin liuoksessa antamalla bioaktiivisen • · *···’ molekyylin amino- tai merkaptoryhmän reagoida leiman isotiosyanaatti-, maleimidi- tai N- hydroksisukkinimidijohdannaisten kanssa [Fichna, J., Janecka, A., Bioconjugate Chem., 2003,14, 3]. Koska useissa biomolekyylien leimauksen menettelytavoissa reaktio 4 suoritetaan aktivoidun leiman ylimäärän kanssa, työläitä puhdistusoperaatioita ei voida välttää. Erityisesti kun kiinnitetään useita leimamolekyylejä tai edellytetään paikkaspesifistä leimausta useiden samanlaisen reaktiivisuuden omaavien funktionaalisten ryhmien läsnä ollessa, tuotteena olevan biomolekyylikonjugaatin eristäminen ja 5 karakterisointi on vaikeaa ja usein käytännöllisesti katsoen mahdotonta.
Tavallisesti useissa sovellutuksissa, kuten homogeenisissa sammutukseen perustuvissa määrityksissä käytettävät biomolekyylikonjugaatit puhdistetaan, koska pienetkin määrät fluoresoivia epäpuhtauksia voivat lisätä luminisenssitaustaa ja vähentää siten detektoinnin 10 herkkyyttä. Täten voi olla toivottavaa suorittaa biomolekyylien konjugointi kiinteän faasin pinnalla, koska useimmat epäpuhtaudet voidaan poistaa pesemällä silloin kun biomolekyyli on ankkuroitu kiinteään faasiin. Kun biomolekyylikonjugaatti vapautuu liuokseen, tarvitaan yleensä tarvitaan vain yksi kromatografinen puhdistus.
15 Suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, leimaus liuosfaasissa on normaalikäytäntö. Näissä tapauksissa leimausreaktion tulee olla spesifinen ja biomolekyylikonjugaattien puhdistuksen mahdollisimman tehokas.
Esillä olevassa keksinnössä havaittiin, että furyylipyridyylialayksiköitä sisältävien • · 20 lantanidikelaattien valofysikaalisia ominaisuuksia voidaan räätälöidä furyylirenkaan • · * , elektroneja luovuttavilla substituenteilla. Kelaattien vesiliukoisuutta voidaan puolestaan • · · • · · *” parantaa sisällyttämällä karboksyyli- tai sulfonihapporyhmiä furyylirenkaaseen. Samat • · • · substituution vaikutukset voidaan myös saada aikaan vastaavilla tienyylijohdannaisilla.
• · • · · • · · • · • · 25 Tämän mukaisesti esillä olevan keksinnön yhdessä sovelluksessa saadaan aikaan kelatoivia 4·%·4 aineita ja näiden lantanidikelaatteja, jotka ovat käyttökelpoisia biomolekyylien • · · . · · ·. leimaamiseen j a j oita voidaan käyttää koettimina aikaerotteisessa fluoresenssi- • · • · · .·. spektroskopiassa, jolloin kromofori sisältää ainakin yhden furyyli- tai tienyylisubstituoidun • · · • · · pyridyyliryhmän, jossa furyyli- tai tienyyliryhmä on substituoitu yhdellä tai useammalla • · • · Ί* 30 samanlaisella tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä ja mahdollisesti lisäksi • · · ·· karboksyyli- tai sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen esterillä, amidilla tai suolalla.
• · • · • · ·
Yksi tämän keksinnön näkökanta tuo esille kelaatteja, jotka antavat fluoresenssin erilaisten kelatoituneiden lantanidien kanssa.
5
Yksi näkökanta on tuoda esille kelaatteja tai kelatoivia aineita, jotka ovat sopivia biomolekyylien leimaamiseen liuoksessa.
Toinen tavoite on tuoda esille kelaatteja ja kelatoivia aineita, jotka sopivat oligopeptidien, 5 oligonukleotidien ja muiden molekyylien leimaamiseen samalla, kun ne syntetisoidaan kiinten faasin pinnalla.
Eräs toinen tarkoitus on tuoda esille biomolekyylejä ja kiinteitä kantajia, jotka on leimattu näillä kelaateilla ja kelatoivilla aineilla.
10
Siten yhden sovelluksen mukaan keksintö koskee kelaattia, joka käsittää - lantanidi-ionin, Ln3+, - kromoforisen rakenneosan, joka käsittää yhden tai useampia aromaattisia yksiköitä, jolloin ainakin yksi aromaattisista yksiköistä on furyylillä tai tienyylillä substituoitu 15 pyridyyliryhmä, jolloin furyyli- tai tienyyliryhmä on substituoitu yhdellä tai useammalla samanlaisella tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä ja mahdollisesti lisäksi karboksyyli- tai sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen esterillä, amidilla tai suolalla, G, ja jolloin kromoforiset rakenneosat on kytketty .. suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän tai ne on kytketty toisiinsa syklisen « · • · · I. 20 tai ei-syklisen N-atomin sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, • » • · · ' . - kelatoivan osan, joka käsittää ainakin kaksi karboksyylihappo-tai fosfonihapporyhmää • · · .···. tai näiden happojen esteriä, amidia tai suolaa kiinnittyneenä kromoforisen rakenneosan • · • · · :·. aromaattiseen yksikköön joko suoraan tai syklisen tai asyklisen N-atomin sisältävän • · · .···. hiilivetyketjun välitykselläpä • · • · · 25 - reaktiivisen ryhmän A kytkettynä kromoforiseen rakenneosaan tai kelatoivaan osaan ; V; joko suoraan tai linkkerin L välityksellä, jolloin reaktiivinen ryhmä A mahdollistaa • · sitoutumisen biomolekyyliin tai kiinteällä faasilla olevaan funktionaaliseen ryhmään.
• ti • · • · · • · · • · . ·· ·. Töisen tämän keksinnön näkökannan mukaisesti keksintö koskee kelatoivaa ainetta, joka • · · * , 30 käsittää • · p^ - kromoforisen rakenneosan, j oka käsittää yhden tai useampia aromaattisia yksiköitä, • « jossa ainakin yksi aromaattisista yksiköistä on furyylillä tai tienyylillä substituoitu pyridyyliryhmä, jolloin furyyli- tai tienyyliryhmä on substituoitu yhdellä tai 6 useammalla samanlaisella tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä ja mahdollisesti lisäksi karboksyyli- tai sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen esterillä, amidilla tai suolalla, G, ja jolloin kromoforiset rakenneosat on kytketty suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän tai on kytketty toisiinsa syklisen tai 5 ei-syklisen N-atomin sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, - kelatoivan osan, joka käsittää ainakin kaksi karboksyylihappo- tai fosfonihapporyhmää tai näiden happojen esteriä, amidia tai suolaa kiinnittyneenä kromoforisen rakenneosan aromaattiseen yksikköön joko suoraan tai syklisen tai asyklisen N-atomin sisältävän hiili vetyketj un välityksellä, ja 10 - reaktiivisen ryhmän A kytkettynä kromoforiseen rakenneosaan tai kelatoivaan osaan joko suoraan tai linkkerin L välityksellä reaktiivisen ryhmän A mahdollistaessa sitoutumisen biomolekyyliin tai kiinteällä faasilla olevaan funktionaaliseen ryhmään.
Toisen näkökannan mukaan keksintö koskee biomolekyyliä konjugoituna tämän keksinnön 15 kelaatin tai kelatoivan aineen kanssa.
Toisen näkökannan mukaan keksintö koskee kiinteää kantajaa, joka on konjugoitu kelaatin, kelatoivan aineen tai tämän keksinnön mukaisesti leimatun biomolekyylin kanssa.
• · • · · *. 20 Toisen näkökannan mukaan tämä keksintö koskee leimattua oligopeptidiä tai orgaanista • · • · · molekyyliä saatuna kiinteän faasin synteesillä liittämällä sopiva tämän keksinnön • · · • · · XI mukainen kelatoiva aine oligopeptidin rakenteeseen oligopeptidi-syntetisaattorissa, minkä • · jälkeen suojaryhmät poistetaan ja mahdollisesti edelleen lisätään metalli-ioni.
• · · • · · • · • · * * * 25 Toisen näkökannan mukaan tämä keksintö koskee leimattua oligonukleotidia, joka on saatu kiinteän faasin synteesillä lisäämällä sopiva tämän keksinnön mukainen kelatoiva • · · • · .***. aine oligonukleotidin rakenteeseen oligonukleotidisyntetisaattorissa, minkä jälkeen ··· suojaryhmät poistetaan ja mahdollisesti edelleen lisätään myös metalli-ioni.
• · · • · • · · • · • · • * ^ 30 Kuten tässä on määritelty, viittaa ’’elektronej a luovuttava ryhmä” alkyyli- j a alkoksi- ryhmään. Alkyyliryhmä voi olla suoraketjuinen tai haaroittunut, kuten metyyli, etyyli, n- • · • · *** propyyli, z-propyyli, «-butyyli, Z-butyyli ja seft-butyyli. Alkoksiryhmä voi olla suoraketj uinen tai haaroittunut kuten metoksi, etoksi, «-propoksi, z-propoksi, «-butoksi, t-butoksi ja .vek-butoksi. Elektroneja luovuttava ryhmä voi myös olla kytkeytynyt elektroneja 7 puoleensa vetäviin ryhmiin kuten hydroksyyliin, karboksyyli-ja sulfonihapporyhmiin, jos elektroneja vetävä ryhmä on erotettu furaani- tai tiofeenirenkaasta yhdellä tai useammalla metyleeni-ryhmällä.
5 Tässä kuvatut kelaatit ja kelatoivat aineet sisältävät kromoforisen rakenneosan, joka on bivalenttinen aromaattinen rakenne, joka käsittää yhden tai useamman furyylillä tai tienyylillä substituoidun pyridyyliryhmän, jolloin furyyli- tai tienyyliryhmissä on lisäksi muita substituentteja. Furyylillä tai tienyylillä substituoitu pyridyyliryhmä pystyy absorboimaan valoa tai energiaa ja siirtämään viritysenergiaa kelatoituneelle lantanidi-10 ionille antaen vahvan fluoresenssin. Furyylillä tai tienyylillä substituoidun pyridyyliryhmän tai -ryhmien lisäksi voi kromoforinen yksikkö käsittää substituoimattomia pyridyyliryhmiä, muita substituentteja ja/tai aromaattisia ryhmiä sisältäviä pyridyyli-ryhmiä.
15 Furyyli- tai tienyyliryhmä voi olla kiinnittynyt pyridiinirenkaaseen sen C2-atomin välityksellä, tai sen C3-atomin välityksellä käyttämällä synteesistrategiassa reagensseina esim. 3-(dihydroksiboryyli)furaani- tai 3-(dihydroksiboryyli)tiofeenijohdannaisia 2-(dihydroksiboryyli)furaani- tai vastaavasti 2-(dihydroksiboryyli)tiofeenijohdannaisten sijaan. Tässä olevilla spesifisillä esimerkeillä havainnollistetuissa yhdisteissä • · J. *' 20 pyridyyliryhmän 4-asema sisältää furyyli- tai tienyylisubstituentin. Muutkin • · • · · * . pyridiinirenkaan asemat voivat olla käyttökelpoisia substituution kannalta.
• · · • · · • · · • ·· • · • · .!" Yhden sovellutusmuodon mukaan kromoforinen rakenneosa käsittää yhden, kaksi tai • ·· kolme pyridyyliryhmää, jolloin ainakin yksi näistä on furyyli- tai tienyylisubstituoitu, • · 25 jolloin tämä furyyli- tai tienyyliryhmä on substituoitu yhdellä tai useammalla samalla tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä. Erityisessä sovellutusmuodossa elektroneja • 9 9 • · .···. luovuttavat ryhmät ovat suoraketjuisia tai haaroittuneita alkyyliryhmiä, kuten metyyli, • · ··« etyyli, «-propyyli, /-propyyli, «-butyyli, /-butyyli ja se£-butyyli.
♦ · ♦ • · · • · ··· • · ♦ · *1* 30 Pyridyyliryhmät voivat kytkeytyä suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän.
«
Vaihtoehtoisesti pyridyyliryhmät ovat kytkeytyneet toisiinsa N:n sisältävien hiilivety- • · *···* ketjujen välityksellä. N:n sisältävä hiilivety ketju voi olla joko syklinen tai ei-syklinen.
Eräässä erityisessä sovellutusmuodossa on N:n sisältävä hiilivetyketju syklinen. Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka käsittävät kolme kromoforista rakenneosaa, jolloin 8 kromoforiset rakenneosat ovat kytkeytyneet toisiinsa syklisen N-atomin sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, esim. atsakruunuun perustuvat yhdisteet, ovat sopivia määrityksissä, jotka perustuvat energiansiirtoon tai sammumiseen, sillä niiden emissiospektrissä 615 nm lähellä oleva piikki on vallitseva.
5
Yhden sovellutusmuodon mukaan kromoforinen rakenneosa käsittää yhden, kaksi tai kolme karboksyyli- tai sulfonihapporyhmää tai näiden happojen esteriä, amidia tai suolaa, G. Karboksyyli- tai sulfonihapporyhmä parantaa kelaatin vesiliukoisuutta. Ryhmää G voidaan käyttää myös kelaatin kovalenttiseksi tai ei-kovalenttiseksi kytkemiseksi 10 bioaktiivisiin molekyyleihin ja kiinteälle alustalle.
Tässä kuvatut kelatoivat aineet ja kelaatit sisältävät reaktiivisen ryhmän A, joka mahdollistaa sen, että käyttäjä voi esimerkiksi sitoa kelatoivan aineen tai kelaatin kovalenttisesti biomolekyyliin tai kiinteälle alustalle. On kuitenkin olemassa sellaisia 15 sovellutuksia, joissa minkäänlainen kovalenttinen sitoutuminen ei ole tarpeen. Siten tässä kuvattua kelatoivaa ainetta tai kelaattia voidaan käyttää sellaisissa sovellutuksissa, joissa ei tarvita minkäänlaista reaktiivista ryhmää. Yksi esimerkki tämänkaltaisesta teknologiasta on esitetty esim. julkaisussa Blomberg et ah, J Immunological Methods, 1996,193, 199. Toinen esimerkki, jossa ei tarvita minkäänlaista reaktiivista ryhmää A, on eosinofiilisten ja • · ” 20 basofiilisten solujen erottaminen [W02006/072668], Tässä sovellutuksessa positiivisesti ja • · • · · ' . negatiivisesti varautuneet kelaatit sitoutuvat negatiivisesti ja vastaavasti positiivisesti • · · • · · *** varautuneille solupinnoille.
• · • · • · « • · • · • · · Tässä kuvatut kelatoivat aineet ja kelaatit voivat sisältää linkkeriryhmän L, joka • · 25 mahdollistaa sen, että käyttäjä voi esimerkiksi muuttaa steerisiä vuorovaikutuksia kelatoivan aineen tai kelaatin osien välillä. Kelatoivat aineet ja kelaatit ovat kuitenkin « · · • · .···. käyttökelpoisia ilman linkkeriryhmää. Minkäänlaista linkkeriä ei tarvita esimerkiksi • · • · · valmistettaessa voimakkaasti luminoivia partikkeleja yksinkertaisesti adsorboimalla • · · • · · M kelaatteja polymeeriin, kuten on kuvattu esimerkiksi julkaisussa Soukka et ah, Anal.
• · **:** 30 Chem., 2001, 73,2254.
• · · · · • · • · · * · · * * Vaikka useissa sovelluksissa reaktiivinen ryhmä A voitaisiin periaatteessa kiinnittää suoraan kromoforiseen ryhmään tai kelatoivaan osaan, steeristen syiden vuoksi on toivottavaa, että reaktiivisen ryhmän A ja kromoforisen ryhmän tai vastaavasti kelatoivan 9 osan välissä on linkkeri L. Linkkeri L voidaan kiinnittää myös karboksyyli- tai sulfonihapporyhmään G amidisidoksen välityksellä. Linkkeri on käyttökelpoinen sellaisissa tapauksissa, joissa kelaattia käytetään oligopeptidien ja oligonukleotidien kiinteän faasin synteesin aikana, mutta voi olla toivottava myös silloin, kun 5 biomolekyylejä leimataan liuoksessa.
Yhden sovellutusmuodon mukaan linkkeri L on muodostunut välillä yhdestä kymmeneen rakenneosaa, joista kukin rakenneosa on valittu joukosta, joka koostuu fenyleenistä, 1-12 hiiliatomia sisältävästä alkyleenistä, etynydiyylistä (-C=C-), etyleenidiyylistä (-C=C-), 10 eetteristä (-0-), tioeetteristä (-S-), amidista (-CO-NH-, -CO-NR’-, -NH-CO-ja -NR’-CO), karbonyylistä (-CO-), esteristä (-COO-ja -OOC-), disulfidista (-SS-), sulfonamidista (-SO2-NH-, -S02-NR’-), sulfonista (-SO2-), fosfaatista (-O-PO2-O-), diatsasta (-N=N-) ja tertiäärisestä amiinista, jolloin R’ edustaa alkyyliryhmää, joka sisältää vähemmän kuin 5 hiiliatomia.
15
Yhden sovellutusmuodon mukaan reaktiivinen ryhmä A on valittu joukosta, joka koostuu isotiosyanaatista, bromiasetamidistä, jodiasetamidista, maleimidistä, 4,6-dikloori-l,3,5-triatsinyyli-2-aminosta, pyridyyliditiosta, tioesteristä, amino-oksista, atsidista, hydratsidista, aminosta, alkyynistä, polymerisoituvasta ryhmästä ja karboksyylihaposta tai • · ·, 20 happohalidista tai karboksyylihapon aktiivisesta esteristä.
• · • ·· • · · • · · ”1 Siinä tapauksessa, että kelatoiva aine on kiinnitetty kiinteälle kantajalle, joka on partikkeli, • · • · .1" kuten mikropartikkeli tai nanopartikkeli tämän partikkelin valmistusprosessin aikana, • ·· ]... ^ reaktiivinen ryhmä A on polymerisoituva ryhmä, kuten metakryyliryhmä.
• · 25
Partikkeleihin polymerisoitava kelaatti tai kelatoiva aine on yleensä liukoinen orgaanisiin • · · • · . · · ·. liuottimiin. Tätä piirrettä voidaan parantaa j ättämällä karboksyyli- tai sulfonihappo-ryhmä • · • · · G pois keksinnön mukaisten kelaattien rakenteista. Edelleen tämä mahdollistaa kolmannen • · · • · · elektroneja luovuttavan ryhmän lisäämisen näiden kelaattien furyyli- tai • · “1 30 tiofeenialayksiköihin.
• · • · · • · ’1··’ Siinä tapauksessa, että kelaatti tai kelatoitava aine on tarkoitus kiinnittää kiinteälle kantajalle, kuten nanomateriaaliin, biomolekyyliin ja erilaisiin orgaanisiin molekyyleihin, käyttämällä kupari(I):n katalysoimaa Huisgen-Sharplessin dipolaarista [2+3] sykloadditio- reaktiota, reaktiivinen ryhmä A voi olla joko atsidi tai terminaalinen alkyyni.
10
On ehdotettu [US-patentti 5.985.566], että oligonukleotidit, DNA, RNA, oligopeptidit, 5 proteiinit ja lipidit voidaan tilastollisesti muuntaa käyttämällä leimamolekyylejä, jotka on kytketty platinajohdannaisiin. Nukleiinihapoissa nämä molekyylit reagoivat pääasiallisesti guaniinitähteiden N7:n kanssa. Tämän teknologian soveltamiseksi tässä kuvatuille kelaateille ja kelatoiville aineille reaktiivinen ryhmä A on o HN ta 10 A" ^ jossa kaavassa A’ on lähtevä ligandi, kuten Cl, (CL^SO, H2O ja NO3
Ryhmä A-L- voidaan kytkeä molekyyliin eri tavoilla. Se voidaan kytkeä kelatoivaan osaan, 15 aromaattiset osat yhdistävään N:n sisältävään ketjuun tai aromaattiseen yksikköön.
Viimeksi mainitussa tapauksessa ryhmä A-L- on kytketty furyyli- tai tienyylisubstituenttiin joko suoraan tai karboksyyli- tai sulfonihappo-johdannaisen G välityksellä.
• · • · • ·· 3+ ·. Yhden sovellutusmuodon mukaan kelatoitu metalli-ioni Ln on europium(III), * · · [ 20 samarium(III), terbium(III) tai dysprosium(III). Yhdessä erityisessä sovellutusmuodossa • · · •·· t o. t .···. kelatoitu metalli-ioni Ln on europium(III) ja samarium(III).
• · • · · • · • · • · · .···. Esimerkkeinä spesifisistä tämän keksinnön mukaisista kelaateista ovat seuraavat rakenteet: • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · · • · · 1 · • · · • · • · • · · 11
^zR| A
XX XkXX RfeR, XV
i Ln^ 1 rN L" , ΑνΛ HN'L'A
A-Lv Ί Γ Ί II A-L-G^>7 I I Γ1 < LA
I § § § § § A § I Ooc 'nIAi [Ar^ OOC^X|g? 1 g^. rVn?S G- ^ G/r)l r2^0,£di coo-coo-coo-coo· r2^3£ri A ί Λ ^ Xk Ά * Ά' LA-AA 4>£r, Λ\ο°°' fS ί Λ L Ln3+ A rA ΛΓΤ ΑνΑ/Νχ^λνλί
Γ Ί X X^NLn .N. Ln3"*· N
% % IIO0C N'-o°<= Acoff 11 II °oc>Afe£R1 O Q p a I fi -¾. .¾.. £«.·
1„ A?·» „&Ar-£“ r^XjAA
M . Λ-& rW r*i AAa ooc " A I § Is :··.. oocAA TOCXfe£R, • Φ • ·
• M
• A-L-G ~ : : ' Az ··· R2i>A-r1 g =:::= /1 A Ά r::· aa coo‘ xAVi xiScx
·..·· All X |_n3+> H p in in π I
oocAlJ, £ L„„ Γνί ΤνΊ - n .. . ^ Hoi oo £3o o oo *::;· -oocA^igz 8 § § 8 o o 99 : : R ^g-l-a ··· • · • · · • · · • · • · · • · • · *·· 5 joissa kaavoissa R1 ja R2 ovat elektroneja luovuttavia ryhmiä, L, G, R’ ja A on määritelty • · .···. kuten patenttivaatimuksessa 1 ja Z on joko O tai S furyylin ja vastaavasti tienyylin • · · kohdalla.
12
Yhdessä sovellutusmuodossa kelaatti on valittu seuraavista rakenteista g ^ a-l-G-o.
R2teRi R2teR' aV0 c00'
Av AnA h%-a Av / N \ L II ^K,Ln3A JL il _A -OOC^N^A/N_N.
-οο=ΑΆρ, g '00C^fetR,
Av r2"5^R1 A-L-G^ r2aTr1 ga jfx r2^r1 G R^sAf N C0° a-L G f\ r^r, xYj00' λ αλ ä, M™
jfS C.rf+y "OOC "N^N % f^S
-OOC _jS N^|j ^ OOcYAl^A_jS
N |1 OOC^^AAA2 nA| ooc^fe'Z , ^R1 'ooc^r^&
K 0^T-R1 K U=ir~G-L-A
5 ♦ ♦ 12 ♦ · joissa kaavoissa R ja R ovat samanlaisia tai erilaisia elektroneja luovuttavia ryhmiä, L, G, ·· • · • ** R’ ja A ovat kuten määritelty yllä ja Z on joko O tai S furyylin tai vastaavasti tienyylin ·· • ** kohdalla.
♦ • · « • · · # ·♦ • · //· 10 Kelatoivat aineet käytettäväksi peptidisynteesissä • « • ♦· * · « • · • ♦ **’ Yhden sovellutusmuodon mukaan tämän keksinnön mukainen kelatoiva aine on sopiva . . käytettäväksi oligopeptidin synteesissä. Tässä sovelluksessa reaktiivinen ryhmä A on • · · 1/. liittynyt kelatoivaan aineeseen linkkerin L välityksellä, ja A on karboksyylihappo tai sen * * ·* 15 suola, happohalidi tai esteri tai aminohappotähde -CH(NHR3)R4, jossa R3 on väliaikainen • · ♦ *·]·* suojaryhmä ja R4 on karboksyylihappo tai sen suola, happohalidi tai esteri. Esimerkkeinä • · ·;·' kelatoivista aineista ovat seuraavat rakenteet • · « · « • « • » 13 .¾. *&R,
riXi XxaX, r^z XXfO
Α_ίΤΝΊ η ΓΊ γνί ?\Γ\ mx-A
π π π *J * * R2^R1 * ^ Κ·Ά'ΛΆ J*> Ä ,¾ ,
a Λ· Λ- a, Q- ex R
ÄiA A ^,aä X n A fvfc; A ί Λ
ΓΊ ΓΊ rii/ T An^n^nA
tj ό T3 "o /X/k_,N ,N.
|T ir ir A R n n f \/\K._—Ί 9 9 9 9 1 "R n—^ 1..
O o O o N -^Ίι \ j j _· j R''^Ain? to nj »o R2\jr_r--pi aar, $* r&r, r^R- *%A q^r'· ΧχΧΧ ,jOl« ,x4x n n Γ·:· -¾ -4¾ • · · • · · • · · • · · lx’ A'L1'®z R%X, : ·· r2aza-ri r a^r1 • *· A^>i fT^4 v^\\ r^i X j_X XXI 1 XX XX1 ΛνΑΑλ r n
:V: A A ‘AA A
:.: * * i i • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · 12 *·;·’ 5 joissa kaavoissa R , R , L ja Z ovat kuten määritelty yllä ja A on karboksyylihappo tai sen ‘•**: suola, happohalidi tai esteri tai aminohappotähde -CH(NHR )R , jossa R on väliaikainen • · · *...* suojaryhmä, R4 on karboksyylihappo tai sen suola, happohalidi tai esteri, R” on alkyyliesteri tai allyyliesteri ja R’” on alkyyliryhmä ja G’ on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi.
14
Eräässä erityisessä sovellutusmuodossa valitut kelatoivat aineet ovat seuraavat rakenteet: G/\ r-
rii k J r^S / N \ L~A
R"^N^L_jk R. A-MLJh
flG. nA
R' rJ^r, A-L-G'x/. Q- r¥vnc1r" A- 1 11 G- A .
\\. r2^-r' r 'ι^0£κ, • · • · • · · » • * · 1 2 *·:·* 5 joissa kaavoissa R , R , L, G’ ja Z ovat kuten määritelty yllä ja A on karboksyylihappo tai • · [···* sen suola, happohalidi tai esteri tai aminohappotähde -CH(NHR3)R4, jossa R3 on • · •>#[* väliaikainen suojaryhmä ja R4 on karboksyylihappo tai sen suola, happohalidi tai esteri, • · ’** missä R on väliaikainen suojaryhmä, joka on valittu joukosta, joka koostuu ryhmistä . . Fmoc (fluorenyylimetoksikarbonyyli), Boc (tm-butyylioksikarbonyyli), tai Bsmoc (1,1- • · · • · · 10 dioksobentso[b]tiofen-2-yylimetyylioksikarbonyyli), ja R” on karboksyylihapon • · *·’ alkyyliesteri tai allyyliesteri ja G’ on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi.
• · • · · *·*·* Kelatoiva aine voidaan lisätä biomolekyyleihin peptidisyntetisaattorin avulla. Kelatoiva • i ··· aine voidaan kytkeä aminokytketylle kiinteälle kantajalle tai immobilisoituun *·**· aminohappoon aktivaattorin läsnä ollessa. Kun kondensointivaihe on viety loppuun ··· • · 15 leimausreagenssin väliaikainen aminoryhmän suojaryhmä poistetaan materiaalin ollessa edelleen kiinnitettynä kiinteälle kantajalle (esim. piperidiinillä Fmoc-suojaryhmän tapauksessa). Sitten suoritetaan toinen kytkeminen kelatoivalla aineella tai muulla 15 reagenssilla (esim. sopivasti suojattu aminohappo, steroidi, hapteeni tai orgaaninen molekyyli) kuten yllä. Kun halutun yhdisteen synteesi on viety loppuun, materiaali irrotetaan kiinteältä kantajalta ja suojaryhmät poistetaan. Puhdistaminen voidaan suorittaa HPLC-tekniikoilla. Lopulta puhdistettu ligandi muunnetaan vastaavaksi lantanidi(III)-5 kelaatiksi lisäämällä tunnettu määrä lantanidi(III)ionia.
Kelatoivat aineet käytettäväksi oligonukleotidisynteeissä
Toisen sovellutusmuodon mukaan tämän keksinnön mukainen kelatoiva aine on sopiva 10 käytettäväksi oligonukleotidin synteesiin. Tässä tapauksessa reaktiivinen ryhmä A on liitetty kelatoivaan aineeseen linkkerin L välityksellä ja A on -Z2-0-PZ3-0-R5 15 jossa toinen happiatomeista on mahdollisesti korvattu rikillä, Z3 on kloori tai NR6R7, R5 on suojaryhmä, R6 ja R7 ovat alkyyliryhmät, jotka käsittävät 1 - 8 hiiltä, ja Z2 ei ole läsnä tai se on piiriiniemäksen tai pyrimidiiniemäksen tai minkä tahansa muun modifioitujen oligonukleotidien synteesiin sopivan modifioidun emäksen radikaali. Emäs on kytketty happiatomiin joko i) suojatulla hydroksimetyyliryhmällä substituoidun hiilivetyketjun 20 välityksellä tai ii) modifioitujen oligonukleotidien synteesiin sopivan furaanirenkaan tai Γ ·.. pyraanirenkaan tai j onkin modifioidun tiiraani- tai pyraanirenkaan välityksellä.
• · • · • · · * 9 L:.: Kelatoiva aine voidaan lisätä oligonukleotideihin oligonukleotidisyntetisaattorin avulla.
• · · Käyttökelpoinen menetelmä on esitetty US-patentissa 6.949.639 ja EP-patentissa • · : *·· 25 1 308 452. Patenttijulkaisuissa on kuvattu menetelmä liittää haluttu määrä ··· *... * konj ugaattiryhmiä oligonukleotidin rakenteeseen ketj un kokoamisen aikana.
Synteesistrategian avainreaktio nukleosidisten ja asyklonukleosidisten oligonukleotidien • · · • · · ’·* * rakennusyksiköiden tuottamiseksi on Mitsunobun alkylaatio, joka mahdollistaa erilaisten ··· • · '•ym kelatoivien aineiden lisäämisen asyklonukleosidiin tai nukleosidiin ja lopulta *.:. ’ 30 oligonukleotidirakenteeseen. Kelatoivat aineet lisätään ketjun kokoamisen aikana.
·** *... · Muunnos lantanidikelaatiksi tapahtuu synteesin j älkeen suoj aryhmien poiston yhteydessä.
• · · • · · • · ·
Yhden sovellutusmuodon mukaan on Z2 jonkin tyrniini-, urasiili-, adeniini- tai sytosiini emäksen radikaali ja emäs liitetään happiatomiin i) suojatulla hydroksimetyyliryhmällä 16 substituoidun hiilivetyketjun välityksellä tai ii) 4-asemassaan suojatun hydroksimetyyli-ryhmän ja mahdollisesti lisäksi hydroksyylin, suojatun hydroksyylin tai modifioidun hydroksyylin 2-asemassaan omaavan furaanirenkaan välityksellä.
5 Yhden sovellutusmuodon mukaisesti reaktiivinen ryhmä -Z2-0-P(NR6R7)-0-R5 on valittu joukosta, joka koostuu ryhmistä o o -nV13
, DMTrtX I DMTrO. I
r< Vn V°^J
DMTrO O Ny J \_/ (,-Pr)2N'^o^CN ? ? (/-Pr)2N'P'O/V/CN (ι-Ργ)2Ν'Ρ'Ό^/ ^na. ογΝγο 0ΐτ" γ o1V r-/N^CH3 DMTrO Ο DMTrO^b DMTrtTp DMTr° ?
(/-Pr)2N'P^0^'CN (/-Pr)2N'P''0^x^CN (,-Pr)2N'%^^CN N
10 jossa - on L-linkkerin asema ja DMTr on dimetoksitrityyli.
• · • · · • · • · • ” Yhden sovellutusmuodon mukaan kelatoiva aine on valittu tätä käyttöä varten jostakin alla • · · • · · ”1 esille tuoduista spesifisistä rakenteista • · • · • · · • · • · • · · • · · • · • · • · · • · • · • · · • · · • · • · • · · 4 4 4 44··· • · ·· • · 4 4 • · · 17 Ä A ,&R.
A ΑΆ-, A·0
«-LY"a α-ΝΊ r'N'l /S Λ M HN'L-A
t ί n r ί n πι < > L Λ
* X. 1. 3? 7! a? Ri^y^p, aj a? R..>»N'Jv^li_jN
Χχ n?Ä β. ex X X G' R-^Är, <f~)Z 2ÖAZ Γ ^ Γ ^ <Χ\Ζ R2\y,-Ri A R2^-ri R” R- R" R·· R2\Ö£ri
rfX L fX 2<P)Z (f) Z
JL An A JL g^\ X i R Ar1 a RX^r1 γνί γνί AA /ΧΆ
1ί 1ί Ή·1Κ Ν ΐΠ Γ A
3 3 3 3 1 R- ,Ν^ R- Ο ο Ο ο Ν |Ί \ * 1 1 1 JL iG;^ R” ro^ N) ro N. R2Xlr_Xp1
A A AA
r&r, A- %A A- A; A
:1· Π < > f | ( ) f] f]
; X ; il g, VTlA
’:::1 R" ^ rAr1 r” r2Ari • · • · • · · • · • · * "1 A-L-GV^ °χ\ O r^£r, kXR, :’:1: Γ n" "n ' "N l
• 1 N N A-L^N N
:"·: ΓΊ f Ί T Ί ΓΊ *:1 TT τ τ ^ ^ ^ ^ • · · • · · • · • · · • · • · *·1 5 ····· • · · · • · • · ’ 1 1 joissa kaavoissa R’ ’ on karboksyylihapon alkyyliesteri tai allyyliesteri ja R’ ” on alkyyliryhmä ja joissa R1, R2, L ja G’ ovat kuten määritelty aiemmin ja A on -Z2-0-P(NR6R7)-0-R5 kuten määritelty yllä.
18
Eräässä erityisessä sovellutusmuodossa kelatoiva aine on valittu seuraavista spesifisistä rakenteista R2$£r1 r&r, g^\ Xl g- rii
ÄRVtL-AR" ^R1 r»V
Λ ^ λ ΥΛ hn'l-a r.A^L5S κ.Λ^ϊ_ϊ^ r-A^r1 A-L-Gk^ G' -^R. R2^£R1 -%r>[^r"
1-1 I R ^ N |_|A
f: -¾¾ • · · 5 • · · • · [···1 joissa kaavoissa R” on alkyyliesteri tai allyyliesteri tai karboksyylihappo ja joissa R1, R2, • · i il 2 6 7 5 · _ L ja G’ ovat kuten määritelty aiemmin ja A on -Z -0-P(NR R )-0-R kuten määritelty yllä.
• · • · • · · . . Yhteen ainoaan leimamolekyyliin kytkettyjen oligonukleotidikonjugaattien • · · *·1·1 2 ... 10 valmistamiseksi Z voidaan jättää pois rakenteesta.
• · m · *·’·’ Biomolekyylit • · • · Tämän keksinnön mukaisen kelatoivan aineen tai kelaatin kanssa konjugoitu biomolekyyli '...' 15 on oligopeptidi, oligonukleotidi, DNA, RNA, modifioitu oligo- tai polynukleotidi, kuten fosforimonotionaatti, fosforiditioaatti, fosforiamidaatti ja/tai sokerin tai emäksen osalta 19 modifioitu oligo- tai polynukleotidi, proteiini, oligosakkaridi, polysakkaridi, fosfolipidi, PNA, LNA, vasta-aine, steroidi, hapteeni, lääke, reseptoriin sitoutuva ligandi tai lektiini.
Kiinteän kantajan konjugaatit 5 Tämän keksinnön mukaiset kelaatit, kelatoivat aineet ja biomolekyylit voidaan konjugoida kiinteälle kantajalle. Kiinteä kantaja voi olla partikkeli, kuten nanopartikkeli tai mikropartikkeli, lasilevy, levy tai kiinteän faasin oligonukleotidi- tai oligopeptidisynteesiin sopiva hartsi.
10
Siinä tapauksessa, että kelaatilla tai kelatoivalla aineella on polymerisoiva ryhmä reaktiivisena ryhmänä, kelaatti tai kelatoiva aine voidaan lisätä kiinteälle kantajalle, esimerkiksi partikkeliin, samanaikaisesti partikkelien valmistuksen kanssa [Org. Biomol. Chem., 2006, 4, 1383]. Kun johdannaisten valmistukseen käytetään kupari(I):n 15 katalysomaa Huisgen-Sharpless-reaktiota, kytketään kelaatti atsidiryhmään ja kiinteästä kantajasta tehdään johdannaiset, joissa on terminaaliset alkyynit, tai päinvastoin.
Kiinteän kantajan kanssa joko kovalenttisesti tai ei-kovalenttisesti konjugoitu biomolekyyli on leimattu oligopeptidi, joka on saatu kiinteän faasin synteesillä, lisäämällä kelatoiva aine • · ** 20 oligopeptidin rakenteeseen oligopeptidisyntetisaattorilla, mitä seuraa suojaryhmien poisto • · • # ja mahdollisesti lisäksi metalli-ionin lisääminen. Vaihtoehtoisesti kiinteän kantajan kanssa • · · • ♦ · *** joko kovalenttisesti tai ei-kovalenttisesti konjugoitu biomolekyyli on leimattu • · • · .*** oligonukleotidi, joka on saatu kiinteä faasin synteesillä, lisäämällä kelatoiva aine • · • · · oligonukleotidin rakenteeseen oligonukleotidisyntetisaattorilla, mitä seuraa suojaryhmien • · 25 poistoja mahdollisesti lisäksi myös metalli-ionin lisääminen. Vaihtoehtoisesti kiinteän kantajan kanssa joko kovalenttisesti tai ei-kovalenttisesti konjugoitu biomolekyyli on • · · • « .···. DNA, RNA, oligopeptidi, oligonukleotidi, polypeptidi, polynukleotidi tai proteiini ·»« .·. leimattuna tämän keksinnön mukaisella kelaatilla.
• · · • · » • · • ♦ 30 Kuvio 1 esittää 6,6,,6”-[(oktahydro-lH-l,4,7-triatsoniini-l,4,7- «···» triyyli)tris(metyleeni)]tris[4-(4-karboksi-3,5-dimetyylifuran-2-yyli)pyridiini-2- • · *···* karboksyylihapon] europium-kelaatin (14c) viritys-ja emissiospektriä.
Keksintöä havainnollistetaan seuraavilla ei-rajoittavilla esimerkeillä.
20
ESIMERKIT
Keksintöä valaistaan edelleen seuraavilla esimerkeillä. Kokeellisessa osassa käytetyt 5 rakenteet ja synteesireitit on kuvattu kaavioissa 1 - 6. Kaavio 1 havainnollistavat kromoforien 6a - c ja 11 synteesiä. Kokeelliset yksityiskohdat on annettu esimerkeissä 1 - 17. Kaavio 2 havainnollistaa myös etyyli-6-bromimetyyli-4-(4’-metyyli-5’-etoksi-karbonyylitien-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin valmistusta alkaen kaupallisesti saatavilla olevasta 3-metyylitiofeeni-2-karboksyylihaposta. Kaaviot 3-5 havainnollistavat 10 kelaattien 14 ja 22 - 24 synteesiä. Kokeelliset yksityiskohdat on annettu esimerkeissä 18 - 37. Yhdisteet 12b sekä 14b eivät täytä patenttivaatimuksissa esitettyjä tunnusmerkistöjä.
Kokeelliset menettelytavat 15
Adsorptio-pylväskromatografia suoritettiin pylväässä, joka oli täytetty silikageelillä 60 (Merck). NMR-spektrit määritettiin joko Bruckerin 250- tai Jeolin LA-600-spektrometreillä toimien 250 ja vastaavasti 650 MHz:llä 'H:n osalta. Me4Si:tä käytettiin sisäisenä standardina. Kytkeytymisvakiot on annettu yksikköinä Hz. Elektrosumutus- • · • · | ’* 20 massaspektrit määritettiin Applied Biosystemsin Mariner ESI-TOF-laitteella. HPLC- * *' puhdistukset suoritettiin käyttämällä Shimazun LC 10 AT-laitetta varustettuna • · · *;* diodirividetektorilla, fraktionkeräimellä ja käänteisfaasikolonnilla (LiChrocart 125-3 • · • · .*** Purospher RP-18e 5 pm). Liikkuva faasi: (puskuri A): 0,02 M trietyyliammoniumasetaatti • · *... (pH 7,0); (puskuri B): A 50 % (til./til.) asetonitriilissä. Gradientti: 0 - 1 min 95 % A, 1 - 31 • · • · 25 min 95 % A - 100 % B. Virtausnopeus oli 0,6 ml min"1. Kaikki kuivat liuottimet olivat
Merckiltä ja niitä käytettiin sellaisenaan. Fluoresenssispektrit määritettiin PerkinElmer LS- • · · • m .···. 5 5-laitteella.
• · • · · • · • · · • · · *.! Esimerkki 1 • · • · *1* 30 Dietyyli-4-jodipyridiini-2,6-dikarboksylaatin (1) synteesi «IM* • · *···’ Seosta, jossa oli 4-bromipyridiini-2,6-dikarboksylaattia (8,36 g, 27,7 mmol), 57 % (paino/paino) jodivetyhapon vesiliuosta (31,05 g, 138,4 mmol) ja EtOH:a (67 ml), sekoitettiin 50 °C:ssa 1 tunnin ajan ja neutraloitiin kylläisellä NaHC03-liuoksella. Tuote 21 uutettiin vesifaasista CH2Cl2:lla (2 x 300 ml). Yhdistetyt orgaaniset fraktiot kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin kuiviin. Saanto oli 5,24 g (54 %).
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. CnHi3IN04+:lle 349,99, havaittu 349,99.
'H NMR (600 MHz, CDCI3): δ 8,63 (s, 2H); 4,50 (q, J = 7,2 Hz, 4H); 1,46 (t, J = 7,2 Hz, 5 6H).
Esimerkki 2
Etyyli-6-hydroksimetyyli-4-jodipyridiini-2-karboksylaatin (2) synteesi 10 Yhdiste 1 (5,24 g, 15,0 mmol) liuotettiin EtOH:iin (270 ml) 40 °C:ssa. Lisättiin varovaisesti NaBH4 (0,57 g, 15,0 mmol) ja seosta sekoitettiin 40 min ajan. Reaktio pysäytettiin säätämällä pH 3:ksi 28 % (paino/paino) jodivetyhapon vesiliuoksella. Seos neutraloitiin kylläisellä NaHCOa-liuoksella ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös suspensoitiin veteen (150 ml) ja tuote uutettiin vesifaasista 10 % EtOH/CH2Cl2-liuoksella (3 x 150 ml).
15 Yhdistetyt orgaaniset fraktiot kuivattiin Na2S04:M ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 2:5) antoi 2,89 g (63 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C9H,,IN03+:lle 307,98, havaittu 307,98.
’H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,37 (s, 1H); 7,95 (s, 1H); 4,83 (d,J= 3,0 Hz, 2H); 4,47 (g, ’* 20 J= 7,2 Hz, 2H); 3,29 (s, 1H); 1,44 (f, J= 7,2 Hz, 3H).
• · • · · • · · • · · *” Esimerkki 3 • · • · .1“ Etyyli-6-(tetrahydropyran-2-yylioksimetyyli)-4-jodipyridiini-2-karboksylaatin (3) synteesi • · · « · · • · • · 25 Seosta, jossa oli 2 (2,89 g, 9,4 mmol), 3,4-dihydro-27/-pyraania (1,19 g, 14,1 mmol), pyridiini-p-tolueenisulfonaattia (0,236 g, 0,94 mmol) ja CH2CI2 (50 ml), sekoitettiin yön • ♦ · .···. yli huoneenlämmössä. Liuotin haihdutettiin ja tuote puhdistettiin silikageelillä • ·♦ (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 2:5), jolloin saatiin 3,18 g (86 %) otsikon « · · • · · *.* yhdistettä.
• · T* 30 ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci4H,9IN04+:lle 392,04, havaittu 392,04.
‘H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,36 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 8,08 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 4,96 (d, J = 14,3 Hz, 1H); 4,77 (t, J = 3,6 Hz, 1H); 4,70 (d, J = 14,8 Hz, 1H); 4,47 (q, J = 7,2 Hz, 2H); 3,91 - 3,84 (m, 1H); 3,59 - 3,54 (m, 1H); 1,94 - 1,86 (m, 1H); 1,84 - 1,78 (m, 1H); 1,77-1,71 (m, 1H); 1,66 - 1,54 (m, 3H); 1,43 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
Esimerkki 4 22
Etyyli“6-(tetrahydropyran-2-yylioksimetyyli)-4-(4,-metoksikarbonyyli-5’-metyylifuran-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (4a) synteesi 5
Seoksesta, jossa oli 3 (220 mg, 0,56 mmol), metyyli-2-metyyli-3-furaanikarboksylaattia (315 mg, 2,25 mmol), KO Ac (110 mg, 1,12 mmol), tetrabutyyliammoniumjodidia (208 mg, 0,56 mmol), Pd(OAc)2 (6,3 mg, 0,028 mmol), tri-2-furyylifosfiinia (13,0 mg, 0,056 mmol) ja kuivaa DMF:ää (3,8 ml), ilma poistettiin argonilla ja sitä sekoitettiin 24 tunnin 10 ajan 120 °C:ssa. Suodatuksen ja haihduttamisen jälkeen tuote puhdistettiin silikageelillä (5 % EtOH/CH2Cl2 + 1 % trietyyliamiinia) Jolloin saatiin 150 mg (66 %) otsikon yhdistettä. ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C2iH26N07+:lle 404,17, havaittu 404,17.
Esimerkki 5 15 Etyyli-6-(tetrahydropyran-2-yylioksimetyyli)-4-(4’-metoksikarbonyylifuran-2’- yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (4b) synteesi
Otsikon yhdiste syntetisoitiin kuten kuvattu 4a:n osalta mutta käyttämällä 3-furaanikarboksylaattia.
: 20 • · • · * Esimerkki 6 • · · • · * * * * Etyyli-6-(tetrahydropyran-2-yylioksimetyyli)-4-(4 ’ -metoksikarbonyyli-3 ’ ,5 ’ - • · • · dimetyylifuran-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (4c) synteesi • · • ·♦ • « » • · • · 25 Seos, jossa oli 3 (3,7 g, 9,5 mmol), etyyliasetoasetaattia (1,2 ml, 9,5 mmol) ja metyyliprop- #·#·# 2-ynyylikarbonaattia (1,1 g, 9,5 mmol), joka syntetisoitiin kuten tuotu esille julkaisussa J.
• · · .···. Org. Chem., 2005, 70, 6980, liuotettiin kuivaan DMF:ään (97 ml) ja siitä poistettiin ilma ··· .·. argonilla. Lisättiin Pd(PPh3)4 (0,56 g, 0,48 mmol) ja K2CO3 (2,6 g, 19 mmol) ja seosta • · ♦ • · · !.* sekoitettiin yön yli pimeässä 85 °C:ssa. Seos suodatettiin ja jäännös haihdutettiin kuiviin.
*Γ 30 Jäännös liuotettiin CF^C^een ja liuos pestiin kylläisellä NaHC03:lla. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 2:5) antoi 1,1 g (27 %) otsikon • · *···* yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C23H3oN07+:lle 432,20, havaittu 432,22.
23 *H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,23 (d, J = 1,2 Hz, 1H); 7,89 (s, 1H); 5,03 (d, J = 14,1 Hz, 1H); 4,82 (m, 1H); 4,79 (m, 1H); 4,51 (q, J = 7,1,2H); 4,35 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 3,94 - 3,88 (m, 1H); 3,58 - 3,55 (m, 1H); 2,66 (s, 3H); 2,53 (s, 3H); 1,94 - 1,51 (m, 6H); 1,45 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 1,40 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
5
Esimerkki 7
Etyyli-6-hydroksimetyyli-4-(4’ -metoksikarbonyyli-5 ’ -metyylifuran-2 ’ -yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (5a) synteesi 10 Seosta, jossa oli 4a (300 mg, 0,74 mmol), p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (141 mg, 0,74 mmol) ja EtOH (30 ml), sekoitettiin 4 tunnin ajan huoneenlämmössä. Liuos haihdutettiin ja tuote puhdistettiin silikageelillä (5 % EtOH/CHzCL + 1 % trietyyliamiini) , jolloin saatiin 148 mg (63 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci6H,8N06+:lle 320,11, havaittu 320,13.
15
Esimerkki 8
Etyyli-6-hydroksimetyyli-4-(4’-metoksikarbonyyli-5,-furan-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (5b) synteesi • · • · ** 20 4b muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 7 esitettyä menetelmää.
• · • · · • · ·
Esimerkki 9 • · • · . * Etyyli-4-(4 ’ -etoksikarbonyyli-3' ,5 ’ -dimetyylifuran-2 ’ -yyli)-6-(hydroksimetyyli)pyridiini- • · • · · 2-karboksylaatin (5c) synteesi =...= 25 #·#·# Yhdiste 4c (1,11 g, 2,57 mmol) liuotettiin etanoliin (84 ml) ja lisättiinp- • · · • · .···. tolueenisulfonihapon monohydraattia (0,49 g, 2,57 mmol). Seosta sekoitettiin yön yli • ♦ ··· huoneenlämmössä. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 • · · °C/etyyliasetaatti/trietyyliamiini 10:1:1 —» 5:2:1 —> 3:5:1) antoi 0,69 g (77 %) otsikon *!' 30 yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+Hf: lask. C18H22N06+:lle 348,14, havaittu 348,15.
« · · : ‘H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,23 (s, 1H); 7,69 (s, 1H); 4,89 (s, 2H); 4,49 (q, J = 7,2 Hz, 2H); 4,35 (q, J = 7,2 Hz, 2H); 2,65 (s, 3H); 2,53 (s, 3H); 1,46 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 1,39 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
24
Esimerkki 10
Etyyli-6-bromimetyyli-4-(4’-metoksikarbonyyli-5’-metyylifuran-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (6a) synteesi 5 Seosta, jossa oli fosforitribromidia (125 mg, 0,46 mmol) ja kuivaa DMF:a, sekoitettiin 0 °C:ssa kunnes muodostui valkoinen saostuma. Lisättiin liuos, jossa oli 5a (148 mg, 0,46 mmol) seoksessa, jossa oli DMF (6 ml) ja CH2CI2 (0,2 ml). Seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan huoneenlämmössä ja neutraloitiin kylläisellä NaHCOa-liuoksella. Liuotin haihdutettiin ja tuote puhdistettiin silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 2:5), jolloin 10 saatiin 113 mg (64 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. 382,02, havaittu 382,02.
Esimerkki 11
Etyyli-6-bromimetyyli-4-(4’-metoksikarbonyylifuran-2,-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin 15 (6b) synteesi 5b muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 10 esitettyä menetelmää. Esimerkki 12 • · • · •# ’* 20 Etyyli-6-(bromimetyyli)-4-(3’,5,-dimetyyli-4,-etoksikarbonyylifuran-2’-yyli)pyridiini-2- • · * , karboksylaatin (6c) synteesi • · · • · · • ·· 1»· • · • · .!'* 5c muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 10 esitettyä menetelmää.
• · ·
Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 5:1) antoi 0,28 g (36 • · 25 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci8H2iBrN05+:lle 410,06, havaittu 410,06.
• · · .···. 'H NMR (600,13 MHz, CDC13): δ 8,24 (d, J = 1,2 Hz, 1H); 7,85 (d, J = 1,2 Hz, 1H); 4,68 • · Λ (s, 2H); 4,52 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 4,35 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 2,66 (s, 3H); 2,54 (s, 3H); 1,46 • · · (t, J = 7,0 Hz, 3H); 1,40 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
• · 30 • · • · · • · • · • · · 25
Esimerkki 13
Ftyyli-6-(fe/V-butyylidifenyylisilyylioksimetyyli)-4-bromipyridiini-2-karboksylaatin (7) synteesi 5 Esikuivattu etyyli-6-hydroksimetyyli-4-bromipyridiini-2-karboksylaatti (1,4 g, 5,4 mmol) ja imidatsoli (1,1 g, 6,5 mmol) liuotettiin kuivaan DMF:ään (1,7 ml). TBDPS-kloridi (1,78 g, 6,5 mmol) lisättiin erissä ja reaktion annettiin edetä 3 tunnin ajan huoneenlämmössä. Reaktioseos laimennettiin Et20:lla (50 ml) ja pestiin vedellä ja kyll. NaHC03:lla. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:M ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistus silikageelillä 10 (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 5:2) antoi 2,5 g (92 %) otsikon yhdistettä. ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C25H29BrN03Si+:lle 520,09, havaittu 520,06.
*H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,14 (d, J < 1 Hz, 1H); 8,04 (d, J < 1 Hz, 1H); 7,66 (d, J = 9,4 Hz, 4H); 7,43 (m, 2H); 7,38 (t, J = 9,4 Hz, 4H); 4,93 (s, 2H); 4,44 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 1,39 (t, J = 7,1 Hz, 3H); 1,15 (s, 9H).
15
Esimerkki 14
Etyyli-6-(ter/-butyylidifenyylisilyylioksimetyyli)-4-(5,-karboksitien-2’-yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (8) synteesi • · • · j# *’ 20 Yhdiste 7 (0,97 g, 1,94 mmol), 5-(dihydroksiboryyli)-2-tiofeenikarboksyylihappo (0,4 g, • · * . 2,33 mmol), CS2CO3 (0,82 g, 2,52 mmol) ja (PPh3)4Pd (45 mg, 3,88 pmol) liuotettiin • · · • · · )** kuivaan DMF:ään (7 ml) ja tästä poistettiin ilma argonilla. Reaktio kuumennettiin 95 • · • · °C:seen ja annettiin edetä yön yli. Reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpöön ja • · · kaikki kiinteät materiaalit poistettiin suodattamalla. Haihtuvat aineet poistettiin • · 25 alipaineessa ja raakatuote puhdistettiin silikageelillä (10 % MeOH/CH2Cl2 + 0,1 % HOAc) ,·#·, jolloin saatiin 0,25 g (20 %) otsikon yhdistettä.
• · * .···. ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C3oH32N05SSi+:lle 546,18, havaittu 546,61.
• · • · • · · • · · M Esimerkki 15 • · • · ’!* 30 Etyyli-6-(reH-butyylidimetyylisilyylioksimetyyli)-4-(5,-etoksikarbonyyliitien-2’- yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (9) synteesi • · • · • · ·
Yhdiste 8 (200 mg, 0,37 mmol) liuotettiin dikloorimetaaniin (200 μΐ). Lisättiin DCC (83 mg, 0,44 mmol, esiliuotettuna 9,5 ml:aan THF) ja katalyyttinen määrä DMAP:ia ja seosta 26 sekoitettiin 5 min ajan huoneenlämmössä, jonka jälkeen lisättiin kuivaa EtOH (64 μΐ, 0,55 mmol). Reaktion annettiin edetä 3 tunnin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen muodostunut DCU suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 5:3) antoi 73 mg (35 %) otsikon yhdistettä.
5 ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C32H36BrN05SSi+:lle 574,21, havaittu 574,35.
Esimerkki 16
Etyyli-6-hydroksimetyy li-4-(5 ’ -etoksikarbonyylitien-2 ’ -yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (10) synteesi 10
Yhdiste 9 (70 mg, 0,12 mmol) liuotettiin kuivaan THF:ään (2 ml). Lisättiin TBAF (64 mg, 0,24 mmol) ja seosta sekoitettiin 5 tunnin ajan huoneenlämmössä. Seos haihdutettiin kuiviin ja puhdistettiin silikageelillä (5 % MeOH/CHhCL) Jolloin saatiin 25 mg (61 %) otsikon yhdistettä.
15 ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci6H18N05S+:lle 336,09, havaittu 336,12.
Esimerkki 17
Etyyli-6-bromimetyyli-4-(5 ’ -etoksikarbonyylitien-2 ’ -yyli)pyridiini-2-karboksylaatin (11) synteesi Γ·“ 20 • · • · * . Yhdiste 10 muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 10 esitettyä • · · II! menetelmää. Puhdistus silikageelillä (5 % MeOH/CELCL) antoi 20 mg (67 %) otsikon • · .1*’ yhdistettä.
• · *... ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci6Hi7BrN04S+:lle 398,01, havaittu 398,03.
:-! 25
Esimerkki 18 • · . · · ·. 1,4,7-tris {[6 ’ -etoksikarbonyyli-4 ’ -(4 ” -metoksikarbonyyli-5 ’ ’ -metyylifuran-2 ’ ’ - • · · yyli)pyridin-2,-yyli]metyyli}-l,4,7-triatsasyklononaanin (12a) synteesi • · • · · *·* 30 Seosta, jossa oli 6a (30 mg, 0,078 mmol), 1,4,7-triatsasyklononaania (3,4 mg, 0,026 mmol), K2CO3 (18,1 mg, 0,13 mmol), MeCN (1,2 ml) ja CH2CI2 (0,2 ml) sekoitettiin yön • · *·* yli huoneenlämmössä. Liuottimet haihdutettiin ja tuote puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (10 % EtOH/CELC^ + 1 % TEA), jolloin saatiin 24 mg (89 %) otsikon yhdistettä. ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C54H61N60i5+:lle 1033,42, havaittu 1033,42.
27
Esimerkki 19 1.4.7- tris {[6 ’ -etoksikarbonyyli-4 ’ -(4 ” -metoksikarbonyylifuran-2 ’ ’ -yyli)pyridin-2 ’ -yyli]metyyli}-l,4,7-triatsasyklononaanin (12b) synteesi 5 6b muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 18 esitettyä menetelmää.
Esimerkki 20 1.4.7- tris {[6 ’ -metoksikarbonyyli-4 ’ -(4 ” -etoksikarbonyyli-3 ” ,5 ” -dimetyylifuran-2 ’ ’ -yyli)pyridin-2,-yyli]metyyli}-l,4,7-triatsasyklononaanin (12c) synteesi 10 6c muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 18 esitettyä menetelmää. Tuote puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti/trietyyliamiini 3:5:1) Jolloin saatiin 30 mg (47 %) otsikon yhdistettä. ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C57H67N60,5+:lle 1075,47, havaittu 1075,50.
15 'H NMR (600 MHz, CDCI3): δ 8,21 (s, 3H); 7,99 (s, 3H); 4,33 (q, J = 7,1 Hz, 6H); 4,03 - 3,97 (m, 6H); 4,00 (s, 9H); 3,02 (bs, 8H); 2,94 (bs, 4H); 2,57 (s, 3H); 2,55 (s, 6H); 2,48 (s, 3H), 2,46 (s, 6H), 1,38 (t, J = 7,0 Hz, 9H).
Esimerkki 21 • · • · *. 20 6,6’ ,6”-[(oktahydro-\H-1,4,7-triatsoniini-1,4,7-triyyli)tris(metyleeni)tris[4-(4-karboksi-5- • · • · · * . metyylifuran-2-yyli)]pyridiini-2-karboksyylihapon (13a) synteesi • · · • · · • · · • · · • · • · 12a liuotettiin 0,5 M KOH/MeOH:iin (1,6 ml) ja lisättiin 0,2 ml vettä. Seosta sekoitettiin • · · # ·. · # yön yli j a haihdutettiin kuiviin.
• · • · · 25
Esimerkki 22 • · · • · . · 1 ·. 6,6’ ,6 ’ ’ -[(oktahydro-1 H-1,47-triatsoniini-1,4,7-triyyli)tris(metyleeni)tris[4-(4- • · · karboksifuran-2-yyli)]pyridiini-2-karboksyylihapon (13b) synteesi • · · • · · • · ··· • · • · ·1 30 12b muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 21 esitettyä menetelmää.
• · • · · • · • · • · · 28
Esimerkki 23 6,6’ ,6” -[(oktahydro-\H-1,47-triatsoniini-l ,4,7-triyy]i)tris(metyleeni)tris[4-(4-karboksi- 3.5- dimetyylifuran-2-yyli)]pyridiini-2-karboksyylihapon (13c) synteesi 5 12c muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 21 esitettyä menetelmää.
Esimerkki 24 6,6’,6”-[(oktahydro-l//-l,47-triatsoniini-l ,4,7-triyyli)tris(metyleeni)tris[4-(4-karboksi-5-metyylifuran-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III):n (14a) synteesi 10 13a (23 pmol) liuotettiin veteen (2 ml) ja pH säädettiin 9:ksi 6 M HCl-liuoksella. Lisättiin 0,2 M europium(III)sitraattia ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 72 tunnin ajan. Tuote saostettiin säätämällä pH 4:ksi 1 M HCl-liuoksella.
ESI-TOF-MS [M+H]': lask. C45H38EuN60,5':lle 1055,15 havaittu 1055,12.
15
Esimerkki 25 6,6’,6”-[(oktahydro-l//-l,4,7-triatsoniini-l,4,7-triyyli)tris(metyleeni)tris[4-(4-karboksimetyylifuran-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III):n (14b) synteesi ·· • · •# 20 13b muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 24 esitettyä menetelmää.
• · • · · • · ·
Esimerkki 26 • · • · 6,6 ’ ,6 ” - [(oktahydro-1 H-1,4,7-triatsoniini-1,4,7-triyyli)tris(metyleeni)tris [4-(4-karboksi- • · · 3.5- dimetyylifuran-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III):n (14c) synteesi • · • · · 25 .·,·. 13c muunnettiin otsikon yhdisteeksi käyttämällä esimerkissä 24 esitettyä menetelmää.
• · · .··. ESI-TOF-MS [M+Na]+: lask. C48H45EuN6NaO|5+:lle 1121,20 havaittu 1121,20.
• · • · · 1 · • · · • · · I.I Esimerkki 27 !'"! 30
Metyyli-2-(metoksikarbonyyli)-8-(trityylioksi)oktanoaatin (15) synteesi • · • · • · ·
Natriummetoksidi (1,42 g, 26,2 mmol) liuotettiin kuivaan MeOH:iin (90 ml). Lisättiin dimetyylimalonaattia (3,0 ml, 26,2 mmol) ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä yhden 29 tunnin ajan. Lisättiin (6-bromiheksyylioksi)trifenyylimetaani (3,7 g, 8,7 mmol) ja seosta refluksoitiin yön yli. Seos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja lisättiin 50 ml 10 % sitruunahappoa. Seosta sekoitettiin sitten huoneenlämmössä 5 min ajan. Tuote uutettiin CL^Cbdla (3 x 100 ml) ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin CL^C^reen ja 5 kuivattiin Na2S04:llä. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 10:1) antoi 2,3 g (56 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+Na]+: lask. C3oH34Na05+:lle 497,23, havaittu 497,23.
'HNMR (250 MHz, CDC13): δ 7,46 - 7,42 (m, 6H); 7,33 - 7,19 (m, 9H); 3,73 (s, 6H); 3,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H); 3,03 (t, J = 6,6 Hz, 2H); 1,88 (q, J = 7,2 Hz, 2H); 1,60 (kvintetti, 2H), 10 1,41 - 1,25 (m, 6H).
Esimerkki 28
Metyyli-8-hydroksi-2-(metoksikarbonyyli)oktanoaatin (16) synteesi 15 Jodi (1,0 g, 7,9 mmol) liuotettiin MeOHriin (100 ml). Lisättiin yhdiste 15 (4,5 g, 9,5 mmol) ja seosta sekoitettiin 50 °C:ssa yhden tunnin ajan. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin CH2Cl2:een ja pestiin 10 % Na2S03:lla (40 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin kuiviin. Puhdistus silikageelillä (petrolieetteri, kp. 40 - 60 °C/etyyliasetaatti 10:1—>5:3) antoi 1,96 g (89 %) otsikon yhdistettä.
!. ** 20 ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. CnH2i05+:lle 233,14, havaittu 233,16.
• · • · · i * ·
Esimerkki 29 • · • · .!'* Metyyli-2-(metoksikarbonyyli)-8-(4-nitrofenoksi)oktanoaatin (17) synteesi • ♦♦ • · · • · • · 25 Yhdiste 16 (1,92 g, 8,3 mmol), 4-nitrofenoli (1,39 g, 10,0 mmol) ja trifenyylifosfiini (2,62 g, 10,0 mmol) liuotettiin kuivaan THF:ään (100 ml) ja ilma poistettiin tästä argonilla. Di- • · · .··♦. isopropyyliatsodikarboksylaatti (2,0 ml, 10,0 mmol) lisättiin kymmenessä erässä argonin • · ··· alla ja seosta sekoitettiin 3 päivän ajan huoneenlämmössä. Seos haihdutettiin kuiviin ja • · · ♦ ♦ · 1/. puhdistettiin silikageelillä (CH2CI2) , jolloin saatiin 2,6 g (89 %) otsikon yhdistettä.
• ♦ **:·* 30 ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. Ci7H24N07+:lle 354,15, havaittu 354,22.
'H NMR (600 MHz, CDC13): δ 8,20 (d, 2H); 6,94 (d, 2H); 4,04 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 3,74 (s, *···: 6H); 3,37 (t, J = 7,6 Hz, 1H); 1,92 (q, J = 7,6 Hz, 2H); 1,81 (kvintetti, J = 7,0, 2H); 1,48 (kvintetti, 2H); 1,43 - 1,33 (m, 4H).
Esimerkki 30 30 2-[6-(4-aminofenoksi)heksyyli]propaani-l,3-diolin (18) synteesi
Yhdiste 17 (1,19 g, 3,4 mmol) liuotettiin kuivaan THF:ään (50 ml). Lisättiin L1BH4 (0,44 5 g, 20,2 mmol) ja seosta refluksoitiin yön yli. Seoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpöön ja lisättiin MeOH (10 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 30 min huoneenlämmössä. Seos haihdutettiin kuiviin. Lisättiin kylläistä NaHCCLia ja seosta refluksoitiin yhden tunnin ajan. Seoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpöön ja suodatettiin sitten. Saostuma pestiin vedellä ja puhdistettiin silikageelillä (10 % MeOH/CH2Cl2) Jolloin saatiin 0,60 g (67 %) 10 otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. CLiH26NOj:lle 268,19, havaittu 268,20.
'H NMR (600 MHz, CDCI3): δ 6,63 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 6,49 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 4,56 (s, 2H); 3,79 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 3,35 (m, 4H); 1,74 (m, 4H); 1,63 (kvintetti, 2H); 1,48 (kvintetti, 2H); 1,37 (kvintetti, 2H), 1,37 (kvintetti, 2H); 1,31 - 1,22 (m, 6H).
15
Esimerkki 31 2- { 6-[4-(ter/-butoksikarbonyyliamino)fenoksi]heksyyli} propaani-1,3-diolin (19) synteesi Yhdiste 18 (0,55 g, 2,1 mmol) liuotettiin kuivaan DMF:ään. Lisättiin trietyyliamiinia (0,36 • · L 20 ml, 2,5 mmol) ja Boc-anhydridiä (0,53 ml, 2,3 mmol) ja seosta sekoitettiin 50 °C:ssa yhden • · I ·« • „ tunnin ajan. Seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 30 % MeOHmn CH2Cl2:ssa (50 • · · • · · *1* ml) ja pestiin kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella. Orgaaninen faasi erotettiin ja vesifaasi • · • · uutettiin CHaCLilla (2 x 50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:llä. Puhdistus tehtiin • m • ·· silikageelillä (30 % MeOH/CH2Cl2) , jolloin saatiin 0,23 g (30 %) otsikon yhdistettä.
25 'H NMR (600 MHz, CDC13): δ 7,24 (d, 2H); 6,82 (d, 2H); 3,91 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 3,81 (d, 2H); 3,65 (t, 2H); 1,78 - 1,72 (m, 3H); 1,51 (s, 9H); 1,45 (kvintetti, 2H), 1,35 (kvintetti, • ♦ Φ .···. 4H); 1,25- 1,24 (m, 2H).
• ♦ ·«· • · • · · !,! Esimerkki 32 • · • · *Γ 30 l,4,7-tris(2-nitrobentseenisulfonyyli)-9-{6-[4-(tert- butoksikarbonyyliamino)fenoksi]heksyyli}-l,4,7-triatsasyklodekaanin (20) synteesi • · • · ···
Yhdiste 19 (0,21 mg, 0,57 mmol) liuotettiin kuivaan THF:ään (8 ml). Lisättiin trifenyylifosfiini ja per(nosyloitu) dietyleenitriamiini (0,38 g, 0,57 mol) ja seoksesta 31 poistettiin ilma argonilla. Lisättiin di-isopropyyliatsodikarboksylaatti (0,34 ml, 1,71 mmol) kymmenessä erässä argonin alla. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä.
Seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin CH2Cl2:een ja se pestiin kylläisellä NaHCC>3:n vesiliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin Na2S04:llä ja puhdistettiin 5 silikageelillä (CH2CI2), jolloin saatiin 0,35 g (63 %) otsikon yhdistettä.
ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C42H52N7015S3+:lle 990,27, havaittu 990,27.
Esimerkki 33 1.4.7- tris{ [6’-(etoksikarbonyyli)-4’-(4”-etoksikarbonyyli-3 ”,5”-dimetyylifuran-2”- 10 yyli)pyridin-2 ’ -yylijmetyyli} -9- {6- [4-(ter/-butoksikarbonyyliamino)fenoksi]heksyyli} - 1.4.7- triatsasyklodekaanin (21) synteesi
Yhdiste 20 (0,12 g, 0,12 mmol) liuotettiin kuivaan DMF:ään. Lisättiin CS2CO3 (0,27 g, 0,84 mmol) ja seoksesta poistettiin ilma argonilla. Seokseen lisättiin 3-(3-15 merkaptofenyyli)propanamidimetyylipolystyreeniä (0,24 g, hartsin kapasiteetti 1,54 mmol/g) ja seosta sekoitettiin 3,5 tunnin ajan huoneenlämmössä. Lisättiin 0,24 g lisäerä 3-(3-merkaptofenyyli)propanamidimetyylipolystyreeniä ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Seos suodatettiin ja jäännös haihdutettiin kuiviin. Kuivaan DMF:ään (2 ml) lisättiin 3-(3-merkaptofenyyli)propanamidimetyylipolystyreeniä (0,24 g) ja CS2CO3 « · ** 20 (0,14 g, 0,43 mmol). Seoksesta poistettiin ilma argonilla. Nosyyli-suojattu yhdiste • ♦ • # liuotettiin kuivaan DM Ikään (2 ml) ja liuos lisättiin 3-(3- • · · • · · *** merkaptofenyyli)propanamidimetyylipolystyreenin seokseen. Seosta sekoitettiin • · • · huoneenlämmössä 3 päivän ajan. Seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin. Jäännös • · • · · *... liuotettiin kuivaan DMF:ään (4 ml). Lisättiin CS2CO3 (0,16 g, 0,49 mmol) ja 6c (R4 = Et) • · 25 (0,15 g, 0,36 mmol) ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos SS, haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin CHhCEieen ja pestiin vedellä. Orgaaninen kerros • · · .···. kuivattiin Na2S04:llä. Tuote puhdistettiin preparatiivisella TLCdlä (10 % EtOH/CH2Cl2), • · • t* jolloin saatiin 39 mg (23 %) otsikon yhdistettä.
• * · *:!:* ESI-TOF-MS [M+H]+: lask. C78HiooN70,8+ 1422,71, havaittu 1422,73.
• · **:** 30 • · • · · • · • · «· · 32
Esimerkki 34 6,6,,6”-{{9-[6-(4-aminofenoksi)heksyyli]dekahydro-l,47-triatsesiini-l,4,7-triyyli} tris(metyleeni)tris [4-(4-karboksi-3,5 -dimetyylifuran-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III):n (22a) synteesi 5
Yhdiste 21 (7 mg, 4,9 μηιοί) liuotettiin etyyliasetaattiin (700 μΐ) ja lisättiin 37 % HC1 (300 μΐ). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tunnin ajan. Seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 0,5 M KOH/MeOH:iin (1 ml). Lisättiin 10 M KOH vedessä (100 μΐ) ja liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 päivän ajan. Metanoli poistettiin reaktioseoksesta 10 alipaineessa ja pH säädettiin 8:ksi 1 M HCkllä. Lisättiin 0,2 M europium(III)-sitraatti (30 μΐ) ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Tuote puhdistettiin HPLCdlä ESI-TOF-MS [M-2H]2': lask. CeiHgiEuNyO^2' 650,67, havaittu 650,71.
Esimerkki 35 15 6,6\6’’-{{9-[6-(4-(4,6-dikloori-l,3,5-triatsinyyliamino)fenoksi]heksyyli}dekahydro-l,4,7-triatsesiini-l,4,7-triyyli}tris(metyleeni)tris[4-(4-karboksi-3,5-dimetyylifuran-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III):n (22b) synteesi
Yhdiste 22 (2,5 mg, 1,7 μηιοί) liuotettiin 1 ml:aan 0,1 M CH3COONa:a(pH 6,5).
• · ** 20 Syanuurikloridi (0,4 mg, 2,1 μηιοί) liuotettiin asetoniin (1 ml) ja lisättiin 0,3 ml vettä.
• · • · · * . Liuokset yhdistettiin, pH säädettiin 6,5:ksi 0,1 M NaOH-liuoksella ja seosta sekoitettiin • · · • · · I** huoneenlämmössä 2 tunnin ajan. Tuote seostettiin säätämällä pH 4:ksi 1 M HCkllä.
• · • ·
Saostuma pestiin kahdesti asetonilla ja kuivattiin alipainekuivaimessa.
• · ESI-TOF-MS [M-2H]2': lask. CeÄiCbEuN^O^2' 724,14, havaittu 724,09.
25
Esimerkki 36 • · .···. 2-{4,7-bis{[4-(4-karboksi-3,5-dimetyylifuran-2-yyli)]-6-karboksipyridin-2-yylimetyyli}- • · · .*. l,4,7-triatsasyklononan-l-yylimetyyli}-4-[4-(4-aminobutyyli)aminokarbonyyli-3,5- ).* dimetyylifuran-2-yyli]pyridiini-2-karboksyylihappo europium(III):n 23 synteesi **:*’ 3o • · · · ·
Seosta, jossa oli yhdistettä 14c (5 μιηοΐ), 1,4-diaminobutaani (0,45 mg, 5 μηιοί), ED AC *···’ (1,1 mg, 5,5 μηιοί) ja A-hydroksisukkinimidiä (0,5 mg) 1,2 rnlrssa DMF/vesi (4:1), sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Tuote puhdistettiin HPLCdlä.
ESI-TOF-MS [M+2H]2+: lask. 585,16, havaittu 585,17.
33
Esimerkki 37 2-{4,7-bis{[4-(4-karboksi-3,5-dimetyylifuran-2-yyli)]-6-karboksipyridin-2-yylimetyyli}- l,4,7-triatsasyklononan-l-yylimetyyli}-4-{4-[4-(4,6-dikloori-l,3,5-triatsinyyli)aminobutyyli]aminokarbonyyli-3,5-dimetyylifuran-2-yyli]pyridiini-2-5 karboksyylihappo europium(III):n 24 synteesi
Yhdiste 23 (4,5 mg, 3,9 pmol) liuotettiin 1 mkaan 0,1 M ChhCOONaia (pH 6,5). Syanuurikloridi (0,8 mg, 4,2 pmol) liuotettiin asetoniin (1 ml) ja lisättiin 0,3 ml vettä. Liuokset yhdistettiin, pH säädettiin 6,5:ksi 0,1 M NaOH-liuoksella ja seosta sekoitettiin 20 10 min ajan huoneenlämmössä. Tuote saostettiin säätämällä pH 3:ksi 1 M HCldlä. Saostuma pestiin kahdesti 2 ml :11a asetonia ja kuivattiin alipainekuivaimessa.
Esimerkki 38 PT66-antifosfotyrosiinin leimaus kelaatilla 24 15
Yhdisteen 24 vesiliuokseen (100 mM, NaHCCLm vesiliuoksessa pH 8,3) lisättiin vasta-aine (0,8 mg) ja pH säädettiin 9,3:ksi NallCOidla. Reaktion annettiin edetä yön yli pimeässä 4 °C:ssa. Leimattu vasta-aine puhdistettiin alustavasti Centricon 30-suppilolla (4500 rpm 30 min ajan käyttämällä 50 mM TSA:ta eluenttina (4 x 1 ml)) ja tämän jälkeen • · • · · L 20 pylväskromatografialla DNA-tasoisella Sephadex G50:llä (50 cm x 1 cm) käyttämällä 50 • · • · · ’ . mM TSA:ta eluenttina. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot (määritettynä • · · • · · !!! fluoresenssispektrometrialla) yhdistettiin ja suodatettiin 0,2 pm suotimen läpi.
• · • · · • · ... Esimerkki 39 • · • · * * * 25 Kinaasimääritys • * * • · · .·*·. Positiivista kontrollia (2 nM Eu-leimattua PT66 ja 10 mM fosforyloitua peptidiä: biotinyyli-8-aminokapryyli-Glu-Pro-Gln-Tyr(P03H2)-Glu-Glu-Ile-Pro-Ile-Tyr-Leu-OH; • · · !.! Bachem) ja negatiivista kontrollia (2 nM Eu-leimattua PT66 + 20 nM SA-Alexa647; 4,3 • · *·* 30 Alexa/SA) inkuboitiin 30 min ajan huoneenlämmössä. Mittaus suoritettiin Victor 3 ····· monileimalaskimella (PerkinElmer LAS) käyttämällä 50 ps viivettä/100 ps TR-ikkunaa ·” 665 nm:ssä ja 615 nm:ssä energiansiirtosignaalia ja vastaavasti europium-signaalia varten.
34
Energiansiirtosignaali 665 nm:ssä kelaatti/IgG__Keskim. Pos__Keskim. Neg__S/B_ 1,3 20108 700 28,7 2.0 __27951__974__28/7_ 2.6 __35871__1115__32,2_ 3.2 33960 1200 28,3
Eu-signaali 615 nm:ssä kelaatti/IgG__Keskim. Pos__Keskim. Neg__E_ "U 154487 208766 0/26 2.0 237086 311151 0,24 2.6 __273813__362397__0/24_ 3.2 291881 385378 0,24 • · • · • · · • · • · · • · · • · · • · · • · · • · • e • · · • · • · · • · · • · • · • · · • 1 · • · · • · • · • · · • · · · • · • · · · · « · • · 35
Br !
AHI (57% vesiliuos) NaBH4 l| I
E10H ‘ A X W X'AcOOR,
. ___ COOR4 R4OOC N COOR4 OH
1 2 R1 COOMe I MeOOCyRi )=/ 3,4-dihydro-2H-pyraam pyridnni- p-tolueeni- sulfonaatti /^N^COOR4 nj/rtA ^ f
_^ I Pd(OAc)2 II I
ch2ci2 ? K0Ac f" COOR4 tri-2-furyylifosfiim q O0 3 r A«-> 00 0
-AA0^ I V
\ /COOEt °0^ ίΓι |/^N^nOOOR4 ί: σ * • · · • · · • · ·
Rt COOR3 Rl COOR3
. 4a.c -TSQH. °γ R2 PBX a: R4= R3 = CH3 R2 = H
EtOH /L DMF A, b:R1=R2 = H;R3 = CH3 fl Ai || c: R-j= R2 = CH3; R3 = Et XL XL aX R4-· CH3 tai Et |^N COOR4 f N COOR4 OH Br ·...· 5a-c 6a-c : V: KAAVIO 1 • m • · · • · • 9 • · · • · · · · • · « · · « « • · ··* 36 COOH HOOC_
Br Br Sy^j
TBDMS-CI li^l (HO)2B
^N^COOEt “ /-N^COOEt ' ^N^COOEt
OH OTBDMS 34 OTBDMS
f CS2CO3 g
EtOOC EtOOC EtOOC
S\^ Sy
DCC ΊΓ TBAF T PBrs JL
boh X X 1 x X X
f N COOEt i^N COOEt f N COOEt OTBDMS OH Br 9 10 11
EtOOC /
COOH COOEt , JjX
Ys m y< 3 . Y
Y/ EtOH Y/S Pd(OAc)2 KOAc 1 X^ tri-2-furyy lifosfiini | N COOEt
Bu4NI o DMF Λο
I**·· XX
• · • · • · ·
EtOOC _/ EtOOC /
*···1 sO
r. TsOH J PBr3 Y
:***: EtOH (ίη DMF rYY
* 1 1 JU I
[ n COOEt f'N^COOEt OH Br • · · • · · KAAVIO 2 • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · • nti • · · · • · • · • · · 37 R3°°c r2
Ri—Λ JL ,COOR4
1 4 7-triatsasyklononaam U I
K2C03 __ R1 CH2CI2/MeCN \Γ P1 ^ y ft coor4 r3°oc\ r2 V-nV V Rz j r4ooc -00c R Rl 12a-c
W2 a Ri = R3=CH3,R2 = H
R —\ \\ ΓΟΟ' b! Ri1 2 3 R2 “ ” ^^3 1 ° li1V COOR4 c. Ri= R2= CH3; Rs = Et II N R4= CH3 taiEt T /Rl I I —\ P~Λ Eu-sitraatti KOH/MeOH Y^V^O^COO- -~ -°ocv r2 VnV UY r2 //Y -ooc
R,V
13a-c COO·
‘DOC a: Rl= CH3· R2 = H
OU \ ,R2 b-R1=R2 = H
// c: R-|= R2= CH3 R^-\ L· /COO- °·Vr T Rl rN Eu3" T^y^V^Y'COO' -°°cv r2 VnV ^ r2 /TY -ooc
·· R^ JL J
: 0 III
j·. VN 14a-c
• ·· I
• 000’ • · · • · · *·1 O KAAVIO 3 « · * · • ·· • · 1 • · • · • · · • · • · 1 • · · • 1 »·« • · • · ··1 • · • · · • · · • · ··1 • · • ·
«M
· 2 • · · • · • · 3 38
° O
V—OMe l2 y—OMe 4-nitrofenoli
TrO(CH2)6 ( -- HO(CH2)6 ( --
V-OMe MeOH V-OMe Ph3P, DIAD
15 O 16 O
O
n—λ y— OMe LiBH4 f/ / ®H
02N-/ \-0(CH2)6—( -- H2N~( _Vo(CH2)6-Y
VoMe 18 ^0H
17 cf 18
Ns
Ns-NH N HN-Ns
Boc20 r.—λ )—OH ^ ^—f - BocHN—(! V- 0(CH2)6—{ -►
' OH Ph3P, DIAD
19 1. 3-(3-merkaptofenyyli)-
Nsv /v. propanamidometyyli-
Λ—λ /—N ^ polystyreeni, Cs2C03, DMF
BocHN—v y—0(CH2)6—( N—Ns
\=/ V_N \ 2. 6c, Cs2C03, DMF
20 Ns ^ KAAVIO 4 • · • · · • · • · • · · • · · • · · • ·· ··· • · • · • · · • · • · • · · • · · • · • · • · « • · • · · • · · • · • · · • · • · * · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · • i»«t • · 1 · · • · • · • · · 39 COOEt
0 X
/ y—COOEt )=N 1. H+ \ 2 HO- /—M^y r-*-
BocHN—V V-0(CH2)6—( N-v 3- Eu-sitraatti '^EtOOC '—N > V^v 0-^/
Vm N_/—Of \ J ' ) / /OOOEt )=7 EtOOC ' \=( 21
jLyO
EtOOC
COO' \_ 22a: R = NH2 - y—COO' V=N pi syanuuri- / u\ kloridi \ λ“Ν \ Λ\ 22b: R = N x)—NH----
/7~\ /^N , / )=N
R-f ^ 0(CH2)6 ( Eu3+ N-v ci ^=7 ooc '—n A y-^ o^y
N 9—<C N
)=7 V-COCV
OOC 7 22a,b • · • ·· • · · • · · .1-. KAAVIO 4 j atk.
• · • · · • · • · • · · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • * « • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · MM· • · M« • « • · ·
OOC
40 \)1γ^00°·
LyN
EDAC, NHS L I-1 /
14C -1" 7n N
butaani-1,4-diamiim \ Eu + 7 //
°°c Vnv γ T I
OOC
Li 23 coo-
syanuuri- OOC
kloridi 7~~i| " "<0Jy^coo-
Cl
\l l_^-x 0-/ μ N^N
on,
'oocy, vnv y To H
_//T OOC
°Vr 24
/yN
coo- KAAVIO 5 • · • · • · · :. 5 • · • · · • · · • · · • · · • · · • · • · • · · • · • · • · · • · · • · • · • · · • · # # · • · · • · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · • · · · · • · · · • · • · • · · 41
Tiettyjen tämän keksinnön mukaisten kelaattien valoiysikaaliset ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. Kelaattien valoiysikaaliset ominaisuudet määritettiin mittaamalla viritys- ja emissiospektrit ja fluoresenssin elinaika TS-puskurissa (50 mM tris, 150 mM NaCl, pH 7,75) LS-55-luminisenssispektrometrillä (PerkinElmer Instruments, Connecticut, USA).
5 Mittaukset tehtiin sopivilla konsentraatioilla aina fluoresenssin intensiteetin mukaan.
Taulukko 1. Syntetisoitujen kelaattien valoiysikaaliset ominaisuudet
Yhdiste Viritys Emissio maksimi / nm aallonpituus / nm ~ä) 328 6Ϊ8 14a ~~338 618 ~14b 330 6Ϊ7 ~14c 347~ 6Ϊ8 ~b) 316 6Ϊ6 ΤΠ 6Ϊ6 "24 ~ ~323 616 10 a) 6,6’,6”-[(oktahydro-\H-1,4,7-triatsoniini-1,4,7-triyyli)tris(metyleeni)]-tris[(furan-2-yyli)pyridiini-2-karboksyylihappo] europium(III), syntetisoitu kuten tuotu esille • · : 1· julkaisussa W02005/021538 • · : I' b) 2,2,,2”,2’”-{[4-(tien-2’-yyli)pyridiini-2,6-diyyli]bis(metyleeninitriili)}- • · · * · | · * tetrakis(Qtikkahappo) europium(III), syntetisoitu kuten tuotu esille artikkelissa • · ];*·’ 15 Latva et ai., J Luminescence, 1997, 35, 149.
• · *...’ c) 2,2’,2”,2” {[4-(fur-2’-yyli)pyridiini-2,6-diyyli]bis(metyleeninitriili)}- • · • · ’ * * teira£«(etikkahappo) europium(III), syntetisoitu kuten tuotu esille julkaisussa W02005/021538 • · · • · · 14h ei keksinnön mukainen malliyhdiste • · • · · 20 • · · * ” * On ymmärrettävä, että esillä olevan keksinnön menetelmät voidaan toteuttaa erilaisissa • · • · ** sovellutusmuodoissa, joista ainoastaan joitakin on tuotu tässä esille. Vaikka esimerkit on • ·· *.* ' esitetty pääasiassa furyylijohdannaisille, voidaan samoja synteesitapoja soveltaa yhtä hyvin t · • · · " vastaaville tienyyli-johdannaisille.
42
Vaikka tässä on esitetty ainoastaan europium(III) kelaattien synteesi, on selvää, että ammattilainen pystyy valmistamaan vastaavat samarium(III)-, terbium(III)- ja dysprosium(III)-kelaatit käyttämällä tässä esille tuotuja menetelmiä korvaamalla europium(III)suola halutulla lantanidi(III)-suolalla. Alan ammattilaiselle on selvää, että 5 muitakin sovellutusmuotoja on olemassa eivätkä ne poikkea tämän keksinnön hengestä. Siten esitetyt sovellutusmuodot ovat havainnollistavia eikä niitä pitäisi pitää rajoittavina.
t · • · • · · • · t · • ·· • · · • · · • · · • ·· • · • · • · · • · • · • · · • · · • · • · ·· · • 9 • 99 • 99 • 9 9 · 9 9 9 9 9 • 9· • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 99 9 9 9 9 99 9 • • · ·· · • · M· • · • · 99 9
Claims (20)
1. Kelaatti, j oka käsittää - lantanidi-ionin, Ln3+, 5. kromoforisen rakenneosan, - kelatoivan osan, joka käsittää ainakin kaksi karboksyylihappo- tai fosfonihappo-ryhmää tai näiden happojen esteriä, amidia tai suolaa kiinnittyneenä kromoforisen rakenneosan aromaattiseen yksikköön joko suoraan tai syklisen tai asyklisen N:n sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, ja 10. reaktiivisen ryhmän A kytkettynä kromoforiseen rakenneosaan tai kelatoivaan osaan joko suoraan tai linkkerin L välityksellä reaktiivisen ryhmän A mahdollistaessa sitoutumisen biomolekyyliin tai kiinteällä faasilla olevaan funktionaaliseen ryhmään, tai ei ole läsnä, jolloin i. reaktiivinen ryhmä A on valittu joukosta, joka koostuu isotiosyanaatista, 15 bromiasetamidista, jodiasetamidista, maleiini-imidistä, 4,6-dikloori-1,3,5-triatsin-2- yyliaminosta, pyridyyliditiosta, tioesteristä, amino-oksista, atsidista, hydratsidista, aminosta, alkyynistä, polymerisoituvasta ryhmästä ja karboksyylihaposta tai happohalidista tai näiden aktiivisesta esteristä tai : *·· f~~\ !’·- %'Γ 20. v • · · • · · • · · • · • · ··, jossa A’ on lähtevä ligandi, kuten Cl, (CE^SO, H2O ja NO3 ja jossa - on L- • · · . · · ·, linkkerin asema, • · IM ii. linkkeri L on muodostunut välillä yhdestä kymmeneen rakenneosasta, joista kukin 25 rakenneosa on valittu joukosta, joka koostuu fenyleenistä, 1 - 12 hiiliatomia • · ;***; sisältävästä alkyleenistä, etynydiyylistä (-C^C-), etyleenidiyylistä (-C=C-), • · · eetteristä (-0-), tioeetteristä (-S-), amidista (-CO-NH-, -CO-NR’-, -NH-CO- ja - • · · ,···. NR’-CO-), karbonyylistä (-CO-), esteristä (-COO- ja -OOC-), disulfidista (-SS-), • · • . sulfonamidista (-SO2-NH-, -SO2-NR’-), sulfonista (-SO2-), fosfaatista (-O-PO2-O-), MIM • · ... 30 diatsasta (-N=N-) ja tertiäärisestä amiinista, missä R’ edustaa alkyyliryhmää, joka • · • · sisältää vähemmän kuin 5 hiiliatomia, iii. kromoforinen rakenneosa käsittää yhden tai useampia aromaattisia yksiköitä, jossa ainakin yksi aromaattisista yksiköistä on furyylillä tai tienyylillä substituoitu pyridyyliryhmä, jossa furyyli- tai tienyyli-ryhmä on substituoitu yhdellä tai useammalla samanlaisella tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä ja 5 mahdollisesti lisäksi karboksyyli- tai sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen esterillä, amidilla tai suolalla, G, ja jossa kromoforiset rakenneosat on kytketty suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän tai on kytketty toisiinsa syklisen tai ei-syklisen N:n sisältävän hiilivetyketjun välityksellä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen kelaatti, tunnettu siitä, että se on valittu joukosta, joka koostuu rakenteista ·· • · • · · ·· • · • ·· • · · • · · • · · • · · • · • 1 • · · • · • · • · · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · • · · • · • · • · · · t · · • · • · • · · fez 1 1 ,¾2 R2-\VjA.r1 K ^ r a K R2^VA-.r1 & Xx.nJv^ Xv A-L^N.Ln3 m N Ln N 1 R>M HN., _λ T ^ Γ Ί ΓΊ A"L'GiAz f ^ f^\ o o O O O Q r2«X. O O _„^S. o o o O O o K ^p~-R1 O O OOC N I I > q o q o q q q q I -ooc-^lg? r G /N. LnVnn r R Ri R2\0£ni Λ rAAri coo-coo-coo-coo· tftQL·, A ( Λ 3 A "Ά A "Ά· Α^ΆΑ, R!!g£ M» X X X - η AAr ΛαΑΛ 1! 11 ™Λ αχ A a*"^n o o O O *? ||_ \ π π χ π JL JiG~ C00- 80. q -ooc^^ZRi A-L-G^-s GX>7 G ^ A-L-G a A a*· A* „,ίζ)£ , Γ-'ζΧοοο- R!£>iR1\ [ n coo ......I An R ANA An / NA /n-n OOC ^n-n jTl<NLn3;> X jL>Ln3A I I Ln3» Γ 1 ooAn-^AjS ooc N I—Π 8 8 8 8 A nA Q O q q -oocAAG^Zri ooc^4^Zr1 • ♦· ·· : "·· A-L-G^ • ·’♦ R2fcAi _ .=. A Ai, A„. r¥ rvU ίΓΑ Γ4i rAi ill ill fn : ·* A /W A J-ί XX JL ΛνΑ^νΛ °°c vM_JS i L„. ^-^"Ί “* (Λ I>U 88 8888 88 ::: ooc^AA? q q q q q 9 • · K '—^G-L-A ··· • ♦ • · ··· • · t t *1*2 · ί#ί#ϊ joissa kaavoissa R jaR ovat elektroneja luovuttavia ryhmiä, L, G, R’ ja A on määritelty ·«· :M1! kuten patenttivaatimuksessa 1 ja Z on joko O tai S furyylin ja vastaavasti tienyylin osalta. ....: 5 % · ·***; 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen kelaatti, tunnettu siitä, että on valittu joukosta, ··· joka koostuu rakenteista G λ. A"L·‘^v^s R2fe£Ri R2^Ri r^>?r, f^V R^ip.^C/'000' ΧΒΛ~Λ λ Υ"Λ Γ 11 On3;/ L JL ^NLn3+N^ oocO^N N> -ooc^N^N JN> -°-M&R, -°“Μ^£κ, G.^7 R2^^R1 A-L-G^, Ό v ' Ä riMr’ Äxr XÄ R^R>dN co°- [^S| /, Or OOC ^ 0]| /^N3+\ ™AJvW Λ «A^ ώχ -^¾ Λ,. ‘OOC^OO? 1 R \— R1 r \— G-L-A joissa kaavoissa R1 ja R2 ovat elektroneja luovuttavia ryhmiä, L, G, R’ ja A on määritelty 5 kuten patenttivaatimuksessa 1 ja Z on joko O tai S furyylin ja vastaavasti tienyylin osalta. • · : ** 4. Patenttivaatimuksien 1 - 3 mukainen kelaatti, tunnettu siitä, että lantanidi-ioni • · * 1 ·3 i ♦ t ** Ln on europium, samarium, terbium tai dysprosium. • ♦ ♦ • · · ··· • · · *···1 10 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen kelaatti, t u n n e 11 u siitä, että lantanidi-ioni Ln3+on ♦ · • ** europium tai samarium. • · • · ···
6. Patenttivaatimuksien 1-5 mukainen kelaatti, tunnettu siitä, että elektroneja • · · • · · *.1 luovuttavat ryhmät on valittu joukosta metyyli, etyyli, zz-propyyli, z-propyyli, n-butyyli, t- • » • « *11 15 butyyli, .se^-butyyli, metoksi, etoksi, zz-propoksi, z-propoksi, zz-butoksi, Z-butoksi ja sek- • · • · · *·1♦1 butoksi. ··1 • · • · • · · ϊ 1 1 1 7. Kelatoi va aine, j oka käsittää • · φ ·...· - kromoforisen rakenneosan, 20. kelatoivan osan, joka käsittää ainakin kaksi karboksyylihappo- tai fosfonihappoesteriä, tai mainittujen happojen amidia kiinnittyneenä kromofoorisen rakenneosan aromaattiseen yksikköön joko suoraan tai syklisen tai asyklisen N:n sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, ja - reaktiivisen ryhmän A kytkettynä kromofooriseen rakenneosaan tai kelatoivaan osaan joko suoraan tai linkkerin L välityksellä, mainitun reaktiivisen ryhmän A 5 mahdollistaessa sitoutumisen biomolekyyliin tai kiinteällä faasilla olevaan funktionaaliseen ryhmään, tai ei ole läsnä, jolloin i. reaktiivinen ryhmä A on karboksyylihappo tai sen suola, happohalidi tai esteri tai aminohappotähde -CH(NHR3)R4, jossa R3 on väliaikainen suojaryhmä ja R4 on karboksyylihappo tai sen suola, happohalidi tai esteri, 10 ii. linkkeri L on muodostunut välillä yhdestä kymmeneen rakenneossa, joista kukin rakenneosa on valittu joukosta, joka koostuu fenyleenistä, 1 -12 hiiliatomia sisältävästä alkyleenistä, etynydiyylistä (-C=C-), etyleenidiyylistä (-C=C-), eetteristä (-0-), tioeetteristä (-S-), amidista (-CO-NH-, -CO-NR’-, -NH-CO-ja -NR’-CO-), karbonyylistä (-CO-), esteristä (-COO- ja -OOC-), disulfidista (-SS-), 15 sulfonamidista (-SO2-NH-, -SC^-NR’-), sulfonista (-SO2-), fosfaatista (-O-PO2-O-), diatsasta (-N=N-) ja tertiäärisestä amiinista, jossa R’ edustaa alkyyliryhmää, joka sisältää vähemmän kuin 5 hiiliatomia, iii. kromoforinen rakenneosa käsittää yhden tai useampia aromaattisia yksiköitä, jossa ainakin yksi aromaattisista yksiköistä on furyylillä tai tienyylillä substituoitu • « *. 20 pyridyyliryhmä, missä furyyli- tai tienyyli-ryhmä on substituoitu yhdellä tai • · • · · ' . useammalla samanlaisella tai erilaisella elektroneja luovuttavalla ryhmällä ja • · · • · · III mahdollisesti lisäksi karboksyyli- tai sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen • · .!** esterillä, amidilla tai suolalla, G, ja jossa kromoforiset rakenneosat on kytketty • · · \^ suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän tai on kytketty toisiinsa syklisen • · 25 tai ei-syklisen N:n sisältävän hiilivetyketjun välityksellä. • · * • · · .···. 8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen kelatoiva aine, t u n n e 11 u siitä, että elektroneja .·. luovuttavat ryhmät on valittu joukosta metyyli, etyyli, u-propyyli, i-propyyli, n-butyyli, t- • · · • · · I.I butyyli, sec-butyyli, metoksi, etoksi, n-propoksi, /-propoksi, n-butoksi, f-butoksi ja sek- • · *1* 30 butoksi. • · · · · • · ***** 9. Patenttivaatimuksen 7 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että se on valittu joukosta, joka koostuu rakenteista Mi#. Μ^Μψ# ;^£ri Ä jfer (Qro A-L N N. .N. N K V RVi,x\ HN. t ί n n ^-¾¾ η λ l-a *. ^ *» *. ^ R2\0Ar1 ^ R”^N^^fL jK j£l Au g:, ax xs ,n βχ R r!^N’ *&* A R^R' R" R” R” R" r2^Ri g. 0. j^UQl <&., Λ r/$£r’a «ψ* r N Α A? r»^r A t A, γΊ n ,3 JS -ο V η,.Λ,ΛθΝ nC /N. .nl TT TT TT T R ^ N A X \^\Ki____ A > O O O O - I ..A N----\x 1., x x x x K,-Nv R / R oo oo N il \ * ^ JLJ^vs R" _= j _= j R"^^vinz a^r, ^/¾. Ml# (&* R%R,ifA R' .NQ XM Cl Cl r A^r, • · • · • · · :*·.. a-l-ga (fa :... R2fc£R, r^r. *** An J\ an fNN A, AN =:::= XWX ΛΚ^Λ •:.:;· γνί γΊ αΎί γνί :: i * i i » » * * ··♦ ; j ; ; « - » • · · • · · ;]t' joissa kaavoissa R1 ja R2 ovat elektroneja luovuttavia ryhmiä, L on kuten määritelty * « * * * patenttivaatimuksessa 7, ja suojaryhmä R3 on valittu joukosta, joka koostuu ryhmistä *. i. * 5 Fmoc, Boc tai Bsmoc, ja R” on alkyyliesteri tai allyyliesteri, R” ’ on alkyyliryhmä, ja • · · *...* joissa Z on joko O tai S, ja G'on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi. • · · • · · • · · • ·
10. Patenttivaatimuksen 7 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että se on valittu ryhmästä, joka koostuu <ν\ r. Är, Μκ, RfeR, Λ ΛΤ λ A η%-λ p-AA^JS pA^-W
1 IIg- A “3&, ,&* r&r, A^r" R>% ? r^R- A ΛΛ λ /"Λ r..an^n_n p-AJou^ r,.a1X%2;z ^01¾ Är’ r"^V^£r, joissa kaavoissa R1 ja R2 ovat elektroneja luovuttavia ryhmiä, L on kuten määritelty patenttivaatimuksessa 7, j a suoj aryhmä Ron valittu j oukosta, j oka koostuu ryhmistä j\# 5 Fmoc, Boc tai Bsmoc, ja R” on alkyyliesteri tai allyyliesteri, ja joissa Z on joko O tai S, ja : ·*; G'on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi. • · · • · · • · • · • · · j’·.. 11. Kelatoiva aine, joka käsittää • · · • ί - kromoforisen rakenneosan • · · 10. kelatoivan osan, j oka käsittää ainakin kaksi karboksyylihappo- tai • · · V · fosfonihappoesteriä, tai mainittujen happojen amidia kiinnittyneenä kromoforisen • · · rakenneosan aromaattiseen yksikköön joko suoraan tai syklisen tai asyklisen N:n ::: sisältävän hiilivetyketjun välityksellä, j a • · · :: - reaktiivisen ryhmän A kytkettynä kromofooriseen rakenneosaan tai kelatoivaan : * j * · 15 osaan j oko suoraan tai linkkerin L välityksellä mainitun reaktiivisen ryhmän A : * ·. · mahdollistaessa sitoutumisen biomolekyyliin tai kiinteällä faasilla olevaan • · funktionaaliseen ryhmään, jolloin i. reaktiivinen ryhmä A on -Z2-0-PZ3-0-R5 5 jossa yksi tai kaksi happiatomeista on mahdollisesti korvattu rikillä, Z3 on kloori tai NR6R7, R5 on suojaryhmä, R6 ja R7 ovat alkyyliryhmät, jotka käsittävät 1 - 8 hiiltä,
10 Z2 ei ole läsnä tai on puriiniemäksen tai pyrimidiiniemäksen tai minkä tahansa muun modifioitujen oligonukleotidien synteesiin sopivan modifioidun emäksen radikaali, mainitun emäksen ollessa kytketty happiatomiin joko a) suojatulla hydroksimetyyliryhmällä substituoidun hiilivetyketjun 15 välityksellä tai b) modifioitujen oligonukleotidien synteesiin sopivan furaanirenkaan tai pyraanirenkaan tai jonkin modifioidun furaani-tai pyraanirenkaan välityksellä ii. linkkeri L on muodostunut välillä yhdestä kymmeneen rakenneossa, joista • · 20 kukin rakenneosa on valittu joukosta, joka koostuu fenyleenistä, 1 - 12 • · * * * * , hiiliatomia sisältävästä alkyleenistä, etynydiyylistä (-C=C-), etyleenidiyylistä • · · “I (-C=C-), eetteristä (-0-), tioeetteristä (-S-), amidista (-CO-NH-, -CO-NR’-, • · -NH-CO- ja -NR’-CO-), karbonyylistä (-CO-), esteristä (-COO- ja -OOC-), disulfidista (-SS-), sulfonamidista (-SO2-NH-, -S02-NR’-), sulfonista (-SO2-), • · 25 fosfaatista (-O-PO2-O-), diatsasta (-N=N-) ja tertiäärisestä amiinista, jossa R’ edustaa alkyyliryhmää, joka sisältää vähemmän kuin 5 hiiliatomia • · · • · .···. iii. kromoforinen rakenneosa käsittää yhden tai useampia aromaattisia • · ··» . ·. yksiköitä, j oissa ainakin yksi aromaattisista yksiköistä on furyylillä tai • · · • · · M tienyylillä substituoitu pyridyyliryhmä, missä furyyli- tai tienyyliryhmä on • · • · 30 substituoitu yhdellä tai useammalla samanlaisella tai erilaisella elektroneja • · * · · luovuttavalla ryhmällä ja mahdollisesti lisäksi karboksyyli- tai • · *···’ sulfonihapporyhmällä tai näiden happojen esterillä, amidilla tai suolalla, G, ja missä kromofooriset rakenneosat on kytketty suoraan toisiinsa muodostaen terpyridyyliryhmän tai on kytketty toisiinsa syklisen tai ei-syklisen N:n sisältävän hiilivetyketjun välityksellä.
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että elektroneja luovuttavat ryhmät on valittu joukosta metyyli, etyyli, rc-propyyli, /-propyyli, «-butyyli, t- 5 butyyli, seAbutyyli, metoksi, etoksi, n-propoksi, z-propoksi, «-brutoksi, /-butoksi ja sek-butoksi.
13. Patenttivaatimuksen 11 tai 12 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että Z2 on jonkin tyrniini-, urasiili-, adeniini-, guaniini- tai sytosiiniemäksen radikaali, ja mainittu 10 emäs on kytketty happiatomiin i) suojatulla hydroksimetyyliryhmällä substituoidun hiilivetyketjun välityksellä tai ii) sellaisen furaanirenkaan välityksellä, joka sisältää suojatun hydroksimetyyliryhmän 4-asemassaan ja mahdollisesti lisäksi hydroksyylin, suojatun hydroksyylin tai modifioidun ryhmän 2-asemassaan. 15
14. Patenttivaatimuksen 12 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että -Z2-0-P(NR6R7)-0-R5 on valittu joukosta, joka koostuu rakenteista WH3 "Λ : ·* o*V tfV . DMTrO. DMTrO. : ** V0^ </-Pr)2NA0—CN ? ? γρ^^ο"'—'2N a- Pr)2N'p"0^CN • · !···: -nVh> -A νγ °tY «V X> rTA γΑ* .·.·. rA f—ΓΛ *.·.* DMTrO O DMTrO O DMTrO O DMTr0 ? (/-Pr)2N'K0~CN ()_pr)2N'%^CN (,-Pr)2hAo~CN • · • · · • · · • · • · · • · m m ..!.i 20 joissa - on L-linkkerin asema ja DMTr on dimetoksitrityyli. • · • · « • ·
15. Patenttivaatimuksen 11 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että se on valittu joukosta, joka koostuu rakenteista r2®r1 a r2^r1 R2&ri A A*A *, A° “A Λ 0--5,3,. Π OxCO"'" * Λ π * * * R2A>-R1 : = R'^N^^i_A A . A*. Ä, 4 ¢, f * - - -¾. «, o. λ v Λ g, Ax “Ά* rAri A-a^aa λ Aa Λ t Λ A. η Α CA νΑΑ-νΆΑ A 33 r-Aa-nl_jo r v/A Is s s A Γ^ R' M 5j r-^a1ö-z, R %, R ,¾¾ -&, A" ’Ψ)Κ'" r-A Υ·ΐ An / \ 1¾. JL nA II J, R-^N^L^O 33 ^ :*·.. y^i] g; XTibvN. :. R--J^2<hz R"^v2i6,z , : ·.. R r2AAri r ^^r1 • · · • · * O a'l'/Bz *€£ 3 :·. r2AAri r Aor1 ·**· A/ufl jO-O-Ol γΊ γΊ A_LTN1 rNi *·· -Li. 3331 X 33 X ?? • · · ^ xi *i *i xx :: ·«· • · • · ·«· • % , T :,;.· 5 joissa R” on karboksyylihapon alkyyhesteri tai allyyliesteri ja R’” on alkyyliryhmäja R • · · :...: ja R2 ovat elektroneja luovuttavat ryhmät, L on kuten määritelty patenttivaatimuksessa 11 :T: ja A on -Z2-0-P(NR6R7)-0-R5 kuten määritelty patenttivaatimuksessa 14 ja Z on O tai S • · ϊ.ja G'on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi.
16. Patenttivaatimuksen 11 mukainen kelatoiva aine, tunnettu siitä, että se on valittu joukosta, joka koostuu rakenteista ' ^ A o· Λ Λ a λλ ην- r.,An3qn Ν (I . ΝΥ r2^-r' r r4Q£r, “SÄ,, AQ .,¾ • · • · • #· • 5 joissa R’’ on karboksyylihapon alkyyliesteri tai allyyliesteri ja R1 ja R2 ovat elektroneja : luovuttavat ryhmät, L on kuten määritelty patenttivaatimuksessa 11 ja A on -Z2-0- P(NR6R7)-0-R5 kuten määritelty patenttivaatimuksessa 14jaZonOtaiS ·· • *·· ja G'on karboksyyli- tai sulfonihappoesteri tai -amidi. ··· • · • · ···
17. Biomolekyyli, tunnettu siitä, että se on konjugoitu jonkin patenttivaatimuksen 1 - ··· * 5 mukaisen kelaatin kanssa. • · · • · • · • · · • t ::: 18. Biomolekyyli, tunnettu siitä, että se on konjugoitu jonkin patenttivaatimuksen 1 - • · · 5 mukaisen kelaatin kanssa, jolloin biomolekyyli on valittu joukosta, joka koostuu :*·*; 15 oligopeptidistä, oligonukleotidista, polysakkaridista, fosfolipidistä, PNA:sta, LNAista, :*·.· vasta-aineesta, steroidista, hapteenista, lääkkeestä, reseptoriin sitoutuvasta ligandista ja • · lektiinistä.
19. Patenttivaatimuksen 18 mukainen biomolekyyli, tunnettu siitä, että modifioitu oligo- tai polynukleotidi on fosforimonotioaatti, fosforiditioaatti, fosforiamidaatti ja/tai sokeri- tai emäsmodifioitu oligo- tai polynukleotidi.
20. Kiinteä alusta, tunnettu siitä, että se on konjugoitu jonkin patenttivaatimuksen 1 - 5 mukaisen kelaatin kanssa.
21. Patenttivaatimuksen 20 mukainen kiinteä alusta, tunnettu siitä, että kelaatti on immobilisoitu mainitulle kiinteälle alustalle joko kovalenttisesti tai ei-kovalenttisesti. 10
22. Patenttivaatimuksen 21 mukainen kelaatin kanssa konjugoitu kiinteä alusta, tunnettu siitä, että mainittu kiinteä alusta on valittu joukosta, joka koostuu nanopartikkelista, mikropartikkelista, lasilevystä, levystä tai oligonukleotidi- tai oligopeptidisynteesiin sopivasta kiinteästä faasista. 15
23. Leimattu biomolekyyli, tunnettu siitä, että se on saatu synteesillä kiinteällä faasilla lisäämällä jonkin patenttivaatimuksen 7-10 kelatoiva aine oligopeptidin rakenteeseen oligopeptidisyntetisaattorissa, minkä jälkeen sen suojaryhmät poistetaan ja mahdollisesti lisäksi lisätään myös metalli-ioni. **' 20 • · • · • · · ' # 24. Leimattu oligonukleotidi, tunnettu siitä, että se on saatu synteesillä kiinteällä • · · faasilla lisäämällä jonkin patenttivaatimuksen 11-16 kelatoiva aine oligonukleotidin • m • m .Γ* rakenteeseen, minkä jälkeen suojaryhmät poistetaan ja mahdollisesti lisäksi lisätään myös • · • ·· *... metalli-ioni. 25
25. Patenttivaatimuksen 22 mukaisen oligopeptidin tai patenttivaatimuksen 23 mukaisen • · · • · .···. oligonukleotidin kanssa konjugoitu kiinteä alusta, tunnettu siitä, että mainittu ··· oligopeptidi tai oligonukleotidi on immobilisoitu kovalenttisesti tai ei-kovalenttisesti • · · • · » l.l mainitulle kiinteälle alustalle. • * **:*' 30
26. Tämän keksinnön mukaisella kelaatilla leimatun DNA:n, RNA:n, oligopeptidin, • · *···* oligonukleotidin, polypeptidin, polynukleotidin tai proteiinin kanssa konjugoitu kiinteä alusta.
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI20070677A FI120538B (fi) | 2007-09-05 | 2007-09-05 | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit |
CN200880105962.6A CN101796047B (zh) | 2007-09-05 | 2008-09-05 | 发光的镧系(iii)螯合物、螯合剂及其衍生的轭合物 |
US12/676,604 US8221719B2 (en) | 2007-09-05 | 2008-09-05 | Luminescent lanthanide (III) chelates, chelating agents and conjugates derived thereof |
PCT/FI2008/050494 WO2009030819A1 (en) | 2007-09-05 | 2008-09-05 | Luminescent lanthanide (iii) chelates, chelating agents and conjugates derived thereof |
EP08805417.6A EP2195310B1 (en) | 2007-09-05 | 2008-09-05 | Luminescent lanthanide (iii) chelates, chelating agents and conjugates derived thereof |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI20070677 | 2007-09-05 | ||
FI20070677A FI120538B (fi) | 2007-09-05 | 2007-09-05 | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI20070677A0 FI20070677A0 (fi) | 2007-09-05 |
FI20070677A FI20070677A (fi) | 2009-03-06 |
FI120538B true FI120538B (fi) | 2009-11-30 |
Family
ID=38572875
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI20070677A FI120538B (fi) | 2007-09-05 | 2007-09-05 | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8221719B2 (fi) |
EP (1) | EP2195310B1 (fi) |
CN (1) | CN101796047B (fi) |
FI (1) | FI120538B (fi) |
WO (1) | WO2009030819A1 (fi) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FI120538B (fi) | 2007-09-05 | 2009-11-30 | Wallac Oy | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit |
EP2897967B1 (en) | 2012-09-24 | 2017-06-21 | Qi Wang | Chelates, chelating agents, conjugates derived thereof and their use |
WO2014147288A1 (en) | 2013-01-31 | 2014-09-25 | Kaivogen Oy | Luminescent triazacyclononane-based lanthanide chelate complexes as labelling reagents |
CN109072280B (zh) | 2016-01-21 | 2022-10-14 | 赛录科试诊断公司 | 用于快速抗微生物剂敏感性测试的方法 |
US9834808B2 (en) | 2016-01-21 | 2017-12-05 | SeLux Diagnostics, Inc. | Methods for rapid antibiotic susceptibility testing |
CA3048213A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Eric Stern | Methods for improved rapid antimicrobial susceptibility testing |
CN112250699A (zh) * | 2020-09-24 | 2021-01-22 | 桂林理工大学 | 4,4,4-三氟-1-苯基-1,3-丁二酮单核铕配合物的制备、结构及荧光 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2536783A1 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Wallac Oy | Novel chelating agents and chelates and their use |
FI120538B (fi) | 2007-09-05 | 2009-11-30 | Wallac Oy | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit |
-
2007
- 2007-09-05 FI FI20070677A patent/FI120538B/fi active IP Right Grant
-
2008
- 2008-09-05 WO PCT/FI2008/050494 patent/WO2009030819A1/en active Application Filing
- 2008-09-05 CN CN200880105962.6A patent/CN101796047B/zh active Active
- 2008-09-05 US US12/676,604 patent/US8221719B2/en active Active
- 2008-09-05 EP EP08805417.6A patent/EP2195310B1/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20100204442A1 (en) | 2010-08-12 |
US8221719B2 (en) | 2012-07-17 |
FI20070677A (fi) | 2009-03-06 |
EP2195310B1 (en) | 2016-06-01 |
WO2009030819A1 (en) | 2009-03-12 |
CN101796047B (zh) | 2014-12-03 |
FI20070677A0 (fi) | 2007-09-05 |
EP2195310A1 (en) | 2010-06-16 |
CN101796047A (zh) | 2010-08-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI120538B (fi) | Kelaatit, kelatoivat aineet sekä niistä johdetut konjugaatit | |
AU2005280581B2 (en) | Long wavelength thiol-reactive fluorophores | |
EP1658282B1 (en) | Novel chelating agents and chelates and their use | |
US20150090936A1 (en) | Large stokes shift dyes | |
JP5818990B2 (ja) | 3つの発色団を有する発光ランタニドキレート及びそれらの使用 | |
JP5837419B2 (ja) | O6−アルキルグアニン−dnaアルキルトランスフェラーゼ及びその変異体 | |
DK3137573T3 (en) | NEW CHROMOPHORE STRUCTURES FOR LANTHANIDE CHELATES | |
WO2010055207A1 (en) | Chelating, chelating agents and conjugates deriver thereof | |
US9944657B2 (en) | Luminescent lanthanide chelates having three chromophores an their use | |
WO2014147288A1 (en) | Luminescent triazacyclononane-based lanthanide chelate complexes as labelling reagents | |
JP6480579B2 (ja) | 大環状ランタニドキレートのための新規発色団構造 | |
Leygue et al. | Design of novel tripyridinophane-based Eu (iii) complexes as efficient luminescent labels for bioassay applications | |
KR101125057B1 (ko) | 물질 표지용 화합물 및 그 제조방법 | |
EP2897967A1 (en) | Chelates, chelating agents, conjugates derived thereof and their use | |
JP6924780B2 (ja) | 結合アッセイのバックグラウンド遮断剤 | |
KR101125058B1 (ko) | 물질 표지용 화합물 및 그 제조방법 | |
FI128833B (fi) | Luminoivat lantanidi(III) kelaatit | |
WO2009115644A1 (en) | Lanthanide(iii) chelates comprising beta-diketones and conjugates derived thereof | |
JP2020523397A (ja) | 水溶性トリメトキシフェニルピリジン型錯化剤および対応するランタニド錯体 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 120538 Country of ref document: FI |