FI109603B - Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi - Google Patents

Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI109603B
FI109603B FI934658A FI934658A FI109603B FI 109603 B FI109603 B FI 109603B FI 934658 A FI934658 A FI 934658A FI 934658 A FI934658 A FI 934658A FI 109603 B FI109603 B FI 109603B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
cationic
porous silica
silicate
microbes
substantially non
Prior art date
Application number
FI934658A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI934658A (fi
FI934658A0 (fi
Inventor
Pekka Vapaaoksa
Pekka Seiskari
Heikki Pulkkanen
Original Assignee
Kemira Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kemira Oy filed Critical Kemira Oy
Publication of FI934658A publication Critical patent/FI934658A/fi
Publication of FI934658A0 publication Critical patent/FI934658A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI109603B publication Critical patent/FI109603B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

109603
Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi 5 Keksintö koskee menetelmää mikro-organismien kasvattamiseksi kiinteällä ravintoalustalla, jossa silikaattiperustainen materiaali käsitellään ravinnelähteellä ja lisätään yhtä tai useampaa mikrobilajia ja syntynyt seos pidetään olosuhteissa, joissa mikrobit lisääntyvät. Keksintö koskee myös tuotetta, 10 joka muodostuu silikaattiperustaisen materiaalin ja yhden tai useamman mikrobilajin seoksesta.
Mikrobien kasvattaminen kiinteillä kasvualustoilla on vanha menetelmä, jota käytetään perinteisesti varsinkin elintarvi-15 keteollisuudessa mm. homejuustojen ja itämaisten koji-tyyp-pisten valmisteiden tuotannossa. Nämä menetelmät on opittu lähinnä perinnetietona aluksi edes tuntematta niiden mikrobiologista ja entsymaattista luonnetta.
20 Biotekniikan teollisuudessa on viime vuosina alettu huomata, että fermentointiprosessit kiinteillä alustoilla (solid state fermentation, SSF) ovat varteenotettava tekniikka tavallisimmin käytetyn nestekasvatuksen (submerged fermentation) rinnalla. Monessa tapauksessa SSF on ainoa mahdollinen menetelmä 25 tietyn tuotteen biotekniseksi valmistamiseksi johtuen esimerkiksi käytettävän mikrobin kasvun fysiologiasta. Usein SSF on myös kustannuksiltaan nestekasvatusta edullisempi menetelmä: aseptisuusvaatimukset eivät tietyissä sovellutuksissa ole yhtä korkeat, prosessi on yksinkertaisempi ja jälkikäsittely-30 kustannukset ovat pienemmät johtuen alustan pienemmästä vesi-pitoisuudesta .
SSF:n käyttökelpoisuus riippuu ratkaisevasti kasvualustan ominaisuuksista: ravinteista, veden sitomiskyvystä ja raken-35 teestä. Perinteisissä SSF:ssa alustana käytetään suhteellisen kompleksisia materiaaleja, jotka toimivat samalla ravinneläh-teinä, veden sitojina ja kantaja-aineina. Tällaisia ovat 2 109603 esimerkiksi viljanjyvät, akanat, olkisilppu, sahajauho, turve ja komposti (esim. US-patentissa 4 748 021, FI-patentissa 69390). Joskus näihin lisätään alustan rakennetta parantavia komponentteja, kuten kipsiä tai kalkkia.
5
Edellä lueteltujen kasvualustojen teollinen käyttö perustuu osaksi niiden edulliseen hintaan ja hyvään saatavuuteen.
Uusia bioteknisiä tuotteita, kuten mikrobisiirrosteita kehitettäessä on ensiarvoisen tärkeää, että lopputuotteen ominai-10 suuksista saadaan juuri halutunlaiset. Esimerkiksi sellu- loosapitoista biomassaa SSF:n alustana käytettäessä on mikro-bisiirrosteesta käytännössä lähes mahdotonta saada peittaus-tai ruiskutejauheeksi kelpaavaa kuivaa pulveria.
15 Ennestään on myös tunnettua käyttää erilaisia silikaatti- mineraaleja, kuten vermikuliittia, bentoniittia ja kaoliniit-tia SSF:n kantaja-aineina etenkin typpibakteeri- ja mykorit-saymppien valmistuksessa (esim. Appi. Env. Microbiol. 53 (1987) 2138-2140; Curr. Sei. 51 (1982) 430-432). Tällaisten 20 tuotteiden formulointimahdollisuudet lopullista käyttöä varten ovat kuitenkin rajalliset ja niitä yleensä käytetäänkin joko sellaisenaan, kuivattuina tai useimmin kuivaamattomina, tai jollain tavalla rakeistettuina.
25 Eläviä mikro-organismeja sisältävät valmisteet pyritään for muloimaan kuhunkin käyttötarkoitukseen mahdollisimman helposti soveltuvaan muotoon, yleensä joko nestekonsentraateiksi tai jauheiksi. Esimerkiksi maatalouskäytössä on edullista, että mikrobivalmistetta voidaan ruiskuttaa käyttökohteeseen 30 tai peitata sillä kasvien siemenet. Tämä asettaa suuret vaatimukset mikrobivalmisteen formuloinnille erityisesti mikro-organismien elävyyden sekä valmisteen ruiskutus- ja peit-tausominaisuuksien osalta. Formulointiin käytetään yleensä kantaja-aineita, erilaisia suoja-aineita, kostutus- ja dis-35 pergointiaineita sekä pH-sääteitä.
109603 l ί i 3
Kantaja-aineen tehtävänä on paitsi suojata mikrobia myös toimia laimentimena; nämä ovat tyypillisesti erilaisia orgaanisia luonnonmateriaaleja, niiden johdannaisia tai epäorgaanisia mineraaleja. Suoja-aineet saattavat olla esimerkiksi 5 UV-protektantteja tai hapettumisenestoaineita. Kantaja-aineelta vaadittavia ominaisuuksia ovat mm. sopiva ominaispin-ta-ala, hyvä puskurointikapasiteetti ja oikea pH-alue.
Aikaisemmin on tunnettua käyttää kantaja-aineena mikrobival-10 misteiden formulointiin erilaisia epäorgaanisia silikaatti- mineraaleja kuten vermikuliittia, kaoliniittia tai montmoril-loniittia (esim. Can. J. Microb., Voi. 12 (1966), s. 1235-1246). Tämäntyyppisten materiaalien laatu saattaa vaihdella suurestikin ja lisäksi niiden mahdollisesti sisältämät mikro-15 beja inhiboivat komponentit voivat aiheuttaa ongelmia mikro-organismien formuloinnissa.
Mikrobivalmisteiden teollisen tuottamisen kannalta on välttämätöntä, että kasvatuksessa tai formuloinnissa voidaan käyt-20 tää halpaa, tasalaatuista kantaja-ainetta, jolla kasvualustaan ja lopulliseen tuotteeseen saadaan halutut edulliset ominaisuudet.
4 109603
Ravinteiden hyväksikäyttö: Prosessin ekonomian kannalta on edullista, että ravinteita on juuri sen verran kuin mikrobi tarvitsee kasvaakseen ja/tai tuottaakseen haluttua komponenttia halutulla nopeudella.
5 Jälkikäsittely: Alustan on oltava sellainen, että sen saa vaivattomasti fermentoriin ja ulos fermentorista. Mikrobisi irrosteiden tapauksessa alusta on myös voitava helposti kuivata niin, että mikrobit tai niiden itiöt säilyvät kui-10 vauksessa hengissä. Kuivauksen jälkeen tuote on usein myös voitava jauhaa pulveriksi hellävaraisesti, ettei organismi kärsi liikaa.
Formulointi: On edullista, jos alusta sisältää komponentteja, 15 jotka edesauttavat tuotteen käytettävyyttä (tarttuminen siemenelle, paakkuuntumattomuus, suspendoituvuus).
Hinta: Alustan on oltava hinnaltaan kohtuullinen suhteessa tuotteen hintaan.
20 Nämä päämäärät on esillä olevassa keksinnössä saavutettu ..· uudella menetelmällä ja tuotteella, joille on tunnusomaista ! se, mitä sanotaan itsenäisten patenttivaatimusten tunnusosas-• · · » » · '.* sa. On siis havaittu, että piidioksidipartikkelit, jotka on •25 saatu uuttamalla silikaattimineraaleista kationit pois, so-• « · veltuvat erinomaisesti SSF:n ja eläviä mikrobeja sisältävien
# · I
:mikrobivalmisteiden kantaja-aineeksi. Piidioksidipartikkeli • · · V : on pintaominaisuuksiltaan hydrofiilinen, korkean ominaispin- nan omaava partikkeli. Huokosrakenne on lähinnä mikro- ja :‘3*Q mesohuokosrakennetta, jolla on luontainen kyky pidättää pin- • · noille adsorboitunutta vettä. Kosteus on lähinnä huokosissa, I I I r • , joten partikkelien välit jäävät kuiviksi.
• · ' · Oikeantyyppinen piidioksidipartikkeli saadaan silikaatti- mineraalista esiin yleensä hapolla uuttamalla. Piidioksidi- • · .*··. partikkelissa kationien jättämä tila täyttyy vetyatomeilla ja pinnasta tulee hydrofiilinen.
5 109603
Uuttotekniikkaan vaikuttavat mineraalissa olevat hilavirheet, joita hyväksi käyttäen happo saadaan tunkeutumaan silikaattiin ja poistamaan kationit. Esimerkissä 1 tällainen hilavir-he johtuu siitä, että osa raudasta on kaksiarvoista ja osa 5 kolmiarvoista. Kun hilassa oleva kaksiarvoinen rauta hapetetaan uuton aikana kolmiarvoiseksi, raudan ionisäde pienenee ja hilaan tulee tilaa, jossa happo pääsee kationirakenteeseen liuottamaan kationit pois vahingoittamatta silikaatin piiok-sidipartikkelia. Lähes kaikista luonnon silikaateista löytyy 10 hilavirheitä, joiden avulla voidaan uuttaa silikaatti piiok-sidipartikkeliksi.
Keksinnön mukaista tuotetta valmistettaessa lähdetään sili-kaattihiukkasista, kuten flogopiitti-, biotiitti-, vermiku-15 liitti-, bentoniitti- tai kaoliniittihiukkasista. Silikaatti-hiukkaset ovat edullisesti kerrossilikaattia ja erityisesti flogopiittia tai biotiittia. Voidaan käyttää myös synteettistä kiillettä.
20 Kun silikaattihiukkaset käsitellään hapolla silikaatin sisältämien kationien poistamiseksi, käsittelyhappona on hapon . .· vesiliuos, jonka väkevyys on välillä 0,7-70 paino-% ja edul- ! lisesti välillä 4-65 paino-%. Vastaava pH-alue on tällöin • · “Y välillä 0-7. Käsittelyn lämpötila-alue on edullisesti noin *25 välillä 0-100°C normaalipaineessa. Sopivista hapoista mainit-···: takoon H2S04, HC1, HN03, HF, HBr, HI, HC103, HBrOa, HC104, : HP04, sitruunahappo, salisyylihappo, viinihappo, humushapot, v * oksaalihappo ja em. happojen seokset. Kaikkein edullisimmat hapot ovat rikki-, suola- ja typpihappo.
Happokäsittely voidaan tarvittaessa suorittaa hapettavan tai • . pelkistävän lisäaineen läsnäollessa. Tyypillisiä hapettavia lisäaineita ovat esim. HN03, H202, Mn04(-), Cr07(2-), C104(-), ' ' C103, 02, persulfaatit, Cl2, Br2. Käyttökelpoisia pelkistimiä :3·5; ovat esim. Sn(II), Fe(II), S203(-), Cu(I) , aldehydit, ke- tönit, H2P04(-), sulfiitit, fosfiitit, V(II) ja V(III). Hapetin- tai pelkistinlisäaineen määrä riippuu siitä, miten pal 6 109603 jon sillä halutaan vaikuttaa silikaatin kationien liukoisuuteen. Tyypillisiä lisäainemääriä ovat 0-20 % lähtöainemateri-aalin painosta.
5 Esillä olevan keksinnön mukaisen tuotteen piidioksidipartik-kelimateriaalin tiheys laskee happouuton seurauksena noin 30-50 %. Nähdään siis, että keksinnön mukaisesta tuotteesta tulee huomattavasti kevyempää kuin tekniikan tason mukaisesta uuttamattomiin silikaattihiukkasiin perustuvasta tuotteesta.
10
Tuotteessa käytetyn piidioksidipartikkelimateriaalin edullinen hiukkaskokoalue vaihtelee käytön mukaan. Edullinen hiuk-kaskokoalue on välillä 1-2000 jum ja edullisimmin välillä 10-900 Mm. Ominaispinta-ala on välillä noin 10-1000 m2/g, mikä 15 tekee materiaalista käyttökelpoisen suuria ominaispinta-aloja vaativissa sovellutuksissa.
Keksinnön mukainen tuote on siis piidioksidipartikkeli, jonka pinnalla on mikrobisiirroste. Mikrobi voi olla esimerkiksi 20 sieni, bakteeri, kasvi- tai eläinsolukko. Mikrobit voidaan joko kasvattaa piidioksidipartikkelin pinnalla SSF:a käyttäen tai sekoittaa silikan kanssa kasvatuksen jälkeen, jolloin * ; mikrobit kasvatetaan erikseen esimerkiksi submerssifermen- ’··/ toinnilla.
:-iö SSF:n ravinnelähteeksi kelpaa mikä tahansa ravinnelähde, i liukoinen tai liukenematon, esimerkiksi kitiini. Staattisessa V 1 pylväsreaktorissa tai sekoitetussa solid-state-fermentorissa tapahtuvan kasvatuksen ja mahdollisen kuivauksen jälkeen tuote on valmis käytettäväksi. Tuotteen esi- ja jälkikäsitte- • · ly (jauhatus, sterilointi) on yksinkertaista, koska piidiok- • · · sidipartikkelin perusominaisuudet säilyvät käsittelyn ajan.
* · t 1 I
• I
Alustan rakeisuudesta johtuen mikrobien kasvupinta-ala on .3.5: suuri ja hapen kuljetus mikrobeille esteetöntä suurissakin ,···. reaktoreissa. Kasvatuksen lopussa alustan poistaminen fermen- 7 109603 torista on helppoa myös tapauksissa, jotka vaativat asepti-suutta.
Tarvittaessa alustan kuivaaminen mikrobeineen ja/tai mikrobi-5 itiöineen kasvatuksen jälkeen ei myöskään tuota vaikeuksia. Silikan huokoinen rakenne suojaa mikrobeja ja, koska silika-kantaja on jo etukäteen jauhettu hienoksi pulveriksi, ei tuotteen hellävarainen jauhaminen kasvatuksen jälkeen ole mikrobeille vahingollista. Näin saatu tuote sopii erinomai-10 sesti peittaus- tai ruiskutejauheeksi.
Pintaominaisuuksiensa ansiosta piidioksidipartikkeli toimii tehokkaasti siihen sekoitettujen mikrobien suoja- ja kantoai-neena. Lisäksi se estää tuotteen paakkuuntumista.
15
Keksintöä selostetaan seuraavassa lähemmin esimerkkien avulla.
Esimerkki 1 20 Piidioksidipartikkelin valmistus flogopiitista a) 700 g flogopiittia, hiukkaskoko / 0,01-1500 μ '*,* 2,5 1 vettä •ΐέ 2065,36 g H2S04 (96 %) ..li’ 331,33 g H202 »» · * t · • » • · • · * V * Kiilteestä, vedestä ja rikkihaposta muodostetaan liete, jota lämmitetään 95°C:een, minkä jälkeen noin 5 tunnin aikana syötetään koko ajan sekoittaen pinnan alle H202:ta. Koko- naisuuttoaika on 7 tuntia, josta noin yksi tunti ennen H202:n • t syöttöä pelkkää sekoitusta ja lämmitystä ja yksi tunti sekoi-* » · · * tusta H202:n syötön loputtua. Tämän jälkeen emäliuos suodate-** * taan pois ja jäännös (piidioksidipartikkeli) pestään useaan :3·§; kertaan, välillä liettäen, puhtaaksi happo- ja kationijäämis-. *' *. tä.
8 109603 b) 700 g flogopiittia, hiukkaskoko 0,01-1500 μ 2,5 1 vettä 750 g typpihappoa (100 %) 5
Uutto suoritetaan kuten edellä, paitsi hapetinta ei tarvita, koska typpihappo sinänsä on hapettavaa.
Esimerkki 2 10 Suoritetaan muuten samoin kuin esimerkki 1, mutta flogopiitin sijasta käytetään anortisiittia.
Esimerkki 3 600 g serpentiniittiä 15 31 ionivaihdettua vettä 1770,31 g H2S04 (96 %) 161,82 g HN03 (65 %)
Uuttolämpötila oli 95-97°C ja uuttoaika 7 tuntia. Lämpötila 20 nostettiin 95°C:een ja syötettiin HN03:a hitaasti 5 tunnin ajan pinnan alle. Syötön loputtua sekoitettiin 2 tunnin ajan ennen suodattamista. Emäliuos suodatettiin pois, kakku lie-/ ! tettiin 1 % H2S04-liuokseen ja seisotettiin siinä 1-3 päivää.
: : ' Lietettiin ja pestiin viisi kertaa ionivaihdetulla vedellä.
il»
Loppusuodoksen pH oli 4,1.
* « * · « • Esimerkki 4 !.· · Suoritettiin samoin kuin edellinen esimerkki, mutta mineraalina käytettiin vermikuliittia tai wollastoniittia.
raTQ
Esimerkki 5 • t Fungisidisten sienten kasvatus kiinteällä silika-alustalla • · * ’ 1 g hienoksi jauhettua kitiiniä sekoitettiin 9 g:aan suola- j*35 liuosta, jonka koostumus oli: II» # » 1 g/1 kh2po4 9 109603 0,2 g/1 MgS04*7H20
Seos steriloitiin (20 min, 120°C) ja jäähtynyt seos siirros-tettiin 1 ml:11a fungisidisen Trichoderma sp:n itiösuspen-5 siota, joka oli saatu raaputtamalla itiöt PDA-maljalta steriiliin, tislattuun veteen.
Trichodermalla ympätty kitiiniliete sekoitettiin 6 g:aan esimerkin 1 mukaan flogopiitista valmistettua, hienoksi jau-10 hettuja piidioksidipartikkeleita, jolloin alustasta tuli rakeinen. Alustaa inkuboitiin huoneenlämpötilassa (20°C) 7 vuorokautta, kunnes alusta oli kauttaaltaan sienirihmaston ja itiöiden peitossa.
15 Alustaa kuivattiin 1 vuorokausi huoneenlämpötilassa levitettynä ohueksi kerrokseksi petrimaljalle. Kuiva tuote jauhettiin pulveriksi huhmareessa. Tuotteen itiöpitoisuus oli 2,4*109/g.
20 Vastaavalla tavalla valmistetun Gliocladium sp.-preparaatin itiöpitoisuus oli 4,8*10®/g.
• 4 ' ; Esimerkki 6 l » *''/ Fungisidistä Streptomvces ariseoviridis -sädesientä kasva-< < · ‘•23 tettiin kiinteällä alustalla, jonka koostumus oli: i ( · ti* ; V silika 10 g ; : ί tiivistetty tärkkelysrankki * 3,6 g dolomiittikalkki 2 g :30b vesi 13,4 g . I * I « * • * Oy Alko Ab, Rajamäki, kuiva-aine n. 36 %
i M M
• * Alusta autoklavoitiin ja siirrostettiin 1 ml:11a sädesienen ,3Sj itiösuspensiota. Kasvatettiin 28°C:ssa 7 vuorokautta. Täyteen ,··, kasvanut alusta kuivattiin huoneenlämmössä. Tuotteen itiöpi- I * toisuus oli 3*109/g.
10 109603
Esimerkki 7
Juurikäävän (Phomes annosuml torjuntaan tarkoitettua Phlebia gjqantea -sientä kasvatettiin samalla alustalla kuin säde-sientä. 11 vuorokauden kasvatuksen jälkeen alusta kuivattiin 5 huoneenlämmössä. Tuotteen itiöpitoisuus oli 2,5*107/g.
Esimerkki 8
Insektisidisten sienten kasvatus kiinteällä silika-alustalla 10 1 g hienoksi jauhettua kitiiniä sekoitettiin 9 g:aan suola liuosta, jonka koostumus oli 1 g/1 K2HP04*3H20 0,2 g/1 MgS04*7H20 15
Seos steriloitiin (20 min, 120°C) ja jäähtynyt seos siirros-tettiin 1 ml:11a insektisidisen Beauveria bassjanan itiösus-pensiota, joka oli saatu raaputtamalla itiöt PDA-maljalta steriiliin, tislattuun veteen.
20
Sekoitus silikakantajaan, kasvatus ja kuivaus tehtiin kuten
Trichodermalla esimerkissä 5. Kuivatun ja jauhetun tuotteen ! itiöpitoisuus oli 3,4*10®.
• · · • · · • » · '•25’ Vastaavalla tavalla kasvatetun insektisidisen Metarrhizium anisooliae -preparaatin itiöpitoisuus oli l,5*10®/g.
I · · ♦ · · • · · Esimerkki 9
Fungisidisen sädesienipreparaatin formulointi silikalla :;j.0: • · .··.·. Streptomvces ariseoviridis -sädesientä kasvatettiin hera- • _ alustalla (10 g/1 heraproteiinia) ja kasvusto erotettiin sentrifugoimalla. 5,1 g:aan erotettua solukuiva-ainetta se-: · koitettiin 9,0 g sakkaroosia ja 15,0 g esimerkin 1 mukaan 35| valmistettua, hienoksi jauhettua silikaa. Seos kylmäkuivat- .*··. tiin ja jauhettiin. Kuivan tuotteen elävyydeksi saatiin • · · 11 109603 5,91107 CFU/g. Kuuden viikon säilytyksen jälkeen 28°C:ssa elävyys oli 1,41107 CFU/g.
Esimerkki 10 5 Fungisidisen Bacillus-preparaatin formulointi silikalla
Bacillus pumilusta kasvatettiin alustalla, jonka koostumus oli: 10 glukoosi 4 g/1 hiivauute 4 g/1 mallasuute 1 g/1
Kasvusto erotettiin sentrifugoimalla ja 1,3 g:aan erotettua 15 solukuiva-ainetta sekoitettiin 2,2 g sakkaroosia ja 3,6 g esimerkin 1 mukaan valmistettua, hienoksi jauhettua silikaa. Kylmäkuivauksen ja jauhatuksen jälkeen elävyys oli 61109 CFU/g ja kymmenen viikon säilytyksen jälkeen 28°C:ssa 2,6110®.
20
Esimerkki 11 . .· Fungisidisen hiivapreparaatin formulointi silikalla
Crvotococcus macerans -hiivaa kasvatettiin perunadekstroosi- • · · '25 alustalla. Kasvusto erotettiin sentrifugoimalla ja 11,8 g:aan • · · ···· erotettua solumassaa sekoitettiin 4,0 g sakkaroosia sekä 11,7 : .1 g esimerkin 1 mukaan valmistettua, hienoksi jauhettua sili-• · · · kaa. Seos kylmäkuivattiin ja jauhettiin. Tuotteen elävyydeksi saatiin 91102 CFU/g.
* · · • · · • · «tl I · 1
III
• « • · •
• I
• · I
• I
• · · • · · · 2

Claims (9)

1. Menetelmä mikrobien kasvattamiseksi kiinteällä kas vualustalla, jossa silikaattiperustainen materiaali käsitellään ravinnelähteellä ja lisätään yhtä tai useampaa mikrobi-5 lajia ja syntynyt seos pidetään olosuhteissa, joissa mikrobit lisääntyvät, tunnettu siitä, että silikaattiperustaisena materiaalina käytetään hydrofiilisiä oleellisesti kationitto-mia ja huokoisia piidioksidirunkoja.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydrofiiliset oleellisesti kationittomat ja huokoiset piidioksidirungot on valmistettu käsittelemällä flogo-piittia, biotiittia, vermikuliittia, bentoniittia tai kao-liniittia hapolla mahdollisesti hapettavan tai pelkistävän 15 lisäaineen läsnäollessa mainittujen silikaattien sisältämien kationien oleelliseksi poistamiseksi.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydrofiiliset oleellisesti kationittomat 20 ja huokoiset piidioksidipartikkelit ovat geelimuodossa. 1 2 3 Patenttivaatimuksen 1, 2 tai 3 mukainen menetelmä, ! tunnettu siitä, että ravinnelähde on adsorboituneena hydro- 2 fiilisten oleellisesti kationittomien, huokoisten piidioksi- • · · ‘{$5 dipartikkelien pinnalle. • · · t * · · • ’.· 5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen mene- • ♦ · t telmä, tunnettu siitä, että mikrobilajit ovat sieniä tai bakteereja. •3*0; 3 Tuote, joka muodostuu silikaattiperustaisesta mate- • · · • riaalista ja yhdestä tai useammasta mikrobilajista, tunnettu siitä, että silikaattiperustaisena materiaalina on hydrofii-liset oleellisesti kationittomat ja huokoiset piidioksidipar- J5,j tikkelit. • · • ♦ 109603
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen tuote, tunnettu siitä, että hydrofiiliset oleellisesti kationittomat ja huokoiset piidioksidipartikkelit ovat hapolla käsiteltyä flogopiit-tia, biotiittia, vermikuliittia, bentoniittia tai kaoliniit- 5 tia, joka on edullisesti geelimuodossa.
8. Patenttivaatimuksen 6 tai 7 mukainen tuote, tunnettu siitä, että oleellisesti kationittomat ja huokoiset piidioksidipartikkelit perustuvat silikaattihiukkasiin, joiden hiuk- 10 kaskoko on alle 2 000 pm, edullisesti alle 900 pm.
9. Jonkin patenttivaatimuksista 6-8 mukainen tuote, tunnettu siitä, että mikrobilajit ovat sieniä tai bakteereja.
15 Patentkrav
FI934658A 1991-04-22 1993-10-21 Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi FI109603B (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/FI1991/000120 WO1992018623A1 (en) 1991-04-22 1991-04-22 Solid support medium for microbe preparations and a method for cultivation of microbes
FI9100120 1991-04-22

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI934658A FI934658A (fi) 1993-10-21
FI934658A0 FI934658A0 (fi) 1993-10-21
FI109603B true FI109603B (fi) 2002-09-13

Family

ID=8556506

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI934658A FI109603B (fi) 1991-04-22 1993-10-21 Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP0597836B1 (fi)
JP (1) JPH06505863A (fi)
AU (1) AU657474B2 (fi)
CA (1) CA2107350C (fi)
DE (1) DE69126625T2 (fi)
DK (1) DK0597836T3 (fi)
FI (1) FI109603B (fi)
LV (1) LV10305B (fi)
RU (1) RU2094459C1 (fi)
WO (1) WO1992018623A1 (fi)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6197573B1 (en) 1998-11-17 2001-03-06 Biocon India Limited Solid state fermentation
US10344253B2 (en) 2014-11-25 2019-07-09 3M Innovative Properties Company Devices and kits for the propagation or storage of microorganisms, and methods of making and using

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD141978A3 (de) * 1976-07-22 1980-06-04 Jens Fischer Verfahren zur herstellung wasserunloeslicher enzyme durch bindung an kieselgel
US4327181A (en) * 1980-05-15 1982-04-27 Battelle Development Corporation Aerobic submerged fermentation of sporulating, ectomycorrhizal fungi
JPS5910795B2 (ja) * 1980-09-11 1984-03-12 日立造船株式会社 醗酵によるアルコ−ル製造法
US4504582A (en) * 1982-07-20 1985-03-12 Genex Corporation Vermiculite as a carrier support for immobilized biological materials
DK317483D0 (da) * 1983-07-08 1983-07-08 Superfos As Immobiliseret enzympraeparat og fremgangsmade til fremstilling deraf
JPS6119568A (ja) * 1984-02-27 1986-01-28 Toyoda Mach Works Ltd 円弧面加工装置における現在位置表示装置
US4748121A (en) * 1984-11-30 1988-05-31 Ppg Industries, Inc. Porous glass fibers with immobilized biochemically active material
EP0267470A1 (en) * 1986-11-03 1988-05-18 Manville Corporation Porous glass fiber mats for attachment of cells and biologically active substances
GB8721018D0 (en) * 1987-09-07 1987-10-14 Alcan Int Ltd Porous inorganic membrane support
AU5737590A (en) * 1989-06-09 1991-01-07 Biotech International Limited A method of growing and preserving fungi and bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
LV10305A (lv) 1994-10-20
EP0597836A1 (en) 1994-05-25
AU657474B2 (en) 1995-03-16
DE69126625D1 (de) 1997-07-24
DK0597836T3 (da) 1997-07-07
CA2107350A1 (en) 1992-10-23
FI934658A (fi) 1993-10-21
FI934658A0 (fi) 1993-10-21
DE69126625T2 (de) 1997-10-02
EP0597836B1 (en) 1997-06-18
RU2094459C1 (ru) 1997-10-27
LV10305B (en) 1995-04-20
AU7676491A (en) 1992-11-17
JPH06505863A (ja) 1994-07-07
WO1992018623A1 (en) 1992-10-29
CA2107350C (en) 1999-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5329092B2 (ja) 安定な微生物の接種材料およびその製造方法
US3935067A (en) Inorganic support for culture media
US5695541A (en) Process for preparation of bacterial agricultural products
CA1179618A (fr) Procede d&#39;inclusion de micro-organismes du groupe des mycorhizes et des actinorhizes
EP2970870B1 (en) Inhibiting or reducing fungal growth
Zohar‐Perez et al. Preservation of chitinolytic Pantoae agglomerans in a viable form by cellular dried alginate‐based carriers
US20190021339A1 (en) Bio-stimulant and method of producing same
Claus et al. Effects of clays and other solids on the activity of phenoloxidases produced by some fungi and actinomycetes
JPH078769B2 (ja) 土壌線虫駆除方法およびそれに用いる線虫駆除組成物
FI109603B (fi) Mikrobivalmisteiden kiinteä kantoaine ja menetelmä mikrobien kasvattamiseksi
De Cal et al. Mass production of conidia of Penicillium frequentans, a biocontrol agent against brown rot of stone fruits
US2756134A (en) Soil stabilization
Straatsma et al. Growth requirements of mycelial cultures of the mycorrhizal mushroom Cantharellus cibarius
JP7177601B2 (ja) 微生物農薬の製造方法
JP2873931B2 (ja) キノコの病害防除剤及び防除方法
LT3817B (en) Solid support medium for microbe preparations and a method for cultivation of microbes
KR100456451B1 (ko) 폐사탕을 이용한 토양 미생물 비료의 제조방법
EP0371408B1 (de) Biokatalysatoren und Verfahren zu ihrer Herstellung
JPH0334905A (ja) 植物用組成物
KR101118485B1 (ko) 고정화된 인산 가용화 미생물을 포함하는 비료 조성물의 제조방법
KR101150511B1 (ko) 애타풀자이트로 고정화된 인산 가용화 미생물을 포함하는비료 조성물
JPS59143524A (ja) きのこ栽培用培養基
RO131926B1 (ro) Procedeu de condiţionare a microorganismelor biostimulante pentru plante pe suporturi ceramice poroase
JPS6368027A (ja) きのこ類の培地
JPH11302120A (ja) イネ苗の立枯性病害防除方法