FI107019B

FI107019B - Lisäaineita naisten hygieniatuotteisiin

Info

Publication number: FI107019B
Application number: FI915088A
Authority: FI
Inventors: Susan K Brown-Skrobot; Mary M Irving
Original assignee: Mcneil Ppc Inc
Priority date: 1990-10-30
Filing date: 1991-10-29
Publication date: 2001-05-31
Also published as: SG48029A1; DK0483835T3; GR910100438A; BR9104710A; DE69118312D1; NO914237D0; IE913779A1; HK155696A; FI915088A; CA2054438A1; EP0483835A1; ZW14991A1; MX9101808A; AU687482B2; NO914237L; MY110560A; GR1002298B; EP0483835B1; ES2085399T3; US5547985A

Description

107019

Lisäaineita naisten hygieniatuotteisiin

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää nestemäisen koostumuksen valmistamiseksi käytettäväksi naisten intii-5 mihygieniassa inhiboimaan Staphylococcus-toksiinien muo dostumista. Lisäksi keksintö koskee nestemäistä koostumusta käytettäväksi naisten intiimihygieniassa emättimen kas-telemiseksi ja puhdistamiseksi.

Ei-absorbenttituotteita voidaan käyttää naisten in-10 tiimihygieniaan, kuten esimerkiksi suihkut, emätinpuikot, geelit, pesut sekä ehkäisyaineet. Aktiivinen aine alentaa naisten hygieniatuotteisiin sisällytettynä bakteerien tuottamien tiettyjen toksiinien määrää.

Naiset käyttävät monia naisten hygieniatuotteita ja 15 tuotteita sisäiseksi puhdistamiseksi pääasiassa nesteiden muodossa. Spesifisemmin monet naiset käyttävät nestemäisiä emätinsuihkuja emättimen kastelemiseksi ja puhdistamiseksi sekä emätintartuntojen ehkäisemiseksi, ehkäisy- ja steri-lointitarkoituksessa sekä abortin aikaansaamiseksi ["Fe-20 minine Hygiene Products: Why Your Advice Is Needed" (suom. "Naisten hygieniatuotteita: Miksi opastustasi tarvitaan"), U.S. Pharmacist 1986 (toukokuu) 20 - 27, Thomas A. Goss- « « \V el] . Emätinsuihkukoostumukset voivat olla valmistettuja i « V,: monista erilaisista koostumuksista. Etikka on tavallisin 11« 25 aine, jota käytetään suihkuttamiseen emättimen puhdistama- • :*; seksi. Etikka sisältää noin 4 - 6 % etikkahappoa. Käytet- • # · · ....j tävissä on kuitenkin riittämättömästi tietoja, jotta voi- täisiin osoittaa sitovasti, että etikka on tehokas emätti- • · | men pH:n muuttamiseksi riittävän pituiseksi ajaksi, jotta . 30 tämä edistäisi normaalin emätinflooran kasvua ja siten ♦ * # « · ehkäisisi tartuntoja.

···* GB-patenttijulkaisussa nro 1 374 105, joka julkais- :' . i tiin 13. marraskuuta 1974 ja jonka otsikko on "Effer- I « vescent Compositions" (suom. "Kuohuvia koostumuksia"), 35 kuvataan emätinsuihkukoostumuksia, jotka sisältävät sili-• ·’ kageeliä. Koostumukset voidaan tabletoida ja niitä voidaan *· käyttää tekohampaiden puhdistusaineina, antasideinä, kipua 2 10701'/ lievittävinä laksatiiveina ja emätinsuihkuina, Kuvatut koostumukset sisältävät hiilidioksidia ja/tai happea muodostavia materiaaleja, esim. persulfaatti/perboraatti-seoksia, ja optimaalisia farmaseuttisia aineita, laimen-5 timia, esim. natriumkloridia, kelatoivia aineita kuten EDTA, pinta-aktiivisia aineita, voiteluaineita, flavori-aineita ja hajusteita.

US-patenttijulkaisussa nro 3 584 119, joka julkaistiin 8. kesäkuuta 1971 ja jonka omistaa Daniel B. 10 Langley, kuvataan emätinsuihkukoostumuksia, jotka sisäl tävät 3-8 pbw vesiliukoista pesuainetta, natriumdodesyy-libentseenisulfonaattia, kalium- tai natriumlauryylisul-faattia tai 2-5 pbw alkalimonopersulfaattia tai 5 -10 pbw alkalimetaalliboraattia ja joita käytetään 5 - 60 g 15 litrassa sisältävinä vesiliuoksina.

US-patenttijulkaisussa nro 3 219 525, joka julkaistiin 23. marraskuuta 1965 ja jonka omistavat Samuel G. Berkow et ai., kuvataan painesäiliötä, jossa on liuos, joka sisältää 1,5 - 2,5 mg pieneliöitä tappavaa kationista 20 kvaternaarista ammoniumpinta-aktiivista ainetta, 30 - 60 mg antiseptistä kostutusainetta. Saatu koostumus on ae-rosolivaahdon muodossa.

On raportoitu, että käytettäessä päivittäin happa-mia tai aikalisiä liuoksia suihkun otossa emättimen pH:ssa 25 tai sen limakalvolla ei tapahtunut kaikenkaikkisia muutok-; siä. On samoin raportoitu, puolestaan osoitettu, että • · « t ·;··♦ suihkunottoaikajaksona emättimen pH asettuu suihkuliuoksen pH:hon. 30 minuutin kuluttua suihkun ottamisesta happamal-la liuoksella pHrsta itseasiassa tulee alkalinen.

. 30 Strobino et ai. raportoivat, että jotkut suihkut • · · · « • · ... ovat myrkyllisiä siemennesteelle, minkä vuoksi niitä käy- • · ·“* tetään ehkäisyaineina. Sitä vastoin natriumbikarbonaatti- suihkut ovat toinen suihkutyyppi, jota käytetään paranta- maan siemennesteen eloonjääntiä ja siten edistämään he- 35 delmällisyyttä ["Sodium Bicarbonate Douching For Impr- • ·' ovement Of The Postcoital Test" (suom. "Natriumbikarbo- • · « « ' · naattisuihku yhdynnän jälkeisen testin tehostamiseksi"), 107019 3

Fertility and Sterility 33:6 (1980, kesäkuu) 608 - 612, Ansari, Gould ja Ansari].

Eräs sairaustyyppi, kuukautisiin liittyvä myrkyllinen shokkioireyhtymä (TSS), joka on vakava ja joskus 5 kuolemaan johtava monisysteemisairaus, liittyy Staphylococcus aureus (S. aureus) -bakteeritartuntaan tai -pesiy-tymiseen. Tämä sairaus on kytketty tamponien käyttöön kuukautisten aikana. Arvellaan, että sairauden aiheuttaa myrkyllisen shokkioireyhtymän toksiini-1 (TSST-1), jota tok-10 siinia tuottaa valtaosa kuukautis-TSS-potilaista eristetyistä Staphylococcus-kannoista.

Sen jälkeen, kun oli julkaistu raportteja, jotka liittivät myrkyllinen shokkioireyhtymä -sairauden tamponien käyttöön, lukuisat tutkijat ryhtyivät tutkimuksiin, 15 joiden tarkoituksena oli arvioida tamponien vaikutusta S. aureus -bakteerien kasvuun sekä tamponien vaikutusta TSST-l:n tuotantoon näiden bakteerien toimesta. Varhaiset pyrkimykset tamponien osuuden selvittämiseksi TSS:ssä tuottivat ristiriitaisia tuloksia. Schlievert et ai. 20 [Obstet.Gynecol. 64 (1984, marraskuu) 666 - 670] tutkivat tamponien vaikutusta S. aureukseen arvioidakseen, lisäävätkö tamponirakenneosat S. aureuksen kasvua sekä myrkyllisen shokkioireyhtymän toksiini-1:n tuotantoa vai eivät.

! t: t He päättelivät, että heidän tutkimuksensa testiolosuh- 25 teissä tamponirakenneosat eivät sen paremmin tarjoa ra- • :’· vinteita myrkylliseen shokkioireyhtymään liittyvän S. au- • · · · ....: reuksen kasvulle kuin tekijöitäkään, jotka indusoivat myrkyllisen shokkioireyhtymän toksiini-1 :n tuotannon kontrollitasojen yläpuolelle. 6 tunnin inkuboinnin jälkeen . 30 jotkut kaupallisesti saatavana olevista testatuista tam- ' ]#t' poneista inhiboivat bakteerikasvua ja tukahduttivat tok- • · ···1 siinituotantoa. Toiset tukahduttivat toksiinituotantoa, mutta eivät inhiboineet solukasvua. Yksi tamponi inhiboi solukasvua, mutta lisäsi tuotettua toksiinimäärää. Toi-35 saalta Tierno ja Hanna [Contraception 31 (1985) 185 - 194] « · • « a · a « · • · 107019 4 raportoivat, että heidän kokeissaan tamponit todella stimuloivat S. aureuksen tuottamaan TSST-l:tä.

Reiser et ai. [J.Clin.Microbiol. 25:8 (1987, elokuu) 1450 - 1452] raportoivat sittemmin tulokset testeis-5 tä, jotka he suorittivat määrittääkseen neljän tamponimer-kin vaikutuksen myrkyllisen shokkioireyhtymän toksiini-l:n tuotantoon. Testatuille tamponeille käytettävissä olevan ilman määrä rajoittui siihen, joka sisältyi pusseihin (jotka oli valmistettu selluloosamakkarapäällysteistä ja 10 joiden molekyylipainokynnys oli alle 10 000), joihin tamponit oli suljettu testauksen ajaksi. Tämä menetelmä katsottiin edulliseksi sikäli, että saatavana olevan ilman rajallisen määrän arveltiin jäljittelevän paremmin kuin aiemmin käytettyjen menetelmien in vivo -tilannetta emät-15 timessä kuukautisten aikana tamponin ollessa paikoillaan, sekä sikäli, että testattuja tamponeita ei muutettu ennen testausta. Reiserin et ai. suorittamien testien tulokset osoittivat, että tamponit tarjoavat kasvaneen pinta-alan S. aureus -bakteerien kasvulle sekä riittävästi happea 20 toksiinituotantoon. Mitään merkittävää Staphylococcus-bak-teerien kasvun tai TSST-l-tuotannnon inhibitiota ei havaittu millään testatuista tamponeista.

Robbins et ai. julkaisussa J. Clinical Microbiol.

• « ‘.v 25:8 (1987, elokuu) 1446 - 1449 raportoivat samoihin ai- :<<<: 25 koihin kuin Reiser et ai. 17:n kaupallisesti saatavana : olevan tamponin vaikutuksesta TSST-1-toksiinituotantoon • · · · levy-membraani-agar (DMA) -menetelmää käyttäen ja inkuboi- den 37 °C:ssa 19 tunnin ajan ilmassa, jossa oli 5 % CO,:ta. Suodatinmembraaneille agar-kasvualustapinnalla (joka si-. 30 sälsi tai ei sisältänyt verta) pienissä petrimaljoissa siirrostettiin levittämällä TSST-1 :tä tuottavaa S. aureus • · ··♦* -kantaa. Robbins et ai. päättelivät, että tamponien tär- ; kein rooli TSS:ssä saattaa olla se, että ne tarjoavat kui- tuisen pinnan voimakkaalle pesiytymiselle sekä riittävästi 35 ilmaa TSST-1-tuotantoon. Lisäksi he löysivät todisteita 107019 5 TSST-l-tuotannon inhibitiosta sen kaltaisten lisäaineiden toimesta kuten deodorantti/pinta-aktiivinen aine, jota käytetään kaupallisesti saatavana olevassa deodorantti-tamponissa, sekä laskusta TSST-l-tuotannossa S. aureuksen 5 kasvun inhiboinnin kautta, kuten havaittiin toisenkin kaupallisesti saatavana olevan tamponin kohdalla. Arveltiin, että sekä TSST-l-tuotannon inhibitio että S. aureuksen kasvun inhibitio saattaisivat osoittautua tärkeiksi TSS-vaaran alentamisessa.

10 S. Notermans et ai. [Journal of Food Safety 3 (1981) 83 - 88] raportoivat, että glyseryylimonolauraatti käytettynä suhteessa 5 g kg:aa kohden lihalietettä (pH 6,0 - 6,2) inhiboi toksiinituotannot Clostridium bo-tulinum tyypeillä A, B ja E. Tässä julkaisussa ei mainita 15 Staphylococcus aureusta eikä mitään sen tuottamia toksiineja eikä siinä mainita naisten hygieniakoostumuksia, joissa käytetään glyseryylimonolauraattia, tai myrkyllinen shokkioireyhtymä -sairautta.

Myrkyllinen shokkioireyhtymä (TSS) -sairauden 20 riippumatta siitä, liittyykö se kuukautisiin vai ei, oireita ovat kuume, alhainen verenpaine, ihottuma ja ihon hilseily. TSST-1 liittyy voimakkaasti kuukautistapauksiin v.: mutta se eristetään harvemmin Staphylococcus aureus -kan- : : : noista sairauden ei-kuukautistapauksissa. Koska TSST-1 voi 25 indusoida monia TSS:n kliinisiä piirteitä kaniinissa ja j muissa lajeissa, sen arvellaan yleisesti olevan aiheuttava • · · t ....: toksiini TSS:ssä (Schlievert, "Staphylococcal Enterotoxin B and Toxic Shock Syndrome Toxin-1 Are Significantly As- • · « sociated With Non-Menstrual TSS" (suom. "Staphylococcus- . 30 enterotoksiini-B ja myrkyllisen shokkioireyhtymän tok- • · « « · - siini-1 liittyvät merkittävästi ei-kuukautis-TSS:ään"), ··.’ Lancet 1 (1986, 17. toukokuuta) 8490. Kuitenkin Garbe (Garbe, Arko, Reingold et ai., "Staphylococcus aureus Iso-lates From Patients With Non-Menstrual Toxic Shock Synd-35 rome: Evidence For Additional Toxins" (suom. "Staphyloco- 107019 6 ecus aureus -isolaatteja potilaista, joilla on ei-kuukau-tisliitteinen myrkyllinen shokkioireyhtymä -sairaus: Todisteita muista toksiineista"), JAMA 253 (1985) 2538 - 2542) havaitsivat, että monet TSS-isolaatit ei-kuukautis-5 tapauksista eivät ilmentäneet TSST-l:tä, vaikka ne kuitenkin aiheuttivat TSS:n kaltaisia oireita kaniinimallissa.

S. aureuksen ei-kuukautisliitteisten isolaattien muodostamien toksiinien osalta TSST-l:tä tuotti 40 % Schlievertin v. 1986 raportoimista.

10 TSST-l:n tuotanto S. aureuksella on pääasiassa yh distetty tamponien käyttöön liittyvään kuukautisliittei-seen TSS:ään. Kokeita käynnistettiin sen määrittämiseksi, voitaisiinko TSST-l:n tuotanto absorboivissa kuituisissa materiaaleissa minimoida tai katkaista. Yllättäen identi- 15 fioitiin ryhmä yhdisteitä, joita kuvataan US-patenttijulkaisuissa 5 641 503, 5 679 369 ja 5 705 182.

Kuitenkin on olemassa tarve löytää suihkukoostumus, joka kykenee vastustamaan Staphylococcus aureuksen TSST-l:n tuotantoa emätinontelossa.

20 Keksintö koskee ei-absorboivia koostumuksia emät timen kastelemiseksi ja puhdistamiseksi, jotka koostumukset sisältävät Staphylococcus-toksiinien inhibointiin « < '•V riittävän määrän yhdistettä, joka valitaan seuraavien muo- i i '.V dostamasta ryhmästä: • 25 a) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvaha- i pon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, monoesteri, jossa • ·· · ·;·· mainitussa monoesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, .•j·. joka liittyy sen alifaattiseen alkoholitähteeseen; b) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvaha- 30 pon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, diesterit, jossa • · ... mainitussa diesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, • · ·;·* joka liittyy sen alif aattiseen alkoholitähteeseen; ja c) edellä mainittujen monoesterien ja diesterien ; seokset. Lisäksi keksintö koskee menetelmää nestemäisen 35 koostumuksen valmistamiseksi käytettäväksi naisten intii- < * \ \ mihygieniassa, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että se käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan ja 7 10701y yhdisteen sekoittamisen, joka yhdiste valitaan yllä mainituista ryhmistä a), b) ja c).

Edellä mainittujen monoesterien ja diesterien rasvahappo-osa voidaan saada kapryyli-, kapriini-, lauriini-, 5 myristiini-, palmitiini- ja steariinihapoista, jotka ovat tyydyttyneitä rasvahappoja, joiden vastaavat ketjupituudet ovat C8, C10, C12, C14, C16 ja C18. Edellä mainittujen monoesterien ja diesterien rasvahappo-osa voi niinikään olla peräisin tyydyttymättömistä rasvahapoista, joiden hiili-10 ketjun pituudet niinikään ovat C8-C18, jolloin yksi esimerkki tällaisista tyydyttymättömistä rasvahapoista on öljyha-ppo. Edullinen rasvahappo käytettäväksi esillä olevan keksinnön käytännössä on lauriinihappo, joka on tyydyttynyt rasvahappo, jonka kemiallinen kaava on C1;lH23COOH.

15 Tässä patenttiselityksessä ja oheisissa patentti vaatimuksissa käytettynä ilmaisulla "alifaattinen" on sille orgaanisessa kemiassa tavallisesti annettu merkitys, jolloin "alifaattinen" viittaa orgaanisiin yhdisteisiin, joille on tunnusomainen hiilirakenneatomien suora- tai 20 haarautunut-järjestäytyminen ketjuksi.

Tässä patenttiselityksessä ja oheisissa patenttivaatimuksissa käytettynä ilmaisulla "polyhydrinen" viita-

« I

taan sellaisen kemiallisen yhdisteen läsnäoloon, jossa on ‘.V ainakin kaksi hydroksyyli (OH) ryhmää. Täten polyhydrinen : 25 alifaattinen alkoholi on yhdiste, jossa on ainakin kaksi • hydroksyyliryhmää ja jossa hiilirunko on joko suora tai • · · · haarautunut.

• ·

Polyhydrisiä alkoholeja, jotka sopivat muodostamaan • · * monoestereitä ja/tai diestereitä käytettäviksi esillä ole- . 3 0 van keksinnön käytännössä, ovat 1,2-etaanidioli; 1,2,3- « · propaanitrioli (glyseroli); 1,3-propaanidioli; 1,4-butaa- • · ·;·* nidioli; 1,2,4-butaanitrioli ja vastaavat. Edullinen poly- ·,: hydrinen alifaattinen alkoholi monoesterien ja diesterien muodostamiseksi käytettäviksi esillä olevan keksinnön käy-3 5 tännössä on 1,2,3-propaanitrioli (jota yleisesti kutsutaan \ \ glyseroliksi), jonka kaava on HOCH2CH (OH) CH2OH.

107019 8

Estereissä, jotka ovat käyttökelpoisia esillä olevan keksinnön käytännössä, on ainakin yksi hydroksyyliryh-mä, joka liittyy niiden alifaattiseen alkoholitähteeseen. Täten tulee huomata, että 1,2-etaanidiolin ja jonkin edel-5 lä mainitun rasvahapon muodostamaa monoesteriä voidaan käyttää esillä olevan keksinnön käytännössä, koska mainitussa esterissä, jonka yleinen kaava on:

C„H2n+1-C-0-CH2-CH20H

10 Ö on ainakin yksi hydroksyyliryhmä (eli hydroksyyli-ryhmä äärimmäisenä oikealla edellä esitetyssä rakennekaavassa) siinä osassa esteriä, joka on peräisin alifaatti-sesta alkoholista 1,2-etaanidiolista. Toisaalta tulee huo-15 mata, että 1,2-etaanidiolin ja jonkin edellä mainitun rasvahapon diesteriä ei voida käyttää esillä olevan keksinnön käytännössä, koska mainitussa esterissä, jonka yleinen kaava on

CnH2ntl-C-0-CH2-CH20-C-CnH2n+1 it it 20 0 0 ei ole vähintään yhtä hydroksyyliryhmää siinä osassa esteriä, joka on peräisin 1,2-etaanidiolista.

Glyserolin ja jonkin mainituista rasvahapoista mo-noesteriä voidaan käyttää esillä olevan keksinnön käytän-: : 25 nössä, koskaa esterissä välttämättä on kaksi siihen liit- * tyvää hydroksyyliryhmää, jotka ovat peräisin glyserolista.

• « · · ..··· Glyserolin ja jonkin mainituista rasvahapoista diesteriä voidaan niinikään käyttää, koska esterissä välttämättä on • · · « yksi siihen liittyvä hydroksyyliryhmä, joka on peräisin . 30 alifaattisesta alkoholista glyserolista. Itse asiassa • · ... kuten nähdään jäljempänä glyserolimonolauraatin ja glyse- • · ·;·' rolidilauraatin seoksien on todettu olevan käyttökelpoisia : '.j esillä olevan keksinnön käytännössä. Lopuksi tulee huoma- ta, että glyserolin ja jonkin mainituista rasvahapoista 35 triesteriä ei voida käyttää esillä olevan keksinnön käy- i · « « I · · 4 · « 107019 9 tännössä, koska esterissä ei ole vähintään yhtä hydroksyy-liryhmää sen siinä osassa, joka on peräisin alifaattisesta alkoholista, eli glyserolista.

Edullisia estereitä käytettäviksi esillä olevan 5 keksinnön käytännössä ovat glyseryylimonolauraatti, gly- seryylidilauraatti ja niiden seokset.

Erityisen edullinen on glyseryylimonolauraatti, jota myy kauppanimellä "Monomuls 90 L-12" valmistaja Henkel Corporation. Tämä yhdiste sisältää noin 96 paino-% 10 glyseryylimonolauraattia. Glyseryylidilauraattia ei todeta tämän yhdisteen näytteissä, joita käytetään jäljempänä esimerkeissä. Glyseryylimonolauraatti on yhdiste, jolla on FDA:n GRAS-luokitus käytettäväksi elintarvike-emulgaatto-rina. Tämä materiaali on ihmisille ei-myrkyllinen ja sillä 15 on mikrobivastaisia ominaisuuksia.

Muita edullisia estereitä käytettäviksi tämän keksinnön mukaisesti ovat C-3-alkanolien monolauraattijohdannaiset, kuten 2-hydroksi-l-propyylilauraatti ja 3-hydrok-si-l-propyylilauraatti. C-3-alkanolien dilauraattijohdan-20 naisten kuten glyseroli-1,3-dilauraatin, glyseroli-1,2- dilauraatin odotetaan myös vähentävän enterotoksiinien A, B, C ja TSST-1, jossa on enterotoksiini-A:ta, määrää. Ety-leeniglykolijohdannaisten kuten etyleeniglykolimonolauraa-tin sekä polyetyleeniglykolilauraattien, esim. dietyleeni-25 glykolimonolauraatti ja trietyleeniglykolimonolauraatti, | odotetaan niinikään olevan aktiivisia. Tietyillä polymee- ·;··· reillä odotetaan samoin olevan toksiineja vähentävää ak- tiivisuutta, esimerkiksi polyetyleeniglykoli- (mp. 200) monolauraatti, polyetyleeniglykoli- (400 mp.) monolauraat-30 ti, polyetyleeniglykoli- (1 000 mp. ) monolauraatti, ja • · polypropyleeniglykolilauraatit kuten polypropyleeniglyko- • ·> ···* limonolauraatti.

t «

Muita yhdisteitä, joiden arvellaan olevan aktiivi-siä TSST-l-toksiinia vastaan tämän keksinnön mukaisissa . Λ 35 koostumuksissa, ovat: glyseryylimonokaprylaatti, glyse-

« I

• · 10 icrc'y ryylikapraatti, glyseryylimonokaprylaatin ja glyseryyli-kapraatin seos, glyseryylimonomyristaatti, glyseryylimo-nopalmitaatti, glyseryylimonostearaatti ja glyseryylimo-no-oleaatti.

5 Keksinnön mukaan tämän keksinnön mukaiset ei-ab- sorbenttikoostumukset sisältävät edellä kuvattua esteriä määrän, joka on tehokas inhiboimaan myrkyllinen shokkioi-reyhtymä -sairaudessa esiintyvää toksiini-1:tä (TSST-l:tä), kun mainittu tuote saatetaan kosketuksiin S. au-10 reuksen kanssa. Esimerkiksi tehokkaiden määrien on todettu olevan noin 0,1 % ja siitä ylöspäin ja edullisesti vähintään noin 0,5 % w/w spesifioitua mono- tai diesteriyh-distettä (tai niiden seosta) laskettuna valmistetun liuoksen painosta.

15 Edullisesti tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden glyseryylimonolauraatti/glyseryylidilauraattiseokset sisältävät ainakin 90 % glyseryylimonolauraattia; edullisemmin ne sisältävät ainakin 95 % glyseryylimonolauraattia. Edullisimmin yhdisteseoksen tulisi koostua oleellisesti 20 kokonaan glyseryylimonolauraatista.

Tämän keksinnön mukaisten koostumusten vaikuttava aine voidaan koostaa erilaisiksi koostumuksiksi, kuten ne, joita käytetään tämänhetkisissä kaupallisissa suihkukoos- tumuksissa, tai suihkuissa, joiden viskositeetti on kor- 25 keampi. Esimerkiksi tämän keksinnön mukaisten koostumusten : : : vaikuttava aine voidaan koostaa pinta-aktiivisten aineiden • · · · ·;·♦· kanssa, edullisesti ei-ionisten pinta-aktiivisten ainei- den, kuten Cremophos RH60, Tween 20 tai vastaavien kanssa.

Tämän keksinnön mukaiset koostumukset voivat samoin sisäl- it<i; 30 tää säilytysaineita kuten metyyliparabeenia tai propyyli-• * ... parabeenia tai vastaavia. Yhdisteitä, jotka nostavat vis- • · ”* kositeettia, kuten propyleeniglykoli, voidaan samoin lisä- t i '> '·! tä tämän keksinnön mukaisiin koostumuksiin. Yleensä koos-

( I

tumukset, joiden viskositeetti on korkeampi, ovat edulli-35 siä koostumusten muodostamiseksi, joilla on taipumus jäädä « ·

III

107019 11 emättimeen suhteellisen pitkäksi ajaksi annostelun jälkeen. Eräs näytekoostumus on seuraavanlainen: 0,3 0 % w/w glyseryylimonolauraattia, 0,50 % w/w Cremophos RH60 -valmistetta, 2,00 % w/w Tween 20 -valmistetta, 0,30 % w/w 5 metyyliparabeenia, 0,10 % w/w propyyliparabeenia, 1,0 % w/w propyleeniglykolia, 0,04 % w/w FD & C Blue #1 -valmistetta, väriä, ja 95,76 % w/w deionisoitua vettä. Toinen näytekoostumus sisältää 0,50 % w/w glyseryylimonolauraattia, 1,50 % w/w Cremophos RH60 -valmistetta, 10 1,00 % w/w Tween 20 -valmistetta, 0,30 % w/w metyylipara beenia, 0,10 % w/w propyyliparabeenia, 0,04 % w/w FD & C Blue #1 -valmistetta, väriä, ja 96,56 % deionisoitua vettä.

Glyseryylimonolauraattia on kuvattu vaikuttavana 15 aineena, joka on käyttökelpoinen myrkyllinen shokkioire-yhtymä -sairauteen liittyvän toksiini-l:n vastustamiseksi US-patenttijulkaisuissa 5 641 503, 5 679 369, 5 705 182, jotka sisällytetään täten tähän viitteiksi. Näissä patenttihakemuksissa kuvataan glyseryylimonolauraattia ja sen 20 analogeja materiaalina, joka saatettuna kosketuksiin S. aureuksen kanssa absorbenttituotteissa kykenee vähentämään TSST-l-toksiinin muodostusta. Arvellaan samoin, että ak- t i ’ I | tiiviset yhdisteet tämän keksinnön mukaisissa koostumuk- I » W sissa ovat tehokkaita muuntyyppisten Staphylococcus-tok- « I « 25 siinien tuotannon vastustamiseksi, erityisesti Staphylo- • · ϊ coccus-enterotoksiinien A, B, C ja TSST-1, jossa on A:ta.

*:**: Tällaista tehoa on tavattu näiden edellä mainittujen ente- rotoksiinien suhteen sijoitettaessa aktiivinen yhdiste absorbenttimateriaalille. Keksinnön mukaisten yhdisteiden 30 tehoa Staphylococcus-enterotoksiinien A, B, C ja TSST-1, • ♦ ' jossa on A:ta, muodostumista vastaan kuvataan US-paten- *** tissa 5 389 374 ja 5 753 252. Glyseryylimonolauraatti on

niinikään todettu tehokkaaksi pyrogeenisten Streptococcus-eksotoksiinien (SPE) A, B ja C tuotannon inhiboimiseksi, 3 5 sekä hemolysiinin, jota tuottavat ryhmän A, B, F ja G

107019 12 streptokokit. Arvellaan, että glyseryylimonolauraatin analogit ovat samoin tehokkaita tällaisten toksiinien tuotannon inhiboimiseksi. Glyseryylimonolauraatin tehoa streptokokkien toksiinituotannon inhiboinnissa käytettynä liuok-5 sena sekä absorbenttituotteissa havainnollistetaan US-pa- tenteissa 5 389 374 ja 5 753 252.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat tämän keksinnön mukaisten koostumusten vaikutuksia TSST-l:n tuotantoon. Luonnollisesti nämä esimerkit ainoastaan havainnoi-10 listavat keksinnön mukaisia tuotteita rajoittamatta keksinnön laajuutta.

Esimerkki 1

Glyseryylimonolauraattia lisättiin kaupallisesti saatavana oleviin suihkuihin ja näitä seoksia kuumennet-15 tiin glyseryylimonolauraatin liuottamiseksi. Suihkukoos- tumukset valmistettiin sisältämään glyseryylimonolauraattia pitoisuudet 0,1, 1,0 ja 10,0 paino-% nestemäisestä suihkusta. Spesifisesti Massengill Vinegar and Water Douche -valmistetta, joka sisältää vain etikkaa ja vettä, 20 yhdistettiin glyseryylimonolauraattiin tässä esimerkissä.

Tässä esimerkissä käytetyt liuokset olivat Massengill Vinegar and Water Douche -valmiste, joka on kaupallisesti saatavana oleva tuote, jota valmistaa Beecham Products, joka on yrityksen Beecham Inc., Pittsburgh, Pennsylvania, 25 jaosto, yksinään sekä kolme liuosta, jotka sisälsivät Mas- < I « ·...· sengill Vinegar and Water Douche -valmistetta sekä • « ·.· · 0,1 paino-% glyseryylimonolauraattia, Massengill Vinegar *:"! and Water Douche -valmistetta sekä 1,0 paino-% glyseryyli- :*j*j monolauraattia ja Massengill Vinegar and Water Douche « 30 -valmistetta sekä 10 paino-% glyseryylimonolauraattia.

♦ • · ··« • · « « t « 107019 13

Glyseryylimonolauraatin aktiivisuutta testattiin käyttäen tamponipussimenetelmää, jonka ovat julkistaneet Reiser et ai. julkaisussa Journal of Clinical Microbiology 25 (1987, elokuu) 1450 - 1452. Menetelmä säädettiin siten, 5 että tätä menettelyä voitiin käyttää ilman tamponeja tai absorbenttimateriaaleja kuten alla kuvataan.

Testeissä käytettiin Staphylococcus aureus -kantaa FRI - 1169, joka saatiin kylmäkuivatussa muodossa Dr. Meriin Bergdollilta, Food Research Institute, University of 10 Wisconsin, Madison, Wisconsin, USA. S. aureus -liete valmistettiin sekoittamalla perusteellisesti yksi (1) milligramma (mg) kylmäkuivattua S. aureus -kantaa yhteen (1) millilitraan (ml) aivosydäninfuusio(BHI-)lientä (joka saatiin valmistajalta Difco Laboratories, Detroit, Michigan, 15 USA), minkä jälkeen mainittu seos siirrettiin koeputkeen, jossa oli viisi (5) ml BHI-lientä, sekoitettiin jälkeen perusteellisesti ja inkuboitiin 24 tunnin ajan 37 °C:ssa ennen käyttöä.

Mikro-organismi kasvualustoineen siirrettiin sitten 20 steriileihin sentrifugiputkiin, joita pyöritettiin solujen pelletoimiseksi 2 000 kierr./min kierrosnopeudella 20 minuutin ajan jäähdytetyssä sentrifugissa, minkä jälkeen supernatantti dekantoitiin eroon ja pelletti uudelleenlie-tettiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen, pH 4,0. Tämä 25 menetelmä toistettiin viiden toisiaan seuraavan 10 minuu-tin pesun suorittamiseksi. Liuos, jonka pH oli 4, salli • · : : : siirrostuksen ilman ravinteiden siirtämistä ja esti bak- ·;··· teereja saamasta shokkia niiden joutuessa kosketuksiin liuoksien kanssa, joiden pH oli 4,0. Tämä menettely suori-30 tettiin kuten kuvattiin sekä Massengill Douche että Sum-iner's Eve Douche -tuotteille.

• · ...^ 100 ml BHI-agaria (joka samoin saatiin valmistajal- ta Difco Laboratories) sijoitettiin kuhunkin kymmenestä « « '·/·] 3,8 cm x 20 cm viljelyputkesta. Selluloosadialyysipussit : 35 valmistettiin ja steriloitiin tavalla, jonka ovat julkis- 107019 14 taneet Reiser et ai. Steriileihin selluloosadialyysipus-seihin (mp. 8 000 raja) siirrostettiin edellä mainittua S. aureus -lietettä määrä, joka riitti tuottamaan testiä aloitettaessa pitoisuuden 5,20 x 108 pmy/ml S. aureus -bak-5 teereja.

Testiliuokset valmistettiin lisäämällä kiinteää gl-yseryylimonolauraattia kaupallisiin suihkuliuoksiin (Ma-ssengill ja Summer's Eve), kuumentamalla 60 °C:seen pitoisuuksissa, jotka johtaisivat glyseryylimonolauraattipitoi-10 suuteen 0,1, 1,0 ja 10 paino-% kuumennetuissa suihkuliuok- sissa. Nämä liuokset jäähdytettiin niitä samalla sekoittaen ja lisättiin sitten siirrostettuihin dialyysipus-seihin, jotka sisälsivät S. aureusta, painomäärinä 1,0 -grammaa.

15 Yksi gramma steriiliä tislattua vettä lisättiin dialyysipusseihin, joihin oli siirrostettu S. aureus, yksinään ilman mitään muita lisäaineita, jolloin tätä näytettä kutsutaan siirrostusverrokiksi. Kukin dialyysipussi työnnettiin sitten viljelyputkiin, jotka sisälsivät BHI-20 agaria ja jätettiin kovettumaan. Käytettiin kahta siirros-tusverrokkia, molempia rinnakkaismäärityksin. Täten tässä testissä käytettiin 10 viljelyputkea, joista neljä sisälsi verrokit (kaksi, joissa oli Massengill Vinegar and Water Douche -valmistetta, ja kaksi tyhjää) sekä 6 viljelyput-25 kea, jotka sisälsivät glyseryylimonolauraattia lisättynä ·...· kaupallisiin suihkuihin pitoisuuksina, jotka tuottivat • · ·.· · näytteet, joissa oli Massengill Douche -valmistetta ja *:·*: siinä 0,1 % glyseryylimonolauraattia w/w, Massengill

Douche -valmistetta ja siinä 1,0 % glyseryylimonolauraat-30 tia w/w ja Massengill Douche -valmistetta, ja siinä 10 % glyseryylimonolauraattia w/w rinnakkaisnäyttein. 24 tunnin • · ... inkubointiaikajakson päätteeksi viljelyputkista mitattiin solupitoisuus ja TSST-l-pitoisuus. Tulokset tästä esimer- kistä esitetään taulukossa 1.

« · 35 107019 15

Taulukko 1

Massengill Douche -tuotteeseen lisätyn GML:n vaikutus Staphylococcus aureuksen TSST-1-muodostukseen ja kasvuun 5 Näyte S. aureuksen S. aureuksen TSST-1:n loppupitoisuus loppupltolsuusa loppumäärä*1'c (x 10® pey/el) (log10 P**/·1) (ng)

Slirroste 91,20 9,96 6 309.80 10 yksinään

Massengill 0,16 7,21 6 512,52

Douche 15 Massengill 2,25 8,35 2 161,60

Douche (0,1 % GML)

Massengill 0,71 6,85 315,80

Douche (1,0 * GML) 20

Massengill 0.22 7.35 35,78 • Douche (10 % GML) a Elinkelpoisten S. aureus -solujen lukumäärä il-25 maistuna logatrimina 10:stä.

b Määritettynä ELISA:11a menetelmän mukaan, jonka julkistivat Reiser et ai., Applied and Environmental Microbiology 1982 (joulukuu) 1349 - 1355.

c Keskiarvomääritys rinnakkaisnäytteistä.

30 • ·

Taulukossa 1 esitetyt tiedot osoittavat, että pi- « · · m“ \ toisuudessa 0,1 % w/w glyseryylimonolauraattia tapahtuu Φ l ... 66 %:n lasku TSST-1 :ssä kun taas pitoisuudessa 1,0 % w/w • » · *·’ ' glyseryylimonolauraattia havaittiin 95 %:n lasku. Pitoi- 35 suudessa 10 % w/w glyseryylimonolauraattia TSST-1:n muo- dostuksessa tapahtui 99 %:n lasku. Solujen elinkelpoisten • · · ‘ * solujen lukumäärän havaittiin kasvavan, kun ne saatettiin .·. ; kosketuksiin Massengill Douche -tuotteen kanssa, joka si- i./ sälsi 0,1 % glyseryylimonolauraattia, log-pitoisuudesta T 40 7,21 kaupallisessa verrokkikoostumuksessa yksinään kor- 4 · · • · • ·

i · I

107019 16 keampaan pitoisuuteen 8,35. Sitä vastoin Massengill Douche, jossa oli 1 % w/w glyseryylimonolauraattia, johti log-pitoisuuteen 6,85 (4,9 %:n lasku) ja 10 % w/w glyseryylimonolauraattia edelleen Massengill Douche -tuotteessa joh-5 ti verrokissa havaittua pitoisuutta 7,21 korkeampaan log-pitoisuuteen 7,35. Käytetty metodiikka ei estänyt vaikuttavan aineen kulkemista dialyysipussien läpi. Kuitenkin jopa tämän liikkumisen valossa vaikutus silti havaittiin ja noteerattiin.

10 Esimerkki 2

Arvioitiin myös S. aureuksen kasvua ja TSST-l-tuo-tantoa Summer's Eve Douche -valmisteen läsnä ollessa, joka sisälsi tai ei sisältänyt glyseryylimonolauraattia. Summer's Eve Douche -valmistetta valmistaa C.B. Fleet Co. 15 Inc., Lynchburg, Virginia, ja sitä on USA:ssa myytävänä. Vaikka löytyy useita suihkutuotteita, joita myydään kauppanimellä Summer's Eve, tässä esimerkissä testattu tuote sisälsi puhdistettua vettä, etikkaa ja bentsoehappoa. Liuoksia, jotka sisälsivät Summer's Eve -suihkutuotetta ja 20 vaihtelevan pitoisuuden glyseryylimonolauraattia, kuumennettiin vaikuttavan ainesosan liuottamiseksi kuten kuvattiin esimerkissä 1. Tähän esimerkkiin sisällytettiin liuokset, jotka sisälsivät glyseryylimonolauraattipitoi-suudet 0,1, 1,0 ja 10 % w/w. Liuokset valmistettiin ja 25 niitä arvioitiin 1,0 gramman määrinä kuten kuvattiin esi- ·...· merkissä 1. Testitulokset esitetään taulukossa 2.

• · · • · · • · 1 « • · • · · • · · • « 1 e • · • · · • · * · · · • · · 107019 17

Taulukko 2

Summer's Eve Douche -tuotteeseen lisätyn GML:n vaikutus Staphylococcus aureuksen TSST-1-muodostukseen ja kasvuun 5 Käyte S. aureuksen s. aureuksen TSST-l:n loppupitoieuus loppupitoieuusa 1 oppimäärä*3 *c (x 10® pmy/ml) (log10 pey/nl) (ng)

Siirroste 91,20 9,96 6 309,80 10 yksinään

Summer's Eve 0,021 6,34 670,94

Douche (verrokki) 15 Summer's Eve 0,005 5,74 27,87

Douche (0,1 % GML)

Summer's Eve 0,006 5,63 4,60

Douche (1,0 S GML) 20

Summer's Eve 0,12 7,08 4.00

Douche (10 * GML) a Elinkelpoisten S. aureus -solujen lukumäärä il-25 maistuna logatrimina 10:stä.

c Keskiarvomääritys rinnakkaisnäytteistä.

. . 30 • ·

Taulukossa 2 esitetyistä tuloksista ilmenee merkit- • · · * tävä lasku sekä elinkelpoisten solujen lukumäärässä log- pitoisuudesta 9,96 6,34:ään (36 %:n lasku) kaupallisen • · » *·* ‘ suihkuvalmisteen läsnä ollessa, sekä merkittävä lasku 35 TSST-l-tuotannossa 6 309,80:sta 670,94:ään (89 %:n lasku). Tämä lasku elinkelpoisten solujen pitoisuudessa johtuu • ’ ’ todennäköisimmin tunnetun bakterisidin bentsoehapon läs- , , 1 näolosta etikkahapon ohella kaupallisessa koostumuksessa.

Taulukossa 2 esitetyistä tiedoista ilmenee myös TSST-1-T 40 tuotannon lasku 96 % alhaisempaan tasoon, kun läsnä on 107019 18 pitoisuus 0,1 % glyseryylimonolauraattia ja 99 %:n lasku, kun läsnä ovat pitoisuudet 1,0 ja 10 % glyseryylimonolauraattia w/w verrattuna määrään, joka muodostuu verrokki-systeemissä, joka sisältää vain Summer's Eve Douche -tuo-5 tetta.

0,1 %:n w/w glyseryylimonolauraattia läsnäolo johti log-pitoisuuteen 5,74 (9 %:n lasku) elinkelpoisia soluja verrokkiin verrattuna. 1,0 %:n w/w glyseryylimonolauraattia läsnä ollessa saatiin log-pitoisuus 5,83 (8 %:n las-10 ku). Sitä vastoin 10 %:n w/w glyseryylimonolauraattiliuos

Summer's Eve Douche -tuotteessa johti log-pitoisuuteen 7,08 (11 %:n nousu).

Esimerkki 3 Tässä esimerkissä arvioitiin S. aureuksen kasvua ja 15 TSST-1-tuotantoa kun läsnä on liete, jossa on glyse ryylimonolauraattia tislatussa vedessä pitoisuuksina 0,1, 1,0 ja 10 % w/w. Liuoksia arvioitiin 1,0 gramman määrinä kuten kuvattiin esimerkissä 1 lukuunottamatta, että testissä ei käytetty kaupallista tuotetta. Tulokset esitetään 20 taulukossa 3.

• o • · • · · • · • · · • · « • · « 4 • < • · · • * · • · · m • · • * * • · « 4 « • · 107019 19

Taulukko 3 GML-lietteen vedessä vaikutus Staphylococcus aureuksen TSST-1-muodostukseen ja kasvuun 5 Näyte S. aureuksen S. aureuksen TSST-l:n loppupitoisuus loppupitoisuus3 loppuaäärä^'c (x 10® pay/ai) (log10 pay/al) (ng)

Siirroste 91,20 9,96 6 309,80 10 vedessä (verrokki) GML (0,1 X) 0,35 7,55 3,45 vedessä 15 GML (1,0 X) 0,002 4,31 2,32 vedessä GML (10 X) 0,03 6,53 4,02 vedessä 20 a Elinkelpoisten S. aureus -solujen lukumäärä ilmaistuna 10:n logatrimina.

b Määritettynä ELISA:11a menetelmän mukaan, jonka julkistivat Reiser et ai., Applied and Environmental 25 Microbiology 1982 (joulukuu) 1349 - 1355.

c Keskiarvomääritys rinnakkaisnäytteistä.

‘ ‘ ‘ Taulukossa 3 esitetyistä tiedoista ilmenee merkit- .v tävä lasku TSST-1-muodostuksessa (99,9 %) eri pitoisuuk- ·...· 30 silla glyseryylimonolauraattia lietettynä tislattuun ve- » « · teen, jolloin kyseessä ovat pitoisuudet 0,1 % w/w glyse- *:**; ryylimonolauraattia ja tästä ylöspäin. Edelleen 1 000-ker- :1·1: täistä laskua toksiinimuodostuksessa vastasi niinikään 99,6 %:n lasku elinkelpoisten S. aureus -solujen lukumää-35 rässä, joka todettiin pitoisuudessa 0,1 % w/w glyseryyli- • · ...^ monolauraattia. Glyseryylimonolauraatin kasvavissa pitoi- ‘ i ‘ suuksissa mikrobivastainen vaikutus oli selvempi tasolla 1,0 %. Pitoisuudessa 10 % w/w glyseryylimonolauraattia mikrovastainen vaikutus oli alhaisempi, minkä voitiin kat- ;·1·. 40 soa johtuvan testun yhdisteen liukenemattomuudesta. Laskut • · » 107019 20 TSST-1-muodostuksessa eivät merkittävästi muutu glyseryy-limonolauraatin pitoisuuden kasvaessa 0,1 %:sta 10 %:iin, jolloin kuitenkin havaittiin merkittäviä muutoksia elinkelpoisten solujen lukumäärissä.

5 Esimerkki 4 Tämä esimerkki suoritettiin S. aureuksen kasvun ja TSST-l-tuotannon arvioimiseksi, kun läsnä oli ei-absor-benttiehkäisytuote, "Today Sponge", lisäten ja lisäämättä glyseryylimonolauraattia. Today Sponge -tuotetta valmistaa 10 Whitehall Laboratories Inc., New York, USA. Today Sponge -tuotteen valmistaja kuvaa sisältävän Nonoxynol-9:ää, bentsoehappoa, sitruunahappoa, natriumdivetysitraattia, natriummetabisulfiittia, sorbiinihappoa ja vettä polyure-taanivaahtosienessä. Sieni painaa keskimäärin 7,0 grammaa. 15 Liuoksia, joissa oli glyseryylimonolauraattia vedessä, kuumennettiin kunnes glyseryylimonolauraatti liu keni, minkä jälkeen niitä pipetoitiin 1,0 gramman määrinä Today Sponge -tuotteeseen, jolloin saatiin pitoisuudet 0,1, 1,0 ja 10 % w/w glyseryylimonolauraattia laskettuna 20 Today Sponge -tuotteen painosta. 1,0 gramman näytteet työnnettiin siirrostettuihin dialyysipusseihin, jotka sisälsivät TSST-1:tä tuottavaa S. aureusta pitoisuuden , , 5,20 x 108 pmy/ml aloitusajankohtana. Edellä mainitut näyt- teet arvioitiin kuten kuvattiin esimerkissä 1. Testitulok-

* I

25 set esitetään taulukossa 4.

* · • · ··· • · • · · • · · • · · · « • · • · « • 1 « • · · • · · · • · 107019 21

Taulukko 4 6ML-lietteen vedessä vaikutus Staphylococcus aureuksen TS-ST-l-muodostukseen ja kasvuun 5 Käyte S. aureuksen S. aureuksen TSST-l:n loppupitoisuus loppupitoisuus3 1 oppimäärä11'c (x 10® pay/al) (log10 W/»D (ng)

Today Sponge 5,66 8,75 12 635,21 10 (verrokki)

Today Sponge 4,60 8,66 2 185,88 (0,1 % GML) 15 Today Sponge 4,46 8,65 799,99 (1,0 % GML)

Today Sponge 0,13 7,13 3.29 (10 % GML) 20 a Elinkelpoisten S. aureus -solujen lukumäärä il maistuna 10:n logatrimina.

25 c Keskiarvomääritys rinnakkaisnäytteistä.

Taulukossa 4 esitetyt tulokset osoittavat laskua TSST-1-muodostuksessa tasolle 82 % vähemmän toksiinia, kun lisäys on 0,1 % w/w glyseryylimonolauraattia, jolloin ha- * · 30 vaitaan laskut 93 % ja vastaavasti 99,9 %, jos läsnä on • · · :·· : 1,0 tai 10 % w/w glyseryylimonolauraattia.

2 Solun elinkelpoisuuden osalta 0,1 %:n w/w glyse- 2 • · e · ryylimonolauraattia läsnäolo johti log-pitoisuuteen 8,66 (1,0 %:n lasku) verrokkiin verrattuna. Kun läsnä oli *:·1: 35 1,0 % w/w glyseryylimonolauraattia, log-pitoisuus oli 8,65 ·3; (1,1 %:n lasku), jolloin pitoisuuden ollessa 10 % w/w 3 / , glyseryylimonolauraattia esiintyi voimakkaampi mikrobivas- « I « • ]· täinen vaikutus, joka johti 18 %:n laskuun elinkelpoisten « e ’ ’ soluj en lukumäärässä.

« « · « « 107019 22

Esimerkki 7

Koska kaupallisia suihkutuotteita käytetään usein virheellisesti ehkäisyaineina, kokeiltiin glyseryylimono-lauraattia siittiöitä tappavan aktiivisuuden arvioimisek-5 si. Glyseryylimonolauraatin siittiöitä tappavaa aktiivisuutta arvioitiin käyttäen Sander-Cramer-testiä, jossa käytetään ihmisen siemennestettä. Yhdistettä mitattiin suolaliuokseen pitoisuus 100 mg/ml. Yksi (1) ml tätä liuosta sekoitettiin nopeasti 0,2 ml:aan ihmisen siemen-10 nestettä. Tästä seoksesta valmistettiin riippuva pisara, jota tarkasteltiin mikroskoopilla tarkaten siittiöiden liikettä 20 sekunnin kuluessa sekoittamisen aloittamisesta. Tässä korkeimmassa käytännöllisessä pitoisuudessa siittiöiden liike kesti kauemmin kuin 3 minuuttia, mikä 15 osoitti todettavan siittiöitä tappavan vaikutuksen puuttumisen.

Nämä esimerkit osoittavat, että glyseryylimonolau-raatti on aktiivinen toksiini-inhibiittori S. aureus -bakteerien tuottamalle TSST-l-toksiinille. Lisäksi yhdiste ei 20 oleellisesti inhiboi solukasvua tai solujen elinkelpoisuutta pitoisuuksissa, joita käytetään tämän keksinnön mukaisissa kaupallisissa koostumuksissa. Edelleen glyse-ryylimonolauraatti ei inhiboi siittiöiden liikettä.

Esimerkki 8 25 Tässä kokeessa, jonka suoritti Dr. Patrick Schlie- ·...* vert Minnesotan yliopistosta, glyseryylimonolauraattia • · · lisättiin vaihteleva pitoisuus 50 ml:aan aivo-sydäninfuu- *:**; siolientä. Näihin liuoksiin siirrostettiin sitten 1,0 x 106 pmy:tä/ml ryhmän A Streptococcus-kantaa C203 tai S. 30 aureus -kantaa MN8:aa, joka tunnetaan TSST-l-tuottajana. ....: Ryhmän A C203-streptokokkeja sisältäviä näytteitä inkuboi- tiin 37 °C:ssa 12 tunnin ajan ravistelematta organismien < '1' altistuksen hapelle vähentämiseksi 7 % C02:ta läsnä olles- « t sa. MN8:aa sisältäviä näytteitä inkuboitiin vastaavasti, 35 paitsi että niitä ravisteltiin (nopeudella 200 kierr./min) I « 4 • · f · » 23 10701y •tavanomaisessa inkubaattorissa. Tulokset tästä kokeesta on koottu taulukkoon 5 .·

Taulukko 5 5 Glyseryylimonolauraatin vaikutus ryhmän A Streptococcuksen ja S. aureuksen MN8 toksiinituotantoon ja vastaavien solujen elinkelpoisuuteen SP£-tyyppi 10 Nä,yte OML P"y X-B TSST-1 _mg/100----- C203 0 3.1x 10s 6.0 3.0 0.05 3.5x10® 6.0 3.0 0.1 3.2 x 10s 1.5 0.75 0.25 3.3 x 10s N.D. ND.

0.5 3.2 x10s N.D. N.D.

15 0.75 2.0 x10s N.D. ND.

1.0 4.0 ΧΙΟ7 N.D. ND.

1.25 3.5 xlO6 ND. N.D.

1.50 0 ND. ND.

1.75 0 N.D. N.D.

2.0 0 ND. ND.

5.0 0 ND. ND. .

10.0 0 ND. ND.

20 MN8 0 8.4 x 109 48 0.05 9.0 x 109 48 0.1 9.4 xlO9 48 0.25 6.2 xlO9 12 0.5 1.8 xlO10 ND.

.75 9.7 xlO9 N.D.

1.0 2.1 x 1010 N.D.

25 1.25 7.0 xlO9 N.D.

1.5 1.4 xlO10 N.D.

: : 1.75 u x io10 . n.d.

.“I 2.0 · 4.0 x I01 N.D.

ί 2.25 2.0xlO3 N.D.

2.5 2.3 XlO4 N.D.

' ‘ 5.0 2.1 xlO4 N.D.

10.0 2.9 xlO4 N.D.

» t * 30 --—____ [ N.D. = hi määritetty • m * ί 1 4 4« 4 # « * t 107019 24

Esimerkki 9 Tässä esimerkissä, jonka suoritti Dr. Patrick Schlievert, arvioitiin glyseryylimonolauraatin vaikutusta ryhmän A Streptococcus-kantojen, jotka yksittäin ilmentä-5 vät SPEA:n, SPEBtn tai SPEC:n, ja ryhmien B, F ja G Strep-tococcus-kantojen eksotoksiinituotantoon. Käyttäen esimerkissä 8 esitettyä menetelmää mikro-organismit altistettiin vaihteleville glyseryylimonolauraattipitoisuuksille aivo-sydäninfuusioliemessä. Käytettiin kantaa 594, joka tuottaa 10 SPEA-, kantaa 86-858, joka tuottaa SPEB-, ja kantaa T18P, joka tuottaa vastaavasti SPEC-toksiineja. Toksiinituotantoa mitattiin Western blot -immuunimäärityksillä aina 96 tuntiin asti. Tulokset tästä kokeesta glyseryylimonolauraatin vaikutuksen SPEA-, SPEB- ja SPEC-toksiinien tuotan-15 toon arvioimiseksi esitetään taulukossa 6.

S. aureus -kanta MN8 altistettiin niinikään glyse-ryylimonolauraatille. S. aureus -kannan MN8 TSST-1-tuotannon määrä mitattiin. Tulokset tästä testistä esitetään taulukossa 7.

20 Streptolysiinit 0 ja S, joita samoin tuottavat kan

nat 594, 86-858 ja T18P, sekä ryhmän B Streptococcus-hemo-lysiini, ryhmän F Streptococcus-hemolysiini ja ryhmän G Streptococcus-hemolysiini mitattiin 0,1 %:n lampaan punasoluja lyysistä, joka suoritettiin käyttäen 0,014 % 2-mer-25 kaptoetanolia pelkistimenä 0,75-%:isessa agaroosissa fos-faattipuskuriliuoksessa (PBS), 4,5 ml/objektilasi. PBS

• ♦ · käsitti pitoisuudet 0,005 M natriumfosfaatti, 0,15 M NaCl, *:*" pH 7,0. Hemolysiinituotannon mittana käytettiin 24 tunnin :*·*; hemolyysiä, joka indusoitiin 20 pl:lla soluja sisältämä- 30 töntä viljelmää, joka lisättiin objektilaseihin lyötyihin kuoppiin. Lipaasi mitattiin samalla tavalla kuin hemoly- • · .···. siini lukuunottamatta, että standardina käytettiin 0,1 %:n tributyriinia poistumista.

i

,'·] Tulokset vähentyneestä streptolysiinista O ja S

1 I I

!1(|! 35 esitetään samoin taulukossa 6. Kokeiden tulokset osoitta- ;v. vat glyseryylimonolauraatin vaikutuksen toksiini tuotantoon « · « I « * 107019 25 ryhmien B, F ja G streptokokeilla taulukoissa 8, 9 ja vastaavasti 10. Tiedot osoittavat merkittävää laskua ryhmien A, B, F ja G streptokokkien tuottaman toksiinin ja/tai hemolysiinin määrissä glyseryylimonolauraatin läsnä olles-5 sa.

Taulukko 6

Glyseryylimonolauraatin vaikutus ryhmän A streptokokkeihin 10 -

Bakteeri a Log pmy/ml Laskenut (μ^Ληΐ) Oig/ml) hemolysiinr 594 (SPEA) 0 8.6 3.2 7.0 23 83 03 4.0 10.0 8.3 03 0.0 15 20.0 6.0 0.0 0.0 86-858 (SPEB) 0 8.0 0.8 4.0 23 7.7 0.0 2.0 10.0 7.7 0.0 0.0 20 20.0 5.8 0.0 0.0 T18P (SPEC) 0 7.9 0.4 8.0 . V: 23 7.9 0.0 8.0 10.0 6.i 0.0 0.0 25 _ • ♦ ♦ ♦ ♦ ♦ · · ♦ « « « ♦ a Ymppikoko 105 - 106 pmy/ml · b Käsittää streptolysiinit O ja S mitattuna lyysihalkai- 30 sijana (mm) • · • ·· 1 • « ♦ · · H 9 ? S « 26 1 0 7 01 y ,<ΰ •H d21 ~ » ts

G O

d w-4 Ώ 2 2 Π +1 tr vd O s Π Π Π r-j CTi d B O o o o H % ^ co o <Ö fö Ή ·γ->Κ 2 2*0 4J d ”

C —I

5 °J 2 2 □ HO ' 00 tr <*· o -a n p o j B Ξ Ξ Ξ S .

H $ 2 O O

c m •H row. Ό rl -U D~ - " ° o Π —!

- o O

fO

(0 q- :CP

·· ™ O-, *1 P _ ^ 00 je o o 2 2 7 «e «.

M H

< H es o o o H

S «o H

“ ° O' t~- Ό V-I -H

01 H -H

... rH ε S

. . >1 • · · f* ^ Ä

l.l Q< X.OOO O O

m M i Λ

• · -P 1¾ ^ ” I

... OT <0 ·π£; o o o o - g : : : m Tl £; o g -h \ 3 co. ' ECO)

+J d tn"tj es es n es H "HS

• 3 4J * Ή w'

J 3 rr O -H W

....I 5 «3· 0"3 ooeoooO ^dCOt^H

* nm ei ® 'o *0 *0 »o OÄJHi ... 2J, X (0 O Es • · 3 p -h o. e w

• · · 3 h Q< τ| d) CO

^ Γ. Oi iH .C Es g ö di £ . . .

e3 o s| 0 8 8 § , i5 „« I1 107019 27

Taulukko 8 GML:n vaikutus ryhmän B streptokokkeihin

Aika: 5 GNL 8 tuntia 24 tuntia (pg/ml) log solut/ml hemolysiini log solut/ml hemolysiini 0 8,7 2 8,5 2 2.5 8,1 0 8,4 0 10 10,0 <4,0 0 <3,0 0

Ymppikoko 2,0 x 105/ml

Taulukko 9 15 GML:n vaikutus ryhmän F streptokokkeihin

Aika: GML 8 tuntia 24 tuntia (pg/ml) log solut/ml hemolysiini log solut/ml hemolysiini 20 ___ 0 8,3 7 8,3 7 2.5 8,5 0 8,3 0 10,0 <104 0 <103 0 25 Ymppikoko 2,0 x 105/ml • · • ♦ · ♦ ♦ · ·»« · « • · • · · • · · « · i •

• I

• t · • · • I» < « « t · « * > „ 10701b.

Taulukko 10 6ML:n vaikutus ryhmän G streptokokkeihin Äika: 5 GML 8 tuntia 24 tuntia (pg/ml) log solut/ml hemolysiini log solut/ml hemolysiini 0 8,9 8 10,0 8 2,5 8,1 5 10,0 6 10 10,0 <104 0 <103 0

Ymppikoko 8 x 105/ml

Esimerkki 10 15 Tässä kokeessa, jonka suoritti Dr. Patrick Schlie- vert, pyrittiin indusoimaan Streptococcus-kanta C203 ja Staphylococcus-kanta MN8 kasvamaan maljoilla, jotka sisälsivät glyseryylimonolauraattia. Glyseryylimonolauraatin minimi-inhibitiopitoisuus kannalle C203 oli 1 mg/100 ml 20 agar-maljoilla maljostettaessa 5 x 106 pmyrtä. Malja, jossa pitoisuus oli 2 mg/100 ml, ei sisältänyt kasvua. Glyseryylimonolauraatin minimi-inhibitiopitoisuus kannalle MN8 oli 5 mg/100 ml maljoitettaessa 7 x 108 pmy:tä. Malja, jossa pitoisuus oli 7,5 mg/100 ml, ei sisältänyt kasvua. Tätä 25 koetta toistettiin keskimäärin kahdesti viikossa 5 kuukau- : .·. den ajan. Tulokset osoittavat, että mutantit eivät kykene • » · • · · · kasvamaan, kun läsnä on inhibiittoritasoja glyseryylimono- • · ... lauraattia.

• · « • · < * «

Claims

107019

1. Menetelmä nestemäisen koostumuksen valmistamiseksi käytettäväksi naisten intiimihygieniassa inhiboimaan

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittua yhdistettä on läsnä aina- . : : kin noin 0,1 %, edullisesti ainakin noin 1,0 %, edullisim min ainakin noin 10,0 % laskettuna mainitun koostumuksen 25 painosta.

: 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- • ♦ · n e t t u siitä, että mainittu rasvahappo on lauriinihap- • · ... po. • « «

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-30 n e t t u siitä, että mainittu polyhydrinen alkoholi on * * glyseroli. • · ·

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste on glyseryyli-monolauraatti. !’ 35

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- i '.· n e t t u siitä, että mainittua glyseryylimonolauraattia • · · 107019 on läsnä määrä, joka on ainakin 0,1 paino-%, edullisesti ainakin 0,5 paino-% laskettuna mainitun koostumuksen painosta.

5 Staphylococcus-toksiinien muodostumista, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan ja yhdisteen sekoittamisen, joka yhdiste valitaan seuraavien muodostamasta ryhmästä: a) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvaha-10 pon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, monoesteri, jossa mainitussa monoesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, joka liittyy sen alifaattiseen alkoholitähteeseen; b) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvahapon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, diesterit, jossa 15 mainitussa diesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, joka liittyy sen alifaattiseen alkoholitähteeseen; ja c) mainittujen monoestereiden ja diestereiden seokset, ja jota yhdistettä käytetään riittävä määrä inhi-20 boimaan Stpahylococcus-toksiinien muodostumista.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-5 n e t t u siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryy- limonolauraatin ja glyseryylidilauraatin seosta.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu seos käsittää ainakin 90 paino-%, edullisesti ainakin 95 paino-% glyseryyli- 10 monolauraattia.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryy-limonokaprylaattia.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylikapraattia.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonokaprylaatin ja glyseryylikapraatin seosta.

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonomyristaattia.

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää 25 glyseryylimonopalmitaattia.

: 14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • · · tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää • « ... glyseryylimonostearaattia.

• « « ** 15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää * ' glyseryylimono-oleaattia.

• » » *...: 16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu koostumus on emättimen puhdistuskoostumus. 107019

17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu koostumus sisällytetään sieneen.

18. Nestemäinen koostumus käytettäväksi naisten in-5 tiimihygieniassa emättimen kastelemiseksi ja puhdistamiseksi, tunnettu siitä, että koostumus käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan ja Staphylococcus-toksiinien inhibointiin riittävän määrän yhdistettä, joka valitaan seuraavien muodostamasta ryhmästä: 10 a) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvaha pon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, monoesteri, jossa mainitussa monoesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, joka liittyy sen alifaattiseen alkoholitähteeseen; b) polyhydrisen alifaattisen alkoholin ja rasvaha-15 pon, joka sisältää 8-18 hiiliatomia, diesterit, jossa mainitussa diesterissä on ainakin yksi hydroksyyliryhmä, joka liittyy sen alifaattiseen alkoholitähteeseen; ja c) mainittujen monoestereiden ja diestereiden seokset .

19. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittua yhdistettä on läsnä ainakin noin 0,1 %, edullisesti ainakin noin 1,0 %, edul-lisimmin ainakin noin 10,0 % laskettuna mainitun koostu-: muksen painosta.

20. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, : tunnettu siitä, että mainittu rasvahappo on lau- • « · · riinihappo.

• · ... 21. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, • · « • · · * tunnettu siitä, että mainittu polyhydrinen alko- 30 holi on glyseroli.

• * ' 22. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, ·«· ’...· tunnettu siitä, että mainittu yhdiste on glyseryy- limonolauraatti.

23. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, 35 tunnettu siitä, että mainittua glyseryylimonolau- raattia on läsnä määrä, joka on ainakin 0,1 paino-%, edul- 107019 lisesti ainakin 0,5 paino-% laskettuna mainitun koostumuksen painosta.

24. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää 5 glyseryylimonolauraatin ja glyseryylidilauraatin seosta.

25. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu seos käsittää ainakin 90 paino-%, edullisesti ainakin 95 paino-% glyseryyli-monolauraattia.

26. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonokaprylaattia.

27. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää 15 glyseryylikapraattia.

28. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonokaprylaatin ja glyseryylikapraatin seosta.

29. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, 20 tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonomyristaattia.

30. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, v ; tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää glyseryylimonopalmitaattia.

31. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää • · · * glyseryylimonostearaattia.

* * ... 32. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, • · · ' • · * tunnettu siitä, että mainittu yhdiste käsittää 30 glyseryylimono-oleaattia.

33. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, • · · ...* tunnettu siitä, että mainittu koostumus on emätti men puhdistuskoostumus.

34. Patenttivaatimuksen 18 mukainen koostumus, - 35 tunnettu siitä, että mainittu koostumus sisällyte- J tään sieneen. • « · 107019