ES3052913T3 - Lysophosphatidylcholine compositions - Google Patents

Lysophosphatidylcholine compositions

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ES3052913T3 ES18855122T ES18855122T ES3052913T3 ES 3052913 T3 ES3052913 T3 ES 3052913T3 ES 18855122 T ES18855122 T ES 18855122T ES 18855122 T ES18855122 T ES 18855122T ES 3052913 T3 ES3052913 T3 ES 3052913T3
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Nils Hoem
Finn Myhren
Petter-Arnt Hals
Armend Håti
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Aker Biomarine Human Ingredients AS
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Abstract

La presente invención proporciona composiciones de lisofosfatidilcolina marina para su uso en productos farmacéuticos, nutracéuticos y alimentos funcionales, así como métodos para elaborar composiciones de lisofosfatidilcolina marina. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Composiciones de lisofosfatidilcolina
[0003] Campo de la invención
[0004] La presente invención proporciona composiciones de lisofosfatidilcolina marina para uso en productos farmacéuticos, nutracéuticos y alimentos funcionales, así como métodos para elaborar composiciones de lisofosfatidilcolina marina.
[0005] Antecedentes de la invención
[0006] La lisofosfatidilcolina (LPC) es un compuesto que resulta de la hidrólisis parcial de una molécula de fosfatidilcolina (PC), de tal manera que se elimina uno de los grupos de ácidos grasos adheridos a la molécula de PC.
[0007] La lisofosfatidilcolina, con un mol de ácido graso por mol de lípido en la posición sn-1, se encuentra en cantidades traza en la mayoría de los tejidos animales (en concentraciones mayores, altera las membranas). Se produce por hidrólisis de la fosfatidilcolina dietética y biliar y se absorbe como tal en los intestinos, pero se reesterifica antes de ser exportada a la linfa. Además, se forma en la mayoría de los tejidos por hidrólisis de la fosfatidilcolina por medio de la superfamilia de enzimas fosfolipasa A2 como parte del ciclo de desacilación/reacilación que controla la composición molecular general de especies de esta última, como se discutió anteriormente. En el plasma de especies animales, una cantidad apreciable de lisofosfatidilcolina se forma por acción de la enzima lecitina: colesterol aciltransferasa (LCAT), que se secreta desde el hígado. Esto cataliza la transferencia de ácidos grasos desde la posición sn-2 de la fosfatidilcolina al colesterol libre en el plasma, con formación de ésteres de colesterol y, por supuesto, de lisofosfatidilcolina, que consiste en una mezcla de especies moleculares con constituyentes de ácidos grasos predominantemente saturados y mono y dienoicos. En el plasma, se une a la albúmina y a las lipoproteínas, de tal manera que su concentración efectiva se reduce a un nivel seguro. La identificación de una fosfolipasa A2y altamente específica en los peroxisomas que es única en la generación de sn-2-araquidonoil lisofosfatidilcolina sugiere que esto puede ser relevante para la generación y señalización de eicosanoides. Se informa que los niveles elevados de 26:0-lisofosfatidilcolina en sangre son característicos de los trastornos del espectro de Zellweger (el resultado de un defecto en la biogénesis del peroxisoma).
[0008] La lisofosfatidilcolina tiene propiedades proinflamatorias y se sabe que es un componente patológico de las lipoproteínas oxidadas (LDL) en el plasma y de las lesiones ateroscleróticas; por ejemplo, se informa de un enriquecimiento específico de 2-araquidonoilisofosfatidilcolina en la placa de ateroma carotídeo de pacientes diabéticos tipo 2. Recientemente, se ha descubierto que tiene algunas funciones en la señalización celular y se han identificado receptores específicos (acoplados a proteínas g). Activa la fosfolipasa C específica que libera diacilgliceroles y trifosfato de inositol con los consiguientes aumentos del Ca2+ intracelular y la activación de la proteína quinasa C. También activa la proteína quinasa activada por mitógenos en ciertos tipos de células y promueve la desmielinización en el sistema nervioso. En las células endoteliales vasculares, induce el importante mediador proinflamatorio ciclooxigenasa-2 (COX-2), una enzima clave en la síntesis de prostaglandinas. Se han identificado niveles elevados de lisofosfatidilcolina en el cáncer de cuello uterino y pueden ser diagnósticos de enfermedad. Algunos efectos biológicos de la lisofosfatidilcolina se pueden deber simplemente a su capacidad de difundirse fácilmente en las membranas, alterando su curvatura y afectando indirectamente las propiedades de las proteínas de membrana.
[0009] El documento WO2015048554 divulga métodos para identificar compuestos que modulan el transporte a través de la proteína Mfsd2a y otros usos potenciales de composiciones de LPC.
[0010] El documento US2013/281404 discute métodos para producir 2-acil-lisofosfatidilserina a partir de una materia prima que contiene altas cantidades de fosfatidilcolina (PC) y, en particular, cómo aumentar el porcentaje de conversión del fosfolípido en lisofosfolípido.
[0011] Molecular and cell biology of lipids, Elsevier, Amsterdam, NL, vol.1861, no.8, 10 May 2016 (2016-05-10), pages 723-729 se centra en un estudio que investiga si la incorporación de DHA dietético a los fosfolípidos linfáticos depende del portador molecular.
[0012] Resumen de la invención
[0013] La presente invención proporciona composiciones de lisofosfatidilcolina marina para uso en productos farmacéuticos, nutracéuticos y alimentos funcionales, así como métodos para elaborar composiciones de lisofosfatidilcolina marina.
[0014] La presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 10 % hasta aproximadamente 100 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1. (propiedad f) y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0015] En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 60 % hasta 100 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 70 % hasta 90 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 20 % hasta 50 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 20 % hasta 30 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 10 % hasta 20 % p/p de LPC de la composición.
[0016] En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 30 % hasta 50 % p/p de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 35 % hasta 45 % p/p de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 20 % p/p de la composición. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen una o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen dos o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen tres o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen cuatro o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen las propiedades (a), (b), (c), (d), (e) y (f).
[0017] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones se seleccionan del grupo que consiste en una composición de LPC de krill, una composición de LPC de arenque, una composición de LPC de huevas de arenque, una composición de LPC de algas, y una composición de LPC de Calanus.
[0018] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona una composición farmacéutica o nutracéutica que comprende una composición como se describió anteriormente y un portador fisiológicamente aceptable. En algunas realizaciones preferidas, el portador fisiológicamente aceptable es un portador de lípidos. En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona un vehículo de suministro oral que contiene la composición de LPC marina, composición farmacéutica o composición nutracéutica como se describió anteriormente.
[0019] Se divulga en el presente documento una composición de lípidos que comprende una primera fracción de lípidos y una segunda fracción de lípidos, en la que la primera fracción de lípidos es una composición de LPC marina como se describió anteriormente y la segunda fracción de lípidos se obtiene a partir de una fuente diferente de la primera fracción de lípidos y/o contiene menos de 20 % de LPC. La segunda fracción de lípidos se puede seleccionar del grupo que consiste en una fracción de triglicéridos, una fracción de diglicéridos, una fracción de éster etílico de ácido graso, una fracción de ácido graso libre y combinaciones de las mismas. La segunda fracción de lípidos puede ser una fracción de lípidos marina que comprende EPA y/o DHA. Asimismo, se divulga en el presente documento una composición farmacéutica o nutracéutica que comprende la composición de lípidos como se acaba de describir y un portador fisiológicamente aceptable. También se divulga un vehículo de suministro oral que contiene la composición de lípidos como se acaba de describir. En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona métodos para elaborar una composición de lisofosfatidilcolina (LPC) con un alto contenido de EPA y DHA a partir de una materia prima marina que contiene fosfolípidos que comprende tratar la materia prima marina con una fosfolipasa que no es nativa de la materia prima marina para proporcionar una materia prima tratada con fosfolipasa y fraccionar la materia prima tratada con fosfolipasa para proporcionar una composición de lípidos que tiene un mayor contenido de lisofosfatidilcolina que la materia prima de partida. En algunas realizaciones preferidas, la materia prima se selecciona del grupo que consiste en una preparación de lípidos de krill, una preparación de lípidos de arenque, una preparación de lípidos de huevas de arenque, una preparación de lípidos de algas, y una preparación de lípidos de Calanus. En algunas realizaciones preferidas, la preparación de lípidos de krill es una preparación de lípidos de Euphausia Superba.
[0020] En algunas realizaciones preferidas, la materia prima se pone en contacto con una fosfolipasa en un solvente. En algunas realizaciones preferidas, el solvente es una mezcla de agua y un alcohol. En algunas realizaciones preferidas, el alcohol es etanol. En algunas realizaciones preferidas, la materia prima se pone en contacto con una fosfolipasa en una mezcla de aproximadamente 85 % de agua y 15 % de etanol.
[0021] En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1). En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), en la que la concentración de enzima está en el rango de 0.1 - 20 % en vol/peso, preferiblemente 0.1 - 15 % en vol/peso, más preferiblemente 0.1 - 10 % en vol/peso, además preferiblemente 0.1 - 5 % en vol/peso, muy preferiblemente 0.1 - 3 % en vol/peso. En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), en la que el método se lleva a cabo a un pH de 3-12, preferiblemente 4-10, más preferiblemente 4-9, muy preferiblemente 5-9. En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), en la que el método se lleva a cabo entre 4-95 °C, preferiblemente 4-85 °C, más preferiblemente 10-80 °C, además preferiblemente 15-70 °C, incluso más preferiblemente 15-65 °C, muy preferiblemente 15-60 °C.
[0022] En algunas realizaciones preferidas, la materia prima tiene un contenido de EPA y DHA en el rango de; EPA: 1-70 % en peso y DHA: 1-70 % en peso, más preferiblemente EPA: 5-70 % en peso y DHA: 5-70 % en peso, muy preferiblemente EPA: 10-60 % en peso y DHA: 10-60 % en peso. La composición de LPC puede tener un contenido de EPA y DHA en el rango de; EPA: 1-100 % en peso y/o DHA: 1-100 % en peso, más preferiblemente EPA: 5-100 % en peso y/o DHA: 5-100 % en peso, muy preferiblemente EPA: 10-90 % en peso y/o DHA: 10-90 % en peso.
[0023] En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC tiene un contenido de LPC en los rangos de 10-100 % en peso, preferiblemente 20-100 % en peso, más preferiblemente 30-100 % en peso, además preferiblemente 40-100 % en peso, muy preferiblemente 50-100 % en peso. En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC obtenida por el proceso se caracteriza en comprender desde aproximadamente 20 % hasta aproximadamente 95 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p; y f) una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA de 1:1 a 5:1.
[0024] En algunas realizaciones preferidas, los métodos comprenden además formular la composición de LPC para consumo humano.
[0025] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona una composición de LPC como se describió anteriormente, o elaborada por un método como se describió anteriormente, para uso para complementar la dieta de un sujeto humano, preferiblemente de menos de 10 años de edad, más preferiblemente de menos de 1 año de edad, incluso más preferiblemente de menos de 1 mes de edad, y muy preferiblemente un recién nacido.
[0026] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 10 % hasta aproximadamente 20 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1 y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1 o más preferiblemente desde 1:1 hasta 10:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0027] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 20 % hasta aproximadamente 40 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1 y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1 o más preferiblemente desde 1:1 hasta 10:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0028] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 40 % a aproximadamente 60 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1 y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1 o más preferiblemente desde 1:1 hasta 10:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0029] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 60 % a aproximadamente 80 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1 y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1 o más preferiblemente desde 1:1 hasta 10:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0030] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona composiciones o concentrados de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizados por comprender desde aproximadamente 60 % a aproximadamente 100 % p/p de LPC de la composición y un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1 y opcionalmente tener una o más de las siguientes características o propiedades: a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1 o más preferiblemente desde 1:1 hasta 10:1; b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) de menos de 10 % p/p de la composición; c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 % p/p de la composición; d) un contenido de lípidos neutros desde 5 % hasta 65 % p/p de la composición; y e) un contenido de éter 2-LPC de menos de 1.0 % p/p.
[0031] La administración oral de las composiciones de lisofosfolípidos descritas anteriormente puede aumentar la cantidad de EPA y/o DHA en un tejido u órgano objetivo. Los tejidos y órganos objetivo preferidos son la glándula suprarrenal, sangre, hueso, médula ósea, cerebro, grasa (blanca), riñón (entero), mucosa del intestino grueso, hígado, pulmón, músculo, miocardio, páncreas, glándula pituitaria, próstata, piel, mucosa del intestino delgado, bazo, mucosa del estómago, testículos, timo y/o glándula tiroides. El aumento de la cantidad de EPA y/o DHA se compara con una dosis equivalente de EPA y/o DHA proporcionada como fosfolípido (es decir, una molécula de fosfolípido que comprende grupos acilo grasos en las posiciones SN-1 y SN-2 del fosfolípido).
[0032] Breve descripción de los dibujos
[0033] FIG.1: Espectro de RMN de<1>H de la muestra AKB69444-1.
[0034] FIG.2: Cromatograma de HPLC del producto LPC, muestra AKB69444-1.
[0035] FIG.3: Espectro de RMN de<1>H de la muestra AKB70005-2.
[0036] FIG.4: Cromatograma de HPLC del producto LPC, muestra AKB70005-2.
[0037] FIG.5: Espectro de RMN de<1>H de la muestra AKB70005-3.
[0038] FIG.6: Cromatograma de HPLC del producto LPC de la muestra AKB70005-3.
[0039] FIG.7: Espectro de RMN de<1>H de la muestra AKB70005-4.
[0040] FIG.8: Cromatograma de HPLC del producto LPC, muestra AKB70005-4.
[0041] FIG.9: Espectro de RMN de<1>H de la muestra AKB70005-5.
[0042] FIG.10: Cromatograma de HPLC del producto LPC, muestra AKB70005-5.
[0043] FIG.11: Diagrama de flujo de procesos de la presente invención.
[0044] FIG.12: Diagrama de flujo de procesos de la presente invención.
[0045] Definiciones
[0046] Como se utiliza en el presente documento, “fosfolípido” se refiere a un compuesto orgánico que tiene dos fracciones de ácidos grasos adheridas en las posiciones sn-1 y sn-2 del glicerol y un grupo de cabeza ligado por un residuo de fosfato en la posición sn-3 del glicerol. Las fracciones de grupos de cabeza de ejemplo incluyen colina, etanolamina, serina e inositol. Los fosfolípidos incluyen fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y ácido fosfatídico. La fracción de ácido graso es la porción de la molécula de ácido graso que está unida en la posición sn-1 o sn-2, por ejemplo mediante un ligamiento de éster o éter. Cuando la fracción de ácido graso es un acilo graso, la cadena alifática del acilo graso está adherida a través de un ligamiento de éster y cuando la fracción de ácido graso es una cadena alifática de un ácido graso, la cadena alifática está adherida a través de un ligamiento de éter. Cuando se menciona un ácido graso particular en relación con un fosfolípido de la invención (por ejemplo, EPA o DHA), se debe tomar por tanto como referencia al grupo acilo graso relevante o a su cadena alifática.
[0047] Como se utiliza en el presente documento, el término “fosfolípido de éter” se refiere a un fosfolípido en el que la fracción de ácido graso en una de las posiciones sn-1 o sn-2 es una cadena alifática de un ácido graso adherida a través de un ligamiento de éter. Los fosfolípidos de éter incluyen, por ejemplo, alquilacilfosfatidilcolina, alquilacilfosfatidiletanolamina y alquilacilfosfatidilserina.
[0048] Como se utiliza en el presente documento, el término “lisofosfolípido” se refiere a una molécula de fosfolípido que tiene una fracción de ácido graso en una de las posiciones sn-1 y sn-2 de la molécula y un grupo -OH en la otra posición, de tal manera que hay un mol de fracción de ácido graso por mol de la molécula de fosfolípido. El término lisofosfatidilcolina (LPC) se refiere a una molécula de fosfatidilcolina que tiene una fracción de ácido graso en una de las posiciones sn-1 y sn-2 de la molécula y un grupo -OH en la otra posición, de tal manera que hay un mol de fracción de ácido graso por mol de lípido. Los lisofosfolípidos pueden designarse como 1- o 2-lisofosfolípidos para indicar la posición del grupo -OH en la molécula. Por lo tanto, 1-LPC se refiere a una lisofosfatidilcolina con un grupo -OH en la posición sn-1 de la molécula y una fracción de ácido graso en la posición sn-2.2-LPC se refiere a una lisofosfatidilcolina con un grupo -OH en la posición sn-2 de la molécula y una fracción de ácido graso en la posición sn-1. Cuando el lisofosfolípido es un fosfolípido éter, la fracción de ácido graso es un alcohol graso adherido a través de un enlace éter en la posición sn-1 o sn-2. Cuando el lisofosfolípido es un fosfolípido éster, la fracción de ácido graso es un éster de ácido graso adherido a través de un enlace éster en la posición sn-1 o sn-2.
[0049] Como se utiliza en el presente documento, el término “ácido graso poliinsaturado de cadena larga” se refiere a un ácido graso que tiene 20 o más carbonos y que es insaturado en dos o más enlaces.
[0050] Como se utiliza en el presente documento, el término ácido graso omega-3 se refiere a los ácidos grasos poliinsaturados que tienen el doble enlace final en la cadena de hidrocarburos entre el tercer y cuarto átomos de carbono desde el extremo metilo de la molécula. Los ejemplos no limitantes de ácidos grasos omega-3 incluyen ácido 5,8,11,14,17-eicosapentaenoico (EPA), ácido 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoico (DHA) y ácido 7,10,13,16,19-docosapentaenoico (DPA).
[0051] Como se utiliza en el presente documento, el término “portador fisiológicamente aceptable” se refiere a cualquier portador o excipiente comúnmente utilizado con productos farmacéuticos oleosos. Dichos portadores o excipientes incluyen, pero no se limitan a, aceites, almidón, sacarosa y lactosa.
[0052] Como se utiliza en el presente documento, el término “vehículo de suministro oral” se refiere a cualquier medio de administración de un producto farmacéutico por vía oral, que incluyen, pero no se limitan a, cápsulas, píldoras, comprimidos y jarabes.
[0053] Como se utiliza en el presente documento, el término “producto alimenticio” se refiere a cualquier alimento o pienso adecuado para el consumo humano, animal no rumiante o animal rumiante. El “producto alimenticio” puede ser un alimento preparado y empacado (por ejemplo, mayonesa, aderezo para ensaladas, pan o alimento a base de queso) o un pienso para animales (por ejemplo, pienso para animales extruido y granulado o pienso grueso mixto). “Producto alimenticio preparado” significa cualquier alimento empacado previamente aprobado para el consumo humano.
[0054] Como se utiliza en el presente documento, el término “materia prima alimenticia” se refiere a cualquier sustancia apta para el consumo humano o animal.
[0055] Como se utiliza en el presente documento, el término “alimento funcional” se refiere a un producto alimenticio al que se ha agregado un suplemento biológicamente activo.
[0056] Como se utiliza en el presente documento, el término “alimento infantil” se refiere a un producto alimenticio formulado para un bebé, tal como la fórmula.
[0057] Como se utiliza en el presente documento, el término “alimento para personas mayores” se refiere a un producto alimenticio formulado para personas de edad avanzada.
[0058] Como se utiliza en el presente documento, el término “alimento para el embarazo” se refiere a un producto alimenticio formulado para mujeres embarazadas.
[0059] Como se utiliza en el presente documento, el término “suplemento nutricional” se refiere a un producto alimenticio formulado como suplemento dietético o nutricional para ser utilizado como parte de una dieta. Como se utiliza en el presente documento, el término p/p (peso/peso), a menos que se especifique lo contrario, se refiere a la cantidad de una sustancia dada en una composición en base al peso y se expresa como un porcentaje del peso total de la composición. Por ejemplo, una composición que comprende 50 % p/p de fosfolípidos significa que la masa de los fosfolípidos es el 50 % de la masa total de la composición (es decir, 50 gramos de fosfolípidos en 100 gramos de la composición, tal como un aceite). Cuando se designa la concentración de solvente a lo largo de la especificación, la concentración se refiere al porcentaje en peso de solvente en la solución de solvente designada. Como ejemplo no limitante, el 96 % de etanol comprende 96 % de etanol y 4 % de agua. Como otro ejemplo no limitante, cuando la especificación describe una solución de lípidos que comprende 20 % p/p de materia seca y que el solvente es 95 % de etanol, esto significa que 100 g de la solución comprenden un total de 20 gramos de materia seca y 80 g de 95 % de etanol.
[0060] Como se utiliza en el presente documento, el término “harina de krill” se refiere a un polvo seco preparado a partir de krill y que tiene un contenido de humedad desde aproximadamente 3 % hasta aproximadamente un 15 %.
[0061] Descripción detallada de la invención
[0062] La presente invención proporciona composiciones de lisofosfatidilcolina marina para uso en productos farmacéuticos, nutracéuticos y alimentos funcionales, así como métodos para elaborar composiciones de lisofosfatidilcolina marina (LPC). En las realizaciones particularmente preferidas, las composiciones de LPC se preparan a partir de fosfolípidos de krill, por ejemplo fosfolípidos deEuphasia superbaoEuphasia pacífica. En otras realizaciones preferidas, las composiciones de LPC se preparan a partir de fosfolípidos de Calanus, arenque, huevas de arenque o algas. En los documentos PCT/IB2016/000208 y PCT/IB2016/000326 se divulgan extractos de fosfolípidos crudos de krill adecuados, extractos de fosfolípidos de krill desalinizados y métodos para procesar krill.
[0063] Los fosfolípidos intactos, tales como la fosfatidilcolina, normalmente se convierten en lisofosfolípidos en el intestino delgado mediante la acción de las fosfolipasas. Los lisofosfolípidos luego se adsorben en el cuerpo. Los datos presentados en el presente documento demuestran que cuando las composiciones de LPC se administran por vía oral en un modelo animal, los ácidos grasos omega-3 objetivo en la composición se incorporan a una gran cantidad de tejidos a un ritmo más rápido y en una cantidad total mayor que cuando se administran por vía oral en composiciones de PC (fosfatidilcolina) que no contienen una cantidad apreciable de lisofosfolípidos. Este resultado es sorprendente dado que uno esperaría que no hubiera diferencia porque se sabe que el PC administrado por vía oral se convierte de manera eficiente en lisofosfolípidos en el intestino.
[0064] 1. Materiales de partida
[0065] La presente invención no se limita al uso de ningún material de partida biológico particular. En las realizaciones preferidas, se prepara un extracto de fosfolípidos a partir del material de partida biológico y las composiciones de LPC se elaboran mediante tratamiento enzimático del extracto de fosfolípidos. El material de partida biológico puede ser o producirse preferiblemente a partir de una biomasa de algas, biomasa vegetal o biomasa de animal marino. En las realizaciones preferidas, se utilizan biomasas de animales marinos como material de partida. Las biomasas de animales marinos adecuados incluyen, pero no se limitan a, krill, cangrejos, Calanus, plancton, huevos, cangrejos de río, camarones, peces (especialmente arenques) y moluscos. El material de partida biológico puede ser fresco o congelado, o puede ser un material producido a partir de biomasa de algas, plantas o animales marinos, tales como harina, polvo, hidrolizado o coagulado (pasta). La pasta puede ser una pasta húmeda o una pasta seca. En algunas realizaciones preferidas, el material de partida biológico es un material de krill, por ejemplo, una harina de krill, hidrolizado de krill, coagulado de krill o krill fresco o congelado. Se podrá utilizar cualesquier especies de krill. En las realizaciones preferidas, el krill esEuphasia superbaoEuphasia pacifica.
[0066] En algunas realizaciones particularmente preferidas, el material de partida biológico es una harina de krill. La harina de krill se puede preparar preferiblemente mediante cualquier proceso de harina marina estándar. En general, la harina de krill se produce al cocinar krill recién capturado a baja temperatura (aproximadamente 80-85 °C) y secarlo para reducir el contenido de humedad a aproximadamente 5 a 8 % y luego molerlo. En las realizaciones donde el producto está destinado al consumo humano, es preferible empacar y almacenar la harina bajo nitrógeno sin la adición de antioxidantes.
[0067] De acuerdo con lo anterior, los procesos de la presente invención se pueden utilizar con una amplia variedad de materiales de partida. El resto de la discusión de los procesos generalmente se refiere al uso de harina de krill como material de partida. Sin embargo, se entenderá que cualquiera de los materiales de partida considerados en el presente documento puede sustituir a la harina de krill en los procesos descritos.
[0068] 2. Extracción con solventes de harina de krill
[0069] En la primera etapa del proceso de extracción, la harina de krill se mezcla con un solvente adecuado para extraer los lípidos de la harina. A diferencia de los métodos de la técnica anterior, la presente invención utiliza condiciones que preferiblemente extraen la máxima cantidad de lípidos de la harina de krill a costa de una mayor cantidad de contaminantes en el extracto de solvente inicial. En las realizaciones preferidas, el solvente es un solvente orgánico prótico, sin embargo también se pueden utilizar otros solventes conocidos por su uso en la extracción de lípidos de calidad alimentaria tal como acetona, hexano, etc. Los solventes orgánicos próticos adecuados incluyen, pero no se limitan a, n-butanol, n-propanol, isopropanol, nitrometano, etanol y metanol. En las realizaciones particularmente preferidas, el solvente prótico es etanol.
[0070] En las realizaciones preferidas, la concentración del solvente prótico utilizado en la etapa de extracción de solvente inicial es al menos 90 %, o preferiblemente desde aproximadamente 94 % hasta 98 %, más preferiblemente desde aproximadamente 95 % hasta 97 %, y es muy preferiblemente aproximadamente 96 % (por ejemplo, 96 % de etanol o metanol).
[0071] En algunas realizaciones, el solvente prótico se mezcla con el material de partida biológico en una relación de solvente prótico: material de partida biológico de aproximadamente 1:1 a 10:1, preferiblemente aproximadamente 3:1 a 6:1, más preferiblemente aproximadamente 4:1 a 5:1, y muy preferiblemente aproximadamente 4.4:1.
[0072] En las realizaciones preferidas, el material de partida biológico se extrae con solvente prótico a una temperatura desde aproximadamente 5 °C hasta 65 °C, desde aproximadamente 20 °C hasta aproximadamente 60 °C, preferiblemente desde aproximadamente 30 °C hasta 50 °C, más preferiblemente desde aproximadamente 30 °C hasta 50 °C, y muy preferiblemente a aproximadamente 40 °C. En algunas realizaciones, el tiempo de extracción (es decir, la cantidad de tiempo que el material de partida biológico está en contacto con el solvente) es desde aproximadamente 10 minutos hasta aproximadamente 2 horas, preferiblemente desde aproximadamente 15 minutos hasta 60 minutos, más preferiblemente desde aproximadamente 20 minutos hasta aproximadamente 45 minutos, y muy preferiblemente aproximadamente 30 minutos.
[0073] Después de la etapa de extracción, una solución de lípidos de krill crudo que contiene los lípidos de la harina de krill se separa de la mezcla de solvente/harina de krill, por ejemplo, mediante decantación y o filtración. Luego, el material insoluble, que comprende proteínas y otros materiales útiles, se seca para recuperar etanol. El producto de harina restante rico en proteínas se puede utilizar posteriormente en productos alimenticios, suplementos proteicos, piensos para animales y similares. En algunas realizaciones, la solución decantada que contiene lípidos solubles tiene un contenido de materia seca desde aproximadamente 4 % hasta 9 % p/p, preferiblemente desde aproximadamente 5.5 % hasta 7.5 % p/p, y muy preferiblemente desde aproximadamente 6 % hasta 7 % p/p, donde p/p se refiere al peso de materia seca como un porcentaje del peso total de la solución. En las realizaciones preferidas, la materia seca consiste esencialmente en lípidos de krill crudo, y preferiblemente tiene un contenido de lípidos de más de 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % p/p, donde p/p se refiere al peso de los lípidos como porcentaje del peso total de materia seca.
[0074] 3. Desalinización y concentración
[0075] En algunas realizaciones, la solución de lípidos de krill crudo se desaliniza para eliminar materiales insolubles en hexano, tales como sales inorgánicas insolubles (por ejemplo, NaCl con cantidades pequeñas o trazas de KCl y/o AlCl<3>) así como compuestos no deseados como el óxido de trimetilamina y metales como el cobre y el arsénico. En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC de la presente invención se prepara a partir de la composición de lípidos de krill desalinizado. Si bien los métodos se describen en referencia a los lípidos de krill desalinizados descritos anteriormente, los métodos son generalmente aplicables a cualesquier fracciones de lípidos que contengan fosfolípidos.
[0076] En algunas realizaciones, la solución de lípidos de krill crudo se desaliniza al evaporar el solvente de la solución de lípidos de krill crudo para proporcionar una composición de lípidos de krill crudo y luego someter la composición de lípidos de krill crudo a lavados repetidos con un solvente acuoso. Los solventes acuosos adecuados incluyen, pero no se limitan a, etanol mezclado con agua o agua desionizada de tal manera que la concentración de etanol sea desde aproximadamente 40 % hasta 70 %, preferiblemente aproximadamente 50 % a 60 %. En estas realizaciones, la composición de lípidos de krill crudo se mezcla con el solvente, se recupera la fase de lípidos y se decanta la fase acuosa. La fase de lavado se puede repetir según sea necesario, por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5 o más veces. La relación de solvente acuoso:composición de lípidos de krill crudo es preferiblemente desde aproximadamente 1:1 hasta 1:5 para cada etapa de lavado, más preferiblemente desde aproximadamente 1:1 hasta 2.5:1, y muy preferiblemente aproximadamente 1:1.7.
[0077] En algunas realizaciones, la solución de lípidos cruda se desaliniza mediante cromatografía. Los medios cromatográficos adecuados incluyen medios de gel de sílice, que incluyen, pero no se limitan a, geles de sílice esféricos y geles de sílice derivatizados tales como C8 (sílice funcionalizada con octilo) y C18 (sílice funcionalizada con octadecilo) y resinas de intercambio iónico tales como resinas Dowex™. En las realizaciones en las que se utiliza cromatografía, los lípidos de krill crudo se aplican preferiblemente al medio cromatográfico en un solvente prótico, preferiblemente el mismo solvente utilizado en la extracción inicial (por ejemplo, etanol). Se pueden utilizar métodos de cromatografía en columna estándar, aunque preferiblemente se pueden utilizar aparatos de cromatografía de lecho móvil o de cromatografía de lecho móvil simulado. La presente invención no está limitada a ningún tipo particular de aparato de purificación cromatográfica. De hecho, en las realizaciones preferidas, el aparato de purificación cromatográfica puede ser una columna, un aparato de lecho fijo, un aparato de lecho móvil simulado o un aparato de lecho móvil. En algunas realizaciones particularmente preferidas, el aparato es un aparato de lecho móvil simulado (SMB). Los sistemas SMB adecuados se divulgan, por ejemplo, en las Patentes de EE.UU. Nos.9,556,116; 9,650,590; y 9,560,333. La composición de los lípidos de krill desalinizado en base a materia seca preferiblemente se puede caracterizar como sigue. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden desde aproximadamente 30 % p/p hasta 50 % p/p de fosfolípidos, más preferiblemente desde aproximadamente 35 % p/p hasta aproximadamente 45 % p/p de fosfolípidos, y muy preferiblemente aproximadamente 40 % p/p de fosfolípidos, en los que p/p se refiere al peso de los fosfolípidos como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden desde aproximadamente 32 % p/p hasta 52 % p/p de triglicéridos, más preferiblemente desde aproximadamente 36 % p/p hasta aproximadamente 48 % p/p de triglicéridos, y muy preferiblemente aproximadamente 42 % p/p de triglicéridos, en los que p/p se refiere al peso de los triglicéridos como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden desde aproximadamente 3 % p/p hasta 13 % p/p de ácidos grasos libres, más preferiblemente desde aproximadamente 5 % p/p hasta aproximadamente 11 % p/p de ácidos grasos libres, y muy preferiblemente aproximadamente 8 % p/p de ácidos grasos libres, en los que p/p se refiere al peso de los ácidos grasos libres como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden desde aproximadamente 0.5 % p/p hasta 5 % p/p de lisofosfolípidos, más preferiblemente desde aproximadamente 0.8 % p/p hasta aproximadamente 3.2 % p/p de lisofosfolípidos, y muy preferiblemente aproximadamente 1.2 % a 2.8 % p/p de lisofosfolípidos, en los que p/p se refiere al peso de los lisofosfolípidos como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden menos de aproximadamente 1 % p/p de sales inorgánicas, más preferiblemente menos de aproximadamente 0.5 % p/p de sales inorgánicas, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 0.2 % p/p de sales inorgánicas, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 0.1 % p/p de sales inorgánicas, en las que p/p se refiere al peso de las sales inorgánicas como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden menos de aproximadamente 5 mg N/100 g, más preferiblemente menos de aproximadamente 3 mg N/100 g, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 2 mg N/100 g, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 mg N/100 g, donde el contenido de N sirve como un sustituto conveniente para el contenido de óxido de trimetilamina (TMAO). En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado comprenden menos de aproximadamente 10 ppm de cobre (Cu<++>), más preferiblemente menos de aproximadamente 5 ppm de Cu<++>, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 2 ppm de Cu<++>, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 ppm de Cu<++>. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado comprenden menos de aproximadamente 10 ppm de arsénico total (As<3+>, orgánico e inorgánico), más preferiblemente menos de aproximadamente 5 ppm de arsénico total, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 3 ppm de arsénico total, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 ppm de arsénico total. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado preferiblemente comprenden desde aproximadamente 0.01 % hasta 2 % p/p de ésteres de etilo, más preferiblemente desde aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 1.5 % p/p de ésteres de etilo, y muy preferiblemente desde aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 1 % p/p de ésteres de etilo, en los que p/p se refiere al peso de los ésteres de etilo como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill preferiblemente comprenden menos de aproximadamente 5 %, 4 %, 3 % o 2 % p/p de ésteres de etilo hasta un límite inferior de 0.01 % de ésteres de etilo (es decir, entre 5 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, entre 4 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, entre 3 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, o entre 2 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo), más preferiblemente menos de aproximadamente 1.5 % p/p de ésteres de etilo, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 % p/p de ésteres de etilo, en los que p/p se refiere al peso de los ésteres de etilo como un porcentaje del peso total de lípidos de krill desalinizado. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado tienen una conductividad de menos de aproximadamente 50 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol, más preferiblemente una conductividad de menos de aproximadamente 30 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol, y muy preferiblemente una conductividad de menos de aproximadamente 20 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol. En algunas realizaciones, los lípidos de krill desalinizado tienen una viscosidad desde aproximadamente 50 hasta 800 mPas a 25 °C, más preferiblemente desde aproximadamente 100 hasta 400 mPas a 25 °C, y muy preferiblemente 180 a 340 mPas a 25 °C. En algunas realizaciones, las composiciones de lípidos de krill desalinizado tienen un pH desde aproximadamente 6.7 hasta 8.3 cuando se mide en 95 % de etanol.
[0079] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones de LPC de la presente invención se preparan a partir de una composición de fosfolípidos elaborada a partir de la composición de lípidos de krill desalinizado. Si bien los métodos se describen en referencia a los lípidos de krill desalinizados descritos anteriormente, los métodos son generalmente aplicables a cualesquier fracciones de lípidos que contengan fosfolípidos.
[0081] De acuerdo con lo anterior, en algunas realizaciones, el contenido de materia seca de una composición de lípidos que contiene fosfolípidos, tal como la composición de lípidos de krill desalinizado descrita anteriormente, se ajusta a un nivel predeterminado al agregar o eliminar solvente y se permite que la mezcla resultante se fraccione de tal manera que los fosfolípidos se sometan a partición predominantemente en una fase y los lípidos neutros se sometan a partición en una fase diferente. En algunas realizaciones, una composición de lípidos que contiene fosfolípidos, tales como los lípidos de krill desalinizado, se mezcla con un solvente prótico adecuado, preferiblemente etanol, de tal manera que el contenido de materia seca (es decir, lípidos) de la solución resultante sea desde aproximadamente 10 % hasta 40 % p/p, preferiblemente aproximadamente 15 % a 35 % p/p, más preferiblemente aproximadamente 18 % a 30 % p/p, y muy preferiblemente aproximadamente 20 % a 25 % p/p. En las realizaciones en las que la etapa de desalinización ya proporciona los lípidos en una solución de alcohol prótico adecuada, tal como es el caso en el que se utiliza etanol como solvente para la cromatografía, la solución de lípidos de krill desalinizada se puede evaporar preferiblemente para proporcionar el contenido de materia seca deseado, es decir, desde aproximadamente 10 % hasta 40 % p/p, preferiblemente aproximadamente 15 % a 35 % p/p, más preferiblemente aproximadamente 18 % a 28 % p/p, y muy preferiblemente aproximadamente 20 % a 22 % p/p.. Los métodos adecuados para la evaporación incluyen, pero no se limitan a, la evaporación a presión reducida (por ejemplo, destilación al vacío), evaporación por película descendente y eliminación de solventes a través de una membrana.
[0082] Después de ajustar el contenido de materia seca al nivel deseado al agregar o eliminar el solvente, se permite que la solución se fraccione en una solución de fase ligera superior con un contenido enriquecido de fosfolípidos y una solución de fase pesada inferior que contiene lípidos predominantemente neutros y un alto nivel de astaxantina. Preferiblemente, se controla la temperatura de la solución durante la etapa de fraccionamiento. En algunas realizaciones, la temperatura para la etapa de fraccionamiento es desde aproximadamente 0 °C hasta aproximadamente 20 °C, preferiblemente desde aproximadamente 5 °C hasta aproximadamente 15 °C, más preferiblemente desde aproximadamente 8 °C hasta aproximadamente 12 °C, y muy preferiblemente aproximadamente 10 °C.
[0083] En algunas realizaciones, la concentración del solvente prótico se puede variar con el fin de controlar la concentración de fosfolípidos en la composición de lípidos de la fase superior. En algunas realizaciones, el solvente prótico tiene una concentración desde aproximadamente 55 % hasta 100 %, más preferiblemente aproximadamente 65 % a 98 %. En algunas realizaciones preferidas, el solvente prótico tiene una concentración desde aproximadamente 90 % hasta 100 %, más preferiblemente aproximadamente 92 % a 98 %, y muy preferiblemente aproximadamente 95 %. En estas realizaciones, el contenido de fosfolípidos en base a materia seca de los lípidos en la fase superior después del fraccionamiento es desde aproximadamente 50 % hasta 70 % p/p, preferiblemente aproximadamente 55 % a 65 % p/p y muy preferiblemente aproximadamente 60 % p/p. En aún otras realizaciones preferidas, el solvente prótico tiene una concentración desde aproximadamente 80 % hasta 90 % p/p, más preferiblemente aproximadamente 82 % a 88 % p/p, y muy preferiblemente aproximadamente 85 % p/p. En estas realizaciones, el contenido de fosfolípidos en base a materia seca de los lípidos en la fase superior después del fraccionamiento es desde aproximadamente 70 % hasta 90 % p/p, preferiblemente aproximadamente 75 % a 85 % p/p y muy preferiblemente aproximadamente 80 % p/p.
[0084] En algunas realizaciones, las fases superior e inferior se separan mediante centrifugación, preferiblemente criocentrifugación con un separador de dos o tres fases. En algunas realizaciones, la centrifugación se realiza desde aproximadamente 0 °C hasta aproximadamente 30 °C, más preferiblemente desde aproximadamente 0 °C hasta aproximadamente 10 °C y muy preferiblemente desde aproximadamente 3 °C hasta aproximadamente 7 °C. En general, la fuerza gravitacional utilizada dependerá del delta T entre las fases. Las temperaturas más bajas proporcionan un delta T mayor. En algunas realizaciones preferidas, la fuerza G empleada en la separación es de aproximadamente 8000 X G a aproximadamente 15000 X G.
[0085] En algunas realizaciones, las etapas del proceso de ajuste del contenido de materia seca como se describió anteriormente a través de las etapas de centrifugación se repiten una o más veces.
[0086] En algunas realizaciones, la fase de luz superior se recolecta y se procesa más. El solvente se elimina preferiblemente de la fase superior mediante uno o más pasos de evaporación para obtener una composición de fosfolípidos de krill. Las composiciones de fosfolípidos de krill comprenden preferiblemente desde aproximadamente 50 % hasta 85 % p/p de fosfolípidos, y más preferiblemente desde aproximadamente 55 % hasta 80 % p/p de fosfolípidos, en el que p/p se refiere al peso de los fosfolípidos como un porcentaje del peso total de la composición.
[0087] En algunas realizaciones, la fase pesada inferior se recolecta y se procesa además. En algunas realizaciones, el solvente se elimina de la fase inferior para proporcionar una composición de lípidos neutra de krill. En algunas realizaciones, la fase inferior se puede fraccionar con solvente prótico y someter a una segunda etapa de centrifugación para recuperar fosfolípidos adicionales no recuperados en la primera etapa de fraccionamiento. De nuevo, se elimina el solvente de la fase inferior resultante para proporcionar una composición de lípidos neutra de krill. La composición de lípidos neutra del krill en ambos casos se caracteriza por contener altos niveles de astaxantina. En algunas realizaciones, la composición de lípidos neutra de krill se puede combinar o mezclar con la composición de fosfolípidos de krill para proporcionar una composición de lípidos con los niveles deseados de fosfolípidos, lípidos neutros y astaxantina. En algunas realizaciones, la composición de lípidos neutra de krill se puede procesar aún más (por ejemplo, mediante cromatografía) para proporcionar una composición de astaxantina. Luego, la composición de astaxantina se puede combinar o mezclar con la composición de fosfolípidos de krill para proporcionar una composición de lípidos con los niveles deseados de fosfolípidos y astaxantina.
[0088] En algunas realizaciones, los procesos comprenden además la etapa de agregar un aceite de triglicéridos, tal como aceite de triglicéridos de cadena media o aceite de triglicéridos de cadena larga, en cualquier etapa durante el proceso. Por ejemplo, el aceite de triglicéridos se puede agregar a la fase ligera, fase pesada, composición de fosfolípidos o composición de lípidos neutros recolectadas. En algunas realizaciones, las etapas del proceso de ajuste del contenido de materia seca como se describió anteriormente a través de las etapas de centrifugación y/o etapas de evaporación se repiten una o más veces.
[0090] En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípidos de krill y de lípidos neutros se producen mediante una etapa de cromatografía adicional. En estas realizaciones, al menos una porción de la corriente rica en lípidos desalinizados descrita anteriormente se introduce en una zona de extracción de líquido polar que comprende un adsorbedor de lecho fijo que contiene una resina tipo perla polimérica estirénica macroporosa eficaz para adsorber lípidos neutros. En las realizaciones preferidas, la etapa de cromatografía de lecho fijo proporciona una corriente de extracto de lípidos polares que comprende solvente y al menos 50 % en peso de lípidos polares en base seca. En algunas realizaciones preferidas, el adsorbedor de lecho fijo se regenera de forma intermitente con una corriente de etanol caliente a una temperatura de regeneración caliente entre aproximadamente 40 °C y aproximadamente 60 °C para proporcionar una corriente de refinado de lípidos neutros que comprende solvente, lípidos neutros y astaxantina. En algunas realizaciones, el solvente se recupera de la corriente de extracto de lípidos polares para proporcionar una composición de fosfolípidos de krill y de la corriente de refinado de lípidos neutros para proporcionar una composición de lípidos neutros. Estos procesos se describen con más detalle en la Solicitud de EE.UU. No.14/619,102 copendiente.
[0092] En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill en base a materia seca preferiblemente comprenden desde aproximadamente 5 % p/p hasta 35 % p/p de triglicéridos, más preferiblemente desde aproximadamente 10 % p/p hasta aproximadamente 30 % p/p de triglicéridos, y muy preferiblemente aproximadamente 15 % a 25 % p/p de triglicéridos, en los que p/p se refiere al peso de los triglicéridos como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill preferiblemente comprenden desde aproximadamente 2 % p/p hasta 13 % p/p de ácidos grasos libres, más preferiblemente desde aproximadamente 4 % p/p hasta aproximadamente 11 % p/p de ácidos grasos libres, y muy preferiblemente aproximadamente 4 % a 10 % p/p de ácidos grasos libres, en los que p/p se refiere al peso de los ácidos grasos libres como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill preferiblemente comprenden desde aproximadamente 0.5 % p/p hasta 10 % p/p de lisofosfolípidos, más preferiblemente desde aproximadamente 0.8 % p/p hasta aproximadamente 7.0 % p/p de lisofosfolípidos, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 5.0 % p/p o 3.0 % p/p de lisofosfolípidos, en los que p/p se refiere al peso de los lisofosfolípidos como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill preferiblemente comprenden menos de aproximadamente 1 % p/p de sales inorgánicas, más preferiblemente menos de aproximadamente 0.5 % p/p de sales inorgánicas, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 0.2 % p/p de sales inorgánicas, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 0.1 % o 0.05 % p/p de sales inorgánicas, en las que p/p se refiere al peso de las sales inorgánicas como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill preferiblemente comprende menos de aproximadamente 5 mg N/100 g, más preferiblemente menos de aproximadamente 3 mg N/100 g, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 2 mg N/100 g, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 mg N/100 g, donde el contenido de N sirve como un sustituto conveniente para el contenido de óxido de trimetilamina (TMAO). En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill comprenden menos de aproximadamente 10 ppm de cobre (Cu<++>), más preferiblemente menos de aproximadamente 5 ppm de Cu<++>, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 2 ppm de Cu<++>, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 ppm de Cu<++>. En algunas realizaciones, las composiciones de fosfolípido de krill comprenden menos de aproximadamente 10 ppm de arsénico total (As<3+>), más preferiblemente menos de aproximadamente 5 ppm de arsénico total, incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 3 ppm de arsénico total, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 ppm de arsénico total. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill preferiblemente comprende desde aproximadamente 0.01 % hasta 2 % p/p de ésteres de etilo, más preferiblemente desde aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 1.5 % p/p de ésteres de etilo, y muy preferiblemente desde aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 1 % p/p de ésteres de etilo, en los que p/p se refiere al peso de los ésteres de etilo como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill preferiblemente comprende menos de aproximadamente 5 %, 4 %, 3 % o 2 % p/p de ésteres de etilo hasta un límite inferior de 0.01 % de ésteres de etilo (es decir, entre 5 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, entre 4 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, entre 3 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo, o entre 2 % y 0.01 % p/p de ésteres de etilo), más preferiblemente menos de aproximadamente 1.5 % p/p de ésteres de etilo, y muy preferiblemente menos de aproximadamente 1 % p/p de ésteres de etilo, en los que p/p se refiere al peso de los ésteres de etilo como un porcentaje del peso total de la composición de fosfolípido de krill. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill tiene una conductividad de menos de aproximadamente 50 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol, más preferiblemente una conductividad de menos de aproximadamente 30 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol, y muy preferiblemente una conductividad de menos de aproximadamente 20 μS/cm, 10 μS/cm, 5 μS/cm o 1 μS/cm cuando se mide con 5 % de materia seca en 95 % de etanol. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill has una viscosidad de desde aproximadamente 400 a 2000 mPas a 35 °C, más preferiblemente desde aproximadamente 500 a 1800 mPas a 35 °C, y muy preferiblemente desde aproximadamente 600 a 1600 mPas a 35 °C. En algunas realizaciones, la composición de fosfolípido de krill tiene un pH de desde aproximadamente 6.7 a 8.3 cuando se mide en 95 % de etanol.
[0094] 4. Producción de composición de LPC
[0096] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones de LPC de la presente invención se preparan a partir de las fuentes de fosfolípido descritas anteriormente. En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona métodos para elaborar una composición de lisofosfatidilcolina (LPC) con un alto contenido de EPA y DHA a partir de una materia marina u otra materia prima que contiene fosfolípidos que comprende tratar la materia prima marina con una fosfolipasa que no es nativa de la materia prima marina para proporcionar una materia prima tratada con fosfolipasa y fraccionar la materia prima tratada con fosfolipasa para proporcionar una composición de lípidos que tiene un mayor contenido de lisofosfatidilcolina que la materia prima de partida. En algunas realizaciones preferidas, la materia prima se selecciona del grupo que consiste en una preparación de lípidos de krill, una preparación de lípidos de arenque, una preparación de lípidos de huevas de arenque, una preparación de lípidos de algas, y una preparación de lípidos de Calanus, proporcionando de esta manera una composición de LPC de krill, una composición de LPC de arenque, una composición de LPC de huevas de arenque, una composición de LPC de algas, o una composición de LPC de Calanus. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la preparación de lípidos de krill es una preparación de lípidos deEuphausia Superba. En algunas realizaciones preferidas, la materia prima tiene un contenido de EPA y DHA en el rango de; EPA: 1-70 % en peso y DHA: 1-70 % en peso, más preferiblemente EPA: 5-70 % en peso y DHA: 5-70 % en peso, muy preferiblemente EPA: 10-60 % en peso y DHA: 10-60 % en peso.
[0098] En algunas realizaciones, la materia prima se pone en contacto con una fosfolipasa en un solvente. La presente invención no se limita al uso de cualquier fosfolipasa particular. En algunas realizaciones, la fosfolipasa es una fosfolipasa A1 (PLA1). En algunas realizaciones particularmente preferidas, la enzima es LECITASE™ Ultra, QUARA™ LowP. En algunas realizaciones, el solvente es una mezcla de agua y un alcohol. En algunas realizaciones preferidas, el alcohol es etanol. En aún realizaciones preferidas adicionales, la materia prima se pone en contacto con una fosfolipasa en una mezcla de aproximadamente 85 % de agua y 15 % de etanol. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), y la concentración de enzima está en el rango de 0.1 - 20 % en vol/peso, preferiblemente 0.1 - 15 % en vol/peso, más preferiblemente 0.1 - 10 % en vol/peso, además preferiblemente 0.1 - 5 % en vol/peso, muy preferiblemente 0.1 - 3 % en vol/peso. En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), en la que el método se lleva a cabo a un pH de 3-12, preferiblemente 4-10, más preferiblemente 4-9, muy preferiblemente 5-9. En algunas realizaciones preferidas, la enzima es una fosfolipasa A1 (PLA1), en la que el método se lleva a cabo entre 4-95 °C, preferiblemente 4-85 °C, más preferiblemente 10-80 °C, además preferiblemente 15-70 °C, incluso más preferiblemente 15-65 °C, muy preferiblemente 15-60 °C.
[0100] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones de LPC de la presente invención se preparan mediante concentración adicional de solvente y/o procedimientos de separación cromatográfica. En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC tratada con enzima se concentra por separación de fase en un sistema de solvente polar/apolar. En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC tratada con enzima se mezcla con un sistema de solventes que comprende cantidades iguales de un solvente polar (por ejemplo, metanol) y un solvente no polar (por ejemplo, heptano). Se agita la mezcla resultante y se dejan separar las fases. Los lípidos polares (por ejemplo, LPC y PC) se someten a partición en la fase polar. En algunas realizaciones, se elimina la fase polar, se lava con heptano y se recupera la fase polar. En algunas realizaciones preferidas, la fase polar luego se evapora a sequedad para proporcionar una composición de LPC concentrada. En algunas realizaciones, la composición de LPC se puede concentrar aún más mediante procedimientos cromatográficos, por ejemplo, mediante cromatografía flash utilizando gel de sílice 60 seguida de evaporación hasta sequedad.
[0102] Los métodos descritos anteriormente producen composiciones de LPC con características y/o propiedades preferidas. En algunas realizaciones preferidas, la composición de LPC tiene un contenido de EPA y DHA en el rango de; EPA: 1-100 % en peso y/o DHA: 1-100 % en peso, más preferiblemente EPA: 5-100 % en peso y/o DHA: 5-100 % en peso, muy preferiblemente EPA: 10-90 % en peso y/o DHA: 10-90 % en peso. En aún realizaciones preferidas adicionales, la composición de LPC tiene un contenido de LPC en los rangos de 10-100 % en peso, preferiblemente 20-100 % en peso, más preferiblemente 30-100 % en peso, además preferiblemente 40-100 % en peso, muy preferiblemente 50-100 % en peso.
[0104] En aún otras realizaciones preferidas, la composición de LPC obtenida por el proceso se caracteriza en comprender: aproximadamente 10 % a aproximadamente 100 % p/p de LPC de la composición, o desde 60 % hasta 100 % de LPC, desde 70 % hasta 90 % de LPC, desde 20 % hasta 50 % de LPC, desde 20 % hasta 40 % de LPC, desde 20 % hasta 30 % de LPC, 10 % a 30 % de LPC y al tener un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 60 % p/p de la composición, desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición, desde 5 % hasta 40 % de la composición o desde 5 % hasta 30 % de la composición, o desde 20 % hasta 60 % p/p de la composición, desde 20 % hasta 50 % p/p de la composición, o desde 20 % hasta 40 % p/p de la composición, o desde 30 % hasta 50 % p/p de la composición. Los expertos en la técnica reconocerán que el contenido de ácidos grasos omega-3 incluye el contenido de cadenas de acilo de ácidos grasos omega-3 que están ligadas por enlaces éster o éter a moléculas de fosfolípidos y glicerol en la composición. El % en peso de grupos acilo de ácidos grasos omega-s en la composición se puede determinar preferiblemente mediante RMN<1>H u otras técnicas de RMN adecuadas, que incluyen RMN<13>C. Alternativamente, el contenido de ácidos grasos omega-3 se puede expresar en g/100 g de ácidos grasos analizados mediante cromatografía de gases como se conoce en la técnica. En estas realizaciones, las composiciones de lisofosfolípidos comprenden preferiblemente desde 10 hasta 50 g/100 g de ácidos grasos omega-3 y más preferiblemente desde 20 hasta 40 g/100 g de ácidos grasos omega-3, donde g/100 gramos es el peso de los ácidos grasos omega-3 por cada 100 gramos de ácidos grasos totales medidos mediante cromatografía de gases.
[0105] En las realizaciones preferidas, las composiciones de lisofosfolípido adicionalmente tienen una o más de las siguientes características o propiedades:
[0106] a) una relación de 2-LPC:1-LPC desde 1:8 hasta 18:1, y más preferiblemente desde 1.2:1 hasta 8:1, 1.2:1 a 4:1, 1.2:1 a 2:1, 4:1 a 10:1; o 5:1 a 12:1;
[0107] b) un contenido de fosfatidilcolina (PC) desde 0.5 % hasta 10 % p/p de la composición, y más preferiblemente menos de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 % o 5 % p/p de la composición;
[0108] c) un contenido de fosfatidiletanolamina (PE) de menos de 1.2 %, 1.1 %, 1.0 %, 0.7 % o 0.5 % p/p de la composición;
[0109] d) un contenido de lípidos neutros desde aproximadamente 5 % hasta 65 % p/p de la composición, o más preferiblemente desde aproximadamente 45 % hasta 65 % p/p o 15 % a 35 % p/p;
[0110] e) una relación de éter 2-LPC:2-LPC desde 15:1 hasta 50:1, y más preferiblemente desde 50:1 hasta 25:1 y en la que las composiciones preferiblemente pueden comprender menos de 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1.0 %, 0.9 %, 0.8 %, 0.7 %, 0.6 %, 0.5 %, 0.4 %, 0.3 %, 0.2 % o 0.1 % 2-LPC-éter; y/o
[0111] f) una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1.
[0112] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones comprenden desde 20 % hasta 40 % o desde 23 % hasta 35 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones comprenden desde 40 % hasta 60 %, desde 40 % hasta 70 %, o desde 50 % hasta 70 % p/p de LPC de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición comprende desde 70 % hasta 90 % p/p de LPC de la composición. Con respecto a la propiedad (f), donde la composición de LPC se prepara a partir de fosfolípidos de krill, la composición de LPC preferiblemente comprenderá una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 y más preferiblemente desde 1.5:1 hasta 2:5:1. Además con respecto a propiedad (f), donde la composición de LPC se prepara a partir de fuentes marinas diferentes de krill (por ejemplo, arenque, huevas de arenque o algas marinas), la composición de LPC preferiblemente comprenderá una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1, más preferiblemente desde 2:1 hasta 4:1, y muy preferiblemente desde 2.5:1 hasta 3.5:1.
[0113] En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 35 % hasta 45 % p/p de la composición. En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene la propiedad (a), (b), (c), (d), (e) o (f) o una combinación de las propiedades, por ejemplo: las propiedades (a) y (b); (a) y (c); (a) y (d); (a) y (e); (a) y (f) (b) y (c); (b) y (d); (b) y (e); (b) y (f); (c) y (d); (c) y (e); ((c) y (f); (d) y (e); (d) y (f); (e) y (f); (a), (b) y (c); (a), (b) y (d); (a), (b) y (e); (a), (b) y (f); (a), (c) y (d); (a), (c) y (e); (a), (c) y (f); (a), (d) y (e); (a), (d) y (f); (b), (c) y (d); (b), (c) y (e); (b) (c) y )f); (b), (d) y (e); (b), (d) y (f); (c), (d) y (e); (c), (d) y (f); (a), (b), (c), y (d); (a), (b), (c), y (e); (a), (b), (c) y (f); (b), (c), (d), y (e); (b), (c), (d) y (f); (a), (c), (d), y (e); (a), (c), (d) y (f); (a), (b), (d), y (e); (a), (b), (d) y (f); (a), (b), (c), (d) y (e); (a), (b), (c), (d), y (f); (b), (c), (d), (e), y (f); (a), (b), (d), (e) y (f); (a), (b), (c), (e) y (f); y (a), (b), (c), (d), (e) y (f) así como cualesquier otras posibles combinaciones. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones tienen dos o más de las propiedades (a), (b) y (c). En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene dos o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene tres o más de las propiedades (a), (b), (c), (d),(e) y (f). En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene cuatro o más de las propiedades (a), (b), (c), (d) y (e). En algunas realizaciones preferidas, la composición tiene cinco o más de las propiedades (a), (b), (c), (d), (e) y (f).
[0114] 5. Formulación de las composiciones de LPC
[0115] En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona una composición farmacéutica o nutracéutica que comprende una composición de LPC como se describió anteriormente y un portador fisiológicamente aceptable. En algunas realizaciones preferidas, el portador fisiológicamente aceptable es un portador de lípidos. En algunas realizaciones preferidas, la presente invención proporciona un vehículo de suministro oral que contiene una composición de LPC marina, composición farmacéutica o composición nutracéutica como se describe en el presente documento.
[0116] Se divulga en el presente documento una composición de lípidos que comprende una fracción de lípidos y segunda fracción de lípidos, en los que la primera fracción de lípidos es la composición de LPC marina como se describe en el presente documento y la segunda fracción de lípidos se obtiene a partir de una fuente diferente de la primera fracción de lípidos y/o contiene menos de 20 % de LPC. La segunda fracción de lípidos se puede seleccionar del grupo que consiste en una fracción de triglicéridos, una fracción de diglicéridos, una fracción de éster etílico de ácido graso, una fracción de ácido graso libre y combinaciones de las mismas. La segunda fracción de lípidos puede ser una fracción de lípidos marina que comprende EPA y/o DHA. También se divulga en el presente documento una composición farmacéutica o nutracéutica que comprende la composición de lípidos que se acaba de describir y un portador fisiológicamente aceptable. También se divulga un vehículo de suministro oral que contiene las composiciones de lípidos que se acaban de describir.
[0118] Las composiciones de LPC de la presente invención se administran preferiblemente por vía oral. De acuerdo con lo anterior, en algunas realizaciones, las composiciones de esta invención (tales como las descritas en las secciones anteriores) están contenidas en excipientes y/o portadores aceptables para el consumo oral. La forma real del portador y, por tanto, la composición en sí misma, no son críticas. El portador puede ser un líquido, gel, cápsula de gel, cápsula, polvo, comprimido sólido (recubierto o no recubierto), té o similar. La composición está preferiblemente en forma de comprimido o cápsula y más preferiblemente en forma de cápsula de gel blando. Los excipientes y/o portadores adecuados incluyen aceite vegetal, aceite de pescado, aceite de krill, maltodextrina, carbonato de calcio, fosfato dicálcico, fosfato tricálcico, celulosa microcristalina, dextrosa, harina de arroz, estearato de magnesio, ácido esteárico, croscarmelosa de sodio, glicolato de almidón de sodio, crospovidona, sacarosa, gomas vegetales, lactosa, metilcelulosa, povidona, carboximetilcelulosa, almidón de maíz y similares (que incluyen mezclas de los mismos). Los portadores preferidos incluyen carbonato de calcio, estearato de magnesio, maltodextrina y mezclas de los mismos. Los diversos ingredientes y el excipiente y/o portador se mezclan y se forman en la forma deseada utilizando técnicas convencionales. Un comprimido o cápsula puede estar recubierto con un recubrimiento entérico que se disuelve a un pH de aproximadamente 6.0 a 7.0. Un recubrimiento entérico adecuado que se disuelve en el intestino delgado pero no en el estómago es el acetato ftalato de celulosa. Se pueden encontrar detalles adicionales sobre las técnicas de formulación y administración en la última edición de Remington’s Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, PA).
[0120] En algunas realizaciones, las composiciones de LPC están formuladas para administración oral con agentes aromatizantes o edulcorantes. Los ejemplos de saborizantes útiles incluyen, pero no se limitan a, extracto de anís puro, extracto de imitación de plátano, extracto de imitación de cereza, extracto de chocolate, extracto de limón puro, extracto de naranja puro, extracto de menta pura, extracto de imitación de piña, extracto de imitación de ron, extracto de imitación de fresa o extracto puro de vainilla; o aceites volátiles, tal como aceite de bálsamo, aceite de laurel, aceite de bergamota, aceite de cedro, aceite de nuez, aceite de cereza, aceite de canela, aceite de clavo o aceite de menta; mantequilla de maní, saborizante de chocolate, migas de galleta de vainilla, caramelo o caramelo duro de mantequilla. En una realización, el suplemento dietético contiene cacao o chocolate. Se pueden agregar emulsionantes para estabilizar el producto final. Los ejemplos de emulsionantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, lecitina (por ejemplo, de huevo o soja) y/o mono y diglicéridos. Otros emulsionantes son fácilmente evidentes para el técnico experto y la selección del(los) emulsionante(s) adecuado(s) dependerá, en parte, de la formulación y el producto final. Además de los carbohidratos descritos anteriormente, el suplemento nutricional puede contener edulcorantes naturales o artificiales (preferiblemente bajos en calorías), por ejemplo, sacáridos, ciclamatos, aspartamina, aspartamo, acesulfamo K y/o sorbitol.
[0121] Las composiciones de LPC de la presente invención también se pueden suministrar como suplementos dietéticos, suplementos nutricionales o alimentos funcionales.
[0123] El suplemento dietético puede comprender uno o más ingredientes inertes, especialmente si es deseable limitar la cantidad de calorías agregadas a la dieta por el suplemento dietético. Por ejemplo, el suplemento dietético de la presente invención también puede contener ingredientes opcionales que incluyen, por ejemplo, hierbas, vitaminas, minerales, potenciadores, colorantes, edulcorantes, saborizantes, ingredientes inertes y similares. Por ejemplo, el suplemento dietético de la presente invención puede contener uno o más de los siguientes: ascorbatos (ácido ascórbico, sales minerales de ascorbato, escaramujos, acerola y similares), deshidroepiandosterona (DHEA), té verde (polifenoles), inositol, algas marinas, palmaria, bioflavonoides, maltodextrina, ortigas, niacina, niacinamida, romero, selenio, sílice (dióxido de silicio, gel de sílice, cola de caballo, equiseto y similares), espirulina, zinc y similares. dichos ingredientes opcionales pueden estar presentes en formas de origen natural o concentradas.
[0125] En algunas realizaciones, los suplementos dietéticos comprenden además vitaminas y minerales que incluyen, pero no se limitan a, fosfato o acetato de calcio, tribásico; fosfato de potasio, dibásico; sulfato u óxido de magnesio; sal (cloruro de sodio); cloruro o acetato de potasio; ácido ascórbico; ortofosfato férrico; niacinamida; sulfato u óxido de zinc; pantotenato de calcio; gluconato de cobre; riboflavina; betacaroteno; clorhidrato de piridoxina; mononitrato de tiamina; ácido fólico; biotina; cloruro o picolonato de cromo; yoduro de potasio; selenato de sodio; molibdato de sodio; filoquinona; vitamina D<3>; cianocobalamina; selenito de sodio; sulfato de cobre; vitamina A; vitamina C; inositol; yoduro de potasio. Las dosificaciones adecuadas de vitaminas y minerales se pueden obtener, por ejemplo, consultando las pautas RDA de EE. UU.
[0126] En otras realizaciones, la presente invención proporciona suplementos nutricionales (por ejemplo, barras energéticas o barras o bebidas sustitutivas de comidas) que comprenden las composiciones de LPC de la presente invención. En las realizaciones preferidas, los suplementos nutricionales comprenden una cantidad efectiva de los componentes como se describió anteriormente. El suplemento nutricional puede servir como sustituto de una comida o una merienda y, por lo general, aporta calorías nutritivas. Preferiblemente, los suplementos nutricionales aportan carbohidratos, proteínas y grasas en cantidades equilibradas. El suplemento nutricional puede comprender además carbohidratos, simples, de cadena media o polisacáridos, o una combinación de los mismos. Se puede elegir un azúcar simple por sus propiedades organolépticas deseadas. El almidón de maíz crudo es un ejemplo de carbohidrato complejo. Si se desea que mantenga su estructura de alto peso molecular, se debe incluir sólo en formulaciones de alimentos o porciones de los mismos que no estén cocinadas ni procesadas térmicamente, ya que el calor descompondrá el carbohidrato complejo en carbohidratos simples, en los que los carbohidratos simples son mono o disacáridos. El suplemento nutricional contiene, en una realización, combinaciones de fuentes de carbohidratos de tres niveles de longitud de cadena (simple, media y compleja; por ejemplo, sacarosa, maltodextrinas y almidón de maíz crudo).
[0128] En aún otras realizaciones adicionales, la presente invención proporciona productos alimenticios, productos alimenticios preparados o materias primas alimenticias (es decir, alimentos funcionales) que comprenden las composiciones de LPC de la presente invención. En las realizaciones preferidas, los alimentos comprenden una cantidad efectiva de los componentes como se describió anteriormente. Por ejemplo, en algunas realizaciones, se proporcionan bebidas y alimentos sólidos o semisólidos que comprenden los ácidos grasos o derivados de los mismos. Estas formas pueden incluir, pero no se limitan a, bebidas (por ejemplo, refrescos, leche y otras bebidas lácteas, y bebidas dietéticas), productos horneados, budines, productos lácteos, confites, bocadillos o confites o postres congelados (por ejemplo, helado, batidos de leche), comidas congeladas preparadas, dulces, bocadillos (por ejemplo, papas fritas), sopas, untables, salsas, aderezos para ensaladas, productos cárnicos preparados, queso, yogur y cualesquier otros alimentos que contengan grasa o aceite e ingredientes alimentarios (por ejemplo, harina de trigo).
[0130] En algunas realizaciones preferidas, las composiciones de LPC se incorporan en matrices masticables. Se prefieren las matrices masticables de gelatina y los caramelos de goma a base de gelatina. Entre los caramelos de goma de mascar se incluyen los ositos de goma, gusanos de goma, ranas de goma, hamburguesas de goma, cerezas de goma, botellas de refresco de goma, tiburones de goma, soldados de goma, hipopótamos de goma, langostas de goma, sandías de goma, pulpos de goma, manzanas de goma, duraznos de goma y naranjas de goma. Los términos “goma” y “gomoso” se utilizan indistintamente en el presente documento.
[0131] También se divulgan en el presente documento composiciones que comprenden las composiciones de LPC descritas anteriormente y uno o más derivados de ácidos grasos omega-3 o ácidos grasos libres adicionales. Los derivados de ácidos grasos omega-3 o ácidos grasos libres se pueden derivar del extracto de lípidos neutro o de una fuente adicional, tal como aceite de pescado o una composición de ésteres omega-3. Los uno o más derivados de ácidos grasos omega-3 adicionales se pueden seleccionar de ésteres y glicéridos omega-3. Por ejemplo, la composición puede comprender desde aproximadamente 1 % hasta aproximadamente 60 % p/p de la composición de aceite de krill (es decir, el peso de los compuestos de fosfolípido /peso total de la composición), siendo el restante 99 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos (es decir, el peso de glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos/peso total de la composición). En algunas realizaciones, la composición puede comprender desde aproximadamente 5 % hasta aproximadamente 60 % p/p de fosfolípidos, siendo el restante 95 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la composición puede comprender desde aproximadamente 20 % hasta aproximadamente 60 % p/p de fosfolípidos, siendo el restante 80 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la composición puede comprender desde aproximadamente 30 % hasta aproximadamente 60 % p/p de fosfolípidos, siendo el restante 70 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la composición puede comprender desde aproximadamente 40 % hasta aproximadamente 60 % p/p de fosfolípidos, siendo el restante 60 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la composición puede comprender desde aproximadamente 50 % hasta aproximadamente 60 % p/p de fosfolípidos, siendo el restante 50 % a 40 % p/p de la composición glicéridos de omega-3, ésteres, o ácidos grasos libres o una combinación de los mismos.
[0133] Las composiciones de LPC de la presente invención se pueden incorporar además en piensos y raciones para animales y peces. Se pueden formular muchas raciones de pienso diferentes para animales y peces a partir de muchos ingredientes para pienso distintos. Las raciones generalmente se formulan para proporcionar nutrientes de acuerdo con los estándares del Consejo Nacional de Investigación. La materia prima para piensos utilizada en la ración se elige de acuerdo con el precio del mercado y la disponibilidad. Por lo tanto, algunos componentes de la ración pueden cambiar con el tiempo. En los piensos, la ración siempre contendrá una composición de LPC de la invención, preferiblemente en una cantidad de desde 0.1 % hasta 50 %, 0.5 % a 50 %, 1.0 % a 40 %, 1.0 % a 30 %, 1.0 % a 20 %, 1.0 % a 10 %, 0.1 % a 10 %, o 0.5 % a 5 % de la grasa total de la ración. Para discusiones sobre la formulación de raciones de pienso, las raciones reales y las directrices del NRC, consulte Church, Livestock Feeds and Feeding, O&B Books, Inc., Corvallis, Oreg. (1984)) y Feeds and Nutrition Digest, Ensminger, Oldfield and Heineman eds., Ensminger Publishing Corporation, Clovis, Calif. (1990).
[0134] Las raciones de pienso para animales se pueden caracterizar de acuerdo con los requisitos del NRC. Los requisitos de NRC se pueden encontrar en Church, Livestock Feeds and Feeding, O&B Books, Inc., Corvallis, Oreg. (1984)) u otros estándares nutricionales. Las raciones de animales y peces se equilibran tradicionalmente teniendo en cuenta los requisitos de proteínas y energía y, si es necesario, se ajustan para satisfacer los demás requisitos. Los piensos para animales y peces contendrán aproximadamente entre un 0.05 % y un 5 % de lípidos más otros materiales de pienso necesarios para equilibrar el pienso y cumplir con los requisitos del NRC (u otros requisitos reconocidos) para las diferentes etapas de crecimiento y mantenimiento.
[0135] Las cantidades relativas de proteína y energía se ajustan para reflejar los requisitos estándar. Las cantidades de los componentes de pienso variarán según el estadio del animal alimentado. Una ración de crecimiento para animales jóvenes y peces tendrá niveles de proteína más altos, mientras que una ración de finalización para animales en etapa de finalización para el mercado tendrá valores energéticos más altos que son suministrados por carbohidratos. Por ejemplo, las raciones de preinicio, de inicio y de crecimiento-finalización para varios animales generalmente contendrán alrededor de 20-24 % de proteína, 18-20 % de proteína y 13-17 % de proteína respectivamente. En algunas situaciones de alimentación, se debe tener cuidado de proporcionar los aminoácidos adecuados, así como el contenido proteico general. Las necesidades energéticas también pueden satisfacerse añadiendo grasa a la ración. La composición de lisofosfolípidos puede proporcionar parte de los requerimientos energéticos.
[0136] Las raciones típicas de salmón comprenden desde aproximadamente 5 % hasta 65 % de harina de pescado y/o harina de krill, un 5 % a 30 % de aceite vegetal y un 5 % - 15 % de aceite de pescado, expresado como % peso del componente/peso de la ración (% p/p) y desde 0.5 % hasta 5 % de una composición de LPC de la presente invención para proporcionar un contenido de grasa total desde 10 % hasta 45 % p/p de la ración. Las raciones tienen un contenido de proteína cruda desde aproximadamente 32 % hasta 46 %, preferiblemente desde aproximadamente 36 % hasta 42 %, un contenido de lípido crudo desde aproximadamente 26 % hasta 42 %, preferiblemente desde aproximadamente 28 % hasta 38 %, un contenido de carbohidratos (NFE) desde aproximadamente 11 % hasta 18 %, preferiblemente desde aproximadamente 13 % hasta 15 %, un contenido de fibra desde aproximadamente 1 % hasta 5 %, preferiblemente desde aproximadamente 1.5 % hasta 2.5 %, un contenido de ceniza desde aproximadamente 4 % hasta 7 %, preferiblemente aproximadamente 4.5 % a 6.5 %, un contenido de fósforo (P) total desde aproximadamente 0.5 % hasta 1.1 %, preferiblemente aproximadamente 0.6 % a 1.0 %, un contenido energético bruto desde aproximadamente 20 hasta 30 MJ/kg, preferiblemente desde aproximadamente 23 hasta 28 MJ/kg, y un contenido energético digerible desde aproximadamente 20 hasta 24 MJ/kg.
[0137] Se pueden agregar otros ingredientes a la ración de pienso. Estos ingredientes incluyen, pero no se limitan a, suplementos minerales tales como calcio, fósforo, sal, selenio y zinc; suplementos vitamínicos tales como las vitaminas A, B, D, E y K; suplementos de aminoácidos tales como la lisina; coccidiostáticos, excepto en piensos para cerdos, o promotores del crecimiento como la bacitracina o la virginamicina; y otros fármacos activos tales como la clortetraciclina, sulfatiozol y penicilina. Para la formulación de suplementos de vitaminas, minerales y antibióticos, consulte Church, Livestock Feeds and Feeding, O&B Books, Inc., Corvallis, Oreg. (1984).
[0138] Las composiciones de lisofosfolípidos se pueden incorporar a un pienso granulado para administración a animales domésticos. El pienso granulado se crea al mezclar primero los componentes del pienso y luego compactarlos y extruir los componentes de pienso a través de una matriz con calor y presión. El pienso se granula mediante métodos conocidos en la técnica, que se describen en MacBain, Pelleting Animal Feed, American Feed Manufacturers Association, Arlington, Va. (1974). Al incorporar grasa agregada al pienso granulado, se debe tener cuidado para evitar que los gránulos queden harinosos. Generalmente, solo se agrega aproximadamente 2 % de la grasa durante la granulación y el resto se agrega después de que se hayan enfriado los gránulos.
[0139] El aceite y el pienso que contiene el aceite se pueden estabilizar mediante la adición de antioxidantes. Por lo tanto, se pueden agregar antioxidantes como conservantes químicos de acuerdo con las regulaciones de la FDA que figuran en la Publicación Oficial de 1997, Association of Feed Control Officials Incorporated (1997). Los antioxidantes adecuados incluyen, pero no se limitan a: Lecitina, tocoferoles, ascorbato, palmitato de ascorbilo y extractos de especias tales como el extracto de romero.
[0140] Los piensos se formulan como se indicó anteriormente y se adaptan a los requisitos del animal que se va a alimentar de acuerdo con las directrices del NRC. Por ejemplo, se pueden formular piensos para perros, gatos, aves de corral, ganado, camarones y peces como el salmón, trucha, bagre y tilapia. Se discuten diversas formulaciones de piensos, métodos de equilibrio y requisitos para estos animales en Church, Livestock Feeds and Feeding, O&B Books, Inc., Corvallis, Oreg. (1984)) y Feeds and Nutrition Digest, Ensminger, Oldfield and Heineman eds., Ensminger Publishing Corporation, Clovis, Calif. (1990)).
[0141] 6. Usos de las composiciones de fosfolípidos de krill
[0143] La administración oral de las composiciones de lisofosfolípidos de la presente invención puede aumentar la cantidad de EPA y/o DHA en un tejido objetivo. Los tejidos y órganos objetivo preferidos son la glándula suprarrenal, sangre, hueso, médula ósea, cerebro, grasa (blanca), riñón (entero), mucosa del intestino grueso, hígado, pulmón, músculo, miocardio, páncreas, glándula pituitaria, próstata, piel, mucosa del intestino delgado, bazo, mucosa del estómago, testículos, timo y/o glándula tiroides.
[0145] Se puede administrar una cantidad eficaz de los compuestos o composiciones descritos anteriormente a un sujeto que los necesite para tratar, prevenir o mejorar la cognición y/o una enfermedad, trastorno o deterioro cognitivo (memoria, concentración, aprendizaje (déficit)), o para tratar o prevenir trastornos neurodegenerativos. La enfermedad, trastorno o deterioro cognitivo se puede seleccionar de Trastorno por Déficit de Atención (ADD), Trastorno por Déficit de Atención e Hiperactividad (ADHD), autismo/trastorno del espectro autista (ASD), (dislexia, deterioro de la memoria y trastornos del aprendizaje asociados a la edad, amnesia, deterioro cognitivo leve, deterioro cognitivo no demente, enfermedad pre-Alzheimer, enfermedad de Alzheimer, epilepsia, enfermedad de Pick, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Lou Gehrig, síndrome de pre-demencia, demencia por cuerpos de Lewy, atrofia dentatorubropalidoluysiana, ataxia de Freidreich, atrofia multisistémica, ataxia espinocerebelosa tipos 1, 2, 3, 6, 7, esclerosis lateral amiotrófica, paraparesia espástica familiar, atrofia muscular espinal, atrofia muscular espinal y bulbar, declive cognitivo relacionado con la edad, deterioro cognitivo, deterioro mental moderado, deterioro mental como resultado del envejecimiento, afecciones que influyen en la intensidad de ondas cerebrales y/o utilización de glucosa en el cerebro, estrés, ansiedad, deterioro de la concentración y la atención, deterioro del estado de ánimo, bienestar cognitivo y mental general, trastornos del desarrollo neurológico, trastornos neurodegenerativos, trastornos hormonales, desequilibrio neurológico o cualquier combinación de los mismos. El trastorno cognitivo puede ser un deterioro de la memoria.
[0147] Se puede administrar una cantidad eficaz de los compuestos o composiciones descritas anteriormente a un sujeto que los necesite para tratar o prevenir un trastorno cardiovascular o síndrome metabólico. El trastorno cardiovascular se puede seleccionar de aterosclerosis, arteriosclerosis, enfermedad coronaria (arteria carótida) (CHD o CAD), síndrome coronario agudo (o ACS), enfermedad cardíaca valvular, trastornos de las válvulas aórtica y mitral, arritmia/fibrilación auricular, miocardiopatía e insuficiencia cardíaca, angina de pecho, infarto agudo de miocardio (o AMI), hipertensión, hipotensión ortostática, choque, embolia (pulmonar y venosa), endocarditis, enfermedades de las arterias, la aorta y sus ramas, trastornos del sistema vascular periférico (enfermedad arterial periférica o PAD), enfermedad de Kawasaki, cardiopatía congénita (defectos cardiovasculares) y apoplejía (enfermedad cerebrovascular), dislipidemia, hipertrigliceridemia, hipertensión, insuficiencia cardíaca, arritmias cardíacas, niveles bajos de HDL, niveles altos de LDL, angina estable, enfermedad coronaria, infarto agudo de miocardio, prevención secundaria del infarto de miocardio, miocardiopatía, endocarditis, diabetes tipo 2, resistencia a la insulina, intolerancia a la glucosa, hipercolesterolemia, apoplejía, hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia, enfermedad renal crónica, claudicación intermitente, hiperfosfatemia, deficiencia de omega-3, deficiencia de fosfolípidos, aterosclerosis carotídea, enfermedad arterial periférica, nefropatía diabética, hipercolesterolemia en la infección por VIH, síndrome coronario agudo (ACS), enfermedad del hígado graso no alcohólico/esteatohepatitis no alcohólica (NAFLD/NASH), enfermedades oclusivas arteriales, aterosclerosis cerebral, arteriosclerosis, trastornos cerebrovasculares, isquemia miocárdica, coagulopatías que conducen a la formación de trombos en un vaso y neuropatía autonómica diabética.
[0149] Se puede administrar una cantidad eficaz de los compuestos o composiciones descritas anteriormente a un sujeto que los necesite para inhibir, prevenir o tratar la inflamación o una enfermedad inflamatoria. La inflamación o enfermedad inflamatoria se puede seleccionar entre rechazo de trasplante de órgano; lesión por reoxigenación resultante del trasplante de órgano (consulte Grupp et al., J. Mol. Cell. Cardiol. 31: 297-303 (1999)) que incluye, pero no se limita a, trasplante de los siguientes órganos: corazón, pulmón, hígado y riñón; enfermedades inflamatorias crónicas de las articulaciones, que incluyen artritis, artritis reumatoide, osteoartritis y enfermedades óseas asociadas con aumento de la resorción ósea; enfermedades inflamatorias intestinales (IBD) tales como ileítis, colitis ulcerosa (UC), síndrome de Barrett y enfermedad de Crohn (CD); enfermedades inflamatorias pulmonares como asma, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD); enfermedades inflamatorias del ojo que incluye distrofia corneal, tracoma, oncocercosis, uveítis, oftalmitis simpática y endoftalmitis; enfermedades inflamatorias crónicas de las encías, incluyendo gingivitis y periodontitis; enfermedades inflamatorias del riñón que incluyen complicaciones urémicas, glomerulonefritis y nefrosis; enfermedades inflamatorias de la piel que incluyen esclerodermatitis, psoriasis y eczema; enfermedades inflamatorias del sistema nervioso central, que incluyen enfermedades desmielinizantes crónicas del sistema nervioso, esclerosis múltiple, neurodegeneración relacionada con el SIDA y enfermedad de Alzheimer, meningitis infecciosa, encefalomielitis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, epilepsia, esclerosis lateral amiotrófica y encefalitis viral o autoinmune, preeclampsia; insuficiencia hepática crónica, traumatismo cerebral y de la médula espinal y cáncer. La enfermedad inflamatoria también puede ser una inflamación sistémica del cuerpo, ejemplificada por un choque grampositivo o gramnegativo, un choque hemorrágico o anafiláctico, o un choque inducido por quimioterapia contra el cáncer en respuesta a citocinas proinflamatorias, por ejemplo, un choque asociado con citocinas proinflamatorias. Este tipo de choque puede ser inducido, por ejemplo, por un agente quimioterapéutico que se administra como tratamiento para el cáncer. Otros trastornos incluyen depresión, obesidad, enfermedades alérgicas, eventos cardiovasculares agudos, enfermedades que producen desgaste muscular y caquexia por cáncer. Asimismo, la inflamación resultante de la cirugía y el trauma se puede tratar con las composiciones de fosfolípidos.
[0150] Las composiciones de LPC descritas anteriormente se pueden administrar a un sujeto que las necesite para tratar una enfermedad o afección asociada con los glóbulos rojos y las membranas celulares, y en particular una enfermedad o afecciones asociadas con una anomalía en los glóbulos rojos o las membranas celulares. La afección o enfermedad puede ser anemia de células falciformes, anemia de células falciformes o rasgo de células falciformes. La afección o enfermedad puede ser talasemia (alfa, beta o delta), talasemia en combinación con una hemoglobinopatía (Hemoglobina E, Hemoglobina S O Hemoglobina C), esplenomegalia o anomalías de la membrana como acantocitos o células en espiga/espolón, codocitos (células objetivo), equinocitos (células crenadas), eliptocitos y ovalocitos, esferocitos, estomatocitos (células de la boca) y degmacitos (“células de mordedura”).
[0151] La cantidad eficaz puede comprender desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 5 gramos de la composición de fosfolípido de krill, preferiblemente desde aproximadamente 0.2 hasta aproximadamente 3 gramos de la composición de fosfolípido de krill, y muy preferiblemente aproximadamente 0.5 a aproximadamente 1.5 gramos de la composición de fosfolípido de krill.
[0152] Las composiciones de lisofosfolípidos de krill de la presente invención se pueden utilizar para tratar una variedad de sujetos. Los sujetos adecuados incluyen tanto humanos como animales domésticos (tales como ganado, caballos, ovejas, cerdos, cabras, peces y camarones), primates no humanos y animales de compañía (tales como perros, gatos y pájaros). El sujeto puede ser sujeto humano de menos de 10 años de edad, más preferiblemente de menos de 1 año de edad, incluso más preferiblemente de menos de 1 mes de edad, y muy preferiblemente un recién nacido. El sujeto humano puede tener desde aproximadamente 10 hasta 20 años de edad. El sujeto humano puede tener desde aproximadamente 20 hasta 50 años de edad. El sujeto humano puede tener desde aproximadamente 50 hasta 100 años de edad. El sujeto humano puede tener desde aproximadamente 60 hasta 100 años de edad. El sujeto humano puede tener desde aproximadamente 70 hasta a 100 años de edad.
[0153] Experimental
[0154] Ejemplo 1- SUPERBA™ BOOST™
[0155] Este ejemplo describe la producción de una composición de LPC utilizando SUPERBA™ BOOST™ (Aker Biomarine AS, Lysaker, NO) como fuente de fosfolípidos de partida. La SUPERBA™ BOOST™ se produce preferiblemente mediante los procesos SMB descritos en otra parte del presente documento. SUPERBA™ BOOST™ es una composición de fosfolípidos de krill en la que 1000 mg contienen 560 mg de fosfolípidos, 150 mg de EPA y 70 mg de DHA. En resumen, 9 gramos de SUPERBA™ BOOST™ se mezcla con 90 ml de EtOH y luego se agregan 450 ml de agua en un matraz de reacción de fondo redondo de un litro purgado con nitrógeno. A continuación, 0.40 ml de LECITASA™ Ultra se agrega y se deja que la reacción continúe durante 30 minutos con agitación. Luego se agregan 500 ml de EtOH para desactivar la enzima y la mezcla se evapora a sequedad utilizando un rotovapor. A continuación, se realiza una separación basada en solvente. La muestra de lípidos de krill tratada con enzima se mezcla con un baño de solvente con heptano y metanol. Las especies LPC y PC migran al solvente polar (metanol) y los lípidos no polares se someten a partición en heptano. La decantación de la fase de heptano deja una fase polar con gran cantidad de lípidos polares, que incluyen LPC y PC. Se agregan 250 ml de heptano y 250 ml de MeOH a la composición de lípidos seca en un matraz. Se agita vigorosamente el matraz y se dejan separar las fases. La fase superior no polar de heptano se decanta y se agregan otros 250 ml de heptano a la fase polar de MeOH y se repite la separación. Luego se agregan 10 gramos de gel de sílice al extracto de MeOH y la solución se evapora hasta sequedad en un evaporador rotatorio. A continuación, la LPC se purifica a partir de la composición de lípidos seca mediante cromatografía flash (100 g de gel de sílice en una columna de 5 cm de diámetro). La LPC se eluye con una serie de fases móviles: MPA (heptano); MPB (Tolueno: Metanol: Trietilamina, 60:40: 1); y Metanol:Trietilamina, 95:5). Las fracciones se recogen y se evaporan hasta sequedad.
[0156] Se analizó una composición de LPC producida mediante métodos de la presente invención mediante RMN<1>H,<31>P, 2D, TLC, GC y HPLC según corresponda. Los resultados de RMN<1>H y HPLC se muestran en la Figura 1 y Figura 2, respectivamente, denominados AKB6444-1.
[0157] Se utilizaron RMN<31>P y 2D para determinar los componentes fosfolípidos, los resultados se presentan en la Tabla 1, Tabla 2 y Tabla 3 denominados AKB6444-1.
[0158] Ejemplo 2- Prelavado SUPERBA™ BOOST™ y FLASH
[0159] Este ejemplo describe la producción de una composición de LPC utilizando SUPERBA™ BOOST™ (Aker Biomarine AS, Lysaker, NO) como fuente de fosfolípidos de partida. La SUPERBA™ BOOST™ se produce preferiblemente mediante los procesos SMB descritos en otra parte del presente documento. SUPERBA™ BOOST™ es una composición de fosfolípidos de krill en la que 1000 mg contienen 560 mg de fosfolípidos, 150 mg de EPA y 70 mg de DHA. En resumen, 10 gramos de SUPERBA™ BOOST™ se mezcla con 100 ml de EtOH y luego se agregan 450 ml de agua en un matraz de reacción de fondo redondo de un litro purgado con nitrógeno. A continuación, 0.40 ml de LECITASA™ Ultra se agrega y se deja que la reacción continúe durante 40 minutos con agitación. Luego se agregan 500 ml de EtOH para desactivar la enzima y la mezcla se evapora a sequedad utilizando un rotovapor. A continuación, se realiza una separación basada en solvente. La muestra de lípidos de krill tratada con enzima se mezcla con un baño de solvente con heptano y metanol. Las especies LPC y PC migran al solvente polar (metanol) y los lípidos no polares se someten a partición en heptano. Específicamente, a la muestra seca se agregó metanol (250 ml) y heptano (250 ml). Después de agitar vigorosamente las fases se separaron y la fase metanólica se extrajo con otra porción de heptano (250 ml). Las fracciones de heptano se analizaron mediante TLC y se evaporaron por separado. Al residuo de metanol se agregó gel de sílice 60 (20 g) y la solución se concentró a sequedad. Luego, la LPC se purifica a partir de la composición de lípidos seca mediante cromatografía flash. El gel de sílice se cargó en una columna (diámetro de 5 cm) con gel de sílice (130 g) y la columna se eluyó. Volumen de la fracción 25 ml. Eluyentes: 500 ml de EtOAc, 250 ml de EtOAc: MeOH 80: 20, 250 ml de EtOAc: MeOH 50: 50, 250 ml de MeOH, 500 ml de MeOH: Et3N 95: 5,500 ml de MeOH: Et3N 90: 10. Las fracciones se analizaron mediante TLC y se evaporaron de acuerdo con los hallazgos. Las fracciones que contienen LPC después de la separación cromatográfica produjeron una masa final de 3,28 gramos.
[0160] Se analizó una composición de LPC producida mediante métodos de la presente invención mediante RMN<1>H,<31>P, 2D, TLC, GC y HPLC según corresponda. Los resultados de RMN<1>H y HPLC se muestran en la Figura 7 y la Figura 8, respectivamente, denominados AKB70005-4.
[0161] Se utilizaron RMN<31>P y 2D para determinar los componentes fosfolípidos, los resultados se presentan en la Tabla 5, Tabla 9 y Tabla 10 denominados AKB70005-4.
[0162] Ejemplo 3- SUPERBA™ BOOST™ FLASH
[0163] Este ejemplo describe la producción de una composición de LPC utilizando SUPERBA™ BOOST™ (Aker Biomarine AS, Lysaker, NO) como fuente de fosfolípidos de partida. La SUPERBA™ BOOST™ se produce preferiblemente mediante los procesos SMB descritos en otra parte del presente documento. SUPERBA™ BOOST™ es una composición de fosfolípidos de krill en la que 1000 mg contienen 560 mg de fosfolípidos, 150 mg de EPA y 70 mg de DHA. En resumen, 10 gramos de SUPERBA™ BOOST™ se mezclan con 100 ml de EtOH y luego se agregan 450 ml de agua en un matraz de reacción de fondo redondo de un litro purgado con nitrógeno. A continuación, 0.40 ml de LECITASA™ Ultra se agrega y se deja que la reacción continúe durante 40 minutos con agitación. Luego se agregan 500 ml de EtOH para desactivar la enzima y la mezcla se evapora hasta sequedad utilizando un rotovapor. A continuación, la LPC se purifica a partir de la composición de lípidos seca mediante cromatografía flash como sigue: el residuo se volvió a disolver en metanol (200 ml) y se agregó gel de sílice 60 (20 g) y la suspensión se concentró hasta sequedad en el evaporador rotatorio. El gel de sílice se cargó en una columna (diámetro de 5 cm) con gel de sílice (130 g) y la columna se eluyó. Volumen de la fracción 25 ml. Eluyentes: 500 ml de EtOAc, 250 ml de EtOAc: MeOH 80: 20, 250 ml de EtOAc: MeOH 50: 50, 250 ml de MeOH, 500 ml de MeOH: Et3N 90: 10. Las fracciones se analizaron mediante TLC y se evaporaron de acuerdo con los hallazgos. Las fracciones que contienen LPC después de la separación cromatográfica produjeron una masa final de 3.73 gramos.
[0164] Se analizó una composición de LPC producida mediante métodos de la presente invención mediante RMN<1>H,<31>P, 2D, TLC, GC y HPLC según corresponda. Los resultados de RMN<1>H y HPLC se muestran en la Figura 9 y la Figura 10, respectivamente, denominados AKB70005-5.
[0165] Se utilizaron RMN<31>P y 2D para determinar los componentes fosfolípidos, los resultados se presentan en la Tabla 6, Tabla 9 y Tabla 10 denominados AKB70005-5.
[0166] Ejemplo 4- Prelavado ROMEGA™ y FLASH
[0167] Este ejemplo describe la producción de una composición de LPC utilizando ROMEGA™ (Arctic Nutrition AS, Ørsta, NO) como fuente inicial de fosfolípidos. La ROMEGA™ se produce preferiblemente mediante procesos descritos en otra parte. ROMEGA™ es una composición de aceite de huevas de arenque y aceite de pescado en la que 1000 mg/3000 mg contienen 340 mg/1020 mg de fosfolípidos, 100 mg/300 mg de EPA y 320 mg/960 mg de DHA. En resumen, 9 gramos de ROMEGA™ se mezcla con 90 ml de EtOH y luego se agregan 450 ml de agua en un matraz de reacción de fondo redondo de un litro purgado con nitrógeno. A continuación, 0.40 ml de LECITASA™ Ultra se agrega y se deja que la reacción continúe durante 40 minutos con agitación. Luego se agregan 500 ml de EtOH para desactivar la enzima y la mezcla se evapora hasta sequedad utilizando un rotovapor. A continuación, se realiza una separación basada en solvente. La muestra de huevas de arenque/lípidos de pescado tratada con enzimas se mezcla con un baño de solvente con heptano y metanol. Las especies LPC y PC migran al solvente polar (metanol) y los lípidos no polares se someten a partición en heptano. Específicamente, a la muestra seca se agregó metanol (250 ml) y heptano (250 ml).
[0168] Después de agitar vigorosamente las fases se separaron y la fase metanólica se extrajo con otra porción de heptano (250 ml). Las fracciones de heptano se analizaron mediante TLC y se evaporaron por separado. Al residuo de metanol se agregó gel de sílice 60 (20 g) y la solución se concentró a sequedad. Luego, la LPC se purifica a partir de la composición de lípidos seca mediante cromatografía flash. El gel de sílice se cargó en una columna (diámetro de 5 cm) con gel de sílice (130 g) y la columna se eluyó. Volumen de la fracción 25 ml. Eluyentes: 500 ml de EtOAc, 250 ml de EtOAc: MeOH 80: 20, 250 ml de EtOAc: MeOH 50: 50, 250 ml de MeOH, 500 ml de MeOH: Et3N 95: 5,500 ml de MeOH: Et3N 90: 10. Las fracciones se analizaron mediante TLC y se evaporaron de acuerdo con los hallazgos. Las fracciones que contienen LPC después de la separación cromatográfica produjeron una masa final de 0.84 gramos.
[0169] Se analizó una composición de LPC producida mediante métodos de la presente invención mediante RMN<1>H,<31>P, 2D, TLC, GC y HPLC según corresponda. Los resultados de RMN<1>H y HPLC se muestran en la Figura 5 y la Figura 6, respectivamente, denominados AKB70005-3.
[0170] Se utilizaron RMN<31>P y 2D para determinar los componentes fosfolípidos, los resultados se presentan en la Tabla 5, Tabla 7 y Tabla 8 denominados AKB70005-3.
[0171] Ejemplo 5- ROMEGA™ FLASH
[0172] Este ejemplo describe la producción de una composición de LPC utilizando ROMEGA™ (Arctic Nutrition AS, Ørsta, NO) como fuente inicial de fosfolípidos. La ROMEGA™ se produce preferiblemente mediante un proceso descrito en otra parte. ROMEGA™ es una composición de aceite de huevas de arenque y aceite de pescado en la que 1000 mg/3000 mg contienen 340 mg/1020 mg de fosfolípidos, 100 mg/300 mg de EPA y 320 mg/960 mg de DHA. En resumen, 9 gramos de ROMEGA™ se mezclan con 90 ml de EtOH y luego se agregan 450 ml de agua en un matraz de reacción de fondo redondo de un litro purgado con nitrógeno. A continuación, 0.40 ml de LECITASA™ Ultra se agrega y se deja que la reacción continúe durante 40 minutos con agitación. Luego se agregan 500 ml de EtOH para desactivar la enzima y la mezcla se evapora a sequedad utilizando un rotovapor. A continuación, la LPC se purifica a partir de la composición de lípidos seca mediante cromatografía flash como sigue: El residuo se volvió a disolver en metanol (200 ml) y se agregó gel de sílice 60 (20 g) y la suspensión se concentró a sequedad en el evaporador rotatorio. El gel de sílice se cargó en una columna (diámetro de 5 cm) con gel de sílice (130 g) y la columna se eluyó. Volumen de la fracción 25 ml. Eluyentes: 500 ml de EtOAc, 250 ml de EtOAc: MeOH 80: 20, 250 ml de EtOAc: MeOH 50: 50, 250 ml de MeOH, 500 ml de MeOH: Et3N 90: 10. Las fracciones se analizaron mediante TLC y se evaporaron de acuerdo con los hallazgos. Las fracciones que contienen LPC después de la separación cromatográfica produjeron una masa final de 0,76 gramos.
[0173] Se analizó una composición de LPC producida mediante métodos de la presente invención mediante RMN<1>H,<31>P, 2D, TLC, GC y HPLC según corresponda. Los resultados de RMN<1>H y HPLC se muestran en la Figura 5 y la Figura 6, respectivamente, denominados AKB70005-2.
[0174] Se utilizaron RMN<31>P y 2D para determinar los componentes fosfolípidos, los resultados se presentan en la Tabla 4, Tabla 7 y Tabla 8 denominados AKB70005-2.
[0175] Tabla 1: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL) de la muestra AKB69444-1
[0178]
[0179]
[0181] Tabla 2: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL de éter) de la muestra AKB69444-1
[0184]
[0186] Tabla 3: La composición de LPC contenía 38.74 % p/p de ácidos grasos omega-3 de la composición según se determina por la RMN<1>H de la muestra AKB69444-1.
[0188]
[0190] *) calculado como DHA, contiene la mezcla de cualquier w-3 FA (ácidos grasos omega 3)
[0192] Tabla 4: p/p de ácidos grasos omega-3 de la composición de LPC según lo determinado por RMN<1>H para las muestras AKB70005-1 y AKB70005-2.
[0194]
[0196] Tabla 5: p/p de ácidos grasos omega-3 de la composición de LPC según lo determinado por RMN<1>H para las muestras AKB70005-3 y AKB70005-4.
[0197]
[0199] Tabla 6: cidos grasos omega-3 p/p de la composición de LPC según lo determinado por RMN<1>H para la muestra AKB70005-5.
[0200]
[0202] Tabla 7: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL) para AKB70005-1, AKB70005-2 y AKB70005-3.
[0203]
[0204] Tabla 8: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL) para AKB70005-1, AKB70005-2 y AKB70005-3.
[0205]
[0207] Tabla 9: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL) para AKB70005-4 y AKB70005-5.
[0208]
[0209] Tabla 10: Resultados (resumen), RMN 2D y 31P (PL) para AKB70005-4 y AKB70005-5.
[0210]
[0212] Tabla 11: Leyenda (abreviaturas).
[0214]
[0215]
[0218] Ejemplo 6
[0219] Se produjo una composición de LPC utilizando aceite de krill SUPERBA™ como punto de partida. El contenido de fosfolípidos se analizó mediante RMN<31>P. Los resultados se presentan en la Tabla 12.
[0220] Tabla 12
[0222]
[0224] Ejemplo 7
[0225] Este ejemplo proporciona un resumen de la producción de otras composiciones de lisofosfolípidos de la invención.
[0226] Método de síntesis de especies de LPC a partir de aceite de krill
[0227] Los métodos utilizados para sintetizar LPC a partir de aceite de krill se pueden dividir en cuatro etapas dependiendo de la composición objetivo de la mezcla/muestra final:
[0228] 1. CRUDE: un proceso que permite alcanzar una concentración de 14 – 27,3 % en peso de LPC en la composición final (Tabla 13.1-1 y 14.1-1).
[0229] 2. POLAR-1/POLAR-2: un proceso posterior al CRUDE que permite alcanzar una concentración de 35,2 – 65,7 % en peso de LPC en la composición final (Tabla 13.1-2 y 14.1-2).
[0230] 3. FLASH: proceso posterior al CRUDE que permite alcanzar una concentración de 56,6 – 81,1 % en peso de LPC en la composición final (Tabla 13.1-3).
[0231] 4. FORMULATION: un proceso después de POLAR-2 que permite alcanzar una concentración de 39,3 - 41,1 % en peso de LPC con 5 - 14 % en peso de PEG400 en la composición final (14.1-3).
[0232] FLASH y POLAR son procesos alternativos para lograr un enriquecimiento de LPC de mezclas/muestras de LPC CRUDE-1 y CRUDE-2, mientras que FORMULATION es un proceso que permite una formulación con mezclas/muestras de LPC POLAR-2 con PEG. Los diagramas de flujo de los distintos procesos se proporcionan en las Figuras 11 (Proceso 1) y 12 (Proceso 2).
[0233] 1. Muestras CRUDE:
[0234] Las mezclas/muestras LPC CRUDE-1 y CRUDE-2 siguen los mismos procesos.
[0235] Se disolvió Superba Boost (10 g) en EtOH (2 - 10 g), se diluyó con agua estabilizada con pH (2 – 45 g, pH 6 -12) para lograr un pH de mezcla de 5.2 – 6.2, se agregó Lecitasa ultra 40 µL, se tapó y se agitó a temperatura ambiente durante 120 - 1440 minutos. Para evitar la oxidación, las muestras se pueden enjuagar con N2. La mezcla de reacción se apagó con la adición de EtOH (25 - 50 g) y se concentró bajo presión reducida a 50 °C para proporcionar las mezclas/muestras de LPC CRUDE-1 y CRUDE-2 (Tablas 13 y 16, respectivamente). 2. Muestras POLAR-1/POLAR-2:
[0236] POLAR-2: El proceso POLAR se inició directamente después del enfriamiento en el proceso CRUDE. Por lo tanto, la muestra CRUDE no se concentró a presión reducida a 50 °C para proporcionar las mezclas/lotes de LPC CRUDE-1 y CRUDE-2, sino que se agregaron 25 – 100 g de heptano a la mezcla CRUDE-1 o CRUDE-2 para lograr una separación de fases y, por lo tanto, un enriquecimiento de lípidos polares en la fase rica en EtOH y agua, llamada fase polar. La fase de heptano se decantó dejando sólo la fase polar. La fase polar se concentró bajo presión reducida para proporcionar las mezclas/muestras de LPC POLAR-1 y POLAR-2 (Tablas 14 y 17, respectivamente).
[0237] 3. Muestras FLASH:
[0238] Las muestras CRUDE se redisolvieron en etanol (10 - 100 g) con adición de 25 – 50 g de gel de sílice 60 y se evaporaron hasta sequedad. Se realizó cromatografía flash (125 g de Silicagel 60, diámetro de columna 5 cm). Elución con 500 ml 80: 20 MPa: MPB, 500 ml 50: 50 MPa: Se realizó MPB, 500 ml MP B, 500 ml MP C. Posteriormente la columna se extruyó con EtOH: Et3N (80: 20, 300 ml). Con base en los resultados, se combinaron y evaporaron diferentes fracciones para proporcionar las mezclas/muestras de FLASH LPC (Tabla 15).
[0239] 4. Muestras FORMULATION:
[0240] Se realizó una formulación con PEG400 a partir de las mezclas/muestras POLAR. Para ello, se agregó EtOH y PEG400 a la mezcla POLAR, con lo cual la mezcla (EtOH, PEG400 y mezcla POLAR LPC) se concentró bajo presión reducida a 50 °C para proporcionar las mezclas/muestras de FORMULATION LPC (Tabla 18) con una concentración final de 5 – 14 % en peso de PEG400 y 4 – 7 % en peso de EtOH (Tabla 18).
[0241] Tabla 13 Resultados analíticos de seis lotes de composición de LPC de krill CRUDE-1 del Proceso 1
[0243]
[0244]
[0245] Tabla 14 Resultados analíticos de seis lotes de composición de LPC de krill POLAR-1 del Proceso 1
[0246]
[0247]
[0249] Tabla 15 Resultados analíticos de seis lotes de composición de LPC de krill FLASH del Proceso 1
[0250]
[0251]
[0252]
[0254] Tabla 16 Resultados analíticos de dos lotes de composición de LPC de krill CRUDE-2 del Proceso 2
[0255]
[0256]
[0257]
[0258]
[0261]  Tabla 18 Resultados analíticos de dos lotes de composición de LPC de krill de formulación del Proceso 2
[0263]
[0264]
[0266] En la Tabla 19 se proporcionan datos analíticos adicionales para los distintos lotes.
[0267]
[0270] Ejemplo 9
[0271] Este ejemplo proporciona datos sobre la absorción de una composición de lisofosfolípidos de la presente invención en tejidos biológicos. Brevemente, la composición de lisofosfolípidos LS:ABM-9C0 descrita anteriormente se enriqueció con lysoPC-EPA o lysoPC-DHA marcados con<14>C y comparados con una composición de PC de krill purificada (98 % de PC formulada con PEG) enriquecida con PC-EPA o DHA marcado con<14>C. Las composiciones enriquecidas se administraron por vía oral a ratas y se midió la absorción en varios tejidos mediante Autorradiografía Cuantitativa de Cuerpo Entero. Se recopilaron datos tanto sobre el momento de absorción en varios órganos y tejidos como sobre la cantidad de incorporación al tejido. Los resultados se proporcionan en las Tablas 20-23. Sorprendentemente, estos datos indican que la absorción tanto de la composición de lisofosfolípidos enriquecida con lysoPC-EPA como de la composición de lisofosfolípidos enriquecida con lysoPC-DHA fue más rápida en el tiempo y mayor en la cantidad total de EPA y DHA incorporada en comparación con las muestras que se prepararon con fosfolípidos intactos (es decir, muestras que no contenían ninguna cantidad apreciable de lisofosfolípidos). Este resultado se observó en todos los órganos/tejidos investigados excepto en el ojo.
[0272] Tabla 20
[0274]
[0275]
[0277] Tabla 21
[0278]
[0279]
[0281] Tabla 22
[0282]
[0283]
[0285] Tabla 23
[0286]

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES
1. Una composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) caracterizada por comprender desde 10 % hasta 100 % p/p de LPC de la composición; un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 5 % hasta 50 % p/p de la composición; y una relación de EPA:DHA desde 1:1 hasta 3:1 o una relación de DHA:EPA desde 1:1 hasta 5:1.
2. La composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) de la reivindicación 1, en la que la composición de LPC es una composición de LPC de krill.
3. La composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) de la reivindicación 1, en la que la composición comprende desde 20 % hasta 100 % p/p de LPC de la composición, tal como desde 60 % hasta 100 % p/p de LPC de la composición, 20 % a 90 % p/p de LPC de la composición o 70 % a 90 % p/p de LPC de la composición.
4. La composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) de la reivindicación 1, en la que la composición comprende desde 20 % hasta 100 % p/p de LPC de la composición.
5. La composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) de la reivindicación 1, en la que la composición tiene un contenido de ácidos grasos omega-3 desde 30 % hasta 50 % p/p de la composición.
6. Una composición farmacéutica o nutracéutica que comprende la composición de la reivindicación 1 y un portador fisiológicamente aceptable.
7. Un vehículo de suministro oral que contiene la composición de LPC marina de la reivindicación 1, la composición farmacéutica de la reivindicación 6 o la composición nutracéutica de la reivindicación 6.
8. Un método para elaborar una composición de lisofosfatidilcolina (LPC) con un alto contenido de EPA y DHA a partir de una materia marina u otra materia prima que contiene fosfolípidos que comprende:
- tratar la materia prima con una fosfolipasa que no es nativa de la materia prima para proporcionar una materia prima tratada con fosfolipasa; y
- fraccionar la materia prima tratada con fosfolipasa para proporcionar una composición de lípidos que tiene un mayor contenido de lisofosfatidilcolina que la materia prima de partida.
9. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la materia prima es una preparación de lípidos de krill.
10. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la materia prima tratada con fosfolipasa se fracciona por separación de fase en un sistema de solvente polar/apolar para proporcionar una composición de lípidos que tiene un mayor contenido de lisofosfatidilcolina que la materia prima de partida.
11. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la composición de lípidos que tiene un mayor contenido de lisofosfatidilcolina que la materia prima de partida se concentra además mediante un procedimiento cromatográfico.
12. El método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el método es un método para elaborar la composición de lisofosfatidilcolina marina (LPC) de acuerdo con la reivindicación 1.
13. Una composición de lisofosfatidilcolina (LPC) elaborada por el método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12.
14. La composición de lisofosfatidilcolina (LPC) de acuerdo con la reivindicación 1 o 13; la composición farmacéutica o nutracéutica de acuerdo con la reivindicación 6; o el vehículo de suministro oral de acuerdo con la reivindicación 7 para uso para tratar, evitar o mejorar una afección que se beneficiaría de mayores niveles de EPA y/o niveles aumentados de DHA, en la que se debe administrar la composición de lisofosfatidilcolina (LPC) por administración oral.
15. La composición de lisofosfatidilcolina (LPC) de acuerdo con la reivindicación 1 o 13; la composición farmacéutica o nutracéutica de acuerdo con la reivindicación 6; o el vehículo de suministro oral de acuerdo con la reivindicación 7 para uso de acuerdo con la reivindicación 14, en la que la afección que se beneficiaría de niveles aumentados de EPA y/o niveles aumentados de DHA se selecciona del grupo que consiste en enfermedad, trastorno o deterioro cognitivo, trastornos neurodegenerativos, trastorno cardiovascular, síndrome metabólico, inflamación, una enfermedad inflamatoria y una enfermedad o afecciones asociadas con una anormalidad en los glóbulos rojos de las membranas celulares.
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