ES3049656T3 - Baloxavir for the prevention of transmission of influenza virus - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para prevenir la transmisión de la gripe, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto a un paciente infectado por el virus de la gripe (en adelante, "paciente índice"), donde el compuesto tiene una de las fórmulas (I) y (II), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. El compuesto utilizado en la presente invención reduce la infectividad del virus de la gripe del paciente índice y, por lo tanto, reduce el riesgo de que este desencadene una epidemia o una pandemia de gripe en comparación con un paciente de control. Por lo tanto, un aspecto de la presente invención se refiere a un método para prevenir una epidemia o una pandemia de gripe, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto a pacientes infectados por el virus de la gripe (pacientes índice), donde el compuesto se administra a al menos el 10 % de todas las personas infectadas por la gripe de la población de una ciudad o país, y donde el compuesto tiene una de las fórmulas (I) y (II), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Baloxavir para la prevención de la transmisión del virus de la gripe

[0005] La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un procedimiento de prevención de la transmisión de una infección por el virus de la gripe desde un paciente que está infectado por un virus de la gripe (paciente de referencia) a una persona de contacto, comprendiendo dicho procedimiento administrar dicho compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a dicho paciente de referencia. El compuesto que se va a usar en la presente invención reduce la infecciosidad del virus de la gripe del paciente de referencia y, por lo tanto, reduce el riesgo de que el paciente de referencia desencadene una epidemia de gripe o una pandemia de gripe en comparación con un paciente control. Por lo tanto, el compuesto como se describe en el presente documento se puede usar en un procedimiento para prevenir una epidemia de gripe o una pandemia de gripe, en el que el procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz de dicho compuesto a pacientes que tienen una infección por el virus de la gripe (pacientes de referencia), en el que el compuesto se administra a al menos el 10 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de una ciudad o país, y en el que el compuesto tiene una de las fórmulas (I) y (II), o su sal farmacéuticamente aceptable.

[0007] Una infección por el virus de la gripe es una enfermedad infecciosa respiratoria aguda causada por los virus de la gripe y se transmite principalmente por vía aérea, en particular infección por gotículas. Los virus de la gripe A y B son altamente contagiosos (Vanderlinden,Med Res Rev2014;34(2):301-339). Por lo tanto, las epidemias de gripe surgen a menudo de los virus de la gripe estacional y son una carga importante para la salud mundial. Se estima que hay 3-5 millones de casos de enfermedad grave en todo el mundo y aproximadamente 290-650 mil personas mueren por gripe anualmente (Comunicado de prensa de la OMS, Ginebra, Suiza, 14 de diciembre de 2017; Hoja informativa de la OMS, Ginebra, Suiza, 31 de enero de 2018; Baxter D,Hum Vaccin Immunother.

[0008] 2016;12(10):2712-2717). La gripe también supone una carga importante para los servicios sanitarios cada temporada e impacta en la sociedad a través de la pérdida de productividad de la fuerza laboral (Hoja informativa de la OMS, Ginebra, Suiza, 31 de enero de 2018).

[0010] Las pandemias de gripe son acontecimientos repentinos y, hasta ahora, inevitables. Han causado varias emergencias sanitarias mundiales durante el último siglo. Se estima que la primera y más grave de ellas dio como resultado más de 40-50 millones de muertes en todo el mundo (Francis,Am J Hyg.,1945, 42:1-11). Los expertos anticipan que la próxima pandemia se asociará con un alto balance de muertes y un alto grado de enfermedad que requiera hospitalización, produciendo por tanto una presión considerable sobre los recursos de atención sanitaria. Las pandemias son globales por naturaleza, y es probable que pocos países se salven. En los países en desarrollo, donde los recursos de atención sanitaria ya son limitados y la población general está con frecuencia debilitada por el mal estado de salud y nutricional, es probable que el impacto sea tremendo.

[0012] Las condiciones que rodearon el brote de "gripe aviar" en Hong Kong en 1997 ponen de relieve la necesidad de una planificación anticipada para garantizar una respuesta adecuada a una emergencia sanitaria que, seguramente, será impredecible, compleja, de rápida evolución y acompañada de una considerable alarma pública. En el pasado, una vez que se iniciaba una pandemia, ya era demasiado tarde para llevar a cabo las muchas actividades clave necesarias para minimizar el impacto. Por lo tanto, la planificación e implementación de las actividades preparatorias deben comenzar con mucha antelación. La planificación para pandemias también potenciará la capacidad de respuesta a otras emergencias sanitarias a gran escala, incluidas las amenazas bioterroristas, que requieren acceso masivo a tratamientos profilácticos y terapéuticos y planes nacionales sólidos que incluyan un componente de comunicación de riesgos para ayudar a calmar los temores de los ciudadanos. Es probable que el impacto de una pandemia de gripe sea mucho mayor, en órdenes de magnitud, que los escenarios de bioterrorismo habituales. A diferencia de la mayoría de las otras emergencias sanitarias, las pandemias se producen en varias oleadas y duran de uno a dos años. Por lo tanto, los esfuerzos de respuesta deberán mantenerse durante un periodo prolongado. Además, la preparación para una pandemia de gripe potenciará la respuesta a las epidemias de gripe, que se producen cada año y se cree que matan cada año a entre 500.000 y 1 millón de personas en todo el mundo. Por tanto, la inversión en la preparación para una pandemia tiene una utilidad directa e inmediata como medida para reducir el impacto de un acontecimiento determinado y recurrente.

[0014] Los programas anuales de vacunación son la piedra angular de los intentos de prevenir las infecciones de gripe, pero la eficacia de estos programas es variable debido tanto a la absorción subóptima de las vacunas como a los desajustes entre la vacuna y las cepas de gripe circulantes (Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades"Vaccine effectiveness - how welldoes the flu vaccine work?'3 de octubre de 2017). Los inhibidores de M2, tales como amantadina, y los inhibidores de la neuraminidasa, tales como oseltamivir, son los fármacos típicos que se usan contra la gripe. Sin embargo, un estudio de modelado del uso de inhibidores de M2 en un entorno de brote institucional no encontró que el tratamiento solo afectara significativamente la evolución del brote, lo que indica que el tratamiento con este fármaco antigripal no reduce la probabilidad de transmisión (Stilianakis,Journal of Infectious Diseases,1998, 177:863-873). Actualmente no existe ningún agente que haya demostrado reducir la transmisión de la gripe. En consecuencia, es una importante necesidad médica no cubierta identificar agentes antivíricos que reduzcan la transmisión del virus de la gripe y, con ello, prevenir o atenuar el brote de epidemias de gripe durante la gripe estacional o de pandemias de gripe.

[0016] Watanabeet al.(Antiviral Research, vol. 163, páginas 75-81, 23 de enero de 2019) divulgan resultados de respuesta a la dosis y de tipo/subtipo de virus de un estudio aleatorizado de fase II sobre Baloxavir marboxil en pacientes japoneses con gripe estacional.

[0018] Koschimichiet al.(Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 108, páginas 1896-1904, 15 de diciembre de 2018) divulgan determinados aspectos de análisis poblacionales de la farmacocinética y la respuesta a la exposición de Baloxavir marboxil en adultos y adolescentes, incluyendo pacientes con gripe.

[0020] Otra referencia de Koschimichiet al.(Clinical Drug Investigation, vol. 38, n.° 12, páginas 1189-1196, 1 de diciembre de 2018) divulga determinados aspectos de seguridad, tolerabilidad y farmacocinética del novedoso agente antigripal Baloxavir marboxil en adultos sanos, en base a los hallazgos de un estudio de fase I.

[0022] Un comunicado de prensa de Roche con fecha del 24 de octubre de 2018 se refiere a la aprobación de Xofluza (baloxavir marboxil) para la gripe por parte de la FDA. El documento destacó que es el primer y único medicamento oral de dosis única aprobado para tratar la gripe, al mismo tiempo que propone un primer mecanismo de acción novedoso para tratar la gripe en casi 20 años. El documento analiza además el ensayo clínico CAPSTONE-1.

[0023] El documento US 2005/147697 divulga estudios sobre transmisividadin vivoy pruebas de profilaxis en hurones con respecto a la transmisión vírica en animales que viven en estrecha proximidad con un animal infectado.

[0024] Por tanto, el problema técnico que subyace a la presente invención es la disposición de medios y procedimientos para salvaguardar la salud en la sociedad.

[0026] El problema técnico se resuelve por la disposición de los modos de realización caracterizados en las reivindicaciones adjuntas.

[0028] En consecuencia, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un procedimiento para prevenir la transmisión de una infección por el virus de la gripe desde un paciente que está infectado por un virus de la gripe (paciente de referencia) a una persona de contacto, comprendiendo dicho procedimiento administrar dicho compuesto de fórmula (I) o (II) (que se debe entender como una cantidad eficaz de dicho compuesto) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a dicho paciente de referencia. Como se divulga en el presente documento, el compuesto es un compuesto que tiene una de las siguientes fórmulas I y II:

[0030]

[0033] o su sal farmacéuticamente aceptable.

[0035] Por tanto, la presente invención se refiere a un compuesto para su uso en el tratamiento de una infección por el virus de la gripe de un paciente (paciente de referencia), en el que el compuesto tiene una de las fórmulas (I) y (II), o su sal farmacéuticamente aceptable, y en el que el compuesto previene (por ejemplo, reduce) la transmisión del virus de la gripe. El compuesto de fórmula (I) o (II) o su sal farmacéuticamente aceptable, como se proporciona en el presente documento, se puede formular como una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una de las fórmulas (I) y (II), o su sal farmacéuticamente aceptable, y que comprende opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que la composición farmacéutica previene (por ejemplo, reduce) la transmisión del virus de la gripe. Esta composición farmacéutica es en particular útil para el tratamiento de un paciente infectado por gripe (paciente de referencia) y previene (por ejemplo, reduce) la transmisión del virus de la gripe de dicho paciente.

[0037] Como se muestra en los ejemplos adjuntos, el compuesto que se va a usar en la presente invención tiene el efecto ventajoso de que reduce la transmisión. Por lo tanto, este compuesto reduce la probabilidad de que surja una epidemia o pandemia de gripe, o reduce la expansión de una epidemia o pandemia de gripe existente. El compuesto que se va a usar en la presente invención también es una herramienta valiosa para debilitar los efectos de un ataque bioterrorista que se enfrenta a un virus de la gripe, tal como una epidemia de virus de la gripe pandémica. Por tanto, el compuesto es en particular útil en el tratamiento de un tipo específico de infección por el virus de la gripe, es decir, una infección que está causada por una cepa del virus de la gripe que tiene potencial epidémico o pandémico. El efecto técnico inesperado del compuesto que se va a usar en la presente invención para reducir la transmisión del virus de la gripe da lugar claramente a una nueva situación clínica. De hecho, teniendo en cuenta este efecto técnico ventajoso, el médico especialista tratará con este compuesto en particular a aquellos pacientes que podrían sufrir daños (por ejemplo, económicos o sociales) si no se reduce su infectividad. Dichos pacientes son, por ejemplo, pacientes que tienen contacto personal con individuos de un grupo de riesgo de gripe, tales como individuos que tienen un alto riesgo de contraer una infección por el virus de la gripe o que tienen un riesgo incrementado de sufrir complicaciones graves relacionadas con la gripe (por ejemplo, ancianos, niños pequeños, personas gravemente enfermas o inmunodeficientes). Por ejemplo, el tratamiento con el compuesto que se va a usar en la presente invención es altamente beneficioso para los pacientes de gripe que se quedan en casa durante su infección por el virus de la gripe pero tienen contacto con miembros del hogar durante su infección por el virus de la gripe, por ejemplo, con niños pequeños. Además, debido a su propiedad ventajosa para reducir la transmisión de la gripe, el compuesto de la presente invención se puede usar en el tratamiento de personas que son esenciales para el funcionamiento de la sociedad, lo que permitiría a estas personas esenciales continuar trabajando durante su infección por el virus de la gripe sin infectar a colegas u otras personas de contacto. Por ejemplo, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede usar de forma ventajosa para el tratamiento del personal sanitario, en particular al comienzo de una situación epidémica o pandémica de gripe. El compuesto también se puede usar para el tratamiento de un paciente que tendrá mucho contacto personal durante su infección por el virus de la gripe, por ejemplo, porque tendrá que volar en un avión. De hecho, en el pasado, varios aviones han tenido que ser puestos en cuarentena debido a un brote repentino de una enfermedad, en particular durante vuelos de larga distancia. Por tanto, los medios y procedimientos proporcionados en el presente documento reducen de forma ventajosa las implicaciones sociales y económicas que se asocian con las infecciones por el virus de la gripe.

[0039] Se indica que el efecto de un fármaco dado para reducir la transmisión no se puede concluir a partir de la eficacia del fármaco contra la gripe (por ejemplo, a partir de la eficacia del fármaco para reducir los síntomas de la gripe, la carga vírica, la excreción del virus o el ARN vírico). De hecho, los ejemplos adjuntos muestran que oseltamivir, que es un fármaco antigripal comúnmente conocido y eficaz, no previene en absoluto la transmisión del virus de la gripe. Los ejemplos adjuntos también muestran que el ARN vírico presente en el lavado nasal de sujetos infectados por gripe es idéntico en sujetos tratados con el compuesto de la presente invención (en particular baloxavir marboxil), oseltamivir o placebo (véanse, por ejemplo, las figuras 6, 9 y 12). Sin embargo, debido a un motivo desconocido, la transmisión vírica se redujo significativamente en los sujetos tratados con baloxavir en comparación con los sujetos tratados con oseltamivir o placebo.

[0041] El hecho de que un fármaco antigripal reduzca los síntomas de la gripe no indica en absoluto que este fármaco también sea adecuado para la reducción de la transmisión del virus de la gripe. Los síntomas de la gripe pueden permanecer incluso después de la eliminación del virus, y la carga y la excreción del virus y, por lo tanto, no pueden predecir la eficacia en la reducción de la transmisión a menos que exista un estudio no clínico bien organizado que imite los modelos en seres humanos. La transmisión (por ejemplo, en un hogar) está influenciada por muchos factores. Por lo tanto, el hecho de que un fármaco dado reduzca la excreción del virus o la carga vírica no permite concluir directamente que este fármaco también reduzca la transmisión.

[0043] Además, no existe una correlación absoluta entre la excreción del virus en la nariz/garganta y la transmisión. En seres humanos, por ejemplo, los virus H5N1 alcanzan títulos muy altos en pacientes infectados, pero no se transmiten a través del aire ni entre personas. En el modelo en hurón se mostró un estrecho margen de contagio que no se correlacionaba necesariamente con el momento de la excreción máxima del virus (Roberts,PLoS One7.8 (2012): e43303). Además, los autores de la invención han demostrado que la transmisión no se correlaciona con signos clínicos, por lo que la reducción de los síntomas no hace que la reducción de la transmisión sea obvia. De hecho, existe consenso en que gran parte de la transmisión de la gripe es asintomática o presintomática (Fraser,Proceedings of the National Academy of Sciences101.16 (2004): 6146-6151). Por tanto, el hecho de que un medicamento conocido sea eficaz en el tratamiento de la gripe no indica en absoluto que este medicamento también sea eficaz en la reducción de la transmisión del virus de la gripe. Sin embargo, en el contexto de la presente invención, se ha descubierto sorprendentemente que el baloxavir marboxil reduce significativamente la transmisión del virus de la gripe.

[0045] Como se describe anteriormente, la presente invención se dirige al compuesto, como se describe en el presente documento, para su uso en el tratamiento de un paciente con gripe cuya infecciosidad se va a prevenir o reducir. De hecho, de acuerdo con la presente invención, el término "previene la transmisión" incluye que el compuesto "reduce la transmisión" en comparación con un paciente control al que no se le administra el compuesto que se va a usar en la presente invención. En el presente documento, el paciente con gripe cuya infecciosidad se va a prevenir o reducir se denomina "paciente de referencia" (o "paciente cero"). Este paciente, que se define además a continuación, puede ser cualquier persona que tenga una infección por el virus de la gripe y cuya infecciosidad se va a prevenir o reducir por cualquier motivo.

[0047] El compuesto que se va a usar en la presente invención reduce la infecciosidad del virus de la gripe del paciente de referencia. En el presente documento, el término "infecciosidad" significa la capacidad de un patógeno tal como un virus de la gripe para establecer una infección en otro huésped. En el presente documento, los términos "infecciosidad" y "transmisividad" tienen el mismo significado y definen la frecuencia con la que se propaga el patógeno entre los huéspedes, incluyendo los huéspedes que tienen una relación padre-hijo y los huéspedes que no tienen una relación padre-hijo. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el compuesto reduce la capacidad del virus de la gripe del paciente de referencia tratado para establecer una infección en otro huésped. O, en otras palabras, el compuesto que se va a usar en la presente invención reduce la frecuencia con la que el virus de la gripe del paciente de referencia infecta a otros huéspedes.

[0049] Los ejemplos adjuntos muestran, sorprendentemente, que la transmisión de un virus de la gripe se puede reducir directamente después de la administración del compuesto que se va a usar en la presente invención. Además, los ejemplos adjuntos también documentan que la infectividad del paciente de referencia tratado disminuye aún más dentro de las 24 horas posteriores a la administración del compuesto. Por lo tanto, es preferente en el contexto de la presente invención que el paciente de referencia no tenga contacto personal con otras personas (es decir, personas de contacto) hasta 1 hora o hasta 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 o 32 horas después de la administración del compuesto que se va a usar en la presente invención. Los lapsos de tiempo mencionados aquí se refieren a lapsos de tiempo mínimos. Por ejemplo, el lapso de tiempo "2 horas después de la administración" también incluye periodos más largos, tales como 2,5 horas después de la administración, y así sucesivamente. De hecho, la invención engloba que el paciente de referencia no tenga contacto personal con las personas de contacto hasta uno o dos días (o un día y una o dos noches) después de la administración del compuesto que se va a usar en la presente invención. Por ejemplo, el paciente de referencia puede permanecer en aislamiento en el hospital durante un día (o durante un día y una o dos noches), de modo que se previene el contacto personal con otras personas durante este periodo de tiempo.

[0051] En línea con esto, en un aspecto de la presente invención, la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia se reduce en de una hora a 24 horas desde la 1.a administración del compuesto. La tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia también se puede reducir en 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 o 32 horas desde la 1.a administración del compuesto. En consecuencia, el lapso de tiempo se puede alargar. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia se reduce en de una hora a 32 horas (por ejemplo, en 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 o 32 horas) desde la 1.a administración del compuesto.

[0053] Por tanto, el compuesto que se va a usar en la presente invención reduce la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia tratado a una persona de contacto del paciente de referencia tratado. La tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia tratado se puede reducir a un 70 % o menos, preferentemente a un 50 % o menos, más preferentemente a un 30 % o menos, en comparación con la tasa de transmisión del virus de la gripe desde un paciente control.

[0055] En el presente documento, la "tasa de transmisión" corresponde al porcentaje de sujetos infectados entre las personas de contacto del paciente infectado por gripe (es decir, del paciente de referencia o del paciente control, respectivamente) dentro de un periodo de tiempo especificado. Por tanto, la "tasa de transmisión" es el número de casos nuevos (de una infección con una cepa del virus de la gripe que proviene del paciente de referencia o de un paciente control, respectivamente) dentro de un periodo de tiempo especificado dividido por la población en riesgo. La "población en riesgo" es, preferentemente, el número de personas que tuvieron contacto personal con el paciente de referencia o con el paciente control, respectivamente, durante su infección por el virus de la gripe. Normalmente, un virus de la gripe se puede transmitir un día antes de que aparezcan los síntomas de la gripe y hasta la duración de los síntomas de la gripe y la recuperación de la enfermedad. Por lo tanto, la "población en riesgo" puede ser el número de personas que tuvieron contacto personal con el paciente de referencia o con el paciente control, respectivamente, un día antes de que aparecieran los síntomas de la gripe y hasta la duración de los síntomas de la gripe. Preferentemente, la "población en riesgo" no incluye a las personas que recibieron una vacuna antigripal. Como se describe en el presente documento anteriormente y a continuación, la "tasa de transmisión" se reduce después de la administración del compuesto que se va a usar en la invención. Por lo tanto, el efecto del compuesto sobre la tasa de transmisión se mide después de la administración del compuesto. En particular, para evaluar el efecto del compuesto sobre la tasa de transmisión, la "población en riesgo" se puede definir como el número de personas (por ejemplo, personas que no están vacunadas contra la gripe) que tuvieron contacto personal con el paciente de referencia durante el periodo de tiempo que comienza con la administración del compuesto y termina con el final de los síntomas de la gripe. En línea con esto, la "población en riesgo" del paciente control se puede definir como el número de personas (por ejemplo, personas que no están vacunadas contra la gripe) que tuvieron contacto personal con el paciente control durante el periodo de tiempo que comienza con la administración de un fármaco antigripal distinto del compuesto, o, si no se administra ningún fármaco antigripal, que comienza en el punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe, y termina con el final de los síntomas de la gripe y la recuperación de la enfermedad.

[0056] Como se describe anteriormente, de acuerdo con la presente invención, el compuesto reduce la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia (es decir, la infectividad del paciente de referencia) al 70 % o menos, preferentemente al 50 % o menos, más preferentemente al 30 % o menos, en comparación con la tasa de transmisión del virus de la gripe de un paciente control al que no se le trata con el compuesto (es decir, en comparación con la infectividad de un paciente control al que no se le trata con el compuesto). En la gripe estacional, incluyendo las epidemias de gripe, el virus de la gripe se transmite de un paciente a aproximadamente 1,35 sujetos en 5 días. Por tanto, si el paciente de referencia se infecta con una cepa de gripe de una gripe estacional (incluyendo una cepa de gripe epidémica pero no una cepa de gripe pandémica), entonces el compuesto reduce la cantidad de sujetos a los que se transmite el virus en promedio a aproximadamente 0,945 sujetos (es decir, 70 % de transmisión) o menos en 5 días, preferentemente en promedio a aproximadamente 0,675 sujetos (es decir, 50 % de transmisión) o menos en 5 días, más preferentemente en promedio a aproximadamente 0,405 sujetos (es decir, 30 % de transmisión) o menos en 5 días. En la gripe pandémica, el virus de la gripe se transmite de un paciente a aproximadamente 2,9 sujetos en 6 días. Por tanto, si el paciente de referencia se infecta con una cepa de gripe de una gripe pandémica, entonces el compuesto reduce la cantidad de sujetos a los que se transmite el virus en promedio a aproximadamente 2,03 sujetos (es decir, 70 % de transmisión) o menos en 6 días, preferentemente en promedio a aproximadamente 1,45 sujetos (es decir, 50 % de transmisión) o menos en 6 días, más preferentemente en promedio a aproximadamente 0,87 sujetos (es decir, 30 % de transmisión) o menos en 6 días.

[0058] A la mayoría de los individuos con una infección de gripe se les aconseja que se queden en casa hasta que hayan estado afebriles durante al menos 24 horas, lo que pone a otros miembros del hogar en riesgo de infección (Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades. The flu: what to do if you get sick. 9 de marzo de 2018). Una vez que un miembro del hogar se infecta por gripe, el riesgo de transmisión a un contacto del hogar puede ser de hasta el 38 %, con un retraso entre la aparición en el paciente de referencia y la infección del contacto del hogar de alrededor de 3 días (Tsang, Trends Microbiol 2016;24(2): 123-133). Como se describe anteriormente, el compuesto que se va a usar en la presente invención redujo la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia tratado a un 70 % o menos, preferentemente a un 50 % o menos, más preferentemente a un 30 % o menos. Por tanto, el tratamiento del paciente de referencia con dicho compuesto reduce el riesgo de transmisión del virus de la gripe a un contacto del hogar a aproximadamente un 27 % o menos (es decir, un 70 %), preferentemente a aproximadamente un 19 % o menos (es decir, un 50 %), más preferentemente a aproximadamente un 11,4 % o menos (es decir, un 30 %). Esta es una ventaja considerable en la prevención de epidemias o pandemias de gripe.

[0060] Se muestra en los ejemplos adjuntos que el compuesto que se va a usar en la presente invención disminuye la carga de virus excretado en las vías respiratorias altas. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el compuesto disminuye la carga de virus excretado en las vías respiratorias altas del paciente de referencia en comparación con la carga de virus excretado en las vías respiratorias altas de un paciente control, en el que el paciente control tiene una infección por el virus de la gripe y no se le ha administrado el compuesto.

[0062] El paciente control puede ser cualquier paciente que tenga una infección por el virus de la gripe y al que no se le trate con el compuesto que se va a usar en la presente invención. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el paciente control tiene una infección por el virus de la gripe y no se le ha administrado el compuesto. Sin embargo, al paciente control se le puede administrar un fármaco antigripal a excepción del compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Por ejemplo, al paciente control se le puede administrar oseltamivir. Por tanto, en un aspecto de la presente invención, al paciente control se le ha administrado cualquier fármaco antigripal a excepción del compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Por ejemplo, al paciente control se le puede haber administrado oseltamivir.

[0064] En otro aspecto de la presente invención, al paciente control no se le ha administrado un fármaco antigripal, por ejemplo, no se le ha administrado oseltamivir. Se puede administrar oseltamivir en una dosis de 75 mg dos veces al día durante 5 días. La dosis en seres humanos de oseltamivir es comúnmente conocida en la técnica. Por ejemplo, para adultos y adolescentes (13 años o más), normalmente se administran 75 mg dos veces al día durante 5 días. La dosis para pacientes pediátricos que tienen de 1 a 12 años de edad se basa en el peso y esta dosis se administra normalmente dos veces al día durante 5 días. La dosis para pacientes pediátricos que tienen de 2 semanas a menos de 1 año de edad es normalmente de 3 mg/kg dos veces al día durante 5 días. El paciente control tiene una cepa de virus de la gripe que es idéntica a la cepa de gripe del paciente de referencia con el que se compara el paciente control. Por ejemplo, si el paciente de referencia tiene una cepa del virus de la gripe pandémica, entonces el paciente control con el que se compara el paciente de referencia tiene la misma cepa del virus de la gripe pandémica.

[0066] El experto en la técnica está fácilmente en posición de reconocer si se ha producido la transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia (tratado) o desde el paciente control. Por ejemplo, se puede considerar que la transmisión se ha producido cuando al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado o del paciente control contrae una infección por el virus de la gripe después de tener contacto personal con el paciente de referencia tratado o con el paciente control, respectivamente. La persona de contacto del paciente de referencia tratado es, preferentemente, una persona que:

[0068] (i) no tenía una infección por el virus de la gripe en el punto temporal en que se administró el compuesto al paciente de referencia por primera vez; y

[0070] (ii) tuvo contacto personal con el paciente de referencia tratado durante la infección por el virus de la gripe del paciente de referencia.

[0072] Con respecto al punto (ii), directamente anterior, es preferente que la persona de contacto haya tenido contacto personal con el paciente de referencia tratado dentro de los 10 días posteriores a la administración del compuesto al paciente de referencia. Por tanto, con respecto al punto (ii), directamente anterior, es preferente que la persona de contacto haya tenido contacto personal con el paciente de referencia tratado dentro de un periodo de tiempo que comienza con la administración del compuesto; y termina de 5 a 10 días (por ejemplo, 9 días o 5 días) después de la administración del compuesto.

[0074] La persona de contacto del paciente control es, preferentemente, una persona que:

[0076] (i) no tenía una infección por el virus de la gripe en el punto temporal en el que se administró el fármaco antigripal al paciente control por primera vez; o si no se administró ningún fármaco antigripal al paciente control en el punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe; y

[0078] (ii) tuvo contacto personal con el paciente control durante la infección por el virus de la gripe del paciente control.

[0079] Con respecto al punto (ii), directamente anterior, es preferente que la persona de contacto haya tenido contacto personal con el paciente control dentro de los 10 días posteriores a la administración del fármaco antigripal al paciente control; o si no se administró ningún fármaco antigripal dentro del periodo de tiempo correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe. Por tanto, con respecto al punto (ii), directamente anterior, es preferente que la persona de contacto haya tenido contacto personal con el paciente control dentro de un periodo de tiempo que comienza con la administración del fármaco antigripal al paciente control; o si no se administró ningún fármaco antigripal comenzando en el punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe; y terminando de 5 a 10 días (por ejemplo, 9 días o 5 días) después de la administración del fármaco antigripal; o si no se administra ningún fármaco antigripal terminando en el punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe.

[0081] Por supuesto, la persona de contacto no necesita tener contacto personal con el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente, todos los días dentro de los 10 días mencionados anteriormente. Por el contrario, la persona de contacto puede, por ejemplo, tener contacto personal con el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente, un solo día dentro de estos 10 días. Por ejemplo, la persona de contacto puede tener contacto personal con el paciente de referencia o con el paciente control (por ejemplo, debido a que conviven en el mismo hogar) en aproximadamente 7 de 9 días.

[0083] En el presente documento, cuando se cuentan los días después de la administración del compuesto al paciente de referencia o del otro fármaco antigripal al paciente control, el día de la administración se considera "día 0". Por tanto, el día 1 (es decir, un día después de la administración del compuesto o del otro fármaco antigripal, respectivamente) es el día siguiente al día de la administración, y así sucesivamente. En consecuencia, 10 días después de la administración del compuesto o del otro fármaco antigripal se refiere al día que transcurre aproximadamente 240 horas desde la administración del compuesto o del otro fármaco antigripal, respectivamente.

[0084] Como se menciona anteriormente, de acuerdo con la presente invención, una persona de contacto del paciente de referencia tratado o del paciente control es una persona que:

[0086] (i) con respecto al paciente de referencia: no tenía una infección por el virus de la gripe en el punto temporal en que se administró el compuesto al paciente de referencia por primera vez; o

[0088] con respecto al paciente control: no tenía una infección por el virus de la gripe en el punto temporal en el que se administró el fármaco antigripal al paciente control por primera vez; o si no se administró ningún fármaco antigripal al paciente control en el punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe; y

[0089] (ii) con respecto al paciente de referencia: tuvo contacto personal con el paciente de referencia tratado durante la infección por el virus de la gripe del paciente de referencia; o

[0091] con respecto al paciente control: tuvo contacto personal con el paciente control durante la infección por el virus de la gripe del paciente control.

[0093] De acuerdo con la presente invención, no tener una infección por el virus de la gripe significa preferentemente tener una PCR negativa para un virus de la gripe (por ejemplo, en el hisopo nasofaríngeo). Por tanto, es preferente que, en el punto temporal como se define en (i) anteriormente, la persona de contacto tenga una PCR negativa para gripe.

[0095] La detección y cuantificación por PCR del virus de la gripe se conoce comúnmente en la técnica. Por ejemplo, se puede emplear la amplificación por PCR con retrotranscripción ultrarrápida (RT-PCR) del gen de la matriz de la gripe como el procedimiento para determinar la presencia o ausencia, o la cantidad de ARN de la gripe. La extracción y purificación de a Rn del virus de la gripe es una técnica de rutina y se puede realizar, por ejemplo, usando una estación de aislamiento MagNA Pure LC 1.0 o 2.0 (Roche Applied Science, producto n.° 05197686001). Para realizar la prueba, se extraen ácidos nucleicos de alícuotas de muestras de hisopo usando la estación de aislamiento MagNA Pure LC y el kit de extracción de ácidos nucleicos MagNA Pure LC de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Roche Applied Science). Las reacciones de retrotranscripción y amplificación se pueden configurar usando Taqman Fast Virus Mastermix. Durante el análisis clínico, se puede usar una curva estándar de gripe A y B de 4 puntos (baja, media y alta) con un número conocido de partículas de virus/ml como control y puede acompañar cada serie. Para monitorizar todo el procedimiento desde el aislamiento hasta la detección ultrarrápida, se puede añadir un control interno universal, el virus del moquillo focino (VMF), a cada aislado. Además, para monitorizar la contaminación en cada aislamiento, se puede incluir un control sin amplificación (CSA) para cada mezcla de PCR que se prepare. Los controles positivos deben dar una señal positiva que se encuentre entre los límites de acción especificados. Si el valor del control positivo se encuentra fuera del límite de acción, es necesario volver a someter a prueba todas las muestras sometidas a prueba con la misma mezcla de PCR. Si el control negativo da una señal positiva para gripe, es necesario volver a someter a prueba todas las muestras analizadas con la misma mezcla de PCR. La salida del ensayo de RT-PCR de gripe es lo que se conoce como un umbral de ciclo, o valor de Ct, y se registra un valor de Ct para cada prueba. Los valores de Ct se convierten en valores cuantitativos de partículas de virus/ml con las curvas estándar ejecutadas simultáneamente con las muestras.

[0097] Para sujetos positivos para gripe A, también se puede realizar un ensayo de PCR del subtipo de gripe A. Más específicamente, para sujetos positivos para gripe A, la subtipificación se puede realizar directamente a partir de una muestra de hisopo de un sujeto usando un ensayo de RT-PCR ultrarrápida. El ARN se puede aislar de aislados clínicos como se describe anteriormente usando el kit MagNA Pure Total Nucleic Acid de Roche, y se puede amplificar usando una RT-PCR de una etapa con cebadores específicos del subtipo de gripe A. Otros procedimientos para la detección de subtipos de virus de la gripe particulares que incluyen secuencias de cebadores adecuadas son comúnmente conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en la "Información de la OMS sobre la detección molecular de virus de la gripe" de julio de 2017.

[0099] El experto puede determinar fácilmente el punto temporal dentro de una infección por el virus de la gripe que corresponde a un estado de enfermedad de gripe dado (es decir, que corresponde a un estado dado dentro del proceso de enfermedad de la gripe). Más específicamente, es comúnmente conocido en la técnica que el proceso de enfermedad de la gripe se puede monitorizar. Por ejemplo, el proceso de enfermedad de la gripe se puede monitorizar mediante monitorización de los síntomas clínicos y/o las medidas virológicas. Se pueden monitorizar los síntomas clínicos:

[0101] (i) determinando la puntuación para los síntomas de tos y nasales (puntos 14 y 15 de la escala canadiense de enfermedades respiratorias agudas y gripe (CARIFS);

[0103] (ii) preguntando al paciente o a su cuidador si (y cuándo) el paciente pudo regresar a la guardería/escuela/trabajo, o reanudar su actividad diaria normal de la misma manera que antes de contraer la infección por el virus de la gripe; y/o

[0105] (iii) si el paciente ya había regresado al estado afebril (y, preferentemente, permaneció así durante al menos 21,5 horas), determinando el punto temporal en el que el paciente regresa por primera vez al estado afebril (es decir, temperatura timpánica <37,2 °C).

[0107] La CARIFS es comúnmente conocida en la técnica y se muestra en la figura 18.

[0109] Las medidas virológicas se pueden monitorizar, por ejemplo, midiendo el título de virus o la excreción del virus.

[0110] De acuerdo con la presente invención, el contacto personal entre la persona de contacto y el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente, es un contacto personal que permite la transmisión del virus de la gripe. Por ejemplo, el contacto personal puede ser un contacto que permita la transmisión aérea y/o la transmisión por contacto directo, preferentemente solo la transmisión aérea. Transmisión por contacto se refiere a la transferencia directa de virus desde una persona infectada a un individuo susceptible, por ejemplo, por medio de manos contaminadas (transmisión por contacto directo) o transferencia indirecta de virus por medio de objetos intermedios (fómites, transmisión por contacto indirecto). La transmisión del virus a través del aire (es decir, transmisión aérea) se puede producir por medio de gotículas o aerosoles. El tamaño de corte comúnmente aceptado entre las gotículas grandes y los aerosoles pequeños es de 5 |jm (Kutter,Current opinion in virology,28 (2018): 142-151). Las gotículas generadas al toser, estornudar o hablar no permanecen suspendidas en el aire. Normalmente, permanecen <17 min en el aire y recorren menos de 1 m antes de asentarse sobre la mucosa de contactos cercanos (es decir, personas que tienen contacto personal con el paciente infectado) o sobre superficies ambientales. Los aerosoles tienen una velocidad de sedimentación lenta, por lo que permanecen suspendidos en el aire durante más tiempo y pueden recorrer largas distancias de más de 1 m (Kutter,Current opinion in virology,28 (2018): 142-151). En estudios para analizar la transmisividad del virus de la gripe, se detectó ARN del virus de la gripe en el aire hasta 3,7 m de distancia de pacientes, con la mayoría del ARN vírico contenido en aerosoles (<5 |jm) (Kutter,Current opinion in virology,28 (2018): 142-151).

[0112] Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el contacto personal que permite la transmisión por contacto directo es el contacto corporal entre el paciente infectado por gripe (es decir, el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente) y la persona de contacto, por ejemplo, un apretón de manos, etc. Se ha demostrado que los virus de gripe A sobreviven hasta 3 días cuando se inoculan en billetes (Thomas,Appl. Environ. Microbiol.74.10 (2008): 3002-3007). El mismo inóculo en presencia de moco respiratorio mostró un incremento notable en el tiempo de supervivencia (hasta 17 días, Thomas,Appl. Environ. Microbiol.74.10 (2008): 3002-3007). Cuando se usaron secreciones nasofaríngeas de niños infectados de forma natural, el virus de la gripe sobrevivió durante al menos 48 h en un tercio de los casos (Thomas,Appl. Environ. Microbiol.74.10 (2008): 3002-3007). En consecuencia, en el contexto de la presente invención, el contacto personal entre el paciente infectado por gripe (es decir, el paciente de referencia o el paciente control) puede permitir la transmisión por contacto indirecto. Dicho contacto personal que permite la transmisión por contacto indirecto puede ser un contacto corporal de la persona de contacto con un fómite después de que un paciente infectado por gripe (es decir, el paciente de referencia o el paciente control) haya tenido contacto personal con el fómite. Por ejemplo, el paciente infectado por gripe puede haber tocado el fómite con sus manos o puede haber respirado sobre el fómite. El lapso de tiempo entre el contacto personal del paciente infectado por gripe y el fómite y el contacto personal de la persona de contacto y el fómite puede ser de 3 días o menos, preferentemente de 48 horas o menos.

[0114] Los virus respiratorios como el virus de la gripe se replican en las vías respiratorias desde donde posteriormente se excretan y se transmiten por medio de las secreciones respiratorias por transmisión aérea. En la presente invención, el contacto personal que permite la transmisión aérea es una distancia entre el paciente infectado por gripe (es decir, el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente) y la persona de contacto que es de hasta 3,7 metros. La gripe se transmite principalmente por medio de transmisión por gotículas respiratorias. Por lo tanto, es preferente que, durante el contacto personal entre la persona de contacto y el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente, estas personas (es decir, la persona de contacto y el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente) estén a una distancia de hasta 1 metro, y más preferentemente de menos de 1 metro.

[0116] Con un equipo potenciado, la transmisión del virus de la gripe se puede detectar inmediatamente después de la transmisión. Normalmente, la transmisión se detecta un día después de que se haya producido la transmisión. La transmisión desde el paciente de referencia tratado se ha producido cuando se puede detectar un virus de la gripe en al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado. Si se produce la transmisión, el virus de la gripe se puede detectar en la persona de contacto incluso dentro de un periodo de tiempo mayor, por ejemplo, dentro de los 15 días posteriores a la administración del compuesto al paciente de referencia. Se espera en particular una evolución aún más prolongada de la enfermedad, por ejemplo, hasta tres semanas o más, si el virus muta.

[0118] En el contexto de la presente invención, la tasa de transmisión se puede medir sometiendo a pruebas a al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado o del paciente control, respectivamente, para detectar una infección por el virus de la gripe. La tasa de transmisión se puede medir sometiendo a pruebas a al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado o del paciente control, respectivamente, para detectar una infección por el virus de la gripe dentro de los 10 días posteriores a la administración del compuesto al paciente de referencia tratado, o dentro de los 10 días posteriores a la administración del otro fármaco antigripal al paciente control, o, si no se administró ningún fármaco antigripal al paciente control dentro de los 10 días posteriores al punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe.

[0120] La gripe es una enfermedad grave y la recuperación puede tardar de varios días a semanas. Por lo tanto, de acuerdo con la presente invención, la tasa de transmisión también se puede medir sometiendo a pruebas a al menos una (por ejemplo, al menos 2) persona(s) de contacto del paciente de referencia tratado o del paciente control, respectivamente, para detectar una infección por el virus de la gripe dentro de los 20 días posteriores a la administración del compuesto al paciente de referencia tratado, o dentro de los 20 días posteriores a la administración del otro fármaco antigripal al paciente control, o, si no se administró ningún fármaco antigripal al paciente control dentro de los 20 días posteriores al punto temporal correspondiente a la vista del proceso de enfermedad de la gripe. Por ejemplo, la tasa de transmisión se puede medir sometiendo a pruebas a varias personas de contacto (por ejemplo, al menos 2) del paciente de referencia y del paciente control, respectivamente, para detectar una infección por el virus de la gripe. Por ejemplo, se puede someter a pruebas a las personas de contacto para detectar una infección por el virus de la gripe en diversos puntos temporales, por ejemplo, aproximadamente 3 días, 5 días, 10 días, 15 días y/o 20 días después de la administración del compuesto al paciente de referencia, o después de la administración del otro fármaco antigripal al paciente control, o si no se administró ningún fármaco antigripal al paciente control en el/los punto(s) temporal(es) correspondiente(s) a la vista del proceso de enfermedad de la gripe.

[0122] En un aspecto de la presente invención, una infección por el virus de la gripe está presente si se puede detectar el virus de la gripe (por ejemplo, en una persona de contacto del paciente de referencia o del paciente control, respectivamente). El virus de la gripe se puede detectar por medio de PCR. Además, o de forma alternativa, el virus de la gripe se puede detectar usando un kit de prueba de gripe. Por ejemplo, se pueden usar pruebas de diagnóstico rápido de la gripe (PDRG) para detectar el virus de la gripe. Las PDRG son inmunoanálisis que pueden identificar la presencia de antígenos de nucleoproteínas víricas de la gripe A o B en muestras respiratorias, y mostrar el resultado de una manera cualitativa (positivo frente a negativo) (Ali T,Clin Infect Dis.1 de marzo de 2004;38(5):760-2). Los ensayos PDRG son ensayos basados en ELISA que son menos exactos que la PCR, pero tienen la ventaja de que son más baratos y más rápidos, lo que es un beneficio considerable, en particular en una situación de epidemia o pandemia.

[0124] El virus de la gripe se puede detectar además usando el sistema de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de detección rápida cobas<®>Liat<®>de Roche (Chen,Eur J Microbiol Immunol (Bp).2015;5(4):236-245). El sistema cobas<®>Liat<®>permite un diagnóstico rápido y exacto de muestras de hisopos nasofaríngeos de gripe A o B. El sistema comprende el analizador cobas<®>Liat<®>y el ensayo cobas<®>Influenza A/B. La detección del virus de la gripe también se puede llevar a cabo usando una prueba molecular basada en PCR (ensayo Prodesse ProFlu+, Chen,Eur J Microbiol Immunol (Bp).2015;5(4):236-245) o el sistema de PCR rápida Alere i Influenza A & B (Merckx,Ann Intern Med.2017; 167(6):394-409).

[0126] La detección del virus de la gripe se puede realizar además analizando si hay partículas infecciosas de virus presentes, por ejemplo, midiendo el título de virus y/o la excreción del virus. El título de virus (por ejemplo, en la mucosa nasal) se puede determinar mediante el ensayo de calvas (por ejemplo, como se realiza en los ejemplos adjuntos y como se describe a continuación).

[0128] La determinación del título infeccioso de virus se conoce comúnmente en la técnica. Por ejemplo, el título infeccioso de virus se puede medir mediante un ensayo de cultivo cuantitativo, es decir, el "ensayo de calvas(plaqueassay)". En particular, el título infeccioso de virus se puede determinar con un ensayo de cultivo cuantitativo que expresa la cantidad de virus presente como una mediana de la dosis infecciosa en cultivo tisular (DICT<50>) por mililitro. Para determinar el título infeccioso de una muestra dada, las muestras clínicas se pueden diluir en serie e incubar en células MDCK. La lectura principal para este ensayo aprovecha la capacidad de los virus de la gripe para unirse a los glucanos sialilados en los glóbulos rojos, causando aglutinación. A continuación, se puede usar la medición de la aglutinación mediada por la adición de glóbulos rojos a una serie de dilución del virus de la gripe para cuantificar el título de virus. Para los aislados de virus circulantes que han perdido la capacidad de aglutinar glóbulos rojos (por ejemplo, los aislados actuales de la temporada respectiva), se puede aplicar una lectura basada en ELISA de la nucleoproteína (NP) de la gripe. El procedimiento de ensayo DICT<50>se puede realizar como un protocolo unificado que permite que el NP-ELIS<a>se realice usando la misma placa de ensayo si el virus es una cepa no aglutinante. Para los estudios clínicos, el análisis de ensayo que usa la lectura de aglutinación de glóbulos rojos puede ir seguido de la lectura de NP-ELISA para los subtipos de virus de la gripe (por ejemplo, H3) (y virus no tipificables). Los controles negativos deben ser negativos y los controles positivos deben ser positivos para que una placa sea válida. Se puede usar el procedimiento de Karber (Karber, G., 1931, Beitrag zur kollektiven Behandlung Pharmakologischer Reihenversuche, Archiv für Experimentelle Pathologie und Pharmakologie, 162, 480-487) para calcular el título de virus (DICT<50>).

[0130] Por ejemplo, para determinar el título infeccioso de virus, el virus se puede cultivar primero a partir de una muestra de lavado nasal y, posteriormente, el título infeccioso de virus se puede medir como se describe en lo que sigue:

[0131] El cultivo de virus a partir de una muestra de lavado nasal se puede realizar como sigue. Las células MDCK se pueden mantener en medio de cultivo celular hasta su uso. Un día antes del ensayo, las células MDCK se pueden sembrar en placas de fondo plano de 96 pocillos a 3,5 x 10<4>células por pocillo en medio de cultivo celular. Se puede requerir tripsina-EDTA para separar las células del matraz de cultivo. La incubación durante 24 h a 37 °C, CO<2>al 5 % da como resultado monocapas celulares a una confluencia del 80-100 %. Por triplicado, se pueden añadir 20 |jl de muestra de lavado nasal descongelada a 180 |jl de medio de infección para realizar una dilución en serie con factor 10. A continuación, las monocapas de MDCK se pueden lavar dos veces con PBS y añadir 100 j l de muestras diluidas a las células durante 2 h de incubación a 37 °C, CO<2>al 5 %. La fila final de la placa se puede dejar sin muestra para que actúe como control negativo. Después de esto, se puede retirar el inóculo de virus y reemplazar por 200 j l de medio de infección recién preparado. A continuación, se pueden incubar las placas a 37 °C, CO<2>al 5 % durante 96 horas.

[0133] La medición de los títulos de virus en el lavado nasal se puede realizar como sigue: Después de una incubación de 96 horas, los títulos de virus de las muestras de lavado nasal cultivadas en placas MDCK se pueden leer mediante un ensayo de hemaglutinación. Se pueden transferir 25 j l de sobrenadante de MDCK desde cada pocillo a los pocillos correspondientes de una nueva placa de fondo en U de 96 pocillos y mezclar con 25 j l de glóbulos rojos de pavo al 1 % (v/v) mediante golpeteo suave. Se pueden incubar las placas a temperatura ambiente durante 30 min y registrar el patrón de aglutinación. Los títulos de virus se pueden calcular usando el procedimiento descrito por Reed y Muench (Reed, L.J. y H. Muench,American Journal of Epidemiology,1938. 27(3): p. 493-497), y se puede expresar como log<10>DICT50/ml.

[0134] Además, la presencia de al menos un síntoma de gripe indica que está presente una infección por el virus de la gripe. Por lo tanto, de acuerdo con la presente invención, una infección por el virus de la gripe está presente si: (i) se puede detectar el virus de la gripe; y/o

[0135] (ii) está presente al menos un síntoma de una infección por el virus de la gripe.

[0136] En un aspecto de la presente invención, está presente una infección por el virus de la gripe si se aplican ambos rasgos característicos, es decir, se puede detectar el virus de la gripe y está presente al menos un síntoma de una infección por el virus de la gripe. Por tanto, la tasa de transmisión (es decir, infectividad) del paciente de referencia tratado o del paciente control se puede medir sometiendo a prueba si se puede detectar el virus de la gripe y, opcionalmente, sometiendo a prueba además si los síntomas de la gripe están presentes en personas que tuvieron contacto personal con el paciente de referencia tratado o con el paciente control, respectivamente. Por ejemplo, se puede someter a prueba si está presente al menos un síntoma de una infección por el virus de la gripe. Dicho al menos un síntoma de una infección por el virus de la gripe puede ser una aparición repentina de fiebre, escalofríos, cefalea, dolor muscular y/o articular, tos, fatiga, dolor de garganta y/o congestión nasal. También se puede someter a prueba si la temperatura corporal alcanza de 38 °C a 40 °C dentro de las 24 horas posteriores a la aparición de los síntomas de gripe (Wright, Fields Virology. 5.a ed. (2). Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins; 2007. p.

[0137] 1691-1740; Monto, Arch Intern Med. 2000;160:3243-3247). En base en estos síntomas, la infección por el virus de la gripe tiende a ser una enfermedad grave y se puede discriminar del resfriado común.

[0138] En el presente documento, la aparición de los síntomas de gripe se puede definir como:

[0139] (i) el punto temporal del primer incremento de la temperatura corporal (un incremento de al menos 1 °C desde la temperatura corporal normal); o

[0140] (ii) el punto temporal en que el paciente experimenta al menos un síntoma general o respiratorio.

[0141] Preferentemente, el punto temporal de la aparición de los síntomas de gripe se confirma verificando que, en un plazo de 24 horas a partir del punto temporal de (i) y (ii) anteriores, la temperatura corporal alcanza de 38 °C a 40 °C.

[0142] Además, o de forma alternativa, el diagnóstico de gripe se puede confirmar por todo lo siguiente:

[0143] (i) Fiebre >38 °C (axilar) en los exámenes previos a la dosis o >4 horas después de la dosificación de antipiréticos si se tomaron.

[0144] (ii) Al menos uno de los siguientes síntomas sistémicos generales asociados con la gripe con una gravedad de moderada o mayor:

[0145] (ii)-1 Cefalea;

[0146] (ii)-2 Fiebre o escalofríos;

[0147] (ii)-3 Dolor muscular o articular;

[0148] (ii) -4 Fatiga.

[0149] (iii) Al menos uno de los siguientes síntomas respiratorios asociados con la gripe con una gravedad de moderada o mayor:

[0150] (iii)-1 Tos;

[0151] (iii)-2 Dolor de garganta;

[0152] (iii)-3 Congestión nasal.

[0153] (iii)-4 Infección de gripe A o B confirmada por la prueba de PCR de detección rápida.

[0154] La transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia o el paciente control a la persona de contacto se puede verificar por diferentes medios. Por ejemplo, se puede asumir que se produjo transmisión si se detecta un virus de la gripe en la persona de contacto (por ejemplo, por medio de PCR), y el paciente de referencia o el paciente control fue la primera (o incluso la única) persona infectada por gripe con la que la persona de contacto tuvo contacto personal directamente antes de la identificación del virus de la gripe en la persona de contacto, por ejemplo, en las últimas cuatro semanas (preferentemente en las últimas dos semanas, o más preferentemente en los últimos 7 días) directamente antes de la identificación del virus de la gripe en la persona de contacto. La transmisión desde el paciente de referencia tratado se puede haber producido cuando se puede detectar una cepa del virus de la gripe en al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado, y cuando dicha cepa del virus de la gripe es idéntica a la cepa del virus de la gripe del paciente de referencia tratado, y la transmisión desde el paciente control se ha producido cuando se puede detectar una cepa del virus de la gripe en al menos una persona de contacto del paciente control, y cuando dicha cepa del virus de la gripe es idéntica a la cepa del virus de la gripe del paciente control. Por tanto, la transmisión desde el paciente de referencia tratado se puede haber producido cuando al menos una persona de contacto del paciente de referencia tratado tiene una infección por el virus de la gripe con una cepa del virus de la gripe que es idéntica a la cepa del virus de la gripe del paciente de referencia tratado, y la transmisión desde el paciente control se ha producido cuando al menos una persona de contacto del paciente control tiene una infección por el virus de la gripe con una cepa del virus de la gripe que es idéntica a la cepa del virus de la gripe del paciente control.

[0156] Por ejemplo, si una persona de contacto (por ejemplo, un contacto del hogar) contrae gripe A o B confirmada por PCR, se puede usar un hisopo nasofaríngeo de la persona de contacto para secuenciar el genoma vírico para someter a prueba si el virus de la gripe proviene de (es decir, desciende de) el paciente de referencia o el paciente control, respectivamente. Los procedimientos para secuenciar el genoma vírico son comúnmente conocidos en la técnica y también se describen a continuación. El experto en la técnica está fácilmente en posición de determinar si un virus de la gripe proviene del paciente de referencia o del paciente control, respectivamente. Por ejemplo, el experto en la técnica reconocerá que se ha producido transmisión si el genoma vírico del virus de la gripe de la persona de contacto es idéntico al genoma vírico del virus de la gripe del paciente de referencia o el paciente control, respectivamente. Sin embargo, el virus de la gripe también puede mutar durante o después de la transmisión desde el paciente de referencia o el paciente control al paciente de contacto. Por lo tanto, también se ha producido transmisión si el genoma vírico del virus de la gripe de la persona de contacto es idéntico al genoma vírico del virus de la gripe del paciente de referencia o el paciente control, respectivamente, aparte de una o varias diferencias de nucleótidos (es decir, mutaciones puntuales).

[0158] Para determinar si se ha producido transmisión de un virus de la gripe de un paciente de referencia a una persona de contacto o de un paciente control a una persona de contacto, se pueden llevar a cabo árboles filogenéticos y mediciones de distancia genética. Más específicamente, para determinar si se ha producido transmisión, se pueden usar los procedimientos descritos en el ejemplo 4.

[0160] Por ejemplo, se puede llevar a cabo un análisis filogenético (árbol de genoma completo con soporte de reposición de topología de árbol o agrupamiento) y/o medición de la distancia genética entre poblaciones emparejadas (por ejemplo, L1-Norm) para identificar pares de transmisión. Dos factores influyen en el resultado del análisis: en primer lugar, la cantidad de datos de secuencia disponibles. Para maximizar este, se puede llevar a cabo una secuenciación de nueva generación del genoma completo (WGNGS) para incrementar la granularidad y la potencia discriminatoria (en comparación con la secuenciación de Sanger y/o la secuenciación de gen único). En segundo lugar, la diversidad en la comunidad/metapoblación muestreada, de modo que se puede realizar con alta confianza la evaluación de que virus dentro de parejas del hogar son más similares entre sí en comparación con un grupo externo. Un mayor número de secuencias obtenidas de una comunidad incrementa la diversidad en este grupo y, por tanto, facilita la identificación de pares de transmisión reales.

[0162] Por ejemplo, se pueden usar >15 pacientes de referencia (PR), preferentemente al menos 30-40 pacientes de referencia (PR) para desarrollar una distribución comunitaria de distancias pareadas, que refleje la diversidad de la comunidad, de modo que se puedan inferir acontecimientos de transmisión verdaderos (por ejemplo, acontecimiento de transmisión en el hogar) con datos de secuencia, por ejemplo, como se describe en McCrone, John T.,et al."Stochastic processes constrain the within and between host evolution of influenza virus."Elife7 (2018): e35962. Se pueden usar los procedimientos como se describen en McCrone(Elife7 (2018): e35962), tales como el procedimiento que se describe en el mismo para la secuenciación. En el contexto de la presente invención, el análisis se centra preferentemente en el análisis de muestras de virus de gripe A.

[0164] Se puede usar tanto el vínculo epidemiológico como la relación genética de los virus (por ejemplo, en los hogares) para definir pares de transmisión y excluir la confusión de la diversidad de fondo en la comunidad. Un par de individuos (por ejemplo, dentro de un hogar) se puede considerar un par de transmisión epidemiológicamente vinculado si tuvieron contacto personal y ambos son positivos para el mismo subtipo de virus de la gripe en un plazo de 7 días entre sí. Por ejemplo, se puede considerar que todos los individuos que tuvieron contacto personal entre sí (por ejemplo, en un hogar) con aparición de síntomas dentro de un margen de 7 días están epidemiológicamente vinculados. El donante en cada supuesto par se puede definir como el individuo con la aparición más temprana de los síntomas. Se puede ignorar un acontecimiento de transmisión si existieron múltiples donantes posibles con el mismo día de aparición de los síntomas. Es posible que no se permita que el donante y los receptores tengan la aparición de los síntomas el mismo día, a menos que los individuos sean ambos pacientes de referencia (por ejemplo, en el hogar analizado).

[0165] A continuación, se pueden usar los datos de secuencias para determinar cuáles de los pares epidemiológicamente vinculados representan acontecimientos de transmisión verdaderos, a diferencia de infecciones comunitarias coincidentes. La distancia genética entre las poblaciones de gripe de cada supuesto par de transmisión se puede medir mediante L1-Norm y estas distancias se pueden comparar con las de pares comunitarios asignados aleatoriamente dentro de cada temporada. Solo se puede considerar que los individuos son un par de transmisión verdadero si tienen una distancia genética por debajo del percentil 5 de la distribución comunitaria de pares asignados aleatoriamente.

[0167] Como se menciona anteriormente, el virus de la gripe se transmite principalmente por transmisión aérea, en particular infección por gotículas. Por lo tanto, preferentemente, la transmisión del virus de la gripe es transmisión por contacto directo y/o transmisión aérea, preferentemente transmisión aérea. Más preferentemente, la transmisión es una infección por gotículas.

[0169] Como se proporciona en el presente documento, el compuesto que se va a usar en la presente invención tiene la propiedad ventajosa de que reduce considerablemente la transmisión del virus de la gripe. Por tanto, dicho compuesto es en particular útil para el tratamiento de pacientes infectados por gripe particulares, cuya infectividad se va a reducir. Por ejemplo, es en particular importante reducir la infectividad de los pacientes que podrían causar daños significativos (por ejemplo, sociales o económicos) debido a la transmisión de su virus de la gripe. En un aspecto de la presente invención, el paciente de referencia tratado tiene contacto personal con al menos una persona de un grupo de riesgo de gripe o con al menos una persona que es esencial para el funcionamiento de la sociedad después de la administración del compuesto al paciente de referencia y durante su infección por el virus de la gripe. La al menos una persona de un grupo de riesgo de gripe puede ser al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de contraer una infección por el virus de la gripe o que tiene un riesgo incrementado de sufrir una complicación relacionada con la gripe. Dicha complicación relacionada con la gripe puede ser al menos una complicación seleccionada del grupo que consiste en hospitalización, sinusitis, otitis media, bronquitis y neumonía. Dicha al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de sufrir una complicación relacionada con la gripe puede tener un riesgo incrementado de morir debido a la infección por el virus de la gripe. En un aspecto de la presente invención, dicha al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de sufrir una complicación relacionada con la gripe es un individuo:

[0171] (i) que tiene una cardiovasculopatía crónica, una enfermedad pulmonar crónica, una enfermedad metabólica crónica, una enfermedad renal crónica, un trastorno cardiopulmonar y/o que es inmunodeficiente; y/o

[0173] (ii) que tiene al menos 65 años o menos de 5 años de edad.

[0175] Además, o de forma alternativa, la al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de sufrir una complicación relacionada con la gripe puede ser un paciente gravemente enfermo (por ejemplo, hospitalizado).

[0176] Como se menciona anteriormente, en un aspecto de la presente invención, el paciente de referencia tratado tiene contacto personal con al menos una persona de un grupo de riesgo de gripe después de la administración del compuesto al paciente de referencia y durante su infección por el virus de la gripe, en el que dicha persona de un grupo de riesgo de gripe puede ser al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de contraer una infección por el virus de la gripe. En el contexto de la presente invención, dicha al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de contraer una infección por el virus de la gripe puede ser un individuo para el que está contraindicada la vacuna contra la gripe. Dicha al menos una persona que tiene un riesgo incrementado de contraer una infección por el virus de la gripe también puede ser una persona que tiene una amenaza importante para la salud, un niño pequeño (por ejemplo, un niño de menos de 5 años), una persona anciana (por ejemplo, una persona de 65 años o más) o una persona inmunodeficiente.

[0178] Como se menciona anteriormente, la persona de contacto del paciente de referencia puede ser al menos una persona que sea esencial para el funcionamiento de la sociedad. Dicha persona que es esencial para el funcionamiento de la sociedad puede ser una persona que es esencial para el funcionamiento de la ciudad o el estado. De acuerdo con la presente invención, dicha al menos una persona que es esencial para el funcionamiento de la sociedad puede estar trabajando como proveedor de servicios esenciales, incluyendo una persona que pertenece al personal de bomberos, personal policial, personal sanitario, personal de un servicio de respuesta a emergencias, militar o gubernamental.

[0180] Permanecer en casa durante una infección por el virus de la gripe puede ser perjudicial si el paciente infectado es un proveedor de servicios esenciales. Esto se aplica en particular durante una situación de emergencia. Por lo tanto, el propio paciente de referencia puede ser una persona esencial para el funcionamiento de la sociedad. El tratamiento de dicho paciente de referencia con el compuesto que se va a usar en la presente invención reducirá (o incluso prevendrá) que el virus se transmita desde el paciente de referencia a otras personas, de modo que el paciente de referencia no tendrá necesariamente que permanecer en casa durante su infección por el virus de la gripe. Por ejemplo, el paciente de referencia puede estar trabajando como proveedor de servicios esenciales, por ejemplo, puede ser una persona que pertenece al personal de bomberos, personal policial, personal sanitario o al personal de un servicio de respuesta a emergencias.

[0182] El paciente de referencia puede ser una persona en una situación de epidemia de gripe o pandemia de gripe. El paciente de referencia también puede ser una persona en una situación de amenaza bioterrorista o ataque bioterrorista, en la que un virus de la gripe desempeña un papel en la amenaza bioterrorista o el ataque bioterrorista, respectivamente. De hecho, es probable que el impacto de una pandemia de gripe sea mucho mayor, en órdenes de magnitud, que los escenarios de bioterrorismo habituales. Por lo tanto, prevenir o reducir la transmisión de la gripe sería una ventaja importante durante una situación de epidemia, pandemia o bioterrorismo. Como se menciona anteriormente, los expertos anticipan que la próxima pandemia de gripe se asociará con un alto balance de muertes y un alto grado de enfermedad que requiera hospitalización, produciendo por tanto una presión considerable sobre los recursos de atención sanitaria. Por tanto, el paciente de referencia puede pertenecer al personal sanitario y el tratamiento de dicho paciente de referencia con el compuesto puede ser durante una epidemia de gripe o durante una pandemia de gripe. Como también se menciona anteriormente, en los países en desarrollo, donde los recursos de atención sanitaria ya son limitados y la población general está con frecuencia debilitada por el mal estado de salud y nutricional, es probable que el impacto de las pandemias de gripe sea máximo. Por lo tanto, el paciente de referencia puede pertenecer a la población de un país en desarrollo.

[0184] Por supuesto, reducir la tasa de transmisión es en particular ventajoso (o incluso necesario) si el paciente de referencia infectado por gripe tiene o tendrá contacto personal con muchas personas. Preferentemente, el paciente de referencia tiene contacto personal con muchas personas después de la administración del compuesto que se va a usar en la presente invención. En un aspecto de la presente invención, el paciente de referencia tratado tiene contacto personal con muchas personas, por ejemplo, con más de 10 personas, después de la administración del compuesto (al paciente de referencia) y durante su infección por el virus de la gripe. Por ejemplo, el paciente de referencia puede tener contacto personal con muchas personas en su hogar o en su trabajo. En un aspecto de la presente invención, el paciente de referencia tratado visita un centro de atención (tal como un hogar de ancianos, una guardería o un hospital), un centro educativo (tal como una escuela o universidad), una institución pública, un centro de transporte, un vehículo, una aeronave y/o una tienda, y tiene contacto personal con muchas personas, por ejemplo, con más de 10 personas, después de la administración del compuesto al paciente de referencia y durante su infección por el virus de la gripe.

[0186] Preferentemente, se reduce la tasa de transmisión del virus de la gripe desde el paciente de referencia tratado a los contactos del hogar. En consecuencia, es preferente que el paciente de referencia tratado tenga contactos del hogar. Por ejemplo, el paciente de referencia tratado puede vivir en un hogar con niños (preferentemente niños que no sean mayores de 5 años). Además, o de forma alternativa, el paciente de referencia tratado puede tener un trabajo con mucho contacto humano. Es preferente que al menos una persona del/de los contacto(s) del hogar y/o contacto(s) laboral(es) del paciente de referencia tratado no esté vacunada contra la gripe.

[0188] Como se menciona anteriormente, el paciente de referencia tratado puede tener contacto personal con muchas personas, por ejemplo, más de 10 personas (preferentemente más de 30, más preferentemente más de 50, incluso más preferentemente más de 100 personas) después de la administración del compuesto y durante su infección por el virus de la gripe. Los ejemplos adjuntos muestran que la velocidad de transmisión se reduce en el sujeto tratado directamente después de la administración del compuesto que se va a usar en la presente invención. De acuerdo con la presente invención, el compuesto se puede administrar al menos una hora antes de dicho contacto personal. En un aspecto de la presente invención, el compuesto se administra al menos 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 o 32 horas antes de dicho contacto personal. A este respecto, son preferentes los intervalos de tiempo más largos frente a los más cortos. En el contexto de la presente invención, el compuesto se puede administrar dentro de las 48 horas posteriores a la aparición de los síntomas de gripe, preferentemente dentro de las 24 horas posteriores a la aparición de los síntomas de gripe.

[0190] La presente invención no se limita a ninguna dosificación particular del compuesto de la presente invención. La cantidad eficaz del compuesto se puede seleccionar y/o ajustar por el médico especialista de acuerdo con su experiencia y las pautas aplicables. Sin embargo, el compuesto se administra preferentemente una vez como tratamiento único. El compuesto se puede administrar al paciente a una dosis adecuada. El compuesto se puede administrar en un intervalo de dosis que varía dependiendo del peso corporal del paciente, edad, sexo, estado de salud y dieta, tiempo de administración, procedimiento de administración, tasa de eliminación y gravedad de la enfermedad. El régimen de dosificación se determinará por el médico especialista y los factores clínicos. Como es bien conocido en la técnica médica, las dosificaciones para un paciente cualquiera dependen de muchos factores, incluyendo la talla del paciente, área de superficie corporal, edad, el compuesto particular que se va a administrar, sexo, tiempo y vía de administración, salud general y otros fármacos que se estén administrando simultáneamente. Sin embargo, la cantidad eficaz del compuesto que se va a usar en la presente invención es, preferentemente, de aproximadamente 40 mg para pacientes <80 kg y aproximadamente 80 mg para pacientes >80 kg. La dosificación de baloxavir marboxil en pacientes pediátricos puede ser como sigue. En un paciente de menos de 1 año: (a) si el paciente tiene menos de 4 semanas, entonces la cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal; (b) si el paciente tiene 4 semanas o más pero menos de 3 meses, entonces la cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal; (c) si el paciente tiene 3 meses o más pero menos de 12 meses, entonces la cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal. En un paciente de 1 año o más, pero de menos de 12 años, la dosificación se puede basar en el peso corporal. Se han llevado a cabo dos ensayos clínicos de fase III en pacientes pediátricos de entre 6 meses y 12 años de edad en Japón (estudios 1618T0822 y 1705T0833). En el primer estudio, 1618T0822, se administró un único comprimido de baloxavir marboxil a sujetos pediátricos de entre 6 meses y <12 años con gripe. La dosificación de baloxavir marboxil fue como sigue: >40 kg: dosis de 40 mg, 20 kg - 40 kg: dosis de 20 mg, 10 kg - 20 kg: dosis de 10 mg, 5 kg - <10 kg: 5 mg. Esta dosificación también se puede usar para pacientes pediátricos de referencia.

[0192] La invención tampoco se limita a ninguna vía de administración específica del compuesto. Todas las posibles vías de administración que el médico especialista considere útiles o necesarias están dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, el compuesto se puede administrar por vía oral, rectal, nasal, tópica, intradérmica, como aerosol, vaginal o parenteral, tal como intramuscular, intravenosa, subcutánea, intraarterial o intracardiaca. Es preferente que el compuesto se administre por vía oral. Las formas farmacéuticas para administración oral incluyen comprimidos recubiertos y no recubiertos, cápsulas de gelatina blandas, cápsulas de gelatina duras, pastillas para chupar, trociscos, soluciones, emulsiones, suspensiones, jarabes, elixires, polvos y gránulos para reconstitución, polvos y gránulos dispersables, chicles con medicación, comprimidos de mascar y comprimidos efervescentes. Las formas farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones, emulsiones, suspensiones, dispersiones y polvos y gránulos para reconstitución. Las formas farmacéuticas para administración rectal y vaginal incluyen supositorios y óvulos. Las formas farmacéuticas para administración nasal se pueden administrar por medio de inhalación e insuflación, por ejemplo, mediante un inhalador dosificador. Las formas farmacéuticas para administración tópica incluyen cremas, geles, pomadas, ungüentos, parches y sistemas de administración transdérmica. Sin embargo, es preferente que el compuesto que se va a usar en la presente invención se administre en forma de un comprimido, más preferentemente un comprimido para uso oral. Por ejemplo, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede administrar como un comprimido de 20 mg y/o un comprimido de 40 mg. El compuesto que se va a usar en la presente invención también se puede administrar en forma de gránulos. Los gránulos son en particular ventajosos si el compuesto se administra a personas que no pueden tragar comprimidos, por ejemplo, niños o personas que tienen una sonda nasogástrica. Por tanto, una persona que tenga un peso corporal de <80 kg puede recibir dos comprimidos de 20 mg o un comprimido de 40 mg como dosis oral única. Un paciente que tenga un peso corporal de >80 kg puede recibir cuatro comprimidos de 20 mg o dos comprimidos de 40 mg como dosis oral única.

[0194] El paciente de referencia puede ser cualquier sujeto humano que tenga una infección por el virus de la gripe. Es preferente que el paciente de referencia tenga al menos 2 años de edad. Es más preferente que el paciente de referencia tenga al menos 12 años de edad. Por ejemplo, el paciente de referencia puede ser un paciente humano que, preferentemente, tiene >12 a <64 años. El paciente de referencia tratado está preferentemente sano aparte de la infección por el virus de la gripe. Como se menciona anteriormente, es preferente que el paciente de referencia tratado tenga al menos una persona de contacto (por ejemplo, un contacto del hogar) que no esté vacunada contra la gripe. Incluso más preferentemente, el paciente de referencia tratado tiene al menos dos personas de contacto (por ejemplo, contactos del hogar) que no están vacunadas contra la gripe. Dichas personas de contacto pueden tener >2 años de edad.

[0196] El paciente control es un paciente infectado por gripe que es lo más similar posible al paciente de referencia, aparte de que el paciente control no se le trate con el compuesto que se va a usar en la presente invención. Por tanto, el paciente control tiene una edad y un estado de salud idénticos o al menos similares (es decir, comparables) a los del paciente de referencia, y el paciente control y el paciente de referencia están infectados con la misma cepa del virus de la gripe.

[0198] Los virus de la gripe causan epidemias estacionales y, muy ocasionalmente, pandemias globales. La palabra "pandemia" (del griego "pan" que significa todo y "demos" que significa pueblo) describe una epidemia que afecta a toda la población. El compuesto que se va a usar en la presente invención tiene la ventaja de que reduce la transmisión de un virus de la gripe y, por lo tanto, puede reducir el riesgo de que un paciente de referencia tratado dé lugar (o contribuya) al desarrollo de una epidemia de gripe o pandemia de gripe. Por tanto, en un aspecto de la presente invención, el tratamiento (del paciente de referencia) tiene el efecto de que el paciente de referencia tratado tiene un riesgo reducido de desencadenar una epidemia de gripe o una pandemia de gripe en comparación con un paciente control. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el paciente de referencia tratado tiene un riesgo reducido de desencadenar una epidemia de gripe o una pandemia de gripe en comparación con un paciente control.

[0200] En el presente documento, una "pandemia de gripe" es una epidemia global causada por un virus de la gripe para el que existe poca o ninguna inmunidad preexistente en la población humana. Una pandemia se define como una epidemia que ocurre en todo el mundo, o en un área muy amplia, tal como en todo el país. Una pandemia cruza a menudo las fronteras internacionales y normalmente afecta a un gran número de personas. Una verdadera pandemia de gripe se produce cuando tiene lugar una transmisión casi simultánea, por ejemplo, en todo el mundo. La transmisión simultánea de la gripe en todo el mundo es suficiente para definir una pandemia de gripe y es consecuente con la definición clásica de "una epidemia que se produce en todo el mundo". Por ejemplo, una pandemia puede ser causada por un virus de gripe recién desarrollado, que es el resultado de cambios dentro de un virus de gripe existente. Dichos cambios se analizan a continuación con más detalle. Las pandemias pueden ser relativamente leves o pueden causar enfermedades graves o la muerte. La enfermedad grave se puede producir en determinados grupos de riesgo, que pueden corresponder a aquellos con riesgo de enfermedad grave debido a la gripe estacional. Sin embargo, también es probable que las personas sanas experimenten una enfermedad más grave que la causada por la gripe estacional.

[0202] Una "epidemia de gripe" es un incremento repentino del número de casos de infección por el virus de la gripe por encima de lo que normalmente se espera. Una "epidemia de gripe" es una incidencia generalizada de gripe en una comunidad en un momento particular. Una epidemia es un acontecimiento en el que una enfermedad se está propagando activamente. Por el contrario, el término pandemia se refiere a la propagación geográfica y se usa para describir una enfermedad que afecta a todo un país o al mundo entero.

[0204] Existen tres tipos de virus de la gripe: A, B y C. Los tipos A y B causan brotes extensos de enfermedades gripales casi todos los años. La gripe C se asocia con una infección esporádica, a menudo asintomática, con poca o ninguna mortalidad y, por lo tanto, no es motivo de preocupación de salud pública. La gripe pandémica se produce solo con los virus de gripe A. Sin embargo, los virus de la gripe B pueden causar una epidemia de gripe. De hecho, la gripe B es parte de las epidemias de gripe estacional. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, el virus de la gripe puede ser un virus de gripe A o un virus de gripe B, preferentemente un virus de gripe A. Es preferente que el virus de la gripe sea una cepa epidémica del virus de la gripe o una cepa pandémica del virus de la gripe.

[0205] Las pandemias y epidemias de gripe en seres humanos surgen como resultado de cambios en las glucoproteínas de superficie conocidos como "salto antigénico"(antigenic shift)y "deriva antigénica"(antigenic drift).

[0207] En particular, una forma en que los virus de la gripe cambian se llama "deriva antigénica". La "deriva antigénica" son pequeños cambios en los genes de los virus de la gripe que ocurren continuamente a lo largo del tiempo a medida que el virus se replica. Estos pequeños cambios genéticos producen normalmente virus que están bastante estrechamente relacionados entre sí, lo que se puede ilustrar por su localización cercana en un árbol filogenético. Los virus que están estrechamente relacionados entre sí comparten normalmente las mismas propiedades antigénicas y un sistema inmunitario expuesto a un virus similar normalmente lo reconocerá y responderá (esto a veces se llama protección cruzada). Pero estos pequeños cambios genéticos se pueden acumular a lo largo del tiempo y dar como resultado virus que son antigénicamente diferentes (es decir, más alejados en el árbol filogenético). Cuando esto sucede, el sistema inmunitario del cuerpo puede no reconocer aquellos virus, lo que puede dar como resultado una epidemia de gripe.

[0209] Otro tipo de cambio en un virus de la gripe se llama "salto antigénico". La gripe pandémica es el resultado de un salto antigénico y solo se produce en el virus de la gripe A. El salto antigénico es un cambio brusco importante en el virus de la gripe A que da como resultado nuevas proteínas hemaglutinina (HA) y/o nuevas proteínas HA y neuraminidasa (NA) en el virus de la gripe. Por tanto, el salto antigénico da como resultado un nuevo subtipo de gripe A o un virus con una hemaglutinina (HA) o una combinación de hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) que ha surgido de una población animal que es tan diferente del mismo subtipo en seres humanos que la mayoría de las personas no tienen inmunidad frente al nuevo virus. Dicho "salto" se produjo en la primavera de 2009, cuando surgió un virus H1N1 con una nueva combinación de genes para infectar a las personas y propagarse rápidamente, causando una pandemia. Cuando se produce un salto, la mayoría de las personas tienen poca o ninguna protección contra el nuevo virus. Por tanto, el salto antigénico implica un cambio brusco en los antígenos HA y posiblemente NA, que son totalmente diferentes de los que circulaban en los seres humanos durante muchos años antes.

[0211] El salto antigénico da como resultado un virus completamente novedoso que es serológicamente distinto de los virus anteriores y que no podría haber surgido de ellos por mutación. Una pandemia es probable cuando grandes sectores de la población de todo el mundo carecen de inmunidad al nuevo virus (es decir, no tienen o tienen pocos anticuerpos contra la HA del virus novedoso), y es fácilmente transmisible entre personas, causando una enfermedad grave. Una pandemia se considera inminente cuando el nuevo virus se propaga rápidamente más allá de la comunidad en la que se identificó por primera vez. Mientras que los virus de la gripe están cambiando debido a deriva antigénica todo el tiempo, el salto antigénico ocurre solo ocasionalmente. Los virus de tipo A experimentan ambas clases de cambios; los virus de tipo B de la gripe cambian solo mediante el proceso más gradual de deriva antigénica.

[0213] Como se menciona anteriormente, las pandemias de gripe son normalmente el resultado de un "salto" antigénico, y las epidemias de gripe son normalmente el resultado de una "deriva" antigénica. Por lo tanto, en el contexto de la presente invención, el virus de la gripe es antigénicamente diferente en comparación con la cepa original del virus de la gripe como resultado de una deriva antigénica y/o un salto antigénico, preferentemente un salto antigénico o ambos.

[0215] Un experto en la técnica puede determinar fácilmente si un virus de gripe dado es el resultado de una deriva antigénica o un salto antigénico. Como se describe anteriormente, el salto antigénico es un cambio brusco importante en los virus de gripe A que da como resultado nuevas combinaciones de proteínas hemaglutinina y neuraminidasa en los virus de gripe A que infectan a seres humanos. Por tanto, para determinar si un virus de gripe A que infecta a seres humanos es el resultado de un salto antigénico, la combinación de proteínas hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) de dicho virus de gripe A se puede comparar con las combinaciones de proteínas hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) de virus de gripe A conocidos que infectan a seres humanos. Si la combinación de proteínas hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) del virus de gripe A en cuestión no está presente en los virus de gripe A conocidos que infectan a seres humanos, entonces el virus de gripe A en cuestión es el resultado de un salto antigénico.

[0217] La deriva antigénica son mutaciones puntuales dentro del genoma del virus. El experto puede determinar fácilmente si un virus de la gripe dado es el resultado de la deriva antigénica secuenciando el genoma de este virus de la gripe y comparando la secuencia resultante con las secuencias del genoma vírico de virus de la gripe conocidos. En consecuencia, para determinar si un virus de la gripe que infecta a seres humanos es el resultado de una deriva antigénica, la secuencia del genoma vírico de dicho virus de la gripe se puede comparar con la secuencia del genoma vírico de virus de la gripe conocidos que infectan a seres humanos. Si la secuencia del genoma vírico del virus de la gripe en cuestión comprende cambios de nucleótidos (es decir, mutaciones puntuales) en comparación con los virus de la gripe conocidos que infectan a seres humanos, entonces el virus de la gripe en cuestión es el resultado de una deriva antigénica.

[0219] La deriva antigénica es el proceso evolutivo normal cuando los genomas de los virus mutan (lentamente en comparación con el salto antigénico) debido a polimerasas propensas a errores. Estas mutaciones pueden cambiar los rasgos característicos funcionales del virus, por ejemplo, la resistencia de las enzimas contra fármacos específicos. Por lo tanto, para determinar si un virus es el resultado de una deriva antigénica, se pueden determinar los rasgos característicos funcionales del virus.

[0221] Además del salto antigénico, los virus con potencial pandémico también pueden surgir a través del reciclaje de virus. Más específicamente, al examinar muestras de sangre de personas de diferentes edades, se puede demostrar si un subtipo particular de gripe circuló previamente y, de ser así, cuando dejó de circular aproximadamente. Este análisis, denominado seroarqueología, apoya la teoría del reciclaje de virus. La seroarqueología ha establecido más allá de toda duda razonable que los subtipos H2 y H3 se reciclaron en los seres humanos durante los siglos XIX y XX. Además, el subtipo H1, que circuló entre la humanidad durante el periodo 1918 a 1957, resurgió o se "recicló" en 1978. El análisis de los ARN de los virus aislados durante la epidemia de 1977-78 mostró que el virus estaba más estrechamente relacionado con virus aislados en 1950 que con las cepas aisladas después de ese momento. Debido a la deriva antigénica, se especuló que el virus H1N1 debía haber resurgido desde el estado congelado en la naturaleza o en otro lugar. Sin embargo, existen pruebas de que los virus de la gripe pueden permanecer invariantes durante periodos prolongados en los cerdos, lo que puede servir como reservorio para la infección en seres humanos. Por tanto, en el contexto de la presente invención, la cepa de gripe puede ser un virus de reciclaje que había causado una epidemia o pandemia en el pasado.

[0223] Por ejemplo, las cepas de virus que se pueden reciclar son A/Hong Kong/97 (H5N1), A/New Jersey/8/76 (H1N1), A/USSR/90/77 (H1N1), A/Hong Kong/68 (H3N2), A/Hong Kong/68 (H3N2), A/Hong Kong/68 (H3N2), A/Hong Kong/68 (H3N2), A/USSR/77 (H1N1), A/USSR/77 (H1N1) o A/USSR/77 (H1N1).

[0225] Como se menciona anteriormente, de acuerdo con la presente invención, el virus de la gripe puede ser un virus de gripe A o un virus de gripe B (por ejemplo, B/Minnesota/23/2015). Los ejemplos adjuntos muestran, sorprendentemente, que el compuesto que se va a usar en la presente invención puede reducir la transmisión de las cepas del virus de la gripe A/Perth/265/2009 (H1N1pdm09) y A/England/195/2009. Por tanto, de acuerdo con la presente invención, la cepa del virus de la gripe es preferentemente un virus de gripe A, más preferentemente una cepa de gripe A del subtipo H1N1 (por ejemplo, A/Perth/265/2009 (H1N1pdm09) o A/England/195/2009). Sin embargo, el virus de gripe A también puede ser del subtipo H2N2, H3N2, H5N1 o H7N9.

[0227] En un aspecto preferente de la presente invención, la cepa del virus de la gripe no porta una mutación I38X, incluyendo una mutación I38T. Por tanto, es preferente que la cepa del virus de la gripe no porte una mutación I38T. La sustitución I38T es una mutación dentro de la proteína polimerasa ácida (PA) vírica de algunas cepas de gripe A mutadas. La secuencia de la proteína PA de un virus de gripe A que tiene la mutación I38T se muestra en SEQ ID NO: 4. Por tanto, en un aspecto preferente de la presente invención, la cepa del virus de la gripe no comprende una proteína PA que tenga la secuencia de SEQ ID NO: 4. También es preferente que la cepa del virus de la gripe no comprenda una proteína PA que tenga una secuencia que tenga al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de SEQ ID NO: 4 y que comprenda una T en la posición correspondiente a la posición 38 de SEQ ID NO: 4. Una fracción de la proteína PA de un virus de gripe A que comprende la mutación I38T se muestra en SEQ ID NO: 5. Por tanto, en un aspecto preferente de la presente invención, la cepa del virus de la gripe no comprende una proteína PA que comprenda la secuencia como se muestra en SEQ ID NO: 5.

[0229] Como se menciona anteriormente, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede usar para prevenir una epidemia de gripe o una pandemia de gripe. En consecuencia, en el presente documento se divulga un compuesto para su uso en un procedimiento para prevenir una epidemia de gripe o una pandemia de gripe, en el que el procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto a pacientes que tienen una infección por el virus de la gripe (pacientes de referencia), en el que el compuesto se administra a al menos el 10 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de una ciudad o país,

[0230] y en el que el compuesto tiene una de las siguientes fórmulas I y II:

[0232]

[0235] o su sal farmacéuticamente aceptable.

[0236] Por tanto, se divulga un compuesto para su uso en el tratamiento de pacientes que tienen una infección por el virus de la gripe (pacientes de referencia), en el que el compuesto se va a administrar a al menos un 10 % de todas las personas infectadas por gripe de la población de una ciudad o país, en el que el compuesto previene una epidemia de gripe o una pandemia de gripe, y en el que el compuesto tiene una de las siguientes fórmulas I y II:

[0238]

[0241] o su sal farmacéuticamente aceptable.

[0242] En el presente documento, "prevenir" una epidemia de gripe o una pandemia de gripe también significa reducir un brote de una epidemia de gripe o de una pandemia de gripe, por ejemplo, reducir las consecuencias de un brote de una epidemia de gripe o de una pandemia de gripe.

[0243] Los ejemplos adjuntos proporcionan una simulación que demuestra que tratar a un 15 % o un 30 % de la población con baloxavir marboxil prevendría una epidemia o pandemia de gripe, respectivamente. También se demuestra en los ejemplos adjuntos que el compuesto que se va a usar en la presente invención tiene el efecto ventajoso de que reduce la transmisión y, por lo tanto, reduce la probabilidad de que surja una epidemia o pandemia. Por tanto, los medios y procedimientos proporcionados en el presente documento reducen de forma ventajosa las implicaciones económicas que se asocian con las infecciones de gripe.

[0244] Como se describe anteriormente, las condiciones que rodearon el brote de la pandemia de "gripe aviar" en Hong Kong en 1997 ponen de relieve la necesidad de una planificación anticipada para garantizar una respuesta adecuada a una emergencia sanitaria que, seguramente, será impredecible, compleja, de rápida evolución y acompañada de una considerable alarma pública. En el pasado, una vez que se iniciaba una pandemia, ya era demasiado tarde para llevar a cabo las muchas actividades clave necesarias para minimizar el impacto. Por lo tanto, la planificación e implementación de las actividades preparatorias deben comenzar con mucha antelación. En consecuencia, para prevenir una pandemia de gripe, es necesario tratar a los pacientes infectados con el compuesto que se va a usar en la presente invención en una fase precoz. Por tanto, se contempla que se prevenga incluso una epidemia de gripe mediante el tratamiento de varias (por ejemplo, al menos un 10 % de las) personas infectadas por gripe durante una gripe estacional. El procedimiento descrito anteriormente (es decir, el procedimiento para prevenir una epidemia de gripe o una pandemia de gripe) puede ser para prevenir una epidemia de gripe y al menos un 10 %, preferentemente al menos un 15 %, más preferentemente al menos un 20 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de una ciudad o un país (preferentemente una población de una ciudad) se tratan con el compuesto. En línea con esto, el compuesto descrito anteriormente (es decir, el compuesto que previene una epidemia de gripe o una pandemia de gripe) puede prevenir una epidemia de gripe y al menos un 10 %, preferentemente al menos un 15 % y más preferentemente al menos un 20 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de una ciudad o un país (preferentemente una población de una ciudad) a las que se les va a tratar con el compuesto. Por ejemplo, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede usar para prevenir una epidemia de gripe (por ejemplo, durante una gripe estacional) si al menos un 20 % de la población ha recibido una vacuna eficaz y si la cantidad de personas susceptibles no es más de un 30 % de la población

[0246] Por supuesto, el efecto del compuesto que se va a usar en la presente invención para prevenir una epidemia (por ejemplo, durante una gripe estacional) o una pandemia se incrementa con el porcentaje de personas infectadas por gripe a las que se trata con el compuesto. Por lo tanto, para prevenir una epidemia de gripe (por ejemplo, durante una gripe estacional), se puede tratar con el compuesto a al menos un 30 %, al menos un 40 % o al menos un 50 % de las personas infectadas de la población de una ciudad o un país (preferentemente la población de una ciudad).

[0247] El procedimiento descrito anteriormente (es decir, el procedimiento para prevenir una epidemia de gripe o una pandemia de gripe) puede ser para prevenir una pandemia de gripe y se puede tratar con el compuesto a al menos un 25 %, preferentemente al menos un 30 %, más preferentemente al menos un 35 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de un país. En línea con esto, el compuesto descrito anteriormente (es decir, el compuesto que previene una epidemia de gripe o una pandemia de gripe) puede ser para prevenir una pandemia de gripe y se va a tratar con el compuesto a al menos un 25 %, preferentemente al menos un 30 % y más preferentemente al menos un 35 % de todas las personas infectadas por gripe de una población de un país. Por ejemplo, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede usar para prevenir una pandemia de gripe si no existe una vacuna eficaz disponible y si la cantidad de personas susceptibles no es más de un 30 % de la población. Como se menciona anteriormente, el efecto del compuesto que se va a usar en la presente invención para prevenir una pandemia se incrementa con el porcentaje de personas infectadas por gripe a las que se trata con el compuesto. Por lo tanto, para prevenir una pandemia de gripe, se puede tratar con el compuesto a al menos un 45 %, al menos un 55 % o al menos un 65 % de las personas infectadas de la población de una ciudad o un país.

[0248] Los medios y procedimientos proporcionados en el presente documento son en particular ventajosos si la cepa del virus de la gripe no tiene resistencia contra el compuesto que se va a usar en la presente invención. Sin embargo, la cepa del virus de la gripe puede tener resistencia contra otros fármacos antivíricos (tales como peramivir, laninamivir, oseltamivir, zanamivir, rimantadina, umifenovir o amantadina). Las pruebas para determinar si un virus dado tiene resistencia contra uno o más fármacos son comúnmente conocidas en la técnica y comprenden, por ejemplo, el ensayo de resistencia fenotípica y el ensayo NA-Star, que se describen ambos a continuación.

[0250] El ensayo de resistencia fenotípica se puede realizar como se describe en lo que sigue: Los ensayos de resistencia fenotípica (ensayo de reducción de punto/foco) se pueden realizar usando la tecnología de detección sensible Virospot que combina el cultivo clásico de virus en placas de microvaloración multipocillo y la inmunotinción específica de virus con formación de imágenes automatizada, la detección de células infectadas usando un analizador CTL Immunospot UV equipado con programa informático de análisis Biospot. La plataforma de tecnología Virospot determina la sensibilidad de los aislados de virus a los fármacos antivíricos midiendo el CI<50>/CI<90>. En resumen, el procedimiento se basa en la inoculación de virus infecciosos en monocapas de células MDCK en placas de 96 pocillos en presencia de un intervalo de concentración de fármaco. Después de la incubación, las células se fijan y se inmunotiñen con anticuerpos específicos del virus, seguido de sustrato TrueBlue y captura de imágenes usando el analizador UV.

[0252] El ensayo NA-Star es en particular útil para determinar la resistencia fenotípica a los inhibidores de neuraminidasa (tales como, por ejemplo, oseltamivir) y se puede realizar como sigue: Este ensayo usa un sustrato quimioluminiscente para la detección altamente sensible de la actividad de la enzima neuraminidasa. La actividad neuraminidasa proporciona un compuesto luminiscente que se cuantifica usando un lector. La actividad neuraminidasa del virus se determina en presencia de diluciones en serie del inhibidor de neuraminidasa. La sensibilidad al inhibidor de neuraminidasa se expresa como valores de CI<50>/CI<90>.

[0254] El compuesto que se va a usar de acuerdo con la presente invención se puede combinar con otros fármacos antigripales. Actualmente, cuatro fármacos antivíricos están aprobados en la Ue para la prevención y el tratamiento de la gripe: el inhibidor del canal iónico M2 amantadina y los NAI fosfato de oseltamivir, zanamivir y peramivir. Un segundo inhibidor de M2, la rimantadina, tiene autorizaciones de comercialización en la República Checa, Francia y Polonia, pero no se comercializa en estos países. Por lo tanto, el compuesto que se va a usar en la presente invención se puede administrar como coterapia con amantadina, fosfato de oseltamivir, zanamivir, peramivir y/o rimantadina. Los inhibidores de la neuraminidasa (NAI) son el pilar del tratamiento para las infecciones de gripe. Por lo tanto, si el compuesto que se va a usar en la presente invención se administra como coterapia, entonces se combina preferentemente con fosfato de oseltamivir o zanamivir. Tanto el fosfato de oseltamivir como el zanamivir se administran dos veces al día durante 5 días.

[0256] Como se describe anteriormente, la presente invención proporciona medios y procedimientos para reducir la transmisión de un virus de la gripe, es decir, para reducir la infectividad de un paciente infectado por gripe (es decir, el paciente de referencia). En línea con esto, la invención también se refiere a los siguientes aspectos. Todas las explicaciones, definiciones y aspectos preferentes que se explican anteriormente también se refieren, con las modificaciones pertinentes, a los aspectos de la invención descritos a continuación.

[0258] La invención también se refiere a un compuesto para su uso en un procedimiento para tratar una infección por el virus de la gripe, en el que dicho procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto a un paciente que tiene una infección por el virus de la gripe (paciente de referencia), en el que el compuesto tiene una de las fórmulas (I) y (II) o su sal farmacéuticamente aceptable, y en el que el compuesto reduce la transmisión. La presente invención también engloba un compuesto para su uso en un procedimiento para tratar la gripe, que comprende: leer una instrucción de dosificación en un prospecto o en un envase para una formulación farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una de las fórmulas (I) y (II)) o que es una sal farmacéutica del mismo; y administrar una cantidad eficaz del compuesto a un paciente infectado por gripe (paciente de referencia) cuya infectividad se va a reducir.

[0260] Como se explica anteriormente, el paciente de referencia tratado está preferentemente sano aparte de la infección por el virus de la gripe. Es preferente que al paciente de referencia no se le trate con ningún medicamento aparte del compuesto que se va a usar en la presente invención. Por ejemplo, es preferente que al paciente de referencia no se le trate con un tratamiento en fase de investigación clínica, un fármaco antivírico sistémico (por ejemplo, peramivir, laninamivir, oseltamivir, zanamivir, rimantadina, umifenovir o amantadina), inmunosupresores, corticoesteroides, fármacos antifúngicos o un fármaco que se administra en los ojos, nariz u oídos, o mediante inhalación.

[0262] El significado del término "infección por el virus de la gripe", o variaciones de este, es comúnmente conocido en la técnica y se refiere a una enfermedad que está causada por el virus de la gripe. Más específicamente, una infección por el virus de la gripe es una enfermedad infecciosa respiratoria aguda causada por un virus de la familia de los ortomixovirus. Se conocen dos formas para infectar principalmente a seres humanos y para provocar enfermedades en seres humanos, el virus de la gripe A y el virus de la gripe B. Los virus de la gripe tienen un genoma de ácido ribonucleico (ARN) segmentado, de sentido negativo, monocatenario y encapsulado en lípidos; varían de tamaño entre 80 y 100 nm. Los subtipos se definen de acuerdo con las glucoproteínas hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) presentes en la cubierta lipídica del virus. Los virus de la gripe entran en la célula epitelial respiratoria mediante unión de la HA vírica a receptores que contienen ácido siálico en la membrana celular, seguida de internalización del virus en un endosoma ácido. En el entorno ácido del endosoma, la HA experimenta un cambio conformacional que libera un péptido de fusión y da como resultado la fusión de la envoltura vírica con la membrana endosómica. Al mismo tiempo, la proteína de la matriz 2 (M2) actúa como un canal iónico que permite que los iones de hidrógeno entren en el virión desde el endosoma. Esto permite que los segmentos génicos víricos abandonen el virión y entren en el citoplasma, un proceso conocido como desencapsidación. Los segmentos génicos víricos se transportan al núcleo, donde el complejo de polimerasa vírico, compuesto por las proteínas proteína básica de la polimerasa 1 (PB1), proteína básica de la polimerasa 2 (PB2) y proteína ácida de la polimerasa (PA), dirige la síntesis del ARN mensajero (ARNm) de sentido positivo, así como, por medio de un ARN complementario de longitud completa de sentido positivo, la síntesis de copias de longitud completa de sentido negativo que servirán como ARN genómico de la progenie. Las proteínas polimerasa también desempeñan un papel en la interrupción de la síntesis de proteínas de células huésped. El ensamblaje de viriones de progenie se produce en la membrana plasmática, y la proteína NA vírica desempeña un papel en la liberación de virus de la superficie celular por escisión de ácido siálico de superficie.

[0264] El "compuesto" que se va a usar en la presente invención es un compuesto que tiene una de las siguientes fórmulas I y II:

[0265] (i) (ii)

[0267]

[0270] o su sal farmacéuticamente aceptable (es decir, del compuesto que tiene una fórmula de (I) o (II)). El compuesto que se va a usar en la presente invención también se denomina en el presente documento "compuesto", "compuesto para su uso", "compuesto que se va a usar (en el presente documento/en la presente invención)" o "compuesto de la presente invención".

[0271] El compuesto que se va a usar en la presente invención actúa como un inhibidor selectivo de endonucleasa dependiente de la caperuza (CEN), inhibiendo la función de "captura de caperuza" de la subunidad PA de la polimerasa de la gripe, que se usa para escindir estructuras de caperuza 5' de ARNm de células huésped, que se usan como cebadores para la transcripción de ARNm vírico. Al inhibir esta función esencial, el compuesto como se usa en el presente documento suprime la replicación de los virus de la gripe.

[0272] El compuesto que se va a usar en la presente invención tiene un amplio espectro de actividad contra los virus de la gripe aviar estacional (por ejemplo, A/H1N1, A/H3N2 y B) y altamente patógena (por ejemplo, A/H5N1, A/H7N9), con una actividad antivírica más potente (concentración que produce una inhibición de la mitad inferior del máximo [CI<50>]) en comparación con otros fármacos antigripales comunes tales como oseltamivir, zanamivir o peramivir. La capacidad del compuesto para ser eficaz como una administración de dosis única simplifica el tratamiento y mejora el cumplimiento por parte del paciente en comparación con los inhibidores de neuraminidasa (NAI). Preferentemente, el compuesto tiene la fórmula de (I) o (II), más preferentemente de (I). El compuesto de fórmula (I) también se pueden mostrar como sigue:

[0274]

[0276] Baloxavir marboxil (BXM)

[0277] Este compuesto (es decir, el compuesto de fórmula (I)) tiene una fórmula molecular de C<27>H<23>F<2>N<3>O<7>S. Este compuesto es un profármaco que es conocido como baloxavir marboxil. El baloxavir marboxil es conocido en la técnica y se describe, por ejemplo, en Noshi,Antiviral Research160 (2018): 109-117.

[0278] El baloxavir marboxil (es decir, el compuesto de fórmula (I)) es un fármaco contra el virus de la gripe con un mecanismo de acción novedoso. Fue descubierto y está siendo desarrollado por Shionogi & Co., Ltd. y F. Hoffman-La Roche, Ltd. Baloxavir marboxil (S-033188) es un profármaco y se convierte en una forma activa (S-033447) a través del metabolismo (hidrólisis). La forma activa se muestra en el presente documento como fórmula (II). La forma activa (S-033447) inhibe selectivamente la actividad endonucleasa dependiente de la caperuza (CEN) necesaria para la replicación de los virus de la gripe (Omoto,Sci Rep.2018; 8(1):9633). Se demostró un amplio espectro de actividad contra los virus de la gripe estacional y sobre el alivio de los efectos de los síntomas de la gripe en estudios de eficacia no clínicos y estudios clínicos en pacientes con gripe, incluyendo el estudio de demostrativo preliminar y de búsqueda de dosis de fase II, el estudio de fase III con enmascaramiento doble en pacientes por lo demás sanos (Portsmouth S, Kawaguchi K, Arai M, Tsuchiya K, Uehara T. Cap-dependent endonuclease inhibitor S-033188 for the treatment of influenza: results from a phase 3, randomized, double-blind, placebo- and active-controlled study in otherwise healthy adolescents and adults with seasonal influenza. Resumen LB-2. Presentación oral en ID Week 2017, 4-8 de octubre de 2017, San Diego, CA, EE. UU.), y el estudio abierto de fase III en pacientes pediátricos por lo demás sanos.

[0280] El compuesto como se muestra en la fórmula (II) es la forma activa de baloxavir marboxil (es decir, del profármaco de fórmula (I)). El compuesto de fórmula (I) también se pueden mostrar como sigue:

[0282]

[0285] Ácido de baloxavir (BXA)

[0287] El compuesto de fórmula (II) también se conoce como ácido de baloxavir. El ácido de baloxavir es conocido en la técnica y se describe, por ejemplo, en Noshi,Antiviral Research160 (2018): 109-117.

[0289] Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos usados en la presente invención incluyen, por ejemplo, sales con metal alcalino (por ejemplo, litio, sodio, potasio o similares), metal alcalinotérreo (por ejemplo, calcio, bario o similares), magnesio, metal de transición (por ejemplo, zinc, hierro o similares), amonio, bases orgánicas (por ejemplo, trimetilamina, trietilamina, diciclohexilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, meglumina, etilendiamina, piridina, picolina, quinolina o similares) o aminoácidos, o sales con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido yodhídrico o similares) o ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido glutárico, ácido málico, ácido benzoico, ácido ftálico, ácido ascórbico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico o similares). Especialmente, se incluyen sales con sodio, potasio, calcio, magnesio, hierro y similares. Estas sales se pueden formar por los procedimientos normales.

[0291] La producción del compuesto de la presente invención es bien conocida en la técnica. Por ejemplo, el compuesto de la presente invención se puede preparar con los procedimientos descritos en la solicitud de patente PCT/JP2016/063139, que se publica como el documento W<o>2016/175224A1.

[0293] Como se menciona anteriormente, de acuerdo con la presente invención, es preferente que la cepa del virus de la gripe no comprenda una proteína PA que tenga una secuencia que tenga al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad de secuencia con la secuencia de SEQ ID NO: 4 y que comprenda una T en la posición correspondiente a la posición 38 de SEQ ID NO: 4. En particular, se pueden generar y alinear secuencias FASTA de dos secuencias de proteínas PA víricas para evaluar el grado de identidad entre las dos proteínas PA víricas. Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias, las secuencias se alinean con propósitos de comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir huecos en una o ambas de una primera y una segunda secuencia de aminoácidos para una alineación óptima y las secuencias no homólogas se pueden descartar para propósitos de comparación). El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias, teniendo en cuenta el número de huecos y la longitud de cada hueco, que se necesita introducir para una alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje de identidad entre dos secuencias de polipéptidos/aminoácidos se determina de diversas maneras que son conocidas por el experto en la técnica, por ejemplo, usando un programa informático disponible públicamente tal como Smith Waterman Alignment (Smith, T. F. y M. S. Waterman (1981) J Mol Biol 147:195-7); "BestFit" (Smith y Waterman, Advances in Applied Mathematics, 482489 (1981)) como se incorpora en GeneMatcher Plus™, Schwarz y Dayhof (1979), Atlas of Protein Sequence and Structure, Dayhof, M.O., Ed, págs. 353-358; programa BLAST (Basic Local Alignment Search Tool; (Altschul, S. F., W. Gish,et al.(1990) J Mol Biol 215: 403-10), programa informático BLAST-2, BLAST-P, BLAST-N, BLAST-X, WU-BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2, CLUSTAL o Megalign (DNASTAR). Además, los expertos en la técnica pueden determinar parámetros apropiados para medir la alineación, incluyendo cualquier algoritmo necesario para lograr la alineación máxima sobre la longitud de las secuencias que se comparan. Preferentemente, las secuencias de proteínas PA víricas se comparan en toda su longitud. Para los propósitos de la presente invención, la comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias se puede lograr usando una matriz de puntuación Blossum 62 (con una penalización por hueco de 12, una penalización por extensión de hueco de 4 y una penalización por hueco de desplazamiento de marco de 5).

[0295] Como se menciona anteriormente, el compuesto de la invención se puede formular como una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una de las fórmulas (I) y (II), o su sal farmacéuticamente aceptable, y que comprende opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que la composición farmacéutica previene (por ejemplo, reduce) la transmisión del virus de la gripe. Las composiciones farmacéuticas se pueden formular con un vehículo farmacéuticamente aceptable por procedimientos conocidos. Por ejemplo, las composiciones se pueden formular combinando apropiadamente los ingredientes con un vehículo o un medio farmacéuticamente aceptable, específicamente, agua estéril o solución salina fisiológica, aceites vegetales, emulsionantes, agentes de suspensión, tensioactivos, estabilizantes, agentes saborizantes, excipientes, vehículos, conservantes, agentes aglutinantes y otros, mezclándolos en una dosis unitaria y forma requerida por las implementaciones farmacéuticas en general aceptadas. Los ejemplos específicos de los vehículos incluyen ácido silícico anhidro ligero, lactosa, celulosa cristalina, manitol, almidón, carmelosa cálcica, carmelosa sódica, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, dietilaminoacetato de polivinilacetal, polivinilpirrolidona, gelatina, triglicérido de cadena media, aceite de ricino endurecido con polioxietileno 60, sacarosa, carboximetilcelulosa, almidón de maíz, sal inorgánica y otros. El contenido del ingrediente activo en dicha formulación se ajusta de modo que se pueda obtener una dosis apropiada dentro del intervalo requerido.

[0297] La composición farmacéutica puede comprender opcionalmente uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como vehículos, diluyentes, cargas, disgregantes, agentes lubricantes, aglutinantes, colorantes, pigmentos, estabilizantes, conservantes, antioxidantes o potenciadores de solubilidad. Además, las composiciones farmacéuticas pueden comprender uno o más potenciadores de solubilidad, tales como, por ejemplo, polietilenglicol, incluyendo polietilenglicol que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 200 a aproximadamente 5000 Da, etilenglicol, propilenglicol, tensioactivos no iónicos, tiloxapol, polisorbato 80, macrogol-15-hidroxiestearato, fosfolípidos, lecitina, dimiristoil fosfatidilcolina, dipalmitoil fosfatidilcolina, diestearoil fosfatidilcolina, ciclodextrinas, hidroxietil-p-ciclodextrina, hidroxipropil-p-ciclodextrina, hidroxietil-Y-ciclodextrina, hidroxi propil-Y-ciclodextrina, di hidroxipropil-p-ciclodextrina, glucosil-a-ciclodextrina, glucosil-p-ciclodextrina, diglucosil-p-ciclodextrina, maltosil-a-ciclodextrina, maltosil-p-ciclodextrina, maltosil-Y-ciclodextrina, maltotriosil-p-ciclodextrina, maltotriosil-Y-ciclodextrina, dimaltosil-p-ciclodextrina, metil-p-ciclodextrina, tioéteres de carboxialquilo, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, polivinilpirrolidona, copolímeros de acetato de vinilo, vinilpirrolidona, lauril sulfato de sodio, dioctil sulfosuccinato de sodio, o cualquier combinación de los mismos.

[0298] Las composiciones farmacéuticas no se limitan a los medios y procedimientos descritos en el presente documento. El experto en la técnica puede usar su conocimiento disponible en la técnica para construir una composición adecuada. Específicamente, las composiciones farmacéuticas se pueden formular por técnicas conocidas por el experto en la técnica, tales como las técnicas publicadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20.a edición.

[0299] La presente invención se describe además por referencia a las siguientes figuras y ejemplos no limitantes.

[0301] Las figuras muestran:

[0303] Figura 1. Evolución temporal y diseño del estudio del ejemplo 1.Evolución temporal del experimento del ejemplo 1. Se administró baloxavir una vez como suspensión s.c. con 1 mg/kg en 4 localizaciones diferentes en el lomo del hurón. Se administró fosfato de oseltamivir (5 mg/kg) por vía oral dos veces al día durante 5 días. Para más detalles, véase el texto. DF, hurón donante; SF, hurón testigo; DC, contacto directo; RD, gotícula respiratoria.

[0305] Figura 2. Resultados del ensayo de calvas del ejemplo 1. (A)Hurones control. Todos los hurones control fueron positivos para gripe, como se detecta por el ensayo de calvas (donante: 4/4; DC testigo: 4/4; RD testigo: 3/4, aquí todos (4/4) fueron positivos en el ensayo de RT-PCR).(B)Hurones tratados con oseltamivir. Todos los hurones tratados con oseltamivir fueron positivos para gripe, como se detecta por el ensayo de calvas (donante: 4/4; DC testigo: 4/4; RD testigo: 3/4, aquí todos (4/4) fueron positivos en el ensayo de RT-PCR).(C)Hurones tratados con baloxavir. Solo un hurón testigo tratado con baloxavir estaba infectado por infección por gotículas respiratorias, como se detecta por el ensayo de calvas (donante: 3/4, aquí todos (4/4) fueron positivos en el ensayo de RT-PCR; DC testigo: 4/4; RD testigo: 1/4). DF, hurón donante; SF, hurón testigo; DC, contacto directo; RD, gotícula respiratoria.

[0307] Figura 3. Resultados de qRT-PCR del ejemplo 1. (A)Hurones control. Todos los hurones control fueron positivos para gripe, como se detecta por qRT-PCR (donante: 4/4; DC testigo: 4/4; RD testigo: 4/4).(B)Hurones tratados con oseltamivir. Todos los hurones tratados con oseltamivir fueron positivos para gripe, como se detecta por qRT-PCR (donante: 4/4, DC testigo: 4/4, RD testigo: 4/4).(C)Hurones tratados con baloxavir. Solo un hurón testigo tratado con baloxavir estaba infectado por infección por gotículas respiratorias, como se detecta por qRT-PCR (donante: 4/4; DC testigo: 4/4; RD testigo: 1/4).(D)Sumario de los resultados de qRT-PCR. Solo un hurón testigo tratado con baloxavir estaba infectado por infección por gotículas respiratorias, como se detecta por qRT-PCR. DF, hurón donante; SF, hurón testigo; DC, contacto directo; RD, gotícula respiratoria.

[0309] Figura 4. Evolución temporal del experimento 1 del ejemplo 2.Se administró baloxavir en un único tratamiento que consistió en inyecciones s.c. de 1 mg/kg en 4 localizaciones separadas en el lomo del hurón (4 mg/kg en total). Se administró placebo (1 ml/kg de vehículo en suspensión solo) de la misma manera. Se administró fosfato de oseltamivir (5 mg/kg) por vía oral dos veces al día hasta el criterio de valoración (excluyendo el último día). Tratamiento de hurones donantes: 24 h después de la inoculación del donante. Coalojamiento de hurones receptores: 24 h después de la inoculación del donante. Para más detalles, véase el texto. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0311] Figura 5. DICT50de hurones donantes en el experimento 1 del ejemplo 2.0/4 donantes tratados con baloxavir estaban excretando virus infeccioso detectable en el criterio de valoración de 3 días postinfección (DPI). El título del grupo de baloxavir fue significativamente menor que el del grupo de placebo a los 2 DPI (*p <0,05) y 3 DPI (***p <0,001). 4/4 donantes tratados con oseltamivir y 4/4 tratados con placebo estaban excretando virus infeccioso en el criterio de valoración de 3 DPI. No hubo diferencias significativas en los títulos de grupo observados entre los donantes tratados con oseltamivir y los tratados con placebo. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0313] Figura 6. Resultados de qRT-PCR de hurones donantes del experimento 1 del ejemplo 2.ARN vírico presente en el lavado nasal de todos los animales en todos los puntos de muestreo. El número de copias víricas en el grupo de baloxavir (*) y en el grupo de oseltamivir (+) se redujo significativamente en comparación con el placebo a los 3 DPI (p <0,05). El umbral de detección positiva del número de copias se basa en el estándar de número de copias de a Rn más bajo para proporcionar un valor de Ct <35 por ensayo. La farmacocinética (FC) del grupo de baloxavir 48 horas después del tratamiento fue de 10,2 ± 2,8 ng/ml de baloxavir en plasma ± DE. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0315] Figura 7. Resultados de los hurones receptores del experimento 1 del ejemplo 2. (A)Resultados de DICT<50>. Solo 1/4 hurones receptores del grupo de baloxavir excretó virus infeccioso detectable después de la exposición por contacto al donante, en comparación con 4/4 hurones del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo.(B)Resultados de qRT-PCR. Se detectó ARN del virus de la gripe en solo 2/4 receptores del grupo de baloxavir, en comparación con 4/4 del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0316] Figura 8. Evolución temporal del experimento 2 del ejemplo 2.Se administró baloxavir en un único tratamiento que consistió en inyecciones s.c. de 1 mg/kg en 4 localizaciones separadas en el lomo del hurón (4 mg/kg en total). Se administró placebo (1 ml/kg de vehículo en suspensión solo) de la misma manera. Se administró fosfato de oseltamivir (5 mg/kg) por vía oral dos veces al día hasta el criterio de valoración (excluyendo el último día). Tratamiento del donante: 24 h después de la inoculación del donante.

[0318] Coalojamiento del receptor: 48 h después de la inoculación del donante. Para más detalles, véase el texto. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0320] Figura 9. Resultados de los hurones donantes del experimento 2 del ejemplo 2. (A)Resultados de DICT<50>.

[0321] 0/4 donantes tratados con baloxavir estaban excretando virus infeccioso detectable en el criterio de valoración de 4 DPI. El título del grupo de baloxavir fue significativamente menor que el del grupo de placebo a los 2 DPI (*p <0,05), 3 DPI (**p <0,001) y 4 DPI (***p <0,001). El título del grupo de baloxavir fue significativamente menor que el del grupo de oseltamivir a los 3-4<d>P<i>(p <0,01). Sin embargo, inmediatamente antes del tratamiento (es decir, 1 DPI) los títulos fueron significativamente mayores en el grupo de baloxavir que en el grupo de placebo (p <0,001).

[0322] 4/4 donantes tratados con oseltamivir y 4/4 tratados con placebo estaban excretando virus infeccioso en el criterio de valoración de 4 DPI. El título del grupo de oseltamivir fue significativamente menor que el del grupo de placebo al 1 (DPI) (p <0,05), pero no hubo diferencias a los 2-4 DPI.(B)Resultados de qRT-PCR. El ARN vírico estaba presente en el lavado nasal de todos los animales en todos los puntos de muestreo. El número medio de copias víricas se redujo en el grupo de baloxavir a los 3 DPI, pero no se observaron diferencias en ningún otro día. La farmacocinética (FC) del grupo de baloxavir 72 h después del tratamiento fue de 12,5 ± 2,4 ng/ml de baloxavir en plasma ± DE. XA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0324] Figura 10. Resultados de los hurones receptores del experimento 2 del ejemplo 2. (A)Resultados de DICT<50>. Solo 1/4 hurones receptores del grupo de baloxavir excretó virus infeccioso detectable después de la exposición por contacto al donante, en comparación con 4/4 hurones del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo.(B)qRT-PCR. Se detectó ARN del virus de la gripe en 1/4 receptores del grupo de baloxavir, en comparación con 4/4 del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo. (C) Serología. 2/4 receptores del grupo de baloxavir mostraron producción de anticuerpos para el virus del donante, en comparación con 4/4 hurones del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo. La producción de anticuerpos detectada en hurones con DICT<50>-negativa se redujo (factor de multiplicación >32) en comparación con hurones con DICT<50>-positiva. "-" no se observó producción de anticuerpos.

[0325] Figura 11. Evolución temporal del experimento 3 del ejemplo 2.Se administró baloxavir en un único tratamiento que consistió en inyecciones s.c. de 1 mg/kg en 4 localizaciones separadas en el lomo del hurón (4 mg/kg en total). Se administró placebo (1 ml/kg de vehículo en suspensión solo) de la misma manera. Se administró fosfato de oseltamivir (5 mg/kg) por vía oral dos veces al día hasta el criterio de valoración (excluyendo el último día). Tratamiento del donante: 48 h después de la inoculación del donante. Coalojamiento del receptor: 48 h después de la inoculación del donante. Para más detalles, véase el texto. BXA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0327] Figura 12. Resultados de los hurones donantes del experimento 3 del ejemplo 2. (A)Resultados de DICT<50>. Ningún donante tratado con baloxavir (es decir, 0/4) estaba excretando virus infeccioso en el criterio de valoración de 4 DPI. El título de grupo del grupo de baloxavir fue significativamente menor que el del grupo de placebo a los 3 y 4 DPI (**p <0,001) y menor que el del grupo de oseltamivir a los 4 DPI (p <0,001). Todos (es decir, 4/4) los donantes tratados con oseltamivir y todos (es decir, 4/4) los tratados con placebo estaban excretando virus infeccioso en el criterio de valoración de 4 DPI. El título del grupo de oseltamivir fue significativamente menor que el título del grupo de placebo a los 3 DPI (p <0,05).(B)Resultados de qRT-PCT. Se midió el ARN vírico presente en el lavado nasal de todos los animales en todos los puntos de muestreo. No hubo diferencias significativas entre los números de copia medios de los grupos. La farmacocinética (FC) del grupo de baloxavir 72 h después del tratamiento fue de 24,5 ± 4,03 ng/ml de baloxavir en plasma ± DE. XA, baloxavir; OST, oseltamivir.

[0329] Figura 13. Resultados de los hurones receptores del experimento 3 del ejemplo 2. (A)Resultados de DICT<50>.

[0330] 2/4 donantes tratados con baloxavir estaban excretando virus infeccioso en el criterio de valoración de 4 DPI, en comparación con 4/4 donantes del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo(B)qRT-PCR. Se detectó ARN vírico en 3/4 donantes tratados con baloxavir en comparación con 4/4 donantes del grupo de oseltamivir y 4/4 del grupo de placebo(C)Serología. Todos los sueros de receptores de todos los grupos mostraron producción de anticuerpos para el virus de donante. Los receptores del grupo de baloxavir con DICT<50>-negativa (2/4) mostraron títulos de anticuerpos reducidos (factor de multiplicación >16) en comparación con los hurones con DICT<50>-positiva. "-" no se observó producción de anticuerpos. * El hurón 11333 (placebo) alcanzó el criterio de valoración humano a los 4 DPE, por lo tanto, se ha excluido del análisis de serología.

[0332] Figura 14. Sumario del efecto de baloxavir en hurones donantes en los experimentos 1-3 del ejemplo 2.El tratamiento con baloxavir reduce rápidamente la excreción de virus infeccioso en las vías respiratorias altas. Ningún hurón tratado con baloxavir excretó virus infeccioso detectable en el criterio de valoración del donante en cada experimento.

[0334] Figura 15. Sumario del efecto de baloxavir sobre la transmisión por contacto en los experimentos 1-3 del ejemplo 2.El grupo de placebo muestra que la frecuencia de transmisión por contacto de A/Perth/265/2009 a hurones no sometidos a tratamiento previo es del 100 % en el modelo usado. El tratamiento con oseltamivir no reduce la transmisión por contacto a los hurones no sometidos a tratamiento previo. El 100 % de los receptores de oseltamivir muestran pruebas de infección en DICT<50>, qRT-PCR y serología en todas las condiciones experimentales. El tratamiento con baloxavir reduce la frecuencia de transmisión por contacto en comparación con oseltamivir o placebo. El tratamiento con baloxavir al 1 DPI reduce la frecuencia de excreción de virus infeccioso en los receptores al 25 %. No se observó diferencia cuando el coalojamiento de los receptores se retrasa 24 h. El tratamiento con baloxavir a los 2 DPI reduce la frecuencia de excreción de virus infeccioso en los receptores al 50 %. Sin embargo, se detectaron copias víricas y producción de anticuerpos en suero en receptores del grupo de baloxavir que no mostraron pruebas de excreción infecciosa en las vías respiratorias altas (VRA), lo que indica exposición al virus pero no una infección productiva.

[0336] Figura 16.Simulación de la prevención de una epidemia de gripe durante una gripe estacional mediante tratamiento con baloxavir. Para más detalles, véase el texto.

[0338] Figura 17.Simulación de la prevención de una pandemia de gripe mediante tratamiento con baloxavir. Para más detalles, véase el texto.

[0340] Figura 18.Escala canadiense de enfermedades respiratorias agudas y gripe (CARIFS)

[0342] Los ejemplos ilustran la invención.

[0344] Ejemplo 1: Baloxavir marboxil previene la transmisión por gotículas respiratorias.

[0346] Diseño de estudio

[0348] El diseño de estudio de este experimento se muestra en la figura 1(A) y (B). En este experimento, se administró baloxavir una vez a los hurones como suspensión s.c. con 1 mg/kg en 4 localizaciones diferentes en el lomo. Se administró fosfato de oseltamivir (5 mg/kg) por vía oral dos veces al día durante 5 días.

[0350] El experimento está diseñado con 3 ramas: baloxavir, oseltamivir y ningún fármaco. Para cada rama había 4 grupos de animales. En cada grupo había animales donantes y animales testigo que se exponen a donantes infectados, ya sea por contacto directo o por una vía de gotículas respiratorias.

[0351] El experimento se realizó como sigue:

[0352] Día 0:

[0353] A todos los animales se les implantó un chip de identificación y de monitorización de temperatura. Se infectó a cuatro hurones (donantes) con el virus de la gripe A. Se administró A/England/195/2009 natural (RG) a una dosis de 104 ufp por vía intranasal bajo anestesia ligera (ketamina/xialzina) en un volumen total de 200 microlitros. Día 1:

[0354] 24 horas después de la infección, se realizaron lavados nasales a los 4 hurones infectados. Los lavados nasales se analizaron de inmediato sembrando en placas sobre células MDCK recién preparadas para detectar virus infecciosos y llevando a cabo RT-PCR para determinar la carga de ARN vírico. A continuación, se trató a cada hurón donante con baloxavir, fosfato de oseltamivir o solo con vehículo. El baloxavir se administró una vez por vía subcutánea en 4 localizaciones en el lomo con 1 mg/1 ml/kg por inyección (total 4 mg/4 ml/kg). Después de la dosificación de baloxavir, se recogieron muestras de sangre (mínimo 200 |jl) de los animales donantes a las 48 h y 144 h, respectivamente, para el análisis farmacocinético (FC).

[0355] Se administró por vía oral una dosis de 5 mg/kg de fosfato de oseltamivir dos veces al día durante 5 días, lo que se considera equivalente a la dosis estándar para humanos adultos de 75 mg para el tratamiento(J Antimicrob Chemother2014; 69: 2458-2469). Después de la administración del fármaco el día 1, se introdujo un animal testigo en la misma jaula que cada donante infectado (animal DC) y se introdujo un animal testigo en la jaula contigua (animal RD). A los animales testigo no se les trató con ningún fármaco.

[0356] Día 2:

[0357] Se realizaron lavados nasales a todos los hurones el día 2 y cada día posteriormente hasta que finalizó el experimento, comenzando con los animales RD, a continuación con los animales DC y terminando con los donantes. El ensayo de calvas se realizó de inmediato en el lavado nasal. El ARN del virus también se monitorizó por RT-PCR. Se realizó un seguimiento diario de los signos clínicos, incluyendo temperatura, pérdida de peso y signos respiratorios. Además, se monitorizó el virus exhalado en la respiración de los 4 animales donantes colocándolos en una cámara durante 10 minutos y tomando muestras de aire usando células MDCK testigo. Día 4:

[0358] Por la mañana, se retiraron los 4 animales DC y 4 RD y se alojaron por separado. Por tanto, los testigos habían estado expuestos desde el día 1-4 postinfección del donante (72 horas).

[0359] El experimento se terminó cuando todos los animales tuvieron lavados nasales negativos para virus durante dos días consecutivos.

[0360] Materiales y procedimientos

[0361] Estudios en animales

[0362] Se usaron hurones hembra (20-24 semanas de edad) que pesaban 750-1000 g. Después de la aclimatación, se obtuvieron sueros y se analizaron por HAI para detectar anticuerpos contra A/England/195/09, un H1N1 pandémico. Todos los hurones eran negativos para anticuerpos contra la gripe al comienzo de los experimentos. Se midió el peso corporal diariamente. Se siguieron procedimientos estrictos para prevenir la contaminación cruzada anómala entre animales. Los animales testigo se manipularon antes que los animales inoculados, y se descontaminaron las superficies de trabajo y los guantes de los manipuladores entre animales. Para la inoculación, se anestesió ligeramente a los hurones con ketamina (22 mg kg-1) y xilazina (0,9 mg kg-1) y se les inoculó por vía intranasal el virus diluido en PBS (0,1 ml por cada fosa nasal). Se realizaron lavados nasales diarios a todos los animales, mientras estaban conscientes, instilando 2 ml de PBS en las fosas nasales, y se recogió el expectorado en tubos de centrífuga de 250 ml modificados. Se usó el expectorado de lavado nasal para la valoración del virus mediante el ensayo de calvas. El límite de detección de virus en los ensayos de calvas fue de 10 u.f.p. ml'1. Monitorización de hurones y medición de actividad

[0363] Se pesaron los hurones diariamente después de la infección. Se midió la temperatura corporal diariamente mediante un transpondedor IPTT-300 subcutáneo (Plexx B.V, Países Bajos). La actividad del hurón se puntuó manualmente a la misma hora todos los días. Esta puntuación se basó en una publicación previa Oh DY, Barr IG, Hurt AC (2015) PLoS ONE 10(3): e0118780. Se observó a los hurones mientras estaban en sus jaulas, al menos 4 horas después del lavado nasal para minimizar la interrupción de su actividad.

[0364] Células

[0365] Las células MDCK se mantuvieron en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; Gibco, Invitrogen) complementado con FBS al 10 % y penicilina/estreptomicina al 1 % (Sigma-Aldrich).

[0366] Ensayo de calvas

[0367] Los ensayos de calvas se realizaron usando células MDCK. Las capas de células inoculadas con 100 |jl de muestras diluidas en serie se recubrieron con agarosa al 0,6 % (Oxoid) en DMEM complementado con 2 jg de tripsina (Worthington) ml-1 y se incubaron a 37 °C durante 3 días.

[0368] Preparación de muestras para PCR ultrarrápida

[0369] Se usaron 140 j l de lavado nasal de hurón para extraer ARN usando el minikit de ARN vírico Qiagen (n.° cat./ID: 52904), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

[0370] PCR ultrarrápida

[0371] Se realizó PCR ultrarrápida usando un sistema 7500 Real Time PCR (Abi) en reacciones de 20 j l usando reactivos de RT-PCR AgPath-ID™ One-Step 10 pl de tampón de RT-PCR (2X) (Thermo Fisher, n.° de cat. 4387391), 4 pl de ARN, 0,8 pl de cebadores directos ( 5'GACCRATCCTGTCACCTCTGA 3' , SEQ ID NO: 1) e inversos ( 5’ AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA31 _ SEQ ID NO: 2) y 0,4 j l de sonda ( 5’ FAM-TCGAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-BHQ1 3’ , SEQ ID NO: 3). La retrotranscripción se llevó a cabo a 45 °C durante 10 min. Las condiciones de amplificación por PCR consistieron en 95 °C durante 15 s y 60 °C durante 1 min después de una etapa de desnaturalización inicial a 95 °C durante 10 min. En total, se realizaron 40 ciclos. Para cada muestra, se determinó el valor de Ct para el gen M diana. El gen M es un gen de la gripe que codifica las 2 proteínas de matriz M1 y M2. El gen M se detecta en PCR y se puede usar para cuantificar el virus de la gripe. En base a las curvas estándar, se calcularon los números absolutos de copias para establecer si el hurón era positivo para gripe A.

[0372] Declaración sobre ética

[0373] Todos los trabajos realizados fueron aprobados por el comité local de seguridad de manipulación genética (GM) del Imperial College London, St. Mary's Campus (número de centro GM77) y el Ejecutivo de Salud y Seguridad del Reino Unido. Toda la investigación con animales descrita en este estudio se llevó a cabo con una licencia del Ministerio del Interior del Reino Unido, P48DAD9B4.

[0374] Todos los procedimientos descritos anteriormente son comúnmente conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en el documento"Contact transmission of influenza virus between ferrets imposes a looserbottleneck than respiratory droplet transmission allowing propagation of antiviral resistance".Frise R, Bradley K, van Doremalen N, Galiano M, Elderfield RA, Stilwell P, Ashcroft JW, Fernandez-Alonso M, Miah S, Lackenby A, Roberts KL, Donnelly CA, Barclay WS.Sci Rep.19 de julio de 2016;6:29793. doi: 10.1038/srep29793.PMID:27430528.

[0375] Resultados y análisis

[0376] Los resultados del ejemplo 1 se muestran en las figuras 2 y 3. Estos resultados muestran que la transmisión por gotículas respiratorias se produjo con menos frecuencia en los sujetos tratados con baloxavir en comparación con los sujetos tratados con oseltamivir o placebo (es decir, 25 % de transmisión frente a 100 % de transmisión). Además, se observó un retraso en el tiempo de excreción para los animales testigo expuestos a donantes tratados con oseltamivir o baloxavir en comparación con el control. El tiempo medio hasta la excreción del virus fue de 4,25 días, frente a 5,5 días para los testigos de contacto directo expuestos a donantes tratados con oseltamivir o bien baloxavir. Para los testigos expuestos a gotículas respiratorias, el tiempo medio hasta la excreción del virus fue de 4,5 días para los animales donantes no tratados frente a 9,3 días para los animales tratados con oseltamivir y 8 días para el testigo tratado con baloxavir que adquirió la infección por la vía RD.

[0377] Tomados conjuntamente, esto muestra que el tratamiento con baloxavir de hurones donantes infectados por un virus pH1N1 2009 retrasó la transmisión a hurones testigo convivientes y disminuyó la probabilidad de transmisión por la vía de las gotículas respiratorias.

[0378] Ejemplo 2: Baloxavir marboxil previene la transmisión por contacto directo.

[0379] Materiales y procedimientos

[0380] Antivíricos y administración de fármacos

[0382] La forma activa ácido de baloxavir (S-033447, a continuación en el presente documento BXA) y el profármaco fosfato de oseltamivir (a continuación en el presente documento OST) fueron proporcionados amablemente por Shionogi & Co., Ltd., Japón. El vehículo para la administración de BXA fue metilcelulosa (Sigma-Aldrich, Australia) en solución acuosa al 0,5 % p/v preparada con agua estéril (a continuación en el presente documento, solución MC). Se preparó BXA en suspensión con solución MC (1 mg/ml) usando un mortero y una mano de mortero de ágata, y se administró a animales anestesiados reversiblemente en un único tratamiento que consistía en 4 inyecciones subcutáneas en 4 localizaciones en la región dorsal (dosis total de 4 mg/kg por animal). Los animales del grupo de placebo recibieron una dosificación idéntica usando solución MC (1 ml/kg) sola. Se prepararon dosis de OST (10 mg/ml) en solución de azúcar (1 g/ml) y se administraron dos veces al día (intervalo de 8 h) a hurones no sedados por vía oral (dosis total de 10 mg/kg/día).

[0384] Células y virus

[0386] Se mantuvieron células de riñón canino Madin-Darby (MDCK) en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, Gibco) complementado con suero fetal bovino al 10 % (v/v), GlutaMAX 2 mM, bicarbonato de sodio al 0,05 %, aminoácido no esencial MEM 100 |<j>M, HEPES 20 mM y 50.000 U de penicilina-estreptomicina (mezcla completa denominada "medio de crecimiento").

[0388] Se usó el virus de la gripe A/Perth/265/2009 H1N1pdm09 para la inoculación a animales. Este virus se aisló de una muestra clínica (Lab n.° 910894) en el Centro Colaborador de la Organización Mundial de la Salud para Referencia e Investigación sobre la gripe (WHOCCRRI, Melbourne, Australia). Los virus se purificaron en placa y se propagaron en células MDCK.

[0390] Animales

[0392] Se obtuvieron machos y hurones exogámicos(Mustela purtoríus furo)de >12 semanas de edad y un peso entre 600 y 1800 g de criadores independientes, y se confirmó que eran seronegativos contra antígenos de gripe recientemente circulantes (A/Michigan/45/2015, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, B/Phuket/3073/2013, B/Brisbane/60/2008) mediante el ensayo de inhibición de la hemaglutinación (HI). Se implantaron chips de identificación/monitorización de temperatura (LifeChip, Bio-Thermo) subcutáneamente en la región dorsal de cada hurón. Se monitorizó a los animales al menos una vez al día para detectar cambios de temperatura y peso, que tuvieron accesoad libituma alimento en gránulos (Eukanuba) y agua, y se les proporcionó alimento húmedo complementario (Hill's Pet Nutrition, Australia) según lo requerido éticamente (por debajo del 90 % del peso inicial). La recogida de muestras de rutina se realizó bajo sedación usando inyección intramuscular de xilazina (5 mg/kg) (Troy Laboratories), mientras que la inoculación de virus y la administración subcutánea de fármacos se realizó bajo anestesia reversible mediante inyección intramuscular de ketamina (10 mg/kg) (Troy Laboratories) en combinación con midazolam (0,5 mg/kg) (Troy Laboratories) y medetomidina (0,02 mg/kg) (Troy Laboratories), que fue antagonizada por atipamezol (0,01 mg/kg) (Troy Laboratories). En el criterio de valoración, a los hurones se les inyectó i.m. un anestésico no reversible que consistía en ketamina (hasta 25 mg/kg) y xilazina (hasta 5 mg/kg), antes del sacrificio por sobredosis de pentobarbital sódico (Troy Laboratories) (hasta 1000 mg/kg) por inyección intracardiaca.

[0394] Se realizaron estudios en hurones en la Instalación de Recursos Biológicos (nivel de contención física 2) en el Instituto Peter Doherty (Melbourne, Australia), de acuerdo con el código de prácticas australiano del Gobierno de Australia, el Consejo Nacional de Salud e Investigación Médica para el cuidado y uso de animales con propósitos científicos (8.a edición). Los procedimientos del estudio se aprobaron (AEC n.° 1714278) por el Comité de Ética Animal de Bioquímica y Biología Molecular, Ciencias Dentales, Medicina, Microbiología e Inmunología y Cirugía de la Universidad de Melbourne.

[0396] Virología

[0398] Las muestras de lavado nasal se almacenaron con seroalbúmina bovina (BSA) al 1 % p/v a -80 °C antes de la determinación del título vírico mediante ensayo de DICT<50>. En resumen, se diluyeron las muestras en serie en factor en 10 en medio de crecimiento libre de suero que contenía tripsina tratada con TPCK (4 jg/ml; Sigma-Aldrich) y se añadieron por triplicado a placas de 96 pocillos de fondo plano que contenían una monocapa confluente de células MDCK en cada pocillo. Después de la infección, se mantuvieron las células en medio de crecimiento libre de suero (que contenía 4 jg/m l de tripsina tratada con TPCK) durante 96 h a 37 °C, CO<2>al 5 %, antes de la evaluación del crecimiento vírico mediante ensayo de hemaglutinación usando glóbulos rojos (RBC) de pavo al 1 %. Los títulos de DICT<50>se calcularon mediante el procedimiento de Reed y Muench (1938) (Reed, L.J., y Muench, H. (1938),American Journal of Epidemiology27, 493-497).

[0400] RT-PCR cuantitativa ultrarrápida

[0401] Se extrajo ARN vírico de 200 |jl de muestras de lavado nasal usando el kit de aislamiento NucleoMag Vet (Macherey Nagel) en la plataforma KingFisher Flex (ThermoFisher Scientific) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se determinó el número de copias del gen M del virus de la gripe en 4 j l de ARN mediante RT-PCR cuantitativa ultrarrápida realizada usando el kit SensiFAST Probe Lo-ROX One-Step qRT-PCR System (Bioline) en el sistema de PCR ultrarrápida Abi 7500 (Applied Biosystems) en las siguientes condiciones de ciclado: 45 °C durante 10 min, 1 ciclo; 95 °C durante 2 min, 1 ciclo; 95 °C durante 5 s y, a continuación, 60 °C durante 30 s, 40 ciclos. Se cuantificó el ARN de muestra usando estándares de ARN de gripe A de número de copias conocido, proporcionados amablemente por Seqirus, Australia. Los conjuntos universales de cebadores/sondas de gripe A ultrarrápida fueron proporcionados amablemente por la Delegación sobre gripe de los CDC (Atlanta, EE. UU.) (secuencias disponibles previa solicitud). Los resultados se analizaron con el programa informático 7500 Fast System SDS v1.5.1.

[0403] Serología

[0405] Se recogieron los sueros de las muestras de sangre del receptor en el criterio de valoración por centrifugación, y se eliminaron los inhibidores no específicos de la aglutinación por tratamiento con la enzima destructora de receptores (RDE) (Denka Seiken) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los sueros tratados se adsorbieron con RBC de pavo antes del ensayo de HI para eliminar los factores de aglutinación no específicos. En resumen, los sueros (inicialmente, dilución 1:20) se diluyeron en serie en un factor de 2 en PBS en placas de 96 pocillos con fondo en V (fila final dejada como control negativo de PBS). Se mezcló virus A/Perth/265/2009 ajustado a 4 unidades de hemaglutinación en 25 j l en todos los pocillos de muestra durante 1 h de incubación a temperatura ambiente, seguido de 45 min de incubación de RBC de pavo al 1 %. La inhibición positiva se definió como la aparición de un patrón de "lágrima" en ejecución comparable al control negativo de PBS. El título de HI se calculó como el recíproco de la dilución en suero más alta a la que se inhibió la aglutinación.

[0407] Análisis farmacocinético antivírico

[0409] En el criterio de valoración, se recogieron muestras de sangre de donantes tratados con BXA y placebo en tubos heparinizados y se aisló el plasma mediante centrifugación. Se almacenaron las muestras de plasma a -80 °C hasta su transporte a las instalaciones analíticas de Shionogi & Co., Ltd.

[0411] Análisis estadísticos

[0413] El análisis de datos se realizó usando Graphpad Prism (GraphPad Software, v5.01). Los títulos víricos de los lavados nasales de todos los hurones obtenidos diariamente después de la inoculación/exposición se compararon mediante un análisis de varianza (ANOVA) bidireccional emparejado, seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey. Se realizó RT-PCR cuantitativa ultrarrápida en ARN de control de gripe de número de copias conocido para generar una curva estándar (regresión lineal de valores de umbral de ciclo (Ct) de gripe frente a número de copias). Se calcularon los números de copias de virus presentes en muestras de ARN de lavado nasal en el mismo ensayo usando la fórmula de la curva estándar. Los números de copias de gripe A para cada grupo de hurones se compararon mediante un ANOVA bidireccional emparejado, seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey. El valor de p<0,05 se consideró estadísticamente significativo.

[0415] Diseño de estudio

[0417] La evolución temporal de los experimentos 1-3 se muestra en las figuras 4, 8 y 11.

[0419] Grupos experimentales y pautas de tratamiento

[0421] Este estudio consistió en tres experimentos separados usando diferentes pautas de tratamiento antivírico y momentos de coalojamiento de animales no sometidos a tratamiento previo. En cada experimento, se asignaron aleatoriamente veinticuatro hurones a tres grupos (n = 8): BXA, OST y placebo. Dentro de cada grupo,n= 4 hurones fueron designados como hurones donantes tratados, yn= 4 como receptores no sometidos a tratamiento previo. En 0 DPI (días postinoculación) para cada experimento, a todos los hurones donantes (cada uno alojado individualmente) se les inoculó por vía intranasal gripe A/Perth/265/2009 a 10<3>dosis infecciosa del 50 % en cultivo tisular (DICT<50>) en 40 j l de solución salina tamponada con fosfato (PBS). Como se describe anteriormente, los donantes en los grupos de BXA y de placebo recibieron un único tratamiento antivírico, mientras que los donantes del grupo de OST fueron tratados diariamente hasta el criterio de valoración (excluyendo el día del sacrificio). En el punto temporal designado, los hurones receptores no sometidos a tratamiento previo se coalojaron con hurones donantes tratados (1:1 por jaula) durante un periodo de exposición de contacto de 48 h.

[0423] Experimento 1: El tratamiento antivírico para todos los donantes comenzó el 1 DPI, y los hurones receptores no sometidos a tratamiento previo se coalojaron inmediatamente después del tratamiento. Se monitorizó diariamente el peso corporal y la temperatura de todos los animales. Se recogieron muestras diarias de lavado nasal de 1 ml de PBS de 1 DPI a 3 DPI para animales donantes, y de 1 día postexposición (DPE) a 10 DPE para animales receptores. Se sacrificó a los donantes el 3 DPI (2 DPE) y se extrajo sangre de los hurones tratados con BXA y placebo mediante punción cardíaca. Se sacrificó a los receptores el 10 DPE.

[0425] Experimento 2: El tratamiento antivírico comenzó el 1 DPI y el coalojamiento de los receptores se retrasó hasta 24 h después del tratamiento (2 DPI). Se monitorizó diariamente el peso corporal y la temperatura de todos los animales. Se recogieron muestras diarias de lavado nasal usando 1 ml de PBS de 1 DPI a 4 DPI para animales donantes, y de 1 DPE a 10 DPE para animales receptores. Se sacrificó a los donantes el 4 DPI (2 DPE) y se extrajo sangre de los hurones tratados con BXA y placebo mediante punción cardíaca. Los receptores se mantuvieron hasta el 16 DPE, momento en el que se extrajo sangre mediante punción cardíaca.

[0427] Experimento 3: El tratamiento antivírico comenzó el 2 DPI y los receptores se coalojaron inmediatamente después. Se monitorizó diariamente el peso corporal y la temperatura de todos los animales. Se recogieron muestras diarias de lavado nasal usando 1 ml de PBS de 1 DPI a 4 DPI para animales donantes, y de 1 DPE a 10 DPE para animales receptores. Se sacrificó a los donantes el 4 DPI (2 DPE) y se extrajo sangre de los hurones tratados con BXA y placebo mediante punción cardíaca. Los receptores se mantuvieron hasta el 16 DPE, momento en el que se extrajo sangre mediante punción cardíaca.

[0429] Resultados y análisis

[0431] En tres experimentos independientes, un único tratamiento con BXA de hurones infectados por H1N1pdm09 redujo significativamente los títulos de virus infeccioso en las VRA en comparación con placebo y oseltamivir (fig. 14). Los títulos víricos medios del grupo de baloxavir se redujeron significativamente en comparación con el grupo de placebo 24 horas después del tratamiento en todas las condiciones del experimento(p<0,05). Mientras que los títulos infecciosos altos se mantuvieron en el criterio de valoración de donante para los donantes del grupo de oseltamivir y del grupo de placebo, ningún donante tratado con baloxavir (es decir, 0/4) fue DICT<50>-positivo en el criterio de valoración en todas las pautas de experimento. El efecto del baloxavir es superior al del oseltamivir en los donantes tratados (fig. 15). Todos (es decir, 4/4) los donantes tratados con oseltamivir fueron DICT<50>-positivos en el criterio de valoración en todas las condiciones; no hubo reducción en comparación con todos (es decir, 4/4) los donantes tratados con placebo.

[0433] En el modelo en hurón usado, los receptores del grupo de placebo demuestran que la frecuencia de transmisión por contacto de A/Perth/265/2009 a hurones no sometidos a tratamiento previo es del 100 % (fig. 14-15). Los receptores del grupo de placebo muestran una cinética de virus sólida medida tanto por DICT<50>como por qRT-PCR, y producción de anticuerpos séricos de título alto (>1280) en el criterio de valoración de receptor (fig. 7, 10, 13). Los autores de la invención observaron que el tratamiento con oseltamivir no reduce la transmisión por contacto a los hurones no sometidos a tratamiento previo. El 100 % de los receptores de oseltamivir mostraron parámetros de infección que son muy similares a los de placebo, independientemente del momento del tratamiento antivírico (fig. 7, 10, 13). Por el contrario, el tratamiento con baloxavir dentro de las 24 h posteriores a la infección dio como resultado una reducción de la transmisión del 75 %. Tanto en el exp. 1 como en el 2, solo 1/4 receptores del grupo de baloxavir mostró una curva cinética de DICT<50>de virus que indica una infección similar al placebo (fig.

[0434] 7, 10). Cuando el tratamiento con baloxavir se administró 48 h después de la infección, se observó una reducción de la transmisión del 50 % (fig. 13).

[0436] La abundancia de ARN vírico en las VRA de hurones tratados con baloxavir no se correlaciona con los cambios en el título de virus infeccioso medido por cultivo celular.

[0438] Si bien se detectó ARN vírico en 2/4 receptores del grupo de baloxavir en el exp. 1, los números de copias son próximos al umbral de detección positiva, y la cinética del virus no se asemeja a una curva de virus del grupo de placebo (fig. 7).

[0440] A pesar de la presencia de excreción de virus en las VRA detectada por qRT-PCR, estos virus no parecen ser capaces de producir una infección detectable en cultivo celular.

[0442] Se detectaron respuestas producción de anticuerpos en los receptores del grupo de baloxavir DICT<50>-negativos en el exp. 2 (fig. 10, 15563) y 3 (fig. 13, 96642,14779), pero se redujeron en un factor de 16-32 en comparación con los títulos en los receptores del grupo de placebo.

[0444] La concentración plasmática media de baloxavir alcanzó el máximo 3 horas después de la dosis (26,1 ng/ml) y, a continuación, disminuyó gradualmente hacia el último punto de muestreo (168 horas después de la dosis, 9,08 ng/ml). Este resultado indicó que la administración subcutánea única de una suspensión de baloxavir a 4 mg/kg (4 localizaciones, 1 mg/kg por localización) podía mantener la concentración plasmática de baloxavir durante una semana o más en el hurón.

[0446] Además, los datos muestran claramente que el tratamiento con baloxavir reduce la transmisión por contacto.

[0447] Ejemplo 3: Modelización de transmisión de gripe para baloxavir

[0448] En base al sorprendente hallazgo de que el baloxavir marboxil pueda prevenir la transmisión del virus de la gripe, se pudo realizar una simulación que muestre el efecto del tratamiento con baloxavir sobre los brotes de gripe. También se consideró para esta simulación el impacto de baloxavir en el tiempo hasta el cese de la excreción vírica (Tshed) observado en un ensayo clínico de fase III (NCT02954354).

[0449] La simulación se realizó proporcionando el porcentaje esperado de pacientes infectados durante las epidemias de gripe y las pandemias de gripe mediante el desarrollo de un modelo específico que tiene en cuenta

[0450] - las características sociales / de la gripe

[0451] - los efectos de los diferentes tratamientos

[0452] Sobre el modelo

[0453] Los ejemplos 1 y 2 como se describen anteriormente muestran que el tratamiento con baloxavir no solo reduce la excreción vírica sino que, sorprendentemente, también reduce la transmisión. La información sorprendente e inesperada de que baloxavir marboxil se puede usar para reducir la transmisión es el requisito previo para la simulación realizada a continuación, que simula el efecto del tratamiento con baloxavir marboxil durante una epidemia de gripe o pandemia de gripe (emergente).

[0454] Para esta simulación se ha usado el modelo epidemiológico SEIR. Descrito por primera vez a principios del siglo XX (Kermack y McKendrick), dicho modelo caracteriza el número de infecciones en una población integrando diferentes tipos de individuos: individuos susceptibles, expuestos, infectados y recuperados. Dicho modelo se utiliza ampliamente en la actualidad para planificación de pandemias de gripe, decisiones políticas con respecto a acopio y despliegue de antivíricos y otras intervenciones y se describe, por ejemplo, en Murillo,J TheorBiol.2013.

[0455] 332:267-290.

[0456] Supuestos

[0457] 1) La excreción vírica se correlaciona con la infectividad con una infectividad constante durante el periodo de excreción vírica.

[0458] 2) Los resultados de fase III proporcionan estimaciones correctas del tiempo esperado de excreción para los tratamientos con baloxavir y oseltamivir

[0459] 3) Todos los pacientes tendrán:

[0460] - el mismo periodo de latencia

[0461] - la misma duración natural de la enfermedad

[0462] - la misma tasa de infección durante el periodo de la enfermedad

[0463] - ninguna intervención específica que no sea el tratamiento

[0464] - ningún efecto de la edad, la geografía o el estado de salud sobre la susceptibilidad

[0465] Resultados y análisis

[0466] Reducción significativa de los porcentajes de pacientes infectados con baloxavir en comparación con placebo u oseltamivir tanto en escenarios estacionales (véase la figura 15) como pandémicos (véase la figura 16).

[0467] Los resultados muestran que el % de pacientes tratados requerido para reducir a la mitad el número de pacientes infectados es de aproximadamente un 15 % de los tratados o un 30 % de los tratados en epidemia o pandemia, respectivamente. El umbral exacto para clasificar un brote de gripe como "epidemia" o "pandemia" cambia cada año. Sin embargo, a la vista de los resultados obtenidos, es altamente probable que el tratamiento con baloxavir marboxil de al menos un 15 % o al menos un 30 % de las personas infectadas prevenga una epidemia de gripe o una pandemia de gripe, respectivamente.

[0468] Ejemplo 4: Identificación de la transmisión en base a la secuencia

[0469] Se puede llevar a cabo un análisis filogenético (árbol de genoma completo con soporte de reposición de topología de árbol o agrupamiento) y/o medición de la distancia genética entre poblaciones emparejadas (L1-Norm) para identificar pares de transmisión. Dos factores influyen en el resultado del análisis: en primer lugar, la cantidad de datos de secuencia disponibles. Para maximizar este, se puede llevar a cabo una secuenciación de nueva generación del genoma completo (WGNGS) para incrementar la granularidad y la potencia discriminatoria (en comparación con la secuenciación de Sanger y/o la secuenciación de gen único). En segundo lugar, la diversidad en la comunidad/metapoblación muestreada, de modo que se puede realizar con alta confianza la evaluación de que virus dentro de parejas del hogar son más similares entre sí en comparación con un grupo externo. Un mayor número de secuencias obtenidas de una comunidad incrementa la diversidad en este grupo y, por tanto, facilita la identificación de pares de transmisión reales. Dado que no se puede llevar a cabo la secuenciación para personas no inscritas en el estudio, los autores de la invención realizarán este análisis para un subgrupo de pacientes, centrándose en sitios que han inscrito un número adecuado de pacientes de referencia (PR) con secuencias únicas. Además, los autores de la invención intentarán obtener secuencias de bases de datos comunitarias para la misma temporada (se espera que esta ruta aporte poco, pero se seguirá).

[0471] En un estudio previo que investigaba la evolución del virus de la gripe en la cohorte HIVE, se analizaron 47 pares de transmisión y se pudieron distinguir en base a la secuencia. Treinta y cuatro pares de los mismos eran de una temporada (H3N2, 2014/2015). En base en estos resultados, se espera que >15 pacientes de referencia (PR), preferentemente al menos 30-40 pacientes de referencia (PR) serán suficientes para desarrollar una distribución comunitaria de distancias pareadas, que refleje la diversidad de la comunidad, de modo que se puedan inferir acontecimientos de transmisión en el hogar con datos de secuencia, como se describe en McCrone, John T.,et al."Stochastic processes constrain the within and between host evolution of influenza virus."Elife7 (2018): e35962. Se pueden usar los procedimientos como se describen en McCrone(Elife7 (2018): e35962), tales como el procedimiento que se describe en el mismo para la secuenciación. En el contexto de la presente invención, el análisis se centra preferentemente en el análisis de muestras de virus de gripe A.

[0473] Para comprender mejor el procedimiento que se usó para identificar los pares de transmisión, así como las consideraciones de fondo de este procedimiento, a continuación se analiza brevemente el contenido del documento de McCrone(Elife7 (2018): e35962).

[0475] En McCrone(Elife7 (2018): e35962) se usó tanto el vínculo epidemiológico como la relación genética de los virus en los hogares para definir pares de transmisión y excluir la confusión de la diversidad de fondo en la comunidad.

[0476] Más específicamente, en McCrone(Elife7 (2018): e35962) se describe que los estudios de poblaciones de virus de gripe A (VGA) en sistemas animales y humanos sugieren que la mayoría de las variantes mononucleotídicas intrahuésped (iSNV) son raras y que las poblaciones intrahuésped están sujetas a una fuerte selección purificadora. En McCrone(Elife7 (2018): e35962) se usó secuenciación de nueva generación de poblaciones de virus de la gripe dentro del huésped para definir la dinámica evolutiva del VGA dentro y entre huéspedes humanos. Se aplicó una cartera de análisis de referencia para identificar iSNV y caracterizar la diversidad genética de las poblaciones de H3N2 y H1N1 recogidas durante cinco temporadas pospandémicas de individuos inscritos en un estudio prospectivo de la gripe en el hogar. En McCrone(Elife7 (2018): e35962), los autores encuentran que las poblaciones intrahuésped son dinámicas y están limitadas por la deriva genética y la selección purificadora. En el estudio de McCrone(Elife7 (2018): e35962), la selección positiva rara vez amplificó una variante beneficiosade novoa una frecuencia mayor de un 2 %. Al contrario de lo que se ha informado previamente para la transmisión de la gripe humana, pero consecuente con lo que se ha observado en muchos otros virus con distintos modos de transmisión, en McCrone(Elife7 (2018): e35962) se identificó un gran obstáculo para una transmisión efectiva que limita la transmisión de variantes de baja frecuencia.

[0478] En McCrone(Elife7 (2018): e35962), los individuos dentro de un hogar se consideraron un par de transmisión vinculado epidemiológicamente si ambos eran positivos para el mismo subtipo de virus de la gripe en un plazo de 7 días entre sí. Varios hogares tuvieron 3 o 4 casos sintomáticos dentro de este margen de una semana, lo que sugiere cadenas de transmisión más largas.

[0480] Las variantes mononucleotídicas intrahuésped (iSNV) se identificaron en McCrone(Elife7 (2018): e35962) 2014) usando su cartera de análisis empíricamente validados. Consecuente con estudios previos de infecciones naturales y de otras, los autores de McCrone(Elife7 (2018): e35962) encontraron que la diversidad dentro del huésped de las poblaciones del virus de gripe A (VGA) estacional es baja. Doscientas cuarenta y tres de las 249 muestras tenían menos de 10 iSNV minoritarias (mediana 2, IIC 1-3). El número de iSNV minoritarias identificadas no se vio afectado por el día de la infección, la carga vírica, el subtipo o el estado de vacunación.

[0482] En McCrone(Elife7 (2018): e35962), las variantes mononucleotídicas se distribuyeron de manera uniforme en todo el genoma. Las variantes minoritarias rara vez se compartieron entre múltiples individuos. Un 98 % de las iSNV minoritarias solo se encontraron una vez, el 2,3 % se encontraron en dos individuos y no se encontraron iSNV minoritarias en tres o más individuos. El bajo nivel de diversidad compartida sugiere que las poblaciones dentro del huésped exploran distintas regiones del espacio de secuencias con escasas pruebas de evolución paralela. La proporción entre variantes no sinónimas y sinónimas fue de 0,75, y, dado el exceso de sitios no sinónimos en todo el genoma y dentro del gen HA, estos datos sugieren una selección purificadora significativa dentro de los huéspedes.

[0484] Se encontró en McCrone(Elife7 (2018): e35962) que la mayoría de las iSNV (68 %) encontradas en la segunda muestra eran nuevos o bien estaban previamente presentes por debajo del límite de detección del 2 %. Tomados conjuntamente, los datos de McCrone(Elife7 (2018): e35962) sugieren que la población presente en las vías respiratorias altas es altamente dinámica mientras mantiene un consenso estable, y que la selección positiva de variantes novedosas dentro de los huéspedes es ineficaz y rara vez amplifica una variante recién generada a una frecuencia mayor de un 2 %.

[0486] Los datos dentro del huésped de McCrone(Elife7 (2018): e35962) sugieren que es probable que las iSNV recién surgidas con efectos positivos de aptitud estén presentes a bajas frecuencias (<2 %) durante una infección aguda. Por lo tanto, el mantenimiento de estas mutaciones en las poblaciones huésped es altamente dependiente del obstáculo para la transmisión.

[0488] En McCrone(Elife7 (2018): e35962), se consideró que todos los individuos de un hogar con aparición de síntomas dentro de un margen de 7 días estaban vinculados epidemiológicamente. El donante en cada supuesto par se definió como el individuo con la aparición más temprana de los síntomas. Se ignoró un acontecimiento de transmisión si existieron múltiples donantes posibles con el mismo día de aparición de los síntomas. No se permitió que el donante y los receptores tuvieran la aparición de los síntomas el mismo día, a menos que los individuos fueran ambos casos de referencia en el hogar. En base a estos criterios, la cohorte de McCrone(Elife7 (2018): e35962) tuvo 124 supuestos acontecimientos de transmisión en el hogar durante cinco temporadas. De estos, 52 pares tenían muestras de calidad suficiente para la identificación fiable de iSNV de ambos individuos.

[0490] A continuación, se usaron datos de secuencia en McCrone(Elife7 (2018): e35962) para determinar cuáles de estos 52 pares epidemiológicamente vinculados representaban acontecimientos verdaderos de transmisión en el hogar, a diferencia de infecciones comunitarias coincidentes. La distancia genética entre las poblaciones de gripe de cada par en el hogar se midió mediante L1-Norm y estas distancias se compararon con las de pares comunitarios asignados aleatoriamente dentro de cada temporada.

[0492] En McCrone(Elife7 (2018): e35962) solo se consideró que los individuos eran un par de transmisión verdadero si tenían una distancia genética por debajo del percentil 5 de la distribución comunitaria de pares asignados aleatoriamente. Cuarenta y siete acontecimientos de transmisión en el hogar cumplieron este criterio. Entre estos 47 pares de transmisión de secuencia validada, tres no tenían iSNV en el donante y un donante adicional parecía tener una infección mixta. Estos cuatro acontecimientos de transmisión se eliminaron del análisis de obstáculos, ya que los donantes sin iSNV no aportan información y las infecciones mixtas vulneran los supuestos del modelo de independencia del sitio. Se estimó el obstáculo para la transmisión en los 43 pares de alta calidad restantes (37 H3N2, 6 H1N1).

[0494] Un obstáculo para la transmisión restringe la cantidad de diversidad genética que comparten ambos miembros de un par. En McCrone(Elife7 (2018): e35962) se encontró que pocas iSNV minoritarias eran polimórficas tanto en las poblaciones donantes como en las receptoras. Las iSNV minoritarias en el donante estaban ausentes o eran fijas en el receptor. La falta de sitios polimórficos compartidos sugiere un riguroso obstáculo eficaz en el que solo un alelo pasa del donante al receptor.

[0496] Los autores de McCrone(Elife7 (2018): e35962) concluyen que las infecciones agudas de gripe se caracterizan por una baja diversidad, una selección positiva limitada y grandes obstáculos para la transmisión. Debido a que se usaron virus recogidos durante cinco temporadas de gripe de individuos inscritos en una cohorte del hogar prospectiva, es probable que estas dinámicas sean ampliamente representativas de muchas infecciones de gripe estacional en regiones templadas. Los datos de McCrone(Elife7 (2018): e35962) sugieren que, incluso si la selección actúa por debajo del nivel de detección, es poco probable que dichas variantes raras se transmitan. Dado el tamaño de los obstáculos estimados, la probabilidad de transmisión es de aproximadamente un 1,7 % para una variante con una frecuencia del 1 % y del 3,3 % para una variante con una frecuencia del 2 %.

[0498] Ejemplo 5: Análisis farmacocinético en hurones

[0500] Materiales, procedimientos y resultados para animales

[0502] Se obtuvieron hembras y hurones exogámicos de 28 meses de edad y un peso entre 650 y 802 g de Japan SLC, Inc. La identificación se llevó a cabo etiquetando cada caja con un número secuencial en la parte frontal. Se monitorizaron las observaciones clínicas de los animales al menos una vez al día, y tuvieron accesoad libituma alimento en gránulos (LabDiet High Density Ferret Diet, Lab Supply, EE. UU.) y agua. En el criterio de valoración, se sacrificó a los hurones por desangrado bajo anestesia por inhalación con isoflurano (Pfizer). Los estudios en hurones se realizaron en Shionogi Pharmaceutical Research Center, Shionogi & Co., Ltd. (Osaka, Japón) de acuerdo con el protocolo de estudios en animales aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales en Shionogi.

[0504] Administración de fármacos y toma de muestras de sangre

[0506] La forma activa ácido de baloxavir (S-033447, a continuación en el presente documento XA) fue proporcionada por Test Substance Control Personnel, Shionogi & Co., Ltd., Japón. El vehículo para la administración de BXA fue metilcelulosa (Fuji-Film Wako, Japón) en solución acuosa al 0,5%p/v preparada con agua estéril (a continuación en el presente documento, solución MC). Se preparó BXA en suspensión con solución MC (1 mg/ml) usando un mortero y una mano de mortero de ágata, y se administró a animales anestesiados reversiblemente en un único tratamiento que consistía en 4 inyecciones subcutáneas en 4 localizaciones en la región dorsal (dosis total de 4 mg/kg por animal). Después de una dosificación, la punción con aguja dio lugar a sangrado de la vena de la extremidad posterior para la toma de muestras de sangre y, a continuación, se recogieron muestras de sangre (aproximadamente 60-100 |jl) de la parte sangrante usando tubos capilares heparinizados (Drummond Scientific Company, EE. UU.) en el momento programado, y se obtuvo el plasma mediante centrifugación. Se almacenaron las muestras de plasma en un congelador a aproximadamente -80 °C hasta su uso para el análisis mediante cromatografía líquida con sistema de espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS).

[0508] Determinación de BXA en plasma

[0510] La concentración plasmática de BXA se determinó por LC-MS/MS, que consiste en el sistema LC-20A (Shimadzu Corporation, Japón) y API 5000 (AB SCIEX, e E. UU.). Las muestras de plasma se prepararon mediante precipitación de proteínas. Se realizó la separación cromatográfica en L-columna 2 CDS sin metal (3 jm , 2,0 mm de d.i. x 50 mm, Chemicals Evaluation and Research Institute, Japón) a 40 °C. Las fases móviles binarias, ácido fórmico al 0,1 % en agua y ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo, se suministraron a un caudal total de 0,6 ml/min en modo de gradiente. El espectrómetro de masas se hizo funcionar en modo de polaridad positiva de ionización por electronebulización (ESI) usando monitorización de reacción múltiple (MRM). Las transiciones precursor/producto(m/z)de 484/247 y 490/247 se monitorizaron para detectar BXA y estándar interno, BXA-racemato-d418O, respectivamente. Los cálculos se basaron en las proporciones de área de pico de BXA con respecto al estándar interno. El procedimiento analítico se validó en todo el intervalo de calibración de 0,5 a 500 ng/ml con respecto a la selectividad, recuperación, exactitud, precisión y estabilidad en una variedad de condiciones.

[0512] Análisis farmacocinético

[0514] Las concentraciones plasmáticas de BXA para cada hurón individual se calcularon mediante el programa informático Analyst (AB SCIEX, EE. UU.). El valor medio y la desviación estándar también se calcularon usando datos individuales mediante Microsoft Excel (Microsoft Co., EE. UU.).

[0516] Resultado y análisis

[0518] La concentración plasmática media alcanzó el máximo 3 horas después de la dosis (26,1 ng/ml) y, a continuación, disminuyó gradualmente hacia el último punto de muestreo (168 horas después de la dosis, 9,08 ng/ml). Este resultado indicó que la administración subcutánea única de una suspensión de BXA a 4 mg/kg (4 localizaciones, 1 mg/kg por localización) podía mantener la concentración plasmática de BXA durante una semana o más en el hurón.

[0520] La presente invención se refiere a las siguientes secuencias de nucleótidos y aminoácidos:

[0522] SEQ ID NO: 1: Cebador directo para PCR ultrarrápida

[0524] 5'GACCRATCCTGTCACCTCTGA 3'

[0526] SEQ ID NO: 2: Cebador inverso para PCR ultrarrápida

[0528] 5' AGGGC ATTYTGGAC AAAKCGT CT A3'

[0530] SEQ ID NO: 3: Sonda para PCR ultrarrápida ("FAM" significa amidita de fluoresceína, es decir, el colorante fluorescente para marcar oligonucleótidos; "BHQ1" significa extintor de agujero negro 1, es decir, el extintor; BHQ1 y FAM juntos no son fluorescentes, FAM solo será fluorescente después de que la sonda se escinda)

[0532] 5’ FAM-TCGAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-BHQ13’

[0534] SEQ ID NO: 4: Virus de gripe A (A/WSN/1933(H1N1)): GenBank: X17336.1, que comprende la mutación I38T. La mutación I38T está subrayada y se muestra en negrita.

[0535] MEDFVRQCFNPMIVELAEKAMKEYGEDLKIETNKFAAICTHLEVCFMYSDFHFIDEQGESIWELGDPNALLKHRFEIIEGR DRTIAWTVINSICNTTGAEKPKFLPDLYDYKKNRFIEIGVTRREVHIYYLEKANKIKSEKTHIHIFSFTGEEMATKADYTLDEE SRARIKTRLFTIRQEMASRGLWDSFRQSERGEETIEERFEITGTMRKLADQSLPPNFSSLENFRAYVDGFEPNGYIEGKLS QMSKEVNARIEPFLKSTPRPLRLPDGPPCSQRSKFLLMDALKLSIEDPSHEGEGIPLYDAIKCMRTFFGWKEPNWKPHE KGINPNYLLSWKQVLAELQDIENEEKIPRTKNMKKTSQLKWALGENMAPEKVDFDDCKDVGDLKQYDSDEPELRSLASW IQNEFNKACELTDSSWIELDEIGEDAAPIEHIASMRRNYFTAEVSHCRATEYIMKGVYINTALLNASCAAMDDFQUPMISKC RTKEGRRKTNLYGFIIKGRSHLRNDTDWNFVSMEFSLTDPRLEPHKWEKYCVLEVGDMLLRSAIGHVSRPMFLYVRTNG TSKIKMKWGMEMRRCLLQSLQQIESMIEAESSVKEKDMTKEFFENKSETWPVGESPKGVEEGSIGKVCRTLLAKSVFNS LYASPQLEGFSAESRKLLLIVQALRDNLEPGTFDLGGLYEAIEECLINDPWVLLNASWFNSFLTHALR

[0536] SEQ ID NO: 5: Fracción de secuencia del virus de gripe A (A/WSN/1933(H1N1)): GenBank: X17336.1, que comprende la mutación I38T. La mutación I38T está subrayada y se muestra en negrita.

[0537] FAATCTH

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un procedimiento de prevención de la transmisión de una infección por el virus de la gripe desde un paciente que está infectado por un virus de la gripe (paciente de referencia) a una persona de contacto, comprendiendo dicho procedimiento administrar dicho compuesto de fórmula (I) o (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a dicho paciente de referencia.

2. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en el que la persona de contacto del paciente de referencia tratado es una persona que:

(i) tiene una PCR negativa para gripe en el punto temporal en que se administró el compuesto al paciente de referencia por primera vez; y

(ii) tuvo contacto personal con el paciente de referencia tratado durante la infección por el virus de la gripe del paciente de referencia.

3. El compuesto para el uso de la reivindicación 2(ii), en el que la persona de contacto tuvo contacto personal con el paciente de referencia tratado dentro de un periodo de tiempo que comienza con la administración del compuesto y termina de 5 a 10 días después de la administración del compuesto.

4. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que está presente una infección por virus de la gripe si el virus de la gripe se puede detectar por medio de PCR o usando un kit de prueba de gripe.

5. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la transmisión del virus de la gripe es transmisión por contacto directo y/o transmisión aérea.

6. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el compuesto se administra dentro de las 48 horas posteriores a la aparición de los síntomas de gripe.

7. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el compuesto se administra una vez como un único tratamiento.

8. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que la cantidad eficaz es de aproximadamente 40 mg para pacientes de <80 kg y de aproximadamente 80 mg para pacientes de >80 kg.

9. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el compuesto se administra por vía oral.

10. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el paciente de referencia tiene al menos 12 años de edad.

11. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el virus de la gripe es un virus de gripe A o un virus de gripe B.

12. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que el virus de la gripe es una cepa epidémica de virus de la gripe o una cepa pandémica de virus de la gripe.

13. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que la cepa de la gripe es un virus de reciclaje que había causado una epidemia o pandemia en el pasado.

14. El compuesto para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que la cepa del virus de la gripe no porta una mutación I38X, incluyendo una mutación I38T.