ES3044732T3 - Immunomodulator - Google Patents

Immunomodulator

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ES3044732T3
ES3044732T3 ES20748337T ES20748337T ES3044732T3 ES 3044732 T3 ES3044732 T3 ES 3044732T3 ES 20748337 T ES20748337 T ES 20748337T ES 20748337 T ES20748337 T ES 20748337T ES 3044732 T3 ES3044732 T3 ES 3044732T3
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Dengyou Zhang
Fei Pan
Rong Ma
Wenji Zhu
Yanfei Xin
Si Li
Weiping Liu
Yanping Lin
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Abstract

La presente solicitud divulga un inmunomodulador y, específicamente, describe un compuesto representado por la fórmula (I), o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto proporcionado en la presente solicitud se une eficazmente a STING, presenta una buena acción agonista sobre la proteína STING y exhibe un buen efecto inhibidor sobre múltiples tumores. Por lo tanto, el compuesto proporcionado en la presente solicitud actúa como agonista de STING y puede utilizarse para el tratamiento de diversas afecciones relacionadas. El compuesto proporcionado en la presente invención presenta un potencial muy prometedor para su aplicación en la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades asociadas con la actividad de STING (en particular, un medicamento para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, alérgicas, autoinmunes, infecciosas, cáncer o síndromes precancerosos) y en la preparación de un adyuvante inmunitario, lo que proporciona una nueva opción para el cribado clínico y/o la preparación de fármacos para enfermedades asociadas con la actividad de STING. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0003] Inmunomodulador
[0005] Campo
[0007] La invención se refiere a un inmunomodulador, en particular a una clase de compuestos que activan STING y a su uso como inmunomodulador en la fabricación de un medicamento.
[0009] Antecedentes
[0011] El sistema inmunitario del cuerpo humano puede dividirse generalmente en sistema de “ inmunidad natural” y sistema de “inmunidad adaptiva”. El sistema inmunitario natural desempeña un papel importante en la resistencia a las infecciones, inhibición del crecimiento tumoral y la patogénesis de enfermedades autoinmunitarias. Reconoce principalmente microorganismos patógenos y componentes de células cancerosas mediante receptores de reconocimiento de patrones, inicia rutas de señalización aguas abajo, y finalmente induce expresión de citocinas, destruye microorganismos patógenos y componentes de células cancerosas, y adapta el sistema inmunitario a fomentar la producción de anticuerpos y linfocitos T específicos.
[0013] STING (factor estimulante de genes de interferón, TMEM173, MITA, etc.) es una molécula central clave para la respuesta intracelular a la invasión de ADN. Con la estimulación de ADN citoplasmático, reconoce la señal de receptor de ADN citoplasmático y desempeña un papel en el proceso de inducir la producción de interferón. Después de que el receptor de reconocimiento de ADN de la célula huésped reconozca el ADN exógeno o endógeno “no propio”, transmite la señal a la molécula central STING, y después STING se dimeriza rápidamente y se transfiere desde el retículo endoplasmático hasta el cuerpo perinuclear. La activación de STING conduce a la regulación por incremento de las rutas de IRF3 y NKkB, lo cual conduce a la inducción de interferón p y otras citocinas.
[0015] Pueden usarse compuestos que inducen interferón humano para tratar diversas enfermedades (incluyendo enfermedades alérgicas y otras enfermedades inflamatorias, rinitis alérgica y asma, enfermedades infecciosas, enfermedades neurodegenerativas, síndrome precanceroso y cáncer), y también pueden usarse como adyuvante para vacunas o composición de inmunización. Por tanto, el desarrollo de nuevos compuestos que puedan activar STING es un método eficaz para el tratamiento de enfermedades de la ruta de IFN de tipo 1 (incluyendo enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas y autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer y síndromes precancerosos).
[0017] El documento WO2017175147 da a conocer amidas heterocíclicas que son útiles como moduladores de STING.
[0018] Sumario
[0020] Con el fin de resolver los problemas anteriormente mencionados, la presente divulgación proporciona un inmunomodulador.
[0022] La presente invención proporciona un compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto está representado por la fórmula Il tal como se define en la reivindicación 1
[0025]
[0028] La presente invención proporciona además un compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es:
[0029]
[0032] 
[0033]
[0036] 
[0037]
[0040] 
[0041]
[0044] 
[0045]
[0048] 
[0049]
[0052] 
[0053]
[0056] 
[0057]
[0058]
[0059]
[0062] La presente invención proporciona además un compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto está representado por la fórmula Ill tal como se define en la reivindicación 3.
[0065]
[0068] La presente invención proporciona además el compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es:
[0071]
[0072]
[0075] La presente invención también proporciona el compuesto anteriormente mencionado, o un estereoisómero, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de enfermedades relacionadas con actividad de STING que son una o más de enfermedades relacionadas con enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer y síndrome precanceroso
[0077] La presente invención también proporciona el compuesto anteriormente mencionado, o un estereoisómero, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como adyuvante inmunitario.
[0078] La presente invención también proporciona un medicamento, que es una preparación preparada a partir del compuesto anteriormente mencionado, o un estereoisómero, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como principio activo, más materiales auxiliares farmacéuticamente aceptables.
[0080] Las enfermedades relacionadas con actividad de STING definidas en la presente invención son enfermedades en las que STING desempeña un papel importante en la patogénesis de la enfermedad.
[0082] Las enfermedades relacionadas con actividad de STING incluyen enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas y enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer y síndrome precanceroso.
[0084] “Cáncer” o “tumor maligno” se refiere a cualquiera de una variedad de enfermedades caracterizadas por una proliferación descontrolada de células anómalas, y la capacidad de células afectadas para dispersarse a otras ubicaciones de manera local o a través del torrente sanguíneo y el sistema linfático del organismo (es decir, metástasis) y cualquiera de muchas características estructurales y/o características moleculares. Las “células cancerosas” se refieren a células que experimentan múltiples estadios de progresión tumoral en los estadios inicial, medio o tardío. Los cánceres incluyen sarcoma, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de cerebro, cáncer de huesos, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de colon y cáncer de próstata. En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula I se usa para tratar un cáncer seleccionado de cáncer de colon, cáncer de cerebro, cáncer de mama, fibrosarcoma y carcinoma de células escamosas. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de melanoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón y cáncer de ovarios. En algunas realizaciones, el cáncer que está tratándose es un cáncer metastásico.
[0086] Las enfermedades inflamatorias incluyen una variedad de estados caracterizados por inflamación histopatológica. Los ejemplos de enfermedades inflamatorias incluyen acné vulgar, asma, enfermedades de enterocelia, prostatitis crónica, glomerulonefritis, enfermedad inflamatoria del intestino, inflamación pélvica, lesión por reperfusión, artritis reumatoide, sarcoidosis, vasculitis, inflamación de las vías respiratorias y cistitis intersticial provocada por ácaros del polvo domésticos. Hay un solapamiento significativo entre enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias. Algunas realizaciones de la presente invención se refieren al tratamiento de asma, una enfermedad inflamatoria. El sistema inmunitario participa habitualmente en enfermedades inflamatorias, que se manifiestan en reacciones alérgicas y alguna miopatía. Muchas enfermedades del sistema inmunitario conducen a inflamación anómala.
[0088] Los compuestos y derivados proporcionados en la presente invención pueden nombrarse según el sistema de nomenclatura de la IUPAC (Unión Internacional de Química Pura y Aplicada, del inglés International Union for Pure and Applied Chemistry) o CAS (Chemical Abstracts Service, Columbus, OH).
[0090] Con respecto a la definición de términos usados en la presente invención: a menos que se especifique lo contrario, las definiciones iniciales de grupos radicales o términos proporcionadas en el presente documento son aplicables a los grupos radicales o términos a lo largo de toda la memoria descriptiva; para términos no definidos específicamente en el presente documento, se les debe conceder, basándose en la divulgación y el contexto, el significado que puedan darles los expertos en la técnica.
[0092] “Sustitución” se refiere al remplazo de un átomo de hidrógeno en una molécula por un átomo o molécula diferente.
[0093] El contenido mínimo y máximo de átomos de carbono en un grupo de hidrocarburo está indicado por un sufijo. Por ejemplo, el sufijo alquilo (Ca-Cb) indica cualquier grupo alquilo que contiene de “a” a “b” átomos de carbono. Por tanto, por ejemplo, alquilo (C-i-Ca) se refiere a un grupo alquilo que contiene de 1 a 6 átomos de carbono.
[0095] En la presente invención, “alquilo” se refiere a una cadena de hidrocarburo saturada que tiene un número especificado de átomos miembros. Por ejemplo, alquilo C1-C6 se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden ser lineales o ramificados. Los grupos alquilo ramificados representativos tienen uno, dos o tres ramificaciones. El grupo alquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes tal como se definen en el presente documento. Los grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo (n-propilo e isopropilo), butilo (nbutilo, isobutilo y terc-butilo), pentilo (n-pentilo, isopentilo y neopentilo) y hexilo. El grupo alquilo también puede formar parte de otro grupo, tal como un grupo alcoxilo C1-C6.
[0097] En la presente invención, el grupo alcoxilo Ca-Cb se refiere a un grupo obtenido conectando un grupo alquilo que contiene de “a” a “b” átomos de carbono al átomo de oxígeno correspondiente.
[0099] En la presente invención, “alquileno C2-C6” se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático saturado divalente que tiene de 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquileno incluyen grupos hidrocarbilo de cadena ramificada y lineal. Por ejemplo, se pretende que “alquileno (C2-Ca)” incluya etileno, propileno, 2-metilpropileno, dimetiletileno, pentileno y similares.
[0101] De manera similar, “alquenileno C2-C6” se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático divalente que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y que contiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono. Los grupos alquenileno incluyen grupos de cadena ramificada y lineal. El doble enlace carbono-carbono en el grupo alquenileno incluye un doble enlace cis y un doble enlace trans.
[0102] De manera similar, “grupo alquinileno C2-C6” se refiere a un grupo de hidrocarburo alifático divalente que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y que contiene uno o más triples enlaces carbono-carbono. Los grupos alquinileno incluyen grupos de cadena ramificada y lineal.
[0103] En la presente invención, el -C(O)- en -C(0)NRaRb, -NRaC(0)Rb, -C(0)Ra, -C (0)0R a y -C(0)Rf, significa un grupo o
[0104] <carbonilo>f ct<compuesto por carbono y oxígeno en el que los átomos están conectados por un doble enlace.>
[0105] En la presente invención, “halógeno” se refiere a un grupo halógeno: flúor, cloro, bromo o yodo.
[0106] El adyuvante inmunitario en la presente invención es un inmunomodulador, que se refiere a una sustancia que tiene la función de potenciar y regular la inmunidad en cuanto a acción anti-infección, anti-virus, anti-tumor, anti-reacción alérgica, anti-asma, etc. Se usa principalmente de manera clínica para tratamiento adyuvante de la inflamación, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer y síndromes precancerosos. El término “farmacéuticamente aceptable” se refiere a que un determinado portador, vehículo, diluyente, excipiente y/o la sal formada es habitualmente compatible desde el punto de vista químico o físico con otros componentes que constituyen una determinada forma de dosificación farmacéutica, y fisiológicamente compatible con el receptor.
[0107] Los términos “sales” y “sales farmacéuticamente aceptables” se refieren a los compuestos anteriormente mencionados o sus estereoisómeros, o sales ácidas y/o sales básicas formadas con ácidos y bases inorgánicos y/u orgánicos, y también incluyen sales zwitteriónicas (sal interna), también incluyen sales de amonio cuaternario, tales como sales de alquil-amonio. Estas sales pueden obtenerse directamente en el aislamiento final y purificación del compuesto. También pueden obtenerse mezclando de manera apropiada el compuesto anteriormente mencionado, o su estereoisómero, con una determinada cantidad de ácido o base (por ejemplo, equivalente). Estas sales pueden formar un precipitado en la disolución y recogerse mediante filtración, o recuperarse tras evaporación del disolvente, o prepararse mediante liofilización tras reacción en un medio acuoso. La sal en la presente invención puede ser el clorhidrato, sulfato, citrato, bencenosulfonato, bromhidrato, fluorhidrato, fosfato, acetato, propionato, succinato, oxalato, malato, succinato, fumarato, maleato, tartrato o trifluoroacetato de los compuestos.
[0108] En determinadas realizaciones, pueden usarse uno o más compuestos de la presente invención en combinación entre sí. Opcionalmente, el compuesto de la presente invención puede usarse en combinación con cualquier otro agente activo para preparar fármacos o composiciones farmacéuticas para regular la función celular o tratar enfermedades. Si se usa un grupo de compuestos, estos compuestos pueden administrarse al sujeto de manera simultánea, separada o secuencial.
[0109] El compuesto proporcionado por la presente invención puede combinarse eficazmente con STING, tiene una buena función agonista de proteína STING, muestra un buen efecto inhibidor sobre una variedad de tumores, y también puede activar el mecanismo de memoria inmunitaria de ratones e inhibir la nueva estimulación tumoral. Por tanto, los compuestos de la presente invención pueden usarse como agonistas de STING y usarse para tratar diversas enfermedades relacionadas. Los compuestos de la presente invención tienen perspectivas de aplicación muy buenas en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con actividad de STING (especialmente medicamentos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer o síndromes precancerosos) y en la fabricación de adyuvantes inmunitarios, proporcionando por tanto una nueva elección para selección clínica y/o fabricación de un medicamento para tratar enfermedades relacionadas con actividad de STING.
[0110] Evidentemente, según el contenido anteriormente mencionado de la presente invención, según el conocimiento técnico común y medios convencionales en el campo, pueden realizarse varias otras modificaciones, sustituciones o cambios sin alejarse de la idea técnica básica anteriormente mencionada de la presente invención.
[0111] A continuación en el presente documento, se describirá adicionalmente en detalle el contenido anteriormente mencionado de la presente invención mediante implementaciones específicas en forma de ejemplos.
[0112] Breve descripción de los dibujos
[0113] La figura 1 es un gráfico que muestra el efecto inhibidor de compuestos preparados en los ejemplos de la presente invención sobre modelo de tumor CT26.
[0114] La figura 2 es un gráfico que muestra el efecto inhibidor del compuesto preparado en los ejemplos de la presente invención sobre el modelo de nueva excitación de tumor CT26, en el que las curvas del ejemplo 2 (4,5 mg/kg), el ejemplo 2 (1,5 mg/kg) y el ejemplo 5 (1,5 mg/kg), el ejemplo 15 (3 mg/kg), el ejemplo 15 (1 mg/kg), el ejemplo 17 (1,5 mg/kg) y el ejemplo 29 (1 mg/kg) se solapan.
[0115] Descripción detallada
[0116] Todas las materias primas y los equipos usados en las realizaciones específicas de la presente invención son productos conocidos, que pueden obtenerse adquiriendo productos comercialmente disponibles.
[0117] Las estructuras de los compuestos se determinaron mediante resonancia magnética nuclear (RMN) o (y) espectrometría de masas (EM). El desplazamiento de RMN (8) se facilita en unidades de 10-6 (ppm). La RMN se midió con el instrumento magnético nuclear (Bruker Avance Ill 400 y Bruker Avance 300), el disolvente fue dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d6), cloroformo deuterado (CDCh), metanol deuterado (CD3OD), y el patrón interno fue tetrametilsilano (TMS).
[0118] La CL-EM se midió con un instrumento de CL-EM de Shimadzu (Shimadzu LC-MS 2020 (ESI)).
[0119] Se usó el cromatógrafo de líquidos de alta presión de Shimadzu (Shimadzu LC-20A) para la medición de HPLC. Se usó el cromatógrafo preparativo de fase inversa Gilson GX-281 para la cromatografía preparativa de fase inversa. La placa de gel de sílice de cromatografía de capa fina usada fue placa de gel de sílice Yantai Huanghai HSGF254 o Qingdao GF254, y las especificaciones para los productos de separación y purificación de cromatografía de capa fina fueron de 0,4 mm-0,5 mm.
[0120] La cromatografía en columna usó generalmente gel de sílice de Yantai Huanghai de 200-300 de malla como soporte. Los materiales de partida conocidos de la presente invención pueden sintetizarse usando, o según, métodos conocidos en la técnica, o pueden adquirirse de Anaiji Chemical, Chengdu Kelon Chemical, Shaoyuan Chemical Technology, J & K Scientific y otras empresas.
[0121] La atmósfera de hidrógeno significa que el matraz de reacción se conecta a un globo de hidrógeno con un volumen de aproximadamente 1 l.
[0122] La reacción de hidrogenación se realiza habitualmente mediante aplicación de vacío, y llenado con hidrógeno, y las operaciones se repiten 3 veces.
[0123] A menos que haya instrucciones especiales en los ejemplos, la reacción se lleva a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno.
[0124] A menos que haya instrucciones especiales en los ejemplos, la disolución se refiere a una disolución acuosa.
[0125] A menos que haya instrucciones especiales en los ejemplos, la temperatura de reacción es temperatura ambiente. A menos que haya instrucciones especiales en los ejemplos, M es moles por litro.
[0126] La temperatura ambiente es la temperatura de reacción más adecuada, que es de 20°C-30°C.
[0127] Durante la noche es 12±1 h.
[0128] PE se refiere a éter de petróleo; EA se refiere a acetato de etilo; DCM se refiere a diclorometano; MeOH se refiere a metanol; DMF se refiere a N,N-dimetilformamida; DMSO se refiere a dimetilsulfóxido; DMAP se refiere a 4-dimetilaminopiridina; DIPEA se refiere a diisopropiletilamina; Boc se refiere a terc-butiloxicarbonilo; TFA se refiere a ácido trifluoroacético; DBU se refiere a 1,8-diazabicicloundec-7-eno; HATU se refiere a hexafluorofosfato 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea.
[0129] Lo siguiente es la preparación de compuestos intermedios:
[0130] 1. Compuesto intermedio: síntesis de 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzamida
[0133]
[0135] Se añadió éster 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobencílico (18,5 g, 75,3 mmol) a un matraz de una sola boca que contenía hidróxido de amonio (200 ml) y se agitó a 60°C durante 3 h. Se concentró la disolución de reacción hasta 100 ml, se enfrió y se filtró y se lavó el sólido con agua helada. Después de secarse, se obtuvo 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzamida (12,5 g, 54,1 mmol) como un sólido marrón.
[0136] EM (ESI) m/z = 231 [M+H]+.
[0137] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da): 88,29 (s, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,78 (s 1H), 4,01 (s, 3H).
[0138] 2. Compuesto intermedio: síntesis de 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzamida
[0141]
[0143] En un baño de hielo, se dispersó 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzamida (7,5 g, 32,5 mmol) en DCM anhidro (90 ml), a lo que entonces se le añadió lentamente tribromuro de boro (120 ml, 1 M) gota a gota. Tras la adición, se retiró el baño de hielo y se llevó a cabo la reacción durante la noche a temperatura ambiente bajo protección de nitrógeno. Tras completarse la reacción, se vertió la disolución de reacción en agua helada, se agitó vigorosamente durante 30 minutos, se filtró y se lavó la torta de filtro con agua. Tras secarse la torta de filtro, se obtuvo 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzamida (6,00 g, 27,7 mmol, rendimiento del 85,3 %) como un sólido de color amarillo pálido.
[0144] EM (ESI) m/z = 217 [M+H]+
[0145] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): 811,73 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,66 (s, 1H).
[0146] 3. Compuesto intermedio: síntesis de isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo
[0149]
[0151] Se dispersó ácido 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico (4,00 g, 25,9 mmol) en DCM anhidro (80 ml), a lo que se le añadió cloruro de oxalilo (3,9 g, 31,1 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. Tras hacer reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente, se eliminaron los compuestos volátiles mediante evaporación rotatoria a presión reducida. Se añadió DCM (20 ml) al producto bruto y se eliminó el disolvente mediante evaporación rotatoria para obtener cloruro de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (4,46 g, rendimiento del 100%), que se usó directamente para la siguiente reacción.
[0152] A 0°C, se disolvió cloruro de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (4,46 g, 25,9 mmol) en acetona anhidra (20 ml) y se añadió gota a gota a una disolución de tiocianato de potasio (5,0 g, 51,5 mmol) en acetona (100 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Se filtró el sistema de reacción para retirar sales inorgánicas. Tras la concentración del filtrado, se purificó el producto bruto mediante columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo (v/v) = 1/15) y se obtuvo isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (4,0 g, 20,4 mmol, 78,3%) como un líquido transparente de color marrón-amarillo.
[0153] EM (ESI) m/z = 196 [M+H]+.
[0154] 4. Compuesto intermedio: síntesis de isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo
[0157]
[0159] Etapa 1: síntesis de cloruro de ácido 4-etil-2-metiltiazol-5-carboxílico
[0160] Se dispersó ácido 4-etil-2-metiltiazol-5-carboxílico (2 g, 11,7 mmol) en DCM anhidro (40 ml), a lo que se le añadieron cloruro de oxalilo (1,9 g, 15,1 mmol) y una cantidad catalítica de gota a gota en un baño de hielo. Tras hacer reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente, se eliminaron los compuestos volátiles mediante evaporación rotatoria a presión reducida. Se añadió DCM (20 ml) al producto bruto y se eliminó el disolvente mediante evaporación rotatoria para obtener cloruro de ácido 4-etil-2-metiltiazol-5-carboxílico (2,2 g, rendimiento del 100 %), que se usó directamente en la siguiente reacción.
[0161] Etapa 2: síntesis de isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo
[0163] A 0°C, se disolvió cloruro de ácido 4-etil-2-metiltiazol-5-carboxílico (2,2 g, 11,7 mmol) en acetona anhidra (10 ml) y se añadió gota a gota a una disolución de tiocianato de potasio (2,3 g, 23,4 mmol) en acetona (50 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se filtró el sistema de reacción para retirar sales inorgánicas, se concentró el filtrado y se purificó el producto bruto mediante columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo, v/v= 1/15) y se obtuvo isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (2,15 g, 10,2 mmol, rendimiento del 87%) como un líquido marrón transparente.
[0165] EM (ESI) m/z = 213 [M+H]+.
[0167] 5. Compuesto intermedio: síntesis de 4-cloro-3-(3-morpholino)-5-nitrobenzamida
[0170]
[0173] A una disolución de 3-morfolinopropan-1-ol (1,0 g, 9,79 mmol) en diclorometano (20 ml) se le añadieron TEA (2,7 ml, 19,58 mmol) y cloruro de p-toluenosulfonilo (2,0 g, 10,77 mmol). Se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h y se añadieron agua y diclorometano para la extracción y se lavó la fase orgánica con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para obtener 4-metilbencenosulfonato de 4-morfolinopropilo, que se usó directamente en la siguiente reacción.
[0175] A una disolución de 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzamida (845 mg, 3,9 mmol) en DMF (10 ml), se le añadieron carbonato de potasio (1,08 g, 7,8 mmol), yoduro de potasio (0,12 g, 0,72 mmol) y 4-metilbencenosulfonato de 4-morfolinopropilo (1,17 g, 3,9 mmol). Se llevó a cabo la reacción a 75°C durante 24 h. Tras la reacción, se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración. Se vertió el filtrado en agua y se extrajo con acetato de etilo. Se lavó la fase orgánica sucesivamente con agua y salmuera saturada y después se secó y se concentró para obtener 4-cloro-3-(3-morfolino)-5-nitrobenzamida (1,0 g, rendimiento del 75,5 %).
[0177] 6. Compuesto intermedio: síntesis de 4-(3-(2-cloro-5-(metoxicarbonil)-3-nitrofenoxi)propil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
[0180]
[0183] Etapa 1: síntesis de 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzoato de metilo
[0185] Se dispersó 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzoato de metilo (10 g, 40,7 mmol) en diclorometano anhidro (100 ml). Se añadió lentamente tribromuro de boro (40,8 g, 162,8 mmol) gota a gota en un baño de hielo. Tras la adición, se calentó lentamente la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Tras completarse la reacción, se añadió lentamente metanol gota a gota para extinguir la reacción en un baño de hielo y después se secó por centrifugación hasta sequedad. Se añadieron al mismo metanol (100 ml) y ácido sulfúrico concentrado (0,2 ml) y se calentó la disolución de reacción hasta 75°C y se agitó durante la noche. Después de enfriarse, se eliminó el disolvente mediante concentración a presión reducida y se añadieron 150 ml de agua. Tras la dispersión por ultrasonidos, se filtró la mezcla, se lavó de nuevo el sólido con agua y se secó el sólido para obtener 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzoato de metilo (8,89 g, 38,4 mmol).
[0187] Etapa 2: síntesis de 4-(3-(2-cloro-5-(metoxicarbonil)-3-nitrofenoxi)propil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
[0188] Se disolvieron 4-cloro-3-hidroxi-5-nitrobenzoato de metilo (10 g, 47,2 mmol), 4-(3-hidroxipropil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (10,6 g, 47,2 mmol) y trifenilfosfina (20,4 g, 77,7 mmol) en THF anhidro (200 ml) bajo protección de nitrógeno. En un baño de hielo, se añadió DIAD (15,8 g, 77,7 mmol) gota a gota a la disolución de reacción anterior. Tras la adición, se aumentó la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Se vertió la disolución de reacción en agua, se extrajo con acetato de etilo y se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró. Se purificó el producto obtenido mediante columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1) para obtener el compuesto objetivo como un sólido de color amarillo pálido (13 g, rendimiento del 61 %).
[0189] 7. Compuesto intermedio: síntesis de 4-(3-(2-cloro-5-(metoxicarbonil)-3-nitrofenoxi)propil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
[0192]
[0194] Se disolvió 4-doro-3-hidroxi-5-nitrobenzoato de metilo (36,8 g, 159,3 mmol) en DMF (300 ml) y se añadieron 4-metilbencenosulfonato de 4-morfolinopropilo (74 g, 247,5 mmol) y K2CO3 (44,5 g, 318,6 mmol). Se agitó la disolución de reacción a 75°C durante 16 h, se separó la sal inorgánica mediante filtración y se eliminó DMF por destilación a presión reducida. Se disolvió el producto bruto en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró hasta el acetato de etilo restante (30 ml), se filtró para obtener el compuesto objetivo como un sólido amarillo (48,7 g, rendimiento del 86 %).
[0195] 8. Compuesto intermedio: síntesis de 4-fluoro-3-(metiltio)-5-nitrobenzoato de metilo
[0198]
[0200] Etapa 1: síntesis de ácido 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoico
[0201] Se disolvió ácido 4-fluoro-3-nitrobenzoico (50 g, 270 mmol) en ácido sulfúrico concentrado (200 ml) y se añadió NBS (47,5 g, 270 mmol). Se calentó la mezcla hasta 75°C y se agitó durante la noche. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se vertió la mezcla lentamente en agua helada y se agitó. Se separó por precipitación un sólido de color amarillo pálido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto objetivo (66 g).
[0202] Etapa 2: síntesis de 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoato de metilo
[0203] En un baño de hielo, se añadió cloruro de tionilo (44,5 g, 373,5 mmol) gota a gota a una disolución de ácido 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoico (66 g, 249 mmol) en metanol (400 ml). Se aumentó la temperatura hasta 75°C. Se agitó la mezcla durante la noche y se concentró hasta aproximadamente 100 ml de disolvente restante. Después de enfriarse, siguió separándose por precipitación un sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoato de metilo (56 g).
[0204] Etapa 3: síntesis de 4-fluoro-3-(metiltio)-5-nitrobenzoato de metilo
[0205] A una disolución de 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoato de metilo (80 mg, 0,14 mmol) en tolueno () y terc-butanol (ml), se añadieron acetato de metil-mercaptano (11 mg, 0,14 mmol), Pd2(dba)3 (13 mg, 0,014 mmol), xantphos (8 mg, 0,014 mmol), K3PO4 (36 mg, 0,166 mmol). Se hizo reaccionar la mezcla durante la noche a 110°C bajo protección de nitrógeno y se completó la reacción. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se concentró la disolución de reacción y se purificó el producto bruto obtenido mediante columna de fase normal (eluyente: PE/EA = 3/1, v/v) para separar y obtener el compuesto objetivo (g, rendimiento del 45 %).
[0206] 9. Compuesto intermedio: síntesis de 4-fluoro-3-((3-morfolinopropil)tio)-5-nitrobenzoato de metilo
[0209]
[0211] Etapa 1: síntesis de acetato de 3-morfolinopropil-mercaptano
[0212] A una disolución de 4-metilbencenosulfonato de 4-morfolinopropilo (9 g, 30,1 mmol) en DMF (100 ml) se le añadieron tioacetato de potasio (6,86 g, 60,2 mmol), carbonato de potasio (12,5 g, 90,3 mmol), se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Se retiró la sal inorgánica mediante filtración y se secó el disolvente por centrifugación. Se purificó el producto bruto mediante columna de gel de sílice (eluyente: diclorometano/metanol = 20/ 1 ) para obtener el compuesto objetivo (5 g, rendimiento del 81 %).
[0213] Etapa 2: síntesis de 4-fluoro-3-((3-morfolinopropil)tio)-5-nitrobenzoato de metilo
[0214] A una disolución de 3-bromo-4-fluoro-5-nitrobenzoato de metilo (3,4 g, 12,3 mmol) en tolueno (50 ml) y terc-butanol (5 ml) se le añadieron secuencialmente acetato de 3-morfolinopropil-mercaptano (3 g, 14,8 mmol), Pd2(dba)3 (1,13 g, 1,23 mmol), xantphos (0,72 g, 1,23 mmol), K3PO4 (7,83 g, 36,9 mmol). Se hizo reaccionar la mezcla durante la noche a 110°C bajo protección de nitrógeno y se completó la reacción. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se concentró la disolución de reacción y se purificó el producto bruto obtenido mediante columna de fase normal (eluyente: PE/EA = 1/1, v/v) para separar y obtener el compuesto objetivo (1,8 g, rendimiento del 41 %).
[0215] 10. Compuesto intermedio: síntesis de isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo
[0218]
[0220] Etapa 1: síntesis de cloruro de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo
[0221] Se dispersó ácido 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico (2 g, 11,7 mmol) en DCM anhidro (40 ml), a lo que se le añadieron cloruro de oxalilo (1,9 g, 15,1 mmol) y una cantidad catalítica de DMF gota a gota en un baño de hielo. Tras hacer reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente, se eliminaron los compuestos volátiles mediante evaporación rotatoria a presión reducida. Se añadió DCM (20 ml) al producto bruto y se eliminó el disolvente mediante evaporación rotatoria para obtener cloruro de ácido 4-etil-2-metiltiazol-5-carboxílico (2,2 g, rendimiento del 100%), que se usó directamente en la siguiente reacción.
[0222] Etapa 2: síntesis de isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo
[0223] A 0°C, se disolvió cloruro de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (2,2 g, 11,7 mmol) en acetona anhidra (10 ml) y se añadió gota a gota a una disolución de tiocianato de potasio (2,3 g, 23,4 mmol) en acetona (50 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Se filtró el sistema de reacción para retirar sales inorgánicas, y tras la concentración del filtrado, se purificó el producto bruto mediante columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo, v/v = 1/15) y se obtuvo isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (2,15 g, 10,2 mmol, rendimiento del 87 %) como un líquido transparente de color marrón-amarillo.
[0224] EM (ESI) m/z = 214 [M+H]+.
[0225] Lo siguiente es la preparación de los compuestos de la presente invención:
[0226] Ejemplo 1
[0229]
[0230]
[0233] Se disolvieron 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzamida (500 mg, 2,17 mmol) y (4-aminobut-2-en-1-il)carbamato de tercbutilo (966 mg, 4,34 mmol) en dimetilsulfóxido (10 ml) y se añadió trietilamina (1,1 g, 10,84 mmol) gota a gota a la disolución de reacción. Se calentó la mezcla de reacción hasta 115°C y se agitó a esta temperatura durante la noche. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se diluyó la mezcla con agua, precipitó una gran cantidad de sólido naranja, se filtró, se lavó la torta de filtro con agua (15 ml x 3). Se realizó el secado mediante evaporador rotatorio a vacío para obtener (trans)-(4-(4-carbamoil-2-metoxi-6-nitrofenil)amino)n-but-2-enil)carbamato de terc-butilo (compuesto 1b) (450 mg, rendimiento del 57 %) como un sólido de color naranja-amarillo.
[0235] EM (ESI) m/z = 381 [M+H]+.
[0237] Etapa 2: síntesis de (trans)-(4-((2amino-4-carbamoil-6-metoxifenil)amino)n-but-2-enil)carbamato de terc-butilo
[0238] Se disolvió el compuesto 1b (450 mg, 1,18 mmol) en metanol (15 ml), se enfrió la disolución hasta 0°C y después se añadieron sucesivamente amoniaco acuoso (1,62 ml, 11,80 mmol) y una disolución de ditionito de sodio (1,22 g, 7,01 mmol) en agua (6 ml). Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 1 h, y el color del líquido de reacción cambió de naranja-rojo a blanco. Se sometió la disolución de reacción a rotación para eliminar el metanol, después se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 4). Se lavó la fase orgánica separada con salmuera saturada (20 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y después se secó por centrifugación para obtener (trans)-(4-((2-amino-4-carbamoil-6-metoxifenil)amino)n-but-2-enil)carbamato de terc-butilo (compuesto 1c) (260 mg, rendimiento del 58%), como un sólido blanco.
[0240] EM (ESI) m/z = 351 [M+H]+.
[0242] Etapa 3: síntesis de (trans)-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1-hidropirazol-5-carboxamida)-7-metoxi-1H-bencimidazolil) n-but-2-enil)carbamato de terc-butilo
[0244] Se disolvieron el compuesto 1c (260 mg, 0,742 mmol) y el compuesto isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilo (145 mg, 0,74 mmol) en N,N-dimetilformamida (5 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h, después se añadieron HATU (338 mg, 0,89 mmol) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (147 mg, 0,96 mmol) a la disolución de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se diluyó la disolución de reacción con agua y se recogió el sólido blanco producido mediante filtración y se lavó con agua (5 ml x 3) y después se separó mediante columna de fase inversa (eluyente: acetonitrilo/agua = 1/3, v/v) para obtener (trans)-(4-(5carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1-hidro-pirazol-5-carboxamida))-7-metoxi-1H-bencimidazolil)-n-but-2-enil)carbamato de terc-butilo (compuesto 1d) (313 mg, rendimiento del 82 %), como un sólido blanco.
[0246] EM (ESI) m/z = 512 [M+H]+.
[0247] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,86 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,48-7,32 (m, 2H), 7,00-6,87 (m, 1H), 6,65 (s, 1H), 5,85-5,50 (m, 2H), 4,93 (d, 2H), 4,61 (q, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,51 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,35 (t, 3H), 1,32 (s, 9H).
[0249] Etapa 4: síntesis de (trans)-1-(4-amino-n-but-2-enil)-2-(1-etil-3-metil-1-hidropirazol-5-carboxamido)-7-metoxi-1H-bencimidazol-5-carboxamida
[0251] Se disolvió el compuesto 1d (290 mg, 0,57 mmol) en metanol (10 ml) y se añadió ácido clorhídrico (disolución acuosa 6 N, 3 ml, 18 mmol) gota a gota. Tras agitar la disolución de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos, se aumentó la temperatura hasta 40°C y se continuó la agitación durante 3 h. Se secó la disolución de reacción por centrifugación y se separó el producto bruto obtenido y se purificó mediante columna de fase inversa (eluyente: agua/acetonitrilo = 50/50, v/v) para obtener el compuesto (trans)-1-(4-amino-n-but-2-eno)-2-(1-etil-3-metil-1-hidropirazol-5-carboxamida)-7-metoxi-1-hidro-bencimidazol-5-carboxamida (compuesto 1e) (230 mg, rendimiento del 98 %), como un sólido de color amarillo pálido.
[0253] EM (ESI) m/z = 412,0 [M+H]+.
[0255] Etapa 5: síntesis de (E)-1-(4-((4-carbamoil-2-(3-morfolino)-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamida)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida
[0257] Se disolvieron el compuesto 1e (150 mg, 0,37 mmol), 4-cloro-3-(3-morfolino)-5-nitrobenzamida (127 mg, 0,37 mmol) y DIPEA (220 mg, 1,85 mmol) en n-butanol (5 ml), se calentó la mezcla de reacción hasta 120°C y se agitó a esta temperatura durante 48 h. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se diluyó la mezcla con agua, se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3) y se lavó la fase orgánica combinada con salmuera saturada (15 ml x 2), se secó con sulfato de sodio anhidro. Se secó el disolvente por centrifugación, se separó el producto bruto obtenido mediante cromatografía en columna de fase inversa (eluyente: acetonitrilo agua = 30/70, v/v) para obtener (E)-1-(4-((4-carbamoil-2-(3-morfolino)-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamida)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida (compuesto 1f) (130 mg, rendimiento del 48,3 %).
[0259] EM (ESI) m/z = 719,3 [M+H]+.
[0261] Etapa 6: síntesis de (E)-1-(4-((2-amino-4-carbamoil-6-(3-morfolino)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamida)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida
[0263] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (0,35 ml) gota a gota a una disolución de compuesto 1f (130 mg, 0,18 mmol) en metanol (5 ml). Tras agitar la disolución de reacción a 0°C durante 5 minutos, se añadió lentamente una disolución acuosa (2 ml) de ditionito de sodio (154 mg, 0,28 mmol) gota a gota. Se calentó lentamente la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 3 h. Se diluyó la mezcla con agua, se filtró y se secó el filtrado por centrifugación. Se separó el producto bruto obtenido mediante cromatografía en columna de fase inversa (eluyente: acetonitrilo/agua = 50/50, v/v) para obtener (E)-1-(4-((2-amino)-4-carbamoil-6-(3-morfolino)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida 1g (91 mg, rendimiento del 74 %), como un sólido blanco.
[0265] EM (ESI) m/z = 688,3 [M+H]+.
[0267] Etapa 7: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-carboxamida
[0268] Se mezclaron el compuesto 1g (91 mg, 0,13 mmol) e isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (28 mg, 0,13 mmol) y se disolvieron en DMF (3 ml) y se agitaron a temperatura ambiente durante 0,5 h, después se añadieron sucesivamente HATU (49 mg, 0,13 mmol) y DIPEA (34 mg, 0,26 mmol) y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 2 h. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC de fase inversa para obtener el compuesto 1 (21 mg, rendimiento del 19 %) como un sólido blanco.
[0270] EM (ESI) m/z = 867,4 [M+H]+.
[0272] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,80-12,92 (m, 1H), 9,64-9,73 (m, 1H), 7,93-8,01 (m, 1H), 7,64-7,67 (m, 2H), 7,28­ 7,43 (m, 3H), 6,52-6,57 (m, 2H), 5,76-5,82 (m, 2H), 4,85-4,94 (m, 4H), 4,51-4,58 (m, 2H), 3,99-4,05 (m, 3H), 3,90-3,97 (m, 4H), 3,71 (s, 3H), 3,24-3,32 (m, 4H), 3,11-3,17 (m, 4H), 2,92-3,06 (m, 4H), 2,65-2,70 (m, 4H), 2,54-2,55 (m, 4H), 2,31-2,36 (m, 4H), 2,11 (s, 3H), 1,86-1,95 (m, 2H), 1,26-1,33 (m, 3H), 1,14-1,21 (m, 3H).
[0274] Ejemplo 2
[0275]
[0277] Etapa 1: síntesis de (E)-4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)amino)-3-metoxi-5-nitrobenzoato de metilo Se dispersó 4-cloro-3-metoxi-5-nitrobenzoato de metilo (30 g, 122 mmol) en n-butanol (500 ml), después se añadieron (E)-(4-aminobutano-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo (22,8 g, 122 mmol) y DIPEA (78,9 g, 609 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo y se añadió una cantidad apropiada de ácido clorhídrico diluido (0,5 M) en un baño de hielo para ajustar el pH a neutro. Se lavó la fase orgánica separada con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener 2b (48,3 g, rendimiento del 99 %).
[0278] EM (ESI) m/z = 396,3 [M+H].
[0279] Etapa 2: síntesis de (E)-3-amino-4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)amino)-5-metoxibenzoato de metilo En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (120 ml) a una disolución de 2b (48,3 g, 122 mmol) en metanol (400 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (106,3 g, 611 mmol) y se calentó lentamente la mezcla hasta temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 2 h. Se separaron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, que se purificó en una columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) para obtener el compuesto 2c (28,6 g, rendimiento del 64 %).
[0280] EM (ESI) m/z = 366,3 [M+H].
[0281] Etapa 3: síntesis de (E)-1-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamido)-7-metoxi-1H-metil-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0282] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (8,7 g, 41,1 mmol) a una disolución de 2c (15 g, 41,1 mmol) en DMF (200 ml). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (15,9 g, 123,3 mmol) y HATU (18,8 g, 49,3 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 2d (14,4 g, rendimiento del 64 %).
[0283] EM (ESI) m/z = 544,3 [M+H].
[0284] Etapa 4: síntesis de (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0285] En un baño de hielo, se añadió TFA (6 ml) a una disolución de 2d (6 g, 11 mmol) en DCM (200 ml) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 2 h. Se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida, se añadió acetato de etilo y después se eliminó TFA libre mediante secado por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 2e (4,9 g, rendimiento del 99 %).
[0286] EM (ESI) m/z = 444,3 [M+H].
[0287] Etapa 5: síntesis de (E)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1-(4-((4-(metoxicarbonil)-2-(3-morfolinopropoxi)-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0288] Se dispersó 2e (4,9 g, 11 mmol) en n-butanol (100 ml) y se añadieron 4-cloro-3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzoato de metilo (4,0 g, 11 mmol) y DIPEA (7,2 g, 55 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación y se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) para obtener 2f (8,4 g, rendimiento del 99 %).
[0289] EM (ESI) m/z = 766,3 [M+H].
[0290] Etapa 6: síntesis de (E)-1-(4-((2-amino-4-(metoxicarbonil)-6-(3-morfolinopropoxi)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil)-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0291] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (11 ml) a una disolución de 2f (8,4 g, 11 mmol) en metanol (50 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (9,6 g, 55 mmol) y se calentó lentamente hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 2 h. Se separaron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto y después se purificó con una columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) para obtener el compuesto 2g (5,1 g, rendimiento del 63 %).
[0292] EM (ESI) m/z = 736,3 [M+H].
[0293] Etapa 7: síntesis de (E)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0294] En un baño de hielo, a una disolución de 2g (5,1 g, 6,94 mmol) en DMF (100 ml) se le añadió isotiocianato de 1 -etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (1,4 g, 6,94 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (2,7 g, 20,82 mmol) y HATU (3,2 g, 8,33 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua, se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró la disolución y se secó el sólido para obtener 2h (4,8 g, rendimiento del 77 %).
[0295] EM (ESI) m/z = 897,3 [M+H]
[0296] Etapa 8: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5(-carboxi-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico Se disolvió 2h (4,8 g, 5,38 mmol) en una disolución mixta (20 ml) de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (2,3 g, 53,8 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente y se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que ya no precipitó el sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 2i (4,65 g, rendimiento del 99 %).
[0297] EM (ESI) m/z = 869,3 [M+H]
[0298] Etapa 9: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolino)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formamida
[0299] Se disolvió 2i (4,65 g, 5,38 mmol) en DMF (100 ml) y se añadieron HATU (4,9 g, 12,86 mmol) y DIPEA (4,2 g, 32,14 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (1,3 g, 16,07 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 2 (2,5 g, rendimiento del 54 %).
[0300] EM (ESI) m/z = 867,3 [M+H]
[0301] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,79-12,96 (m, 1H), 11,30-11,46 (m, 1H), 7,92-8,14 (m, 2H), 7,63-7,69 (m, 2H), 7,33­ 7,45 (m, 3H), 7,26-7,32 (m, 1H), 6,53-6,59 (m, 1H), 5,81-5,92 (m, 1H), 5,68-5,79 (m, 1H), 4,51-4,59 (m, 2H), 3,97-4,04 (m, 2H), 3,85-3,93 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,72-3,79 (m, 2H), 3,02-3,24 (m, 6H), 2,85-2,98 (m, 2H), 2,58 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,90-2,01 (m, 2H), 1,30 (t, J = 7,08 Hz, 3H), 1,17 (t, J = 7,44 Hz, 3H).
[0302] Ejemplo 3
[0305]
[0308] Etapa 1: síntesis de (3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de éster (E)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilaino)-1-(4-(2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-metílico de metilo
[0309] En un baño de hielo, a una disolución de 2g (0,5 g, 0,69 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (0,18 g, 0,83 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (0,27 g, 2.08 mmol) y HATU (0,32 g, 0,83 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 3a (623 mg, rendimiento del 99 %).
[0310] EM (ESI) m/z = 914,3 [M+H]
[0311] Etapa 2: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico Se disolvió 3a (623 mg, 0,68 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio hidratado (0,17 g 4,08 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que ya no precipitó el sólido, se filtró y se secó el sólido para obtener el compuesto 3b (610 mg, rendimiento del 99 %).
[0312] EM (ESI) m/z = 886,3 [M+H]
[0313] Etapa 3: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formamida
[0314] Se disolvió 3b (610 mg, 0,68 mmol) en DMF (10 ml) y se añadieron HATU (4,9 g, 1,36 mmol) y DIPEA (0,53 g, 4.08 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (0,16 g, 2,04 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 3 (206 mg, rendimiento del 34 %).
[0315] EM (ESI) m/z = 884,3 [M+H]
[0316] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,80-12,91 (m, 1H), 11,10-11,23 (m, 1H), 7,91-8,12(m, 2H), 7,60-7,69 (m, 2H), 7,26­ 7,48 (m, 4H), 5,71-5,95 (m, 2H), 3,98-4,11 (m, 2H), 3,85-3,95 (m, 2H), 3,71-3,83 (m, 5H), 3,04-3,29 (m, 8H), 2,88-3,01 (m, 2H), 2,56-2,60 (m, 4H), 1,95-2,04 (m, 2H), 1,12-1,24 (m, 6H).
[0317] Ejemplo 4
[0320]
[0322] Etapa 1: síntesis de (E)-4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)amino)3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzoato de metilo
[0323] Se dispersó 4-cloro-3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzoato de metilo (6,8 g, 19 mmol) en n-butanol (100 ml) y después se añadieron (E)-(4-aminobut-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo (3,5 g, 19 mmol) y DIPEA (12,3 g, 95 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo y se añadió una cantidad apropiada de ácido clorhídrico diluido (0,5 M) en un baño de hielo para ajustar el pH a neutro. Se lavó la fase orgánica separada con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener 4b (7,3 g, rendimiento del 76 %).
[0324] EM (ESI) m/z = 509,3 [M+H]
[0325] Etapa 2: síntesis de (E)-3-amino-4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)amino)-5-(3-morfolinopropoxil)benzoato de metilo
[0326] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (15 ml) a una disolución de 4b (7,3 g, 14,4 mmol) en metanol (100 ml). Después de 10 minutos, se añadió disolución acuosa de ditionito de sodio (12,5 g, 71,9 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, que se purificó en una columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) para obtener el compuesto 4c (4,5 g, rendimiento del 65 %).
[0327] EM (ESI) m/z = 479,3 [M+H]
[0328] Etapa 3: síntesis de (E)-1-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0329] En un baño de hielo, a una disolución de 4c (1,8 g, 3,76 mmol) en DMF (30 ml) se le añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (0,96 g, 4,52 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (1,46 g, 11,3 mmol) y HATU (1,72 g, 4,52 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 4d (1,9 g, rendimiento del 77 %).
[0330] EM (ESI) m/z = 657,3 [M+H]
[0331] Etapa 4: síntesis de (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0332] En un baño de hielo, se añadió TFA (3 ml) a 4d (1,9 g, 2,9 mmol) en DCM (40 ml) y después se calentó hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 2 h. Se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida, se añadió acetato de etilo y después se eliminó TFA libre mediante secado por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 4e (1,6 g, rendimiento del 99 %).
[0333] EM (ESI) m/z = 557,3 [M+H]
[0334] Etapa 5: síntesis de (E)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-((4-(metoxicarbonil)-2-(metiltio))-6-nitrofenil)amino)but-2-cetoen-1-il)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0335] Se añadieron DIPEA (387 mg, 3 mmol) y 4-fluoro-3-metiltio-5-nitrobenzoato de metilo (245 mg, 1 mmol) a una disolución de (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinepropoxi)-1H-benzo[d]]imidazol-5-carboxilato de metilo (556 mg, 1 mmol) en DMF (10 ml) y se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Se vertió la disolución de reacción en agua, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 4f (616 mg, rendimiento del 79 %).
[0336] EM (ESI) m/z = 782,3 [M+H]
[0337] Etapa 6: síntesis de metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de éster (E)-1-(4-((2-amino-4-(metoxicarbonil)-6-(metiltio)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2)metílico de metilo
[0338] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (1 ml) a una disolución de 4f (616 mg, 0,79 mmol) en metanol (5 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (686 mg, 3,94 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, que después se purificó con una columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) para obtener el compuesto 4g (435 mg, rendimiento del 73 %).
[0339] EM (ESI) m/z = 752,3 [M+H]
[0340] Etapa 7: síntesis de (E)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0341] En un baño de hielo, a una disolución de 4g (145 mg, 0,193 mmol) en DMF (5 ml) se le añadió isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (46 mg, 0,232 mmol). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,579 mmol) y HATU (89 mg, 0,232 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 4h (150 mg, rendimiento del 85 %).
[0342] EM (ESI) m/z = 913,3 [M+H]
[0343] Etapa 8: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0344] Se disolvió 4h (150 mg, 0,16 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (69 mg, 1,64 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se secó la mezcla por centrifugación para eliminar el disolvente orgánico, se enfrió hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que ya no precipitó el sólido, se filtró y se secó el sólido para obtener el compuesto 4i (126 mg, rendimiento del 86 %).
[0345] EM (ESI) m/z = 885,3 [M+H]
[0346] Etapa 9: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida Se disolvió 4i (126 mg, 0,143 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (131 mg, 0,342 mmol) y DIPEA (110 mg, 0,855 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (34 mg, 0,428 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 4 (54 mg, rendimiento del 43 %).
[0347] EM (ESI) m/z = 883,3 [M+H]
[0348] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,79-12,88 (m, 1H), 11,10-11,12 (m, 1H), 7,95-8,12 (m, 2H), 7,85-7,89 (m, 1H), 7,62­ 7,68 (m, 2H), 7,33-7,46 (m, 3H), 6,52 (s, 1H), 5,71-5,78 (m, 2H), 5,11-5,18 (m, 2H), 4,85-4,94 (m, 2H), 4,47-4,55 (m, 2H), 4,05-4,10 (m, 4H), 3,87-3,91 (m, 4H), 3,71-3,81 (m, 4H), 3,22-3,29 (m, 2H), 3,08-3,18 (m, 8H)), 2,89-3,01 (m, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00-2,07 (m, 2H), 1,28 (t, J = 7,08 Hz, 3H), 1,17 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0349] Ejemplo 5
[0352]
[0355] Se preparó el compuesto 5 mediante el mismo método que el compuesto 4, excepto porque se intercambiaron los materiales de cierre de anillo usados en la etapa 3 y la etapa 7, es decir, se usó isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo en la etapa 3 para el cierre de anillo y se usó isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo en la etapa 7 para el cierre de anillo. Las demás etapas fueron las mismas que en el método experimental y se obtuvo el compuesto 5 (67 mg).
[0356] EM (ESI) m/z = 883,3 [M+H]
[0357] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,90-13,04 (m, 1H), 10,92-11,05 (m, 1H), 7,93-8,14 (m, 2H), 7,83-7,87 (m, 1H), 7,62­ 7,70 (m, 2H), 7,34-7,48 (m, 2H), 7,27-7,32 (m, 1H), 6,51-6,67 (m, 1H), 5,66-5,83 (m, 4H), 5,06-5,12 (m, 2H), 4,89-4,96 (m, 2H), 4,50-4,59 (m, 2H), 3,99-4,05 (m, 2H), 3,86-3,94 (m, 2H), 3,70-3,80 (m, 2H), 3,19-3,27 (m, 2H), 3,06-3,15 (m, 4H), 2,88-3,00 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,95-2,03 (m, 2H), 1,30 (t, J = 7,08 Hz, 3H), 1,17 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0358] Ejemplo 6
[0359]
[0362] Se preparó el compuesto 6 mediante el mismo método que la síntesis del compuesto 2. Se sustituyó 4-cloro-3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzoato de metilo usado en la síntesis del compuesto 2 por 4-fluoro-3-((3-morfolinopropil)tio)-5-nitrobenzoato de metilo, y los demás métodos fueron los mismos.
[0364] EM (ESI) m/z = 883,3 [M+H]
[0366] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,73-12,84 (m, 1H), 10,59-10,82 (m, 1H), 7,98-8,14 (m, 2H), 7,91-7,98 (m, 1H), 7,75­ 7,83 (m, 1H), 7,59-7,67 (m, 1H), 7,31-7,49 (m, 3H), 6,51-6,59 (m, 1H), 5,87-5,96 (m, 1H), 5,69-5,78 (m, 1H), 5,18-5,29 (m, 2H), 4,83-4,90 (m, 4H), 4,51-4,58 (m, 4H), 3,88-3,97 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,67-3,79 (m, 2H), 3,27-3,37 (m, 2H), 3,04-3,15 (m, 4H), 2,91-3,03 (m, 4H), 2,55 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,77-1,88 (m, 2H), 1,29 (t, J = 7,04 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0368] Ejemplo 7
[0371]
[0372]
[0375] Etapa 1: síntesis de (E)-1-(4-((2-(3-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propoxi)-4-(metoxicarbonil)-6-nitrofenil)amino)but-2-cetoen-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-lH-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0377] Se dispersó (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]]imidazol-5-carboxilato de metilo (0,65 g, 1,4 mmol) en n-butanol (15 ml) y se añadieron 4-(3-(2-cloro-5-(metoxicarbonil)-3-nitrofenoxi)propil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (630 mg, 1,4 mmol) y DIPEA (1,8 g, 14 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación y se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) para obtener 7a (312 mg, rendimiento del 26 %).
[0379] EM (ESI) m/z = 865,2 [M+H]+
[0381] Etapa 2: síntesis de (E)-1-(4-((2-amino-6-(3-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propoxi)-4-(metoxicarbonil)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0383] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (0,5 ml) a una disolución de 7a (285 mg, 0,36 mmol) en metanol (10 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (311 mg, 1,8 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se separaron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, compuesto 7b (296 mg, pureza del 90 %, rendimiento del 96 %).
[0385] EM (ESI) m/z = 835,0 [M+H]+
[0387] Etapa 3: síntesis de (E)-7-(3-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propoxi)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2)-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-5-(metoxicarbonil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-ilmetil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0389] En un baño de hielo, a una disolución de 7b (296 mg, 0,34 mmol) en DMF (3 ml) se le añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (66 mg, 0,34 mmol). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron HATU (155 mg, 0,41 mmol) y DIPEA (88 mg, 0,68 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 7c (346 mg, rendimiento del 97 %).
[0391] EM (ESI) m/z = 996,4 [M+H]+
[0393] Etapa 4: síntesis de ácido (E)-7-(3-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)propoxi)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil)-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1 -il)but-2-en-1 -il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0395] Se disolvió 7c (340 mg, 0,34 mmol) en una disolución mixta (5,5 ml) de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/0,5) y se añadió hidróxido de litio (142 mg, 3,4 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria y se disolvió el producto bruto en agua, se extrajo añadiendo acetato de etilo. Se ajustó la fase acuosa resultante obtenida mediante separación con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó el sólido, se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 7d (220 mg, rendimiento del 67 %).
[0396] EM (ESI) m/z = 968,4 [M+H]+
[0398] Etapa 5: síntesis de metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1H-benzo[d]imidazol-7-il)oxi)propil)piperazin-1-carboxilato de éster (E)-4-(3-((5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-terc-butílico de terc-butilo
[0400] Se disolvió 7d (158 mg, 0,16 mmol) en DMF (2 ml) y se añadieron HATU (182 mg, 0,48 mmol) y DIPEA (103 mg, 0,8 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (64,5 mg, 0,82 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. A la disolución de reacción se le añadió agua para precipitar un sólido, que se filtró, se lavó con agua pura y se secó para obtener el compuesto 7e (140 mg, rendimiento del 90 %).
[0402] EM (ESI) m/z = 966,5 [M+H]+
[0404] Etapa 6: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0406] En un baño de hielo, se añadió TFA (2 ml) a una disolución de compuesto 7e (140 mg, 0,14 mmol) en DCM (5 ml), se calentó lentamente la mezcla hasta temperatura ambiente, se hizo reaccionar durante 1 h y se secó por centrifugación para eliminar el disolvente. Se eliminó el TFA libre a presión reducida con una bomba de aceite para obtener el compuesto 7f (130 mg, pureza del 80 %).
[0408] EM (ESI) m/z = 866,4 [M+H]
[0410] Etapa 7: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0412] Se añadió disolución de formaldehído al 30 % (2 gotas) a una disolución de compuesto 7f (10 mg, 0,011 mmol) en metanol (1 ml), se añadió ácido acético después de 0,5 h para ajustar el pH a aproximadamente 4, después se añadió borohidruro de sodio (1,3 mg). Después de 3 h de reacción, se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se obtuvo el compuesto 7 (8,5 mg, rendimiento del 87 %) mediante purificación a través de HPLC preparativa.
[0414] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 D2O) 87,59 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,87-5,67 (m, 2H), 4,99-4,78 (m, 4H), 4,53-4,38 (m, 2H), 4,10 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,48 (s, 8H), 3,17 (dt, J = 13,6, 5,6 Hz, 2H), 3,04 (dd, J = 15,0, 7,7 Hz, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,06-1,97 (m, 2H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,09 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0416] EM (ESI) m/z = 880,4 [M+H]+.
[0418] Ejemplo 8
[0421]
[0424] Se añadió acetaldehído (18 mg) a una disolución de compuesto 7f (60 mg, 0,07 mmol) en metanol y se añadió ácido acético después de 0,5 h para ajustar el pH a aproximadamente 4, después se añadió cianoborohidruro de sodio (13 mg, 0,21 mmol). Después de 3 h de reacción, se añadió agua para extinguir la reacción. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 8 (31 mg, rendimiento del 49,3 %).
[0426] 1H-RMN (400 MHz, MeOD) 87,67 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,38 (s, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,07-5,96 (m, 1H), 5,93-5,79 (m, 1H), 5,19 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 5,07 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 4,68 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,87 (s, 7H), 3,64 (s, 4H), 3,51-3,40 (m, 3H), 3,40-3,34 (m, 2H), 3,29-3,22 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,27-2,17 (m, 2H), 1,44 (t, J = 7,2 Hz, 6H), 1,33 (t, J = 7,6 Hz, 3H).
[0427] EM (ESI) m/z = 894,41 [M+H]+.
[0429] Ejemplo 9
[0432]
[0435] Se añadió acetona (3 ml) a una disolución de compuesto 7f (50 mg, 0,058 mmol) en metanol y se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético. Se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante 4 horas y se enfrió la disolución de reacción hasta 0°C, después se añadió cianoborohidruro de sodio (11 mg, 0,17 mmol). Se hizo reaccionar la mezcla durante la noche a temperatura ambiente y se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 9 (23 mg, rendimiento del 43 %).
[0437] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da D2O) 87,61 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 5,87-5,62 (m, 2H), 4,90 (s, 4H), 4,45 (q, J = 6,7 Hz, 2H), 4,13 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,67-3,32 (m, 10H), 3,32-3,23 (m, 2H), 3,04 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,58 (s, 3H), 2,18-2,09 (m, 2H), 2,07 (s, 3H), 1,29 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,10 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0439] EM (ESI) m/z = 908,43 [M+H]+.
[0441] Ejemplo 10
[0444]
[0447] Se añadió 1-etoxi-1-trimetilsiloxiciclopropano (48 mg, 0,277 mmol) a una disolución de compuesto 7f (60 mg, 0,055 mmol) en metanol y se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético y después se añadió acetato de borohidruro de sodio (47 mg, 0,22 mmol) y se calentó hasta 50°C y se hizo reaccionar durante la noche. CL-EM mostró que todo se había convertido en la imina intermedia. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se añadió cianoborohidruro de sodio (10 mg, 0,16 mmol). Se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 10 (27,7 mg, rendimiento del 55 %).
[0449] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 D2O) 87,57 (s, 2H), 7,23 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,83-5,63 (m, 2H), 4,85 (d, J = 10,9 Hz, 4H), 4,45 (dd, J = 13,3, 6,5 Hz, 2H), 3,64 (s, 4H), 3,27-2,91 (m, 10H), 2,87 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,01 (s, 1H), 1,85 (s, 2H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,09 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,55 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 0,43 (s, 2H).
[0450] EM (ESI) m/z = 906,41 [M+H]+.
[0451] Ejemplo 11
[0454]
[0457] Se añadieron TEA (5,5 mg, 0,055 mmol) y anhídrido acético (3,3 mg, 0,033 mmol) a una disolución de 7f (10 mg, 0,011 mmol) en DMF (1 ml) y se hizo reaccionar la mezcla durante 2 ha temperatura ambiente. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa y se obtuvo el compuesto 11 (6,5 mg, rendimiento del 62 %).
[0458] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da D2O) 87,61 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 7,27 (s, 2H), 6,48 (s, 1H), 5,84-5,58 (m, 2H), 4,87 (d, J = 4,9 Hz, 4H), 4,47 (dd, J = 13,8, 6,8 Hz, 2H), 4,01 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,33 (s, 4H), 3,17-3,04 (m, 5H), 2,87 (s, 4H), 2,54 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,97 (s, 2H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,12 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0459] EM (ESI) m/z = 908,39 [M+H]+.
[0460] Según el método de síntesis del ejemplo 7, también se prepararon los compuestos 12-23 de los ejemplos 12-23.Ejemplo 12
[0463]
[0465] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (40 mg, 0,044 mmol) en metanol (2 ml) se le añadió una disolución de formaldehído al 30 % (2 gotas). Después de 0,5 h, se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4, después se añadió borohidruro de sodio (5,2 mg) y se extinguió la reacción añadiendo agua después de 3 h. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 12 (29 mg, rendimiento del 75 %).
[0466] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,79 (s, 1H), 11,85 (s, 2H), 8,03 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,36 (s, 2H), 7,34 (s, 2H), 6,49 (s, 1H), 5,97-5,84 (m, 1H), 5,79-5,65 (m, 1H), 4,96 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 4,86 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 4,49 (q, J = 7,0 Hz, 3H), 4,15-4,08 (m, 4H), 3,83 (s, 8H), 3,64 (s, 5H), 3,44 (s, 4H), 3,22 (s, 2H), 3,09 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,86 (d, J = 20,8 Hz, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,09 (s, 5H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0467] EM (ESI) m/z = 880,4 [M+H]+.
[0468] Ejemplo 13
[0471]
[0474] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (50 mg, 0,058 mmol) en metanol, se le añadió acetaldehído (18 mg), después de 0,5 h se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4 y después se añadió cianoborohidruro de sodio (13 mg, 0,21 mmol). Tras hacer reaccionar durante 3 h, se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 13 (30 mg, rendimiento del 58 %).
[0476] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,80 (s, 1H), 11,80 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,36 (s, 3H), 7,34 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,94-5,89 (m, 1H), 5,78-5,70 (m, 1H), 4,96 (d, J = 3,8 Hz, 2H), 4,86 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 4,50 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 4,09 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,68 (s, 4H), 3,38 (s, 4H), 3,20 (s, 4H), 3,09 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,09 (s, 5H), 1,26 (q, J = 6,9 Hz, 6H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0478] EM (ESI) m/z = 894,41 [M+H]+.
[0480] Ejemplo 14
[0483]
[0486] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (50 mg, 0,058 mmol) en metanol, se le añadió acetona (3 ml) y se ajustó el pH con ácido acético a aproximadamente 4, se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante 4 horas. Se enfrió la disolución de reacción hasta 0°C, después se añadió cianoborohidruro de sodio (11 mg, 0,17 mmol), se hizo reaccionar durante la noche a temperatura ambiente y se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrar la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 14 (23 mg, rendimiento del 43,3 %).
[0488] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,80 (s, 1H), 11,86 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,36 (s, 3H), 7,34 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,99-5,87 (m, 1H), 5,79-5,70 (m, 1H), 4,96 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 4,86 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 4,50 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 4,10 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,71-3,37 (m, 8H), 3,22 (s, 2H), 3,09 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,09 (s, 5H), 1,30 (d, J = 6,5 Hz, 5H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0490] EM (ESI) m/z = 908,43 [M+H]+.
[0491] Ejemplo 15
[0494]
[0497] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (50 mg, 0,058 mmol) en metanol, se le añadió 1-etoxi-1-trimetilsililoxiciclopropano (48 mg, 0,277 mmol), se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético, después se añadió acetato de borohidruro de sodio (47 mg, 0,22 mmol) y se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante la noche. CL-EM mostró que todo se había convertido en la imina intermedia. Tras enfriar hasta temperatura ambiente, se añadió cianoborohidruro de sodio (10 mg, 0,16 mmol). Se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 15 (9 mg, rendimiento del 17 %).
[0499] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 8 12,82 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,45-7,26 (m, 3H), 6,52 (s, 1H), 5,98-5,84 (m, 1H), 5,79-5,68 (m, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,85 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 4,52 (dd, J = 14,2, 7,2 Hz, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,79 (s, 2H), 3,66-3,14 (m, 6H), 3,10 (dd, J = 15,0, 7,5 Hz, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,11 (s, 2H), 1,99 (s, 1H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 0,99 (s, 2H), 0,74 (s, 2H).
[0501] EM (ESI) m/z = 906,41 [M+H]+.
[0503] Ejemplo 16
[0506]
[0509] A una disolución de compuesto (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (20 mg, 0,023 mmol) en metanol, se le añadió una disolución de formaldehído al 30 % (2 gotas), después de 0,5 h, se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4, después se añadió borohidruro de sodio (2,6 mg, 0,069 mmol) y se extinguió la reacción añadiendo agua después de 3 h. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 16 (10 mg, rendimiento del 48 %).
[0511] EM (ESI) m/z = 896,37 [M+H]+.
[0513] Ejemplo 17
[0516]
[0519] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoiM-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (60 mg, 0,07 mmol) en metanol, se le añadió acetaldehído (18 mg). Después de 0,5 h, se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4 y después se añadió cianoborohidruro de sodio (13 mg, 0,21 mmol). Tras hacer reaccionar durante 3 h, se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrar la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 17 (26 mg, rendimiento del 41 %).
[0521] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,80 (s, 1H), 11,77 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,36 (s, 2H), 6,51 (s, 1H), 5,92-5,79 (m, 1H), 5,79-5,68 (m, 1H), 5,15 (d, J = 2,6 Hz, 2H), 4,91 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 4,51 (dd, J = 14,1, 7,0 Hz, 4H), 4,14 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,70 (s, 4H), 3,39 (s, 5H), 3,20 (s, 4H), 3,09 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,13 (s, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,33-1,19 (m, 7H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0523] EM (ESI) m/z = 910,39 [M+H]+.
[0525] Ejemplo 18
[0528]
[0531] A una disolución de ((E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (60 mg, 0,07 mmol) en metanol, se le añadió acetona (3 ml) y después se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético, se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante 4 horas. Se enfrió la disolución de reacción hasta 0°C, después se añadió cianoborohidruro de sodio (11 mg, 0,17 mmol). Se hizo reaccionar la mezcla durante la noche a temperatura ambiente y se añadió agua para extinguir la reacción. Se concentró la disolución de reacción, después se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 18 (17 mg, 26 %).
[0533] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,81 (s, 1H), 12,12 (s, 1H), 11,84 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,37 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 5,91-5,67 (m, 2H), 5,15 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 4,91 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 4,51 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 4,16 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,81-3,39 (m, 10H), 3,24 (s, 2H), 3,09 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,54 (s, 3H), 2,45 (s, 4H), 2,14 (s, 2H), 2,09 (s, 3H), 1,30 (d, J = 6,5 Hz, 6H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
[0534] EM (ESI) m/z = 924,40 [M+H]+.
[0536] Ejemplo 19
[0539]
[0542] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoiM-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (60 mg, 0,07 mmol) en metanol, se le añadió 1-etoxi-1-trimetilsiloxiciclopropano (48 mg, 0,277 mmol), se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético, después se añadió acetato de borohidruro de sodio (47 mg, 0,22 mmol), se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante la noche. CL-EM mostró que todo se había convertido en la imina intermedia. Se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente y se añadió cianoborohidruro de sodio (10 mg, 0,16 mmol). Se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 19 (16 mg, rendimiento del 25 %).
[0544] EM (ESI) m/z = 922,39 [M+H]+.
[0546] Ejemplo 20
[0549]
[0552] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (10 mg, 0,011 mmol) en metanol, se le añadió una disolución de formaldehído al 30 % (2 gotas). Después de 0,5 h, se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4, después se añadió borohidruro de sodio (1,3 mg, 0,033 mmol) y se extinguió la reacción con agua después de 3 h. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 20 (5 mg, rendimiento del 51 %).
[0554] EM (ESI) m/z = 896,37 [M+H]+.
[0556] Ejemplo 21
[0557]
[0560] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (60 mg, 0,07 mmol) en metanol, se le añadió acetaldehído (18 mg). Después de 0,5 h, se añadió ácido acético para ajustar el pH a aproximadamente 4 y después se añadió cianoborohidruro de sodio (13 mg, 0,21 mmol). Tras hacer reaccionar durante 3 h, se extinguió la reacción añadiendo agua. Después de concentrar la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 21 (8 mg, rendimiento del 12 %).
[0562] 1H-RMN (400 MHz, MeOD-d4) 87,83-7,90 (m, 1H), 7,74-7,79 (m, 1H), 7,68-7,74 (m, 1H), 7,34-7,45 (m, 1H), 6,75-6,83 (m, 1H), 5,82-6,02 (m, 2H), 5,18-5,34 (m, 4H), 4,67-4,79 (m, 2H), 4,17-4,28 (m, 2H), 3,54-3,99 (m, 8H), 3,36-3,47 (m, 4H), 3,26-3,30 (m, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,17-2,27 (m, 2H), 1,42-1,53 (m, 6H), 1,32-1,39 (m, 3H).
[0564] EM (ESI) m/z = 910,39 [M+H]+.
[0566] Ejemplo 22
[0569]
[0572] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (60 mg, 0,07 mmol) en metanol, se le añadió acetona (3 ml) y después se ajustó el pH con ácido acético a aproximadamente 4, se calentó la mezcla hasta 50°C para reaccionar durante 4 horas, se enfrió la disolución de reacción hasta 0°C, después se añadió cianoborohidruro de sodio (11 mg, 0,17 mmol), se hizo reaccionar la mezcla durante la noche a temperatura ambiente y se añadió agua para extinguir la reacción. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 22 (17 mg, 26 %).
[0574] 1H-RMN (400 MHz, MeOD-d4) 87,85-7,90 (m, 1H), 7,74-7,79 (m, 1H), 7,70-7,74 (m, 1H), 7,37-7,41 (m, 1H), 6,78-6,83 (m, 1H), 5,82-6,01 (m, 2H), 5,18-5,34 (m, 4H), 4,68-4,78 (m, 2H), 4,19-4,26 (m, 2H), 3,66-3,87 (m, 8H), 3,40-3,47 (m, 2H), 3,28-3,32 (m, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,58 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,18-2,28 (m, 2H), 1,44-1,53 (m, 9H), 1,31-1,40 (m, 3H).
[0576] EM (ESI) m/z = 924,40 [M+H]+.
[0578] Ejemplo 23
[0579]
[0582] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida (40 mg, 0,045 mmol) en metanol, se le añadió 1-etoxM-trimetilsiloxiciclopropano (39 mg, 0,225 mmol), se ajustó el pH a aproximadamente 4 con ácido acético, después se añadió borohidruro de acetato de sodio (47 mg, 0,22 mmol), se calentó la mezcla hasta 50°C y se hizo reaccionar durante la noche, después se añadió agua para extinguir la reacción. Después de concentrarse la disolución de reacción, se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 23 (10 mg, rendimiento del 24 %).
[0584] EM (ESI) m/z = 922,39 [M+H]+.
[0586] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoiM-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-7-metoxMH-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida en DMS, se le añadió TEA y el cloruro de ácido correspondiente, se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa y se obtuvieron los compuestos 24, 25, 26, 27, 28. Las estructuras de compuestos y la caracterización se muestran en la tabla 1 a continuación:
[0588] Tabla 1: estructuras y caracterización de algunos compuestos de ejemplo
[0591]
[0592]
[0595] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida en DMF, se le añadieron TEA y el cloruro de ácido correspondiente, se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h y se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa. Se obtuvieron los compuestos 29, 30, 31, 32, 33 y 34. Las estructuras de compuestos y la caracterización se muestran en la tabla 2 a continuación:
[0596] Tabla 2: estructuras y caracterización de algunos compuestos de ejemplo
[0599]
[0600]
[0603] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoiM-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-iTietiMH-pirazol-5-fonTiilaiTiino)-7-(iTietiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida en DMF, se le añadieron TEA y el cloruro de ácido correspondiente y se llevó a cabo la reacción durante 2 h a temperatura ambiente. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa. Se obtuvieron los compuestos 35, 36, 37, 38, 39, 40. Las estructuras de compuestos y la caracterización se muestran en la tabla 3 a continuación:
[0604] Tabla 3: estructuras y caracterización de compuestos en algunos ejemplos
[0606]
[0607] A una disolución de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-(piperazin-1-il)propoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida en DMF, se le añadieron TEA y el cloruro de ácido correspondiente y se llevó a cabo la reacción durante 2 h a temperatura ambiente. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa para obtener los compuestos 41, 42, 43, 44, 45, 46. Las estructuras de compuestos y la caracterización se muestran en la tabla 4 a continuación:
[0609] Tabla 4: estructuras y caracterización de algunos compuestos de ejemplo
[0612]
[0613]
[0614] _____ _____________ _ ____
[0616] Ejemplo 47
[0619]
[0622] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(((2-metoxi-4-(metoxicarbonil))-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0624] Se dispersó 4e (2,1 g, 3,8 mmol) en n-butanol (20 ml) y se añadieron 4-cloro-3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzoato de metilo (0,93 g, 3,8 mmol) y DIPEA (2,5 g, 19 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación y se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) para obtener 47a (2,0 g, rendimiento del 70 %).
[0626] EM (ESI) m/z = 766,2 [M+H]
[0628] Etapa 2: síntesis de (E)-metiM-(4-(((2-amino-6-metoxi-4-(metoxicarbonil)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-carboxiamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0630] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (1 ml) a una disolución de 47a (600 mg, 0,78 mmol) en metanol (5 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (679 mg, 3,9 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el compuesto 47b (459 mg, rendimiento del 80 %).
[0632] EM (ESI) m/z = 736,3 [M+H]
[0634] Etapa 3: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-5-(metoxicarbonil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H benzo[d]imidazol-5 carboxilato de metilo
[0635] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (58 mg, 0,27 mmol) a una disolución de 47b (200 mg, 0,27 mmol) en DMF (5 ml). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (70 mg, 0,54 mmol) y HATU (102 mg, 0,27 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 47c (185 mg, rendimiento del 75 %).
[0636] EM (ESI) m/z = 915,3 [M+H]
[0637] Etapa 4: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0638] Se disolvió 47c (185 mg, 0,2 mmol) en una disolución mixta (5 ml) de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (42 mg, 1,0 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido, se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 47d (141 mg, rendimiento del 80 %).
[0639] EM (ESI) m/z = 887,3 [M+H]
[0640] Etapa 5: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H)benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0641] Se disolvió 47d (141 mg, 0,16 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (152 mg, 0,4 mmol) y DIPEA (82 mg, 0,64 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (38 mg, 0,48 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 47 (30 mg, rendimiento del 43 %).
[0642] EM (ESI) m/z = 885,4 [M+H]
[0643] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,81-12,98 (m, 2H), 9,69-9,77 (m, 1H), 7,93-8,02 (m, 2H), 7,61-7,69 (m, 2H), 7,37­ 7,43 (m, 2H), 7,26-7,34 (m, 2H), 5,71-5,90 (m, 4H), 4,80-4,94 (m, 4H), 4,46-4,54 (m, 2H), 3,90-4,00 (m, 4H), 3,75 (s, 3H), 3,58-3,64 (m, 4H), 3,21-3,26 (m, 2H), 3,05-3,20 (m, 6H), 2,93-3,00 (m, 2H), 2,64-2,70 (m, 2H), 2,31-2,36 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,80-1,94 (m, 4H), 1,29 (t, J = 7,04 Hz, 3H), 1,16 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0644] Ejemplo 48
[0647]
[0650] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0651] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (0,15 g, 0,69 mmol) a una disolución de 2g (0,51 g, 0,69 mmol) en DMF (5 ml). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (0,27 g, 2,07 mmol) y HATU (0,32 g, 0,83 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 48a (0,48 g, rendimiento del 77 %).
[0652] EM (ESI) m/z = 915,3 [M+H]
[0653] Etapa 2: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-metilamido)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0654] Se disolvió 48a (0,48 g, 0,52 mmol) en una disolución mixta (20 ml) de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio hidratado (0,22 g, 5,2 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 48b (0,45 g, rendimiento del 97 %). EM (ESI) m/z = 886,3 [M+H]
[0655] Etapa 3: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino))-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0656] Se disolvió 48b (0,45 g, 0,51 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (0,46 g, 1,22 mmol) y DIPEA (0,33 g, 2,55 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (0,2 g, 2,55 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 48 (0,26 g, rendimiento del 57 %).
[0657] EM (ESI) m/z = 884,4 [M+H]
[0658] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,82-12,97 (m, 2H), 9,55-9,85 (m, 1H), 7,92-8,02 (m, 2H), 7,61-7,67 (m, 2H), 7,35­ 7,45 (m, 2H), 7,28-7,35 (m, 3H), 5,77-5,89 (m, 2H), 4,86-4,93 (m, 4H), 4,44-4,52 (m, 2H), 4,03-4,07 (m, 2H), 3,91-3,98 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,59-3,67 (m, 4H), 3,26-3,32 (m, 4H), 3,12-3,18 (m, 4H), 2,95-3,04 (m, 2H), 2,53 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,86-1,99 (m, 2H), 1,26 (t, J = 7,04 Hz, 3H),1,17 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0659] Ejemplo 49
[0662]
[0664] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol 5-carboxilato de metilo
[0665] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (49 mg, 0,23 mmol) a una disolución de 4g (145 mg, 0,19 mmol) en DMF (5 ml). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,58 mmol) y HATU (89 mg, 0,23 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 49a (116 mg, rendimiento del 64 %).
[0666] EM (ESI) m/z = 931,3 [M+H]
[0667] Etapa 2: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0668] Se disolvió 49a (116 mg, 0,12 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio hidratado (54 mg, 12,4 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 49b (102 mg, rendimiento del 90 %).
[0669] EM (ESI) m/z = 903,3 [M+H]
[0670] Etapa 3: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino))-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0671] Se disolvió 49b (102 mg, 0,11 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (103 mg, 0,27 mmol) y DIPEA (88 mg, 0,68 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (27 mg, 0,34 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 49 (46 mg, rendimiento del 45 %).
[0672] EM (ESI) m/z = 901,3 [M+H]
[0673] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,77-13,08 (m, 1H), 10,91-10,99 (m, 1H), 7,94-8,14 (m, 2H), 7,83-7,90 (m, 1H), 7,61­ 7,68 (m, 2H), 7,31-7,48 (m, 3H), 5,72-5,84 (m, 2H), 5,09-5,17 (m, 2H), 4,87-4,91 (m, 2H), 4,41-4,49 (m, 2H), 4,03-4,13 (m, 2H), 3,86-3,97 (m, 2H), 3,69-3,81 (m, 2H), 3,22-3,33 (m, 2H), 3,07-3,20 (m, 4H), 2,91-3,04 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,99-2,07 (m, 2H), 1,25 (t, J = 7,04 Hz, 3H), 1,16 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0674] Ejemplo 50
[0677]
[0680] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0681] En un baño de hielo, a una disolución de 4g (145 mg, 0,19 mmol) en DMF (5 ml), se añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (49 mg, 0,23 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,58 mmol) y HATU (89 mg, 0,23 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 50a (116 mg, rendimiento del 64 %).
[0682] EM (ESI) m/z = 930,3 [M+H]
[0683] Etapa 2: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico Se disolvió 50a (116 mg, 0,12 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio hidratado (54 mg, 12,4 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 50b (103 mg, rendimiento del 91 %).
[0684] EM (ESI) m/z = 902,3 [M+H]
[0685] Etapa 3: síntesis de (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-formilamida
[0686] Se disolvió 50b (103 mg, 0,11 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (103 mg, 0,27 mmol) y DIPEA (88 mg, 0,68 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (27 mg, 0,34 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 50 (36 mg, rendimiento del 35 %).
[0687] EM (ESI) m/z = 900,3 [M+H]
[0688] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,79-12,99 (m, 1H), 10,99-11,08 (m, 1H), 7,89-8,16 (m, 2H), 7,83-7,87 (m, 1H), 7,63­ 7,67 (m, 2H), 7,29-7,48 (m, 3H), 5,75-5,81 (m, 2H), 5,08-5,12 (m, 4H), 4,88-4,92 (m, 4H), 4,01-4,10 (m, 2H), 3,86-3,95 (m, 2H), 3,70-3,81 (m, 2H), 3,21-3,30 (m, 2H), 3,07-3,17 (m, 6H), 2,90-3,01 (m, 2H), 2,56 (s, 3H)), 1,97-2,09 (m, 2H), 1,17 (dt, J = 7,44, 3,00 Hz, 6H).
[0689] Ejemplo 51
[0692]
[0694] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-1-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0695] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (0,34 g, 1,55 mmol) a una disolución de 4c (0,74 g, 1,55 mmol) en DMF (5 ml). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (0,6 g, 4,65 mmol) y HATU (0,71 g, 1,86 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 51a (0,88 g, rendimiento del 86 %).
[0696] EM (ESI) m/z = 658,3 [M+H]
[0697] Etapa 2: síntesis de (E)-metiM-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(1-etil-4-fluoro-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0698] En un baño de hielo, se añadió TFA(3 ml) a 51a (0,88 g, 1,34 mmol) en DCM (40 ml) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente durante 2 h. Se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida, se añadió acetato de etilo y después se eliminó el TFA libre mediante secado por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 51b (0,66 g, rendimiento del 88 %).
[0699] EM (ESI) m/z = 558,3 [M+H]
[0700] Etapa 3: síntesis de (E)-metil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-1-(4-((4-(metoxicarbonil)-2-(metiltio)-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0701] A una disolución de 51b (557 mg, 1 mmol) en DMF (10 ml), se le añadieron DIPEA (387 mg, 3 mmol) y 4-fluoro-3-metiltio-5-nitrobenzoato de metilo (245 mg, 1 mmol), se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h. Se vertió la disolución de reacción en agua, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 51c (451 mg, rendimiento del 58 %).
[0702] EM (ESI) m/z = 783,3 [M+H]
[0703] Etapa 4: síntesis de metiltiazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinometil)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de éster (E)-1-(4-((2-amino-4-(metoxicarbonil)-6-(metiltio)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2)metílico de metilo
[0704] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (1 ml) a una disolución de 51c (451 mg, 0,58 mmol) en metanol (5 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (502 mg, 2,88 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiró la sal inorgánica mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto y después se purificó con una columna de gel de sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) para obtener el compuesto 51d (417 mg, rendimiento del 94 %).
[0705] EM (ESI) m/z = 753,3 [M+H]
[0706] Etapa 5: síntesis de (E)-metil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0707] En un baño de hielo, a una disolución de 51d (139 mg, 0,193 mmol) en DMF (5 ml), se le añadió isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (46 mg, 0,232 mmol). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,579 mmol) y HATU (89 mg, 0,232 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 51e (120 mg, rendimiento del 71 %).
[0708] EM (ESI) m/z = 914,3 [M+H]
[0709] Etapa 6: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0710] Se disolvió 51e (120 mg, 0,13 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (55 mg, 1,31 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 51f (112 mg, rendimiento del 96 %).
[0711] EM (ESI) m/z = 886,3 [M+H]
[0712] Etapa 7: síntesis de (E)-1-(4-(5-(5-carbamoil-2)-(1-estiren-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-estiren-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-anthralamido)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-formilamida
[0713] Se disolvió 51f (112 mg, 0,126 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (116 mg, 0,304 mmol) y DIPEA (98 mg, 0,759 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (30 mg, 0,380 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 51 (51 mg, rendimiento del 46 %).
[0715] EM (ESI) m/z = 884,3 [M+H]
[0717] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,76-13,12 (m, 1H), 11,07-11,17 (m, 1H), 7,95-8,13 (m, 2H), 7,85-7,90 (m, 1H), 7,61­ 7,70 (m, 2H), 7,31-7,46 (m, 3H), 6,51 (s, 1H), 5,71-5,76 (m, 2H), 5,09-5,16 (m, 2H), 4,89-4,96 (m, 2H), 4,42-4,47 (m, 4H), 4,00-4,07 (m, 2H), 3,85-3,94 (m, 2H), 3,70-3,81 (m, 2H), 3,18-3,28 (m, 2H), 3,04-3,13 (m, 2H), 2,87-3,00 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,10 (s, 6H), 1,95-2,04 (m, 2H), 1,23-1,32 (m, 6H).
[0719] Ejemplo 52
[0722]
[0725] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)butan-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0727] En un baño de hielo, a una disolución de 51d (139 mg, 0,193 mmol) en DMF (5 ml), se le añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (49 mg, 0,232 mmol). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,579 mmol) y HATU (89 mg, 0,232 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y precipitó un sólido amarillo. Se filtró el sólido y se secó para obtener 52a (118 mg, rendimiento del 68 %).
[0729] EM (ESI) m/z = 931,3 [M+H]
[0731] Etapa 2: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0733] Se disolvió 52a (118 mg, 0,13 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (55 mg, 1,31 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria y se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 52b (110 mg, rendimiento del 96 %).
[0735] EM (ESI) m/z = 903,3 [M+H]
[0737] Etapa 3: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino))-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0739] Se disolvió 52b (110 mg, 0,122 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (112 mg, 0,293 mmol) y DIPEA (95 mg, 0,732 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (29 mg, 0,366 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 52 (32 mg, rendimiento del 29 %).
[0740] EM (ESI) m/z = 901,3 [M+H]
[0741] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,93-12,98 (m, 1H), 10,88-10,96 (m, 1H), 7,94-8,13 (m, 2H), 7,84-7,88 (m, 1H), 7,63­ 7,68 (m, 2H), 7,28-7,46 (m, 3H), 5,70-5,83 (m, 2H), 5,06-5,12 (m, 2H), 4,90-4,96 (m, 2H), 4,45-4,52 (m, 4H), 3,98-4,06 (m, 2H), 3,86-3,94 (m, 2H), 3,68-3,80 (m, 2H), 3,19-3,27 (m, 2H), 3,05-3,16 (m, 4H), 2,88-3,00 (m, 2H), 2,49 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,93-2,03 (m, 2H), 1,28 (t, J = 7,04 Hz, 3H), 1,16 (t, J = 7,48 Hz, 3H).
[0742] Ejemplo 53
[0745]
[0748] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-1-(4-(2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-2-en-1-il)-7-(metiltio))-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0749] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (49 mg, 0,232 mmol) a una disolución de 51d (139 mg, 0,193 mmol) en DMF (5 ml). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (75 mg, 0,579 mmol) y HATU (89 mg, 0,232 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 53a (108 mg, rendimiento del 62 %).
[0750] EM (ESI) m/z = 932,3 [M+H]
[0751] Etapa 2: síntesis de (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-formamida
[0752] Se disolvió 53a (108 mg, 0,12 mmol) en una disolución mixta de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 1/1/1) y se añadió hidróxido de litio (49 mg, 1,16 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria, se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 53b (100 mg, rendimiento del 95 %).
[0753] EM (ESI) m/z = 904,3 [M+H]
[0754] Etapa 3: síntesis de (E)-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-4-fluoro-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida
[0755] Se disolvió 53b (100 mg, 0,111 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (102 mg, 0,266 mmol) y DIPEA (88 mg, 0,665 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (27 mg, 0,333 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 53 (41 mg, rendimiento del 41 %).
[0756] EM (ESI) m/z = 902,3 [M+H]
[0757] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 812,89-13,08 (m, 1H), 10,47-10,57 (m, 1H), 7,92-8,13 (m, 2H), 7,85-7,89 (m, 1H), 7,61­ 7,69 (m, 2H), 7,30-7,48 (m, 3H), 5,74-5,79 (m, 2H), 5,09-5,16 (m, 2H), 4,89-4,95 (m, 2H), 4,41-4,49 (m, 6H), 4,03-4,07 (m, 2H), 3,89-3,95 (m, 2H), 3,66-3,75 (m, 2H), 3,21-3,30 (m, 2H), 3,08-3,17 (m, 2H), 2,92-3,02 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,91-2,03 (m, 2H), 1,20-1,30 (m, 6H).
[0759] Ejemplo 54
[0762]
[0765] Etapa 1: síntesis de (E)-metil-1-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0767] En un baño de hielo, a una disolución de 4c (3,0 g, 6,27 mmol) en DMF (30 ml), se le añadió 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo isotiocianato (1,35 g, 6,90 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (1,62 g, 12,54 mmol) y HATU (2,62 g, 6,9 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 3 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 54a (3,21 g, rendimiento del 80 %).
[0769] EM (ESI) m/z = 640,3 [M+H]
[0771] Etapa 2: síntesis de (E)-metil-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0773] En un baño de hielo, se añadió TFA (5 ml) a 54a (3,20 g, 4,0 mmol) en DCM (30 ml) y después se calentó hasta temperatura ambiente durante 2 h. Se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida, se añadió acetato de etilo y después se eliminó el TFA libre mediante secado por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 54b (4,2 g), que se usó directamente en la siguiente etapa.
[0775] EM (ESI) m/z = 540,3 [M+H]
[0777] Etapa 3: síntesis de (E)-metil-2-(1-etil-3-metil-1-pirazol-5-formilamino)-1-(4-((4-(metoxicarbonil)-2-(metiltio)-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0779] A una disolución de 54b (296 mg, producto bruto, 0,37 mmol) en DMF (10 ml), se le añadieron DIPEA (143 mg, 1,1 mmol) y 4-fluoro-3-metiltio-5-nitrobenzoato de metilo (91 mg, 0,37 mmol), se hizo reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h. Tras completarse la reacción, se vertió la mezcla en agua, se filtró, se lavó con agua y se secó para obtener 54c como un sólido amarillo (120 mg, rendimiento del 42 %).
[0780] EM (ESI) m/z = 765,3 [M+H]
[0781] Etapa 4: síntesis de (E)-metil-1-(4-(((2-amino-4-(metoxicarbonil)-6-(metiltio)fenil)amino)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1 H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0782] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (1 ml) a una disolución de 54c (120 mg, 0,16 mmol) en metanol (5 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (140 mg, 0,8 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiró la sal inorgánica mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, que se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente: diclorometano/metanol = 10/1, v/v) para obtener el compuesto 54d (55 mg, rendimiento del 48 %).
[0783] EM (ESI) m/z = 735,3 [M+H]
[0784] Etapa 5: síntesis de (E)-metil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-1-(4-(2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-5-(metoxicarbonil)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)butan-2-en-1-il)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0785] En un baño de hielo, a una disolución de 54d (55 mg, 0,074 mmol) en DMF (5 ml), se le añadió isotiocianato de 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carbonilo (16 mg, 0,08 mmol). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (20 mg, 0,15 mmol) y HATU (34 mg, 0,09 mmol) y después se aumentó la temperatura hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 3,5 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido blanco por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 54e (50 mg, rendimiento del 75 %).
[0786] EM (ESI) m/z = 897,0 [M+H]
[0787] Etapa 6: síntesis de ácido (E)-1-(4-(5-carboxi-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-(metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxílico
[0788] Se disolvió 54e (50 mg, 0,056 mmol) en una disolución mixta (3,5 ml) de metanol, tetrahidrofurano y agua (razón en volumen: 2/1/0,5) y se añadió hidróxido de litio (12 mg, 0,28 mmol). Se aumentó la temperatura hasta 75°C y se agitó la reacción durante la noche. Se eliminó el disolvente orgánico mediante evaporación rotatoria. Se enfrió la mezcla hasta temperatura ambiente, se ajustó con ácido clorhídrico diluido (1 M) en un baño de hielo hasta que no precipitó ningún sólido. Se filtró el sólido y se secó para obtener el compuesto 54f (38 mg, rendimiento del 78 %).
[0789] EM (ESI) m/z = 867,0 [M+H]
[0790] Etapa 7: síntesis de (E)-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxamino)-7-metiltio)-1H-benzo[d]imidazol-5-formilamida
[0791] Se disolvió 54f (38 mg, 0,043 mmol) en DMF (5 ml) y se añadieron HATU (49 mg, 0,129 mmol) y DIPEA (30 mg, 0,215 mmol). Después de 0,5 h, se añadió bicarbonato de amonio (16 mg, 0,131 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la disolución de reacción y se purificó mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 54 (18 mg, rendimiento del 47 %) como un sólido blanco.
[0792] EM (ESI) m/z = 866,3 [M+H]
[0793] 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 812,98 (s, 2H), 9,79 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,87 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,63 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,78-5,61 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 4,90 (s, 2H), 4,52 (p, J = 7,3 Hz, 4H), 4,00 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,94 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,26 (d, J = 11,8 Hz, 3H), 3,11 (s, 3H), 2,97 (s, 3H), 2,43 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,96-1,81 (m, 2H), 1,28 (td, J = 7,1, 4,1 Hz, 6H).
[0794] Ejemplo 56
[0795]
[0798] En un baño de hielo, a una disolución de compuesto 55 (100 mg, 0,12 mmol) entetrahidrofurano (5 ml), se le añadieron trietilamina (36 mg, 0,36 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (14 mg, 0,13 mmol). Se aumentó la temperatura hasta temperatura ambiente y se hizo reaccionar durante 2 h. CL-EM mostró que se completó la reacción. Se añadieron carbonato de potasio (50 mg, 0,36 mmol) y 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octano (68 mg, 0,6 mmol) a la disolución de reacción y se aumentó la temperatura hasta 50°C para la reacción durante 2 h y se secó el disolvente por centrifugación. Se purificó el producto bruto mediante HPLC preparativa para obtener el compuesto 56 (15 mg).
[0799] Según el método de preparación del compuesto 56, usando el compuesto 55 y la amina correspondiente como materias primas, se obtuvieron los compuestos 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64.
[0802]
[0803]
[0805] Ejemplo 65
[0806]
[0809] Etapa 1: síntesis de 4-amino-2-fluoro-5-metoxibenzamida
[0810] A temperatura ambiente, se añadió paladio al 10 % sobre carbono (1,5 g) a una disolución de 2-fluoro-5-metoxi-4-nitrobenzamida (10 g, 46,7 mmol) en metanol (100 ml) y se realizó la hidrogenación a temperatura ambiente durante 5 h. Se separó el paladio sobre carbono mediante filtración y se secó el filtrado por centrifugación para obtener el compuesto 65a (7,7 g, rendimiento del 89 %).
[0811] EM (ESI) m/z = 185 [M+H]+
[0812] Etapa 2: síntesis de (E)-(4-((4-carbamoil-5-fluoro-2-metoxifenil)amino)but-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo
[0813] Se disolvió el compuesto 65a (7,5 g, 40,7 mmol) en DMF (150 ml) y se añadieron secuencialmente carbonato de potasio (8,4 g, 61 mmol) y (E)-(4-bromobut-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo (10,1 g, 40,7 mmol). Se calentó la mezcla hasta 60°C y se hizo reaccionar durante 8 horas. Después de enfriarse, se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración. Se secó el filtrado por centrifugación, se disolvió con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada respectivamente. Se secó la fase orgánica por centrifugación y se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) para obtener el compuesto 65b (5,2 g, rendimiento del 36 %).
[0814] EM (ESI) m/z = 354 [M+H]+
[0815] Etapa 3: síntesis de (E)-(4-((4-carbamoil-5-fluoro-2-metoxi-6-nitrofenil)amino)but-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo Se disolvió el compuesto 65b (5,2 g, 14,7 mmol) en anhídrido acético (30 ml) y, cuando se enfrió hasta 0°C en un baño de hielo, se añadió ácido nítrico (1,7 g, 17,6 mmol, pureza del 65% ) gota a gota a la disolución de reacción. Se mantuvo la reacción a 0°C durante 2 h. Se vertió la disolución de reacción en agua, se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera saturada. Se concentró la fase orgánica y se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) para obtener el compuesto 65c (2 g, rendimiento del 34 %).
[0816] EM (ESI) m/z = 399 [M+H]+
[0817] Etapa 4: síntesis de (E)-(4-((4-carbamoil-5-fluoro-2-metoxi-6-aminofenil)amino)but-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (5 ml) a una disolución de 65c (2 g, 5 mmol) en metanol (20 ml). Después de 10 minutos, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (4,3 g, 25 mmol) y se hizo reaccionar durante 2 h. Se retiraron las sales inorgánicas mediante filtración y se añadió acetato de etilo para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se secó por centrifugación para obtener el producto bruto, que se purificó en una columna de gel de sílice (eluyente: diclorometano/metanol = 50/1-30/1) para obtener el compuesto 65d (1,1 g, rendimiento del 64 %).
[0818] EM (ESI) m/z = 369 [M+H]+
[0819] Etapa 5: síntesis de (E)-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metiMH-pirazol-5-formilamino)-4-fluoro-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1-il)-2-en-1-il)carbamato de terc-butilo
[0820] En un baño de hielo, a una disolución de 65d (1,1 g, 2,9 mmol) en DMF (20 ml), se le añadió isotiocianato de 1 -etil-3-metiMH-pirazol-5-carbonilo (565 mg, 2,9 mmol). Tras hacer reaccionar durante 0,5 h, se añadieron DIPEA (748 mg, 5,8 mmol) y HATU (1,3 g, 3,48 mmol) y después se calentaron hasta temperatura ambiente para reaccionar durante 12 h. Se vertió la disolución de reacción lentamente en agua y se separó un sólido amarillo por precipitación. Se filtró el sólido y se secó para obtener 65e (1,1 g, rendimiento del 75 %).
[0821] EM (ESI) m/z = 530 [M+H]+
[0822] Etapa 6: síntesis de (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(4-etil-2-metiltiazol-5-formilamino)-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxilato de metilo
[0823] En un baño de hielo, se añadió TFA (5 ml) a 65e (1,1 g, 2,1 mmol) en DCM (10 ml) y después se calentó hasta temperatura ambiente durante 2 h. Se secó el disolvente por centrifugación a presión reducida, se añadió acetato de etilo y después se eliminó TFA libre mediante secado por centrifugación a presión reducida para obtener el compuesto 65f (1,5 g, que contenía ácido trifluoroacético).
[0824] EM (ESI) m/z = 403 [M+H]+.
[0825] Etapa 7: síntesis de (E)-1-(4-aminobut-2-en-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-4-fluoro-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-carboxamida
[0826] Se dispersó 65f (1,5 g, 2,1 mmol, pureza del 57 %) en n-butanol (10 ml) y se añadieron 4-cloro-3-(3-morfolinopropoxi)-5-nitrobenzamida (720 mg, 2,1 mmol) y DIPEA (1,35 g, 10,5 mmol). Se calentó la disolución de reacción hasta 120°C y se agitó durante 18 h. Se disolvió el producto bruto obtenido mediante destilación a presión reducida en acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera saturada respectivamente, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó por centrifugación y se purificó mediante columna de gel de sílice (eluyente: diclorometano/metanol = 30/1) para obtener 65g (770 mg, rendimiento del 49 %).
[0827] EM (ESI) m/z = 737 [M+H]+
[0828] Etapa 8: síntesis de (E)-1-(4-(((2-amino-4-carbamoil-6-(3-morfolinopropoxi)fenil)amino)but-2-eno-1-il)-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)-4-fluoro-7-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-5-formilamida
[0829] En un baño de hielo, se añadió hidróxido de amonio (1 ml) a una disolución de 65g (500 mg, 0,68 mmol) en metanol (10 ml). 10 minutos después, se añadió una disolución acuosa de ditionito de sodio (591 mg, 3,4 mmol) y se calentó lentamente la mezcla para reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Se retiró la sal inorgánica mediante filtración, se concentró el filtrado para obtener el producto bruto y después se purificó mediante cromatografía en columna de fase inversa (eluyente: acetonitrilo/agua = 60/40) para obtener el compuesto 65h (200 mg, rendimiento del 41 %).
[0830] EM (ESI) m/z = 707 [M+H]+
[0831] Etapa 9: síntesis de (E)-N-(5-carbamoil-1-(4-(5-carbamoil-2-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-formilamino)il)-4-fluoro-7-metoxi-1H)-benzo[d]imidazol-1-il)but-2-en-1-il)-7-(3-morfolinopropoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-etil-2-metiltiazol-5-formilamida
[0832] En un baño de hielo, se añadió isotiocianato de 4-etil-2-metiltiazol-5-carbonilo (30 mg, 0,14 mmol) a una disolución de 65h (100 mg, 0,14 mmol) en DMF (3 ml). Después de 0,5 h de reacción, se añadieron DIPEA (54 mg, 0,42 mmol) y HATU (53 mg, 0,14 mmol) y después se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente durante 2 h. Se purificó la disolución de reacción mediante HPLC preparativa para obtener 65 (20 mg, rendimiento del 16 %).
[0833] EM (ESI) m/z = 885 [M+H]+
[0834] Se usan los siguientes ejemplos experimentales para ilustrar los efectos beneficiosos de la presente invención:Ejemplo experimental 1: la prueba de afinidad de unión del compuesto de la presente invención y proteína STING
[0835] (1) Método experimental
[0836] Se usó la prueba de transferencia térmica de proteína (TSA) para determinar la afinidad de unión del compuesto con respecto a proteína STING. Se mezcló la proteína STING 100 ug/ml con diferentes concentraciones del compuesto y colorante naranja 5X SYPRO en un tampón de Hepes 20 mM, NaCl 150 mM, MgCh 1 mM, DTT 1 mM, pH = 7,5. Se midió la curva de disolución de proteína en un instrumento de qPCR, se ajustó el valor de Tf con el software Protein Thermal Shift Software 1.3, y se calculó la diferencia de Tf de la proteína cuando se añadieron diferentes concentraciones de compuesto y sin compuesto. Se ajustó la constante de disociación Kd y se obtuvo según el cambio de ATf con la concentración del compuesto. El compuesto 3 notificado en el artículo (Nature, diciembre de 2018; 564 (7736): 439-443) se usó como compuesto de referencia positivo. Los resultados de prueba se muestran en la tabla 5 a continuación. El valor de Kd de cada compuesto se clasifica según las siguientes instrucciones:
[0837] “+” significa que el valor de Kd es mayor de 10 |iM;
[0838] “++” significa que el valor de Kd es menor de 10 |iM y mayor de 1 |iM;
[0839] “+++” significa que el valor de Kd es menor de 1 |iM .
[0840] Cuanto menor es Kd, más fuerte es la afinidad de unión del compuesto con respecto a la proteína STING.
[0841] (2) Resultados experimentales
[0842] Tabla 6: afinidad de unión del compuesto con respecto a la proteína STING
[0845]
[0847] Los resultados experimentales anteriores muestran que el compuesto de la presente invención tiene una buena<capacidad para unirse a la proteína STING, y tiene una afinidad>in vitro<similar al compuesto de referencia, de modo>que el compuesto de la presente invención puede usarse como regulador eficaz de la proteína STING.
[0848] Ejemplo experimental 2. La prueba de función agonista del compuesto de la presente invención sobre proteína STING
[0849] (1) Método experimental
[0850] En este experimento, se evaluó la función de agonista de STING detectando los cambios de citocinas IFN-p y CXCL10 (IP10) producidas por células de la línea de células mononucleares de sangre periférica humana THP1 (banco de células de Shanghái) estimuladas por los compuestos. En el primer día del experimento, se recubrió la placa de ELISA según las instrucciones del kit de prueba ELISA de IFN-p (R&D, n.° DY814-05) y de IP10 (BD, n.° 550926). Se disolvió el compuesto en disolución madre de DMSO y se diluyó con medio de cultivo hasta una concentración de trabajo de 2X, se añadió a una placa de 96 pocillos, a 100 |il por pocillo. Se extrajeron las células THP1 en la fase de crecimiento logarítmi
[0852] El compuesto 3 notificado en el artículo (Nature, diciembre de 2018; 564 (7736): 439-443) se usó como compuesto de referencia positivo.
[0853] (2) Resultados experimentales
[0854] Los resultados experimentales se muestran en la tabla 6 a continuación, y los valores de CE50 de cada compuesto se clasifican según las siguientes instrucciones.
[0855] “+” significa que el valor de CE50 es mayor de 1 |iM ;
[0856] “++” significa que el valor de CE50 es menor de 1 |iM y mayor de 100 nM;
[0857] “+++” significa que el valor de CE50 es menor de 100 nM y mayor de 10 nM;
[0858] “++++” significa que el valor de CE50 es menor de 10 nM.
[0859] Tabla 7: efectos de los compuestos sobre las citocinas IFN-p y CXCL10 (IP10)
[0862]
[0863]
[0866] En la tabla 7, “ND” significa que aún no se ha realizado la prueba.
[0868] Los datos experimentales anteriores muestran que los compuestos de la presente invención tienen una buena actividad estimulante de citocinas IFN-p y CXCL10 (IP10) producidas por células THP1 y tienen una buena función agonista de proteína STING. Especialmente para los compuestos 2, 4, 5, 15, 19, 23, 35, 40, 49, 50, 51, 52, 53, etc., en comparación con el compuesto de referencia, los compuestos de la presente invención tienen una actividad comparable o incluso superior de estimulación de células inmunitarias para producir citocinas.
[0870] Ejemplo experimental 3: experimento de inducción de IFN-P en ratonesin vivo
[0872] (1) Método experimental
[0874] Se inocularon ratones Balb/C con 5 x 105 células CT26 por vía subcutánea en el lomo. Tras la inoculación, se seleccionaron para el experimento ratones portadores de tumor con un volumen tumoral en el intervalo de 200­ 300 mm3 Según el método aleatorio de tamaño de tumor y segmento, se dividieron en 21 grupos con 3 ratones en cada grupo. Se administraron diferentes doses de fármacos (compuestos de la presente invención) mediante inyección en la vena de la cola, y al grupo de control se le administró un vehículo de control (DMSO al 5 %, PEG400 al 40 % formulado en solución salina fisiológica). Tres horas tras la administración, se extrajo sangre de la vena orbital de ratón, y se usó EDTA<2K como anticoagulante. Se centrifugó la sangre completa de ratón extraída a 8000g durante 5 minutos y después se tomó el plasma superior para las pruebas. Tres horas tras la administración, se extrajeron tejidos tumorales de ratón, se pesaron y se homogeneizaron añadiendo un volumen de 9 veces de PBS. Tras centrifugar el homogeneizado a 10.000 rpm durante 15 minutos, se recogió el sobrenadante para las pruebas. Se realizó la detección según el kit de detección de IFN-P (R&D, n.° DY814-05), se leyó el valor de DO450, que se convirtió en la concentración de IFN-P según la curva patrón.
[0876] (2) Resultados experimentales
[0878] Los resultados experimentales muestran que la administración en la vena de la cola de ratones puede inducir la liberación de IFN-P aguas abajo de la ruta de STING en la sangre y los tumores. Tras la administración del compuesto de la presente invención, el nivel de IFN-P intratumoral era más de 3 veces el nivel de IFN-P en plasma, indicando que las citocinas estaban relativamente enriquecidas en tejidos tumorales, y las citocinas en sangre eran bajas, sugiriendo un intervalo de tratamiento superior.
[0880] Ejemplo 4. Efecto de inhibición tumoral del compuesto de la presente invención (modelo de tumor CT26)
[0881] (1) Método experimental
[0883] Tras dejar reposar a los ratones Balb/c durante una semana, se inocularon células CT26 por vía subcutánea en el lomo, y a cada ratón se le inocularon 100 |il de suspensión celular que contenía 5x105 células. Cuando el volumen tumoral promedio aumentó hasta aproximadamente 120 mm3, se dividieron aleatoriamente en grupos según el tamaño del tumor, con 5 en cada grupo. Se realizaron administraciones en los ratones en cada grupo por vía intravenosa en la vena de la cola en el día 1, 4 y 8 tras la agrupación, y al grupo de control se le administró un vehículo de control (DMSO al 5 %, PEG400 al 40 % formulado en solución salina fisiológica). En el día de la agrupación, 3 veces por semana después de la primera administración, y antes del sacrificio, se midieron la longitud y el diámetro corto del tumor y se registraron con un calibre, se calculó el volumen tumoral y se trazó la curva de crecimiento tumoral según el volumen tumoral. Se calculó el volumen tumoral según la siguiente fórmula: V = 1/2 x diámetro largo x diámetro corto x diámetro corto.
[0885] (2) Resultados experimentales
[0887] Los resultados experimentales se muestran en la figura 1. Después de 20 días de administración, todos los compuestos preparados en los ejemplos de la presente invención inhibieron eficazmente el crecimiento tumoral y mostraron un efecto inhibidor del crecimiento tumoral dependiente de la dosis.
[0889] Ejemplo 5. Efecto de inhibición tumoral de los compuestos de la presente invención (modelo de tumor H22)
[0890] (1) Método experimental
[0892] Se inocularon ratas Kunming con células H22 por vía subcutánea en sus lomos después de una semana de reposo. A cada ratón se le inocularon 100 |il de suspensión celular que contenía 5x106 células. Cuando el volumen tumoral promedio aumentó hasta aproximadamente 200 mm3, se agruparon aleatoriamente según el tamaño tumoral, con 7 en cada grupo. En el día 1, 4 y 8 tras la agrupación, se realizaron administraciones en los ratones en los grupos de dosis alta, media y baja por vía intravenosa en la vena de la cola (los compuestos de la presente invención), o en el día 1, 8 y 15 se realizaron administraciones en los ratones en el grupo de dosis alta por vía intravenosa en la vena de la cola. Al grupo de control se le administró un vehículo de control (DMSO al 5 %, PEG400 al 40 % formulado en solución salina fisiológica). En el día de la agrupación, 3 veces por semana después de la primera administración, y antes del sacrificio, se midieron la longitud y el diámetro corto del tumor y se registraron con un calibre, se calculó el volumen tumoral y se trazó la curva de crecimiento tumoral según el volumen tumoral. Se calculó el volumen tumoral según la siguiente fórmula: V = 1/2 x diámetro largo x diámetro corto x diámetro corto.
[0894] (2) Resultados experimentales
[0896] Después de 30 días de administración, todos los compuestos de la presente invención inhibieron eficazmente el crecimiento tumoral, y mostraron un efecto inhibidor del crecimiento tumoral dependiente de la dosis.
[0898] Ejemplo 6. Efecto de inhibición tumoral de los compuestos de la presente invención (modelo de re-excitación tumoral)
[0900] (1) Método experimental
[0902] Se observó adicionalmente la remisión tumoral de cada grupo de ratones en el modelo de eficacia anti-tumoral CT26 del ejemplo experimental 4 anterior. Después de 30 días desde la última administración, se inocularon células CT26 por vía subcutánea en el lomo. A cada ratón se le inocularon 100 |il de suspensión celular que contenía 5x105 células; ratones que no se habían tratado con fármacos se usaron como grupo de control para inocular células CT26 de la misma manera. Se observó el tumor y se registró el crecimiento del tumor.
[0904] (2) Resultados experimentales
[0906] Los resultados experimentales se muestran en la figura 2. Los tumores CT26 en el grupo de control pueden crecer después de la inoculación, pero los tumores en los ratones cuyos tumores desaparecieron completamente tras el tratamiento con los compuestos de la presente invención no pueden crecer de nuevo tras la inoculación, lo que indica que estos compuestos activaron el mecanismo de memoria inmunitaria de los ratones, y hacen que los ratones tengan inmunidad frente a células tumorales que volvieron a inocularse.
[0908] En resumen, la presente invención da a conocer un compuesto que puede unirse eficazmente a STING, tiene una buena función agonista de proteína STING, tiene un buen efecto inhibidor sobre una variedad de tumores, y también puede activar el mecanismo de memoria inmunitaria en ratones, para inhibir la nueva estimulación tumoral. Por tanto, los compuestos de la presente invención pueden usarse como agonistas de STING y usarse para tratar diversas enfermedades relacionadas. Los compuestos de la presente invención tienen perspectivas de aplicación muy buenas en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades relacionadas con actividad de STING (especialmente un medicamento para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer o síndromes precancerosos) y en la fabricación de adyuvantes inmunitarios, por tanto proporciona una nueva elección para selección clínica y/o fabricación de un medicamento para enfermedades relacionadas con actividad de STING.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES
Un compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto está representado por la fórmula Il,
Fórmula II
en la que X se selecciona de -O- y -S-, y X' es -O-;
<N>-N
<el anillo A y el anillo A’ se seleccionan, cada uno independientemente, de>¡<1—>L<-X>>* ' o
opcionalmente sustituidos con 0-2 Rc; y cuando X y X’ son ambos -O-, al menos uno del anillo A y el anillo A’
se selecciona de opcionalmente sustituido con 0-2 Rc
R5 se selecciona de alquilo C1-C3;
R5’ se selecciona
Re' se selecciona de alquilo C1-C3, cicloalquilo de 3-6 miembros, -C(O)Rf;
Rf se selecciona de -ORa', alquilo C1-C3, cicloalquilo de 3 a 4 miembros, y Ra' se selecciona de alquilo C1-C3; y
en la que
el opcionalmente sustituido con
Un compuesto, o el estereoisómero, o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto es:
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