ES2995086T3 - Gastrointestinal health composition - Google Patents

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Abstract

La presente invención se refiere a una composición para mejorar la salud gastrointestinal que comprende enzima bromelina, ácidos grasos de cadena corta, aminoácidos específicos y vitamina D. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Composición para la salud gastrointestinal
Campo de la invención
Esta invención se refiere en general a una composición para mejorar la salud gastrointestinal, a suplementos nutricionales y/o dietéticos formulados para tal uso y al uso de tales composiciones y/o suplementos para la reprogramación gastrointestinal. Esta invención proporciona una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o más ácidos grasos de cadena corta (AGCC) o ésteres de los mismos,
(c) uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en L-treonina, L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos, y
(d) Vitamina D o alfacalcidiol.
Antecedentes de la invención
Enfermedades gastrointestinales
Las enfermedades y trastornos gastrointestinales tales como el síndrome del intestino irritable (SII) y la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) están causados por la interacción de varios conductores diferentes, incluidos factores microbianos, inmunológicos, genéticos y ambientales (Bernstein CN, 2010). La disbiosis de las bacterias gastrointestinales ejerce los efectos posteriores de la inflamación de la mucosa, alteración inmunitaria y daño en la mucosa (Bernstein CN, 2010). Los trastornos gastrointestinales de EII e SII comparten características comunes de enfermedad tales como microbioma alterado, función intestinal alterada y daño en la mucosa. El factor diferenciador entre estas dos enfermedades es el nivel de inflamación observado; el SII tiene inflamación de bajo grado en contraste con la EII que se caracteriza por inflamación crónica. El enfoque de tratamiento actual para la EII es suprimir la inflamación con el objetivo de inducir y mantener la remisión. Por el contrario, los gastroenterólogos que tratan el SII tratan principalmente los síntomas de dolor abdominal, hinchazón y estreñimiento y diarrea alternos. Los enfoques terapéuticos empleados actualmente para tratar tanto la EII como el SII tienen altas tasas de fracaso del tratamiento.
En consecuencia, existe una necesidad médica no satisfecha en la técnica de productos que puedan tratar y/o aliviar o eliminar con éxito estas afecciones y sus síntomas de pacientes con EII e SII sin sufrir de las altas tasas de fracaso del tratamiento observadas actualmente.
Por consiguiente, es un objeto de la invención proporcionar un suplemento dietético gastrointestinal que pueda dirigirse al menos de alguna manera a abordar esta necesidad no satisfecha y/o que al menos proporcione al público una elección útil.
En esta memoria descriptiva, cuando se ha hecho referencia a memorias descriptivas de patentes, otros documentos externos u otras fuentes de información, esto tiene generalmente el propósito de proporcionar un contexto para discutir las características de la invención. A menos que se indique específicamente lo contrario, la referencia a tales documentos externos no debe interpretarse como una admisión de que tales documentos, o tales fuentes de información, en cualquier jurisdicción, sean técnica anterior, o forman parte del conocimiento general común en la técnica.
Head, K. A. et al, 1 de agosto de 2003, Altern Med Rev vol 8. Núm. 3, pág. 247-283 describen la patofisiología de la colitis ulcerosa y opciones de tratamiento convencionales y alternativos.
Zaleski A. et al, 1 de enero de 2013, Prz Gastroenterol: vol 8 (6), pág. 350-353 describe el ácido butírico en el síndrome del intestino irritable.
Bertrand, J. et al, 13 de mayo de 2015, J. Parenteral and Enteral Nutrition, vol. 40, núm. 8, pág. 1170-1176 describen que la glutamina restaura la expresión de la proteína de unión estrecha Claudina-1 en la mucosa colónica de pacientes con síndrome de intestino irritable con diarrea predominante.
Hale, L. P. et al, 1 de diciembre de 2010, Inflamm. Bowel, Dis, vol 16, núm. 12, pág. 212-2021 describen la complementación dietética con zumo de piña fresco que disminuye la inflamación y la neoplasia colónica en ratones deficientes en IL-10 con colitis.
Williams, C. E., 25 de enero de 2018, European Journal of Clinical Nutrition, vol 72, núm. 10, pág. 1358-1363 describe el estado de vitamina D en el síndrome del intestino irritable y el impacto de la complementación en síntomas.
Compendio de la invención
La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención proporciona una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o más ácidos grasos de cadena corta (AGCC) o ésteres de los mismos,
(c) uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en L-treonina, L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos, y
(d) Vitamina D o alfacalcidiol.
En un aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o varios AGCC o ésteres de los mismos,
(c) L-treonina, y
(d) Vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación oral que comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 g de una composición de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación oral que consiste esencialmente en una composición de la invención en donde al menos dos componentes de la composición están comprendidos en una formulación de liberación retardada.
La referencia al método de tratamiento en el compendio y la descripción detallada de la invención en esta descripción debe interpretarse como referencia a las composiciones de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del organismo humano (o animal) mediante terapia.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para prevenir, tratar o gestionar la EII o el SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para aliviar al menos parcialmente al menos un síntoma de EII o SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para mejorar al menos un parámetro asociado con EII o SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para reducir la unión bacteriana a las células del tracto gastrointestinal de un sujeto que lo necesite, que comprende poner en contacto las bacterias con una cantidad eficaz de la composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para reducir la invasión bacteriana en las células del tracto gastrointestinal de un sujeto que lo necesite, que comprende poner en contacto las bacterias con una cantidad eficaz de la composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para aumentar la capa mucosa gastrointestinal en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para mejorar la integridad de la barrera gastrointestinal en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para restaurar la homeostasis del microbioma de un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención. En otro aspecto, la invención se refiere a un método para tratar la inflamación gastrointestinal en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención.
Otros aspectos de la invención pueden resultar evidentes a partir de la siguiente descripción que se proporciona a modo de ejemplo solamente y con referencia a los dibujos adjuntos.
Breve descripción de las figuras
La invención se describirá ahora a modo de ejemplo solamente y con referencia a los dibujos en donde:
Figura 1- Representación del ensayo de placa transwell.El ensayo de placa transwell se estableció sembrando células Caco-2-BBe1 a 5x105 células/pocillo en placas para insertos transwell de 24 pocillos (4,67 cm2, tamaño de poro de 0,4 gm). El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células estaban completamente diferenciadas [Valor de Resistencia Transepitelial (RET) >1100/cm2]. Para probar la translocación de bacterias o el efecto de un tratamiento sobre la liberación de citocinas, se colocaron bacterias o tratamientos en el compartimento apical.
Figura 2-Efecto de GaRP y bromelaína sobre la liberación de TNFa de macrófagos THP-1.Las células THP-1 se sembraron a 1x106 células/cm2 en placas de 24 pocillos. Los macrófagos se diferenciaron mediante tratamiento con 200 nm de PMA durante 48 horas. Después de 48 h, los macrófagos se lavaron y se cultivaron en PMA y medio sin antibióticos durante 24 h antes de comenzar el experimento. Los macrófagos se estimularon con 50 ng/ml de LPS inmediatamente antes de la adición de GaRP ± 0-80 pg/ml de bromelaína (0-107 pg/macrófago). Los pocillos no estimulados se utilizaron como controles comparativos para confirmar la eficacia de la estimulación con LPS. Después de 8 h, se retiró el medio y se cuantificó el TNFa utilizando un ELISA. Cada punto de datos es la media ± DT de 5-10 experimentos independientes.
Figura 3 - Efecto de GaRP y bromelaína sobre la liberación de IL-8 de monocapas de Caco-2 polarizadas co incubadas con macrófagos THP-1 estimulados con LPS.El ensayo de placa transwell se estableció sembrando células Caco-2-BBe1 a 5x105 células/pocillo en placas para insertos transwell de 24 pocillos (4,67 cm2, tamaño de poro de 0,4 gm). El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células se diferenciaron completamente (valor RET >1100/cm2). En una placa de 24 pocillos separada, se sembraron células de monocitos THP-1 a 1x106 células/pocillo y se diferenciaron con PMA 200 nM durante 48 h seguido de cultivo en medio normal durante 24 h antes del experimento. Después de reemplazar todos los medios por RPMI1640, todos los insertos transwell que contenían las monocapas diferenciadas de Caco-2 se cargaron en los pocillos que contenían células THP-1 diferenciadas. En experimentos para evaluar el efecto antiinflamatorio de diferentes formulaciones de bromelaína, se aplicaron 0,25 ml de muestras de ensayo al lado apical durante 24 h, al mismo tiempo se añadieron 50 ng/ml de LPS al lado basolateral en este modelo. Después de 24 h de incubación, se recogieron los sobrenadantes del cultivo del lado apical para la medición de IL-8 utilizando un ELISA para IL-8. Cada punto de datos es la media ± DT de 5 experimentos independientes.
Figura 4-GaRP (menos bromelaína) previene la pérdida de RET inducida bacterianamente.Se estableció un modelo de celda M cultivando en placas 5x105 células Caco-2 sobre la cara apical de insertos de cultivo celular transwell de 12 mm que se habían precubierto con matriz de membrana basal de Matrigel. Las células se mantuvieron durante 14-18 días, hasta que la RET fue > 600 Q por transwell (equivalente a 300 Q cm2 por monocapa de tejido). El día del cocultivo, se recogieron células B Raji, se resuspendieron en DMEM completo y se añadieron 5x105 células al compartimento transwell basal. Los cocultivos se mantuvieron durante 4-6 días, hasta que se generaron células M. El modelo de células M se infectó con ECAI HM605 añadiendo las bacterias al pocillo apical del inserto del transwell a una MOI de 30 durante un período de 4 h. Después de 4 h, las células se lavaron y se incubaron con 100 gg/ml de gentamicina para destruir cualquier bacteria residual. En ese punto, se colocó GaRP menos bromelaína sobre las células y se midió la RET de todas las monocapas a intervalos de 2 horas hasta 12 horas y se enumeraron las bacterias en el pocillo basal cada hora hasta 4 horas.
Cuando ECAI HM605 que se suspendió en medio normal (o-o) o en GaRP (menos bromelaína, ▼ -▼) y se aplicó al modelo de células M, la formulación de GaRP proporcionó un efecto protector sobre la integridad de la capa celular. Las bacterias aplicadas a las monocapas celulares en GaRP produjeron un efecto similar sobre la integridad de la capa celular que el control de DMEM/sin bacterias (•-•). Cada punto de datos es la media ± DT de 4 determinaciones independientes.
Figura 5-Titulación del efecto de la bromelaína en GaRP sobre la expresión de genes de mucina formadores de gel.
Se estableció un cocultivo 75:25 de Caco-2/HT-29 sembrando las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se trató con 5 ml de soluciones de prueba durante 24 h. Después de 24 h de exposición a bromelaína, treonina, butirato de sodio, vitamina D3 y las dos formulaciones de GaRP diferentes, se investigó la expresión de los genes de MUC utilizando qPCR. Los puntos de datos son la media ± ETM de 12 (DMEM) o 6 determinaciones independientes.
Figura 6-Titulación del efecto de la bromelaína en GaRP sobre la expresión de mucinas asociadas a la membrana.
Se estableció un cocultivo 75:25 de Caco-2/HT-29 sembrando las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se trató con 5 ml de soluciones de prueba durante 24 h. Después de 24 h de exposición a bromelaína, treonina, butirato de sodio, vitamina D3 y las dos formulaciones de GaRP diferentes, se investigó la expresión de los genes de MUC utilizando qPCR. Los puntos de datos son la media ± ETM de 12 (DMEM) o 6 determinaciones independientes.
Figura 7-Titulación del efecto de la bromelaína en GaRP sobre la expresión de mucinas secretadas.
Se estableció un cocultivo 75:25 de Caco-2/HT-29 sembrando las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se trató con 5 ml de soluciones de prueba durante 24 h. Después de 24 h de exposición a bromelaína, treonina, butirato de sodio, vitamina D3 y las dos formulaciones de GaRP diferentes, se investigó la expresión de los genes de MUC utilizando qPCR. Los puntos de datos son la media ± ETM de 12 (DMEM) o 6 determinaciones independientes.
Figura 8-Efecto de la vitamina D3 y la L-treonina sobre la expresión de genes de mucina
Se estableció un cocultivo 75:25 de Caco-2/HT-29 sembrando las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se trató con 5 ml de soluciones de prueba durante 24 h. Después de las 24 h de exposición a treonina vitamina D3, se investigó la expresión de los genes de MUC utilizando qPCR. Los puntos de datos representan la media ± ETM (donde n=6)
Figura 9-9A: Efecto de la L-treonina sobre la expresión de MUC2 y MUC7
Se estableció un cocultivo 75:25 de Caco-2/HT-29 sembrando las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. A los 15 días después de la siembra, la monocapa de cocultivo se trató con 5 ml de soluciones de prueba durante 24 h. Después de las 24 h de exposición a L-treonina, se investigó la expresión de los genes de MUC utilizando qPCR. Los puntos de datos son la media ± ETM de 12 (DMEM) o 6 determinaciones independientes.
9B:Efecto de la vitamina D3 sobre la expresión de MUC2 y MUC7. Los puntos de datos representan la media ± ETM (donde n=6).
Figura 10-10A: Efecto de diferentes concentraciones de vitamina D3 y treonina sobre la expresión de MUC2; 10B:Efecto de diferentes concentraciones de vitamina D3 y treonina sobre la expresión de MUC 7.
Los puntos de datos representan la media ± ETM (n=6), donde todos los puntos de datos eran significativamente diferentes del control sin tratamiento (p<0,05, prueba t de Student).
Figura 11- Evaluación de GaRP en un modelo de ratón de ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico (TNBS).Se indujo colitis por solución de ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico (TNBS) en ratones C56/BL/6 de 5 semanas de edad mediante instilación rectal de TNBS (5% p/v) en etanol al 50%. El programa de tratamiento y el procedimiento experimental se resumen en la Figura 11.
Figura 12-Comparación del cambio en el peso corporal en el punto final experimental.
Se indujo colitis en ratones C56/BL/6, 4 días después de que comenzaran los tratamientos diarios de inducción de la enfermedad. A los ratones se les administró bromelaína por vía oral (75 mg/kg) ± 15 mg/kg de mentol y/o GaRP administrado por vía rectal. Los pesos corporales se tomaron diariamente donde se determinaron los cambios en el punto final experimental en la masa corporal comparando el peso del punto final con el peso del día 4 inicial (justo antes del comienzo del tratamiento). Cada punto representa la media ± DT de 5-9 animales.
Figura 13-Comparación del efecto de las formulaciones que contienen 75 mg/kg de bromelaína y 15 mg/kg de mentol con controles con vehículo.Se indujo colitis en ratones C56/BL/6 y 4 días después de que comenzaran los tratamientos diarios de inducción de la enfermedad. Los tratamientos fueron vehículo oral (•-•), 75 mg/kg de bromelaína en agua (o--o), 75 mg/kg de bromelaína 15 mg/kg de mentol en vehículo oral (▼--▼) o 75 mg/kg de bromelaína 15 mg/kg de mentol en vehículo oral y GaRP administrado por vía rectal (△ ---△ ). Cada punto representa la media ± DT de 8-9 animales.
Figura 14-Comparación del efecto de la formulación de GaRP y los controles de vehículo sobre la reducción en la puntuación endoscópica.Se indujo colitis en ratones C56/BL/6 y 4 días después de que comenzaran los tratamientos diarios de inducción de la enfermedad. Cada punto representa la media ± DT de 5-9 animales. *Indica significación estadística en comparación con el control de vehículo oral o rectal.
Figura 15-Actividad de la enfermedad en colitis experimental. (A) Longitud del colon, (B) peso del colon, (C) razón peso/longitud del colon.Se indujo colitis en ratones C56/BL/6 y 4 días después de que comenzaran los tratamientos diarios de inducción de la enfermedad. En el punto final experimental, los animales se sacrificaron y se retiró el colon, se pesó y se midió. Los datos se presentaron como medias ± ETM (n = 5-9 animales).
Figura 16-Puntuaciones endoscópicas.Se indujo colitis en ratones C56/BL/6 y 3 días después de que comenzaran los tratamientos diarios de inducción de la enfermedad. Cada barra representa la mejora media en la puntuación endoscópica el día 11 para los grupos de tratamiento. Los valores del número de animales, las medias, las desviaciones estándar y la significación estadística con relación al placebo se muestran entre paréntesis y las medias se muestran en la parte superior de cada barra. Los tratamientos mostrados son vehículo oral y rectal combinado (n=34, x 3,00, o 2,00), 150 mg/kg de bromelaína en agua (n=8, x=5,00, o =1,41, p=0,0036), 150 mg/kg de bromelaína 15 mg/kg de mentol en vehículo oral y GaRP administrado por vía rectal (n=11, x=4,73, o =2,42, p=0,0294), 150 mg/kg de bromelaína 15 mg/kg de mentol en vehículo oral y 2 mg/kg de prednisolona y GaRP administrado por vía rectal (n=7, x=4,86, o =1,36, p=0,0080), 2 mg/kg de prednisolona administrada por vía rectal (n=12, x=4,25, o=2,38, p=0.0445), y GaRP administrado por vía rectal (n=19, x=4,42, o =2,32, p=0,0167).
Figura 17-Perfil de disolución de un comprimido de tipo A recubierto entéricamente que contiene bromelaína y mentol.Se sometieron a condiciones de ensayo de disolución de USP minicomprimidos de bromelaína/mentol preparadas según los métodos del ejemplo 13 y demostraron una estabilidad aceptable en la fase ácida seguido de liberación sostenida comenzando a un pH equivalente a aclaramiento posgástrico y continuando durante 3 horas.
Figura 18-Perfil de disolución de un comprimido de tipo B recubierto entéricamente que contiene butirato de sodio, treonina y vitamina D3.Se sometieron a condiciones de ensayo de disolución de USP modificadas minicomprimidos preparados según los métodos del ejemplo 13 en donde la composición se expuso a ácido (HCl 1 N) durante 1 hora, tampón a pH 6,2 (1 hora) y tampón a pH 7,4 (5 horas). La figura muestra una estabilidad aceptable en las etapas ácida y de pH 6,2 seguido de una liberación sostenida comenzando a pH 7,4 equivalente al pH observado en los intestinos delgado inferior y grueso.
Figura 19-Puntuaciones histológicas.Se indujo colitis y se sacrificaron ratones C56/BL/6 tratados de los ejemplos 11 y 12 tras el tratamiento y se seccionaron los colones para análisis histopatológico. Cada barra representa la puntuación histopatología media para los grupos de tratamiento. Los valores del número de animales, las medias, las desviaciones estándar y la significación estadística con relación al placebo se muestran entre paréntesis. Los tratamientos mostrados son placebo (n=16, x 4,4, o 2,2), GaRP (n=10, x 2,5, o 2,4, p=0,034), prednisolona (n=10, x 3,5, o 2,5, p=0,196), 150 mg/kg de bromelaína GaRP (n=10 x 10,8, o=2,6, p=0,012), 150 mg/kg de bromelaína GaRP prednisolona (n=7, x=2,0, o=1,5, p=0,005), 75 mg/kg de bromelaína GaRP (n=8, x=2,1, o=2,8, p=0,045).
Descripción detallada de la invención
Definiciones
Las siguientes definiciones se presentan para definir mejor la presente invención y como una guía para los expertos en la técnica en la práctica de la presente invención.
A menos que se especifique lo contrario, se debe entender que todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen los mismos significados que entiende un experto en la técnica relevante a la que pertenece esta divulgación.
También se cree que la práctica de la presente invención puede realizarse utilizando protocolos y procedimientos de biología celular, microbiológicos, de biología molecular, farmacología y bioquímica convencionales, como se conoce en la técnica, y como se describe, por ejemplo, en numerosos materiales de referencia disponibles comúnmente relevantes en la técnica a la que pertenece esta divulgación.
El término "alimento" significa cualquier sustancia, ya sea procesada, semiprocesada o cruda, que está destinada al consumo por animales, incluyendo seres humanos e incluye, pero no se limita a, alimentos sólidos y semisólidos, bebidas alcohólicas, bebidas y goma de mascar. Una composición alimenticia de la invención comprende una composición como se describe en el presente documento combinada con alimentos.
El término "suplemento dietético" se refiere a un producto destinado a complementar la dieta que incluye uno o más de los siguientes ingredientes: enzimas, vitaminas, minerales, hierbas, metabolitos, extractos y similares. Un suplemento dietético no está típicamente destinado a ser utilizado como el único artículo de una comida, sino que puede ser consumido independientemente de cualquier alimento. Un suplemento dietético de la invención comprende una composición como se describe en el presente documento combinada con uno o más suplementos dietéticos.
El término "alimento médico" se refiere a un alimento que se formula para ser consumido o administrado enteralmente (p. ej., a través de una sonda de alimentación o nasogástrica) bajo la supervisión de un médico facultativo. Los alimentos médicos están destinados al tratamiento dietético de afecciones que tienen requisitos nutricionales distintivos. Los ejemplos de alimentos médicos incluyen, pero no se limitan a, productos de nutrición de fuente única, soluciones de rehidratación oral y productos destinados a su uso en el tratamiento dietético de trastornos metabólicos. Un alimento médico como se contempla en el presente documento comprende una composición como se describe en el presente documento que se formula como un alimento médico.
En una formulación nutracéutica, composición alimenticia, suplemento dietético o alimento médico como se describe en el presente documento pueden estar presentes uno o más excipientes consumibles. Tales excipientes consumibles pueden incluir portadores, diluyentes, aglutinantes, adhesivos, lubricantes, plastificantes, disgregantes, colorantes, agentes espesantes, agentes aromatizantes, edulcorantes, agentes tamponadores, absorbentes y similares, como sería evidente para el experto en la técnica.
Los ejemplos de aglutinantes que se pueden utilizar en composiciones y dosificaciones orales como se describen en el presente documento incluyen derivados de celulosa tales como etilcelulosa, hidroxipropilcelulosa o hidroxipropilmetilcelulosa, povidona, crospovidona, barniz farmacéutico, gomas, derivados de leche tales como suero y caseína, almidones y derivados de almidón. Los agentes edulcorantes pueden incluir edulcorantes con base de dipéptidos, edulcorantes naturales solubles en agua y edulcorantes artificiales. Los agentes aromatizantes pueden incluir aceites aromatizantes, tanto sintéticos como naturales, incluyendo aceite de menta, aceite de menta verde, aceite de canela, aceite de gaulteria; aromas de frutas naturales y artificiales tales como aceites cítricos incluyendo limón, lima, pomelo y naranja, y esencias de frutas incluyendo cereza, piña, fresa, frambuesa, manzana y similares. Las sustancias espesantes pueden incluir glucosa, sacarosa, lactosa, almidón, gelatina y dióxido de silicio. Todos los aglutinantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes y sustancias espesantes anteriores son ejemplos, y no son limitantes.
La terminología "tipo diferente de píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula" y variaciones gramaticales de la misma como se emplea en el presente documento significa una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula dados como se describe en el presente documento como un "tipo" (incluyendo Tipo A, Tipo B y Tipo C como se describe en el presente documento) formulado para que comprenda o consista esencialmente en diferentes componentes, suministrándose a continuación los componentes incluidos en cada tipo, y siendo activos en diferentes partes del intestino. En una realización, las diferentes partes del intestino son el duodeno y el colon.
Como se emplea en el presente documento, los términos "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a medidas terapéuticas que reducen, alivian, mejoran, gestionan, previenen, restringen, detienen o revierten los síntomas causados por o asociados con la EII y/o el SII, incluyendo los síntomas asociados con o relacionados con la EII y/o el SII. El sujeto puede mostrar una disminución observable o medible (estadísticamente significativa) en uno o más de los síntomas asociados con o relacionados con la EII y/o el SII como es conocido por los expertos en la técnica, como indicativo de mejora.
El término "cantidad eficaz" como se emplea en el presente documento significa una cantidad eficaz para proteger contra, retrasar, reducir, estabilizar, mejorar o tratar al menos un síntoma de la EII y/o del SII como se conoce en la técnica, y/o como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para lograr un resultado estadísticamente diferente en comparación con un control no tratado o un control tratado con placebo.
Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de una composición como se describe en el presente documento es una cantidad que es suficiente para lograr al menos una disminución de al menos un síntoma asociado con la EII y/o el SII que está siendo o va a tratarse o que es suficiente para lograr un cambio en ese síntoma que tiene un efecto terapéuticamente beneficioso. Los ejemplos de cambios en los síntomas que se contemplan en el presente documento incluyen una reducción en la inflamación gastrointestinal, un aumento en el grosor de la capa mucosa gastrointestinal y/o una mejora en la integridad de la barrera gastrointestinal, pero no se limitan a los mismos.
Como se emplea en el presente documento, los términos "gestionar", "gestionando" y "gestión" en el contexto de la administración de terapia a un sujeto se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de la terapia, mientras que no da como resultado una curación de la afección. Por ejemplo, la gestión de la condición incluye la prevención de un empeoramiento de la afección.
Como se emplea en el presente documento, los términos "prevenir", "previniendo" y "prevención" en el contexto de la administración de terapia a un sujeto se refieren a la prevención o inhibición de la recurrencia, inicio o desarrollo de la afección resultante de la administración de la terapia.
El término "aproximadamente", cuando se emplea en conexión con una indicación numérica referenciada, significa la indicación numérica referenciada más o menos hasta 10% de esa indicación numérica referenciada. Por ejemplo, "aproximadamente 100" significa de 90 a 110 y "aproximadamente seis" significa de 5,4 a 6,6.
El término "que comprende", como se emplea en esta memoria descriptiva, significa "que consiste al menos en parte en". Cuando se interpretan las declaraciones en esta memoria descriptiva que incluyen ese término, las características, precedidas por ese término en cada declaración, necesitan estar presentes todas, pero también pueden estar presentes otras características. Términos relacionados tales como "comprenden" y "comprendido" deben interpretarse de la misma manera.
El término "que consiste esencialmente en" como se emplea en el presente documento significa los materiales o etapas especificados y aquellos que no afectan materialmente a la característica o características básicas y novedosas de la invención reivindicada.
El término "que consiste en", como se emplea en el presente documento, significa los materiales o etapas especificados de la invención reivindicada, excluyendo cualquier elemento, etapa o ingrediente no especificado en la reivindicación.
Se pretende que la referencia a un intervalo de números divulgado en el presente documento (por ejemplo, de 1 a 10) también incorpore referencia a todos los números racionales dentro de ese intervalo (por ejemplo, 1, 1,1, 2, 3, 3,9, 4, 5, 6, 6,5, 7, 8, 9 y 10) y también cualquier intervalo de números racionales dentro de ese intervalo (por ejemplo, de 2 a 8, de 1,5 a 5,5 y de 3,1 a 4,7) y, por lo tanto, en el presente documento se divulgan expresamente todos los subintervalos de todos los intervalos divulgados expresamente en el presente documento. Estos son solo ejemplos de lo que se pretende específicamente y se debe considerar que todas las combinaciones posibles de valores numéricos entre el valor más bajo y el valor más alto enumerados se indican expresamente en esta solicitud de manera similar.
Descripción
La enfermedad gastrointestinal y trastornos tales como el síndrome del intestino irritable (SII) y la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) están causados por varios factores diferentes en un individuo, incluyendo factores microbianos, inmunológicos, genéticos y ambientales.
Estos tres factores contribuyen al inicio y persistencia crónica de EII, SII y síntomas asociados tales como hábitos intestinales alterados (es decir, diarrea, estreñimiento o una mezcla de los mismos), dolor abdominal e hinchazón: • pérdida de homeostasis microbiana gastrointestinal
• daño en la mucosa
• inflamación.
Actualmente hay muy pocos productos, incluyendo suplementos dietéticos, disponibles en el mercado que puedan restablecer con éxito la homeostasis del microbioma gastrointestinal, reducir la inflamación y promover la cicatrización de la mucosa. El restablecimiento de la homeostasis del microbioma se considera beneficioso para reducir los efectos de la enfermedad asociados con diarrea, inflamación, obesidad, diabetes, enfermedad cardiovascular (Vamanu, 2018). Sin embargo, el autor de la presente invención ha descubierto ahora una composición de agentes que trabajan juntos para actuar sobre los tres factores causantes, proporcionando un manejo eficaz de las afecciones intestinales crónicas tales como EII e SII.
En el presente documento se describe un Producto de Reprogramación Gastrointestinal (GaRP). El GaRP es un producto dietético totalmente natural específicamente desarrollado por el autor de la presente invención para apoyar y mantener la salud gastrointestinal. El GaRP como se describe en el presente documento se puede formular como, o incluir en, un suplemento dietético, alimento médico o producto medicinal para abordar los principales factores subyacentes asociados con trastornos gastrointestinales. Sin desear estar limitado por la teoría, el autor de la presente invención cree que el GaRP actúa apoyando la microbiota gastrointestinal de un individuo y restaurando la función intestinal microbiana normal. Además, los componentes de la formulación reducen la inflamación que es crítica para restaurar el funcionamiento normal del tracto gastrointestinal.
Por consiguiente, en un aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o varios AGCC o ésteres de los mismos,
(c) uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en L-treonina, L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos, y
(d) Vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En una realización, la composición consiste esencialmente en los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o varios AGCC o ésteres de los mismos,
(c) uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en L-treonina, L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos, y
(d) Vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en uno o más aminoácidos seleccionados entre L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos.
En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-arginina, L-glutamina y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano, L-glutamina y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano, L-arginina y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano, L-arginina y L-glutamina.
En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano y L-arginina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano y L-glutamina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-arginina y L-glutamina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-arginina y L-metionina. En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-glutamina y L-metionina.
En una realización (c) comprende o consiste esencialmente en L-triptófano, L-arginina, L-glutamina o L-metionina. En otro aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o varios AGCC o ésteres de los mismos,
(c) L-treonina, y
(d) Vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En una realización, la composición consiste esencialmente en los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o varios AGCC o ésteres de los mismos,
(c) L-treonina, y
(d) Vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En una realización, la L-treonina en (c) se sustituye por uno o más aminoácidos diferentes seleccionados del grupo que consiste en L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina.
En una realización, la composición comprende al menos un componente aminoácido adicional: L-triptófano, L-arginina, L-glutamina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, la composición consiste esencialmente en los componentes: bromelaína, un AGCC, L-treonina y vitamina D o un metabolito de los mismos que es alfacalcidiol.
En una realización, los uno o más AGCC o ésteres del mismo son ácido butírico, ácido propiónico o ácido acético, o una de sus sales fisiológicamente aceptables. Preferiblemente, el AGCC es butirato de sodio, butirato de calcio, propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente butirato de sodio.
En una realización, la composición consiste esencialmente en los componentes: bromelaína, butirato, preferiblemente butirato de sodio, L-treonina y vitamina D o un metabolito de la misma que es alfacalcidiol.
En una realización, la composición comprende como componente: mentol.
En una realización, la composición es un suplemento dietético, nutracéutico o alimento. En una realización, el alimento es un alimento médico.
En una realización, la composición comprende uno o más componentes adicionales que son un excipiente consumible.
Componentes
El autor de la presente invención ha determinado sorprendentemente que los diversos componentes de la composición de la invención actúan sinérgicamente para restaurar el funcionamiento gastrointestinal normal, reduciendo los síntomas de EII e SII, en particular diarrea.
La bromelaína es el nombre colectivo de un extracto proteolítico obtenido de los tallos de la piña(Ananus comosus).).El término "bromelaína" también se utiliza para referirse a las dos enzimas proteolíticas principales presentes en la piña - proteasa bromelaína de tallo (CAS 37189-34-7/EC 3.4.22.32), y proteasa bromelaína de fruto (EC 3.4.22.33). Aunque los nombres reflejan su ubicación primaria en la planta, ambas enzimas están presentes en extractos de bromelaína de tallo. Además de la proteasa bromelaína de tallo y la proteasa bromelaína de fruto, la bromelaína puede contener las proteasas ananaina, cosmosaina y canazaina, así como pequeñas cantidades de otros compuestos. El extracto de bromelaína se prepara mezclando la cáscara, tallo, hojas y otras partes no comestibles de la piña y filtrando la mezcla para obtener un líquido que contiene las enzimas de bromelaína solubles, que después se pueden purificar, fraccionar, concentrar y/o secar. La bromelaína se puede fraccionar utilizando cromatografía de intercambio iónico. Las fracciones asociadas con los picos de absorbancia principales se pueden someter a SDS-PAGE para aislar e identificar enzimas individuales.
Como se emplea en el presente documento, el término ''bromelaína'' se refiere a un extracto de enzimas proteolíticas obtenido de los tallos de piña, incluyendo el extracto bruto, extracto purificado o cualquier fracción o combinación de fracciones de los mismos.
Aunque la bromelaína no ha sido aprobada por la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos para el tratamiento de cualquier trastorno gastrointestinal, es un suplemento dietético bien conocido, que se sugiere que es útil como adyuvante digestivo y antiinflamatorio general. También se ha sugerido que es útil para apoyar la respuesta del organismo al estrés, ayudar a la digestión de proteínas, reducir la hinchazón de la nariz y los senos nasales, eliminar el tejido muerto y dañado después de quemaduras, relajar los músculos, prevenir el edema pulmonar, estimular las contracciones musculares y acortar el parto; así como tratar el dolor articular, infecciones de los senos nasales, alergias, asma, cáncer, venas varicosas, hemorroides, infecciones del tracto urinario, bronquitis, gota, fiebre y síndrome del túnel Carpiano.
La composición de la invención combina bromelaína con agentes específicos que combinados, reducen los tres factores causantes de las enfermedades inflamatorias gastrointestinales EII y SII.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 2500 mg, preferiblemente de aproximadamente 250 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1750 mg, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1600 mg, de aproximadamente 1300 a aproximadamente 1550 mg, de aproximadamente 1400 a aproximadamente 1500 mg, de aproximadamente 1420 a aproximadamente 1460 mg, preferiblemente de aproximadamente 1440 mg de bromelaína. En una realización, la composición comprende aproximadamente 1440 mg, preferiblemente aproximadamente 1030 mg, preferiblemente aproximadamente 720 mg de bromelaína.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 460 mg a aproximadamente 500 mg de bromelaína, preferiblemente aproximadamente 480 mg de bromelaína.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 460 mg a 500 mg de bromelaína, preferiblemente 480 mg de bromelaína.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 50 mg a 2500 mg, preferiblemente de 250 a 2250 mg, de 500 a 2000 mg, de 750 a 1750 mg, de 1000 a 1600 mg, de 1300 a 1550 mg, de 1400 a 1500 mg, de 1420 a 1460 mg, preferiblemente 1440 mg, 1030 mg, preferiblemente 720 mg de bromelaína. En una realización, la composición comprende 1440 mg, preferiblemente 1030 mg, preferiblemente 720 mg de bromelaína.
Los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) son los productos finales de la fermentación microbiana de macronutrientes tales como polisacáridos vegetales que no pueden ser digeridos por seres humanos que carecen de las glicósido hidrolasas y polisacárido liasas necesarias. El microbioma suministra las enzimas ausentes, produciendo AGCC que puede promover la integridad de la barrera epitelial intestinal. Los AGCC tales como butirato también pueden ayudar a restaurar la homeostasis microbiana intestinal.
Una mayor concentración de AGCC promueve el recrecimiento de bacterias beneficiosas que reducen la inflamación mediante la inhibición de NF-kB y la reducción de citocinas proinflamatorias.
Los términos "ácido graso de cadena corta" y "AGCC" se refieren a ácidos débiles que contienen de 2 a 7 átomos de carbono, pero también incluyen la forma aniónica y salina del ácido base particular. Con referencia al anión, los AGCC incluyen acetato, butirato, propionato, valerato, caproato, isobutirato, 2-metil-isobutilrato e isovalerato. Las sales de AGCC para su uso en la composición de la invención incluyen los metales alcalinos (por ejemplo, Na y K) y metales alcalinotérreos (p, ej., Mg y Ca).
El término "ésteres de AGCC de los mismos" se refiere a ésteres de AGCC. Los ésteres de AGCC para su uso en la composición de la invención incluyen metílico, etílico y similares.
Los AGCC y aminoácidos seleccionados presentes en la composición de la invención promueven la regeneración de la mucosa intestinal que renueva la integridad del tracto gastrointestinal y microbioma intestinal.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 45 a 1800 mg de AGCC, preferiblemente de aproximadamente 75 a aproximadamente 1650 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 1100 a aproximadamente 1300 mg, preferiblemente aproximadamente 1200 mg de AGCC. En una realización, la composición comprende aproximadamente 1200 mg, preferiblemente aproximadamente 600 mg, preferiblemente aproximadamente 300 mg de AGCC.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 45 a 1800 mg de AGCC, preferiblemente de 75 a 1650 mg, de 250 a 1500, de 500 a 1400, de 750 a 1500, de 1000 a 1400, de 1100 a 1300 mg, preferiblemente 1200 mg de AGCC. En una realización, la composición comprende 1200 mg, preferiblemente 600 mg, preferiblemente 300 mg de AGCC.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 45 a 1800 mg de butirato de sodio, propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente de aproximadamente 75 a aproximadamente 1650 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 1100 a aproximadamente 1300 mg, preferiblemente aproximadamente 1200 mg de butirato de sodio. En una realización, la composición comprende aproximadamente 1200 mg, preferiblemente aproximadamente 600 mg, preferiblemente aproximadamente 300 mg de butirato de sodio, propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente butirato de sodio.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 45 a 1800 mg de butirato de sodio, propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente de 75 a 1650 mg, de 250 a 1500, de 500 a 1400, de 750 a 1500, de 1000 a 1400, de 1100 a 1300 mg, preferiblemente 1200 mg de butirato de sodio. En una realización, la composición comprende 1200 mg, preferiblemente 600 mg, preferiblemente 300 mg de butirato de sodio propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente butirato de sodio.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende aproximadamente 600 mg de butirato de sodio. En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende 600 mg de butirato de sodio.
La L-treonina se incluye como componente de una composición como se describe en el presente documento. La treonina es un aminoácido esencial utilizado en la biosíntesis de proteínas, produce colágeno y puede beneficiar a la salud inmunitaria.
También pueden incluirse aminoácidos adicionales en una composición como se describe en el presente documento. En algunas realizaciones, la L-treonina puede estar sustituida en la composición por otro aminoácido seleccionado del grupo que consiste en L-triptófano, L-glutamina, L-arginina y L-metionina. Sin desear estar limitado por teoría alguna, el autor de la presente invención cree que cada aminoácido seleccionado de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina y L-metionina, así como cualquier combinación de los mismos en la composición puede reducir la inflamación y/o promover la cicatrización de la mucosa. Preferiblemente, el aminoácido es L-treonina. Junto con la bromelaína, estos aminoácidos también pueden actuar para reducir las citocinas proinflamatorias que promueven la reversión del microbioma y reducen la inflamación.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 67,5 a aproximadamente 2700 mg, preferiblemente de aproximadamente 112,5 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1900 mg, de aproximadamente 900 a aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la composición comprende aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 900 mg, preferiblemente aproximadamente 450 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 67,5 a aproximadamente 2700 mg, preferiblemente de aproximadamente 112,5 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1900 mg, de aproximadamente 900 a aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 1800 mg de L-treonina. En una realización, la composición comprende aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 900 mg, preferiblemente aproximadamente 450 mg de L-treonina.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 67,5 a 2700 mg, preferiblemente 112,5 a 2250 mg, 250 a 2000 mg, 500 a 1900 mg, 900 a 1800 mg, preferiblemente 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la composición comprende 1800 mg, preferiblemente 900 mg, preferiblemente 450 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 67,5 a 2700 mg, preferiblemente de 112,5 a 2250 mg, de 250 a 2000 mg, de 500 a 1900 mg, de 900 a 1800 mg, preferiblemente 1800 mg de L-treonina. En una realización, la composición comprende 1800 mg, preferiblemente 900 mg, preferiblemente 450 mg de L-treonina.
La vitamina D se incluye como un componente en la composición descrita en el presente documento. La vitamina D tiene efectos antiinflamatorios y también puede ayudar a mover el microbioma de vuelta a la homeostasis, así como a estrechar las uniones de espacio entre las células I del tracto gastrointestinal, lo que reduce la permeabilidad intestinal.
El término "Vitamina D" se refiere a un grupo de secoesteroides solubles en grasas que incluyen vitamina D2 (ergocalciferol) y vitamina D3-1,25-dihidroxivitamina D3 (colecalciferol); vitamina D sin subíndice se refiere a D2 o D3 0 ambas. Ambas formas de vitamina D se conocen colectivamente como calciferol. El metabolito activo de la vitamina D conocido como alfacalcidiol que no requiere la segunda etapa de hidroxilación en el riñón.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 4 a aproximadamente 150 ug, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 140 ug, de aproximadamente 13 a aproximadamente 130 ug, de aproximadamente 25 a aproximadamente 120 ug, de aproximadamente 35 a aproximadamente 110 ug, de aproximadamente 50 a aproximadamente 105 ug, preferiblemente aproximadamente 100 ug, preferiblemente aproximadamente 50 ug, preferiblemente aproximadamente 25 ug, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de vitamina D.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 4 a 150 ug, de 6,5 a 140 ug, de 13 a 130 ug, de 25 a 120 ug, de 35 a 110 ug, de 50 a 105 ug, preferiblemente 100 ug, preferiblemente 50 ug, preferiblemente 25 ug, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D.
En una realización, la vitamina D es Colecalciferol (vitamina D3).
El mentol se puede incluir como componente en una composición como se describe en el presente documento puede ser un compuesto orgánico preparado sintéticamente u obtenido a partir de aceites de menta, tales como hierbabuena. Tanto las hojas de hierbabuena como el aceite esencial de hierbabuena se han utilizado para fines de salud.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 3 a aproximadamente 150 mg, preferiblemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 145 mg, de aproximadamente 12 a aproximadamente 140 mg, de aproximadamente 24 a aproximadamente 135 mg, de 48 a aproximadamente 130 mg, de aproximadamente 60 a aproximadamente 125 mg, de aproximadamente 80 a aproximadamente 120 mg, de aproximadamente 90 a aproximadamente 110 mg, aproximadamente 100 mg, preferiblemente aproximadamente 96 mg de mentol. En una realización, la composición comprende aproximadamente 100, preferiblemente aproximadamente 96, preferiblemente aproximadamente 50 mg, preferiblemente aproximadamente 48 mg de mentol.
En una realización, la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de 3 a 200 mg, preferiblemente de 6 a 150 mg, de 12 a 145 mg, de 24 a 140 mg, de 48 a 135 mg, de 60 a 130 mg, de 80 a 120 mg, de 90 a 110 mg, 100 mg, preferiblemente 96 mg de mentol. En una realización, la composición comprende 100, preferiblemente 96, preferiblemente 50 mg, preferiblemente 48 mg de mentol.
En una realización, el mentol es L-mentol. En una realización, el mentol es D-mentol.
Las composiciones divulgadas en el presente documento se pueden presentar en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de formulación y farmacia. El término "forma de dosificación unitaria" significa una dosis única que se va a administrar a un paciente, en donde todos los agentes activos e ingredientes inactivos se combinan en un sistema adecuado, de manera que la dosis única está disponible en un solo recipiente o envase, estando contenida en el mismo la "forma de dosificación unitaria" completa. La "forma de dosificación unitaria" no abarca mezclar ningún componente entre sí desde dos o más recipientes o envases.
Los ejemplos típicos de formas de dosificación unitaria son píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas y/o micropartículas para la administración oral de una composición como se describe en el presente documento (es decir, una forma de dosificación oral), o parches transdérmicos que comprenden una dosificación unitaria de una composición como se describe en el presente documento (es decir, una forma de dosificación tópica). No se pretende que estos ejemplos de formas de dosificación unitarias sean limitantes de ninguna manera, sino simplemente representen ejemplos típicos en las técnicas farmacéuticas de formas de dosificación unitarias.
Por consiguiente, en otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria para el tratamiento o profilaxis de EII o SII que comprende de aproximadamente de 1 a aproximadamente 10 g de una composición de la invención. En una realización, la forma de dosificación unitaria es una forma de dosificación oral.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 8 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 7 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 4, de aproximadamente 1 a 3 g de la composición. En una realización, la forma de dosificación oral comprende de 1 a 8 g, de 1 a 7 g, de 1 a 6 g, de 1 a 5 g, de 1 a 4, de 1 a 3 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de aproximadamente 4 g a aproximadamente 4,5 g de la composición, preferiblemente aproximadamente 4,22 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de 4 g a 4,5 g de la composición, preferiblemente 4,22 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de aproximadamente 2 g a aproximadamente 2,5 g de la composición, preferiblemente aproximadamente 2,21 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de 2 g a 2,5 g de la composición, preferiblemente 2,21 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 1 a aproximadamente 8 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 7 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 g, de aproximadamente 1 a aproximadamente 4, aproximadamente 1 a 3 g de la composición. En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 1 a 8 g, 1 a 7 g, 1 a 6 g, 1 a 5 g, 1 a 4, 1 a 3 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 g de la composición, de aproximadamente 1,25 a aproximadamente 8 g, preferiblemente de aproximadamente 1,5 a aproximadamente 6 g, de la composición. En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 1 a 10 g de la composición, 1 a 8 g, preferiblemente 1,5 a 6 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 4 g a aproximadamente 4,5 g de la composición, preferiblemente aproximadamente 4,22 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 4 g a 4,5 g de la composición, preferiblemente 4,22 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 2 g a aproximadamente 2,5 g de la composición, preferiblemente aproximadamente 2,21 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 2 g a 2,5 g de la composición, preferiblemente 2,21 g de la composición.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende 50-2500 mg de bromelaína, preferiblemente 720 mg de bromelaína, 45-1800 mg de butirato de sodio, preferiblemente 300 mg de butirato de sodio, 67,5-2700 mg de L-treonina, preferiblemente 450 mg de L-treonina, 4-150 pg de vitamina D, preferiblemente 25 pg de vitamina D y opcionalmente 3-150 mg de mentol, preferiblemente 48 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de aproximadamente 460 mg a aproximadamente 500 mg de bromelaína, preferiblemente aproximadamente 480 mg de bromelaína, de aproximadamente 550 mg a aproximadamente 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente aproximadamente 600 mg de butirato de sodio, de aproximadamente 850 mg de L-treonina a aproximadamente 950 mg de L-treonina, preferiblemente aproximadamente 900 mg de L-treonina, de aproximadamente 10 ug de vitamina D a aproximadamente 15 ug de vitamina D, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de aproximadamente 65 mg de mentol a aproximadamente 75 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 70 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de 460 mg a 500 mg de bromelaína, preferiblemente 480 mg de bromelaína, de 550 mg a 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente 600 mg de butirato de sodio, de 850 mg de L-treonina a 950 mg de L-treonina, preferiblemente 900 mg de L-treonina, de 10 ug de vitamina D a 15 ug de vitamina D, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente 65 mg de mentol a 75 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 70 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 460 mg a aproximadamente 500 mg de bromelaína, preferiblemente aproximadamente 480 mg de bromelaína, de aproximadamente 550 mg a aproximadamente 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente aproximadamente 600 mg de butirato de sodio, de aproximadamente 850 mg de L-treonina a aproximadamente 950 mg de L-treonina, preferiblemente aproximadamente 900 mg de L-treonina, de aproximadamente 10 ug de vitamina D a aproximadamente 15 ug de vitamina D, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de aproximadamente 65 mg de mentol a aproximadamente 75 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 70 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 460 mg a 500 mg de bromelaína, preferiblemente 480 mg de bromelaína, de 550 mg a 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente 600 mg de butirato de sodio, de 850 mg de L-treonina a 950 mg de L-treonina, preferiblemente 900 mg de L-treonina, de 10 ug de vitamina D a 15 ug de vitamina D, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de 65 mg de mentol a 75 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 70 mg de mentol
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de aproximadamente 700 mg a aproximadamente 740 mg de bromelaína, preferiblemente aproximadamente 720 mg de bromelaína, de aproximadamente 550 mg a aproximadamente 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente aproximadamente 600 mg de butirato de sodio, de aproximadamente 850 mg de L-treonina a aproximadamente 950 mg de L-treonina, preferiblemente aproximadamente 900 mg de L-treonina, de aproximadamente 10 ug de vitamina D a aproximadamente 15 ug de vitamina D, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de aproximadamente 100 mg de mentol a aproximadamente 110 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 105 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende de 700 mg a 740 mg de bromelaína, preferiblemente 720 mg de bromelaína, de 550 mg a 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente 600 mg de butirato de sodio, de 850 mg de L-treonina a 950 mg de L-treonina, preferiblemente 900 mg de L-treonina, de 10 ug de vitamina D a 15 ug de vitamina D, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de 100 mg de mentol a 110 mg de mentol, preferiblemente 105 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de aproximadamente 700 mg a aproximadamente 740 mg de bromelaína, preferiblemente aproximadamente 720 mg de bromelaína, de aproximadamente 550 mg a aproximadamente 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente aproximadamente 600 mg de butirato de sodio, de aproximadamente 850 mg de L-treonina a aproximadamente 950 mg de L-treonina, preferiblemente aproximadamente 900 mg de L-treonina, de aproximadamente 10 ug de vitamina D a aproximadamente 15 ug de vitamina D, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de aproximadamente 100 mg de mentol a aproximadamente 110 mg de mentol, preferiblemente aproximadamente 105 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en de 700 mg a 740 mg de bromelaína, preferiblemente 720 mg de bromelaína, de 550 mg a 650 mg de butirato de sodio, preferiblemente 600 mg de butirato de sodio, de 850 mg de L-treonina a 950 mg de L-treonina, preferiblemente 900 mg de L-treonina, de 10 ug de vitamina D a 15 ug de vitamina D, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D, y opcionalmente de 100 mg de mentol a 110 mg de mentol, preferiblemente 105 mg de mentol.
En una realización, la forma de dosificación oral se formula para la administración de 4,22 gramos de la forma de dosificación dos veces al día por sujeto. En esta realización, la dosificación oral proporciona una dosis diaria total de 140 mg de mentol, 960 mg de bromelaína, 1800 mg de treonina, 1200 mg de butirato de sodio y 25 microgramos de colecalciferol.
En otra realización, la forma de dosificación oral se formula para la administración de 2,21 gramos dos veces al día por sujeto. En esta realización, la dosificación oral proporciona una dosis diaria total de 70 mg de mentol, 480 mg de bromelaína, 900 mg de treonina, 600 mg de butirato de sodio y 12,5 microgramos de colecalciferol.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden 1440 mg de bromelaína y 288 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de 1200 mg de ácido butírico (sal de sodio), 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden aproximadamente 480 mg de bromelaína y aproximadamente 70 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de aproximadamente 600 mg de ácido butírico (sal de sodio), aproximadamente 900 mg de L-treonina y aproximadamente 0,0125 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden 480 mg de bromelaína y 70 mg de mentol dirigido al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de 600 mg de ácido butírico (sal sódica), 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden aproximadamente 480 mg de bromelaína y aproximadamente 70 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de aproximadamente 600 mg de ácido butírico (sal de sodio), aproximadamente 900 mg de L-treonina y aproximadamente 0,0125 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden 480 mg de bromelaína y 70 mg de mentol dirigido al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de 600 mg de ácido butírico (sal de sodio), 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden aproximadamente 960 mg de bromelaína y aproximadamente 140 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de aproximadamente 1200 mg de ácido butírico (sal de sodio), aproximadamente 1800 mg de L-treonina y aproximadamente 0,025 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden 960 mg de bromelaína y 140 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de 1200 mg de ácido butírico (sal sódica), 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden aproximadamente 960 mg de bromelaína y aproximadamente 140 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de aproximadamente 1200 mg de ácido butírico (sal de sodio), aproximadamente 1800 mg de L-treonina y aproximadamente 0,025 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral consiste esencialmente en al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden 960 mg de bromelaína y 140 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y al menos una píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula con recubrimiento entérico o cualquier combinación de los mismos que comprenden una dosis dirigida al colon de 1200 mg de ácido butírico (sal de sodio), 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D3.
En una realización, la forma de dosificación oral proporciona las concentraciones de componentes por enterocito y bacterias contenidas dentro del microbioma intestinal como se muestra en la Tabla 1.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende una o más píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas o cualquier combinación de las mismas.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende una composición que comprende o consiste esencialmente en dos tipos diferentes de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas, en donde cada tipo diferente se formula para liberar su contenido en una parte diferente del tracto gastrointestinal. En una realización, las diferentes partes del tracto gastrointestinal son el duodeno (también denominado en el presente documento el "intestino superior") y el colon (también denominado en el presente documento el "intestino inferior").
El solicitante ha encontrado sorprendentemente que la eficacia de una composición de la invención aumenta cuando los componentes de la composición se formulan en dos tipos diferentes de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas (denominadas en el presente documento tipo A y tipo B), en donde cada tipo se formula para la administración de los componentes contenidos en el mismo, a una parte específica del intestino.
En un ejemplo, los componentes de la composición trabajan juntos para aliviar los síntomas de la EII y/o el SII actuando simultáneamente para reducir el dolor en la inflamación del intestino superior (tipo A) a través del intestino superior e inferior (tipo A) y restaurar la función de unión estrecha y la generación de mucina en el intestino inferior (tipo B). El beneficio inesperado de este enfoque ideado por el solicitante puede verse claramente en los resultados endoscópicos mejorados obtenidos en ratones (Ejemplos 11 y 12) y en la histopatología (Ejemplo 14).
En una realización, los dos tipos diferentes de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas son píldoras de Tipo A y Tipo B, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, partículas o micropartículas de gránulos, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B comprenden cada una al menos un componente, preferiblemente al menos dos componentes, de la composición descrita en el presente documento.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B comprenden cada una al menos un componente diferente de la composición entre sí, preferiblemente al menos dos componentes diferentes de la composición entre sí.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en bromelaína. En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden mentol.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden una cantidad de bromelaína que proporciona una dosis de aproximadamente 10 a 40 fg/bacteria, de aproximadamente 15 a 35 fg/bacteria, de aproximadamente 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente aproximadamente 28 fg/bacteria, preferiblemente aproximadamente 25 fg/bacteria, preferiblemente aproximadamente 20 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto. En una realización, la dosis es una dosis eficaz.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden una cantidad de bromelaína que proporciona una dosis de 10 a 40 fg/bacteria, de 15 a 35 fg/bacteria, de 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente 28 fg/bacteria, preferiblemente 25 fg/bacteria, preferiblemente 20 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto. En una realización, la dosis es una dosis eficaz.
En una realización, la dosis eficaz es de aproximadamente 10 a 40 fg/bacteria, de aproximadamente 15 a 35 fg/bacteria, de aproximadamente 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente de aproximadamente 28 fg/bacteria, preferiblemente de aproximadamente 25 fg/bacteria, preferiblemente de aproximadamente 20 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto.
En una realización, la dosis eficaz es de 10 a 40 fg/bacteria, de 15 a 35 fg/bacteria, de 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente 28 fg/bacteria, preferiblemente 25 fg/bacteria, preferiblemente 20 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden una cantidad de bromelaína que proporciona una dosis de aproximadamente 25 a 125 pg/enterocito ileal (pg/ie), de aproximadamente 50 a 100 pg/ie, de aproximadamente 60 a aproximadamente 90 pg/ie, de aproximadamente 70 a 80 pg/ie, preferiblemente aproximadamente 75 pg/ie, en el íleon/intestino delgado del sujeto. En una realización, la dosis es una dosis eficaz.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden una cantidad de bromelaína que proporciona una dosis de 25 a 125 pg/enterocito ileal (pg/ie), de 50 a 100 pg/ie, de 60 a 90 pg/ie, de 70 a 80 pg/ie, preferiblemente 75 pg/ie, en el íleon/intestino delgado del sujeto. En una realización, la dosis es una dosis eficaz.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 400 mg a 1100 mg de bromelaína, de aproximadamente 600 mg a 1000 mg, de aproximadamente 700 mg a 900 mg, de aproximadamente 750 mg a 850 mg, preferiblemente aproximadamente 800 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de 400 mg a 1100 mg de bromelaína, de 600 mg a 1000 mg, de 700 mg a 900 mg, de 750 mg a 850 mg, preferiblemente 800 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 460 mg a aproximadamente 500 mg de bromelaína, de aproximadamente 470 mg a aproximadamente 490 mg, de aproximadamente 475 mg a aproximadamente 485 mg, preferiblemente aproximadamente 480 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de 460 mg a 500 mg de bromelaína, de 470 mg a 490 mg, de 475 mg a 485 mg, preferiblemente 480 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 700 mg a aproximadamente 740 mg de bromelaína, de aproximadamente 710 mg a aproximadamente 730 mg, de aproximadamente 715 mg a aproximadamente 725 mg, preferiblemente aproximadamente 720 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden o consisten esencialmente en de 700 mg a 740 mg de bromelaína, de 710 mg a 730 mg, de 715 mg a 725 mg, preferiblemente 720 mg de bromelaína.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A comprenden mentol.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, butirato de sodio y vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden L-treonina, butirato de sodio y vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B consisten esencialmente en L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, butirato de sodio y vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B consisten esencialmente en L-treonina, butirato de sodio y vitamina D. En una realización, la vitamina D es vitamina D3.
En una realización, la vitamina D es vitamina D3.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartículas de tipo B comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 67,5 a aproximadamente 2700 mg, preferiblemente de aproximadamente 112,5 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1900 mg, de aproximadamente 900 a aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 900 mg, preferiblemente aproximadamente 450 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartículas de tipo B comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 67,5 a aproximadamente 2700 mg, preferiblemente de aproximadamente 112,5 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1900 mg, de aproximadamente 900 a aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 1800 mg de L-treonina. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en aproximadamente 1800 mg, preferiblemente aproximadamente 900 mg, preferiblemente aproximadamente 450 mg de L-treonina.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 67,5 a 2700 mg, preferiblemente de 112,5 a 2250 mg, de 250 a 2000 mg, de 500 a 1900 mg, de 900 a 1800 mg, preferiblemente 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en 1800 mg, preferiblemente 900 mg, preferiblemente 450 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 67,5 a 2700 mg, preferiblemente de 112,5 a 2250 mg, de 250 a 2000 mg, de 500 a 1900 mg, de 900 a 1800 mg, preferiblemente 1800 mg de L-treonina. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en 1800 mg, preferiblemente 900 mg, preferiblemente 450 mg de L-treonina.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 45 a 1800 mg de butirato de sodio, preferiblemente de aproximadamente 75 a aproximadamente 1650 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 1100 a aproximadamente 1300 mg, preferiblemente aproximadamente 1200 mg de butirato de sodio. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden aproximadamente 1200 mg, preferiblemente aproximadamente 600 mg, preferiblemente aproximadamente 300 mg de butirato de sodio.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 45 a 1800 mg de butirato de sodio, preferiblemente de 75 a 1650 mg, de 250 a 1500, de 500 a 1400, de 750 a 1500, de 1000 a 1400, de 1100 a 1300 mg, preferiblemente 1200 mg de butirato de sodio. En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en 1200 mg, preferiblemente 600 mg, preferiblemente 300 mg de butirato de sodio.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 4 a aproximadamente 150 ug, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 140 ug, de aproximadamente 13 a aproximadamente 130 ug, de aproximadamente 25 a aproximadamente 120 ug, de aproximadamente 35 a aproximadamente 110 ug, de aproximadamente 50 a aproximadamente 105 ug, preferiblemente aproximadamente 100 ug de vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 4 a 150 ug, de 6,5 a 140 ug, de 13 a 130 ug, de 25 a 120 ug, de 35 a 110 ug, de 50 a 105 ug, preferiblemente 100 ug de vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 ug de Vitamina D, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 40 ug, de aproximadamente 20 a aproximadamente 30 ug, preferiblemente aproximadamente 25 ug de Vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 1 a 50 ug de vitamina D, preferiblemente de 10 a 40 ug, de 20 a 30 ug, preferiblemente 25 ug de vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en aproximadamente 5 a aproximadamente 30 ug de Vitamina D, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 25 ug, de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 ug, preferiblemente aproximadamente 12,5 ug de Vitamina D.
En una realización, la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden o consisten esencialmente en de 5 a 30 ug de vitamina D, preferiblemente de 10 a 25 ug, de 12 a 13 ug, preferiblemente 12,5 ug de vitamina D.
En una realización, la vitamina D es colecalciferol (vitamina D3).
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B pueden comprender píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de subtipo que son píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de subtipo de Tipo B1 y B2.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B1 comprenden los componentes L-treonina y butirato de sodio comprendidos en las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B y las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B2 comprenden el componente vitamina D comprendido en las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B.
Realizaciones adicionales de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B que comprenden píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de subtipo B1 y B2 se contemplan específicamente en el presente documento como opciones de todas las realizaciones específicas descritas en el presente documento y expuestas para píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B.
En algunas realizaciones, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de tipo A y/o tipo B de pueden modificar para la liberación diferencial de uno o más componentes, incluyendo la liberación sostenida y la liberación retardada. Un experto en la técnica puede diseñar una forma de dosificación oral según cualquiera de las formas de dosificación de liberación modificada conocidas y descritas en la técnica (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Núm. 7.108.865).
En algunas realizaciones, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas comprenden un recubrimiento hidrosoluble, insoluble en agua o entérico.
Los polímeros entéricos y otros polímeros sensibles al pH que son relativamente insolubles e impermeables al pH del estómago, pero que son más solubles y permeables al pH del intestino delgado y del colon incluyen poliacrilamidas, derivados de ftalato tales como ftalatos ácidos de carbohidratos, acetato ftalato de amilosa, acetato ftalato de celulosa, otros ésteres ftalato de celulosa, éteres ftalato de celulosa, ftalato de hidroxipropilcelulosa, ftalato de hidroxipropiletilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de metilcelulosa, ftalato de poli(acetato de vinilo), hidrogenoftalato de poli(acetato de vinilo), acetato ftalato de celulosa de sodio, ftalato ácido de almidón, copolímero de estireno-ácido maleico/ftalato de dibutilo, copolímero de estireno-ácido maleico-ftalato de polivinilacetato, copolímeros de estireno y ácido málico, derivados de ácido poliacrílico tales como copolímeros de ácido acrílico y éster acrílico, ácido polimetacrílico y ésteres de los mismos, copolímeros de poli(ácido acrílico-metacrílico), goma laca y copolímeros de acetato de vinilo y ácido crotónico. Los polímeros sensibles al pH preferidos incluyen goma laca; derivados de ftalato, particularmente acetato ftalato de celulosa, poli(acetato ftalato de vinilo), y ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa; derivados de ácido poliacrílico, particularmente poli(metacrilato de metilo) mezclado con copolímeros de ácido acrílico y éster acrílico; y copolímeros de acetato de vinilo y ácido crotónico.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden un recubrimiento entérico. En una realización, el recubrimiento entérico forma una capa externa sobre la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A. En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico está comprendido dentro de una capa interna dentro de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A se formulan con un excipiente que libera los componentes comprendidos en el mismo en la parte superior del intestino delgado. En una realización, los excipientes comprenden uno o más diluyentes, aglutinantes, lubricantes y agentes disgregantes.
En una realización, el diluyente es celulosa microcristalina o dihidrato de fosfato dicálcico o una combinación de los mismos. En una realización, el disgregante es crospovidona o croscarmelosa sódica o una combinación de los mismos.
En una realización, el polímero es hidroxipropilmetilcelulosa o Ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa HP 55 o Eudragit L100-55. En una realización, el lubricante es estearato de magnesio o talco o una combinación de los mismos.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan con un excipiente que libera los componentes comprendidos en el mismo en la parte inferior del intestino delgado. En una realización, los excipientes comprenden uno o más diluyentes, aglutinantes, lubricantes y agentes disgregantes.
En una realización, el diluyente es celulosa microcristalina o dihidrato de fosfato dicálcico o una combinación de los mismos. En una realización, el disgregante es crospovidona o croscarmelosa sódica o una combinación de los mismos. En una realización, el polímero es hidroxipropilmetilcelulosa o etilcelulosa o Eudragit S100 o Goma laca o biótico Eudraguard. En una realización, el lubricante es estearato de magnesio o talco o una combinación de los mismos.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo B comprenden un recubrimiento entérico. En una realización, el recubrimiento entérico forma una capa externa sobre la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B. En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico está comprendido dentro de una capa interna dentro de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B.
Lo que es importante es que el recubrimiento entérico esté diseñado para disolverse de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula en la región del tracto gastrointestinal (GI) de un sujeto en la ubicación óptima identificada por el autor de la presente invención para liberar los componentes de la composición comprendidos en el mismo en el tracto GI.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A a aproximadamente pH 6,0. En una realización, el pH es < pH 6,0.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la micropartícula de tipo A a un pH predeterminado. En una realización, el pH predeterminado es aproximadamente pH 6,0. En una realización, el pH predeterminado es > pH 6,0.
En una realización, el recubrimiento entérico se formula para liberar la bromelaína y el mentol de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A en el íleon/intestino delgado de un sujeto.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo A en el íleon/intestino delgado de un sujeto, liberando bromelaína y mentol.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la píldora, comprimido, minicomprimido, gránulo, cápsula, partícula o micropartícula de Tipo B a un pH neutro. En una realización, el pH es > pH 6,5. En una realización, el pH es aproximadamente 7,0.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la micropartícula de Tipo B a un pH predeterminado. En una realización, el pH predeterminado es un pH neutro. En una realización, el pH es > pH 6,5. En una realización, el pH es aproximadamente 7,0.
En una realización, el recubrimiento entérico se formula para liberar la L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, butirato de sodio y vitamina D de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula cerca y/o en el colon de un sujeto.
En una realización, el recubrimiento entérico se formula para liberar la L-treonina, butirato de sodio y vitamina D de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula cerca y/o en el colon de un sujeto.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B cerca y/o en el colon de un sujeto liberando la L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, butirato de sodio y vitamina D.
En una realización, el recubrimiento entérico se disuelve de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B cerca y/o en el colon de un sujeto liberando la L-treonina, butirato de sodio y vitamina D.
En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico está diseñado para suministrar los componentes de la composición a una región predeterminada del tracto GI. En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico suministra los componentes de la composición a la región predeterminada del tracto GI.
En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico está diseñado para disolverse de la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula a un pH predeterminado dentro del tracto GI de un sujeto para liberar los componentes de la composición comprendida en el mismo. En algunas realizaciones, el recubrimiento entérico se disuelve al pH predeterminado dentro del tracto GI del sujeto.
En algunas realizaciones, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A y/o Tipo B se formulan para suministrar una cantidad eficaz de al menos uno, preferiblemente al menos dos, preferiblemente al menos tres, preferiblemente al menos cuatro, preferiblemente cinco componentes de la composición a las bacterias en el tracto GI del sujeto.
En algunas realizaciones, los diferentes tipos de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas suministran una cantidad eficaz de al menos uno, preferiblemente al menos dos, preferiblemente al menos tres, preferiblemente al menos cuatro, preferiblemente cinco componentes de la composición a las bacterias en el tracto GI del sujeto tras la disolución del recubrimiento entérico.
En algunas realizaciones, el suministro de una cantidad eficaz comprende el suministro al íleon/intestino delgado del sujeto. En alguna, la cantidad eficaz es de 10 a 40 fg/bacteria, de 15 a 35 fg/bacteria, de 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente 28 fg/bacteria, preferiblemente 25 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto.
En una realización, la cantidad eficaz es de 10 a 40 fg/bacteria, de 15 a 35 fg/bacteria, de 20 a 30 fg/bacteria, preferiblemente 28 fg/bacteria, preferiblemente 25 fg/bacteria, preferiblemente 20 fg/bacteria de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto.
En algunas realizaciones, el suministro de la cantidad eficaz comprende el suministro al colon del sujeto. En algunas realizaciones, la cantidad eficaz es de 25 a 125 pg/enterocito ileal (pg/ie), de 50 a 100 pg/ie, de 60 a 90 pg/ie, de 70 a 80 pg/ie, preferiblemente 75 pg/ie, de bromelaína en el íleon/intestino delgado del sujeto.
En una realización, la al menos primera píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula comprende una cantidad de bromelaína que es suficiente para proporcionar una dosis eficaz de 25 a 125 pg/enterocito ileal (pg/ie), de 50 a 100 pg/ie, de 60 a 90 pg/ie, de 70 a 80 pg/ie, preferiblemente 75 pg/ie, en el íleo/intestino delgado del sujeto.
Como entenderá un experto en la técnica, el experto en las técnicas farmacéuticas puede preparar varios tipos diferentes de recubrimientos entéricos que se disolverán en una ubicación predeterminada en el tracto GI siguiendo las directrices para recubrimientos entéricos, por ejemplo, según la práctica de formulación convencional, véanse, p. ej., (Allen) y (Encyclopedia of Pharmaceutical Technology). Se cree que la preparación de tales recubrimientos entéricos está dentro del conocimiento práctico de la técnica. Por ejemplo, una composición como se describe en el presente documento se formula para facilitar la administración dirigida de bromalina al colon. Los sistemas de descubrimiento de fármacos orales dirigidos al colon se conocen bien en la técnica (Amidon, 2016).
La presente solicitud proporciona una divulgación sustancial en cuanto a dónde se van a liberar en el tracto GI de un sujeto los componentes de la composición de la invención. Por consiguiente, se cree que un experto en la técnica puede formular un recubrimiento entérico apropiado para liberar los componentes de bromelaína y mentol al íleon/intestino delgado de un sujeto siguiendo la dirección proporcionada en la divulgación de la presente solicitud combinada con el conocimiento general común.
Por ejemplo, los componentes de la composición pueden dispersarse en cualquier portador farmacéuticamente aceptable, que puede ser un portador de liberación inmediata o de liberación lenta. El portador puede comprender celulosa microcristalina (MCC), dextrano, almidón de maíz, harina, talco, sacarosa, manitol, lactosa, carbonato de calcio, polivinilpirrolidona (PVP), poli(óxido de etileno), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC), alcohol polivinílico (PVA) o similares como se conoce en la técnica.
En un ejemplo no limitante, el portador se puede comprimir en un sólido o semisólido y después recubrir con un recubrimiento polimérico para modificar el perfil de liberación de los componentes. El recubrimiento puede comprender o bien un polímero soluble en agua que incluye polivinilpirrolidona (PVP), polivinilpolipirrolidona (crospovidona) o polietilenglicol, o bien un polímero insoluble en agua que incluye éteres de celulosa, ésteres de celulosa, acetato de celulosa, etilcelulosa, poli(acetato de vinilo), copolímeros neutros basados en acrilato de etilo y metacrilato de metilo, copolímeros de ésteres de ácido acrílico y metacrílico con grupos amonio cuaternario, copolímeros de ácido amonio metacrílico insensibles al pH y mezclas de los mismos. El recubrimiento también puede comprender metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), hidroxipropilcelulosa (HPC) o una combinación de tales polímeros naturales. Por ejemplo, el uso de metilcelulosa combinada con hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) es bien conocido.
Los ingredientes y métodos convencionales de preparación de diversas formas de dosificación oral se describen en "Remington: The science and practice of pharmacy". Los excipientes adicionales incluyen, sin limitación, lubricantes, disgregantes y similares.
En una realización, una composición de la invención comprende una forma de dosificación unitaria como se describe en el presente documento, preferiblemente una forma de dosificación oral como se describe en el presente documento, que comprende una mezcla de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B como se describe en el presente documento en un único recipiente.
En una realización, una composición de la invención comprende una forma de dosificación unitaria como se describe en el presente documento, preferiblemente una forma de dosificación oral como se describe en el presente documento, que comprende píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A o Tipo B descritas en el presente documento en un único recipiente.
En una realización, el recipiente es una bolsita. En una realización, la mezcla se suspende en un portador. En una realización, el portador es un líquido acuoso consumible seleccionado del grupo que consiste en agua, zumo, zumos artificiales, bebidas aromatizadas artificialmente, leches animales, suero, bebidas con base de suero, leches vegetales y leches de frutos secos. En una realización, el portador es un gel consumible. En una realización, el gel consumible es yogur.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, preferiblemente micropartículas.
En una realización, la forma de dosificación oral comprende partículas o micropartículas de Tipo A o Tipo B, preferiblemente micropartículas.
En una realización, la dosificación oral comprende micropartículas suspendidas. En una realización, las micropartículas suspendidas se suspenden en un líquido o gel.
En una realización, la dosificación oral comprende micropartículas dispersadas. En una realización, las micropartículas dispersadas se dispersan en un polvo.
En una realización, la dosificación oral comprende una mezcla de micropartículas de Tipo A y Tipo B en un único recipiente. En una realización, la mezcla se suspende en un portador. En una realización, el vehículo es un líquido consumible seleccionado del grupo que consiste en agua, zumo, zumos artificiales, bebidas aromatizadas artificialmente, leches animales, leches vegetales, leches de frutos secos, suero y bebidas a base de suero. En una realización, el portador es un gel consumible. En una realización, el gel consumible es yogur.
En una realización, el sujeto es un mamífero. En una realización, el sujeto es un ser humano. El sujeto puede ser cualquier sujeto, incluyendo sujetos masculinos, femeninos, adultos, geriátricos o pediátricos. En algunas realizaciones, el sujeto ha tenido un diagnóstico clínico de EII y, en particular, colitis ulcerosa o enfermedad de Crohn. También se contempla en el presente documento el uso veterinario en mamíferos. Por consiguiente, en algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero no humano. En una realización, el mamífero no humano es un gato o un perro.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación oral que consiste esencialmente en una composición de la invención en donde al menos dos componentes de la composición están comprendidos en una formulación de liberación retardada.
Se contemplan específicamente en el presente documento como realizaciones de la forma de dosificación oral de la invención que consisten esencialmente en una composición de la invención en donde al menos dos componentes de la composición están comprendidos en una formulación de liberación retardada, todas las realizaciones contempladas dentro de los aspectos de la invención divulgados en el presente documento que son una composición que comprende (a)-(d) y una forma de dosificación oral que comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 g de la composición de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria, preferiblemente una forma de dosificación oral que comprende o consiste esencialmente en los componentes enumerados en la Tabla 1 en aproximadamente las cantidades, preferiblemente en las cantidades, mostradas como dosis total/persona de 80 kg (mg/día), en donde los componentes están comprendidos en el Tipo A o el Tipo B como se muestra, en donde el Tipo A y el Tipo B se dirigen al intestino delgado y grueso respectivamente o se formulan para la liberación de los componentes mostrados en el intestino delgado y grueso respectivamente.
Tabla 1 - Componentes de GaRP
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende como partes discretas, píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden bromelaína y se formulan para la liberación de la bromelaína al intestino delgado de un sujeto, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden opcionalmente mentol, y
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y vitamina D y las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan para liberación en el intestino inferior de un sujeto.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende como partes discretas, píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A consisten esencialmente en 720 mg de bromelaína y se formulan para la liberación de la bromelaína al intestino delgado de un sujeto, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden opcionalmente 144 mg de mentol, y
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,0125 mg de vitamina D y se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende como partes discretas, píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A consisten esencialmente en 720 mg de bromelaína y se formulan para la liberación de la bromelaína al intestino delgado de un sujeto, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden opcionalmente 105 mg de mentol, y
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,0125 mg de vitamina D y se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende como partes discretas, píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A consisten esencialmente en 480 mg de bromelaína y se formulan para la liberación de la bromelaína al intestino delgado de un sujeto, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden opcionalmente 70 mg de mentol, y
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,0125 mg de vitamina D y se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D. En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende como partes discretas, píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B, en donde
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A consisten esencialmente en 1440 mg de bromelaína y se formulan para la liberación de la bromelaína al intestino delgado de un sujeto, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden opcionalmente 288 mg de mentol, y
las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,025 mg de vitamina D y se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B son de tamaño y características similares entre sí, y se pueden mezclar a cualquier razón útil dependiendo de la etapa de la afección que va a tratarse.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B se mezclan a la razón de 1,94 partes de A a 2,28 partes de B (p/p en mg), proporcionando una razón de componentes de Mentol 70 : bromelaína 480 : treonina 900 : butirato de sodio 600 : colecalciferol 0,0125.
En otra realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B se mezclan a la razón de 2,91 partes A a 2,28 partes B (p/p en mg), proporcionando una razón de componentes de Mentol 105 : bromelaína 720 : treonina 900 : butirato de sodio 600 : colecalciferol 0,0125.
Los autores de la presente invención también han descubierto sorprendentemente que una composición que comprende butirato de sodio, L-treonina y vitamina D es sorprendentemente eficaz en el tratamiento de los síntomas de EII/SII promoviendo la cicatrización de lesiones relacionadas con disfunción gastrointestinal. Cuando se utilizan juntos como se describe en el presente documento, estos componentes, butirato de sodio, L-treonina y vitamina D, actúan sinérgicamente aumentando la expresión de varios genes de mucina implicados en la integridad intestinal, manteniendo la diversidad de microbiomas intestinales y evitando la inflamación. Este efecto se puede observar en los resultados presentados en el Ejemplo 10. Estos mismos genes no se vieron afectados cuando los componentes se dosificaron individualmente. En el Ejemplo 11 se encuentra una demostración adicional de que la combinación de butirato de sodio, treonina y vitamina D3 es eficaz en el tratamiento de colitis en un modelo de ratón. Los ratones del experimento descrito exhibieron puntuaciones de lesión significativamente reducidas en 135% según lo medido 7 días después de la inducción con TNBS. Los resultados obtenidos del Ejemplo 12 demuestran adicionalmente que la combinación de butirato de sodio, treonina y vitamina D3 tiene una eficacia similar a 2 mg/kg de prednisolona en el tratamiento de las lesiones inducidas con TNBS.
Por consiguiente, en otro aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende butirato de sodio, uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D.
En una realización, la composición consiste esencialmente en butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D.
En una realización, la composición se formula para la liberación del butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la composición, cuando se administra, administra el butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la composición comprende butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D.
En una realización, la composición consiste esencialmente en butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D.
En otro aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,0125 mg de vitamina D.
En una realización, la composición comprende 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D.
En una realización, la composición consiste esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D.
En una realización, la composición se formula para la liberación del butirato de sodio, L-treonina y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la composición, cuando se administra, administra el butirato de sodio, L-treonina y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En otro aspecto, la invención se refiere a una composición que comprende 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, la composición comprende 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, la composición consiste esencialmente en 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, la composición se formula para la liberación del butirato de sodio, L-treonina y vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la composición, cuando se administra, administra el butirato de sodio, L-treonina, vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
Se contemplan específicamente en el presente documento como realizaciones de cada uno de los aspectos de la invención relacionadas con composiciones que comprenden y/o que consisten esencialmente en butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y Vitamina D, todas las realizaciones descritas en el presente documento relacionadas con formas de dosificación unitarias y formas de dosificación oral que incluyen la determinación, formulación y administración de las mismas.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B comprenden butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan para la liberación del butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan para la liberación del butirato de sodio y uno o más de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina, y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la forma de dosificación unitaria, cuando se administra, administra las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B comprenden butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D.
En una realización, la forma de dosificación unitaria es una forma de dosificación oral como se describe en el presente documento.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B, en donde- las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,0125 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B comprenden 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 600 mg de butirato de sodio, 900 mg de L-treonina y 0,0125 mg de vitamina D. En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la forma de dosificación unitaria, cuando se administra, administra las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la forma de dosificación unitaria es una forma de dosificación oral como se describe en el presente documento.
En otro aspecto, la invención se refiere a una forma de dosificación unitaria que comprende píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B comprenden 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B consisten esencialmente en 1200 mg de butirato de sodio, 1800 mg de L-treonina y 0,025 mg de vitamina D.
En una realización, las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B se formulan para la liberación del butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D al intestino inferior de un sujeto.
En una realización, la forma de dosificación unitaria, cuando se administra, administra las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B al intestino inferior de un sujeto.
Las composiciones relacionadas anteriores y las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, gránulos, cápsulas, partículas o micropartículas de Tipo B que comprenden y/o consisten esencialmente en butirato de sodio, L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos, y Vitamina D, contempladas específicamente en el presente documento como realizaciones de los aspectos de la invención, son todas realizaciones expuestas en el presente documento referentes a formas de dosificación unitarias y formas de dosificación oral incluyendo la dosificación, formulación y administración de tales formas como se describe en el presente documento.
Métodos
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para reducir la unión bacteriana a las células del tracto gastrointestinal de un sujeto que comprende poner en contacto las bacterias con una cantidad eficaz de la composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para reducir la invasión bacteriana en las células del tracto gastrointestinal de un sujeto que comprende poner en contacto las bacterias con una cantidad eficaz de la composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para mejorar la integridad de la barrera gastrointestinal en un sujeto que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En un aspecto, la invención se refiere a un método para prevenir, tratar o gestionar la EII o el SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para aliviar al menos parcialmente al menos un síntoma de la EII o el SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En una realización, el al menos un síntoma se selecciona del grupo que comprende diarrea, dolor abdominal, calambres abdominales, fiebre, fatiga, náuseas, flatulencia, hinchazón, pérdida de peso, reducción de apetito y heces sanguinolentas.
En otro aspecto, la invención se refiere a un método para mejorar al menos un parámetro asociado con la EII o el SII que comprende administrar a un sujeto que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral de la invención.
En una realización, al menos un parámetro asociado con EII o SII se selecciona del grupo que comprende:
• Niveles séricos circulantes de marcadores inflamatorios tales como IL-6, IL-8, IL-17A, IL-17F, IL-18, IL-21, IL-22, TL1A, TGF-p, ICAM-1, IFN-gamma, MADCAM-1 y E-selectina
• Marcadores fecales de inflamación tales como calprotectina, lactoferrina y lisozima
• Niveles circulantes de marcadores de estrés oxidativo en suero tales como LDL oxidada, oxidabilidad en suero e isoprostanos F2
• Biopatógenos en muestras de heces tales como bacterias pertenecientes a Proteobacteria EnterobacteriaceaeEscherichia coli,a Proteobacteria EnterobacteriaceaeKlebsiellaspp., Proteobacteria PseudomonadaceaePseudomonasspp., Proteobacteria enterobacteriaceaeSalmonella spp.,Proteobacteria DesulfovibrionaceaeBilophilia wadsworthia,ProteobacteriasDesulfovibrionaceae desulfovibriospp., ProteobacteriaDesulfovibrionaceae Desulfuronomonasspp., Proteobacteria CampylobacteraceaeCampylobacter concisus,Proteobacteria CampylobacteraceaeCampylobacter jejuni,Bacteroidetes Bacteroidaceae EnterotoxigénicasBacteroides fragilis,Actinobacteria CoriobacteriaceaeAtopobium parvulumy Firmicutes ClostridiaceaeClostridium difficile.
En los aspectos anteriores:
En una realización, el sujeto padece colitis ulcerosa. En una realización, el sujeto padece la enfermedad de Crohn. En una realización, el sujeto padece SII. En una realización, la administración es administración oral.
En una realización, la administración es aproximadamente 20 - 90 minutos, preferiblemente aproximadamente 30 - 60, preferiblemente aproximadamente 45 minutos antes de una comida. En una realización, la administración es 20-90 minutos, preferiblemente 30-60, preferiblemente 45 minutos antes de una comida.
En una realización, la administración es de una a cinco veces al día antes de las comidas, preferiblemente tres veces al día antes de las comidas, preferiblemente dos veces al día antes de las comidas. En una realización, la administración es antes del desayuno y el almuerzo. En una realización, la administración es antes del desayuno y la cena.
En una realización, la administración es aproximadamente 20 - 90 minutos, preferiblemente aproximadamente 30 - 60, preferiblemente aproximadamente 45 minutos después de una comida. En una realización, la administración es 20-90 minutos, preferiblemente 30-60, preferiblemente 45 minutos después de una comida.
En una realización, la administración es de una a cinco veces al día después de las comidas, preferiblemente tres veces al día después de las comidas, preferiblemente dos veces al día después de las comidas. En una realización, la administración es después del desayuno y el almuerzo. En una realización, la administración es después del desayuno y la cena.
Un sujeto que necesita prevención, tratamiento o gestión de la EII o el SII es un sujeto diagnosticado de dicha afección, predispuesto y/o en riesgo de dicha afección, o que se ha recuperado de o está en remisión de dicha afección. Un sujeto puede estar predispuesto y/o en riesgo de la afección debido a factores genéticos y/o ambientales.
La cantidad de la composición, forma de dosificación unitaria o forma de dosificación oral como se describe en el presente documento que será eficaz en la prevención, tratamiento o gestión de una afección mencionada variará con la naturaleza y gravedad de la afección y la vía por la que se va a administrar el extracto, así como factores específicos para el sujeto tales como su edad, peso, sexo e historial médico pasado.
Generalmente, la composición o forma de dosificación utilizadas en el tratamiento de una afección aguda comprenderán una cantidad mayor de la composición de bromelaína, dosificación unitaria o dosificación oral de la invención que las que se utilizarían en el tratamiento de la afección crónica. Se cree que la formulación de la forma de dosificación específica para abordar una afección aguda o crónica puede ser lograda por un experto en la técnica farmacéutica combinada con la presente divulgación de la invención.
En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero no humano.
En una realización, la administración al mamífero no humano comprende la administración de una composición o forma de dosificación unitaria descritas en el presente documento que comprenden o consisten esencialmente en una forma de dosificación oral como se describe en el presente documento.
En una realización, la forma de dosificación oral administrada al mamífero no humano comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg de bromelaína, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mg, de aproximadamente 7 a aproximadamente 20 mg, de aproximadamente 9 a aproximadamente 18 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 15 mg, aproximadamente 13 mg de bromelaína por kg de sujeto.
En una realización, la forma de dosificación oral administrada al mamífero no humano comprende aproximadamente 9 mg/kg, aproximadamente 13 mg o aproximadamente 18 mg de bromelaína por kg de sujeto.
En una realización, la forma de dosificación oral administrada al mamífero no humano comprende de 1 a 50 mg de bromelaína, preferiblemente de 5 a 25 mg, de 7 a 20 mg, de 9 a 18 mg, de 10 a 15 mg o 13 mg de bromelaína por kg de sujeto.
En una realización, la forma de dosificación oral administrada al mamífero no humano comprende 9 mg/kg, 13 mg o 18 mg de bromelaína por kg de sujeto.
En una realización, la forma de dosificación oral es una dosificación inicial determinada basándose en una conversión aceptada en la técnica a partir de una dosificación humana contemplada en el presente documento utilizando la Guía para la Industria "Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers" publicada por el Departamento de Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos Centro de Administración de Alimentos y Fármacos para Evaluación e Investigación de Fármacos (CDER), julio de 2005.
En una realización, la dosis humana en mg/kg se multiplica por 1,8 para proporcionar una dosis para perros en mg/kg.
En una realización, el mamífero no humano es una mascota doméstica. En una realización, la mascota doméstica se selecciona del grupo que consiste en perros, gatos, ratas, ratones, hámsteres, cobayas, hurones y gerbos. En una realización, la mascota doméstica es un perro. En una realización, la mascota doméstica es un gato. En esta memoria descriptiva, cuando se ha hecho referencia a memorias descriptivas de patentes, otros documentos externos u otras fuentes de información, esto tiene generalmente el propósito de proporcionar un contexto para discutir las características de la invención. A menos que se indique específicamente lo contrario, la referencia a tales documentos externos no debe interpretarse como una admisión de que tales documentos; o tales fuentes de información, en cualquier jurisdicción, son técnica anterior, o forman parte del conocimiento general común en la técnica.
La invención se ilustrará ahora de una manera no limitante por referencia a los siguientes ejemplos.
1. Ejemplos
Metodología general
Cultivo celular de macrófagos:Las células THP-1 monocíticas humanas se cultivaron en medio RPMI 1640 modificado para que contuviera L-glutamina 2 mM, HEPES 10 mM, piruvato de sodio 1 mM, glucosa 4500 mg/l, y bicarbonato de sodio 1500 mg/l y se complementaron con FBS al 10%, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, p-mercaptoetanol 5 mM. La densidad celular nunca excedió de 1x106/ml. Para inducir la diferenciación, se sembraron células THP-1 a 5-10x105 células/cm2 en placas de 24 pocillos y se trataron con 200 nm de PMA durante 48 horas. Después de 48 h, los macrófagos se lavaron y se cultivaron en PMA y medio sin antibióticos durante 24 h antes de comenzar el experimento. Los cultivos celulares se incubaron en una incubadora con CO2 al 5% humidificada a 37°C. Todos los experimentos se realizaron en células dentro de los pases número 10-30.
Cultivo de células Caco-2:La línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano Caco-2-BBe1 se cultivó y se mantuvo en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con suero bovino fetal (FBS) al 10% v/v, L-glutamina 4 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Todos los experimentos se realizaron en células Caco-2-BBe1 en 12 pases después de la descongelación. Los cultivos celulares se incubaron en una incubadora con CO2 al 5% humidificada a 37°C.
Cocultivo Caco-2:HT-29-MTX 75:25:Este modelo de cocultivo se utilizó para simular el epitelio colónico humano (Hilgendorh C, 2000). Las células Caco-2 (pase 8) y las células HT29-MTX (pase 9) se combinaron a una razón 75:25 en DMEM con FBS al 10%. Las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) se sembraron en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. El cocultivo se incubó a 37°C en una atmósfera con CO2 al 5% con medio refrescado cada 48 horas. A los 15 días después de la siembra, la monocapa de cocultivo se lavó tres veces en DMEM y se reemplazó por 5 ml de solución de prueba precalentada, y después se incubó durante 24 h.
Cepas bacterianas y condiciones de crecimiento:Las cepas ECAI de HM 95, HM605, HM 615 y HM484 se cultivaron en caldo LB. Todas las bacterias se cultivaron durante la noche a 37°C al aire, seguido de una dilución 1:100 en medio fresco antes de incubar durante 2 h más. Las bacterias se utilizaron en experimentos en la fase semilogarítmica confirmada midiendo 0,8 en Ab600nm
Medición de la resistencia eléctrica transepitelial (RET):La integridad de la monocapa de Caco-2 se determinó midiendo el valor de RET. Las uniones estrechas sirven como barreras a la difusión paracelular, donde RET es indicativa del nivel de integridad entre las células epiteliales (Mynott TL, 1999). Antes de medir la RET, los cultivos celulares se equilibraron a temperatura ambiente durante 30 minutos. La RET se midió utilizando un aparato millicell-ERS (Millipore, Eschborn, Alemania).
Cuantificación de citocinas y TNF-aLos niveles de IL-8, IL-6 y TNF-a se determinaron utilizando kits ELISA comerciales. Al final de la incubación, se recogieron los medios apical y basolateral, se centrifugaron a 400 gav durante 5 min y el sobrenadante se congeló a -80°C hasta el análisis. No se realizó más de un ciclo de repetición/descongelación con el sobrenadante congelado. Todos los ELISA se realizaron según las instrucciones del fabricante.
Modelo inflamatorio de un sistema de cocultivo de macrófagos Caco-2/THP-1:Se sembraron células Caco-2-BBe1 a 5x105 células/pocillo en placas para insertos Transwell de 24 pocillos (4,67 cm2, tamaño de poro de 0,4 gm).
El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células se diferenciaron completamente (valor RET > 1200/cm2). En una placa de 24 pocillos separada, se sembraron células de monocitos THP-1 a 1x106 células/pocillo y se diferenciaron con PMA 200 nM durante 48 h seguido de cultivo en medio normal durante 24 h antes del experimento. Después de reemplazar todos los medios por RPMI1640, todos los insertos Transwell que contenían las monocapas diferenciadas Caco-2 se cargaron en los pocillos que contenían células THP-1 diferenciadas. En experimentos para evaluar el efecto antiinflamatorio de diferentes formulaciones de bromelaína, se aplicaron 0,25 ml de muestras de ensayo al lado apical durante 24 h, al mismo tiempo se añadieron 50 ng/ml de LPS al lado basolateral en este modelo. Después de 24 h de incubación, se recogieron los sobrenadantes del cultivo del lado apical para la medición de IL-8.
Modelo inflamatorio de monocapa polarizada Caco-2 estimulada con mediadores inflamatorios LPS, TNF-a, IFN-p:Se generaron modelos Caco-2 polarizados como se ha descrito anteriormente. Cuando los cultivos celulares alcanzaron una RET inicial de >1000/cm2 las monocapas se estimularon mediante la adición de 0,6 ml que contenían 50 ng/ml de IFN-p, 10 pg/ml de LPS y 5 ng/ml de TNFa al compartimento basolateral. Inmediatamente después de la adición del cóctel de estimulación, se aplicaron 0,25 ml de GaRP ± 0-80 pg/ml de bromelaína al compartimento apical. Después de 24 h de incubación, se recogieron sobrenadantes de cultivo del lado apical para la cuantificación de IL-8.
Ensayo de protección con gentamicina - medida de la captación, supervivencia y replicación bacterianas:Las células THP1 se infectaron con una multiplicidad de infección (MOI) de 30 bacterias por macrófago. Después de una incubación de 3 h, se retiró el medio y se añadió medio de cultivo celular de nueva aportación que contenía 100 pg/ml de gentamicina para destruir las bacterias extracelulares. Para determinar el número de bacterias intracelulares, a las 1 y 3 h, se retiró el medio y se añadieron 0,5 ml de Triton X-100 al 1% en agua desionizada a cada pocillo durante 5 min para lisar las células THP-1. Esta concentración de Tritón X-100 no tuvo efecto sobre la viabilidad bacteriana durante al menos 30 minutos. Las muestras se mezclaron, diluyeron y sembraron en placas de agar LB para determinar el número de unidades formadoras de colonias (ufc) recuperadas de las monocapas lisadas. El número de bacterias intracelulares a 1 h se comparó con el control con RPMI sin tratar y estas se consideraron como bacterias adheridas. La replicación bacteriana se expresó como el porcentaje medio de bacterias recuperadas 4 h después de la infección con respecto al número de bacterias recuperadas después de 1 h de tratamiento con gentamicina, definido como 100%.
Análisis de la expresión génica mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR)
Antes de la extracción de ARN, las células se recogieron por centrifugación a 5.000 g durante 5 min, 4°C. El sedimento celular se lavó tres veces en PBS enfriado con hielo seguido de resuspensión en 500 pl de PBS enfriado con hielo. El ARN total de 2 x 106 células por muestra se extrajo utilizando un mini kit de ARN PureLink con 1,5 pg de ARN (con una razón A260/A280 entre 2,00 y 2,20) transcrito de manera inversa a ADNc utilizando un kit de RT de ADNc de alta capacidad. La expresión de los genes de interés se cuantificó utilizando la mezcla maestra PowerUp SYBR Green. En resumen, se establecieron reacciones de qPCR por triplicado utilizando 20 ng de ADNc y cebadores 500 nM en placas de reacción ópticas de 384 pocillos MicroAmp utilizando un manipulador de líquidos automatizado Biomek-4000 (Beckman Coulter, Brea, CA, EE. UU.). La amplificación se realizó en un sistema de PCR en tiempo real ViiA7 (Thermo Fisher Scientific) en las siguientes condiciones: 95°C durante 20 segundos seguido de 40 ciclos de 95°C durante 1 segundo y 60°C durante 20 segundos; y una etapa de curva de fusión: 95°C, 15 s; 60°C, 60 s. Los resultados de la qPCR se analizaron con el método 2-AACT como se describió anteriormente utilizando el soporte lógico QuantStudio V1.3 (Applied Biosystems). Los valores relativos de expresión génica se normalizaron utilizando GAPDH y 18S como los múltiples genes de referencia endógenos.
Análisis estadísticos.Los resultados se generaron a partir de 3 experimentos independientes (n = 3) con 3 réplicas técnicas a menos que se indique lo contrario. El análisis de los datos se realizó con Microsoft Excel. Los resultados se ilustran utilizando SigmaPlotv11 y las variaciones entre resultados se expresan como desviación típica (DT). Los datos se analizaron estadísticamente mediante ANOVA unidireccional y prueba de Dunnett post-hoc, a menos que se indique lo contrario, utilizando Sigmaplot v11. Un valor de p < 0,05 se aceptó como estadísticamente significativo. No se hizo ninguna diferencia gráfica para valores p < 0,05-0,001.
Ejemplo 1: Componentes y modelado de la dosificación
Los componentes de las composiciones de la invención como se describen en el presente documento se exponen a continuación en la Tabla 2 incluyendo sus fuentes. En algunas realizaciones, las composiciones se prepararon mezclando bromelaína con el resto de ingredientes en las cantidades mostradas en la Tabla 2a o 2b.
Tabla 2a - Componentes
Tabla 2b: Composiciones
Modelación de las dosis potenciales de los componentes de la invención que alcanzan el íleon y el colon después de la administración de GArP.
Modelado de justificación de dosis
Determinar el intervalo de dosis de bromelaína que se va a someter a ensayo en la prueba de concepto en estudiosin vitro, se desarrolló el siguiente modelo de distribución gastrointestinal
Suposiciones:
• Biodisponibilidad oral inferior al 1%
• El comprimido de bromelaína tiene una disolución rápida y uniforme en el fluido ileal
• La bromelaína mantiene su actividad biológica completa a medida que entra en el colon
• La mezcla de la bromelaína en el colon es uniforme y no se produce como una mezcla en gradienteTabla 2c: Modelo de distribución gastrointestinal
Enterocitos en el íleon:Para calcular la superficie del íleo los autores de la presente invención consideraron un cilindro con una longitud de 3 m y un diámetro de 2 cm (Sender, 2016). Después, considerando las valvulas conniventes, la superficie total aumenta 3 veces (Mudie DM, 2014). Cattaneo y Baratta (Borley, 2005) estimaron 1000 ± 3,4 células por villus. Puesto que hay 13 ± 1 villi/mm2, el número total de células que los cubren se estima en 1,35 x1010. El número total de células que cubren las criptas es de 3,24 ± 0,14x109 si se considera que representan 12/50 de las criptas que cubren cada villus (Sender, 2016) (Teodori, 1987) y que el número estimado de criptas y villi es aproximadamente el mismo (Sender, 2016). Por lo tanto, se calculó que el número total de células enterocíticas era de 1x1010 por Íleon de 3 m.
Enterocitos en el colon:Para calcular la superficie del colon se consideró un cilindro con una longitud de 1,5 m y un diámetro de 7,5 cm (Cattaneo L, 1989) y esto es 1/30 del intestino delgado (Weiss L, 1981) ya que carece de villi. Por lo tanto, el número total de células de enterocitos por colon de 1,5 m es de 3,3x108.
Concentración de bromelaína en el íleonSi se administraran a una persona de 60 kg por vía oral 1,5 g de bromelaína dirigida al íleon/colon con un vaso de agua, la bromelaína se distribuiría en 94 ± 24 ml (Weiss L, 1981) o 16 mg/ml. A esta concentración, suponiendo una disolución completa del comprimido de bromelaína en el íleon, la exposición máxima por bacteria sería de 170 fg/bacteria.
Concentración de bromelaína en el colon:Si se administraran a una persona de 60 kg 1,5 g de bromelaína dirigida al íleon/colon, la bromelaína se distribuiría en 400 ml de fluido colónico o 40 gg/ml. A esta concentración, suponiendo una mezcla completa de la bromelaína en el fluido colónico, la exposición máxima por bacteria sería de 38 fg/bacteria.
Concentración de bromelaína por enterocito en el íleonSi se administraran a una persona de 60 kg por vía oral 1,5 g de bromelaína dirigida al íleon/colon con un vaso de agua, la bromelaína se distribuiría en 94 ± 24 ml (Weiss L, 1981) o 16 mg/ml. A esta concentración, suponiendo una disolución completa del comprimido de bromelaína en el íleon, la exposición máxima por enterocito sería de 150 pg/enterocito.
Concentración de bromelaína por enterocito colónicoSi se administraran a una persona de 60 kg 1,5 g de bromelaína dirigida al íleon/colon, la bromelaína se distribuiría en 400 ml de fluido colónico o 40 gg/ml. A esta concentración, suponiendo una mezcla completa de la bromelaína en el fluido colónico, la exposición máxima por bacteria sería de 4,5 ng/enterocito.
Usando el modelo descrito anteriormente, si una persona de 80 kg tomara una dosis diaria total de 1440 mg de bromelaína con recubrimiento entérico y 288 mg de mentol dirigidos al intestino delgado y una dosis dirigida al colon de 1200 mg de ácido butírico (sal sódica), 1800 mg de I-treonina y 0,025 mg de vitamina d 3, se lograrían las siguientes concentraciones por enterocito y bacterias contenidas dentro del microbioma intestinal (Tabla 3).
Tabla 3: Resumen de las concentraciones ileales y colónicas alcanzables de cada componente de formulación de GaRP
La dosis terapéutica efectiva observada se determinó en los experimentosin vitrodescritos en el presente documento.
LaTabla 4resume la dosis terapéutica eficaz observada para cada componente de formulación de GaRP.
Tabla 4: Resumen de la dosis terapéutica eficaz observada de cada componente de formulación de GaRP
En conclusión, el autor de la presente invención cree que excepto la dosis modelada de mentol que necesitaría ser alcanzada en el íleon, la formulación de GaRP descrita en el presente documento alcanzará con éxito dosis terapéuticas tanto en el íleon como en el colon.
Ejemplo 2: Evaluación del efecto del pretratamiento con bromelaína sobre la invasión y proliferación intracelular de E. coli Adherente Invasiva (ECAI) en macrófagos THP-1
En estos estudios, las bacterias se pretrataron con bromelaína.
Cultivo de macrófagos
Las células monocíticas humanas THP-1 (ATCC TIB-202) se cultivaron en medio RPMI 1640 modificado para que contuviera L-glutamina 2 mM, HEPES 10 mM, piruvato de sodio 1 mM, glucosa 4500 mg/L, y bicarbonato de sodio 1500 mg/L y se complementaron con FBS al 10%, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina y pmercaptoetanol 5 mM. La densidad celular nunca excedió de 1x106/ml. Para inducir la diferenciación, las células THp1 se sembraron a 1x105 células/cm2 en placas de 24 pocillos y se trataron con 200 nm de PMA durante 48 horas. Después de 48 h, los macrófagos se lavaron y se cultivaron en PMA y medio sin antibióticos durante 24 h antes de comenzar el experimento.
Cepas bacterianas y condiciones de crecimiento
ECAI HM 605 (de paciente con EC), ECAI HM 615 (de paciente con EC) y HM484
Se cultivaron E. coli (aisladas de un paciente con SII) durante la noche en agar nutriente y se suspendieron en solución salina estéril y se dejaron a temperatura ambiente durante 24 horas, ya que se ha encontrado que esto maximiza la expresión fimbrial (HM Martin, 2004). El día del experimento, las bacterias se centrifugaron a 300 gav durante 15 min a temperatura ambiente y se resuspendieron a 1,4x107 bacterias/ml en el medio de tratamiento o control. Los tratamientos se resumen en la Tabla 5.
Tabla 5 - Pretratamiento de bacterias con bromelaína
Las bacterias se incubaron a 37°C durante 2 h con movimiento oscilatorio constante. Al final de la incubación, las bacterias se lavaron 3X con RPMI y después se resuspendieron en medio THP-1 hasta una concentración final de 1,4x107 bacterias/ml.
Se midieron la captación bacteriana, la supervivencia y el ensayo de replicación mediante el ensayo de protección con gentamicina
Las células THP1 se infectaron con una multiplicidad de infección (MOI) de 30 bacterias por macrófago. Después de una incubación de 3 h, se retiró el medio y se añadió medio de cultivo celular de nueva aportación que contenía 100 pg/ml de gentamicina para destruir las bacterias extracelulares. Para determinar el número de bacterias intracelulares, a las 1 y 3 h, se retiró el medio y se añadieron 0,5 ml de T riton X-100 al 1 % en agua desionizada a cada pocillo durante 5 min para lisar las células THP-1. Esta concentración de Tritón X-100 no tuvo efecto sobre la viabilidad bacteriana durante al menos 30 minutos. Las muestras se mezclaron, diluyeron y sembraron en placas de agar LB para determinar el número de unidades formadoras de colonias (ufc) recuperadas de las monocapas lisadas. El número de bacterias intracelulares a 1 h se comparó con el control con RPMI sin tratar y estas se consideraron como las bacterias adheridas. La replicación bacteriana se expresó como el porcentaje medio de bacterias recuperadas 4 h después de la infección con respecto al número de bacterias recuperadas después de 1 h de tratamiento con gentamicina, definido como 100%.
Resultados/Discusión:
En el caso de las bacterias HM605 y HM484, las concentraciones de bromelaína de > 20 fg/bacteria fueron capaces de inhibir la invasión bacteriana de los macrófagos THP-1 (Tabla 6). El tratamiento previo de las bacterias con bromelaína fue menos eficaz en la inhibición de la proliferación intracelular.
Tabla 6: El pretratamiento de ECAI con bromelaína en GaRP inhibe su invasión de macrófagos THP-1
Al insertar los datos de la Tabla 5 en el modelo de distribución gastrointestinal expuesto en el presente documento basado en enterocitos/cm2 y bacterias/enterocitos, los autores de la presente invención creen que una persona requeriría 867 mg/80 kg de bromelaína dirigida al íleon (¿dirigida al intestino delgado?) para lograr la dosis eficaz de 20 fg/bacteria. En una realización, una composición como se describe en el presente documento proporciona una dosis diaria total de 1440 mg de bromelaína dirigida al íleon.
Ejemplo 3: Pretratamiento con bromelaína de ECAI y efecto sobre la invasión y proliferación intracelular de ECAI en enterocitos Caco-2
Cultivo celular
Se sembraron enterocitos Caco-2-BBe1 a 2x105 células/cm2 en placas de 24 pocillos y se cultivaron hasta confluencia. Las células se cultivaron en medio sin antibióticos durante 24 h antes de comenzar el experimento. El día del experimento,E. coliHM605 y HM484 se centrifugaron a 300 gav durante 15 min a temperatura ambiente y se resuspendieron a 1,4x107 bacterias/ml en medio Caco-2 ± 20-640 pg/ml de bromelaína. Las bacterias se incubaron a 37°C durante 2 h con agitación constante. Al final del periodo de incubación, las bacterias se lavaron 3 veces con DMEM y después se resuspendieron en medio Caco-2 hasta una concentración final de 1,4x107 bacterias/ml. El ensayo de protección con gentamicina se realizó entonces como se ha descrito previamente. Para simular el entorno intestinal, se realizaron una serie de experimentos en donde las bacterias se resuspendieron en líquido intestinal simulado en estado de ayuno (Rieder F, 2012) que contenía 20-640 pg/ml de bromelaína.
Resultados/Discusión:
En el caso de las bacterias HM605 y HM484, las concentraciones de bromelaína de > 20 fg/bacteria fueron capaces de inhibir la invasión bacteriana de los enterocitos y la proliferación intracelular (Tabla 7).
El pretratamiento de las bacterias en fluido intestinal simulado aumentó (20 fg aumentó a 28 fg) la concentración de bromelaína requerida para lograr el mismo nivel de inhibición de la invasión bacteriana y la proliferación intracelular. Por consiguiente, cuando se utiliza el modelo de exposición gastrointestinal descrito en el presente documento, una dosificación apropiada para el paciente será de 800 mg/60 kg/día para lograr 20 fg de bromelaína por bacteria.
Tabla 7: El pretratamiento de ECAI con bromelaína en GaRPv1 inhibe la invasión de enterocitos Caco-2
Insertar los datos de la Tabla 7 en el modelo de distribución gastrointestinal basado en enterocitos/cm2 y bacterias/enterocitos como se describe en el presente documento, el autor de la presente invención cree que una dosificación apropiada para el paciente será 1067 mg/80 kg/día de bromelaína dirigida al intestino delgado para lograr la dosis eficaz de 28 fg/bacteria.
Ejemplo 4 - La bromelaína que contiene GaRP es eficaz en la inhibición de la liberación de TNFa de macrófagos THP-1 estimulados con LPS
Cultivo de macrófagos
Las células monocíticas humanas THP-1 (ATCC TIB-202) se cultivaron en medio RPMI 1640 modificado para que contuviera L-glutamina 2 mM, HEPES 10 mM, piruvato de sodio 1 mM, glucosa 4500 mg/L, y bicarbonato de sodio 1500 mg/L y se complementó con FBS al 10%, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina y p-mercaptoetanol 5 mM. La densidad celular nunca excedió de 1x106/ml. Para inducir la diferenciación, las células THP1 se sembraron a 5x105 células/cm2 en placas de 96 pocillos y se trataron con 200 nm de PMA durante 48 horas. Después de 48 h, los macrófagos se lavaron y se cultivaron en medio sin antibiótico PMA durante 24 h antes de comenzar el experimento. Los transwell se muestran en la Figura 1. Los tratamientos se muestran en la Tabla 8.
Tabla 8-Tratamientos con bromelaína que evalúan el efecto de GaRpv1 que contiene bromelaína sobre la liberación de citocinas proinflamatorias de macrófagos THP-1
Los compuestos de ensayo y los controles se aplicaron a las células en donde los macrófagos se estimularon con 50 ng/ml de LPS utilizando un cultivo no estimulado como control. Después de 8 h, se retiró el medio y se cuantificó el TNFa utilizando un ELISA.
Resultados/Discusión:
Como se observa en la Figura 2, la bromelaína fue capaz de inhibir la liberación de TNFa de macrófagos THP-1 que habían sido estimulados con LPS. Cuando se comparó con el control con RPMI, a concentraciones de bromelaína superiores a 13 pg/macrófago hubo una inhibición significativa en la liberación de TNFa (p<0,001, prueba de suma de rangos de Mann Whitney).
Conclusión:
Sin desear estar limitado por la teoría, el autor de la presente invención cree que su modelado utilizando el modelo de distribución gastrointestinal muestra que, si una persona tomaba 800 mg de bromelaína con recubrimiento entérico, la exposición sería de 75 pg/célula por enterocito ileal y 4500 pg/célula en el colon.
Ejemplo 5 - La GaRP que contiene bromelaína inhibe la liberación de IL-8 de monocapas de Caco-2 polarizadas coincubadas con macrófagos THP-1 estimulados con LPS
Usando el modelo convencional de la industria más comúnmente utilizado para evaluar productos alimenticios y productos farmacéuticos, se investigaron los efectos de la bromelaína sobre la liberación de IL-8. El compartimento apical representa el lumen (fluidos & mucosa de TGI)
Cultivo celular en cocultivo
Se sembraron células Caco-2 a 1 x106 células/pocillo en placas para insertos Transwell (1,12 cm2, tamaño de poro de 0,4 gm). El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células se diferenciaron completamente (valor RET > 1200 X cm2), y las células se utilizaron en número de pases de 12 pases después de descongelar. En una placa de 12 pocillos separada, se sembraron células de monocitos THP-1 a 8,5 x 105 células/pocillo y se diferenciaron con PMA 200 nM durante 48 h seguido de cultivo en medio normal durante 24 h antes del experimento. Después de reemplazar todos los medios con RPMI1640, el inserto Transwell en donde se cargaron células Caco-2 en los pocillos contenía células THP-1. Cuando los cultivos celulares alcanzaron una RET inicial de >1000 cm2, las monocapas se estimularon mediante la adición de 0,6 ml que contenía 50 ng/ml de IFN-p, 10 gg/ml de LPS y 5 ng/ml de TNFa al compartimento basolateral. Inmediatamente después de la adición del cóctel de estimulación, se aplicaron 0,25 ml de GaRP ± 0-80 gg/ml de bromelaína (0-20 pg/enterocito) al compartimento apical. Después de la incubación de 24 h, se recogieron los sobrenadantes de cultivo del lado apical y los lados basolaterales para la medición de IL-8.
Resultados/Discusión:
Como se observa en la Figura 3, la bromelaína es capaz de inhibir la liberación de IL-8 de células Caco-2 cocultivadas con macrófagos THP-1 estimulados con LPS. GaRPv1 sin bromelaína fue capaz de inhibir la liberación de IL-8 en 18 ± 6.
Ejemplo 6 - Evaluación del efecto de GaRPvl que contiene bromelaína sobre la restauración de la integridad intestinal, medida por resistencia eléctrica transepitelial (RET).
Estudios preclínicos han mostrado que la vitamina D3 y el butirato de sodio son eficaces en la regulación de uniones de hueco estrecho (Kong J, 2008) (Ma X, 2012), un hallazgo que desempeñaba un papel en su selección como parte de la formulación de GaRP. Para determinar si GaRPv1 podría restaurar la integridad intestinal, se infectó un modelo de transwell de células M/caco-2 con HM605 ECAI ± GaRP y se monitorizó la RET durante 2 días después de la infección.
Modelo de células M/Caco-2
Se cultivaron células Caco2-cl1 y se mantuvieron como se ha descrito anteriormente. La línea celular de linfoma de Burkitt humano Raji B se mantuvo en medio RPMI-1640 complementado con FBS al 10%, L-glutamina 8 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Se sembraron células B Raji a 3x105/ml y cada tres días se dejaron sedimentar las suspensiones celulares. Dos tercios de los medios se reemplazaron por medios de cultivo de nueva aportación. Cada nueve días, las células se dividieron 1:3. Todas las células se mantuvieron a 37°C con CO2 al 5% en una atmósfera humidificada.
Se generaron células M cultivando en placas 5x105 células caco-2 sobre la cara apical de insertos de cultivo celular Transwell de 12 mm que habían sido precubiertos con matriz de membrana basal de Matrigel y medio DMEM en el compartimento basolateral. Las células se mantuvieron durante 14-18 días, hasta que la RET fue > 600 Q por Transwell (equivalente a 300 Q cm2 por monocapa de tejido). El día del cocultivo, se recogieron células B Raji, se resuspendieron en DMEM completo y se añadieron 5x105 células al compartimento Transwell basal. De manera importante, después del cocultivo, se cambiaron tanto los medios apicales como los basales cada día, teniendo cuidado de no alterar las células B Raji. Los cocultivos se mantuvieron durante 4-6 días, hasta que se generaron células M. También se generaron monocultivos paralelos de Caco2-cl1 (sin células B Raji en el compartimento basal) en insertos Transwell y se mantuvieron según las células M. Se midió la RET a lo largo de todo el tiempo para monitorizar la generación exitosa de monocapas.
Infección del modelo de células M con ECAI HM605
Se ha informado previamente que ECAI HM 615 causa la rotura de las uniones celulares estrechas en monocapas de Caco-2 y T84 y la muerte celular inducida (Bailey JR, 2011). Para recrear este efecto, cuando se habían generado modelos de células M (día 20-24 dependiendo de cuando había una caída concomitante en la RET), el medio se cambió para que estuviera libre de antibióticos y se añadieron bacterias al pocillo apical del inserto Transwell a una MOI de 30 durante un período de 4 h. Después de 4 h, las células se lavaron y se incubaron con 100 gg/ml de gentamicina para destruir cualquier bacteria residual. En ese punto, se colocó GaRP menos bromelaína sobre las células y se midió la RET de todas las monocapas a intervalos de 2 horas hasta 12 horas y se enumeraron las bacterias en el pocillo basal cada 1 hora hasta 4 horas.
Resultados/Discusión:
Restauración de la capa celular gastrointestinal después de la infección con ECAI
Cuando se suspendieron ECAI HM605 en medio normal (control sin tratamiento) o en GaRP (menos bromelaína) y se aplicaron al modelo de células M, la formulación de GaRP proporcionó un efecto protector sobre la integridad de la capa celular (Figura 4).
Ejemplo 7 - Comparación de la actividad antiinflamatoria de diferentes composiciones de reprogramación gastrointestinal sin bromelaína.
La línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano C2BBe1 se cultivó y se mantuvo en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con suero bovino fetal (FBS) al 10% v/v, L-glutamina 4 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Todos los experimentos se realizaron en células C2BBe1 en 12 pases después de la descongelación. Se sembraron células Caco-2 a 5 x105 células/pocillo en placas para insertos Transwell (0,33 cm2, tamaño de poro de 0,4 gm). El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células se diferenciaron completamente (media inicial RET 1121 ± 196 cm2; media ± DT), y las células se utilizaron en un número de pases hasta 12 pases después de la descongelación.
En un experimento para evaluar el efecto antiinflamatorio de la bromelaína o diversas formulaciones de GaRP, se aplicaron 0,25 ml de muestras de ensayo al lado apical durante 24 h, al mismo tiempo se añadieron 0,6 ml de un cóctel que contenía 50 ng/ml de IFN+ 10 ug/ml de LPS 14 ng/ml de TNF al lado basolateral en este modelo. Después de 24 h de incubación, se recogieron los sobrenadantes del cultivo del lado apical y se cuantificó la IL-8 mediante ELISA.
Tabla 9esboza las diferentes permutaciones y combinaciones de componentes de formulación que se probaron para determinar su capacidad para inhibir la liberación de IL-8 de monocapas de Caco-2 polarizadas estimuladas con LPS, TNF-o, IFN-p como se describió anteriormente en el presente documento.
Tabla 9
Resultados/Discusión:
Los datos presentados en la Tabla 10 confirman que GARP sin bromelaína puede reducir significativamente la liberación de IL-8 en comparación con los medios de crecimiento convencionales (DMEM), p<0,001. Cuando se comparan todas las formulaciones de GaRP con GaRPv1 original no hubo diferencias estadísticamente significativas, pero cuando se clasifica la actividad antiinflamatoria de más alta a más baja, se podrían hacer observaciones específicas generales como se muestra en la Tabla 11.
Tabla 10-Capacidad inhibidora de IL-8 de diversas formulaciones de GaRP y componentes de formulación individuales
Cuando se clasifican todas las formulaciones de GaRP de la actividad antiinflamatoria más alta a más baja, el autor de la presente invención cree que se podrían realizar varias observaciones específicas (Tabla 11). Es decir, el butirato de sodio, la L-treonina y el colecalciferol están todos correlacionados con mejores efectos antiinflamatorios y, en general, se observan mayores efectos antiinflamatorios utilizando formulaciones que contenían L-glutamina y L-triptófano.
Los ejemplos proporcionados en el presente documento confirman que la bromelaína es el componente antiinflamatorio clave de un suplemento dietético de GaRP como se describe en el presente documento donde, como único agente, la bromelaína inhibió la secreción de IL-8 en 70 ± 7 (media ± ETM). Sin desear estar limitado por la teoría, el autor de la presente invención cree que los componentes adicionales de una formulación de GaRP como se describe en el presente documento (butirato de sodio, aminoácidos y Vitamina D3) actúan como una fuente de energía celular y precursores sintéticos de mucina que potencian la actividad antiinflamatoria de la bromelaína. Estos experimentos confirman estudios publicados previamente de que cada componente de formulación en sí mismo demuestra un nivel bajo de actividad antiinflamatoria. En una realización, una formulación de GaRP como se describe en el presente documento comprende o consiste esencialmente en 80 pg/ml de bromelaína, 400 pg/ml de butirato de sodio, 400 Mg/ml de l-treonina y 0,48 pg/ml de vitamina D3.
Ejemplo 8 - Comparación de la actividad antiinflamatoria de diferentes composiciones de reprogramación gastrointestinal con 80 ug/ml (equivalente a 40 pg/célula) de bromelaína.
Para determinar si cualquiera de las formulaciones de GaRP ejercía un efecto aditivo o sinérgico sobre la actividad antiinflamatoria de la bromelaína, cada formulación se volvió a analizar después de la adición de 80 Mg/ml de bromelaína (equivalente a 20 pg/célula).
Metodología
La línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano C2BBe1 se cultivó y se mantuvo en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con suero bovino fetal (FBS) al 10% v/v, L-glutamina 4 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Todos los experimentos se realizaron en células C2BBe1 hasta en 12 pases después de la descongelación. Se sembraron células Caco-2 a 5 x105 células/pocillo en placas para insertos Transwell (0,33 cm2, 0,4 pm tamaño de poro). El medio de cultivo celular se cambió cada 3 días hasta que las células se diferenciaron completamente (media inicial RET 1121 ± 196 cm2; media ± DT), y las células se utilizaron en un número de pases de hasta 12 pases después de la descongelación.
En un experimento para evaluar el efecto antiinflamatorio de la bromelaína o diversas formulaciones de GaRP, se aplicaron 0,25 ml de muestras de ensayo al lado apical durante 24 h, al mismo tiempo, se añadieron 0,6 ml de un cóctel que contenía50 ng/ml de IFN 10 ug/ml de LPS 14 ng/ml de TNFal lado basolateral en este modelo. Después de 24 h de incubación, se recogieron los sobrenadantes del cultivo del lado apical y se cuantificó la IL-8 mediante ELISA.
Resultados/Discusión:
LaTabla 12muestra los resultados de la adición de 80 ug/ml de bromelaína (equivalente a 40 pg/célula) a las formulaciones probadas en el Ejemplo 7. La bromelaína añadió un aumento del 30-70% en la capacidad para suprimir la secreción de IL-8.
Tabla 12-Capacidad inhibidora de IL-8 de diversas formulaciones de GaRP más 80 ug/ml de bromelaína y componentes de formulación individuales
Cuando se clasificaron las formulaciones que contenían bromelaína, se observó el mejor efecto antiinflamatorio como se muestra enTabla 13.
Tabla 13
Ejemplo 9 - Cuantificación del efecto de GaRP y sus componentes de formulación individuales sobre la expresión de receptores de Tipo toll de mucina y genes proinflamatorios.
Se estableció un cocultivo 75:25 de caco-2/HT-29 como se describió anteriormente en el presente documento y se investigó el efecto de una exposición de 24 h a bromelaína, treonina, butirato de sodio, vitamina D3 y las dos formulaciones de GaRP diferentes en la expresión de los siguientes genes de MUC utilizando qPCR. Al final del tratamiento de 24 h, el sobrenadante en los matraces de 25 cm2 se recogió y se tripsinizó la monocapa de cocultivo como se describió anteriormente en el presente documento.
Cuando se interpretan los datos de expresión génica, los genes de MUC y sus mucinas asociadas se dividieron en:
• Mucinas secretadas
• Mucinas asociadas a la membrana
• Mucinas no formadoras de gel
Mucinas secretadas
MUC2, MUC5AC, MUC5B, MUC6 y MUC19 actúan como secreciones viscosas extracelulares secretadas. Remitirse a la Figura 5 para un resumen del efecto de diferentes concentraciones de bromelaína disuelta en los componentes de la formulación de GaRP dirigida al colon de butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D3.
La Tabla 14 resume la asociación entre cada mucina y el SII o la EII.
Tabla 14-Resumen de la asociación entre cada mucina enumerada y el SII o la EII
Se ha encontrado que la expresión del gen y la proteína MUC2 está significativamente regulada por disminución en la EII y el SII y se considera la mucina fundamental para el mantenimiento de la barrera mucosa. Su contenido en glicanos, unidos a mucina MUC2, sirve como nutriente para bacterias, pero también como sitio de unión e induce la selección de especies microbianas específicas, que son esenciales para mantener la integridad, homeostasis y función intestinal. Como se observa en la Figura 6, tanto 20 como 40 pg/ml de bromelaína en GaRP fueron capaces de aumentar la expresión génica de 5 a 25 veces.
MUC6 también está regulado por disminución en la EII y el SII. A concentraciones de bromelaína > 10 pg/ml, los componentes de la formulación de GaRP parecían funcionar aditivamente si no sinérgicamente (GaRPv1) con la bromelaína para aumentar significativamente la expresión de MUC6 hasta 30 veces.
La expresión de MUC19 no se ha caracterizado en el SII o la EII. A >10 pg/ml de bromelaína, los componentes de la formulación de GaRPv1 parecían ejercer un efecto aditivo sobre la actividad de la bromelaína.
Mucinas asociadas a la membrana
Los MUC1-4, MUC12, MUC15-17 y MUC20 se consideran mucinas asociadas a la membrana dentro del glicocalix. Remitirse a la Figura 6 para un resumen del efecto de diferentes concentraciones de bromelaína disuelta en los componentes de la formulación de GaRP dirigida al colon de butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D3.
LaTabla 15Resume la asociación entre cada mucina y el SII o la EII.
Tabla 15 - Resumen de la asociación entre cada mucina enumerada y el SII o la EII
Con la excepción de la expresión del gen MUC1, a concentraciones de bromelaína > 10 pg/ml la formulación de GARP/bromelaína parecía aumentar significativamente la expresión de MUC3, MUC 4 y MUC15. Considerando que estas mucinas se reducen en la EII y en algunos casos en el SII, estos datos sugieren que el producto de GaRP puede ser capaz de estimular la producción de las mucinas, lo que puede dar como resultado el restablecimiento de la homeostasis del intestino. En general, la formulación de GaRPv1 dirigida al colon funcionó mejor que la de GaRPv2, actualmente están en curso estudios de proteínas y trabajo de cuantificación de mucina para confirmar esta observación.
La expresión de MUC13, MUC16 y MUC17 aumenta en la EII. A concentraciones de bromelaína > 20 pg/ml la formulación de GARPv2/bromelaína fue capaz de reducir significativamente la expresión génica.
Mucinas no formadoras de gel
MUC7 y MUC8 son mucinas no formadoras de gel que no se han caracterizado bien en la EII o el SII. Con referencia a la Figura 7, concentraciones de bromelaína > 10 pg/ml fueron capaces de aumentar significativamente la expresión génica.
Sin desear estar limitado por la teoría, el autor de la presente invención cree que los datos de expresión del gen de MUC proporcionados en el presente documento muestran que las concentraciones de bromelaína y componentes de formulación dirigidos al colon utilizados en el suplemento dietético de GaRP serán suficientes para estimular la expresión del gen de mucina que se espera, a su vez, que promueva la cicatrización de la mucosa.
Ejemplo 10 - Capacidades de cicatrización de la mucosa del producto de GaRP: Demostración de la relación sinérgica entre L-treonina y Vitamina D3.
Líneas celulares y establecim iento del cocultivo Caco-2:HT-29-MTX 75:25 (simulación de colon)
La línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano Caco-2-BBe1 (obtenida del profesor Barry Campbell, Universidad de Liverpool) se cultivó y se mantuvo en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) complementado con suero bovino fetal (FBS) al 10% v/v, L-glutamina 4 mM, 100 U/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Todos los experimentos se realizaron en células Caco-2-BBe1 hasta en 12 pases después de la descongelación. Los cultivos celulares se incubaron en una incubadora con CO2 al 5% humidificada a 37°C. Las células se mantuvieron en una incubadora a 37°C en una atmósfera con CO2 al 5% reemplazando el medio cada 48 h. A una confluencia de 80%, las células se separaron con 10 ml de tripsina-EDTA al 1% (Sigma-Aldrich) durante 5 min, seguido de la adición de 40 ml de DMEM con FBS al 10% para terminar la tripsinización. La suspensión celular se nodulizó mediante centrifugación (200 g, 5 min) y se resuspendió en DMEM de nueva aportación con FBS al 10%, y después se subcultivó en matraces nuevos a una dilución de 1:4.
Este modelo de cocultivo se utilizó para simular el epitelio colónico humano. Las células Caco-2 (pase 8) y las células HT29-MTX (pase 9) se combinaron a una razón 75:25 en DMEM con FBS al 10%. Las células combinadas (6,4 x 104 células/ml) se sembraron en 25 cm2 en un total de 5 ml por matraz. El cocultivo se incubó a 37°C en una atmósfera con CO2 al 5% refrescando el medio cada 48 horas. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se lavó tres veces en DMEM y se reemplazó por 5 ml de solución de prueba precalentada, y después se incubó durante 24 h.
Tratamiento del cocultivo Caco-2:HT-29-MTX 75:25
Las soluciones de prueba de colecalciferol (VD3) y L-treonina (L-Thr) (Sigma-Aldrich) en medio de cultivo se prepararon un día antes del tratamiento. A los 15 días de la siembra, la monocapa de cocultivo se lavó tres veces a intervalos horarios con medio de cultivo, que después se reemplazó por 5 ml de solución de prueba precalentada, y después se incubó durante 24 h.
Análisis de la expresión génica mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR)
Al final del tratamiento de 24 h, el sobrenadante en los matraces de 25 cm2 se recogió y la monocapa de cocultivo se tripsinizó como se ha descrito anteriormente. Las células se recogieron por centrifugación a 5.000 g durante 5 min, 4°C. Después de lavarlas tres veces con PBS enfriado con hielo, las células se resuspendieron en 500 |ul de PBS enfriado con hielo. El ARN total de 2 x 106 células por muestra se extrajo utilizando el mini kit PureLink RNA (Invitrogen). Para el análisis de PCR en tiempo real, se sometieron a transcripción inversa 1,5 |jg de ARN (con una razón A260/A280 entre 2,00 y 2,20) a ADNc utilizando el kit de RT de ADNc de Alta Capacidad (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE. UU.).
La expresión de los genes de MUC2 y MUC7 humanos en el cocultivo Caco-2:HT-29-MTX 75:25 se cuantificó utilizando la mezcla Maestra PowerUp SYBR Green (Applied Biosystems). Los cebadores para detectar la expresión de MUC2 (directo, 5'-CGAAACCACGGCCACAACGT-3' (SEQ ID NO: 3); inverso, 5'-GACCACGGCCCCGTTAAGCA-3' (SEQ ID NO: 4)) y MUC7 (directo, 5'-GCAACTACCCTAGACCCATCA-3' (SEQ ID NO: 15); inverso, 5'-TAGGTGTGGTAATTGGGGCAG-3' (SEQ ID NO: 16) se adquirieron de Sigma-Aldrich. La reacción de qPCR de 10 |ul se estableció con 20 ng de ADNc y cebadores 500 nM por triplicado en placas de reacción ópticas de 384 pocillos MicroAmp (Applied Biosystems) utilizando un manipulador de líquidos automatizado Biomek-4000 (Beckman Coulter, Brea, CA, EE. UU.). La amplificación se realizó en un sistema de PCR en tiempo real ViiA7 (Thermo Fisher Scientific) en las siguientes condiciones: 95°C durante 20 segundos seguido de 40 ciclos de 95°C durante 1 segundo y 60°C durante 20 segundos; y una etapa de curva de fusión: 95°C, 15 s; 60°C, 60 s. Los resultados de la qPCR se analizaron con el método 2-AACT como se describió anteriormente utilizando el soporte lógico QuantStudio V1.3 (Applied Biosystems). Los valores relativos de expresión génica se normalizaron utilizando GAPDH y 18S como los múltiples genes de referencia endógenos.
Resultados
Cuando se interpretan los datos de expresión génica, los genes de MUC y sus mucinas asociadas se dividieron en tres clases:
• Mucinas secretadas
• Mucinas asociadas a la membrana
• Mucinas no formadoras de gel
Mucinas secretadas
MUC2, MUC5AC, MUC5B, MUC6 y MUC19 actúan como secreciones viscosas extracelulares secretadas. La Tabla 16 resume la asociación entre cada mucina y el SII o la EII.
Tabla 16 - Resumen de la asociación entre cada mucina y el SII o la EII
Mucinas asociadas a la membrana
Los MUC1 -4, MUC12, MUC15-17 y MUC20 se consideran mucinas asociadas a la membrana dentro del glicocalix. La Tabla 17 resume la asociación entre cada mucina y el SII o EII.
Tabla 17 - Resumen de la asociación entre cada mucina y el SII o EII
Mucinas no formadoras de gel
MUC7 y MUC8 son mucinas no formadoras de gel que no se han caracterizado bien en la EII o el SII. Véase la Figura 8 que sigue, que demostró el efecto sinérgico resultante de la combinación de L-treonina y Vitamina D3 sobre los genes de MUC descritos anteriormente.
La L-treonina (400 gg/ml), como único agente, no ejerció un efecto estadísticamente significativo sobre la expresión de ninguno de los genes de MUC probados. El efecto de i) vitamina D3 y la combinación de ii) 0,48 gg/ml de vitamina D3 y 400 gg/ml de L-treonina, sobre la expresión de genes de MUC se resume en la Tabla 18.
Los efectos sinérgicos se resaltan en negrita.
La evidencia de que la L-treonina y la vitamina D3 actuaban inesperadamente en sinergia aumentando la expresión de MUC15, MUC2, MUC6, MUC 19, MUC7 y MUC8 se exploró adicionalmente titulando la L-treonina y la vitamina D3. La expresión de MUC2 y MUC7 se utilizó como genes de mucina ilustrativos.
Como se observa en las Figuras 9A y 9B, individualmente, ni la L-treonina ni la vitamina D3 ejercieron un efecto importante sobre la expresión de MUC2 (secretada primaria, que forma gel en el tracto gastrointestinal) o MUC7 (una mucina que no forma gel).
Tanto en el SII como en la EII, se ha demostrado que la expresión del gen, proteína y mucina de MUC2 disminuye, lo que da como resultado una integridad intestinal alterada y microbioma disbiótico, factores que conducen a inflamación sistémica.
Cuando se realiza una titulación de la vitamina D3 de 0-0,48 pg/ml combinada con 0-800 pg/ml de L-treonina, se hizo evidente que a > 0,053 pg/ml de vitamina D3 la concentración de L-treonina fue el factor primario que afectaba al aumento en la expresión génica de MUC 2 y MUC 7 (Figura 10A y 10B)
Ejemplo 11 - La bromelaína y GaRP pueden reducir la enfermedad endoscópica en un modelo de colitis por TNBS que evalúa GaRP en un modelo de ratón con TNBS
La colitis por solución de ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico (TNBS) se indujo en ratones C56/BL/6 de 5 semanas de edad mediante instilación rectal de TNBS (5% p/v) en etanol al 50%. Los animales se aleatorizaron en grupos de tratamiento y se trataron como se indica en la Figura 11.
Se han completado ocho grupos de tratamiento (n=4 para controles sanos y 8-9 animales/grupo de TNBS). En la Tabla 19 se proporciona una descripción detallada de los grupos de tratamiento.
Tabla 19-Descripción detallada de los grupos de tratamiento
Se utilizó el siguiente sistema endoscópico de puntuación: i) Puntuación 5-7 = enfermedad leve, ii) Puntuación 8-11 = enfermedad moderada y iii) Puntuación 12-15 = enfermedad grave. La gravedad de la enfermedad de la población en el momento inicial fue:
• Leve: 34% (21/62 animales)
• Moderada: 62% (38/62 animales)
• Grave: 4% (3/62 animales)
8.1: Seguridad
De los 72 animales originales que se aleatorizaron en el estudio, diez animales se excluyeron del análisis ya que murieron por complicaciones de la anestesia o por pérdida >20% de peso corporal antes del comienzo del tratamiento. Las muertes en estudio se resumen en la Tabla 20.
Tabla 20 - Resumen de muertes en estudio
Los animales que fueron sacrificados debido a la pérdida de peso tenían buen aspecto y estaban funcionando normalmente, pero debido a las directrices éticas los animales fueron sacrificados. Se hace referencia a la Figura 12 que compara el cambio en el peso corporal desde el día 0 del tratamiento hasta el punto final experimental (día 7)
Los únicos grupos que mostraron cualquier diferencia significativa en el peso corporal del punto final experimental fueron:
• TNBS-75 mg/kg de bromelaína/15 mg/kg de mentol en vehículo oral: Cuando se compara con 75 mg/kg de bromelaína en agua o vehículo oral, los 75 mg/kg de bromelaína/15 mg/kg de mentol en vehículo oral redujeron el peso final en 9% (p=0,024).
• TNBS-75 mg/kg de bromelaína/15 mg/kg de mentol en vehículo oral y GaRP en vehículo rectal: Cuando se compara con 75 mg/kg de bromelaína en agua, vehículo oral o rectal; los 75 mg/kg de bromelaína/15 mg/kg de mentol/GaRP rectal redujeron el peso final en 5-12% (p=0,001).
Al comparar estos grupos durante el período de tratamiento, los animales mantuvieron su peso original como se puede observar en la Figura 13.
Estudios publicados encontraron que la administración 10 mg/kg de L-mentol a ratones aumenta la temperatura central, desacoplando la expresión de la proteína 1 en el tejido adiposo pardo, la actividad de termogénesis sin escalofríos y la sensibilidad a la insulina, lo que conduce a una ganancia de peso corporal atenuada. En el producto de GaRP, los ratones reciben 15 mg/kg diariamente, lo que puede explicar la falta observada de aumento de peso. No se observaron toxicidades.
Eficacia
Véase la Figura 14 que compara el cambio en la puntuación endoscópica desde el Día 0 (antes del tratamiento) hasta el Día 7 (punto final experimental). Se observaron diferencias estadísticamente significativas en los siguientes grupos de tratamiento:
•Componentes dirigidos al colon del producto GaRP (butirato de sodio/L-treonina/vitamina D3 instilados por vía rectal):La colitis disminuyó significativamente como se cuantificó mediante puntuación endoscópica. Cuando se compara con un control de vehículo rectal, GaRP mejora la puntuación endoscópica en 135% (p=0,018, n=8)
•Bromelaína/aceite de menta administrado por vía oral combinados con componentes dirigidos al colon delproducto GaRP (butirato de sodio/L-treonina/vitamina D3 instilados por vía rectal): Cuando se compara con el control de vehículo oral y rectal, esta formulación mejora la puntuación endoscópica en 148% (p=0,012, n=9).
• Bromelaína administrada por vía oral en agua: Cuando se comparó con un control de vehículo oral, la bromelaína mejoró la puntuación endoscópica en 65% (p=0,038, n=8).
Al comparar los parámetros individuales tales como consistencia de las heces, extensión de la zona implicada, granularidad de la superficie mucosa, cambios en el patrón vascular y engrosamiento de la pared del colon no hubo diferencias significativas entre los grupos de tratamiento.
Remitirse a la Figura 15 que compara el efecto de los diferentes tratamientos y vehículos de control sobre la longitud del colon, el peso del colon y la razón peso/longitud del colon. No se observaron diferencias significativas entre los grupos de tratamiento.
Conclusiones:
Los componentes dirigidos al colon del producto GaRP (butirato de sodio/L-treonina/vitamina D3 instilados por vía rectal) sin bromelaína mejoraron significativamente la colitis experimental. La adición de bromelaína/mentol administrado por vía oral ejerció un ligero efecto aditivo en el modelo de colitis que no fue significativamente mejor que el de GaRP solo. Se observó que la bromelaína en vehículo oral no funcionaba tan bien como la bromelaína en agua lo que el autor de la presente invención cree que sugiere que algunos componentes del vehículo oral pueden interferir en la liberación de la bromelaína tanto en el intestino delgado como en el grueso. Se cree que la formulación específica para proporcionar la liberación de bromelaína y/o cualquiera de los componentes de las composiciones y formulaciones descritas en el presente documento está dentro del conocimiento práctico de los expertos en la técnica de formulaciones farmacéuticas para su administración al sistema gastrointestinal, también como se describe en otra parte en el presente documento.
Ejemplo 12 - La bromelaína y GaRP pueden reducir la enfermedad endoscópica en un modelo de co litis por TNBS sin interacciones negativas con el fármaco con prednisolona.
Se sabe que la prednisolona tiene 55 interacciones farmacológicas graves, 390 moderadas y 39 leves. Entre los efectos negativos conocidos están las interacciones con varios ingredientes comunes tales como agentes tamponadores que pueden perjudicar la absorción de prednisolona. Los medicamentos a base de plantas son remedios populares y se están utilizando por un número creciente de pacientes que típicamente no comunican a sus médicos su uso concomitante. Por lo tanto, los facultativos y médicos clínicos reconocen que existen interacciones fármaco-planta conocidas o potenciales y deben ser escrutadas. Este concepto puede extenderse razonablemente a agentes nutricionales que no están constituidos a base de plantas. De particular relevancia para el síndrome del intestino irritable y la enfermedad inflamatoria intestinal es el uso general de corticosteroides para controlar la inflamación. Según Miller [MillerMiller LG "Herbal medicinals: selected clinical considerations focusing on known or potential drug-herb interactions". Arch Intern Med 158 (1998): 2200-11], la preocupación teórica subyacente a esta interacción fármaco-planta es que las plantas inmunoestimuladoras compensarán o minimizarán los efectos inmunosupresores de los corticosteroides. A la luz de estas preocupaciones, los autores de la presente invención examinaron el efecto de la prednisolona en presencia y ausencia de una formulación como se describe en el presente documento.
Se indujo colitis en los ratones administrando TNBS de la misma manera que en el ejemplo 11. Después de tres días, las lesiones se puntuaron mediante endoscopia y los animales se trataron con i). 150 mg/kg de bromelaína en agua, ii) 150 mg de bromelaína y treonina/butirato de sodio/vitamina D3, iii) 2 mg/kg de prednisolona oral o iv). 150 mg de bromelaína y treonina/butirato de sodio/vitamina D3 administrado por vía rectal más 2 mg/kg de prednisolona oral. Las puntuaciones endoscópicas se midieron el día 11 y se calculó el cambio en la puntuación endoscópica entre el día 3 y el día 11 (Fig. 16). La Tabla 21 muestra el cambio en la puntuación endoscópica para los grupos anteriores y la significación estadística con relación al placebo.
Tabla 20 - Puntuaciones endoscópicas
Los grupos son i) placebo, ii) 150 mg de bromelaína en agua por vía oral, i¡¡) 150 mg de bromelaína y 15 mg/kg de mentol por vía oral más GaRP por vía rectal, iv) 150 mg de bromelaína y 15 mg/kg de mentol por vía oral más GaRP y 2 mg/kg de prednisolona por vía rectal, v) 2 mg/kg de prednisolona por vía rectal, y vi) GaRP por vía rectal. GaRP es 185 mg/kg de butirato de sodio, 280 mg/kg de treonina y 3,84 microgramos por kg de Vitamina D3. Las dosis equivalentes humanas son 960 mg/persona de 80 kg de bromelaína); 100 mg/persona de 80 kg de mentol); 1800 mg/persona de 80 kg de treonina); 1200 mg/persona de 80 kg de butirato de sodio) y 25 microgramos por persona de 80 kg Vitamina D3). La treonina, el butirato de sodio y la Vitamina D3 se formularon y administraron como una sonda rectal en la parte superior del colon para simular una formulación que se libera en el colon; es decir, para lograr la administración al intestino inferior. La formulación humana de una composición como se describe en el presente documento no podría utilizarse ya que el pH del colon de ratón es menor que el de un ser humano y el tiempo de tránsito es más corto, lo que significa que una formulación humana dirigida no liberaría el contenido en un estudio animal ya que la formulación viajaría rápidamente a través del tracto GI de los ratones y no se lograría el pH requerido para erosionar el recubrimiento protector requerido para la liberación.
A partir de los resultados presentados aquí, los autores de la presente invención creen que es evidente que la formulación que comprende butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D no interfiere en la eficacia de la prednisolona, y que 1) bromelaína sola, 2) treonina/butirato/vitamina D3 sola, y 3) la combinación de bromelaína/mentol por vía oral más treonina/butirato/vitamina D3 por vía rectal son tan eficaces como 2 mg/kg de prednisolona en este experimento.
Ejemplo 13 - Formulación de una forma de dosificación
Parte A comprim ido/m inicomprim ido/cápsula/componentes:
El objetivo fue desarrollar una formulación de minicomprimido con recubrimiento entérico estable que contenía bromelaína y mentol a una razón de 6,8:1 (±30%, es decir, intervalo de 4,75:1 a 8,85:1). La formulación desarrollada se prepara mediante un procedimiento de compresión directa
Fórmula de fabricación finalizada
Procedimiento de fabricación:
1.Premezcla de mentol:El mentol se fundió calentando a 70°C. Se añadió FujiSil al mentol fundido y se agitó calentando. La agitación continuó hasta que se formó un polvo de flujo libre.
2. Se debe mezclar una Pre-Mezcla de Aerosil 200, Fujicalina y Mentol en un mezclador octogonal de 10 L durante 15 minutos a 15 rpm.
3. La bromelaína, Avicel SMCC 90, Klucel EXF y la crospovidona se tamizaron a través de una malla Núm. 40 de ASTM anclado a un clasificador mecánico y se mezclaron durante 15 min junto con los materiales de la etapa 2 en un mezclador octogonal de 30 L a 15 rpm.
4. El estearato de magnesio se tamizó a través de una malla Núm. 60 de ASTM.
5.Lubricación:Los materiales de la Etapa 4 se añadieron a los materiales de la Etapa 3 y se mezclaron durante 5 min en un mezclador octogonal de 30 L a 15 rpm.
6.Compresión:La mezcla lubricada se comprimió en minicomprimidos utilizando punzones de múltiples puntas redondos biconvexos de 2,50 x 2,50 mm.
7.Recubrimiento de sellado:Al control de Eudraguard, se le añadió la cantidad requerida de agua purificada. Se añadieron Methocel E5 Premium LV y talco agitando. La agitación continuó durante toda la operación de recubrimiento. La suspensión se pulverizó sobre el lecho de comprimidos con núcleo en el revestidor automático de comprimidos.
8.Recubrimiento entérico:Se añadió glicerina al control Eudraguard con agitación. Se añadió la cantidad requerida de agua purificada a la mezcla de control de Eudraguard y glicerina con agitación. Se combinaron Alginato de Sodio y Talco en una bolsa de polietileno y se añadieron a la mezcla anterior lentamente sin formación de grumos. La cantidad requerida de colorante o colorantes de laca se homogeneizó con una pequeña cantidad de agua y se añadió a la suspensión con agitación. La agitación continuó durante 3 horas antes de la operación de recubrimiento.
Parámetros de compresión:
Se seleccionó la estrategia de compresión directa basándose en el perfil de estabilidad de la bromelaína. La técnica de adsorción se empleó para el mentol debido a su tendencia a la sublimación a baja temperatura, aunque se exploraron métodos alternativos que incluían disolución de mentol en migloílo, inclusión en ceras o la incorporación de micelas de mentol en vitamina E.
Las minicomprimidos se sometieron a un ensayo de disolución según el método convencional de la USP con un aparato de Tipo II USP29NF24<711>. Los minicomprimidos Se agitaron en ácido clorhídrico 0,1 N durante 1 hora antes de ajustar a pH 6,8 durante 5 horas. Se tomaron muestras a tiempo 0, 30 minutos, 60 minutos antes del ajuste del pH, después del ajuste 30 minutos, 60 minutos y cada hora después. Se analizó la bromelaína y se representó el título frente al tiempo como se muestra en la Figura 17.
Parte B comprimido/minicomprimido/cápsula/componente
El producto farmacológico se diseñó como minicomprimidos para la administración de fármacos en la parte inferior de las regiones del intestino delgado y del colon. El producto se diseñó para ser física y químicamente estable y para poseer potencia durante la duración de su vida útil. Se desarrollaron una formulación y un procedimiento para asegurar que el producto era compatible y cumplía todos los criterios de calidad. La razón de treonina a butirato de sodio es 1,5:1 ± 30%, es decir, (1,05:1 a 1,95:1).
Fórmula de fabricación
Procedimiento de fabricación:
1. Tamizado: Se hicieron pasar butirato de sodio, L-treonina, celulosa microcristalina, fosfato dicálcico anhidro (A Tab), crospovidona (Kollidon CL) a través de una malla Núm. 24 de ASTM.
2. Solución aglutinante: Añadir hidroxitolueno butilado, vitamina D3, povidona K90F a alcohol isopropílico y continuar agitando hasta que se forme una solución transparente.
3. Los materiales anteriores se combinan mediante granulación en húmedo y el producto se seca en un secador de lecho fluidificado, después se muele y se tamiza con estearato de magnesio.
4. Compresión: La mezcla se comprimió en minicomprimidos utilizando punzones de múltiples puntas redondos biconvexos de 2,50 x 2,50 mm.
5. Recubrimiento de sellado: Se aplicó recubrimiento de sellado de hidroxipropilmetilcelulosa en alcohol isopropílico/cloruro de metileno.
6. Dispersión biótica de Eudraguard: Se pulverizaron dispersión biótica de Eudraguard, agua y PlasACRYL T20 sobre los minicomprimidos sellados.
7. Dispersión de control de Eudraguard: glicerina, control de Eudraguard, alginato de sodio y talco se mezclaron para formar una dispersión que se aplicó como recubrimiento sobre los minicomprimidos.
Parámetros de compresión:
Las minicomprimidos se sometieron a un ensayo de disolución según el método convencional de la USP con un aparato de Tipo II USP29NF24<711>. Los minicomprimidos se agitaron en ácido clorhídrico 0,1 N durante 1 hora antes de ajustar a pH 6,2 durante 1 hora y finalmente a pH 7,4 durante 4 horas. Se tomaron muestras a tiempo 0, y 60 minutos antes del ajuste del pH, después 60 minutos antes del segundo ajuste del pH y finalmente 30 minutos, 60 minutos y cada hora después. Se analizó el butirato y se representó el título frente al tiempo como se muestra en la figura 18
Formulación acabada:
Las minicomprimido de la Parte A y de la Parte B son de tamaño y características similares y se pueden mezclar en cualquier proporción útil dependiendo de la etapa de la afección que se vaya a tratar. En el ensayo clínico actual se mezclan a una razón de 1,94:2,28 p/p, lo que proporciona una razón de componentes de mentol 70: bromelaína 480: treonina 900: butirato de sodio 600: colecalciferol 0,0125. Una razón alternativa de 2,91 partes de A p/p con respecto a 2,28 partes de B p/p proporciona una razón de componentes de mentol 105: bromelaína 720: treonina 900: butirato de sodio 600: colecalciferol 0,0125 y una razón.
La dosis proporcionada al paciente en el ensayo clínico actual es de 4,22 gramos dos veces al día, proporcionando una dosis diaria total de 140 mg de mentol, 960 mg de bromelaína, 1800 mg de treonina, 1200 mg de butirato de sodio y 25 microgramos de colecalciferol; o 2,21 gramos dos veces al día, proporcionando una dosis diaria total de 70 mg de mentol, 480 mg de bromelaína, 900 mg de treonina, 600 mg de butirato de sodio y 12,5 microgramos de colecalciferol. Las tolerancias de llenado para la dosificación son ± 15%.
Ejemplo 14 - Puntuación histológica de secciones después del tratamiento en los ejemplos 11 y 12 Evaluación de GaRP en un modelo de ratón TNBS
Los Ejemplos 11 y 12 evaluaron aspectos del rendimiento de GaRP en la colitis inducida por TNBS en un modelo de ratón. Se informó del efecto de diversos grupos de tratamiento sobre las puntuaciones endoscópicas en el día 11 con respecto al día 3 y sobre la razón de peso, longitud y peso a longitud del colon extirpado de animales sacrificados. En este ejemplo, el colon se fijó, tiñó y seccionó antes de evaluarse por microscopía de una manera ciega. Se examinaron los colones no sólo para determinar la enfermedad activa sino también la evidencia de recuperación de la enfermedad y se puntuaron según los siguientes criterios. La puntuación se realizó por triplicado de manera ciega al marcador con una puntuación máxima de 3 en cada una de las 6 categorías.
Puntuación histológica de colitis
Actividad de colitis (0-3 basada en la gravedad)
Hipervascularización (apertura de vasos sanguíneos)
Presencia de células mononucleares (la arquitectura también desaparece)
Hiperplasia epitelial (cripta alargada y villi)
Lesión epitelial (pérdida de continuidad epitelial)
Presencia de neutrófilos
Agregados linfoides (puntuados 0-2) 0,1-2, >2
Los datos se recogieron y analizaron mediante la prueba t de Student para determinar la significación frente al control de placebo. Las estadísticas resumen se presentan en la tabla siguiente, y los datos medios para cada grupo menos la media para controles sanos (x=5,1, a=1,7) se representan en la figura 19.
Los datos muestran que el tratamiento con prednisolona muestra una tendencia a mejorar la curación, mientras que las formulaciones de GaRP (treonina/butirato/vitamina D) y completas a ambas concentraciones de bromelaína muestran una mejora estadísticamente significativa en las puntuaciones histológicas independientemente de la presencia o ausencia de prednisolona.
Sin desear estar limitado por la teoría, el autor de la presente invención cree que los datos proporcionados en la presente memoria descriptiva muestran que el uso de componentes de GaRP dirigidos al colon y bromelaína/mentol dirigida al intestino delgado puede proporcionar un beneficio terapéutico inesperado y sorprendentemente robusto para el tratamiento de colitis.
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Claims (18)

REIVINDICACIONES
1. Una composición que comprende los siguientes componentes:
(a) bromelaína,
(b) uno o más ácidos grasos de cadena corta (AGCC) o ésteres de los mismos,
(c) uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en L-treonina, L-triptófano, L-arginina, L-glutamina y L-metionina y combinaciones de los mismos, y
(d) Vitamina D o alfacalcidiol.
2. La composición de la reivindicación 1 que comprende (a), (b), L-treonina y (d).
3. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los uno o más AGCC o ésteres del mismo son butirato de sodio, butirato cálcico, propionato de sodio o acetato de sodio, preferiblemente butirato de sodio.
4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que consiste esencialmente en bromelaína, butirato de sodio, L-treonina y Vitamina D o alfacalcidiol.
5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 2500 mg, o de aproximadamente 250 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1750 mg, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1600 mg, de aproximadamente 1300 a aproximadamente 1550 mg, de aproximadamente 1400 a aproximadamente 1500 mg, de aproximadamente 1420 a aproximadamente 1460 mg, o aproximadamente 1440 mg de bromelaína.
6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 45 a 1800 mg de AGCC, o de aproximadamente 75 a aproximadamente 1650 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 750 a aproximadamente 1500, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 1400, de aproximadamente 1100 a aproximadamente 1300 mg, o aproximadamente 1200 mg de AGCC.
7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 67,5 a aproximadamente 2700 mg, o de aproximadamente 112,5 a aproximadamente 2250 mg, de aproximadamente 250 a aproximadamente 2000 mg, de aproximadamente 500 a aproximadamente 1900 mg, de aproximadamente 900 a aproximadamente 1800 mg, o aproximadamente 1800 mg de L-treonina, L-triptófano, L-glutamina, L-arginina o L-metionina o cualquier combinación de los mismos.
8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición es una forma de dosificación unitaria que comprende de aproximadamente 4 a aproximadamente 150 ug, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 140 ug, de aproximadamente 13 a aproximadamente 130 ug, de aproximadamente 25 a aproximadamente 120 ug, de aproximadamente 35 a aproximadamente 110 ug, de aproximadamente 50 a aproximadamente 105 ug, aproximadamente 100 ug, aproximadamente 50 ug, aproximadamente 25 ug o aproximadamente 12,5 ug de vitamina D.
9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde la vitamina D es vitamina D2 o vitamina D3 o una combinación de las mismas.
10. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que es una forma de dosificación oral.
11. Una forma de dosificación unitaria para su uso en un método para el tratamiento o profilaxis de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII) o el síndrome del intestino irritable (SII) que comprende de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 g de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
12. La forma de dosificación unitaria para el uso de la reivindicación 11, en donde la forma de dosificación unitaria es una forma de dosificación oral.
13. La forma de dosificación oral para el uso de la reivindicación 12 que comprende 50-2500 mg de bromelaína, 45 1800 mg de butirato de sodio, 67,5-2700 mg de L-treonina, 4-150 gg de Vitamina D y, opcionalmente, 3-150 mg de mentol, en donde la Vitamina D es Vitamina D2 o Vitamina D3 o una combinación de las mismas.
14. La forma de dosificación oral para el uso de la reivindicación 12 o la reivindicación 13, que comprende dos tipos diferentes de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas, en donde cada tipo diferente se formula para liberar su contenido en una parte diferente del tracto gastrointestinal.
15. La forma de dosificación oral para el uso de la reivindicación 14, en donde los dos tipos diferentes de píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas son píldoras de Tipo A y Tipo B, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A y Tipo B comprenden cada uno al menos un componente, preferiblemente al menos dos componentes, de la composición definida en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
16. La forma de dosificación oral para el uso de la reivindicación 15, en donde las píldoras, comprimidos, minicomprimidos, cápsulas, gránulos, partículas o micropartículas de Tipo A comprenden bromelaína.
17. La forma de dosificación oral para el uso de la reivindicación 15, en donde la píldora, comprimido, minicomprimido, cápsula, gránulo, partícula o micropartícula de Tipo B comprenden L-treonina, butirato de sodio y Vitamina D.
18. Una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para su uso en un método para prevenir, tratar o gestionar la EII o el SII que comprende su administración a un sujeto que lo necesite.34746
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