ES2963339T3

ES2963339T3 - Compuestos de pirazolopiridinona

Info

Publication number: ES2963339T3
Application number: ES18881021T
Authority: ES
Inventors: Haibing Guo; Zhao-Kui Wan; Luoheng Qin; Qian Liu; Wing Shun Cheung
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2017-11-24
Filing date: 2018-11-23
Publication date: 2024-03-26
Anticipated expiration: 2038-11-23
Also published as: KR20200090828A; CN111655689A; US20220340598A1; US20210147446A1; JP7329510B2; EP3717483B1; CA3084528A1; MX2020005342A; JP2021504332A; MA51221A; EP3717483A4; BR112020010004A2; RU2020120796A; AU2018370904A1; AU2018370904B2; US11384099B2; EP3717483A1; CN111655689B; WO2019101183A1

Abstract

Compuestos de pirazolopiridinona, las composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y el uso de dichos compuestos como inhibidores del FGFR (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos) y su uso en el tratamiento de enfermedades, por ejemplo cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de pirazolopiridinona

Campo de la invención

La invención se refiere a nuevos compuestos de pirazolopiridinona, a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, a procesos para la preparación de dichos compuestos y al uso de dichos compuestos como inhibidores de FGFR (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos) y a su uso en el tratamiento de enfermedades, por ejemplo, cáncer. Antecedentes de la invención

Se ha demostrado que las vías de señalización del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) desempeñan papeles críticos en los procesos que van desde la embriogénesis y la cicatrización de heridas y también han mostrado enlaces fuertes a varias características distintivas del cáncer. Las alteraciones genéticas en los miembros de la familia de FGFR están asociadas con el crecimiento tumoral, la metástasis, la angiogénesis y la supervivencia. Una variedad de inhibidores de FGFR están en ensayos clínicos y han mostrado respuesta clínica en pacientes con aberraciones de FGFR. Sin embargo, se ha informado que las mutaciones que afectan a los aminoácidos en FGFR, por ejemplo, FGFR1, 2 o 3, pueden causar resistencia a inhibidores de FGFR o disminuir la sensibilidad a los inhibidores de FGFR. El desarrollo de mutaciones secundarias del dominio de la quinasa de FGFR tras el tratamiento con inhibidores de FGFR son un mecanismo importante de resistencia adquirida a la inhibición de FGFR. Las mutaciones puntuales de FGFR equivalentes existen también de novo en cánceres. Se han informado mutaciones guardián como uno de los mecanismos principales que conducen a la resistencia a los inhibidores de tirosina quinasa. Las mutaciones guardián incluyen FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M y FGFR4 V550L. Se han informado mutaciones resistentes a FGFR en ensayos clínicos y sistemas celulares in vitro. Por lo tanto, se necesitan nuevos inhibidores de FGFR (segunda generación) para una actividad más duradera en cánceres que albergan alteraciones en la vía de señalización de FGFR para superar la resistencia clínica adquirida a la terapia de inhibidor de FGFR de primera generación. Los inhibidores de FGFR de segunda generación se necesitan para superar la actividad reducida observada para inhibidores de FGFR de primera generación contra FGFR que albergan las mutaciones guardián anteriores y, por lo tanto, mantienen la actividad inhibidora de FGFR.

Se encontró que los compuestos de la invención muestran actividad contra FGFR mutados, en particular contra FGFR que albergan mutaciones guardián o contra FGFR1 mutado o FGFR2 mutado o FGFR3 mutado, en particular contra FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, particularmente contra FGFR3 V555L y FGFR3 V555M. En el documento WO02/18383 se describen compuestos heterocíclicos que actúan como antagonistas de tirosina quinasas receptoras. En los documentos WO2002/022598, WO2003/087095, WO2004/018419, WO2004/043389, WO2005/046589 se describen cada uno una serie de derivados de quinolinona.

Descripción de la invención

La invención proporciona compuestos de fórmula (I):

incluyendo cualquier forma tautomérica y estereoquímicamente isomérica de la misma, en donde

A1, A2, A3y A4cada uno representa independientemente CH, CR<a1>, CR<a2>o N; siempre que uno o más de A1, A2, A3y A4representen un átomo de carbono sustituido, al menos uno de dichos átomos de carbono sustituidos representa CR<a1>, y siempre que máximo tres de A1, A2, A3y A4puedan representar CR<a1>o CR<a2>;

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos; cada R<a1>es independientemente halo, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, ciano, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, -S(=O)-alquilo C1-6, -S(=O)2-alquilo C1-6o cicloalquilo C3-6;

cada R<a2>es independientemente alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halo, alcoxi C1-6, carboxilo, alquiloxicarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, ciano, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, o un heterociclilo saturado monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

Res hidrógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquiloxicarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, cicloalquilo C3-6, fenilo, un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, o alquilo C1-6sustituido con cicloalquilo C3-6o con fenilo o con un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S;

B es un carbociclilo de 3 a 12 miembros o un heterociclilo de 3 a 12 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen opcionalmente con 1 a 5 sustituyentes de R;

cada R es independientemente alquilo C1-6, ciano, halo, alcoxi C1-6, haloalcoxi C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo C1-6, haloalquilo C1-6, oxo, -SO2-NH2, -SO2-NH(alquilo C1-4), -SO2-N (alquilo C1-4)2, -NH-C(=O)-alquenilo C2-6, -C(=O)-alquilo C1-6, -C(=O)-alquenilo C2-6, alquilo C1-6-O-C (=O)-, cicloalquilo C3-6, fenilo o un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S;

o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos o los solvatos de los mismos.

En un aspecto adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo para su uso en la profilaxis o el tratamiento de un estado o afección de enfermedad mediada por una quinasa de FGFR.

En un aspecto adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo para su uso en la profilaxis o el tratamiento del cáncer. En particular, el cáncer es un cáncer mediado por una quinasa de FGFR.

Descripción detallada de la invención

Salvo que el contexto indique lo contrario, las referencias a la Fórmula (I) en todas las secciones de este documento (que incluyen los usos, métodos y otros aspectos de la invención) incluyen referencias a toda las demás subfórmulas (p. ej., (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a)), subgrupos, preferencias, realizaciones y ejemplos según se define en la presente memoria.

El sufijo (donde x e y son números enteros), según se usa en la presente memoria, se refiere al número de átomos de carbono en un grupo dado. Por lo tanto, un grupo alquilo C1-6contiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo cicloalquilo C3-6contiene de 3 a 6 átomos de carbono, un grupo alcoxi C1-4contiene de 1 a 4 átomos de carbono, y así sucesivamente. El término 'halo' o 'halógeno', según se usa en la presente memoria, se refiere a un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. El término 'alquilo C1-4' o 'alquilo C1-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un grupo hidrocarburo saturado lineal o ramificado que contiene de 1 a 4 o de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, npentilo, isopentilo, neopentilo o hexilo y similares.

El término 'alquenilo C2-4' o 'alquenilo C2-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un grupo hidrocarburo lineal o ramificado que contiene de 2 a 4 o de 2 a 6 átomos de carbono y que contiene un doble enlace carbono-carbono.

El término 'alquinilo C2-4' o 'alquinilo C2-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un grupo hidrocarburo lineal o ramificado que tiene de 2 a 4 o de 2 a 6 átomos de carbono y que contiene un triple enlace carbono-carbono.

El término 'alcoxi C1-4' o 'alcoxi C1-6' según se usa en la presente memoria como grupo o parte de un grupo se refiere a un grupo -O-alquilo C1-4o un grupo -O-alquilo C1-6en donde alquilo C1-4y alquilo C1-6son según se define en la presente memoria. Los ejemplos de tales grupos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y similares.

El término 'cicloalquilo C3-6', según se usa en la presente memoria, se refiere a un anillo de hidrocarburo monocíclico saturado de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo.

El término 'hidroxialquilo C1-4' o 'hidroxialquilo C1-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un alquilo C1-4o a un grupo alquilo C1-6según se define en la presente memoria en donde uno o más de un átomo de hidrógeno se reemplaza con un grupo hidroxilo. Los términos 'hidroxialquilo C1-4' o 'hidroxialquilo C1-6' por lo tanto incluye monohidroxialquilo C1-4, monohidroxialquilo C1-6y también polihidroxialquilo C1-4y polihidroxialquilo C1-6. Puede haber uno, dos, tres o más átomos de hidrógeno reemplazados con un grupo hidroxilo, por lo que el hidroxialquilo C1-4o hidroxialquilo C1-6puede tener uno, dos, tres o más grupos hidroxilo. Los ejemplos de tales grupos incluyen hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo y similares.

El término 'haloalquilo C1-4' o 'haloalquilo C1-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un alquilo C1-4o grupo alquilo C1-6según se define en la presente memoria en donde uno o más de un átomo de hidrógeno se reemplaza con un halógeno. El término 'haloalquilo C1-4' o 'haloalquilo C1-6', por lo tanto, incluye monohaloalquilo C1-4, monohaloalquilo C1-6y también polihaloalquilo C1-4y polihaloalquilo C1-6. Puede haber uno, dos, tres o más átomos de hidrógeno reemplazados con un halógeno, por lo que el haloalquilo C1-4o haloalquilo C1-6puede tener uno, dos, tres o más halógenos. Los ejemplos de tales grupos incluyen fluoroetilo, fluorometilo, trifluorometilo o trifluoroetilo y similares.

El término 'haloalcoxi C1-4' o 'haloalcoxi C1-6' según se usa en la presente memoria como un grupo o parte de un grupo se refiere a un grupo -O-alquilo C1-4o un grupo -O-alquilo C1-6según se define en la presente memoria en donde uno o más de un átomo de hidrógeno se reemplaza con un halógeno. Los términos 'haloalcoxi C1-4' o 'haloalcoxi C1-6' por lo tanto incluye monohaloalcoxi C1-4, monohaloalcoxi C1-6y también polihaloalcoxi C1-4y polihaloalcoxi C1-6. Puede haber uno, dos, tres o más átomos de hidrógeno reemplazados con un halógeno, por lo que el haloalcoxi C1-4o haloalcoxi C1-6puede tener uno, dos, tres o más halógenos. Los ejemplos de tales grupos incluyen fluoroetiloxi, difluorometoxi o trifluorometoxi y similares.

El término cianoalquilo C1-4o cianoalquilo C1-6según se usa en la presente memoria se refiere a un alquilo C1-4o grupo alquilo C1-6según se define en la presente memoria que está sustituido con uno o dos grupos ciano, en particular con un grupo ciano.

El término “heterociclilo” según se usa en la presente memoria, salvo que el contexto indique lo contrario, incluye sistemas de anillos aromáticos y no aromáticos. Por lo tanto, por ejemplo, el término “heterociclilo” incluye dentro de su alcance sistemas de anillos heterociclilo aromáticos, no aromáticos, insaturados, parcialmente saturados y completamente saturados. En general, salvo que el contexto indique lo contrario, tales sistemas de anillos pueden ser monocíclicos o bicíclicos o con puente y pueden contener, por ejemplo, 3 a 12 miembros del anillo, o 4 a 10 miembros del anillo, o más generalmente de 5 a 10 miembros del anillo. Referencia a 4 a 7 miembros del anillo incluyen 4, 5, 6 o 7 átomos en el anillo, referencia a 3 a 6 miembros del anillo incluyen 3,4, 5 o 6 átomos en el anillo y referencia a 4 a 6 miembros del anillo incluyen 4, 5 o 6 átomos en el anillo. Los ejemplos de sistemas de anillos heterociclilo monocíclicos son sistemas de anillos que contienen 3, 4, 5, 6, 7 u 8 miembros del anillo, más usualmente 3 a 7, y preferiblemente 4, 5, 6 o 7 miembros del anillo, más preferiblemente 5 o 6 miembros del anillo. Los ejemplos de sistemas de anillos heterociclilo bicíclicos son aquellos que contienen 8, 9, 10, 11 o 12 miembros del anillo, y más usualmente 9 o 10 miembros del anillo. Los sistemas de anillo de heterociclilo contienen al menos un heteroátomo seleccionado típicamente de nitrógeno, oxígeno o azufre, en particular contienen hasta 5, hasta 4, hasta 3, hasta 2, o un único heteroátomo. Cuando se hace referencia en la presente memoria a un sistema de anillo heterociclilo, el anillo heterociclilo puede, salvo que el contexto indique lo contrario, estar opcionalmente sustituido (es decir, no sustituido o sustituido) por uno o más sustituyentes como se describe en la presente memoria.

Los sistemas de anillo de heterociclilo pueden ser sistemas de anillo heteroarilo que tienen de 5 a 12 miembros de anillo, más habitualmente de 5 a 10 miembros de anillo. El término “heteroarilo” se usa en la presente memoria para indicar un sistema de anillo de heterociclilo que tiene carácter aromático. El término “heteroarilo” abarca sistemas de anillos policíclicos (p. ej., bicíclicos) en donde uno o más anillos son no aromáticos, siempre que al menos un anillo sea aromático. En tales sistemas policíclicos, el sistema de anillos puede unirse al resto del compuesto por un anillo aromático o por un anillo no aromático.

Los ejemplos de grupos heteroarilo son grupos monocíclicos y bicíclicos que contienen de cinco a doce miembros del anillo, y más habitualmente de cinco a diez miembros del anillo. El grupo heteroarilo puede ser, por ejemplo, un anillo monocíclico de cinco miembros o seis miembros o una estructura bicíclica formada a partir de anillos fusionados de cinco y seis miembros o dos anillos fusionados de seis miembros, o dos anillos fusionados de cinco miembros. El sistema de anillo heteroarilo puede contener hasta aproximadamente cinco heteroátomos típicamente seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Típicamente, el anillo heteroarilo contendrá hasta 4 heteroátomos, más típicamente hasta 3 heteroátomos, más usualmente hasta 2, por ejemplo, un único heteroátomo. En una realización, el anillo heteroarilo contiene al menos un átomo de nitrógeno del anillo. Los átomos de nitrógeno en los anillos heteroarilo pueden ser básicos, como en el caso de un imidazol o piridina, o esencialmente no básicos como en el caso de un nitrógeno indol o pirrol. En general, el número de átomos de nitrógeno básicos presentes en el grupo heteroarilo, incluidos cualquier grupo amino del anillo, será inferior a cinco.

Los ejemplos de grupos heteroarilo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa, grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, oxatriazol, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, triazolilo y tetrazolilo. En particular, los ejemplos de grupos heteroarilo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa, grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo y triazolilo

Los ejemplos de grupos heteroarilo de seis miembros incluyen, aunque no de forma limitativa, piridilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo y triazinilo.

Un grupo heteroarilo bicíclico puede ser, por ejemplo, un grupo seleccionado de:

a) un anillo de benceno fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; b) un anillo de piridina fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; c) un anillo de pirimidina fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; d) un anillo de pirrol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; e) un anillo de pirazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; f) un anillo de imidazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; g) un anillo de oxazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; h) un anillo de isoxazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; i) un anillo de tiazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo;

j) un anillo de isotiazol fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1 o 2 heteroátomos en el anillo; k) un anillo de tiofeno fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; l) un anillo de furano fusionado a un anillo de 5 o 6 miembros que contiene 0, 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; m) un anillo ciclohexilo fusionado a un anillo aromático de 5 o 6 miembros que contiene 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo; y n) un anillo de ciclopentilo fusionado a un anillo aromático de 5 o 6 miembros que contiene 1, 2 o 3 heteroátomos en el anillo. Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen un anillo de cinco miembros fusionado a otro anillo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa, imidazotiazolilo (p. ej. imidazo[2,1-b]tiazol) e imidazoimidazolilo (p. ej., imidazo[1,2-a]imidazol).

Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen un anillo de seis miembros fusionado a un anillo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa a grupos benzofuranilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, isobenzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, isobenzofuranilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, purinilo, indazolilo, pirazolopirimidinilo (p. ej., pirazolo[1,5-a]pirimidina), triazolopirimidinilo (p. ej., [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina), benzodioxolilo, imidazopirazinilo, imidazopiridazinilo, imidazopiridinilo y pirazolopiridinilo (p. ej., grupos pirazolo[1,5-a]piridina). Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen un anillo de seis miembros fusionado a un anillo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa a grupos benzofuranilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, indazolilo, pirazolopirimidinilo (p. ej., pirazolo[1,5-a]pirimidina), triazolopirimidinilo (p. ej., [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina), imidazopirazinilo, imidazopiridazinilo, imidazopiridinilo y pirazolopiridinilo (p. ej., grupos pirazolo[1,5-a]piridina).

Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen un anillo de seis miembros fusionado a un anillo de cinco miembros incluyen, aunque no de forma limitativa a grupos benzofuranilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benztiazolilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo.

Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen dos anillos de seis miembros fusionados incluyen, aunque no de forma limitativa grupos quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinnolinilo, cromanilo, isocromanilo, tiocromanilo, benzopiranilo, benzodioxanilo, benzoxazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo y pteridinilo.

Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen dos anillos de seis miembros fusionados incluyen, aunque no de forma limitativa a grupos quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzopiranilo, benzodioxanilo, benzoxazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo y pteridinilo. Los ejemplos particulares de grupos heteroarilo bicíclicos que contienen dos anillos fusionados de seis miembros incluyen, aunque no de forma limitativa a grupos quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo y pteridinilo.

Los ejemplos de grupos heteroarilo policíclicos que contienen un anillo aromático y un anillo no aromático incluyen, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzofuranilo, 2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxinilo, benzo[1,3]dioxoll, 4,5,6,7-tetrahidrobenzofuranilo, tetrahidrotriazolpirazinilo (p. ej., 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazinilo), e indolinilo.

Un anillo de heteroarilo que contiene nitrógeno debe contener al menos un átomo de nitrógeno del anillo. Cada anillo puede, además, contener hasta aproximadamente cuatro otros heteroátomos típicamente seleccionados de nitrógeno, azufre y oxígeno. Típicamente, el anillo heteroarilo contendrá hasta 3 heteroátomos, por ejemplo, 1, 2 o 3, más habitualmente hasta 2 nitrógenos, por ejemplo, un solo nitrógeno. Los átomos de nitrógeno en los anillos heteroarilo pueden ser básicos, como en el caso de un imidazol o piridina, o esencialmente no básicos como en el caso de un nitrógeno indol o pirrol. En general, el número de átomos de nitrógeno básicos presentes en el grupo heteroarilo, incluidos cualquier grupo amino del anillo, será inferior a cinco.

Los ejemplos de grupos heteroarilo que contienen nitrógeno incluyen, aunque no de forma limitativa a piridilo, pirrolilo, imidazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, oxatriazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, triazinilo, triazolilo (p. ej., 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo), tetrazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo y bencisotiazol, indolilo, 3H-indolilo, isoindolilo, indolizinilo, isoindolinilo, purinilo, indazolilo, quinolizinilo, benzoxazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo y pteridinilo.

Los ejemplos de grupos heteroarilo policíclicos que contienen nitrógeno que contienen un anillo aromático y un anillo no aromático incluyen tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo e indolinilo.

El término “grupo no aromático” abarca, salvo que el contexto indique lo contrario, sistemas de anillo insaturados sin carácter aromático, sistemas de anillo heterociclilo parcialmente saturados y completamente saturados. Los términos “insaturado” y “parcialmente saturado” se refieren a anillos en los que la(s) estructura(s) de anillo contiene átomos que comparten más de un enlace de valencia, es decir, el anillo contiene al menos un enlace múltiple, p. ej., un enlace C=C, C≡C o N=C. La expresión “completamente saturado” se refiere a los anillos donde no hay enlaces múltiples entre los átomos del anillo. Los grupos heterociclilo saturados incluyen piperidina, morfolina, tiomorfolina, piperazina. Los grupos heterociclilo parcialmente saturados incluyen pirazolinas, por ejemplo, 2-pirazolina y 3-pirazolina.

Los ejemplos de grupos heterociclilo no aromáticos son grupos que tienen de 3 a 12 miembros del anillo, más normalmente de 5 a 10 miembros del anillo. Tales grupos pueden ser monocíclicos o bicíclicos, por ejemplo, y típicamente tienen de 1 a 5 miembros del anillo de heteroátomos (más normalmente 1, 2, 3 o 4 miembros del anillo de heteroátomos), generalmente seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterociclilo pueden contener, por ejemplo, restos de éter cíclico (p. ej., como en tetrahidrofurano y dioxano), restos tioéter cíclicos (p. ej., como en tetrahidrotiofeno y ditiano), restos de amina cíclica (p. ej., como en pirrolidina) y combinaciones de los mismos (p. ej., tiomorfolina). Los ejemplos particulares incluyen morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), azetidinilo, piranilo (2H-piranilo o 4H-piranilo), dihidrotiofenilo, dihidropiranilo, dihidrofuranilo, dihidrotiazolilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, dioxolanilo, tetrahidropiranilo, imidazolinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, oxetanilo, tiazolinilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo y piperazinilo. En general, los grupos heterociclilo no aromáticos preferidos incluyen grupos saturados tales como piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo, morfolinilo y piperazinilo.

Los ejemplos particulares incluyen morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), piranilo (2H-piranilo o 4H-piranilo), dihidrotiofenilo, dihidropiranilo, dihidrofuranilo, dihidrotiazolilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, tetrahidropiranilo, imidazolinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo y piperazinilo. En general, los grupos heterociclilo no aromáticos preferidos incluyen grupos saturados tales como piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo, morfolinilo y piperazinilo.

En un anillo heterociclilo no aromático que contiene nitrógeno, el anillo debe contener al menos un átomo de nitrógeno del anillo.

Los ejemplos particulares de grupos heterociclilo no aromáticos que contienen nitrógeno incluyen aziridinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), dihidrotiazolilo, imidazolinilo, oxazolinilo, tiazolinilo, 2-pirazinilo, 3-pirazolinilo, pirazolidinilo y piperazinilo.

Los ejemplos particulares de heterociclilos saturados monocíclicos de 3 a 6 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, dioxanilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), piperazinilo, pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, ditiolanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidropiranilo (p. ej. 4-tetrahidro piranilo), ditianilo, trioxanilo, tritianilo, azinidinilo, oxiranilo, tiiranilo, diazanilo, dioxininilo, oxetanilo, azetidinilo, tietanilo, dioxetanilo.

Los ejemplos particulares de heterociclilos saturados monocíclicos de 3 a 6 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, dioxanilo, piperidinilo (por ejemplo, 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), piperazinilo, pirrolidinilo (por ejemplo, 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidropiranilo (por ejemplo, 4-tetrahidro piranilo), oxiranilo, azetidinilo.

Los ejemplos particulares de heterociclilos saturados monocíclicos de 3 a 6 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, dioxanilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), piperazinilo, pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, dioxolanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidropiranilo (p. ej., 4-tetrahidro piranilo).

Los ejemplos particulares de heterociclilos monocíclicos de 3 a 6 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, ditiolanilo, piperazinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, tetrahidropiranilo (p. ej., 4-tetrahidropiranilo), ditianilo, trioxanilo, tritianilo, aziridinilo, oxiranilo, tiiranilo, diaziridinilo, dioxarinilo, oxetanilo, azetidinilo, tietanilo, dioxetanilo, azirinilo, azetilo, 1,2-ditietilo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, ditiazolilo, piridinilo, piranilo, tiopiranilo, pirimidinilo, tiazinilo, oxazinilo y triazinilo.

Los ejemplos particulares de heterociclilos monocíclicos de 3 a 6 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, ditiolanilo, piperazinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, tetrahidropiranilo (p. ej., 4-tetrahidropiranilo), oxiranilo, oxetanilo, azetidinilo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, ditiazolilo, piridinilo, piranilo, tiopiranilo, pirimidinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo.

Los ejemplos particulares de heterociclos de 3 a 12 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, ditiolanilo, piperazinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, tetrahidropiranilo (p. ej., 4-tetrahidropiranilo), ditianilo, trioxanilo, tritianilo, aziridinilo, oxiranilo, tiiranilo, diaziridinilo, dioxarinilo, oxetanilo, azetidinilo, tietanilo, dioxetanilo, azirinilo, azetilo, 1,2-ditietilo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, ditiazolilo, piridinilo, piranilo, tiopiranilo, pirimidinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo, azepanilo, oxepanilo, tiepanilo, 1,2-diazepanilo, 1,4-diazepanilo, diazepinilo, tiazepinilo, azocanilo, azocinilo, imidazotiazolilo (p. ej., imidazo[2,1-b]tiazolilo), imidazoimidazolilo (p. ej., imidazo[1,2-a]imidazolilo), benzofuranilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, isobenzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo, benzotiotiazolilo, isobenzofuranilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, purinilo, indazolilo, pirazolopirimidinilo (p. ej., pirazolo[1,5-a]pirimidinilo), triazolopirimidinilo (p. ej., [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidinilo), benzodioxolilo, imidazopiridinilo y pirazolopiridinilo (p. ej., pirazolo[1,5-a]piridinilo), quinolinilo, isoquinolinilo, cromanilo, tiocromanilo, isocromanilo, benzodioxanilo, quinolizinilo, benzoxazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo, pteridinilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzofuranilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, benzo[1,3]dioxolilo, 4,5,6,7-tetrahidrobenzofuranilo, tetrahidrotriazolopirazinilo (p. ej., 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazinilo), 8-oxa -3-azabiciclo[3.2.1]octanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]-octanilo, 3,6-diazabiciclo[3.1.1]heptanilo.

Los ejemplos particulares de heterociclos de 3 a 12 miembros incluyen sistemas de anillos morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidinilo (p. ej., 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo y 4-piperidinilo), pirrolidinilo (p. ej., 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo y 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, dioxolanilo, piperazinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, tetrahidropiranilo (p. ej., 4-tetrahidropiranilo), oxiranilo, oxetanilo, azetidinilo, pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, ditiazolilo, piridinilo, piranilo, tiopiranilo, pirimidinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo, imidazotiazolilo (p. ej., imidazo[2,1-b]tiazolilo), imidazoimidazolilo (p. ej., imidazo[1,2-a]imidazolilo), benzofuranilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, isobenzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo, benzotiotiazolilo, isobenzofuranilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, indazolilo, pirazolopirimidinilo (p. ej. pirazolo[1,5-a]pirimidinilo), triazolopirimidinilo (p. ej., [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidinilo), benzodioxolilo, imidazopiridinilo y pirazolopiridinilo (p. ej., pirazolo[1,5-a]piridinilo), quinolinilo, isoquinolinilo, benzodioxanilo, quinolizinilo, benzoxazinilo, piridopiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, naftiridinilo, pteridinilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzofuranilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, benzo[1,3]dioxolilo, 4,5,6,7-tetrahidrobenzofuranilo, tetrahidrotriazolopirazinilo (p. ej., 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazinilo).

Los ejemplos particulares de heterociclos aromáticos de 5 a 6 miembros incluyen, aunque no de forma limitativa, sistemas de anillo pirrolilo, furanilo, tiofenilo, imidazolilo, furazanilo, oxazolilo, oxadiazolilo, oxatriazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, piridinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo y triazinilo. Los anillos de heterociclilo y carbociclilo que representan el sustituyente B incluyen sistemas de anillo puenteados tales como, por ejemplo, cicloalcanos puenteados, tales como, por ejemplo, norbornano (1,4-endo-metilenociclohexano), adamantano, oxaadamantano; anillos de morfolina con puente tales como, por ejemplo, 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octano, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptano, 3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano; anillos de piperazina puenteados tales como, por ejemplo, 3,6-diazabiciclo[3.1.1]heptano; anillos de piperidina puenteados tales como, por ejemplo, 1,4-etilenpiperidina. Para una explicación de la distinción entre sistemas de anillos fusionados y puenteados, véase Advanced Organic Chemistry, por Jerry March, 4.° edición, Wiley Interscience, páginas 131-133, 1992.

El término “carbociclilo” según se usa en la presente memoria, salvo que el contexto indique lo contrario, incluye sistemas anillos de carbono aromáticos y no aromáticos. Por lo tanto, por ejemplo, el término “carbociclilo” incluye dentro de su alcance sistemas de anillos carbocíclicos aromáticos, no aromáticos, insaturados, parcialmente saturados y completamente saturados. En general, salvo que el contexto indique lo contrario, tales sistemas de anillos pueden ser monocíclicos o bicíclicos o con puente y pueden contener, por ejemplo, 3 a 12 miembros del anillo, o 4 a 10 miembros del anillo, o más generalmente de 5 a 10 miembros del anillo. La referencia a 4 a 7 miembros del anillo incluye 4, 5, 6 o 7 átomos en el anillo y referencia a 4 a 6 miembros del anillo incluyen 4, 5 o 6 átomos en el anillo. Los ejemplos de sistemas de anillos de carbociclilo monocíclicos son sistemas de anillos que contienen 3, 4, 5, 6, 7 y 8 miembros del anillo, más normalmente 3 a 7, y preferiblemente 4, 5, 6 o 7 miembros del anillo, más preferiblemente 5 o 6 miembros del anillo. Los ejemplos de sistemas de anillos de carbociclilo bicíclicos son aquellos que contienen 8, 9, 10, 11 y 12 miembros de anillo, y más normalmente 9 o 10 miembros de anillo. Cuando se hace referencia en la presente memoria a un sistema de anillo de carbociclilo, el anillo de carbociclilo puede, salvo que el contexto indique lo contrario, estar opcionalmente sustituido (es decir, no sustituido o sustituido) por uno o más sustituyentes como se analiza en la presente memoria. Los sistemas de anillos de carbociclilo pueden ser sistemas de anillo de arilo. El término “arilo”, según se usa en la presente memoria, se refiere a grupos aromáticos de carbociclilo y abarca sistemas de anillos policíclicos (p. ej., bicíclicos) en donde uno o más anillos son no aromáticos, siempre que al menos un anillo sea aromático. En tales sistemas policíclicos, el sistema de anillos puede unirse al resto del compuesto por un anillo aromático o por un anillo no aromático. El término 'arilo' incluye grupos fenilo, naftilo, indenilo y tetrahidronaftilo.

Los ejemplos particulares de carbociclos de 3 a 12 miembros incluyen sistemas de anillo de ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, fenilo naftilo, indenilo, tetrahidronaftilo, azulenilo, norbornano (1,4-endo-metileno-ciclohexano), adamantano.

Líneas (tales como '-' en-(R<a2>)n) dibujadas en sistemas de anillos indican que el enlace puede unirse a cualquiera de los átomos de anillo adecuados y disponibles.

En una realización en la que están implicados dos o más heteroátomos, estos heteroátomos pueden ser iguales o parciales o todos los dos o más heteroátomos pueden ser diferentes.

El término “opcional” u “opcionalmente” significa que el evento descrito posterior al mismo puede o no ocurrir. Este término abarca los casos en que el evento puede o no ocurrir.

Según se usa en la presente memoria, la expresión “uno o más” se refiere a al menos uno, por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco o más, siempre que sea posible y dependiendo del contexto.

En los compuestos de fórmula (I) el átomo de carbono indicado con un “*” en la siguiente fórmula es un centro quiral. La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I) en donde dicho centro quiral representa una estereoquímica específica (S o R), en particular compuestos de fórmula (I) en la que dicho centro quiral tiene estereoquímica S. Los compuestos de fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos que tiene la estereoquímica S en el centro quiral * que exhiben una alta actividad inhibidora de FGFR.

Por lo tanto, la presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-a)

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

cada R es independientemente alquilo C1-6, ciano, halo, alcoxi C1-6, haloalcoxi C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo C1-6, haloalquilo C1-6, oxo, -SO2-NH2, -SO2-NH(alquilo C1-4), -SO2-N (alquilo C1-4)2, -NH-C(=O)-alquenilo C2-6, -C(=O)alquilo C1-6, -C(=O)-alquenilo C2-6, alquilo C1-6-O-C (=O)-, cicloalquilo C3-6, fenilo o un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-A)

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos;

R<a1>es halo, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, ciano, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, -S(=O)-alquilo C1-6, -S(=O)2-alquilo C1-6o cicloalquilo C3-6;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

n representa un número entero igual a 0, 1 o 2;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-A) según se ha definido anteriormente en la presente memoria que tiene un estereocentro S como en la siguiente fórmula (I-A-a):

incluyendo cualquier forma tautomérica y estereoquímicamente isomérica de la misma, en donde los sustituyentes son como se han definido anteriormente para los compuestos de fórmula (I-A);

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-B)

que incluye cualquier forma tautomérica y estereoquímicamente isomérica de la misma, en donde C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

n representa un número entero igual a 0, 1 o 2;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-B) según se ha definido anteriormente en la presente memoria que tiene un estereocentro S como en la siguiente fórmula (I-B-a):

los sustituyentes son como se definieron anteriormente para los compuestos de fórmula (I-B);

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-C)

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

n representa un número entero igual a 0, 1 o 2;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-C) según se ha definido anteriormente en la presente memoria que tiene un estereocentro S como en la siguiente fórmula (I-C-a):

incluyendo cualquier forma tautomérica y estereoquímicamente isomérica de la misma, en donde los sustituyentes son como se definieron anteriormente para los compuestos de fórmula (I-C);

La invención proporciona compuestos de fórmula (I-D):

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos; R<a1>es halo, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, ciano, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, -S(=O)-alquilo C1-6, -S(=O)2-alquilo C1-6o cicloalquilo C3-6;

R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4;

n representa un número entero igual a 0, 1 o 2;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-D) según se ha definido anteriormente en la presente memoria que tiene un estereocentro S como en la siguiente fórmula (I-D-a):

los sustituyentes son como se definieron anteriormente para los compuestos de fórmula (I-D);

La invención proporciona

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4;

C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4;

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I-E) según se ha definido anteriormente en la presente memoria que tiene un estereocentro S como en la siguiente fórmula (I-E-a):

los sustituyentes son como se definieron anteriormente para los compuestos de fórmula (I-E);

En una realización, en los compuestos de fórmula (I) o (I-a), un sustituyente de R<a1>y un sustituyente de R<a2>están presentes.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I) o (I-a), un sustituyente de R<a1>y dos sustituyentes de R<a2>están presentes.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), n es 0. En una realización, en los compuestos de fórmula (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), n es 1. En una realización, en los compuestos de fórmula (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), n es 2. En una realización, en los compuestos de fórmula (I) o (I-a), uno de A1, A2, A3y A4representa N y los sustituyentes de A restantes representan CH, CR<a1>o CR<a2>.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I) o (I-a), dos de los sustituyentes de A1, A2, A3y A4representan N y los sustituyentes de A restantes representan CH, CR<a1>o CR<a2>.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1es hidrógeno.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C2es hidrógeno.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1es hidrógeno y C2es alquilo C1-4.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1y C2son ambos hidrógeno.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1y C2son ambos alquilo C1-4.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1es hidrógeno y C2es hidroxilo.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1es hidrógeno y C2es alcoxi C1-4.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), C1y C2se toman juntos para formar cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos, en particular ciclopropilo.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a),

representa -CH3.

representa -CH2C (alquilo C1-4), en particular -CH2CH3o -CH2CH2CH3.

representa -CH(alquilo C1-4)2, en particular -CH (CH3)2.

representa -ciclopropilo.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a1>es independientemente halo, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, en particular cada R<a1>es independientemente -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a1>es independientemente -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, en particular cada R<a1>es independientemente metoxi, amida o dimetilamina.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a1>es independientemente halo, por ejemplo, fluoro, -O-alquilo C1-4, -O-alquiloxi C1-4alquilo C1-4, -NH2, -N(alquilo C1-4)2, -C(=O)-NHz o -C(=O)-N(alquilo C1-4)2.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a1>es independientemente -O-alquilo C1-4, en particular metoxi.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a2>es independientemente halo o alcoxi C1-6.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), cada R<a2>es independientemente alcoxi C1-6, en particular metoxi.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), hay una R<a1>y un sustituyente de R<a2>. En una realización, la una R<a1>es -OR<c>, -N(R<c>)2, -C (=O)-N(R<c>)2y la una R<a2>es alcoxi C1-6. En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), hay una R<a1>y no hay un sustituyente de R<a2>. En una realización, la una R<a1>es -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2. En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), Res hidrógeno.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), Res alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquiloxicarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, cicloalquilo C3-6, fenilo, un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, o alquilo C1-6sustituido con cicloalquilo C3-6o con fenilo o con un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), Res alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquilocarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), Res alquilo C1-6, en particular metilo o etilo.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es carbociclilo o heterociclilo de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen cada uno opcionalmente con 1 a 5, en particular 1 a 4, o 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. En una realización, B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es fenilo o un heterociclilo aromático de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho fenilo y heterociclilo se sustituyen cada uno opcionalmente con 1 a 5, en particular 1 a 4, o 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. En una realización, B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es carbociclilo monocíclico o heterociclilo de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen cada uno opcionalmente con 1 a 5, en particular 1 a 4, o 1 a 3, o 1 o 2, 1 sustituyente de R. En una realización, B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es carbociclilo o heterociclilo monocíclico no aromático de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen cada uno opcionalmente con 1 a 5, en particular 1 a 4, o 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. En una realización, B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 a 4, en particular 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. Por ejemplo B es pirazolilo, piridilo, pirimidinilo o pirazinilo opcionalmente sustituido, en particular pirazolilo, piridilo o pirimidinilo opcionalmente sustituido. En una realización, B no se sustituye. En una realización, B se sustituye con 1 sustituyente de R. En una realización, el sustituyente de R se selecciona de alquilo C1-6, alcoxi C1-6y cicloalquilo C3-6. En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es un heterociclilo monocíclico aromático de 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 a 4, en particular 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. Por ejemplo, B es piridilo, pirimidinilo o pirazinilo opcionalmente sustituido, en particular piridilo o pirimidinilo opcionalmente sustituido. En una realización, B no se sustituye. En una realización, B se sustituye con 1 sustituyente de R. En una realización, el sustituyente de R se selecciona de alquilo C1-6, alcoxi C1-6y cicloalquilo C3-6.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 a 3, en particular 1 o 2, o 1 sustituyente de R. Por ejemplo, B es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo opcionalmente sustituido, en particular pirazolilo opcionalmente sustituido. En una realización, B no se sustituye. En una realización, B se sustituye con 1 sustituyente de R. En una realización, el sustituyente de R se selecciona de alquilo C1-6, alcoxi C1-6y cicloalquilo C3-6.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) O (I-E-a), B es carbociclilo bicíclico o heterociclilo de 3 a 12 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen cada uno opcionalmente con 1 a 5, en particular 1 a 4, o 1 a 3, o 1 o 2, o 1 sustituyente de R. En una realización, B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), B es pirimidinilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3, en particular 1 o 2, o 1 sustituyente de R; en particular, B es pirimidinilo no sustituido.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), B es piridilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3, en particular 1 o 2, o 1 sustituyente de R; en particular, B es piridilo no sustituido.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), B es oxazolilo, opcionalmente sustituido con 1 o 2 sustituyentes R, en particular, 1 sustituyente de R; en particular, B es oxazolilo no sustituido.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), cada R es independientemente alquilo C1-6, ciano, halo, alcoxi C1-6, haloalcoxi C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo C1-6, haloalquilo C1-6, oxo, -SO2-NH2, -SO2-NH (alquilo C1-4), -SO2-N(alquilo C1-4)2, -NH-C(=O)-alquenilo C2-6, -C(=O)-alquilo C1-6, -C(=O)-alquenilo C2-6o alquilo C1-6-O-C(=O)-.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), cada R es independientemente alquilo C1-6, ciano, halo, alcoxi C1-6, haloalcoxi C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo C1-6, haloalquilo C1-6, oxo, -SO2-NH2, -SO2-NH(alquilo C1-4), -SO2-N (alquilo C1-4)2, -NH-C(=O)-alquenilo C2-6, -C(=O)-alquilo C1-6, -C(=O)-alquenilo C2-6, cicloalquilo C3-6, fenilo o un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), B no se sustituye.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a), B se sustituye con 1 a 5 sustituyentes de R, en particular 1 a 4 sustituyentes de R, o 1 a 3 sustituyentes de R, o 1 o 2 sustituyentes de R, o 1 sustituyente de R.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I) o (I-a), uno o más, en particular cuando sea posible todas las condiciones siguientes se aplican:

A1, A2, A3y A4cada uno representa independientemente CH, CR<a1>, CR<a2>; o uno de A1, A2, A3y A4representa N y los sustituyentes de A restantes representan cada uno independientemente CH, CR<a1>, CR<a2>; C1 es hidrógeno o alquilo C1-4, en particular hidrógeno o metilo;

C2 es hidrógeno o alquilo C1-4o alcoxi C1-4, en particular hidrógeno, metilo o metoxi;

o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos, en particular ciclopropilo;

cada R<a1>es independientemente halo (p. ej., fluoro), -OR<c>, -N(R<c>)2, o -C(=O)-N(R<c>)2; en particular halo, -O-alquilo C1-4, -O-alquiloxi C1-4alquilo C1-4, -NH2, -N(alquilo C1-4)2, -C(=O)-NH2o -C(=O)-N(alquilo C1-4)2;

cada R<a2>es independientemente halo (p. ej., fluoro) o alcoxi C1-6, en particular halo o alcoxi C1-4; Res alquilo C1-6, en particular alquilo C1-4;

B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 sustituyente de R; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo u oxazolilo; o B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros no sustituido que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo o oxazolilo.

En una realización, en los compuestos de fórmula (I), (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D) o (I-D-a), uno o más, en particular cuando sea posible todas las condiciones siguientes se aplican:

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4, en particular hidrógeno, metilo o etilo;

C2 es hidrógeno o alquilo C1-4o alcoxi C1-4, en particular hidrógeno, metilo o etilo;

o C1y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos, en particular ciclopropilo;

En una realización, en los compuestos de fórmula (I-E) o (I-E-a), uno o más, en particular cuando sea posible todas las condiciones siguientes se aplican:

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4, en particular hidrógeno, metilo o etilo;

Res alquilo C1-6, en particular alquilo C1-4;

En una realización, los compuestos son de fórmula (I-A) o (I-A-a), en donde uno o más, en particular cuando sea posible todas las condiciones siguientes se aplican:

C1 es hidrógeno o alquilo C1-4, en particular hidrógeno, metilo o etilo, más en particular hidrógeno;

C2 es hidrógeno o alquilo C1-4o alcoxi C1-4, en particular hidrógeno, metilo o etilo, o metoxi, más en particular hidrógeno; o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos, en particular ciclopropilo;

R<a1>es halo (p. ej., fluoro), -OR<c>, -N(R<c>)2, o -C(=O)-N(R<c>)2; en particular halo, -O-alquilo C1-4, -O-alquiloxi C1-4alquilo C1-4, -NH2, -N(alquilo C1-4)2, -C(=O)-NH2o -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, en particular -O-alquilo C1-4, más en particular metoxi; cada R<a2>es independientemente halo (p. ej., fluoro) o alcoxi C1-6, en particular halo o alcoxi C1-4;

n es un número entero igual a 0, 1 o 2, más en particular 0 o 1, p. ej., 0;

Res alquilo C1-6, en particular alquilo C1-4, p. ej., metilo;

B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 sustituyente de R; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo u oxazolilo; o B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros no sustituido que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo u oxazolilo; o B es pirimidinilo no sustituido.

En una realización, el compuesto de la invención se selecciona de

las sales farmacéuticamente aceptables del mismo o los solvatos del mismo.

En una realización, el compuesto de la invención es

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.

En una realización, el compuesto de la invención es

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.

En una realización, el compuesto de la invención es

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.

En una realización, el compuesto de la invención es

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.

En una realización, el compuesto de la invención es

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.

Para evitar dudas, debe entenderse que cada preferencia, realización y ejemplo general y específicos de un sustituyente puede combinarse si es químicamente posible con cada preferencia general y específica, realización y ejemplo para uno o más, preferiblemente, todos los demás sustituyentes según se define en la presente memoria y que todas estas realizaciones están abarcadas por esta solicitud.

Métodos para la preparación de compuestos de fórmula (I)

En esta sección, como en todas las demás secciones de esta solicitud, salvo que el contexto indique lo contrario, las referencias a la Fórmula (I) también incluyen todos los demás subgrupos y ejemplos de los mismos (p. ej., (I-a), (I-A), (I-A-a), (I-B), (I-B-a), (I-C), (I-C-a), (I-D), (I-D-a), (I-E) o (I-E-a) según se define en la presente memoria.

En el Esquema 1, se aplican las siguientes condiciones de reacción:

1: en presencia de un reactivo protector H-P adecuado, tal como, por ejemplo, 4-metoxibenzaldehído y un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, NaBH4, un ácido adecuado, tal como, por ejemplo, ácido trifluoroacético y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, acetato de etilo, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente;

2: a) en presencia de cloruro malonilo de metilo, un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, hidruro de sodio, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, N, N-dimetilformamida, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente; y b) en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, metóxido de sodio, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 110 °C;

3: en presencia de un agente de introducción de grupo saliente adecuado, tal como, por ejemplo, cloruro de oxalilo o cloruro de fosforilo, en presencia de un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, y diclorometano, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente o 15 °C;

4: en presencia de un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, hidruro de diisobutilaluminio y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o diclorometano, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, -78 °C;

5: en presencia de fenilmetanamina, una base adecuada, tal como, por ejemplo, diisopropiletilamina, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, acetonitrilo, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 70 °C;

6: en presencia de un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, H2, y un catalizador adecuado, tal como, por ejemplo, paladio sobre carbón vegetal, en un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo, metanol, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 50 °C;

7: en presencia de un oxidante adecuado, tal como, por ejemplo, FeCl3y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, 1,4-dioxano, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente o 110 °C;

8: en presencia de un agente de desprotección adecuado, tal como, por ejemplo, ácido trifluorometanosulfónico, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, ácido trifluoroacético, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 20 °C, 60 °C, 80 °C o 85 °C;

9: en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, diisopropiletilamina, bicarbonato de sodio o bicarbonato de potasio, y opcionalmente en presencia de un catalizador de transferencia de fase adecuado tal como, por ejemplo, yoduro de tetrabutilamonio o 18-crown-6, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, cloroformo, una mezcla de cloroformo/agua, n, n-dimetilacetamida o un alcohol, por ejemplo, n butanol, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 35 °C, 40 °C, 60 °C, 80 °C o 110 °C;

En el Esquema 1, el producto intermedio de fórmula (XII) puede ser un estereoisómero específico, por ejemplo, el enantiómero S, lo que da como resultado un estereoisómero específico, por ejemplo, el enantiómero S, de fórmula (I), tal como se muestra a continuación en el Esquema 1a para la preparación de compuestos de fórmula (I-a).

Los productos intermedios de fórmula (IX-b) se pueden preparar según el siguiente Esquema de reacción 2.

En el Esquema 2, todas las variables se definen según la presente invención.

En el Esquema 2, se aplican las siguientes condiciones de reacción:

1: en presencia de un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, H2, un catalizador adecuado, tal como, por ejemplo, paladio sobre carbón vegetal, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo, metanol o etanol, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente o 40 °C.

Los productos intermedios de fórmula (XIII) en donde al menos un R<1a>está presente y en donde dicha R<1a>representa halo, p. ej. fluoro, puede convertirse en un producto intermedio de fórmula (IX) en donde dicha R<1>representa metoxi, en presencia de sodio, metanol, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente.

Los productos intermedios de fórmula (IX) también se pueden preparar según el siguiente Esquema 3 de reacción. En el Esquema 3, todas las variables se definen según la presente invención.

En el Esquema 3, se aplican las siguientes condiciones de reacción:

1: en presencia de un agente reductor adecuado, tal como, por ejemplo, H2y NH2NH2,H2O, un catalizador adecuado, tal como, por ejemplo, paladio sobre carbón vegetal, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, un alcohol, por ejemplo, etanol, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, temperatura ambiente o 85 °C. Los compuestos de fórmula (I) también pueden convertirse entre sí a través de reacciones conocidas por la técnica o transformaciones de grupo funcional.

Los compuestos de la invención según se prepararon en los procesos descritos en la presente memoria se pueden sintetizar en forma de mezclas de enantiómeros, en particular mezclas racémicas de enantiómeros, que se pueden separar entre sí siguiendo procedimientos de resolución conocidos en la técnica. Los compuestos racémicos de fórmula (I) que contienen un átomo de nitrógeno básico pueden convertirse en las formas salinas diastereoméricas correspondientes mediante reacción con un ácido quiral adecuado. Dichas formas de sal diastereomérica se separan posteriormente, por ejemplo, mediante cristalización selectiva o fraccionada y los enantiómeros se liberan de esta mediante el uso de álcali. Una manera alternativa de separar las formas enantioméricas de los compuestos de fórmula (I), y las sales de adición farmacéuticamente aceptables y solvatos de las mismas, implica cromatografía líquida usando una fase estacionaria quiral, por ejemplo, mediante cromatografía de fluidos supercríticos. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también pueden derivar de las formas estereoquímicamente isoméricas puras correspondientes de los materiales de partida adecuados, siempre que la reacción se produzca estereoespecíficamente. Preferentemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizaría mediante métodos estereoespecíficos de preparación. Estos métodos emplearán de forma ventajosa materiales de partida enantioméricamente puros.

En la preparación de los compuestos de la presente invención, puede ser necesaria la protección de una funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los productos intermedios. La necesidad de dicha protección varía dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados (NH-PG) incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (Boc), benciloxicarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenoxi-carbonilo (Fmoc). El experto en la técnica puede determinar fácilmente la necesidad de una protección de este tipo. Para consultar una descripción general de los grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4.ª ed., Wiley, Hoboken, New Jersey, 2007.

En todas estas preparaciones, los productos de reacción pueden aislarse del medio de reacción y, si es necesario, purificarse adicionalmente según metodologías generalmente conocidas en la técnica tales como, por ejemplo, extracción, cristalización, trituración y cromatografía. La pureza de los productos de reacción se puede determinar según metodologías generalmente conocidas en la técnica tales como por ejemplo, LC-MS, TLC, HPLC.

Un aspecto adicional de la invención es un proceso para la preparación de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria, proceso que comprende:

(i) hacer reaccionar un producto intermedio de fórmula (II)

en donde W1representa un grupo saliente adecuado, tal como, por ejemplo, halo, por ejemplo, cloro, con un producto intermedio de fórmula (XII)

en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, diisopropiletilamina, bicarbonato de sodio o bicarbonato de potasio, y opcionalmente en presencia de un catalizador de transferencia de fase adecuado tal como, por ejemplo, yoduro de tetrabutilamonio o 18-crown-6, y un disolvente adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, cloroformo, una mezcla de cloroformo/agua, n, n-dimetilacetamida o un alcohol, por ejemplo, n butanol, a una temperatura adecuada, tal como, por ejemplo, 35 °C, 40 °C, 60 °C, 80 °C o 110 °C;

en donde las variables son según se define en la presente memoria; y opcionalmente después de eso convertir un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I).

Sales, solvatos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos

En esta sección, al igual que en todas las demás secciones de esta solicitud, salvo que el contexto indique lo contrario, las referencias a la Fórmula (I) incluyen referencias a todos los demás subgrupos, preferencias, realizaciones y ejemplos de la misma según se define en la presente memoria.

Salvo que se indique lo contrario, una referencia a un compuesto particular también incluye formas iónicas, sales, solvatos, isómeros, tautómeros e isótopos, por ejemplo, preferiblemente, las sales o isómeros o solvatos de los mismos. Los compuestos de fórmula (I) pueden existir en forma de sales, por ejemplo, sales de adición de ácido o, en ciertos casos, sales de bases orgánicas e inorgánicas tales como sales de carboxilato, sulfonato y fosfato. Todas estas sales están dentro del alcance de esta invención, y las referencias a compuestos de fórmula (I) incluyen las formas de sal de los compuestos. Las formas de sal de los compuestos de la invención son típicamente sales farmacéuticamente aceptables, y los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se discuten en Berge y col. (1977) “Pharmaceutically Acceptable Salts”, J. Pharm. Sci., Vol.66, págs.1-19. Sin embargo, las sales que no son farmacéuticamente aceptables también pueden prepararse como formas intermedias que a continuación pueden convertirse en sales farmacéuticamente aceptables. Tales formas de sales no farmacéuticamente aceptables, que pueden ser útiles, por ejemplo, en la purificación o separación de los compuestos de la invención, también forman parte de la invención.

Las sales de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto original que contiene un resto básico o ácido mediante métodos químicos convencionales tales como métodos descritos en Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 páginas, agosto de 2002. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas de ácido o base libres de estos compuestos con la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se usan medios no acuosos tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Los compuestos de la invención pueden existir como mono o disales dependiendo del pKa del ácido a partir del cual se forma la sal.

Las sales de adición de ácido pueden formarse con una amplia variedad de ácidos, tanto inorgánicos como orgánicos. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales formadas con un ácido seleccionado del grupo que consiste en ácido acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (p. ej., L-ascórbico), L-aspártico, bencenosulfónico, benzoico, 4-acetamidobenzoico, butanoico, (+) alcanforado, alcanforsulfónico, (+)-(1S)-alcanfor-10-sulfónico, cáprico, caproico, caprílico, cinámico, cítrico, ciclámico, dodecilsulfúrico, etano-1,2-disulfónico, etanosulfónico, 2-hidroxietanosulfónico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, glucoheptónico, D-glucónico, glucurónico (p. ej., D-glucurónico), glutámico (p. ej., L-glutámico), α-oxoglutárico, glicólico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, yodhídrico, isetiónico, láctico (p. ej., (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico), lactobiónico, maleico, málico, (-)-L-málico, malónico, (±)-DL-mandélico, metanosulfónico, naftalenosulfónico (p. ej., naftaleno-2-sulfónico), naftaleno-1,5-disulfónico, 1-hidroxi-2-naftoico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamoico, fosfórico, propiónico, L-piroglutámico, pirúvico, salicílico, 4- aminosalicílico, sebácico, esteárico, succínico, sulfúrico, tánico, (+)-L-tartárico, tiociánico, toluenosulfónico (p. ej. p-toluenosulfónico), undecilénico y valérico, así como aminoácidos acilados y resinas de intercambio catiónico. Un grupo particular de sales consiste en sales formadas a partir de ácido acético, clorhídrico, yodhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, succínico, maleico, málico, isetiónico, fumárico, bencenosulfónico, toluenosulfónico, metanosulfónico (mesilato), etanosulfónico, naftalenosulfónico, valérico, acético, propanoico, butanoico, malónico, glucurónico y lactobiónico. Otro grupo de sales de adición de ácido incluye sales formadas a partir de los ácidos acético, adípico, ascórbico, aspártico, cítrico, DL-láctico, fumárico, glucónico, glucurónico, hipúrico, clorhídrico, glutámico, DL-málico, metanosulfónico, sebácico, esteárico, succínico y tartárico.

Si el compuesto es aniónico, o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (p. ej., -COOH puede ser -COO-), entonces una sal puede formarse con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa a iones de metal alcalino tales como Na<+>y K<+>, cationes de metales alcalinotérreos tales como Ca<2+>y Mg<2+>y otros cationes tales como Al<3+>. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa a ion amonio (es decir, NH4<+>) y iones amonio sustituidos (p. ej., NH3R<+>NH2R2<+>, NHR3<+>NR4<+>). Los ejemplos de algunos iones de amonio sustituidos adecuados son los derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion de amonio cuaternario común es N (CH3)4<+>.

Cuando los compuestos de la fórmula (I) contienen una función amina, estos pueden formar sales de amonio cuaternario, por ejemplo, mediante reacción con un agente alquilante según métodos bien conocidos por el experto. Tales compuestos de amonio cuaternario están dentro del alcance de fórmula (I).

Los compuestos de la invención pueden formar solvatos, por ejemplo, con agua (es decir, hidratos) o disolventes orgánicos comunes. Según se usa en la presente memoria, el término “solvato” significa una asociación física de los compuestos de la presente invención con una o más moléculas de disolvente, así como sales de adición farmacéuticamente aceptables de los mismos. Esta asociación física implica diversos grados de enlace iónico y covalente, incluyendo el enlace de hidrógeno. En determinados casos, el solvato será susceptible de aislamiento, por ejemplo, cuando se incorporan una o más moléculas de disolvente en la red cristalina del sólido cristalino. El término “solvato” pretende abarcar solvatos tanto en fase de solución como aislables. Los ejemplos no limitantes de solvatos adecuados incluyen compuestos de la invención en combinación con agua (hidrato), isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético o etanolamina y similares. Los compuestos de la invención pueden ejercer sus efectos biológicos mientras están en solución.

Los solvatos pueden ser importantes para los procesos para la preparación de una sustancia (p. ej., en relación con su purificación, el almacenamiento de la sustancia (p. ej., su estabilidad) y la facilidad de manipulación de la sustancia y, con frecuencia, se forman como parte de las fases de aislamiento o purificación de una síntesis química. Un experto en la materia puede determinar por medio de técnicas convencionales y de uso prolongado si se ha formado un hidrato u otro solvato mediante las condiciones de aislamiento o las condiciones de purificación utilizadas para preparar un compuesto dado. Los ejemplos de dichas técnicas incluyen análisis termogravimétrico (ATG), calorimetría diferencial de barrido (CDB), cristalografía de rayos X (por ejemplo, cristalografía de rayos X monocristalina o difracción de rayos X de polvo) y RMN en estado sólido (RMN-ES, también conocida como RMN de giro de ángulo mágico RMN o RMN-GAM). Dichas técnicas son una parte tan importante del conjunto de herramientas analíticas convencionales del químico experto como la RMN, IR, HPLC y EM. Como alternativa, el experto en la materia puede formar deliberadamente un solvato usando condiciones de cristalización que incluyen una cantidad del disolvente necesaria para el solvato particular. Posteriormente, los métodos convencionales descritos anteriormente pueden usarse para establecer si se han formado solvatos.

Además, los compuestos de la presente invención pueden tener una o más formas polimorfas (cristalinas) o amorfas y estas formas como tales están destinadas a incluirse en el alcance de la invención.

Los compuestos de fórmula (I) pueden existir en varias formas isoméricas geométricas diferentes y formas tautoméricas y las referencias a compuestos de fórmula (I) incluyen todas estas formas. Para evitar dudas, donde un compuesto puede existir en una de varias formas geométricas isoméricas o tautoméricas y solo una se describe o muestra específicamente, no obstante, todas las demás están incluidas por fórmula (I). Los ejemplos de formas tautoméricas incluyen, por ejemplo, formas de ceto-, enol- y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautoméricos: ceto/enol (ilustrado a continuación), imin/enamina, amida/imino alcohol, amidina/endiaminas, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol y nitro/acii-nitro.

Tales formas en la medida en que pueden existir, se pretende que estén incluidas dentro del alcance de la presente invención. Se deduce que un solo compuesto puede existir tanto en forma estereoisomérica como tautomérica.

Cuando los compuestos de fórmula (I) contienen uno o más centros quirales, y pueden existir en forma de dos o más isómeros ópticos, las referencias a compuestos de fórmula (I) incluyen todas las formas isoméricas ópticas de las mismas (p. ej., enantiómeros, epímeros y diastereoisómeros), ya sea como isómeros ópticos individuales o mezclas (p. ej., mezclas racémicas) de dos o más isómeros ópticos, salvo que el contexto requiera lo contrario. Cuando un compuesto de fórmula (I) tiene más de un centro quiral, y un centro quiral se indica como que tiene una estereoconfiguración absoluta, tal como en compuestos de fórmula (I-a), (I-A-a), (I-B-a), (I-C-a), (I-D-a) o (I-E-a), el otro centro o centros quirales incluyen todas las formas isoméricas ópticas, ya sea como isómeros ópticos individuales, o mezclas (p. ej., mezclas racémicas) de dos o más isómeros ópticos, salvo que el contexto requiera lo contrario. Los isómeros ópticos pueden caracterizarse e identificarse por su actividad óptica (es decir, como isómeros y- dependiendo de la dirección en la que giran la luz polarizada plana, o isómeros d y l) o pueden caracterizarse en términos de su estereoquímica absoluta usando la nomenclatura “R y S” desarrollada por Cahn, Ingold y Prelog, véase Advanced Organic Chemistry por Jerry March, 4.° edición, John Wiley & Sons, Nueva York, 1992, páginas 109-114, y véase también Cahn, Ingold & Prelog (1966) Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415. Por ejemplo, los enantiómeros resueltos cuya configuración absoluta no se conoce pueden designarse por (+) o (-), dependiendo de la dirección en la que giran la luz polarizada plana.

Los isómeros ópticos pueden separarse mediante una serie de técnicas que incluyen cromatografía quiral (cromatografía en un soporte quiral) y tales técnicas son bien conocidas por el experto en la técnica. Como alternativa a la cromatografía quiral, los isómeros ópticos se pueden separar formando sales diastereoisoméricas con ácidos quirales tales como (+)-ácido tartárico, (-)-ácido piroglutámico, (-)-ácido di-toluoil-L-tartárico, (+)-ácido mandélico, (-)-ácido málico y (-)-camforsulfónico, que separan los diastereoisómeros por cristalización preferencial, y a continuación disocian las sales para dar el enantiómero individual de la base libre.

Cuando los compuestos de fórmula (I) existen como dos o más formas isoméricas, una forma isomérica, por ejemplo, un enantiómero en un par de enantiómeros, puede exhibir ventajas sobre la otra forma isomérica, por ejemplo, sobre el otro enantiómero, por ejemplo, en términos de actividad biológica. Por lo tanto, en ciertas circunstancias, puede ser deseable usar como un agente terapéutico solo uno de un par de enantiómeros, o solo uno de una pluralidad de diastereoisómeros. Se encontró que los compuestos en los que el centro quiral indicado con * en la estructura siguiente

tiene la configuración S, presenta una mayor actividad biológica que la configuración R correspondiente. Cuando se identifica un estereoisómero específico, esto significa que dicho estereoisómero está sustancialmente libre, es decir, asociado con menos del 50 %, preferiblemente menos del 20 %, con mayor preferencia menos del 10 %, aún con mayor preferencia menos del 5 %, en particular menos del 2 % y, con la mayor preferencia, menos del 1 % que los otros esteroisómeros. Por lo tanto, cuando se especifica que un compuesto de fórmula (I) es, por ejemplo, (S), significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero (R); cuando un compuesto de la Fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como E, significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero Z; cuando un compuesto de la Fórmula (I) se especifica, por ejemplo, como cis, significa que el compuesto está sustancialmente libre del isómero trans.

Según se usa en la presente memoria, cualquier fórmula química con enlaces mostrados únicamente como líneas sólidas y no como enlaces sólidos en cuña o en cuña biselada, o que no se indica lo contrario que tenga una configuración particular (p. ej. R, S) alrededor de uno o más átomos, contempla cada posible estereoisómero, o mezcla de dos o más estereoisómeros.

Los términos “estereoisómeros” o la expresión “formas estereoquímicamente isoméricas” indicados anteriormente o en lo sucesivo en la presente memoria se utilizan indistintamente.

Los enantiómeros son estereoisómeros que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es un racemato o mezcla racémica.

Los atropisómeros (o atropoisómeros) son estereoisómeros que tienen una configuración espacial particular, lo que resulta de una rotación restringida alrededor de un enlace único, debido al gran impedimento estérico. Todas las formas atropisoméricas de los compuestos de fórmula (I) están incluidas en el alcance de la presente invención. Los diastereómeros (o diastereoisómeros) son estereoisómeros que no son enantiómeros, es decir, no están relacionados como imágenes especulares. Si un compuesto contiene un enlace doble, los sustituyentes pueden estar en la configuración E o Z. Los sustituyentes en radicales cíclicos (parcialmente) saturados bivalentes pueden tener ya sea la configuración cis o trans; por ejemplo, si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuración cis o trans. Por lo tanto, la invención incluye enantiómeros, atropisómeros, diastereómeros, racematos, isómeros E, isómeros Z, isómeros cis, isómeros trans y mezclas de los mismos, siempre que sea químicamente posible. El significado de todos esos términos, es decir, enantiómeros, atropisómeros, diastereómeros, racematos, isómeros E, isómeros Z, isómeros cis, isómeros trans y mezclas de los mismos son conocidos por el experto en la técnica. Los compuestos de la invención incluyen compuestos con una o más sustituciones isotópicas, y una referencia a un elemento particular incluye dentro de su alcance todos los isótopos del elemento, ya sea producidos de forma natural o producidos sintéticamente, ya sea con abundancia natural o en forma isotópicamente enriquecida. Por ejemplo, una referencia al hidrógeno incluye dentro de su alcance<1>H,<2>H (D) y<3>H (T). Asimismo, las referencias al carbono y al oxígeno incluyen dentro de su alcance respectivamente<12>C,<13>C y<14>C y<16>O y<18>O. Los isótopos pueden ser radiactivos o no radiactivos. En una realización de la invención, los compuestos no contienen isótopos radiactivos. Tales compuestos se prefieren para uso terapéutico. Sin embargo, en otra realización el compuesto puede contener uno o más radioisótopos. Los compuestos que contienen dichos radioisótopos pueden ser útiles en un contexto de diagnóstico. Los compuestos radiomarcados de fórmula (I) pueden comprender un isótopo radiactivo seleccionado del grupo de<2>H,<3>H,<11>C,<18>F,<122>I,<123>I,<125>I,<131>I,<75>Br,<76>Br,<77>Br y<82>Br. Preferiblemente, el isótopo radioactivo se selecciona del grupo de<2>H,<3>H,<11>C y<18>F. Más preferiblemente, el isótopo radiactivo es<2>H.

En particular, se pretende que los compuestos deuterados se incluyan dentro del alcance de la presente invención. Farmacología

Proteína tirosina quinasas (PTK)

Los compuestos de la invención descritos en la presente memoria inhiben o modulan la actividad de ciertas tirosina quinasas y, por lo tanto, los compuestos serán útiles en el tratamiento o profilaxis, en particular el tratamiento, de estados patológicos o afecciones mediadas por esas tirosina quinasas, en particular FGFR.

FGFR

La familia del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) de los receptores de proteína tirosina quinasa (PTK) regula una amplia gama de funciones fisiológicas que incluyen mitogénesis, cicatrización de heridas, diferenciación celular y angiogénesis y desarrollo. Tanto el crecimiento celular normal como maligno, así como la proliferación, se ven afectados por cambios en la concentración local de FGF, moléculas de señalización extracelular que actúan como factores autocrinos así como paracrinos. La señalización autocrina de FGF puede ser particularmente importante en la progresión de cánceres dependientes de hormonas esteroides a un estado independiente de hormonas. Los FGF y sus receptores se expresan a niveles aumentados en varios tejidos y líneas celulares y se cree que la sobreexpresión contribuye al fenotipo maligno. Además, un número de oncogenes son homólogos de genes que codifican receptores de factor de crecimiento, y existe un potencial para la activación aberrante de la señalización dependiente de FGF en cáncer pancreático humano (Knights y col., Pharmacology and Therapeutics 2010125:1 (105-117); Korc M. y col. Current Cancer Drug Targets 20099:5 (639-651). Los dos miembros prototípicos son el factor de crecimiento de fibroblastos ácido (aFGF o FGF1) y el factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF o FGF2), y hasta la fecha, se han identificado al menos veinte miembros de la familia de FGF distintos. La respuesta celular a los FGF se transmite a través de cuatro tipos de receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR) de la proteína transmembrana de alta afinidad numerados del 1 al 4 (FGFR1 a FGFR4).

La interrupción de la vía de FGFR1 debe afectar la proliferación de células tumorales ya que esta quinasa se activa en muchos tipos de tumores además de las células endoteliales proliferantes. La sobreexpresión y activación de FGFR1 en la vasculatura asociada a tumores ha sugerido un papel de estas moléculas en la angiogénesis tumoral. Un estudio reciente ha mostrado un vínculo entre la expresión de FGFR1 y la tumorigenicidad en carcinomas lobulares clásicos (CLC, por sus siglas en inglés). CLC representan el 10-15 % de todos los cánceres de mama y, en general, carecen de la expresión de p53 y Her2 al tiempo que conservan la expresión del receptor de estrógenos. Se demostró una amplificación génica de 8p12-p11.2 en ~50 % de casos de CLC y esto se demostró que estaba unido con una expresión aumentada de FGFR1. Estudios preliminares con ARNip dirigido contra FGFR1, o un inhibidor de molécula pequeña del receptor, mostraron que las líneas celulares que albergan esta amplificación son particularmente sensibles a la inhibición de esta vía de señalización. El rabdomiosarcoma (RMS, por sus siglas en inglés) es el sarcoma de tejido blando pediátrico más común probablemente debido a la proliferación y diferenciación anormales durante la miogénesis esquelética. FGFR1 se sobreexpresa en tumores de rabdomiosarcoma primario y se asocia con hipometilación de una isla de CpG de 5' y expresión anormal de los genes AKT1, NOG y BMP4.

El receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos tiene una alta afinidad por los factores de crecimiento de fibroblastos ácidos y/o básicos, así como los ligandos del factor de crecimiento de queratinocitos. El receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos también propaga los potentes efectos osteogénicos de los FGF durante el crecimiento y la diferenciación de los osteoblastos. Se demostró que las mutaciones en el receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos, lo que conduce a alteraciones funcionales complejas, induce una osificación anormal de las suturas craneales (cranosinostosis), lo que implica un papel importante de la señalización de FGFR en la formación de hueso intramembrano. Por ejemplo, en el síndrome de Apert (AP), caracterizado por osificación prematura de la sutura craneal, la mayoría de los casos están asociados con mutaciones puntuales que generan ganancia de función en el receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos. Además, la selección de mutaciones en pacientes con cranosinostosis sindrómica indica que un número de mutaciones de FGFR2 representan formas graves del síndrome de Pfeiffer. Las mutaciones particulares de FGFR2 incluyen W290C, D321A, Y340C, C342R, C342S, C342W, N549H, K641R en FGFR2.

Varias anormalidades graves en el desarrollo esquelético humano, incluyendo los síndromes de Apert, Crouzon, Jackson-Weiss, Beis-Stevenson cutis gyrata, y Pfeiffer están asociados con la aparición de mutaciones en el receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos. La mayoría de, si no todos, los casos del Síndrome de Pfeiffer (PS) también son causados por la mutación de novo del gen del receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos, y recientemente se demostró que las mutaciones en el gen del receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos rompen una de las reglas cardinales que rigen la especificidad del ligando. Es decir, dos formas de corte y empalme mutantes del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos, FGFR2c y FGFR2b, han adquirido la capacidad de unirse y activarse por ligandos atípicos de FGF. Esta pérdida de especificidad del ligando conduce a una señalización aberrante y sugiere que los fenotipos graves de estos síndromes de enfermedad resultan de la activación ectópica dependiente del ligando del receptor 2 del factor de crecimiento de fibroblastos.

Las aberraciones genéticas de la tirosina quinasa del receptor FGFR3, tales como translocaciones cromosómicas o mutaciones puntuales, dan como resultado receptores FGFR3 expresados ectópicamente o desregulados, constitutivamente activos. Tales anormalidades están vinculadas a un subconjunto de mielomas múltiples y en vejiga, hepatocelular, carcinoma oral de células escamosas y carcinomas cervicales. Por consiguiente, los inhibidores de FGFR3 serían útiles en el tratamiento de mieloma múltiple, carcinomas de vejiga y cervicales. FGFR3 también se sobreexpresa en cáncer de vejiga, en particular cáncer de vejiga invasivo. FGFR3 se activa frecuentemente por mutación en carcinoma urotelial (UC). El aumento de la expresión se asoció con la mutación (85 % de los tumores mutantes mostró una expresión de alto nivel) pero también el 42 % de los tumores sin mutación detectable mostraron sobreexpresión, incluidos muchos tumores musculares invasivos.

La sobreexpresión de FGFR4 se ha relacionado con un mal pronóstico tanto en los carcinomas de próstata como de tiroides. Además, un polimorfismo de la línea germinal (Gly388Arg) se asocia con una mayor incidencia de cánceres de pulmón, mama, colon, hígado (HCC) y próstata. Además, también se ha encontrado que una forma truncada de FGFR4 (incluido el dominio quinasa) está presente en el 40 % de los tumores hipofisarios pero no está presente en el tejido normal. Se ha observado sobreexpresión de FGFR4 en tumores de hígado, colon y pulmón. FGFR4 se ha implicado en el cáncer colorrectal y hepático donde la expresión de su ligando FGF19 es frecuentemente elevada.

Las afecciones fibróticas son un problema médico importante que resulta de la deposición anormal o excesiva de tejido fibroso. Esto ocurre en muchas enfermedades, incluyendo cirrosis hepática, glomerulonefritis, fibrosis pulmonar, fibrosis sistémica, artritis reumatoide, así como el proceso natural de cicatrización de heridas. Los mecanismos de fibrosis patológica no se comprenden completamente, pero se cree que resultan de las acciones de diversas citocinas (incluyendo el factor de necrosis tumoral (TNF), los factores de crecimiento de fibroblastos (FGF), el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento transformante beta. (TGFp) involucrado en la proliferación de fibroblastos y la deposición de proteínas de la matriz extracelular (incluyendo colágeno y fibronectina). Esto da como resultado una alteración de la estructura y función del tejido y la patología posterior.

Varios estudios preclínicos han demostrado la regulación positiva de factores de crecimiento de fibroblastos en modelos preclínicos de fibrosis pulmonar. Se ha informado que TGFβ1 y PDGF están implicados en el proceso fibrogénico y el trabajo publicado adicional sugiere la elevación de FGF y el consiguiente aumento en la proliferación de fibroblastos, puede ser en respuesta a TGFβ1 elevado. El beneficio terapéutico potencial de dirigir el mecanismo fibrótico en afecciones tales como fibrosis pulmonar idiopática (IPF) se sugiere por el efecto clínico informado del agente antifibrótico pirfenidona. La fibrosis pulmonar idiopática (también denominada alveolitis fibrogénica criogénica) es una afección progresiva que implica cicatrices del pulmón. Gradualmente, los sacos de aire de los pulmones se reemplazan por tejido fibrótico, que se vuelve más grueso, provocando una pérdida irreversible de la capacidad del tejido para transferir oxígeno al torrente sanguíneo. Los síntomas de la afección incluyen dificultad para respirar, tos seca crónica, fatiga, dolor torácico y pérdida de apetito, lo que resulta en una rápida pérdida de peso. La condición es extremadamente grave con aproximadamente un 50 % de mortalidad después de 5 años.

Como tal, los compuestos que inhiben FGFR serán útiles para proporcionar un medio para prevenir el crecimiento o inducir apoptosis en tumores, particularmente inhibiendo la angiogénesis. Por lo tanto, se anticipa que los compuestos resultarán útiles en el tratamiento o prevención de trastornos proliferativos tales como cánceres. En particular, los tumores con mutantes activadores de tirosina quinasas receptoras o la regulación positiva de tirosina quinasas receptoras pueden ser particularmente sensibles a los inhibidores. Los pacientes con mutantes activadores de cualquiera de las isoformas de las RTK específicas discutidas en la presente memoria también pueden encontrar tratamiento con inhibidores de RTK particularmente beneficiosos.

Como se indicó anteriormente, una variedad de inhibidores de FGFR están en ensayos clínicos y han mostrado respuesta clínica en pacientes con aberraciones de FGFR. Sin embargo, se ha informado que las mutaciones que afectan a los aminoácidos en FGFR, por ejemplo, FGFR1, 2 o 3, pueden causar resistencia a inhibidores de FGFR o disminuir la sensibilidad a los inhibidores de FGFR. El desarrollo de mutaciones secundarias del dominio de la quinasa de FGFR tras el tratamiento con inhibidores de FGFR son un mecanismo importante de resistencia adquirida a la inhibición de FGFR. Las mutaciones puntuales de FGFR equivalentes existen también de novo en cánceres. Se han informado mutaciones guardián como uno de los mecanismos principales que conducen a la resistencia a los inhibidores de tirosina quinasa. Las mutaciones guardián incluyen FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M y FGFR4 V550L. Se han informado mutaciones resistentes a FGFR en ensayos clínicos y sistemas celulares in vitro. Por lo tanto, se necesitan nuevos inhibidores de FGFR (segunda generación) para superar la resistencia clínica adquirida a la terapia de inhibidor de FGFR de primera generación y para mantener la actividad inhibidora de FGFR contra las mutaciones de FGFR activadoras primarias al mismo tiempo.

Se encontró que los compuestos de la invención muestran actividad contra FGFR de tipo silvestre, en particular FGFR1, 2, 3 o 4, más en particular FGFR3, pero también contra FGFR mutados, en particular contra FGFR que albergan mutaciones guardián o contra FGFR1 mutado o FGFR2 mutado o FGFR3 mutado, en particular contra FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, particularmente contra FGFR3 V555L y FGFR3 V555M.

Actividad biológica y usos terapéuticos

Los compuestos de la invención, y subgrupos de los mismos, tienen actividad inhibidora o moduladora del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR) y serán útiles para prevenir o tratar, en particular tratar estados patológicos o afecciones descritas en la presente memoria. Además, los compuestos de la invención, y subgrupos de los mismos, serán útiles para prevenir o tratar, en particular tratar enfermedades o afecciones mediadas por las quinasas. Las referencias a la prevención o profilaxis o tratamiento de un estado o afección de enfermedad tal como cáncer incluyen dentro de su alcance aliviar o reducir la incidencia del cáncer.

En una realización, los compuestos de fórmula (I) son inhibidores de ATP-competencia de la quinasa de FGFR. Según se usa en la presente memoria, el término “modulación”, como se aplica a la actividad de una quinasa, pretende definir un cambio en el nivel de actividad biológica de la proteína quinasa. Por lo tanto, la modulación abarca cambios fisiológicos que afectan un aumento o disminución en la actividad de la proteína quinasa relevante. En el último caso, la modulación puede describirse como “inhibición”. La modulación puede surgir directa o indirectamente, y puede estar mediada por cualquier mecanismo y a cualquier nivel fisiológico, que incluye, por ejemplo, al nivel de expresión génica (que incluye, por ejemplo, la transcripción, traducción y/o modificación postraduccional), al nivel de expresión de genes que codifican elementos reguladores que actúan directa o indirectamente sobre los niveles de actividad de quinasa. Por lo tanto, la modulación puede implicar expresión o subexpresión excesiva o insuficiente de una quinasa, que incluye la amplificación génica (es decir, múltiples copias de genes) y/o aumento o disminución de la expresión por un efecto transcripcional, así como también la hiper (o hipo)actividad y (des)activación de la(s) proteína(s) quinasa(s) (incluida la (des)activación) por mutación(es). Los términos “modulado”, “modulador” y “modular” deben interpretarse en consecuencia.

Según se usa en la presente memoria, el término “mediado”, como se usa, p. ej., junto con una quinasa como se describe en la presente memoria (y se aplica, por ejemplo, a diversos procesos fisiológicos, enfermedades, estados, afecciones, terapias, tratamientos o intervenciones) se pretende que funcione de manera limitante para que los diversos procesos, enfermedades, estados, afecciones, tratamientos e intervenciones a las que se aplica el término son aquellos en los que la quinasa juega un papel biológico. En los casos en que el término se aplica a un estado o afección de enfermedad, el papel biológico desempeñado por una quinasa puede ser directo o indirecto y puede ser necesario y/o suficiente para la manifestación de los síntomas del estado o afección de enfermedad (o su etiología o progresión). Por lo tanto, la actividad de la quinasa (y en particular los niveles aberrantes de la actividad de la quinasa, por ejemplo, la sobreexpresión de quinasas) no necesita necesariamente ser la causa proximal del estado de la enfermedad: más bien, se contempla que las enfermedades, estados o afecciones mediadas por la quinasa incluyen aquellas que tienen etiologías multifactoriales y progresiones complejas en las que la quinasa en cuestión solo está parcialmente involucrada. En los casos en que el término se aplica al tratamiento, profilaxis o intervención, el papel desempeñado por la quinasa puede ser directo o indirecto y puede ser necesario y/o suficiente para el funcionamiento del tratamiento, profilaxis o resultado de la intervención. Por lo tanto, una patología o afección mediada por una quinasa incluye el desarrollo de resistencia a cualquier fármaco o tratamiento específico del cáncer.

Por lo tanto, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden ser útiles para aliviar o reducir la incidencia del cáncer.

Más particularmente, los compuestos de las fórmulas (I) y subgrupos de los mismos son inhibidores de FGFR. Por ejemplo, los compuestos de la invención tienen actividad contra FGFR1, FGFR2, FGFR3 y/o FGFR4, y en particular contra FGFR1, 2 y 3. Más en particular, los compuestos de la presente invención muestran actividad contra FGFR de tipo silvestre y/o contra FGFR mutados, en particular FGFR con mutaciones puntuales, más en particular contra mutaciones guardián. Las mutaciones guardián incluyen FGFR3 VSSSL/VSSSM, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M y FGFR4 V550L. En particular, los compuestos de la presente invención muestran actividad contra FGFR1, FGFR2 y FGFR3 mutados de guardián, más en particular contra FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, en particular contra FGFR3 V555L y FGFR3 V555M.

El diagnóstico de tumores con mutaciones podría realizarse mediante el uso de técnicas conocidas por un experto en la técnica y como se describe en la presente memoria como RT-PCR y FISH.

Ejemplos de cánceres que pueden tratarse (o inhibirse) incluyen, aunque no de forma limitativa a, un carcinoma, por ejemplo, un carcinoma de vejiga, mama, colon (p. ej., carcinomas colorrectales tales como adenocarcinoma de colon y adenoma de colon), riñón, urotelial, útero, epidermis, hígado, pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células pequeñas y carcinomas de pulmón de células no pequeñas (p. ej., adenocarcinoma y carcinoma de células escamosas)), esófago, cabeza y cuello, vesícula biliar, ovario, páncreas (p. ej., carcinoma de páncreas exocrino), cáncer de estómago, gastrointestinal (también conocido como gástrico) (p. ej., tumores del estroma gastrointestinal), cuello uterino, endometrio, tiroides, próstata o piel (p. ej., carcinoma de células escamosas o dermatofibrosarcoma protuberante); cáncer pituitario, un tumor hematopoyético del linaje linfoide, por ejemplo, leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, linfoma de células B (p. ej., linfoma difuso de células B grandes), linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas o linfoma de Burkitt; un tumor hematopoyético de linaje mieloide, por ejemplo, leucemias, leucemias mielógenas agudas y crónicas, leucemia mielomonocítica crónica (CMML), trastorno mieloproliferativo, síndrome mieloproliferativo, síndrome mielodisplásico o leucemia promielocítica; mieloma múltiple; cáncer folicular tiroideo; cáncer hepatocelular, un tumor de origen mesenquimatoso (p. ej., sarcoma de Ewing), por ejemplo, fibrosarcoma o rabdomiosarcoma; un tumor del sistema nervioso central o periférico, por ejemplo, astrocitoma, neuroblastoma, glioma (tal como glioblastoma multiforme) o schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xerodermia pigmentaria; queratoacantoma; cáncer folicular tiroideo; o sarcoma de Kaposi. En particular, cáncer de pulmón escamoso, cáncer de mama, cáncer colorrectal, glioblastoma, astrocitomas, cáncer de próstata, cáncer de pulmón de células pequeñas, melanoma, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de tiroides, cáncer de útero, cáncer gástrico, cáncer hepatocelular, cáncer de cuello uterino, mieloma múltiple, cáncer de vejiga, cáncer de endometrio, cáncer urotelial, cáncer de colon, rabdomiosarcoma, cáncer de glándula pituitaria, colangiocarcinoma.

Los ejemplos de cánceres que pueden tratarse (o inhibirse) incluyen, aunque no de forma limitativa a, cáncer de vejiga, cáncer urotelial, cáncer urotelial metastásico, cáncer urotelial quirúrgicamente no resecable, cáncer de mama, glioblastoma, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células escamosas, adenocarcinoma del pulmón, adenocarcinoma pulmonar, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, sarcoma de tejido blando, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer gástrico, cáncer de esófago, carcinoma de células escamosas del esófago, adenocarcinoma del esófago, colangiocarcinoma, carcinoma hepatocelular.

Ciertos cánceres son resistentes al tratamiento con fármacos particulares. Esto puede deberse al tipo de tumor o puede surgir debido al tratamiento con el compuesto. En este sentido, las referencias al mieloma múltiple incluyen mieloma múltiple sensible al bortezomib o mieloma múltiple refractario. De manera similar, las referencias a leucemia mielógena crónica incluyen leucemia mielógena crónica sensible a imitanib y leucemia mielógena crónica refractaria. La leucemia mielógena crónica también se conoce como leucemia mieloide crónica, leucemia granulocítica crónica o LMC. Asimismo, la leucemia mielógena aguda, también se denomina leucemia mieloblástica aguda, leucemia granulocítica aguda, leucemia no linfocítica aguda o LMA.

Los compuestos de la invención también pueden usarse en el tratamiento de enfermedades hematopoyéticas de proliferación celular anormal ya sea premaligno o estable tales como enfermedades mieloproliferativas. Las enfermedades mieloproliferativas (“MPD”) son un grupo de enfermedades de la médula ósea en las que se producen células en exceso. Están relacionadas con, y pueden evolucionar en, síndrome mielodisplásico. Las enfermedades mieloproliferativas incluyen policitemia vera, trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria. Otro trastorno hematológico es el síndrome hipereosinofílico. Las enfermedades linfoproliferativas de células T incluyen las derivadas de células destructoras naturales.

Además, los compuestos de la invención pueden usarse para tratar el cáncer gastrointestinal (también conocido como gástrico), por ejemplo, tumores del estroma gastrointestinal. El cáncer gastrointestinal se refiere a afecciones malignas del tracto gastrointestinal, que incluyen el esófago, estómago, hígado, sistema biliar, páncreas, intestinos y ano.

Por lo tanto, en los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección que comprende un crecimiento celular anormal, la enfermedad o afección que comprende el crecimiento celular anormal en una realización es un cáncer.

Los subconjuntos particulares de cánceres incluyen cánceres de mieloma múltiple, vejiga, cuello uterino, próstata, tiroides, pulmón, mama y colon.

Un subconjunto adicional de cánceres incluye mieloma múltiple, vejiga, hepatocelular, carcinoma oral de células escamosas y carcinomas cervicales.

Los compuestos de la invención, que tienen FGFR tal como la actividad inhibidora de FGFR1, pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o prevención del cáncer de mama en particular carcinomas lobulares clásicos (CLC) y cáncer de pulmón con amplificación de FGFR1 o mutaciones de FGFR1.

Como los compuestos de la invención tienen actividad de FGFR4, también serán útiles en el tratamiento de cánceres de próstata o pituitaria, o serán útiles en el tratamiento del cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de hígado (HCC) o cáncer de pulmón.

En particular, los compuestos de la invención como inhibidores de FGFR son útiles en el tratamiento de mieloma múltiple, trastornos mieloproliferativos, cáncer de endometrio, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer colorrectal y carcinoma oral de células escamosas. Los subconjuntos adicionales del cáncer son mieloma múltiple, cáncer de endometrio, cáncer de vejiga, cáncer de cuello uterino, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal y carcinomas de tiroides. En particular, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento del mieloma múltiple (en particular mieloma múltiple con t (4; 14) translocación o sobreexpresión de FGFR3), cáncer de próstata (carcinomas de próstata resistentes a hormonas), cáncer de endometrio (en particular tumores endometriales con mutaciones activadoras en FGFR2) y cáncer de mama (en particular cáncer de mama lobular).

En particular, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento del colangiocarcinoma, en particular colangiocarcinoma con translocaciones y mutaciones de FGFR, o amplificaciones de FGF 19.

En particular, los compuestos son útiles en el tratamiento de carcinomas lobulares tales como CLC (carcinoma lobular clásico).

Como los compuestos tienen actividad contra FGFR3, serán útiles en el tratamiento de mieloma múltiple y cáncer de vejiga. En particular, los compuestos tienen actividad contra tumores con translocación de FGFR3-TACC3, en particular tumores de vejiga o cerebro con translocación de FGFR3-TACC3.

En particular, los compuestos son útiles para el tratamiento de t (4; 14) mieloma múltiple positivo con translocación. En una realización, los compuestos pueden ser útiles para el tratamiento del sarcoma. En una realización, los compuestos pueden ser útiles para el tratamiento del cáncer de pulmón, por ejemplo, carcinoma de células escamosas.

Como los compuestos tienen actividad contra FGFR2, serán útiles en el tratamiento de cánceres de endometrio, ovario, gástrico, hepatocelular, uterino, cuello uterino y colorrectal. FGFR2 también se sobreexpresa en el cáncer epitelial de ovario, por lo tanto, los compuestos de la invención pueden ser específicamente útiles en el tratamiento de cáncer de ovario tal como cáncer de ovario epitelial.

En una realización, los compuestos pueden ser útiles para el tratamiento del cáncer de pulmón, en particular NSCLC (cáncer de pulmón de células no pequeñas), carcinoma de células escamosas, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, cáncer de próstata.

Los cánceres pueden ser cánceres que son sensibles a la inhibición de uno o más FGFR seleccionados de FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, por ejemplo, uno o más FGFR seleccionados de FGFR1, FGFR2 o FGFR3.

Si un cáncer particular es o no uno que es sensible a la inhibición de la señalización de FGFR puede determinarse por medio de un ensayo de crecimiento celular como se expone a continuación o mediante un método como se establece en la sección titulada “Métodos de diagnóstico”.

Los compuestos de la invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o prevención de cánceres de un tipo asociado o caracterizado por la presencia de niveles elevados de FGFR.

Los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de otras afecciones que resultan de trastornos en la proliferación tales como diabetes mellitus tipo II o no dependiente de insulina, enfermedades autoinmunitarias, traumatismo craneal, accidente cerebrovascular, epilepsia, enfermedades neurodegenerativas tales como Alzheimer, enfermedad de neuronas motoras, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal y enfermedad de Pick, por ejemplo, enfermedades autoinmunes y enfermedades neurodegenerativas.

Un subgrupo de estados de enfermedad y afecciones en los que los compuestos de la invención pueden ser útiles consiste en enfermedades inflamatorias, enfermedades cardiovasculares y cicatrización de heridas.

También se sabe que FGFR desempeña un papel en la apoptosis, angiogénesis, proliferación, diferenciación y transcripción y, por lo tanto, los compuestos de la invención también podrían ser útiles en el tratamiento de las siguientes enfermedades distintas del cáncer; enfermedades inflamatorias crónicas, por ejemplo, lupus eritematoso sistémico, glomerulonefritis mediada autoinmune, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria intestinal, diabetes mellitus autoinmune, reacciones de hipersensibilidad a la eccema, asma, EPOC, rinitis y enfermedad del tracto respiratorio superior; enfermedades cardiovasculares, por ejemplo, hipertrofia cardíaca, reestenosis, aterosclerósida; trastornos neurodegenerativos, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer, demencia relacionada con el SIDA, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, retinosis pigmentaria, atrofia muscular espinal y degeneración cerebelar; glomerulonefritis; síndromes mielodisplásicos, lesión isquémica asociada a infartos de miocardio, lesión por accidente cerebrovascular y reperfusión, arritmia, aterosclerosis, enfermedades hepáticas inducidas por toxinas o relacionadas con el alcohol, enfermedades hematológicas, por ejemplo, anemia crónica y anemia aplásica; enfermedades degenerativas del sistema musculoesquelético, por ejemplo, osteoporosis y artritis, rinosinusitis sensible a la aspirina, fibrosis quística, esclerosis múltiple, enfermedades renales y dolor de cáncer. Además, las mutaciones de FGFR2 están asociadas con varias anormalidades graves en el desarrollo esquelético humano y, por lo tanto, los compuestos de la invención podrían ser útiles en el tratamiento de anomalías en el desarrollo esquelético humano, incluyendo una osificación anormal de suturas craneales (cranosinostosis), síndrome de Apert (AP), síndrome de Crouzon, síndrome de Jackson-Weiss, síndrome de Beare-Stevenson cutis gyrata y síndrome de Pfeiffer. El compuesto de la invención, que tiene FGFR tal como la actividad inhibidora de FGFR2 o FGFR3, puede ser particularmente útil en el tratamiento o prevención de las enfermedades esqueléticas. Las enfermedades esqueléticas particulares son la acondroplasia o el danismo cuatófórico (también conocido como displasia tanatofórica).

El compuesto de la invención, que tiene FGFR tal como la actividad inhibidora de FGFR1, FGFR2 o FGFR3, puede ser particularmente útil en el tratamiento o prevención en patologías en las que la fibrosis progresiva es un síntoma. Las afecciones fibróticas en las que los compuestos de las invenciones pueden ser útiles en el tratamiento de las enfermedades que exhiben una deposición anormal o excesiva de tejido fibroso, por ejemplo, en cirrosis hepática, glomerulonefritis, fibrosis pulmonar, fibrosis sistémica, artritis reumatoide, así como también el proceso natural de cicatrización de heridas. En particular, los compuestos de las invenciones también pueden ser útiles en el tratamiento de la fibrosis pulmonar en particular en fibrosis pulmonar idiopática.

La sobreexpresión y activación de FGFR y VEGFR en la vasculatura asociada a tumores también ha sugerido un papel para los compuestos de la invención para prevenir yeinterrumpir el inicio de la angiogénesis tumoral. En particular, los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer, metástasis, leucemia tales como CLL, enfermedades oculares tales como degeneración macular relacionada con la edad en particular, la forma húmeda de degeneración macular relacionada con la edad, retinopatías proliferativas isquémicas tales como retinopatía del prematuro (ROP) y retinopatía diabética, artritis reumatoide y hemangioma.

La actividad de los compuestos de la invención como inhibidores de FGFR1-4, en particular FGFR3 mutado, tal como, por ejemplo, FGFR3 V555L y FGFR3 V555M, puede medirse usando los ensayos establecidos en los ejemplos siguientes y el nivel de actividad exhibido por un compuesto dado puede definirse en términos del valor de IC50. Los compuestos preferidos de la presente invención son compuestos que tienen un valor de IC50inferior a 1 µM, más preferiblemente inferior a 0,1 µM, inferior a 0,01 µM o inferior a 0,001 µM.

La invención proporciona compuestos que tienen actividad inhibidora o moduladora de FGFR, y que pueden ser útiles para prevenir o tratar estados patológicos o afecciones mediadas por quinasas de FGFR.

En una realización, se proporciona un compuesto según se define en la presente memoria para su uso en terapia, para su uso como medicamento. En otra realización, se proporciona un compuesto según se define en la presente memoria para su uso en la profilaxis o el tratamiento, en particular en el tratamiento, de un estado de enfermedad o afección mediada por una quinasa de FGFR.

Por lo tanto, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden ser útiles para aliviar o reducir la incidencia del cáncer. Por lo tanto, en otra realización, se proporciona un compuesto según se define en la presente memoria para su uso en la profilaxis o el tratamiento, en particular el tratamiento, del cáncer. En una realización, el compuesto según se define en la presente memoria es para su uso en la profilaxis o el tratamiento, en particular el tratamiento, del cáncer dependiente de FGFR. En una realización, el compuesto según se define en la presente memoria es para su uso en la profilaxis o el tratamiento, en particular el tratamiento, del cáncer mediado por las quinasas de FGFR.

Por tanto, la descripción proporciona entre otros:

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la profilaxis o el tratamiento de un estado o afección de enfermedad mediada por una quinasa de FGFR.

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la profilaxis o el tratamiento de un estado o afección de enfermedad como se describe en la presente memoria.

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para aliviar o reducir la incidencia de un estado de enfermedad o afección mediada por una quinasa de FGFR.

- Un compuesto inhibidor de quinasa de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para inhibir una quinasa de FGFR, que comprende poner en contacto la quinasa con el compuesto inhibidor de quinasa de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria.

- Un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para su uso como modulador de un proceso celular (por ejemplo, división celular) mediante la inhibición de la actividad de una quinasa de FGFR. - Un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para su uso en la profilaxis o el tratamiento del cáncer, en particular el tratamiento del cáncer, en particular un cáncer que alberga FGFR1, FGFR2 o FGFR3 mutado guardián, más en particular un cáncer que alberga FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M o FGFR2 V564I, en particular FGFR3 V555L o FGFR3 V555M. En una realización, el cáncer alberga además de un FGFR1, FGFR2 o FGFR3 mutado guardián, una o más otras aberraciones de FGFR, tales como, por ejemplo, una o más mutaciones de FGFR o una o más translocaciones de FGFR, tales como las definidas en la presente memoria. - Un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para su uso como modulador (p. ej., inhibidor) de FGFR.

- Uso de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento, en particular el tratamiento, de un estado de enfermedad o afección mediada por una quinasa de FGFR, el compuesto que tiene la fórmula (I) según se define en la presente memoria. - Uso de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de un estado o afección de enfermedad como se describe en la presente memoria. - Uso de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento, en particular el tratamiento, del cáncer, en particular un cáncer que alberga FGFR1, FGFR2 o FGFR3 mutado guardián, más en particular un cáncer que alberga FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M o FGFR2 V564I, en particular FGFR3 V555L o FGFR3 V555M. En una realización, el cáncer alberga además de un FGFR1, FGFR2 o FGFR3 mutado guardián, una o más otras aberraciones de FGFR, tales como, por ejemplo, una o más mutaciones de FGFR o una o más translocaciones de FGFR, tales como las definidas en la presente memoria.

- Uso de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para modular (p. ej., inhibir) la actividad de FGFR.

- Uso de un compuesto de fórmula (I) según se define en la presente memoria en la fabricación de un medicamento para modular un proceso celular (p. ej., división celular) mediante la inhibición de la actividad de una quinasa de FGFR. - Uso de un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por la regulación positiva de una quinasa de FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

- Uso de un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de un cáncer, siendo el cáncer uno que se caracteriza por la regulación positiva de una quinasa de FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

- Uso de un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento del cáncer en un paciente seleccionado de una subpoblación que posee una aberración genética de quinasa de FGFR3.

- Uso de un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento del cáncer en un paciente que ha sido diagnosticado como parte de una subpoblación que posee una aberración genética de quinasa de FGFR3.

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para la profilaxis o el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por la regulación positiva de una quinasa de FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria para aliviar o reducir la incidencia de una enfermedad o afección caracterizada por la regulación positiva de una quinasa de FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria que tiene actividad inhibidora de quinasa de FGFR3 para la profilaxis o el tratamiento de (o aliviar o reducir la incidencia de) cáncer en un paciente que padece o se sospecha que padece cáncer; que comprende (i) someter a un paciente a una prueba de diagnóstico para determinar si el paciente posee una aberración genética del gen de FGFR3; y (ii) donde el paciente posee dicha variante, a continuación, administrar al paciente el compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria que tiene actividad inhibidora de quinasa de FGFR3.

- Un compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria que tiene actividad inhibidora de la quinasa FGFR para la profilaxis o el tratamiento de (o aliviar o reducir la incidencia de) un estado o afección de enfermedad caracterizada por la regulación positiva de una quinasa de FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4); que comprende (I) someter a un paciente a una prueba de diagnóstico para detectar un marcador característico de la regulación positiva de una quinasa FGFR (p. ej., FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4) y (ii) donde la prueba de diagnóstico es indicativa de la regulación positiva de una quinasa FGFR, a continuación, administrar al paciente el compuesto de la Fórmula (I) según se define en la presente memoria que tiene actividad inhibidora de la quinasa de FGFR.

En una realización, la enfermedad mediada por las quinasas de FGFR es una enfermedad relacionada con la oncología (p. ej., cáncer). En una realización, la enfermedad mediada por las quinasas de FGFR es una enfermedad no relacionada con la oncología (p. ej., cualquier enfermedad descrita en la presente memoria que excluye el cáncer). En una realización, la enfermedad mediada por las quinasas de FGFR es una afección descrita en la presente memoria. En una realización, la enfermedad mediada por las quinasas de FGFR es una afección esquelética descrita en la presente memoria. Las anormalidades particulares en el desarrollo esquelético humano incluyen una osificación anormal de suturas craneales (cranosinostosis), síndrome de Apert (AP), síndrome de Crouzon, síndrome de Jackson-Weiss, síndrome de Beare-Stevenson cutis gyrata, síndrome de Pfeiffer, acondroplasia y enanismo tanatofórico (también conocido como displasia tanatofórica).

Quinasas mutadas

Como se indicó anteriormente, las mutaciones de quinasa resistentes a fármacos pueden surgir en poblaciones de pacientes tratadas con inhibidores de quinasa. Estos ocurren, en parte, en las regiones de la proteína que se unen o interactúan con el inhibidor particular usado en la terapia. Tales mutaciones reducen o aumentan la capacidad del inhibidor para unirse e inhibir la quinasa en cuestión. Esto puede ocurrir en cualquiera de los residuos de aminoácidos que interactúan con el inhibidor o son importantes para soportar la unión de dicho inhibidor a la diana. Un inhibidor que se une a una quinasa diana sin requerir la interacción con el residuo de aminoácido mutado no se verá afectado por la mutación y permanecerá un inhibidor eficaz de la enzima.

Un estudio en muestras de pacientes con cáncer gástrico mostró la presencia de dos mutaciones en FGFR2, Ser167Pro en el exón IIIa y una mutación del sitio de corte y empalme 940-2A-G en el exón IIIc. Estas mutaciones son idénticas a las mutaciones activadoras de la línea germinal que causan síndromes de cranosinosis y se observaron en el 13 % de los tejidos de cáncer gástrico primario estudiados. Además, se observaron mutaciones activadoras en FGFR3 en el 5 % de las muestras de pacientes ensayadas y la sobreexpresión de FGFR se ha correlacionado con un mal pronóstico en este grupo de pacientes.

Además, existen translocaciones cromosómicas o mutaciones puntuales que se han observado en FGFR que dan lugar a estados biológicos de ganancia de función, sobreexpresados o constitutivamente activos.

Por lo tanto, los compuestos de la invención encontrarían una aplicación particular en relación con cánceres que expresan una diana molecular mutada tal como FGFR. El diagnóstico de tumores con tales mutaciones podría realizarse mediante el uso de técnicas conocidas por un experto en la técnica y como se describe en la presente memoria como RT-PCR y FISH. Se ha sugerido que las mutaciones de un residuo de treonina conservado en el sitio de unión de ATP de FGFR resultarían en resistencia a inhibidores. El aminoácido valina 561 ha sido mutado a una metionina en FGFR1 que corresponde a mutaciones previamente informadas encontradas en Abl (T315) y EGFR (T766) que se ha demostrado que confiere resistencia a inhibidores selectivos. Los datos de ensayo para FGFR1 V561M mostraron que esta mutación confirió resistencia a un inhibidor de tirosina quinasa en comparación con la del tipo silvestre. Otras mutaciones que se han encontrado son las mutaciones guardián FGFR3 VSSSL/VSSSM, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M y FGFR4 V550L. Los compuestos de la invención son específicamente activos contra las mutaciones guardián, en particular contra FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, particularmente contra FGFR3 V555L y FGFR3 V555M. Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento de la población adulta. Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento de la población pediátrica.

Métodos de diagnóstico

Antes de la administración de un compuesto de fórmula (I), se puede examinar a un paciente para determinar si una enfermedad o afección que padece o puede sufrir el paciente es susceptible de tratamiento con un compuesto que tenga actividad contra FGFR, en particular FGFR que alberga mutaciones puntuales, en particular mutaciones guardián de FGFR tales como, por ejemplo, FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, en particular FGFR3 V555L y FGFR3 V555M. En una realización, el cáncer alberga además de una mutación de guardián de FGFR, en particular un FGFR1, FGFR2 o FGFR3 mutado guardián, tal como, por ejemplo, FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, en particular FGFR3 V555L y FGFR3 V555M, una o más de otras aberraciones de FGFR, tales como por ejemplo, una o más mutaciones de FGFR o una o más translocaciones de FGFR, tales como las definidas en la presente memoria. Por ejemplo, una muestra biológica tomada de un paciente puede analizarse para determinar si una afección o enfermedad, tal como cáncer, que el paciente padece o puede estar padeciendo es una que se caracteriza por una anomalía genética o expresión de proteínas anormales que conduce a la regulación positiva de los niveles o actividad de FGFR o a la sensibilización de una vía a la actividad de FGFR normal, o a la regulación positiva de estas vías de señalización del factor de crecimiento tales como los niveles de ligando del factor de crecimiento o la actividad del ligando del factor de crecimiento o para la regulación positiva de una ruta bioquímica aguas abajo de la activación de FGFR. Los ejemplos de tales anormalidades que dan como resultado la activación o sensibilización de la señal de FGFR incluyen la pérdida o inhibición de las vías apoptóticas, la regulación positiva de los receptores o ligandos, o la presencia de variantes mutantes de los receptores o ligandos, por ejemplo, variantes de PTK. Los tumores con mutantes de FGFR1, FGFR2 o FGFR3 o FGFR4 o la regulación positiva, en particular la sobreexpresión de mutantes FGFR1, o ganancia de función de FGFR2 o FGFR3 pueden ser particularmente sensibles a los inhibidores de FGFR. Por ejemplo, se han identificado mutaciones puntuales que generan ganancia de función en FGFR2 en varias condiciones. En particular, se han identificado mutaciones activadoras en FGFR2 en el 10 % de los tumores endometriales.

Además, se han identificado aberraciones genéticas de la tirosina quinasa del receptor FGFR3, tales como translocaciones cromosómicas o mutaciones puntuales, que dan como resultado receptores FGFR3 expresados ectópicamente o desregulados, constitutivamente activos y están unidos a un subconjunto de mielomas múltiples, de vejiga y de carcinomas cervicales. Se ha identificado una mutación particular T674I del receptor de PDGF en pacientes tratados con imatinib. Además, se demostró una amplificación génica de 8p 12-p 11.2 en ~50 % de casos de cáncer de mama lobular (CLC) y esto se demostró que estaba unido con una expresión aumentada de FGFR1. Estudios preliminares con ARNip dirigido contra FGFR1, o un inhibidor de molécula pequeña del receptor, mostraron que las líneas celulares que albergan esta amplificación son particularmente sensibles a la inhibición de esta vía de señalización. Alternativamente, una muestra biológica tomada de un paciente puede analizarse para determinar la pérdida de un regulador o supresor negativo de FGFR. En el presente contexto, el término “pérdida” abarca la deleción de un gen que codifica el regulador o supresor, el truncamiento del gen (por ejemplo, por mutación), el truncamiento del producto transcrito del gen o la inactivación del producto transcrito (p. ej., por mutación puntual) o secuestro por otro producto génico.

El término regulación positiva incluye expresión elevada o sobreexpresión, que incluye la amplificación génica (es decir, múltiples copias de genes) y la expresión aumentada por un efecto transcripcional, e hiperactividad y activación, incluyendo la activación por mutaciones. Por lo tanto, el paciente puede someterse a una prueba de diagnóstico para detectar un marcador característico de la regulación positiva de FGFR. El término diagnóstico incluye la selección. Por marcador, se incluyen marcadores genéticos que incluyen, por ejemplo, la medición de la composición de ADN para identificar mutaciones de FGFR. El término marcador también incluye marcadores que son característicos de la regulación positiva de FGFR, incluyendo actividad enzimática, niveles enzimáticos, estado enzimático (p. ej., fosforilados o no) y niveles de ARNm de las proteínas mencionadas anteriormente.

Las pruebas de diagnóstico y selección se realizan típicamente en una muestra biológica seleccionada de muestras de biopsia de tumor, muestras de sangre (aislamiento y enriquecimiento de células tumorales desprendidas), biopsias de heces, esputo, análisis cromosómico, líquido pleural, fluido peritoneal, focos bucales, biopsia u orina. Los métodos de identificación y análisis de mutaciones y la regulación positiva de proteínas son conocidos por un experto en la técnica. Los métodos de selección podrían incluir, aunque no de forma limitativa, métodos estándar tales como reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) o hibridación in situ tal como hibridación fluorescente in situ (FISH).

La identificación de un individuo que porta una mutación en FGFR puede significar que el paciente sería particularmente adecuado para el tratamiento con un inhibidor de FGFR. Los tumores pueden analizarse preferiblemente para detectar la presencia de una variante de FGFR antes del tratamiento. El proceso de selección implicará típicamente secuenciación directa, análisis de micromatrices de oligonucleótido o un anticuerpo específico mutante. Además, el diagnóstico de tumores con tales mutaciones podría realizarse mediante el uso de técnicas conocidas por un experto en la técnica y como se describe en la presente memoria como RT-PCR y FISH.

Además, las formas mutantes de, por ejemplo, FGFR, pueden identificarse mediante secuenciación directa de, por ejemplo, biopsias tumorales usando PCR y métodos para secuenciar productos de PCR directamente como se describió anteriormente en la presente memoria. El experto en la materia reconocerá que todas estas técnicas bien conocidas para la detección de la sobreexpresión, activación o mutaciones de las proteínas mencionadas anteriormente podrían ser aplicables en el presente caso.

En la selección por RT-PCR, el nivel de ARNm en el tumor se evalúa creando una copia de ADNc del ARNm seguido de la amplificación del ADNc por PCR. Los métodos de amplificación por PCR, la selección de cebadores y condiciones para la amplificación, son conocidos por un experto en la técnica. Las manipulaciones de ácido nucleico y la PCR se llevan a cabo mediante métodos estándar, como se describe, por ejemplo, en Ausubel, F.M. y col., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., o Innis, M.A. y col., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Las reacciones y manipulaciones que implican técnicas de ácido nucleico también se describen en Sambrook y col., (2001), 3.° Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativamente, puede usarse un kit comercialmente disponible para RT-PCR (por ejemplo, Roche Molecular Biochemicals), o metodología como se establece en las patentes de Estados Unidos 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531; 5.192.659, 5.272.057, 5.882.864, y 6.218.529. Un ejemplo de una técnica de hibridación in situ para evaluar la expresión de ARNm sería la hibridación in situ de fluorescencia (FISH) (véase Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649).

Generalmente, la hibridación in situ comprende las siguientes etapas principales: (1) fijación del tejido a analizar; (2) tratamiento de prehibridación de la muestra para aumentar la accesibilidad del ácido nucleico diana, y para reducir la unión no específica; (3) hibridación de la mezcla de ácidos nucleicos al ácido nucleico en la estructura biológica o tejido; (4) lavados después de la hibridación para eliminar fragmentos de ácido nucleico no unidos en la hibridación y (5) detección de los fragmentos de ácido nucleico hibridados. Las sondas usadas en tales aplicaciones están típicamente marcadas, por ejemplo, con radioisótopos o informadores fluorescentes. Las sondas preferidas son suficientemente largas, por ejemplo, de aproximadamente 50, 100 o 200 nucleótidos a aproximadamente 1000 o más nucleótidos, para permitir la hibridación específica con el ácido nucleico diana en condiciones rigurosas. Los métodos estándar para llevar a cabo FISH se describen en Ausubel, F.M. y col., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc y Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview por John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; Marzo 2004, pág.077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.

Los métodos para el perfil de expresión génica se describen por (DePrimo y col. (2003), BMC Cancer, 3:3). Brevemente, el protocolo es el siguiente: se sintetiza ADNc bicatenario a partir de ARN total usando un oligómero (dT)24 para cebar la síntesis de ADNc de primera cadena, seguido de la síntesis de ADNc de segunda cadena con cebadores hexámeros aleatorios. El ADNc bicatenario se usa como plantilla para la transcripción in vitro de ARNc usando ribonucleótidos biotinilados. ARNc se fragmenta químicamente según los protocolos descritos por Affymetrix (Santa Clara, CA, EE. UU.) y a continuación se hibridó durante la noche en matrices de genoma humano.

Alternativamente, los productos proteicos expresados a partir de los ARNm pueden analizarse mediante inmunohistoquímica de muestras tumorales, inmunoensayo en fase sólida con placas de microtitulación, transferencia Western, electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida bidimensional, ELISA, citometría de flujo y otros métodos conocidos en la técnica para la detección de proteínas específicas. Los métodos de detección incluirían el uso de anticuerpos específicos de sitio. El experto reconocerá que todas estas técnicas bien conocidas para la detección de la regulación positiva de FGFR o detección de variantes o mutantes de FGFR podrían ser aplicables en el presente caso.

Los niveles anormales de proteínas tales como FGFR pueden medirse mediante el uso de ensayos enzimáticos estándar, por ejemplo, aquellos ensayos descritos en la presente memoria. La activación o sobreexpresión también podría detectarse en una muestra de tejido, por ejemplo, un tejido tumoral. Al medir la actividad de la tirosina quinasa con un ensayo tal como el de Chemicon International. La tirosina quinasa de interés se inmunoprecipitaría del lisado de muestras y se mediría su actividad.

Los métodos alternativos para la medición de la sobreexpresión o activación de FGFR que incluyen las isoformas de los mismos incluyen la medición de la densidad de microvasos. Esto puede medirse, por ejemplo, usando métodos descritos por Orre y Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101-8).

Por lo tanto, todas estas técnicas también podrían usarse para identificar tumores particularmente adecuados para el tratamiento con los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención son particularmente útiles en el tratamiento de un paciente que tiene un FGFR mutado. La mutación G697C en FGFR3 se observa en el 62 % de los carcinomas orales de células escamosas y causa la activación constitutiva de la actividad de la quinasa. Las mutaciones activadoras de FGFR3 también se han identificado en casos de carcinoma de vejiga. Estas mutaciones fueron de 6 tipos con grados variables de prevalencia: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Además, se ha descubierto que un polimorfismo Gly388Arg en FGFR4 está asociado con una mayor incidencia y agresividad del cáncer de próstata, colon, pulmón, hígado (HCC) y mama. Los compuestos de la invención son particularmente útiles en el tratamiento de un paciente que tiene una translocación de FGFR3-TACC3.

Por lo tanto, en un aspecto adicional la invención incluye el uso de un compuesto según la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un estado o afección de enfermedad en un paciente que se ha examinado y se ha determinado que padece, o está en riesgo de padecer, una enfermedad o afección que sería susceptible al tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra FGFR.

Se analizan mutaciones particulares a un paciente para incluir las mutaciones G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y373C, K652Q en FGFR3 y polimorfismo Gly388Arg en FGFR4, en particular FGFR3 R248C, FGFR3 S249C, FGFR3 G370C o FGFR3 Y373C.

Las mutaciones particulares para las que se examina a un paciente incluyen en particular mutaciones guardián de FGFR. Las mutaciones guardián incluyen FGFR3 V555L/V555M, FGFR1 V561M, FGFR2 V564F/V564I/V564M y FGFR4 V550L. Se analizan mutaciones particulares a un paciente para incluir FGFR3 V555L, FGFR3 V555M, FGFR1 V561M y FGFR2 V564I, en particular FGFR3 V555L y FGFR3 V555M.

En otro aspecto, la invención incluye un compuesto de la invención para su uso en la profilaxis o el tratamiento del cáncer en un paciente seleccionado de una subpoblación que posee una variante del gen FGFR (por ejemplo, mutación G697C en FGFR3 y polimorfismo Gly388Arg en FGFR4).

Los compuestos de la invención son particularmente útiles en el tratamiento de un paciente que tiene una fusión o translocación de FGFR, en particular de FGFR3:TACC3 v1; FGFR3: TACC3 v3; FGFR3:Intrón TACC3; FGFR3:BAIAP2L1; FGFR2:AFF3; FGFR2:BICC1; FGFR2:CASP7; FGFR2:CCDC6; y FGFR2:OFD1. Se usan las siguientes abreviaturas: FGFR (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos); FGFR3:TACC3 (fusión entre genes que codifican FGFR3 y proteína 3 que contiene espiral enrollada ácida); FGFR3:BAIAP2L1 (fusión entre genes que codifican FGFR3 e inhibidor de angiogénesis específica del cerebro 1-proteína 1 de tipo proteína 2 asociada); FGFR2:AFF3 (fusión entre genes que codifican FGFR2 y la familia AF4/FMR2, miembro 3); FGFR2:BICC1 (fusión entre genes que codifican FGFR2 y homólogo 1 de bicaudal C); FGFR2: CASP7 (fusión entre genes que codifican FGFR2 y caspasa 7); FGFR2:CCDC6 (fusión entre genes que codifican FGFR2 y dominio enrollado en espiral 6); FGFR2:OFD1 (fusión entre genes que codifican FGFR2 y síndrome oral-facial-digital 1). Composiciones farmacéuticas y combinaciones

En vista de sus propiedades farmacológicas útiles, los compuestos de la invención pueden formularse en diversas formas farmacéuticas para fines de administración.

En una realización, la composición farmacéutica (p. ej., formulación) comprende al menos un compuesto activo de la invención junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable que puede incluir adyuvantes, excipientes, diluyentes, cargas, reguladores, estabilizantes, conservantes, lubricantes u otros materiales bien conocidos por los expertos en la técnica y opcionalmente otros agentes terapéuticos o profilácticos.

Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención, a medida que el ingrediente activo se combina en una mezcla íntima con un portador farmacéuticamente aceptable, que puede adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en cualquier forma adecuada para administración oral, parenteral, tópica, intranasal, oftálmica, ótica, rectal, vaginal o transdérmica. Estas composiciones farmacéuticas se presentan deseablemente en forma de dosificación unitaria adecuada, preferiblemente, para su administración oralmente, por vía rectal, por vía percutánea o por inyección parenteral. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad en la administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente portadores farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el portador generalmente comprenderá agua estéril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para facilitar la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar soluciones inyectables en las que el portador comprende solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear portadores líquidos, agentes de suspensión y similares adecuados. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el portador comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, cuyos aditivos no causan un efecto perjudicial significativo en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser útiles para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar de diversas maneras, por ejemplo, como un parche transdérmico, como producto para aplicación local, como pomada. Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de dosis unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. Forma farmacéutica unitaria según se usa en la presente memoria, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, cada una de las cuales contiene una cantidad predeterminada del principio activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. Los ejemplos de dichas formas de dosis unitaria son comprimidos (que incluyen comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, paquetes de polvo, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y múltiplos segregados de los mismos. El compuesto de la invención se administra en una cantidad suficiente para ejercer su actividad antitumoral o para ejercer su efecto inhibidor de FGFR.

En una realización, el compuesto de la invención o la composición farmacéutica de la invención es para administración oral. Los expertos en la técnica podrían determinar la cantidad eficaz de los resultados de la prueba presentados a continuación en la memoria. En general, se contempla que una cantidad terapéuticamente eficaz sería de 0,005 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal, y en particular de 0,005 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida en una, dos, tres, cuatro o más subdosis a intervalos apropiados durante todo el día. Dichas subdosis pueden formularse como formas de dosificación unitarias, por ejemplo, que contienen de 0,5 a 500 mg, en particular de 1 mg a 500 mg, más en particular de 10 a 500 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria.

Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá preferiblemente del 0,05 al 99 % en peso, más preferiblemente del 0,1 al 70 % en peso, aún más preferiblemente del 0,1 al 50 % en peso del compuesto de la presente invención, y, del 1 al 99,95 % en peso, más preferiblemente del 30 al 99,9 % en peso, aún más preferiblemente del 50 al 99,9 % en peso de un portador farmacéuticamente aceptable, basados todos los porcentajes en el peso total de la composición.

Se ha descubierto que algunos inhibidores de FGFR pueden usarse en combinación con otros agentes anticancerígenos. Por ejemplo, puede ser beneficioso combinar un inhibidor que induzca la apoptosis con otro agente que actúe mediante un mecanismo diferente para regular el crecimiento celular, tratando así dos de las características del desarrollo del cáncer. A continuación se exponen ejemplos de tales combinaciones.

Como otro aspecto de la presente invención, se prevé una combinación de un compuesto de la presente invención con otro agente anticancerígeno, especialmente para su uso como medicamento, más específicamente para su uso en el tratamiento del cáncer o enfermedades relacionadas, en particular una afección o enfermedad mediada por una quinasa de FGFR. Para el tratamiento de las condiciones anteriores, los compuestos de la invención pueden emplearse ventajosamente en combinación con uno o más de otros agentes medicinales, más particularmente, con otros agentes anticancerígenos o adyuvantes en terapia contra el cáncer. Los ejemplos de agentes anticancerígenos o adyuvantes (agentes de soporte en la terapia) incluyen aunque no de forma limitativa a:

- compuestos de coordinación de platino, por ejemplo, cisplatino opcionalmente combinado con amifostina, carboplatino o oxaliplatina;

- compuestos de taxano, por ejemplo, paclitaxel, partículas unidas a proteínas de paclitaxel (Abraxane™) o docetaxel;

- inhibidores de topoisomerasa I, tales como compuestos de camptotecina, por ejemplo, irinotecán, SN-38, topotecán, topotecán hcl;

- inhibidores de topoisomerasa II tales como epipodofilotoxinas antitumorales o derivados de podofilotoxina, por ejemplo, etopósido, fosfato de etopósido o teniposido;

- alcaloides de la vinca antitumorales, por ejemplo, vinblastina, vincristina o vinorelbina;

- derivados de nucleósidos antitumorales, por ejemplo, 5-fluorouracilo, leucovorina, gemcitabina, gemcitabina hcl, capecitabina, cladribina, fludarabina, nelarabina;

- agentes alquilantes tales como mostaza nitrogenada o nitrosourea, por ejemplo, ciclofosfamida, clorambucilo, carmustina, tiotepa, mefalán (melfalán), lomustina, altretamina, busulfán, dacarbazina, estramustina, ifosfamida opcionalmente en combinación con mesna, pipobroman, procarbazina, estreptozocina, telozolomida, uracilo;

- derivados antitumorales de antraciclina, por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina opcionalmente en combinación con dexrazoxano, doxil, idarrubicina, mitoxantrona, epirrubicina, epirrubicina hcl, valrubcina;

- moléculas que se dirigen al receptor de IGF-1, por ejemplo, picropodofilina;

- derivados de tetracarcina, por ejemplo, tetrocarcina A;

- glucocorticoides, por ejemplo, prednisona;

- anticuerpos, por ejemplo, trastuzumab (anticuerpo HER2), rituximab (anticuerpo CD20), gemtuzumab, gemtuzumab ozogamicina, cetuximab, pertuzumab, bevacizumab, alemtuzumab, eculizumab, ibritumomab tiuxetan, nofetumomab, panitumumab, tositumomab, CNTO 328;

- antagonistas del receptor de estrógeno o moduladores selectivos del receptor de estrógeno o inhibidores de la síntesis de estrógenos, por ejemplo, tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, droloxifeno, faslodex, raloxifeno o letrozol; - inhibidores de aromatasa tales como exemestano, anastrozol, letrazol, testolactona y vorozol;

- agentes de diferenciación tales como retinoides, vitamina D o ácido retinoico y agentes de bloqueo del metabolismo del ácido retinoico (RAMBA), por ejemplo, accutane;

- inhibidores de ADN metil transferasa, por ejemplo, azacitidina o decitabina;

- antifolatos, por ejemplo, premetrexed disódico;

- antibióticos, por ejemplo, antinomicina D, bleomicina, mitomicina C, dactinomicina, carminomicina, daunomicina, levamisol, plicamicina, mitramaricina;

- antimetabolitos, por ejemplo, clofarabina, aminopterina, arabinósido de citosina o metotrexato, azacitidina, citarabina, floxuridina, pentostatina, tioguanina;

- agentes inductores de apoptosis y agentes antiangiogénicos tales como inhibidores de Bcl-2, por ejemplo, YC 137, BH 312, ABT 737, gossypol, HA 14-1, TW 37 o ácido decanoico;

- agentes de unión a tubulina, por ejemplo, combrestatina, colchicina nocodazol;

- inhibidores de quinasa (p. ej., inhibidores del EGFR (receptor del factor de crecimiento epitelial), MTKI (inhibidores de la quinasa multidiana), inhibidores de mTOR, inhibidores de cmet), por ejemplo, flavoperidol, mesilato de imatinib, erlotinib, gefitinib, dasatinib, lapatinib, ditosilato de lapatinib, sorafenib, sunitinib, maleato de sunitinib, temsirolimus, 6- f difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-[1,2,4]triazolo[4,3-b] piridazin-3-il]metil}quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;

- inhibidores de farnesiltransferasa, por ejemplo, tipifarnib;

- inhibidores de histona desacetilasa (HDAC), por ejemplo, butirato de sodio, ácido suberoilanilida, ácido hidroxamida (SAHA), depsipéptido (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, tricostatina A, vorinosta; - inhibidores de la ruta ubiquitina-proteasoma, por ejemplo, PS-341, MLN.41 o bortezomib;

- yondelis;

- inhibidores de telomerasa, por ejemplo, telomestatina;

- inhibidores de metaloproteinasa de matriz, por ejemplo, batimastat, marimastat, prinostat o metastat.

- interleucinas recombinantes, por ejemplo, aldesleucina, denileucina dititox, interferón alfa 2a, interferón alfa 2b, peginterferón alfa 2b

- inhibidores de MAPK

- retinoides, por ejemplo, alitretinoína, bexaroteno, tretinoína

- trióxido de arsénico

- asparaginasa

- esteroides, por ejemplo, propionato de dromostanolona, acetato de megarol, nandolona (decanoato, fenpropionato), dexametasona

- agonistas o antagonistas de la hormona liberadora de gonadotropina por ejemplo, abarelix, acetato de goserelina, acetato de histina, acetato de leuprolida

- talidomida, lenalidomida

- mercaptopurina, mitotano, pamidronato, pogademasa, pegaspargasa, rasburicasa

- miméticos de BH3, por ejemplo, ABT-737

- inhibidores de MEK, por ejemplo, PD98059, AZD6244, CI-1040

- análogos del factor estimulante de colonias, por ejemplo, filgrastim, pegfilgrastim, sargramostim; eritropoyetina o análogos de los mismos (p. ej., darbepoetina alfa); interleucina 11; oprelvecina; zoledronato, ácido zoledrónico; fentanilo; bisfosfonato; palifermin.

- un inhibidor del citocromo P450 17alfa-hidroxilase-17,20-liasa esteroideo (CYP17), por ejemplo, abiraterona, acetato de abiraterona

- un anticuerpo que bloquea la interacción entre PD-1 y PD-L1.

En una realización, la presente invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable de la misma o un solvato de la misma, o cualquier subgrupo y ejemplo de la misma, y 6- f difluoro [6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]triazolo[4,3-b]-piridazin-3-il]metil}quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización, la presente invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable de la misma o un solvato de la misma, o cualquier subgrupo y ejemplo de la misma, y 6-[difluoro(6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il)metil]-quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable de la misma o un solvato de la misma, o cualquier subgrupo y ejemplo de la misma, y 6- f difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)[1,2,4]-triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable de la misma o un solvato de la misma, o cualquier subgrupo y ejemplo de la misma, y 6- [difluoro (6-piridin-4-il[1,2,4]triazolo[4,3-b]-piridazin-3-il)metil]quinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los compuestos de la presente invención también tienen aplicaciones terapéuticas para sensibilizar las células tumorales para la radioterapia y la quimioterapia.

Por lo tanto, los compuestos de la presente invención pueden usarse como “radiosensibilizador” y/o “quimiosensibilizador” o pueden administrarse en combinación con otro “radiosensibilizador” y/o “quimiosensibilizador”. El término “radiosensibilizador”, según se usa en la presente memoria, se define como una molécula, preferiblemente una molécula de bajo peso molecular, administrada a animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la sensibilidad de las células a la radiación ionizante y/o para promover el tratamiento de enfermedades que son tratables con radiación ionizante.

El término “quimiosensibilizador”, según se usa en la presente memoria, se define como una molécula, preferiblemente una molécula de bajo peso molecular, administrada a animales en cantidades terapéuticamente eficaces para aumentar la sensibilidad de las células a la quimioterapia y/o promover el tratamiento de enfermedades que son tratables con quimioterapéuticos.

Se han sugerido varios mecanismos para el modo de acción de radiosensibilizadores en la bibliografía que incluye: radiosensibilizadores de células hipóxicas (p. ej., compuestos de 2-nitroimidazol y compuestos de dióxido de benzotriazina) que imitan oxígeno o alternativamente se comportan como agentes biorreductivos bajo hipoxia; Los radiosensibilizadores no hipóxicos (p. ej., pirimidinas halogenadas) pueden ser análogos de bases de ADN y se incorporan preferiblemente en el ADN de células cancerosas y, por lo tanto, promueven la ruptura inducida por radiación de moléculas de ADN y/o previenen los mecanismos normales de reparación de ADN; y diversos otros mecanismos de acción potenciales han sido hipotetizados para radiosensibilizadores en el tratamiento de la enfermedad.

Muchos protocolos de tratamiento de cáncer emplean actualmente radiosensibilizadores junto con radiación de rayos x. Los ejemplos de radiosensibilizadores activados por rayos x incluyen, aunque no de forma limitativa a lo siguiente: metronidazol, neonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, EO9, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR), 5- yododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina, fluorodesoxiuridina (FudR), hidroxiurea, cisplatino y análogos y derivados terapéuticamente eficaces de los mismos.

La terapia fotodinámica (PDT) de cánceres emplea luz visible como activador de radiación del agente sensibilizante. Los ejemplos de radiosensibilizadores fotodinámicos incluyen los siguientes, aunque no de forma limitativa a: derivados de hematoporfirina, Photofrin, derivados de benzoporfirina, etioporfirina de estaño, feoborbide-a, bacterioclorofila-a, naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de zinc y análogos y derivados terapéuticamente eficaces de los mismos. Los radiosensibilizadores pueden administrarse junto con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de otros compuestos, que incluyen, aunque no de forma limitativa a: compuestos que promueven la incorporación de radiosensibilizadores a las células diana; compuestos que controlan el flujo de productos terapéuticos, nutrientes y/u oxígeno a las células diana; agentes quimioterapéuticos que actúan sobre el tumor con o sin radiación adicional; u otros compuestos terapéuticamente eficaces para tratar el cáncer u otras enfermedades. Los quimiosensibilizantes pueden administrarse junto con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de otros compuestos, que incluyen, aunque no de forma limitativa a: compuestos que promueven la incorporación de quimiosensibilizadores a las células diana; compuestos que controlan el flujo de productos terapéuticos, nutrientes y/u oxígeno a las células diana; agentes quimioterapéuticos que actúan sobre el tumor u otros compuestos terapéuticamente eficaces para tratar el cáncer u otra enfermedad. Los antagonistas de calcio, por ejemplo, verapamilo, se encuentran útiles en combinación con agentes antineoplásicos para establecer la quimiosensibilidad en las células tumorales resistentes a los agentes quimioterapéuticos aceptados y para potenciar la eficacia de dichos compuestos en neoplasias malignas sensibles a fármacos.

En vista de sus propiedades farmacológicas útiles, los componentes de las combinaciones según la invención, es decir, el uno o más agentes medicinales y el compuesto según la presente invención pueden formularse en diversas formas farmacéuticas para fines de administración. Los componentes pueden formularse por separado en composiciones farmacéuticas individuales o en una composición farmacéutica unitaria que contiene todos los componentes.

Por lo tanto, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el uno o más agentes medicinales y el compuesto según la presente invención junto con un portador farmacéuticamente aceptable. La presente invención se refiere además al uso de una combinación según la invención en la fabricación de una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de células tumorales.

La presente invención se refiere además a un producto que contiene como primer ingrediente activo un compuesto según la invención y como ingrediente activo adicional uno o más agentes anticancerígenos, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de pacientes que padecen cáncer.

El uno o más agentes medicinales y el compuesto según la presente invención pueden administrarse simultáneamente (p. ej., en composiciones separadas o unitarias) o secuencialmente en cualquier orden. En el último caso, los dos o más compuestos se administrarán dentro de un período y en una cantidad y manera que sea suficiente para asegurar que se logre un efecto ventajoso o sinérgico. Se apreciará que el método preferido y el orden de administración y las cantidades de dosificación respectivas y los regímenes para cada componente de la combinación dependerán del otro agente medicinal particular y el compuesto de la presente invención que se administra, su vía de administración, el tumor particular que se está tratando y el huésped particular que se está tratando. El método y el orden de administración óptimos y las cantidades y régimen de dosificación pueden determinarse fácilmente por los expertos en la técnica usando métodos convencionales y en vista de la información establecida en la presente memoria. La relación en peso del compuesto según la presente invención y el uno o más agentes anticancerígenos cuando se administran como una combinación puede ser determinada por el experto en la técnica. Dicha relación y la dosificación exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular según la invención y el(los) otro(s) agente(s) anticancerígeno(s) usado(s), la afección particular que se está tratando, la gravedad de la afección que se está tratando, la edad, el peso, el género, la dieta, la hora de administración y la condición física general del paciente en cuestión, el modo de administración así como otros medicamentos que el individuo puede estar tomando, como es bien conocido por los expertos en la técnica. Además, es evidente que la cantidad diaria eficaz puede reducirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe los compuestos de la presente invención. Una relación en peso particular para el presente compuesto de fórmula (I) y otro agente anticancerígeno puede variar de 1/10 a 10/1, más en particular de 1/5 a 5/1, incluso más en particular de 1/3 a 3/1. El compuesto de coordinación de platino se administra ventajosamente en una dosis de 1 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, 50 a 400 mg/m<2>, particularmente, para cisplatino en una dosis de aproximadamente 75 mg/m<2>y para carboplatino en aproximadamente 300 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El compuesto de taxano se administra ventajosamente en una dosificación de 50 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, 75 a 250 mg/m<2>, particularmente para paclitaxel en una dosificación de aproximadamente 175 a 250 mg/m<2>y para docetaxel en aproximadamente 75 a 150 mg/m<2>por ciclo de tratamiento. El compuesto de camptotecina se administra ventajosamente en una dosis de 0,1 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, de 1 a 300 mg/m<2>, particularmente para irinotecán en una dosis de aproximadamente 100 a 350 mg/m<2>y para topotecán en aproximadamente 1 a 2 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El derivado de podofilotoxina antitumoral se administra ventajosamente en una dosis de 30 a 300 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, 50 a 250 mg/m<2>, particularmente para etopósido en una dosis de aproximadamente 35 a 100 mg/m<2>y para tenipósido en aproximadamente 50 a 250 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El alcaloide de la vinca antitumoral se administra ventajosamente en una dosis de 2 a 30 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, particularmente para vinblastina en una dosificación de aproximadamente 3 a 12 mg/m<2>, para vincristina en una dosis de aproximadamente 1 a 2 mg/m<2>y para vinorelbina en dosis de aproximadamente 10 a 30 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El derivado de nucleósido antitumoral se administra ventajosamente en una dosis de 200 a 2500 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, 700 a 1500 mg/m<2>, particularmente para 5-FU en una dosis de 200 a 500 mg/m<2>, para gemcitabina en una dosis de aproximadamente 800 a 1200 mg/m<2>y para capecitabina en aproximadamente 1000 a 2500 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

Los agentes alquilantes tales como mostaza nitrogenada o nitrosourea se administran ventajosamente en una dosificación de 100 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) del área de superficie corporal, por ejemplo, de 120 a 200 mg/m<2>, particularmente para ciclofosfamida en una dosis de aproximadamente 100 a 500 mg/m<2>, para clorambucilo en una dosificación de aproximadamente 0,1 a 0,2 mg/kg, para carmustina en una dosificación de aproximadamente 150 a 200 mg/m<2>y para lomustina en una dosis de aproximadamente 100 a 150 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El derivado de antraciclina antitumoral se administra ventajosamente en una dosis de 10 a 75 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, por ejemplo, de 15 a 60 mg/m<2>, particularmente para doxorrubicina en una dosis de aproximadamente 40 a 75 mg/m<2>, para daunorrubicina en una dosis de aproximadamente 25 a 45 mg/m<2>y para idarubicina en una dosis de aproximadamente 10 a 15 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

El agente antiestrógeno se administra ventajosamente en una dosis de aproximadamente 1 a 100 mg al día dependiendo del agente particular y la afección que se está tratando. El tamoxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de 5 a 50 mg, preferiblemente de 10 a 20 mg dos veces al día, continuando la terapia durante un tiempo suficiente para lograr y mantener un efecto terapéutico. El toremifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 60 mg una vez al día, continuando la terapia durante un tiempo suficiente para lograr y mantener un efecto terapéutico. El anastrozol se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 1 mg una vez al día. El droloxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 20-100 mg una vez al día. El raloxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosis de aproximadamente 60 mg una vez al día. El exemestano se administra de forma ventajosa por vía oral en una dosificación de aproximadamente 25 mg una vez al día.

Los anticuerpos se administran ventajosamente en una dosis de aproximadamente 1 a 5 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) del área de superficie corporal, o como se conoce en la técnica, si es diferente. El trastuzumab se administra ventajosamente en una dosis de 1 a 5 mg por metro cuadrado (mg/m<2>) de área de superficie corporal, particularmente de 2 a 4 mg/m<2>por ciclo de tratamiento.

Estas dosificaciones pueden administrarse por ejemplo, una vez, dos o más por ciclo de tratamiento, que pueden repetirse, por ejemplo, cada 7, 14, 21 o 28 días.

Los compuestos de fórmula (I), las sales de adición farmacéuticamente aceptables, en particular las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, y las formas estereoisoméricas de las mismas pueden tener propiedades de diagnóstico valiosas en el sentido de que pueden usarse para detectar o identificar la formación de un complejo entre un compuesto marcado y otras moléculas, péptidos, proteínas, enzimas o receptores.

Los métodos de detección o identificación pueden usar compuestos que están marcados con agentes de etiquetado tales como radioisótopos, enzimas, sustancias fluorescentes, sustancias luminosas, etc. Los ejemplos de los radioisótopos incluyen<125>I,<131>I,<3>H y<14>C. Las enzimas generalmente se pueden detectar por conjugación de un sustrato apropiado que, a su vez cataliza una reacción detectable. Ejemplos de los mismos incluyen, por ejemplo, beta-galactosidasa, betaglucosidasa, fosfatasa alcalina, peroxidasa y malato deshidrogenasa, preferiblemente peroxidasa de rábano picante. Las sustancias luminosas incluyen, por ejemplo, luminol, derivados de luminol, luciferina, aequorina y luciferasa.

Las muestras biológicas pueden definirse como tejido corporal o fluidos corporales. Ejemplos de fluidos corporales son líquido cefalorraquídeo, sangre, plasma, suero, orina, esputo, saliva y similares.

Parte experimental

Varios métodos para preparar los compuestos de la invención se ilustran en los siguientes ejemplos. Salvo que se indique lo contrario, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se usaron sin purificación adicional.

Cuando se indica un estereocentro con “RSR” esto significa que se obtuvo una mezcla de estereoisómeros en el centro indicado, salvo que se indique lo contrario. La configuración estereoquímica para un estereocentro en algunos compuestos se designa “R” o “S” y/o con un enlace en cuña en cuña o en estado estacionario que indica la estereoconfiguración absoluta es conocida. Para algunos compuestos, la configuración estereoquímica en un estereocentro indicado se ha designado como “R*” o “S*” con un enlace de línea continua, o un enlace en estado sólido o un enlace en cuña troceado que indica que la estereoquímica absoluta en el estereocentro no se determina aunque es absoluto. Por lo tanto, un estereocentro indicado como S* significa un estereocentro absoluto, pero no se determina si es S o R.

A continuación en la memoria, los términos: 'TA' o 'ta' significa temperatura ambiente; 'FA' significa ácido fórmico; 'TFA' significa ácido trifluoroacético, 'TfOH' significa ácido trifluorometanosulfónico, 'DIPEA' o 'DIEA' significa etildiisopropilamina o N-etil-N-isopropilpropan-2-amina o N,N-diisopropiletilamina, 'RT' o 'Rt' significa tiempo de retención, '18-crown-6' significa 1,4,7,10,13,16-Hexaoxaciclooctadecano, 'SFC' significa cromatografía de fluidos supercríticos, 'ACN' significa acetonitrilo, 'DEA' significa dietilamina, 'IPA' significa isopropilo alcohol, 'DIBAL-H' significa hidruro de diisopropilaluminio, 'PMB' significa 4-metoxibencilo, 'EtOAc' significa acetato de etilo, 'DMF' significa N,N-dimetilformamida, 'DCM' significa diclorometano, 'DMAc' significa N,N- dimetilacetamida, 'THF' significa tetrahidrofurano, 'Bn' significa bencilo, 'M.P.' o 'm.p.' significa punto de fusión, 'HPLC' significa cromatografía líquida de alta resolución, 'TLC' significa cromatografía en capa fina, 'LC-MS' significa cromatografía líquida-espectrometría de masas, 'ee' significa exceso enantiomérico.

Ejemplo 1

Preparación del compuesto 1

a) Preparación del producto intermedio 1

4-amino-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo

El producto intermedio 1 se sintetizó como se describe en ACS Medicinal Chemistry Letters, 2013, 979.

b) Preparación del producto intermedio 2

4-((4-metoxibencil)amino)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo

A una solución de producto intermedio 1 (4-amino-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo) (7,50 g, 48,3 mmol) en acetato de etilo (150 ml) se añadió 4-metoxibenzaldehído (7,90 g, 58,0 mmol) y ácido trifluoroacético (7,2 ml, 96,7 mmol). Se añadió borohidruro de sodio (1,83 g, 48,3 mmol) a la mezcla en porciones mientras se mantenía la temperatura por debajo de 35 °C. Tras la adición, la mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se inactivó con agua (100 ml) y se agitó a 25 °C durante 1 hora. A continuación la mezcla se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyendo con: éter de petróleo:acetato de etilo de 1: 0 a 5: 4) para dar el producto intermedio 2 (7,92 g, 73,9 % de pureza, 73,2 % de rendimiento) como sólidos blancos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,66 min, masa calculada para C14H17N3O3275,13, m/z encontrada 275,9 [M+H]<+>.

c) Preparación del producto intermedio 3

7-hidroxi-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]-piridina-6-carboxilato de metilo

A una solución de producto intermedio 2 (4-((4-metoxibencil)amino)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato) (13,2 g, 47,9 mmol) en N,N-dimetilformamida (300 ml) se añadió hidruro de sodio (2,68 g, 67,1 mmol) en porciones. La mezcla se agitó a 20 °C durante 10 minutos y se enfrío a 0 °C. Se añadió cloruro malonilo de metilo (6,54 g, 47,9 mmol) gota a gota a la mezcla y la mezcla se agitó adicionalmente a 20 °C durante 15 minutos. Se añadió metóxido de sodio (5,18 ml, 95,9 mmol) a la reacción y la mezcla se calentó a 110 °C durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró para dar un residuo que se disolvió en agua (200 ml) y se filtró. El filtrado se extrajo con éter metílico de terc-butilo (100 ml). A la capa acuosa se le añadió ácido clorhídrico concentrado para ajustar el pH a 3-4 con sólidos blancos precipitando. El precipitado recogido se disolvió en diclorometano (200 ml). La solución orgánica resultante se lavó con salmuera (300 ml), se secó sobre Na2SO4anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para dar el producto intermedio 3 (10,0 g, bruto) como un aceite amarillo que se usó para la siguiente etapa directamente.

d) Preparación del producto intermedio 4

7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]-piridina-6-carboxilato de metilo

A una solución de producto intermedio 3 (7-hidroxi-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carboxilato) (10,0 g, 29,1 mmol) en diclorometano (200 ml) se añadió cloruro de oxalilo (4,9 ml, 58,2 mmol) y N,N-dimetilformamida (10 gotas). La mezcla se agitó a 25 °C durante 16 horas. A continuación la mezcla se concentró para dar un residuo que se disolvió en diclorometano (200 ml). La solución resultante se lavó con agua (100 ml x 2), salmuera (100 ml), se secó sobre Na2SO4anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para dar un residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyendo con: éter de petróleo:acetato de etilo de 1: 0 a 5: 4) para dar el producto intermedio 4 (10,0 g, 94,9 %) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,69 min, masa calculada para C17H16ClN3O4361,08, m/z encontrada 362,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) (Varian) δ 8,22 (s, 1H), 7,29 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 6,88 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,07 - 4,02 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,70 (s, 3H).

e) Preparación del producto intermedio 5

7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]-piridina-6-carbaldehído

A una solución de producto intermedio 4 (7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carboxilato de metilo) (7,00 g, 19,3 mmol) en THF (200 ml) se añadió hidruro de diisobutilaluminio (DIBAL-H) en tolueno (38,7 ml, 1 M en tolueno, 38,7 mmol) en forma de gotas a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 1 hora. La reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml) a -78 °C y se dejó elevar la temperatura a 25 °C. La mezcla se agitó durante 1 hora. La mezcla se añadió a 200 ml de CHCl3y la mezcla se filtró. La torta del filtro se lavó con 200 ml de CHCl3y se filtró 3 veces. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, y se filtraron. El filtrado se concentró para dar un residuo.30 ml de éter metílico de terc- butilo se añadió y la mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos. Los precipitados se filtraron para dar el producto intermedio 5 (5,00 g, 73,2 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,69 min, masa calculada para C16H14ClN3O3331,07, m/z encontrada 331,9 [M+H]<+>.

f) Preparación del producto intermedio 7

7-cloro-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5 (4H)-ona

Una solución de producto intermedio 6 (4-metoxibenceno-1,2-diamina) (125 mg, 0,905 mmol), tricloruro férrico (293 mg, 1,81 mmol) e intermedio 5 (7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (300 mg, 0,904 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación, la solución resultante se basificó con bicarbonato de sodio a pH = 8. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyendo con: éter de petróleo:acetato de etilo de 6:1 a 3:1) para proporcionar el producto intermedio 7 (309 mg, 71,0 % de pureza, 54,1 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 8): RT= 2,09 min, masa calculada para C23H20ClN5O3449,13, m/z encontrada 450,1 [M+H]<+>.

g) Preparación del producto intermedio 8

7-cloro-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Se añadió ácido trifluoroacético (192 mg, 1,28 mmol) a una solución que consistía en el producto intermedio 7 (7-cloro-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (270 mg, 0,426 mmol) en ácido 2,2,2-trifluoroacético (2 ml). Después de agitar la mezcla a 80 °C durante 1 hora, la mezcla resultante se basificó con bicarbonato de sodio a pH = 8. A continuación, la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto intermedio 8 (200 mg, bruto) como sólidos amarillos que se usaron para la siguiente etapa directamente.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,61 min, masa calculada para C15H12ClN5O2329,07, m/z encontrada 329,9 [M+H]<+>.

h) Preparación del compuesto 1

(S*)-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una solución que consiste en el producto intermedio 8 (7-cloro-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (170 mg, 0,376 mmol), intermedio 9 (hidrocloruro de (S*)-1-(pirimidin-2-il)etanamina) (60,1 mg, 0,376 mmol), N-etil-N-isopropil-propan-2-amina (243 mg, 1,88 mmol) y n-butanol (2 ml) se agitó a 60 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini C18250*50 10u, Fase móvil A: agua (0,225 % FA), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 22 ml/min, condición de gradiente de 18 % de B a 48 %). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente al vacío, y a continuación se liofilizó hasta el producto (30,0 mg, 92,0 % de pureza). A continuación, el producto se separó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: OJ (250 mm x 30 mm, 10 um)); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O EtOH, A:B = 65:35 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogió la fracción pura y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta la sequedad para dar el compuesto 1 (9,4 mg, 95,1 % de pureza, 5,70 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 4,42 min, masa calculada para C21H20N8O2416,17, m/z encontrada 417,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 13,01 - 12,87 (m, 1H), 12,70 (d, J= 8,2 Hz, 0,5H), 12,66 (d, J= 8,2 Hz, 0,5H), 10,88 (br. s., 1H), 8,86 (d, J= 4,9 Hz, 2H), 7,66 (s, 1H), 7,54 (d, J= 8,6 Hz, 0,5H), 7,48 (d, J= 8,6 Hz, 0,5H), 7,42 (t, J= 4,9 Hz, 1H), 7,30 - 7,24 (m, 0,5H), 7,14 - 7,07 (m, 0,5H), 6,82 - 6,73 (m, 1H), 6,53 - 6,41 (m, 1H), 4,02 - 3,92 (m, 3H), 3,86 - 3,75 (m, 3H), 1,73 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

SFC (Método 11): RT= 1,61 min, área del pico: 100 %.

empo

Preparación del compuesto 2

a) Preparación del producto intermedio 11

3-fluoro-5-metoxi-2-nitroanilina

Se añadió sodio (1,32 g, 57,4 mmol) a metanol anhidro (60 ml) en porciones y a continuación la mezcla se agitó a 25 °C durante 10 minutos. A continuación, la mezcla se añadió gota a gota a una solución de producto intermedio 10 (3,5-difluoro-2-nitroanilina) (10,0 g, 57,4 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (60 ml) a -70 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 horas antes de verterla en agua (50 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: acetato de etilo:éter de petróleo de 0:1 a 1:1) para dar el producto intermedio 11 (4,00 g, 90,0 % de pureza, 33,7 % de rendimiento) como sólidos amarillos. Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 7,29 (s, 2H), 6,27 (dd, J = 1,3, 2,6 Hz, 1H), 6,18 (dd, J= 2,6, 14,1 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H).

b) Preparación del producto intermedio 12

3-fluoro-5-metoxibenceno-1,2-diamina

Se añadieron una barra de agitación, el producto intermedio 11 (3-fluoro-5-metoxi-2-nitroanilina) (4,00 g, 21,5 mmol) y metanol (100 ml) a un matraz de fondo redondo de 250 ml. A continuación se añadió paladio húmedo sobre carbón activado (500 mg, 10 % en carbón activado) a la solución, y la suspensión se desgasificó al vacío y se burbujeó con argón por tres veces. A continuación la mezcla se burbujeó con hidrógeno por tres veces. La mezcla se agitó bajo hidrógeno (15 psi) a 40 °C durante 12 horas. La suspensión se filtró a través de una capa de Celite® y la almohadilla se lavó con metanol (20 ml). El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para dar el producto intermedio 12 (3,0 g, 85 % de pureza, 76,0 % de rendimiento) como aceite negro. Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) δ 6,03 - 6,00 (m, 2H), 4,85 (br. s., 2H), 4,40 (br. s, 2H), 3,58 (s, 3H) c) Preparación del producto intermedio 13

7-cloro-6-(4-fluoro-6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo [4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 12 (3-fluoro-5-metoxibenceno-1,2-diamina) (2,60 g, 16,7 mmol), producto intermedio 5 (7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazol-[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (5,52 g, 16,7 mmol), cloruro férrico (5,40 g, 33,3 mmol) y 1,4-dioxano (50 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 250 ml. Se agitó la mezcla resultante a 25 °C durante 1 hora. A continuación la mezcla se vertió en agua (100 ml) y se basificó con bicarbonato de sodio hasta pH = 6-7 antes de aislar el precipitado negro mediante filtración al vacío. El filtrado se recogió y se extrajo con diclorometano (100 ml x 4). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyendo con: éter de petróleo:acetato de etilo de 1:0 a 0:1) para proporcionar el producto intermedio 13 (2,20 g, 80 % de pureza, 22,6 % de rendimiento) como sólidos amarillos. d) Preparación del producto intermedio 14

7-cloro-6-(4-fluoro-6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 13 (7-cloro-6-(4-fluoro-6-metoxi-1-H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (2,20 g, 3,76 mmol), ácido trifluorometanosulfónico (0,992 ml, 11,3 mmol) y ácido trifluoroacético (5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. Se agitó la mezcla resultante a 60 °C durante 1 hora. A continuación, la mezcla de reacción se vertió en agua (10 ml) y se trató con bicarbonato sódico acuoso saturado hasta pH = 6-7. La mezcla se extrajo con diclorometano (15 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto intermedio bruto 14 (1,10 g, bruto) que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional.

e) Preparación del compuesto 2

(S)-6-(4-fluoro-6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 14 (7-cloro-6-(4-fluoro-6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (1,10 g, 1,58 mmol), producto intermedio 9-A (hidrocloruro de (S)-1-(pirimidin-2-il)etanamina) (0,379 g, 2,37 mmol), N,N-diisopropiletilamina <1,31 ml, 7,91 mmol) y diclorometano (10 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 100 ml, a continuación la mezcla de reacción se agitó a 40 °C durante 12 horas. La mezcla se extrajo con diclorometano (10 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para dar un residuo, que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Synergi C18150*30 mm*4 um, Fase móvil A: agua (0,05 % HCl), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente de 30 % de B a 60 %). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se resuspendió en agua (20 ml) y la mezcla resultante se liofilizó hasta sequedad para producto como un polvo amarillo. El producto se purificó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm*30 mm, 5 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O IPA, A:B = 60:40 a 60 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogió la fracción y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 2 (248 mg, 100 % de pureza, 36,1 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,48 min, masa calculada para C21H19FN8O2434,16, m/z encontrada 435,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d<6>)(Varian) δ 13,37 (s, 0,1H), 13,12 (s, 0,9H), 12,55 (d, J = 8,2 Hz, 0,9H), 12,41 (d, J = 8,6 Hz, 0,1H), 10,94 (br. s., 1H), 8,88 (d, J = 5,1 Hz, 0,2H), 8,82 (d, J = 4,9 Hz, 1,8H), 7,73 (s, 0,1H), 7,69 (s, 0,9H), 7,43 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 2,0 Hz, 0,9H), 7,04 (d, J = 1,8 Hz, 0,1H), 6,75 (dd, J = 1,9, 11,8 Hz, 0,1H), 6,67 (dd, J = 2,0, 12,3 Hz, 0,9H), 6,53 - 6,38 (m, 1H), 4,03 - 3,93 (m, 3H), 3,88 - 3,74 (m, 3H), 1,81 - 1,66 (m, 3H).

SFC (Método 15): RT= 3,02 min, área del pico: 100 %.

Ejemplo 3

Preparación del compuesto 3

a) Preparación del producto intermedio 15

5-metoximetoxi-2,3-diamina

El producto intermedio 15 se sintetizó como se describe en el documento US5221683.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) δ = 7,00 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 6,43 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,94 (br. s., 2H), 4,77 (br. s., 2H), 3,62 (s, 3H).

b) Preparación del producto intermedio 16

7-cloro-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5 (4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 5 (7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (500 mg, 1,51 mmol), producto intermedio 15 (5-metoxipiridin-2,3-diamina) (221 mg, 95,0 % de pureza, 1,51 mmol), cloruro de hierro(III) (978 mg, 6,03 mmol) y 1,4-dioxano anhidro (8 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. Se agitó la mezcla resultante a 110 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con agua (40 ml) y se trató con bicarbonato sódico sólido hasta pH = 9 con mucha precipitación formada. La mezcla resultante se filtró y se lavó con diclorometano/metanol = 10/1 (30 ml x 3). El filtrado se extrajo con diclorometano (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con salmuera (50 ml x 3), y se secó sobre Na2SO4anhidro y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: acetato de etilo:tetrahidrofurano de 1: 0 a 1: 1) para proporcionar el producto intermedio 16 (130 mg, 90,0 % de pureza, 17,2 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

c) Preparación del producto intermedio 17

7-cloro-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-2-metil-2H-pirazolo-[4,3-b]piridin-5 (4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 16 (7-cloro-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (345 mg, 90 % de pureza, 0,689 mmol) y ácido 2,2,2-trifluoroacético (5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. A continuación se añadió ácido trifluorometanosulfónico (311 mg, 2,07 mmol) a la mezcla. Se agitó la mezcla de reacción a 80 °C durante 2 horas. La mezcla se concentró hasta sequedad a presión reducida antes de diluirse con diclorometano/agua (10 ml/20 ml). La mezcla se ajustó a un pH de 9 por bicarbonato de sodio sólido con precipitación marrón formada. El precipitado marrón se filtró y se lavó con agua (25 ml x 2). Los sólidos recogidos se suspendieron en tolueno (15 ml) y se concentraron a sequedad y este procedimiento de suspensión y secado se repitió para proporcionar el producto intermedio 17 (208 mg, 91,6 % de pureza, 83,7 % de rendimiento) como sólidos de color pardo, que se usó para la siguiente etapa directamente.

d) Preparación del compuesto 3

(S)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5b]piridin-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 17 (7-cloro-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-2-metil-2H-pirazolo [4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (200 mg, 91,6 % de pureza, 0,554 mmol), producto intermedio 9-A (hidrocloruro de (S)-1-(pirimidin-2-il)etanamina) (88,4 mg, 0,554 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (TBAI) (20,5 mg, 0,0560 mmol), hidrogenocarbonato de sodio (140 mg, 1,67 mmol), cloroformo (12 ml) y agua (2 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml y se agitaron a 60 °C durante 33 horas. Se añadió agua (25 ml) a la mezcla de reacción. A continuación, la mezcla se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano: tetrahidrofurano = 2: 3) para proporcionar el compuesto 3 (66,8 mg, 95,7 % de pureza, 27,6 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): masa calculada para C20H19N9O2417,17, m/z encontrada 418,0 [M+H]<+>. Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 13,32 (s, 0,3H), 13,19 (s, 0,7H), 12,50 (d, J= 8,2 Hz, 0,3H), 12,38 (d, J= 8,4 Hz, 0,7H), 11,06 (s, 0,3H), 10,96 (s, 0,7H), 8,88 (d, J= 4,9 Hz, 0,6H), 8,81 (d, J= 5,1 Hz, 1,4H), 8,05 (d, J= 2,9 Hz, 0,7H), 8,00 (d, J= 2,6 Hz, 0,3H), 7,72 (s, 0,3H), 7,69 - 7,66 (m, 1,4H), 7,61 (d, J= 2,2 Hz, 0,3H), 7,43 (t, J= 4,9 Hz, 0,3H), 7,40 (t, J= 4,9 Hz, 0,7H), 6,60 - 6,45 (m, 1H), 3,99 (s, 0,9H), 3,95 (s, 2,1H), 3,90 (s, 0,9H), 3,85 (s, 2,1H), 1,78 - 1,73 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 1,15 min, área del pico: 99,6 %.

Ejemplo 4

Preparació

a) Preparación del producto intermedio 18

4-amino-1-etil-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo

El producto intermedio 18 se sintetizó como se describe en el documento WO201218909A1.

b) Preparación del producto intermedio 19

1-etil-4-((4-metoxibencil)amino)-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo

En un vaso de precipitados (3 l) equipado con un agitador magnético, una solución de producto intermedio 18 (4-amino-1-etil-1H-pirazol-3-carboxilato) (120 g, 709 mmol), se preparó ácido trifluoroacético (162 g, 1,42 mol) y 4-metoxibenzaldehído (116 g, 852 mmol) en acetato de etilo (1,2 l). Se añadió borohidruro de sodio (21,5 g, 568 mmol) a la mezcla en porciones en baño de hielo-agua manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. A continuación se añadió agua (1 l) a la mezcla para inactivar la reacción y se agitó a 25 °C durante 2 horas. La mezcla se separó y la capa orgánica separada se lavó con agua (1 l x 3), salmuera (1 l), se secó sobre Na2SO4y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (equivalentes de gradiente: éter de petróleo:acetato de etilo de 100: 0 a 1: 1) para proporcionar el producto intermedio 19 (180 g, bruto) como un aceite amarillo claro.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 7,34 - 7,20 (m, 3H), 6,91 - 6,76 (m, 2H), 4,16 - 4,03 (m, 2H), 4,03 - 3,97 (m, 2H), 3,80 - 3,68 (m, 6H), 1,37 - 1,21 (m, 3H).

c) Preparación del producto intermedio 20

2-etil-7-hidroxi-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2-dihidro-2H-pirazol-[4,3-b]piridina-6-carboxilato de metilo

Una solución de producto intermedio 19 (1-etil-4-((4-metoxibencil)amino)-1H-pirazol-3-carboxilato de metilo) (90,0 g, 121 mmol) en seco N,N-dimetilformamida (600 ml) se añadió a un matraz de tres cuellos de 2 l. Se añadió hidruro de sodio (16,2 g, dispersión al 60 % en aceite, 405 mmol) a la mezcla en baño de hielo-agua en porciones. Después de la adición, la mezcla se agitó a 0 °C durante 15 minutos y se añadió cloruro malonilo de metilo (44,6 g, 327 mmol) a la mezcla gota a gota a 0 °C. La mezcla se agitó durante otros 15 minutos, a continuación se añadió metóxido de sodio (33,6 g, 622 mmol) a la mezcla en una porción y la mezcla se agitó a 110 °C durante 3 horas. La mezcla se concentró a presión reducida para dar un residuo. A continuación, el residuo se suspendió en 300 ml de agua y acetato de etilo (400 ml). La fase acuosa separada se acidificó por HCl (12 M) hasta un pH de 6-7. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (400 ml x 4). Los extractos combinados de diclorometano se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (equivalentes de gradiente: éter de petróleo:acetato de etilo de 10: 0 a 1: 9) para proporcionar el producto intermedio 20 (15,0 g, 85,9 % de pureza, 11,6 % de rendimiento) como sólidos pegajosos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B, Método 4): RT= 1,76 min, masa calculada para C18H19N3O5357,13, m/z encontrada 358,1 [M+H]<+>.

d) Preparación del producto intermedio 21

7-cloro-2-etil-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2-dihidro-2H-pirazol-[4,3-b]piridina-6-carboxilato de metilo

Una barra de agitación, producto el intermedio 20 (2-etil-7-hidroxi-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carboxilato de metilo) (25,0 g, 70,0 mmol) y diclorometano (150 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 500 ml. Se añadió cloruro de oxalilo (8,9 ml, 104 mmol) a 0 °C gota a gota. A continuación se añadió N,N-dimetilformamida (0,26 g, 3,56 mmol) a 0 °C, y la mezcla resultante se agitó a 15 °C. Después de 16 horas, la mezcla de reacción se concentró hasta sequedad a presión reducida. El residuo se suspendió en diclorometano (300 ml) y se basificó con solución saturada de bicarbonato de sodio hasta pH>7. La mezcla se separó y la capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (equivalente de gradiente: éter de petróleo:acetato de etilo de 1: 0 a 1: 2) para proporcionar el intermedio 21 (7,50 g, 25,7 % de rendimiento) como sólidos de color amarillo claro.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 7): RT= 2,93 min, masa calculada para C18H18ClN3O4375,10, m/z encontrada 375,9 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) δ = 8,31 (s, 1H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,88 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 5,06 (s, 2H), 4,32 (q, J= 7,3 Hz, 2H), 3,89 - 3,82 (m, 3H), 3,73 - 3,70 (m, 3H), 1,44 (t, J= 7,3 Hz, 3H). e) Preparación del producto intermedio 22

7-cloro-2-etil-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2-dihidro-2H-pirazol-[4,3-b]piridina-6-carbaldehído

Una barra de agitación, el producto intermedio 21 (7-cloro-2-etil-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carboxilato de metilo) (7,50 g, 20,0 mmol) y diclorometano (150 ml) se añadieron a un matraz de tres cuellos de 500 ml bajo nitrógeno. A continuación se añadió gota a gota hidruro de diisobutilaluminio (DIBAL-H) (29,9 ml, 1 M en tolueno, 29,9 mmol) a -78 °C, y la mezcla resultante se agitó a -78 °C. Después de 2 horas, la mezcla de reacción se inactivó con solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml) a -78 °C. La mezcla se agitó a -78 °C durante 20 minutos antes de añadir diclorometano (100 ml). La mezcla de reacción se filtró después de que la mezcla se calentara a 25 °C. La torta del filtro se lavó con diclorometano (300 ml x 5) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (equivalentes de gradiente: éter de petróleo:acetato de etilo de 1: 0 a 1: 3) para dar el producto, que se purificó adicionalmente mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex luna C18250*50 mm *10 um, Fase móvil A: agua (0,1 % TFA), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 120 ml/min, condición de gradiente del 20 % de B a 50 %). Las fracciones puras recolectadas se neutralizaron con solución saturada de bicarbonato de sodio hasta pH>7. A continuación, la mezcla se extrajo con diclorometano (200 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, y se filtraron. El filtrado se evaporó a sequedad para dar un residuo, que se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó para dar el producto intermedio 22 (5,50 g, 90,0 % de pureza, 71,7 % de rendimiento) como sólidos color amarillo claro. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,80 min, masa calculada para C17H16ClN3O3345,09, m/z encontrada 346,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 10,28 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,38 - 7,30 (m, 2H), 6,91 - 6,83 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 4,34 (q, J= 7,3 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 1,44 (t, J= 7,3 Hz, 3H).

f) Preparación del producto intermedio 23

7-cloro-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 22 (7-cloro-2-etil-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (1,20 g, 3,47 mmol), el producto intermedio 6 (4-metoxibenceno-1,2-diamina) (576 mg, 4,17 mmol) y 1,4-dioxano anhidro (8 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. A continuación se añadió tricloruro férrico (1,13 g, 6,97 mmol) a la mezcla de reacción, que se agitó a 25 °C durante 1 hora. La mezcla se ajustó a aproximadamente pH = 9,0 por solución saturada de bicarbonato de sodio y se filtró, a continuación el filtrado se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (DCM: MeOH = 10: 1) para dar el producto intermedio 23 (660 mg, 69,8 % de pureza, 28,6 % de rendimiento) como un polvo negro. LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,66 min, masa calculada para C24H22ClN5O3463,14, m/z encontrada 464,0 [M+H]<+>.

g) Preparación del producto intermedio 24

7-cloro-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 23 (7-cloro-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (660 mg, 0,993 mmol) y ácido 2,2,2-trifluoroacético (6 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. A continuación, se añadió ácido trifluorometanosulfónico (0,262 ml, 2,98 mmol) a la mezcla gota a gota, que se agitó a 60 °C durante 2 horas. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se basificó mediante solución saturada de bicarbonato de sodio hasta pH = 9. La mezcla se extrajo con cloroformo (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el producto intermedio 24 (1,20 g, bruto) como un polvo negro, que se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional. h) Preparación del compuesto 4

(S)-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 24 (7-cloro-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (400 mg, 0,582 mmol), producto intermedio 9-A (hidrocloruro de (S)-1-(pirimidin-2-il)etanamina) (140 mg, 0,877 mmol), bicarbonato de sodio (147 mg, 1,75 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (TBAI) (22,0 mg, 0,060 mmol), agua (0,5 ml) y cloroformo (3 ml) se añadieron a un vial de reacción de 8 ml. La mezcla se agitó a 60 °C durante 12 horas. La mezcla se enfrió lentamente hasta temperatura ambiente y se diluyó en diclorometano (20 ml), se lavó con agua (10 ml x 5). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM: MeOH = 10: 1) para dar el producto. A continuación el producto se purificó adicionalmente mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini C18250*5010 u, Fase móvil A: agua (10 mM de NH4HCO3), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 22 ml/min, condición de gradiente: de 22 % B a 52 %). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). A continuación, la mezcla se liofilizó para dar el compuesto 4 (30,5 mg, 100 % de pureza, 12,2 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,02 min, masa calc. Fo C22H22N8O2430,19, m/z encontrada 431,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 12,95 (br. s., 0,6H), 12,94 (br. s., 0,4H), 12,64 (d, J= 7,9 Hz, 0,4H), 12,60 (d, J=7,9 Hz, 0,6H), 10,89 (s, 1H), 8,85 - 8,81 (m, 2H), 7,67 (d, J= 1,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J= 8,6 Hz, 0,5H), 7,48 (d, J= 8,8 Hz, 0,5H), 7,39 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,2 Hz, 0,6H), 7,12 (d, J = 2,2 Hz, 0,4H), 6,80 (t, J = 2,0 Hz, 0,5H), 6,77 (t, J = 2,0 Hz, 0,5H), 6,44 - 6,34 (m, 1H), 4,26 - 4,17 (m, 2H), 3,84 - 3,76 (m, 3H), 1,78 - 1,71 (m, 3H), 1,36 - 1,29 (m, 3H).

SFC (Método 20): RT= 4,04 min, área del pico: 98,9 %.

Ejemplo 5

Preparación del compuesto 5, compuesto 5A y compuesto 5B

a) Preparación del compuesto 5

6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(oxazol-4-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 25 (7-cloro-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona; preparado como se describe en el Ejemplo 6) (0,400 g, 1,07 mmol), clorhidrato de 1-(oxazol-4-il)etanamina (0,191 g, 1,28 mmol), hidrogenocarbonato de sodio (0,270 g, 3,21 mmol) y N,N -dimetilacetamida (5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. La mezcla resultante se extrajo a 80 °C durante 1,5 horas. La mezcla se vertió en diclorometano (20 ml) y se lavó con agua (10 ml x 3). La capa orgánica separada se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina (THF) prep. para proporcionar el compuesto 5 (386 mg, 100 % de pureza, 80,3 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B, Método 5): RT= 0,60 min, masa calculada para C22H23N7O4449,18, m/z encontrada 450,1 [M+H]<+>.

b) Preparación del compuesto 5A

(S*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(oxazol-4-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

el compuesto 5B

(R*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(oxazol-4-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El compuesto racémico 5 se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm x 30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O IPA, A: B = 50: 55 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogió la fracción pura y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo puro se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 5A (96,8 mg, 97,3 % de pureza, 24,4 % de rendimiento) como sólidos amarillos, y el compuesto 5B (105,3 mg, 95,0 % de pureza, 25,9 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

Compuesto 5A

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,06 min, masa calculada para C22H23N7O4449,18, m/z encontrada 450,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,94 (s, 1H), 12,29 - 12,19 (m, 1H), 10,94 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,46 - 6,36 (m, 1H), 4,33 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 3,83 - 3,77 (m, 6H), 1,72 - 1,66 (m, 3H), 1,45 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

SFC (Método 13): RT= 0,94 min, área del pico: 99,9 %.

Compuesto 5B

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,93 (s, 1H), 12,27 - 12,21 (m, 1H), 10,94 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,45 - 6,36 (m, 1H), 4,33 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,83 - 3,76 (m, 6H), 1,71 - 1,66 (m, 3H), 1,45 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

SFC (Método 13): RT= 1,35 min, área del pico: 99,7 %.

Ejemplo 6

Preparación del compuesto 6

a) Preparación del producto intermedio 26

4,5-dimetoxibenceno-1,2-diamina

El producto intermedio 26 se sintetizó como se describe en Journal of Medicinal Chemistry, 1993, 331. LC-MS (ESI) (Procedimiento general B, Método 6): RT= 0,87 min, masa calculada para C8H12N2O2168,09, M/z encontrado 169,2 [M+H]<+>. Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 6,27 (s, 2H), 4,08 (br. s., 4H), 3,58 (s, 6H) b) Preparación del producto intermedio 27

7-cloro-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-4-(4-metoxibencil)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 26 (4,5-dimetoxibenceno-1,2-diamina) (0,560 g, 2,89 mmol), el producto intermedio 22 (7-cloro-2-etil-4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (1,00 g, 2,89 mmol) y 1,4-dioxano seco (5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 100 ml. Se añadió cloruro de hierro (III) (0,938 g, 5,78 mmol) a la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de diluir con agua (10 ml) y tratar con bicarbonato sódico sólido hasta pH = 8. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (30 ml). El extracto orgánico separado se lavó con salmuera (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro y se filtró. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (THF: EtOAc de 2: 1 a 1: 1) para proporcionar el producto intermedio 27 (621 mg, 100 % de pureza, 43,5 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 9): RT= 0,76 min, masa calculada para C25H24ClN5O4493,15, m/z encontrada 494,1 [M+H]<+>.

c) Preparación del producto intermedio 25

7-cloro-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 27 (7-cloro-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-4-(4-metoxibencilo)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona) (0,570 g, 1,15 mmol) y ácido 2,2,2-trifluoroacético (5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 100 ml. A continuación se añadió ácido trifluorometanosulfónico (0,3 ml, 3,41 mmol) a la mezcla. La mezcla de reacción se agitó a 80 °C por 1 hora antes de diluir con agua (10 ml) y tratar con bicarbonato de sodio sólido hasta pH = 8. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto intermedio 25 (610 mg, bruto) como sólidos amarillos que se usó para la siguiente etapa directamente sin purificación adicional.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C, Método 8): RT= 1,42 min, masa calculada para C17H16ClN5O3373,09, m/z encontrada 374,0 [M+H]<+>.

d) Preparación de (S)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Una barra de agitación, el producto intermedio 25 (7-cloro-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5 (4H)-ona) (0,200 g, 0,535 mmol), el producto intermedio 9-A (hidrocloruro de (S)-1-(pirimidin-2-il)etanamina) (0,102 g, 0,642 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,346 g, 2,68 mmol) y diclorometano anhidro (2,5 ml) se añadieron a un matraz de fondo redondo de 10 ml. La mezcla resultante se extrajo a 40 °C durante 18 horas. La mezcla se vertió en diclorometano (20 ml) y se lavó con agua (10 ml x 3). Y las capas orgánicas separadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y concentraron hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en capa fina (THF) prep. para producir el compuesto del título (163 mg, 98,2 % de pureza, 65,0 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B, Método 5): RT= 0,56 min, masa calculada para C23H24N8O3460,20, m/z encontrada 461,1 [M+H]<+>.

SFC (Método 13): RT= 1,10 min, área del pico: 92,2 %.

e) Preparación del compuesto 6

(S)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El compuesto del título se purificó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm x 30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: NH3H2O al 0,1 % IPA, A:B=45: 45 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogió la fracción y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se suspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 6 (117 mg, 99,6 % de pureza, 71,3 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,69 min, masa calculada para C23H24N8O3460,20, m/z encontrada 461,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,92 (s, 1H), 12,53 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 10,89 (s, 1H), 8,83 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 7,66 (s, 1H), 7,38 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,40 (quint, J = 7,1 Hz, 1H), 4,21 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 3,85 - 3,78 (m, 6H), 1,79 - 1,73 (m, 3H), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H),

SFC (Método 10): RT= 0,81 min, pico: 99,6 %.

Ejemplo 7

Preparación del compuesto 4 (forma de síntesis alternativa)

a) Preparación del producto intermedio 23

7-cloro-2-etil-6-(5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona A una mezcla del producto intermedio 6 (4-metoxibenceno-1,2-diamina) (1,0 g, 7,24 mmol) en dioxano (50 ml) se añadió el intermedio 22 (7-cloro-2-etil- 4-(4-metoxibencil)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (2,50 g, 7,24 mmol) en un baño de hielo. FeCl3(2,35 g, 14,48 mmol) se añadió y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El pH de la mezcla se ajustó a 8 con NaHCO3saturado. La mezcla se extrajo con CH2Cl2(50 ml *2). La fase orgánica combinada se lavó con H2O, salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (CH2Cl2: MeOH = 20:1), para dar el producto intermedio 23 (815 mg, 24,3 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,11 min, masa calculada para C24H22ClN5O3463,1, m/z encontrada 464,3 [M+H]<+>.

b) Preparación del producto intermedio 24

7-cloro-2-etil-6-(5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2,4-dihidro-5H-pirazol-[4,3-b]piridin-5-ona

A una solución de producto intermedio 23 (7-cloro-2-etil-6-(5-metoxi-1H-benzo [d] imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona) (1,03 g, 2,22 mmol) en CF3COOH (15 ml) se añadió TfOH (1,00 g, 6,66 mmol). La mezcla se agitó a 85 °C durante 3 horas. A continuación se concentró a presión reducida. El pH del residuo se ajustó a 8 con NaHCO3saturado. La mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2(50 ml *2). La fase orgánica combinada se lavó con H2O y salmuera, se secó sobre Na2SO4, filtró y concentró para dar el producto intermedio 24 (641 mg, bruto, 84,0 % de rendimiento) como sólidos negros que se usaron en la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 0,45 min, masa calculada para C16H14ClN5O2343,1, m/z encontrada 344,2 [M+H]<+>.

c) Preparación del compuesto 4

(S)-2-etil-6-(5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

A una solución de producto intermedio 24 (7-cloro-2-etil-6-(5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona) (170 mg, 0,49 mmol) en CH2Cl2(15 ml) se añadió el producto intermedio 9-A (hidrocloruro de (S)-1-(pirimidin-2-il)etan-1-amina) (156 mg, 0,98 mmol) y DIEA (317 mg, 2,45 mmol). La mezcla se agitó a 35 °C durante 16 horas. A continuación se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: MeOH = 100:1 a 60:1) para dar el compuesto 4 (106 mg, 50,0 % de rendimiento, 96,4 % de pureza, ee: 94,02 %) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 1,41 min, masa calculada para C22H22N8O2430,46, m/z encontrada 431,2 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,77-8,76 (m, 2H), 7,50-7,45 (m, 2H), 7,34-7,31 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 6,82(dd, J = 8,8 Hz, 2,4 Hz, 1H), 6,45-6,40 (m, 1H), 4,25-4,17 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 1,85 (d, J= 6,8 Hz, 3H), 1,39 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 8

Preparación del compuesto 7

Ejemplo 8

a) Preparación del producto intermedio 29

4-etoxi-5-metoxibenceno-1,2-diamina

A una mezcla del producto intermedio 28 (1-etoxi-2-metoxi-4,5-dinitrobenceno) (8,0 g, 33,06 mmol) y NH2NH2·H2O (16,53, 33,06 mmol) en EtOH (120 ml) se añadió 10 % de paladio sobre carbón vegetal en peso (800 mg). La reacción se realizó a 15 psi de H2. La mezcla resultante se agitó a 85 °C durante 30 minutos. A continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con H2O, y se extrajo con CH2Cl2(150 ml *2). La fase orgánica combinada se lavó con H2O, salmuera se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto intermedio 29 como sólidos grises.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 3): RT= 0,49 min, masa calculada para C9H14N2O2182,1, M/z encontrado 183,2 [M+H]<+>.

b) Preparación del producto intermedio 30

7-cloro-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2,4-dihidro-SH-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

A una mezcla del producto intermedio 5 (7-cloro-4-(4-metoxibencil)-2-metil-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridina-6-carbaldehído) (1,5 g, 4,52 mmol) en dioxano (25 ml) se añadió FeCl3(1,47 g, 9,06 mmol), seguido de una solución de producto intermedio 29 (4-etoxi-5-metoxibenceno-1,2-diamina) (824 mg, 4,52 mmol) en dioxano (10 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, a continuación se vertió en NaHCO3saturado (50 ml) y se extrajo con CH2Cl2(100 ml*2). La fase orgánica combinada se lavó con H2O, salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: EtOAc = 1:0 a 1:1) para dar el producto intermedio 30 (750 mg, 33,6 % de rendimiento) como sólidos marrones.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 1,02 min, masa calculada para C25H24ClN5O4493,2, m/z encontrada 494,3 [M+H]<+>.

c) Preparación del producto intermedio 31

7-cloro-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

A una solución de producto intermedio 30 (7-cloro-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d] imidazol-2-il)-4-(4-metoxibencil)-2-metil-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona) (750 mg, 1,52 mmol) en CF3COOH (20 ml) se añadió TfOH (684 mg, 4,56 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación se concentró a presión reducida. El pH del residuo se ajustó a 8 con NaHCO3saturado. La mezcla resultante se extrajo con CH2Cl2(50 ml *2). La fase orgánica combinada se lavó con H2O y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para dar el producto intermedio 31 como sólidos amarillos (630 mg, > 100 % de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 0,85 min, masa calculada para C17H16ClN5O3373,1, m/z encontrada 374,2 [M+H]<+>.

d) Preparación del compuesto 7 (S)-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2,4-dihidro-SH-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

A una solución de producto intermedio 31 (7-cloro-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona) (630 mg, 1,69 mmol) en CHCl3(20 ml) se añadió producto intermedio 9-A (hidrocloruro (S)-1-(pirimidin-2-il)etan-1-amina) (405 mg, 2,54 mmol), KHCO3(508 mg, 5,07 mmol) y 18-crown-6 (671 mg, 2,54 mmol). La mezcla se agitó a 60 °C durante 16 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se extrajo con CH2Cl2(50 ml*2). La fase orgánica combinada se lavó con KHCO3saturado (50 ml*3), H2O y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: EtOAc = 1:0~2:1) para dar el compuesto 7 (95,48 mg, 12,3 % de rendimiento, 96,8 % de pureza, ee: 96,32 %) en forma de sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 1,172 min, masa calculada para C23H24N8O3460,2, m/z encontrada 461,3 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,87 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 12,57 (d, J= 4,0 Hz, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,85-8,40 (m, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,42-7,11 (m, 3H), 6,47-6,46 (m, 1H), 4,08-3,99 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,83-3,79 (m, 3H), 1,73 (d, J= 6,8 Hz, 3H), 1,38 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

Los siguientes compuestos se prepararon según los protocolos de reacción de uno de los ejemplos anteriores usando materiales de partida alternativos según sea apropiado. (En la Tabla 1, Ej. X indica que la preparación de este compuesto se describe en el Ejemplo X o se prepara según el Ejemplo X).

Como se entiende por un experto en la técnica, los compuestos sintetizados mediante el uso de los protocolos como se indica pueden existir como un solvato, por ejemplo, hidrato, y/o contienen solvente residual o impurezas menores. Los compuestos aislados como una forma de sal pueden ser enteros estequiométricos, es decir, mono o disales, o de estequiometría intermedia.

Tabla 1

Método de purificación, LC MS, SFC y RMN para compuestos preparados según los procedimientos indicados en la Tabla 1

Compuesto 9

(S*)-2-(2-metil-7-(2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-6-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxamida

Después de completarse la reacción, la mezcla se vertió en agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano (15 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron, y se concentraron hasta secarse a presión reducida, para dar un residuo, que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 150*25 mm * 10 um, Fase móvil A: agua (hidróxido de amoniaco al 0,05 %), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente de 31 % de B a 61 %). La fracción pura se recogió y los compuestos volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 9 (26,4 mg, 99,2 % de pureza, 9,81 % de rendimiento) como un polvo amarillo. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 4,02 min, masa calculada para C23H23N9O2457,20, m/z encontrada 458,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) δ 13,22 (s, 1H), 12,63 - 12,52 (m, 1H), 10,89 (s, 1H), 8,82 - 8,76 (m, 2H), 8,21 - 8,17 (m, 0,4H), 8,11 (s, 0,6H), 7,99 (s, 0,6H), 7,88 (s, 0,4H), 7,76 - 7,71 (m, 1H), 7,71 - 7,67 (m, 0,6H), 7,65 - 7,61 (m, 1H), 7,56 - 7,51 (m, 0,4H), 7,37 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,50 - 6,41 (m, 1H), 3,94 - 3,86 (m, 3H), 2,70 - 2,61 (m, 1H), 1,12 - 1,02 (m, 6H).

SFC (Método 14): RT= 2,40 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 10

(S*)-N,N-dimetil-2-(2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-5-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-6-il)-1H-benzo[d]imidazol-6-carboxamida

Después de completarse la reacción, la mezcla se vertió en agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano (15 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron, y se concentraron hasta secarse a presión reducida, que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini C18250*5010u, Fase móvil A: agua (0,225 % FA), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 22 ml/min, condición de gradiente de 20 % de B a 50 %). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 10 (65,0 mg, 97,6 % de pureza, 20,2 % de rendimiento) como un polvo amarillo. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 4,32 min, masa calculada para C25H27N9O2485,23, m/z encontrada 486,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) δ 13,18 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 12,67 - 12,55 (m, 1H), 10,90 (s, 1H), 8,83 - 8,75 (m, 2H), 7,77 (s, 0,5H), 7,71 (d, J= 8,0 Hz, 0,5H), 7,63 (s, 1H), 7,57 - 7,52 (m, 1H), 7,40 - 7,33 (m, 1H), 7,21 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,48 - 6,42 (m, 1H), 3,96 - 3,83 (m, 3H), 3,07 - 2,93 (m, 6H), 2,70 - 2,61 (m, 1H), 1,12 - 1,01 (m, 6H).

SFC (Método 11): RT= 1,27 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 11

(S*)-6-(6-(dimetilamino)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo [4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla de reacción se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y concentraron a sequedad para dar un residuo, que se suspendió en éter metílico de terc-butilo (15 ml) y acetato de etilo (3 ml) con precipitación formada. La precipitación se filtró y se lavó con éter metílico de terc-butilo (10 ml) para dar el producto. El producto se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó para dar el compuesto 11 (165 mg, 96,6 % de pureza, 39,8 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,75 min, masa calculada para C23H26N10O2458,23, m/z encontrada 459,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 12,96 (s, 0,2H), 12,89 (s, 0,8H), 12,59 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 12,43 (d, J = 9,0 Hz, 0,8H), 10,89 (s, 0,2H), 10,86 (s, 0,8H), 8,84 - 8,75 (m, 2H), 8,51 (s, 0,2H), 8,40 (s, 0,8H), 7,62 (s, 1H), 7,36 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 6,81 (s, 0,8H), 6,58 (s, 0,2H), 6,47 - 6,38 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,06 - 2,99 (m, 6H), 2,64 - 2,56 (m, 1H), 1,08 - 1,00 (m, 6H).

SFC (Método 12): RT= 4,78 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 12

(S*)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: OD (250 mm × 30 mm, 5 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O EtOH, A:B = 55:45 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 12 (81,9 mg, 92,8 % de pureza, 35,9 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,81 min, masa calculada para C22H22N8O3446,18, m/z encontrada 447,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,96 - 12,86 (m, 1H), 12,77 - 12,63 (m, 1H), 10,93 - 10,84 (m, 1H), 8,90 - 8,74 (m, 2H), 7,69 - 7,61 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 0,5H), 7,45 - 7,37 (m, 1,5H), 7,29 - 7,25 (m, 0,5H), 7,08 - 7,02 (m, 0,5H), 6,82 - 6,74 (m, 1H), 6,64 - 6,55 (m, 1H), 4,17 - 4,10 (m, 1H), 4,04 - 3,97 (m, 1H), 3,94 - 3,88 (m, 3H), 3,83 - 3,76 (m, 3H), 3,38 - 3,35 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 3,69 min, pico: 97,6 %.

Compuesto 13

(R*)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y se concentraron hasta secarse a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: OD (250 mm × 30 mm, 5 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O EtOH, A:B = 55:45 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 13 (73,4 mg, 99,5 % de pureza, 34,5 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,96 - 12,88 (m, 1H), 12,77 - 12,64 (m, 1H), 10,93 - 10,86 (m, 1H), 8,86 - 8,79 (m, 2H), 7,67 - 7,62 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 0,5H), 7,45 - 7,37 (m, 1,5H), 7,29 - 7,25 (m, 0,5H), 7,07 - 7,03 (m, 0,5H), 6,81 - 6,75 (m, 1H), 6,65 - 6,54 (m, 1H), 4,17 - 4,11 (m, 1H), 4,04 - 3,97 (m, 1H), 3,93 - 3,89 (m, 3H), 3,82 - 3,77 (m, 3H), 3,37 - 3,35 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 4,55 min, pico: 100 %.

Compuesto 14

(S*)-6-(6-(dimetilamino)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y concentraron hasta sequedad a presión reducida para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano:metanol = 10: 1) para proporcionar el compuesto 14 (15,1 mg, 95,9 % de pureza, 26,9 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 4,06 min, masa calculada para C22H24N10O 444,21, m/z encontrada 445,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 12,94 (s, 0,2H), 12,87 (s, 0,8H), 12,66 (d, J = 8,4 Hz, 0,2H), 12,51 (d, J = 8,6 Hz, 0,8H), 10,91 (s, 0,2H), 10,88 (s, 0,8H), 8,87 - 8,79 (m, 2H), 8,50 (s, 0,2H), 8,43 (s, 0,8H), 7,65 (s, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 1H), 6,79 (s, 0,8H), 6,63 (s, 0,2H), 6,43 - 6,32 (m, 1H), 3,97 - 3,91 (m, 3H), 3,03 (s, 6H), 2,22 - 2,08 (m, 2H), 1,04 - 0,93 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 0,97 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 15

(S*)-6-(5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)-propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (100 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (50 ml x 3), salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano:metanol = 10:1) para dar el compuesto 15 (224 mg, 99,2 % de pureza, 32,9 % de rendimiento) como sólidos blancos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,47 min, masa calculada para C23H24N8O2444,20, m/z encontrada 445,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 12,98 (s, 1H), 12,63 - 12,50 (m, 1H), 10,86 (s, 1H), 8,84 - 8,73 (m, 2H), 7,62 (d, J=1,1 Hz, 1H), 7,57 (d, J=8,8 Hz, 0,4H), 7,42 (d, J=8,6 Hz, 0,6H), 7,39 - 7,33 (m, 1H), 7,29 (d, J=2,2 Hz, 0,6H), 7,04 (d, J=1,5 Hz, 0,4H), 6,84 - 6,76 (m, 1H), 6,49 - 6,40 (m, 1H), 3,94 - 3,87 (m, 3H), 3,84 - 3,77 (m, 3H), 2,71 - 2,56 (m, 1H), 1,11 - 1,00 (m, 6H).

SFC (Método 10): RT= 2,92 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 16

(S*)-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (100 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (50 ml x 3), salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a sequedad para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano:metanol = 10: 1), para dar el producto racémico como un sólido blanco. El producto racémico se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: columna: OJ (250 mm*30 mm, 5 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % NH3H2O MeOH, A:B = 65:35 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. Los residuos se liofilizaron para dar el compuesto 16 (31,7 mg, 97,7 % de pureza, 11,9 % de rendimiento) como sólidos blancos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,15 min, masa calculada para C22H22N8O2430,19, m/z encontrada 431,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 12,95 (br. s., 1H), 12,69 - 12,57 (m, 1H), 10,88 (br. s., 1H), 8,90 - 8,79 (m, 2H), 7,67 - 7,63 (m, 1H), 7,55 (d, J=8,6 Hz, 0,4H), 7,45 (d, J=8,6 Hz, 0,6H), 7,40 (dt, J=1,5, 4,9 Hz, 1H), 7,27 (d, J=2,4 Hz, 0,6H), 7,07 (d, J=2,0 Hz, 0,4H), 6,79 (dd, J=2,4, 8,6 Hz, 1H), 6,45 - 6,34 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,83 - 3,77 (m, 3H), 2,22 - 2,09 (m, 2H), 1,00 (q, J=7,5 Hz, 3H).

SFC (Método 13): RT= 1,50 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 17

(R*)-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (100 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (50 ml x 3), salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a sequedad para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano:metanol = 10: 1), para dar el producto racémico como un sólido blanco. El producto racémico se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: columna: OJ (250 mm*30 mm, 5 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % NH3H2O MeOH, A:B = 65:35 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. Los residuos se liofilizaron para dar el compuesto 17 (27,9 mg, 95,4 % de pureza, 10,2 % de rendimiento) como sólidos blancos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,15 min, masa calculada para C22H22N8O2430,19, m/z encontrada 431,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ = 12,99 (br. s., 1H), 12,65 (dd, J=8,4, 17,4 Hz, 1H), 10,90 (br. s., 1H), 8,92 - 8,78 (m, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,57 (d, J=8,6 Hz, 0,4H), 7,47 (d, J=8,6 Hz, 0,6H), 7,40 (dt, J=1,5, 4,9 Hz, 1H), 7,29 (d, J=2,4 Hz, 0,6H), 7,10 (d, J=2,2 Hz, 0,4H), 6,85 - 6,75 (m, 1H), 6,47 - 6,36 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,89 - 3,76 (m, 3H), 2,25 - 2,11 (m, 2H), 1,01 (q, J=7,5 Hz, 3H).

SFC (Método 13): RT= 2,18 min, área del pico: 96,6 %.

Compuesto 18

(S*)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 5), se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano:metanol = 10: 1) para dar un residuo. El residuo se resuspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 18 (56,4 mg, 98,5 % de pureza, 13,7 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,63 min, masa calc. Para C22H23N9O2445,20, m/z encontrada 446,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,14 (s, 0,3H), 13,11 (s, 0,7H), 12,58 (d, J = 8,8 Hz, 0,3H), 12,46 (d, J = 9,0 Hz, 0,7H), 10,94 (br. s., 0,3H), 10,93 (br. s., 0,7H), 8,83 - 8,78 (m, 2H), 8,52 (s, 0,3H), 8,40 (s, 0,7H), 7,65 (s, 1H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 7,01 (s, 0,7H), 6,80 (s, 0,3H), 6,49 - 6,41 (m, 1H), 3,94 - 3,90 (m, 3H), 3,89 - 3,86 (m, 3H), 2,66 - 2,57 (m, 1H), 1,08 - 1,01 (m, 6H).

SFC (Método 12): RT= 2,07 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 19

(S*)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-c]-piridin-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (8 ml x 5), se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano: THF=1 : 1) para dar el producto racémico como un polvo amarillo. A continuación, el producto racémico se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: columna: AD (250 mm * 30 mm, 10 um), fase móvil : A: agua; B: 0,1 % NH3H2O MEOH, A:B = 45:55 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se resuspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 19 (35,3 mg, 98,4 % de pureza, 3,05 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 3,76 min, masa calc. Para C21H21N9O3447,18, m/z encontrada 448,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,09 (s, 0,3H), 13,05 (s, 0,7H), 12,71 (d, J = 8,4 Hz, 0,3H), 12,60 (d, J = 8,2 Hz, 0,7H), 10,95 (br. s., 1H), 8,85 - 8,80 (m, 2H), 8,50 (s, 0,3H), 8,42 (s, 0,7H), 7,68 - 7,65 (m, 1H), 7,43 - 7,38 (m, 1H), 7,00 - 6,97 (m, 0,7H), 6,82 - 6,79 (m, 0,3H), 6,61 - 6,54 (m, 1H), 4,19 - 4,11 (m, 1H), 4,03 - 3,96 (m, 1H), 3,92 - 3,90 (m, 3H), 3,88 - 3,85 (m, 3H), 3,36 - 3,35 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 3,74 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 20

(R*)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-c]-piridin-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (8 ml x 5), se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (diclorometano: THF=1 : 1) para dar el producto racémico como un polvo amarillo. A continuación, el producto racémico se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: columna: AD (250 mm *30 mm, 10 um), fase móvil : A: agua; B: 0,1 % NH3H2O MEOH, A:B = 45:55 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se resuspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 20 (29,5 mg, 98,3 % de pureza, 2,56 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 3,77 min, masa calc. Para C21H21N9O3447,18, m/z encontrada 448,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,09 (s, 0,3H), 13,05 (s, 0,7H), 12,71 (d, J = 8,4 Hz, 0,3H), 12,60 (d, J = 8,2 Hz, 0,7H), 10,95 (br. s., 1H), 8,85 - 8,80 (m, 2H), 8,50 (s, 0,3H), 8,42 (s, 0,7H), 7,68 - 7,65 (m, 1H), 7,43 - 7,38 (m, 1H), 7,00 - 6,97 (s, 0,7H), 6,82 - 6,79 (s, 0,3H), 6,61 - 6,54 (m, 1H), 4,19 - 4,12 (m, 1H), 4,03 -3,97 (m, 1H), 3,92 - 3,90 (m, 3H), 3,88 - 3,85 (m, 3H), 3,36 - 3,35 (m, 3H)), 1,79 - 1,71 (m, 3H), 1,38 - 1,28 (m, 3H) SFC (Método 14): RT= 4,73 min, área del pico: 97,8 %.

Compuesto 21

(R)-6-(6-(dimetilamino)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 150 *25 mm* 10 um, Fase móvil A: agua (0,05 % hidróxido de amoníaco v/v), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente de 30 % de B a 60 %) para dar el producto como sólidos amarillos. El producto se purificó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm *30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % NH3H2O MeOH, A:B = 45:55 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 21 (28,3 mg, 99,6 % de pureza, 11,5 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 3): RT= 2,52 min, masa calculada para C22H24N10O 444,21, m/z encontrada 445,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,94 (s, 0,2H), 12,87 (s, 0,8H), 12,67 (d, J = 8,8 Hz, 0,2H), 12,51 (d, J = 8,6 Hz, 0,8H), 10,93 (s, 0,2H), 10,90 (s, 0,8H), 8,89 - 8,79 (m, 2H), 8,51 (s, 0,3H), 8,43 (s, 0,7H), 7,66 (s, 1H), 7,47 - 7,33 (m, 1H), 6,80 (s, 0,8H), 6,64 (s, 0,2H), 6,46 - 6,31 (m, 1H), 4,05 - 3,85 (m, 3H), 3,03 (s, 6H), 2,25 - 2,03 (m, 2H), 1,07 - 0,90 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 1,24 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 22

(S)-6-(6-(dimetilamino)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 150 *25 mm* 10 um, Fase móvil A: agua (0,05 % hidróxido de amoníaco v/v), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente de 30 % de B a 60 %) para dar el producto como sólidos amarillos. El producto se purificó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm * 30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % NH3H2O MeOH, A:B = 45:55 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 22 (14,0 mg, 100 % de pureza, 5,70 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 3): RT= 2,53 min, masa calculada para C22H24N10O 444,21, m/z encontrada 445,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Bruker) 12,94 (s, 0,2H), 12,87 (s, 0,8H), 12,66 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 12,51 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 10,92 (s, 0,2H), 10,89 (s, 0,8H), 8,89 - 8,80 (m, 2H), 8,50 (s, 0,2H), 8,43 (s, 0,8H), 7,66 (s, 1H), 7,45 - 7,37 (m, 1H), 6,80 (s, 0,8H), 6,63 (s, 0,2H), 6,44 - 6,31 (m, 1H), 4,01 - 3,88 (m, 3H), 3,03 (s, 6H), 2,24 - 2,05 (m, 2H), 1,05 - 0,90 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 1,82 min, área del pico: 99,5 %.

Compuesto 23

(S*)-6-(6-(dimetilamino)-1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona 0,14 formiato

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (15 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 250 mm*50 mm, 10 µm, Fase móvil A: agua (0,225 % FA), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 22 ml/min, condición de gradiente de 25 % de B a 55 %). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente al vacío, y a continuación se liofilizó para dar el compuesto 23 (37,6 mg, 100 % de pureza, 9,3 % de rendimiento) como polvo blanco. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,71 min, masa calculada para C23H26N10O 458,23, m/z encontrada 459,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,18 (s, 0,2H), 12,98 (s, 0,8H), 12,44 - 12,36 (m, 1H), 10,98 (s, 0,2H), 10,87 (s, 0,8H), 8,80 (d, J = 4,9 Hz, 0,4H), 8,77 (d, J = 4,9 Hz, 1,6H), 8,14 (s, 0,14H), 7,99 (d, J = 2,6 Hz, 0,8H), 7,95 (d, J = 2,6 Hz, 0,2H), 7,67 (s, 0,2H), 7,62 (s, 0,8H), 7,42 (d, J = 2,6 Hz, 0,8H), 7,39 - 7,32 (m, 1H), 7,24 (d, J = 2,2 Hz, 0,2H), 6,50 - 6,44 (m, 1H), 3,93 - 3,86 (m, 3H), 2,97 - 2,92 (m, 6H), 2,66 - 2,58 (m, 1H), 1,10 - 1,03 (m, 6H). SFC (Método 13): RT= 0,87 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 24

(S*)-6-(1H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (15 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 150 mm*25 mm, 10 µm, Fase móvil A: agua (0,05 % hidróxido de amoniaco), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente de 15 % de B a 45 %). Se recogieron las fracciones puras y se evaporó el disolvente al vacío, y a continuación se liofilizó para dar el compuesto 24 (11,3 mg, 99,2 % de pureza, 8,1 % de rendimiento) como polvo blanco. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,49 min, masa calculada para C21H21N9O 415,19, m/z encontrada 416,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,35 (s, 1H), 12,56 (d, J = 8,8 Hz, 0,4H), 12,49 (d, J = 8,8 Hz, 0,6H), 10,99 - 10,89 (m, 1H), 8,96 (s, 0,4H), 8,83 (s, 0,6H), 8,82 - 8,79 (m, 2H), 8,30 - 8,23 (m, 1H), 7,69 - 7,66 (m, 0,6H), 7,65 (s, 1H), 7,54 - 7,49 (m, 0,4H), 7,40 - 7,34 (m, 1H), 6,50 - 6,43 (m, 1H), 3,94 - 3,90 (m, 3H), 2,65 - 2,57 (m, 1H), 1,07 - 1,03 (m, 6H).

HPLC quiral (Método 22): RT= 14,6 min, área del pico: 99,8 %.

Compuesto 25

(S*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2-nietil-2H-pirazolo [4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (20 ml x 3), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía de capa fina prep. (DCM : MeOH = 10: 1), para dar el producto. El producto se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación:

IC (250 mm *30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O EtOH, A:B = 55:45 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (50 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 25 (27,8 mg, 95,2 % de pureza, 12,5 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,40 min, masa calculada para C23H24N8O4476,19, m/z encontrada 477,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,86 (s, 1H), 12,61 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,82 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,40 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,66 - 6,57 (m, 1H), 4,15 - 4,08 (m, 1H), 4,03 - 3,96 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,34 - 3,33 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 2,11 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 26

(R*)-6-(5,6-dimetoxi-1H benzo[d]imidazol-2-il)-7-((2-metoxi-1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (50 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (20 ml x 3), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía de capa fina prep. (DCM : MeOH = 10: 1), para dar el producto. El producto se separó mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: IC (250 mm * 30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O EtOH, A:B = 55:45 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y el disolvente se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (50 ml) y las mezclas resultantes se liofilizaron hasta sequedad para dar el compuesto 26 (31,8 mg, 96,3 % de pureza, 14,4 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,50 min, masa calculada para C23H24N8O4476,19, m/z encontrada 477,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,86 (s, 1H), 12,61 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,82 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,40 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,66 - 6,57 (m, 1H), 4,15 - 4,08 (m, 1H), 4,03 - 3,97 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,36 - 3,35 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 3,06 min, área del pico: 99,285 %.

Compuesto 27

(S*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (50 ml x 2). La capa orgánica separada se concentró a presión reducida para proporcionar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: diclorometano:metanol = 1:0 a 10:1) para proporcionar el compuesto 27 (39,5 mg, 98,1 % de pureza, 18,7 % de rendimiento) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,11 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 12,93 (s, 1H), 12,44 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 10,82 (s, 1H), 8,78 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 7,61 (s, 1H), 7,38 - 7,31 (m, 2H), 7,05 (s, 1H), 6,47 - 6,41 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (m, 3H), 2,65 - 2,57(m, 1H), 1,09 - 1,02 (m, 6H).

SFC (Método 10): RT= 0,92 min, área del pico: 98,5 %.

Compuesto 28

(S)-6-(6-fluoro-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de que se completó la reacción, la mezcla se concentró al vacío para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM:MeOH = 10:1) para proporcionar el compuesto 28 (1,0 mg, 99,5 % de pureza, 49,7 %) como un sólido amarillo claro.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 4,68 min, masa calculada para C20H17FN8O 404,15, m/z encontrada 405,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, METANOL-d<4>) (Varian) 8,78 (dd, J = 2,9, 4,9 Hz, 2H), 7,57 (dd, J = 4,9, 8,6 Hz, 0,5H), 7,51 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 4,7, 8,7 Hz, 0,5H), 7,35 (dt, J = 1,8, 4,9 Hz, 1H), 7,33 - 7,23 (m, 1H), 7,04 - 6,82 (m, 1H), 6,55 - 6,40 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 1,82 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

SFC (Método 11): RT= 1,49 min, área del pico: 99,2 %.

Compuesto 29:

(S)-6-(4,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtro se concentró hasta sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de capa fina prep. (THF: EtOAc = 1: 0) para proporcionar el producto como sólidos amarillos, que se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm × 30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: NH3H2O EtOH al 0,1 %, A:B=45: 55 a 80 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogió la fracción deseada y el disolvente orgánico se evaporó al vacío. El residuo se resuspendió en agua (10 ml) y la mezcla resultante se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 29 (104 mg, 99,7 % de pureza, 53,7 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 3,94 min, masa calculada para C22H22N8O3446,18, m/z encontrada 447,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) 13,10 - 12,90 (m, 1H), 12,53 - 12,44 (m, 1H), 11,07 - 10,81 (m, 1H), 8,88 - 8,77 (m, 2H), 7,71 - 7,63 (m, 1H), 7,44 - 7,39 (m, 1H), 6,89 - 6,85 (m, 0,7H), 6,77 -6,75 (m, 0,3H), 6,52 - 6,43 (m, 1H), 6,43 - 6,40 (m, 0,3H), 6,32 - 6,30 (m, 0,7H), 4,03 (s, 2H), 3,96 (s, 1H), 3,95 (s, 2H), 3,93 (s, 1H), 3,82 (s, 1H), 3,76 (s, 2H), 1,75 - 1,68 (m, 3H).

SFC (Método 14): RT= 1,40 min, pico: 99,1 %.

Compuesto 30

(S)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5c]piridin-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con agua (10 ml x 5). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM: MeOH = 10: 1) para dar el producto. El producto se purificó además mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: C2250 mm*30 mm, 10 um; Fase móvil: A: CO2supercrítico, B: 0,1 % de NH3H2O MeOH, A:B = 45:55 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 30 (14,8 mg, 97,5 % de pureza, 5,72 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 1): RT= 3,91 min, masa calc. Para C20H19N9O2417,17, m/z encontrada 418,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,26 (br. s., 0,3H), 13,16 (br. s., 0,7H), 12,72 -12,55 (m, 1H), 10,96 (br. s., 1H), 8,88 (d, J=4,9 Hz, 2H), 8,54 (s, 0,1H), 8,47 (s, 0,9H), 7,69 (s, 1H), 7,43 (t, J=4,9 Hz, 1H), 6,97 (br. s., 0,8H), 6,87 (br. s., 0,2H), 6,51 - 6,40 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 1,75 - 1,70 (m, 3H).

HPLC quiral (Método 22): RT= 14,9 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 31

(S)-6-(4,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano

(20 ml × 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4anhidro, se filtraron y concentraron hasta sequedad a presión reducida para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM: MeOH = 10: 1) para proporcionar el compuesto 31 (129 mg, 99,2 % de pureza, 45,9 % de rendimiento) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,17 min, masa calculada para C24H24N8O3460,20, m/z encontrada 461,1 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,07 (s, 0,3H), 12,92 (s, 0,7H), 12,46 (d, J = 7,9 Hz, 0,7H), 12,40 (d, J = 7,7 Hz, 0,3H), 11,02 (s, 0,3H), 10,87

(s, 0,7H), 8,86 - 8,75 (m, 2H), 7,69 (s, 0,3H), 7,66 (s, 0,7H), 7,39 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 2,0 Hz, 0,7H), 6,77 (d, J = 1,5 Hz, 0,3H), 6,46 - 6,30 (m, 2H), 4,26 - 4,17 (m, 2H), 4,05-3,91 (m, 3H), 3,86-3,76 (m, 3H), 1,80-1,68 (m, 3H), 1,36-1,28 (m, 3H).

SFC (Método 14): TA = 1,04 min, área del pico: 99,7 %.

Compuesto 32

(S)-2-etil-6-(4-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (20 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 5), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar el producto bruto que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM : THF=1 : 1) para dar el producto. El producto además se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Agela DuraShell 150 mm_25 mm_5um, Fase móvil A: agua (NH 10 mM4HCO3), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 25 ml/min, condición de gradiente: de 38 % de B a 68 %). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 32 (56,6 mg, 99,9 % de pureza, 11,3 % de rendimiento) como un polvo amarillo. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,19 min, masa calc. Para C22H22N8O2430,19, m/z encontrada 431,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 13,19 (s, 0,4H), 13,03 (s, 0,6H), 12,58 (d, J = 7,9 Hz, 0,6H), 12,49 (d, J = 7,7 Hz, 0,4H), 11,05 (s, 0,4H), 10,90 (s, 0,6H), 8,84 (d, J = 4,9 Hz, 0,8H), 8,80 (d, J = 4,9 Hz, 1,2H), 7,71 (s, 0,4H), 7,67 (s, 0,6H), 7,42 - 7,37 (m, 1H), 7,30 - 7,24 (m, 1H), 7,13 (t, J = 7,9 Hz, 0,4H), 7,05 (t, J = 7,9 Hz, 0,6H), 6,79 (d, J = 7,9 Hz, 0,4H), 6,69 (d, J = 7,9 Hz, 0,6H), 6,44 - 6,35 (m, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 2H), 4,06 - 3,95 (m, 3H), 1,79 - 1,71 (m, 3H), 1,38 - 1,28 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 0,79 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 33

(S*)-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(oxazol-4-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b] 124iridine-5(4H)-ona

y

Compuesto 34

(R*)-2-etil-6-(6-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(oxazol-4-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

Después de completarse la reacción, la mezcla se extrajo con diclorometano (30 ml). La capa orgánica separada se lavó con agua (10 ml x 5), se secó sobre Na2SO4anhidro, y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para dar el producto bruto, que se purificó mediante cromatografía en capa fina prep. (DCM : MeOH = 10: 1) para dar el producto. El producto además se purificó mediante HPLC prep. (Columna: Phenomenex Gemini 150 *25 mm* 10 um, Fase móvil A: agua (0,05 % hidróxido de amoníaco v/v), Fase móvil B: acetonitrilo, caudal: 22 ml/min, condición de gradiente de 35 % de B a 65 %). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto racémico (200 mg, 93,6 % de pureza, 38,4 % de rendimiento) como un polvo amarillo. A continuación, el producto racémico se purificó sobre cromatografía de fluidos supercríticos (condición de separación: AD (250 mm *30 mm, 10 um); Fase móvil: A: CO2supercrítico, B:

0,1 % de NH3H2O IPA, A:B = 45:55 a 50 ml/min; Temp. de columna: 38 °C; Presión de boquilla: 100 Bar; Temp. de boquilla: 60 °C; Temp. de evaporador: 20 °C; Temp. de recortadora: 25 °C; Longitud de onda: 220 nm). Se recogieron las fracciones puras y los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se suspendió en acetonitrilo (2 ml) y agua (10 ml). La mezcla se liofilizó a sequedad para dar el compuesto 33 (24,8 mg, 97,2 % de pureza, 12,1 % de rendimiento) como polvo amarillo, y compuesto 34 (32,2 mg, 95,1 % de pureza, 15,3 % de rendimiento) como un polvo amarillo.

Compuesto 33

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,50 min, masa calc. Para C21H21N7O3419,17, m/z encontrada 420,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 12,96 (s, 1H), 12,36 (d, J = 8,6 Hz, 0,4H), 12,30 (d, J = 8,6 Hz, 0,6H), 10,95 (s, 1H), 8,37 - 8,35 (m, 1H), 8,03 - 7,99 (m, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 0,5H), 7,41 (d, J = 8,8 Hz, 0,5H), 7,26 (d, J = 2,4 Hz, 0,6H), 7,06 (d, J = 2,4 Hz, 0,4H), 6,78 (d, J = 2,4 Hz, 0,5H), 6,76 (d, J = 2,4 Hz, 0,5H), 6,45 - 6,33 (m, 1H), 4,38 - 4,29 (m, 2H), 3,79 (d, J = 9,7 Hz, 3H), 1,71 - 1,65 (m, 3H), 1,48 - 1,41 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 1,38 min, área del pico: 100 %.

Compuesto 34

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A, Método 2): RT= 4,49 min, masa calc. C21H21N7O3419,17, m/z encontrada 420,0 [M+H]<+>.

Procedimiento general A: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d<6>) (Varian) δ 12,96 (s, 1H), 12,36 (d, J = 8,6 Hz, 0,4H), 12,31 (d, J = 8,6 Hz, 0,6H), 10,96 (br. s., 1H), 8,36 (s, 1H), 8,03 - 7,99 (m, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 0,5H), 7,41 (d, J = 8,8 Hz, 0,5H), 7,26 (d, J = 2,2 Hz, 0,6H), 7,06 (d, J = 2,2 Hz, 0,4H), 6,78 (d, J = 2,4 Hz, 0,5H), 6,76 (d, J = 2,4 Hz, 0,5H), 6,45 - 6,34 (m, 1H), 4,38 - 4,29 (m, 2H), 3,79 (d, J = 9,7 Hz, 3H), 1,72 - 1,65 (m, 3H), 1,49 - 1,41 (m, 3H).

SFC (Método 13): RT= 2,37 min, área del pico: 99,8 %.

Compuesto 35

(R*)-6-(5-metoxi-6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

Compuesto 36

(S*)-6-(5-metoxi-6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: MeOH = 150:1 hasta 50:1), para dar el producto bruto (497 mg, 84,2 % rendimiento) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC prep. (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: AD 2,5*25 cm, 10 um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2; A:B = 50:50 a 80 ml/min; Temp. de columna: 25 °C; Contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 35 (125,00 mg, 25,2 % de rendimiento, 96,9 % de pureza, ee: >99 %) y el compuesto 36 (99,33 mg, 20,0 % de rendimiento, pureza 98,3 %, ee: >99 %).

Compuesto 35:

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,39 min, masa calculada para C26H30N8O4518,57, m/z encontrada 519,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ12,93 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 12,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 10,81 (s, 1H), 8,79-8,78 (m, 2H), 7,61 (s, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 7,07 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,45-6,43 (m, 1H), 4,13-4,08 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,82-3,80 (m, 3H), 3,71-3,68 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,62-2,60 (m, 1H), 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 6H). Compuesto 36

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,93 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 12,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 10,81 (s, 1H), 8,79-8,78 (m, 2H), 7,61 (s, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 7,07 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,45-6,43 (m, 1H), 4,13-4,08 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,82-3,80 (m, 3H), 3,71-3,68 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,62-2,60 (m, 1H), 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 6H). Compuesto 37

(S)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante TLC preparativa (CH2Cl2: MeOH = 10:1) para dar el compuesto 37

(91,07 mg, 49,0 % de rendimiento, 99,4 % de pureza, ee: >99 %) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,27 min, masa calculada para C23H24N8O3460,20, m/z encontrada 461,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,90 (s, 1H), 12,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 10,86 (s, 1H), 8,82 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,38 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,42-6,38 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 1,75 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Compuesto 38

(S)-2-etil-6-(5-metoxi-6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante TLC prep. (CH2Cl2/MeOH=10:1), para dar el compuesto 38 (100,87 mg, 55,0 % de rendimiento, pureza 96,0 %, ee): 96,12 %) en forma de sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,32 min, masa calculada para C25H28N8O4504,22, m/z encontrada 505,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,90 (s, 1H), 12,51-12,49 (m, 1H), 10,85 (s, 1H), 8,82 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,39-7,15 (m, 3H), 6,43-6,36 (m, 1H), 4,23-4,18 (m, 2H), 4,12-4,10 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,71-3,69 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 1,75 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,32 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Compuesto 39

(R*)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

y

el compuesto 40

(S*)-6-(6-metoxi-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2-il)-2-metil-7-((2-metil-1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente, CH2Cl2:MeOH=100:1) para dar producto (70 mg, 14,8 % de rendimiento) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: AD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, fase móvil B: IPA/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=50/50 a 80 ml/min, temperatura de columna: 25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 39 (9,96 mg, 14,23 % de rendimiento, 94,4 % de pureza, ee: 98,42 %) y el compuesto 40 (13,56 mg, 19,37 % de rendimiento, 90,8 % de pureza, ee: 93,34 %). Compuesto 39

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,24 min, masa calculada para C22H23N9O2445,5, m/z encontrada 446,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ13,36-13,18 (m, 1H), 12,39-12,33 (m, 1H), 11,00-10,89 (m, 1H), 8,82-8,76 (m, 2H), 8,05-7,35 (m, 4H), 6,50-6,47 (m, 1H), 3,89 (t, J = 16,0 Hz, 6H), 1,24-1,22 (m, 1H), 1,09-1,04 (m, 6H). Compuesto 40

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,36-13,18 (m, 1H), 12,39-12,33 (m, 1H), 11,00-10,89 (m, 1H), 8,82-8,76 (m, 2H), 8,05-7,35 (m, 4H), 6,50-6,47 (m, 1H), 3,89 (t, J = 16,0 Hz, 6H), 1,24-1,22 (m, 1H), 1,09-1,04 (m, 6H). Compuesto 41

(S)-2-etil-6-(4-fluoro-5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: MeOH = 80:1 a 50:1) para dar el compuesto 41 (133 mg, 54,0 % de rendimiento, 99,4 % de pureza, ee: >99 %) como sólidos blancos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 4): RT= 1,38 min, masa calculada para C23H23FN8O3478,48, m/z encontrada 479,3 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,79-8,78 (m, 2H), 7,52 (s, 1H), 7,36-7,34 (m, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,41-6,38 (m, 1H), 4,25-4,20 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,90 (s, 2H), 1,84 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Compuesto 42

(S*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)-propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

el compuesto 43

(R*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)-propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (CH2Cl2: MeOH = 100:1), para dar el producto bruto (70 mg, 14,8 %) como un sólido amarillo. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=70/30 a 70 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 42 (32,23 mg, 46,0 % de rendimiento, 98,3 % de pureza, >99 %) y el compuesto 43 (33,88 mg, 48,4 % de rendimiento, pureza 98,4 %, ee: 98,76 %). Compuesto 42

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C-2, método 2): RT= 1,51 min, masa calculada para C23H24N8O3460,49, m/z encontrada 461,2 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,91 (s, 1H), 12,52-12,50 (m, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,83 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,41-7,32 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 6,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 2,17-2,15 (m, 2H), 1,01 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Compuesto 43

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C-2, método 2): RT= 1,52 min, masa calculada para C23H24N8O3460,49, m/z encontrada 461,2 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,02 (s, 1H), 12,40 (s, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,83 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,40-7,20 (m, 3H), 6,40-6,38 (m,1H), 3,93 (s, 3H), 3,81 (s, 6H), 2,16-2,14 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Compuesto 44

(S*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

el compuesto 45

(R*)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante TLC preparativa (CH2Cl2:MeOH = 10:1) para dar el producto bruto (112 mg, 59,1 % de rendimiento, pureza > 99 %) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: IC 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/DEA = 100/0,2, A:B=50/50 a 60 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión:100 bar) para proporcionar el compuesto 44 (41,93 mg, 37,2 % de rendimiento, 98,7 % de pureza, ee: >99 %) y el compuesto 45 (40,76 mg, 36,4 % de rendimiento, pureza 99,1 %, ee: >99 %).

Compuesto 44

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,35 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,91 (s, 1H), 12,48 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,81 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,37 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,34-6,29 (m, 1H), 4,22-4,17 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,21-2,12 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,04 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Compuesto 45

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,91 (s, 1H), 12,48 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,81 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,39-7,33 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 6,34-6,29 (m, 1H), 4,22-4,17 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 2,21-2,08 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,04 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Compuesto 46

(S*)-7-((ciclopropil(pirimidin-2-il)metil)amino)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]-imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

el compuesto 47

(R*)-7-((ciclopropil(pirimidin-2-il)metil)amino)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]-imidazol-2-il)-2-metil-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (CH2Cl2: MeOH = 100:1) para dar el producto bruto (70 mg, 14,8 % de rendimiento) como un sólido amarillo. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=60/40 a 70 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 46 (40,32 mg, 76,2 % de rendimiento, 98,5 % de pureza, >99 %) y el compuesto 47 (42,66 mg, 76,1 % de rendimiento, pureza 98,1 %, ee: 97,4 %).

Compuesto 46

LC-MS (ESI) (Procedimiento general C-2, método 2): RT= 1,58 min, masa calculada para C24H24N8O3472,50, m/z encontrada 473,3 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ12,92 (s, 1H), 12,51-12,49 (m, 1H), 10,85 (s, 1H), 8,83-8,82 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,40-7,33 (m, 3H), 6,28-6,24 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 1,56-1,55 (m, 1H), 0,56-0,51 (m, 4H).

Compuesto 47

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,91 (s, 1H), 12,33 (s, 1H), 10,86 (s, 1H), 8,84-8,82 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,41-7,24 (m, 3H), 6,25-6,22 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 1,57-1,54 (m, 1H), 0,56-0,51 (m, 4H).

Compuesto 48

(S*)-6-(6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)-propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

y

el compuesto 49

(R*)-6-(6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)propil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: MeOH = 20:1 hasta 10:1), para dar el producto bruto (40 mg, 20 % rendimiento) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:EtOH/ACN/DEA = 85/15/0,2, A:B=70/30 a 80 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 48 (7,24 mg, 18,1 % de rendimiento, 97,6 % de pureza, >99 %) y el compuesto 49 (17,57 mg, 44,0 % de rendimiento, pureza 98,2 %, ee: 95,98 %). Compuesto 48

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 0,95 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,78-8,71 (m, 2H), 7,50-7,46 (m, 2H), 7,36-7,34 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,89-6,87 (m, 1H), 6,40-6,37 (m, 1H), 4,18-4,17 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,79-3,77 (m, 2H), 3,45 (s, 3H), 2,28-2,22 (m, 2H), 1,13 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Compuesto 49

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 0,96 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,78 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,47 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,36-7,33(m, 1H), 7,16 (s, 1H), 6,88-6,86 (m, 1H), 6,39-6,37 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,79-3,77 (m, 2H), 3,45 (s, 3H), 2,26-2,24 (m, 2H), 1,13 (t, J = 6,8 Hz, 3H).

Compuesto 8

(S)-6-(6-etoxi-5-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (gradiente, CH2Cl2EtOAc = 1:0-2:1) para dar el compuesto 8 (100,37 mg, 14 % de rendimiento, 95,3 % de pureza, ee: 96,4 %) en forma de sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 1,285 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ12,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 12,53 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,82 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,39-7,37 (m, 1H), 7,30 (d, J = 5,6 Hz 1H), 7,13 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,40-6,38 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 2H), 4,08-4,01 (m, 2H), 3,83-3,79 (m, 3H), 1,75 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,40-1,30 (m, 6H). Compuesto 50

(S)-6-(6-etoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

La mezcla de reacción se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (CH2Cl2:MeOH = 25:1) para dar el producto bruto (110 mg, 35,0 % de rendimiento) como un sólido amarillo. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=60/40 a 80 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para dar el compuesto 50 (59,57 mg, 54,2 % de rendimiento, 99,8 % de pureza, ee: >99 %) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 2): RT= 1,70 min, masa calculada para C23H24N8O2444,20, m/z encontrada 445,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,92 (s, 1H), 12,65-12,59 (m, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,84-8,83 (m, 2H), 7,66-7,09 (m, 4H), 6,79 - 6,76 (m, 1H), 6,41-6,37 (m, 1H),4,25-4,19 (m, 2H), 4,11-4,02(m, 2H), 1,77-1,73 (m, 3H), 1,39-1,31 (m, 6H).

Compuesto 51

(S)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(piridin-2-il)etil)-amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (CH2Cl2:MeOH=100:1) para dar el compuesto 51 (328,25 mg, 53,5 % de rendimiento, 99,1 % de pureza, ee: >99 %) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 2): RT= 1,377 min, masa calculada para C24H25N7O3459,5, m/z encontrada 460,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,53 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,76-7,70 (m, 1H), 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,23-7,18 (m, 3H), 6,47-6,38 (m, 1H), 4,27-4,16 (m, 2H), 3,90 (s, 6H), 1,82 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,37 (t, J = 6,8 Hz, 3H). Compuesto 52

(S)-6-(5,6-dietoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-etil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (gradiente, CH2Cl2:MeOH=150:1 a 50: 1), para dar el producto bruto (260 mg, 34,0 %) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=50/50 a 80 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 52 (129,11 mg, 49,6 % de rendimiento, 98,9 % de pureza, >99 %) como sólidos amarillos. LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,44 min, masa calculada para C25H28N8O3488,54, m/z encontrada 489,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,87 (s, 1H), 12,53 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 10,85 (s, 1H), 8,82 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,38 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,41-6,37 (m, 1H), 4,23-4,00 (m, 6H), 1,75 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,38-1,30 (m, 9H).

Compuesto 53

(S)-6-(5,6-dietoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)-amino)-2,4-dihidro-5H-pirazolo[4,3-b]piridin-5-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (CH2Cl2:MeOH = 100:1), para dar el producto bruto (200 mg, 42,1 %) como sólidos amarillos. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: OD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: COz supercrítico, Fase móvil B:IPA/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=50/50 a 70 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 53 (71,44 mg, 35,7 % de rendimiento, 98,4 % de pureza, ee: >99 %).

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,37 min, masa calculada para C24H26N8O3474,5, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,78 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,34 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 7,19 (s, 2H), 6,49-6,48 (m, 1H), 4,14-4,12 (m, 4H), 3,95 (s, 3H), 1,83 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,44 (t, J = 7,0 Hz, 6H). Compuesto 54

(S)-2-etil-6-(6-(2-metoxietoxi)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-7-((1-(pirimidin-2-il)-etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, CH2Cl2: MeOH = 20:1 hasta 10:1), para dar el producto bruto (350 mg 70,6 % de rendimiento) como un sólido amarillo. El producto bruto se purificó adicionalmente mediante SFC (condición de separación: Instrumento: SFC80 (Waters); columna: AD 2,5*25 cm, 10um; Fase A móvil: CO2supercrítico, Fase móvil B:MeOH/ACN/DEA = 60/40/0,2, A:B=50/50 a 60 ml/min, temperatura de columna:25 °C, contrapresión: 100 bar) para proporcionar el compuesto 54 (114,25 mg, 32,6 % de rendimiento, 99,0 % de pureza, >99 %) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 3): RT= 1,50 min, masa calculada para C24H26N8O3474,21, m/z encontrada 475,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,78-8,76 (m, 2H), 7,51-7,15 (m, 4H), 6,88-6,85 (m, 1H), 6,46-6,43 (m, 1H), 4,25-4,16 (m, 4H), 3,79-3,76 (m, 2H), 3,45 (s, 3H), 1,88-1,84 (m, 3H), 1,39 (t, J = 7,6 Hz, 3H). Compuesto 55

(S)-6-(4-fluoro-5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(pirimidin-2-il)etil)amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante TLC prep. (CH2Cl2/MeOH=15:1), para dar el compuesto 55 (48,11 mg, 15,0 % de rendimiento, pureza 96,2 %, ee): 97,94 %) como sólidos marrones.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general B-2, método 4): RT= 1,44 min, masa calculada para C22H21FN8O3464,45, m/z encontrada 465,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, CD3OD) δ 8,80-8,79 (m, 2H), 7,51 (s, 1H), 7,37-7,35 (m, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,44-6,42 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,92 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 1,82 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

Compuesto 56

(S)-6-(5,6-dimetoxi-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metil-7-((1-(piridin-2-il)etil)-amino)-2H-pirazolo[4,3-b]piridin-5(4H)-ona

El residuo se purificó mediante TLC preparativa (CH2Cl2: MeOH = 10:1) para dar el compuesto 56 (124,58 mg, 33,5 % de rendimiento, 98,5 % de pureza, ee: >99 %) como sólidos amarillos.

LC-MS (ESI) (Procedimiento general A-2, método 2): RT= 1,20 min, masa calculada para C23H23N7O3445,19, m/z encontrada 446,4 [M+H]<+>.

Procedimiento general A-2: RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,93 (s, 1H), 12,48 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,61 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,47 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,26-7,25 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,53-6,45 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 1,71 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

Parte analítica

LCMS

Procedimiento general A

La medición de LC se realizó usando un sistema de HPLC Agilent 1200 que comprende un desgasificador, una bomba binaria, un muestreador automático, un calentador de columna, un detector de matriz de diodos (DAD) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. El flujo desde el DAD se dividió en un espectrómetro de MS (Agilent 6110 o 6140) y un ELSD. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La temperatura del gas de secado se mantuvo a 350 °C. El voltaje capilar fue de 2,5 V para el modo de ionización positiva y 3,0 V para el modo de ionización negativa. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 en un tamaño de paso 0,1. El tiempo de ciclo es de 0,89 segundos/ciclo. La adquisición de datos se realizó con una Chemstation B.04.03 Método 1

Además del procedimiento general A: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Waters XBridge Shield RP18 (50*2,1 mm 5 pm) con un caudal de 0,8 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A: agua con 0,05 % NH3 ● H2O; fase móvil B:acetonitrilo) se usaron. Primero, el 100 % de A se mantuvo durante 1 minuto. A continuación, se aplicó un gradiente a 40 % de A y 60 % de B en 4 minutos y a continuación a 5 % de A y 95 % de B en 2,5 minutos. Finalmente vuelve al 100 % de A en 2 minutos y se mantiene durante 0,5 minutos. El tiempo posterior es de 0,5 minutos. La temperatura del horno fue de 40 °C. El volumen de inyección es de 2 ul. (Polaridad de MS: positiva)

Método 2

Además del procedimiento general A: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Phenomenex Luna-C18 (5 µm, 2,0 x 50 mm) con un caudal de 0,8 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A: agua con TFA al 0,1 %; fase móvil B: acetronilo con 0,05 % de TFA) se usaron. El 100 % de A se mantuvo durante 1 minuto, se aplicó un gradiente de 100 % de A a 40 % de A en 4 minutos y 40 % de A hasta 15 % de A en 2,5 minutos. Y a continuación se devuelve al 100 % de A en 2 minutos y se mantiene durante 0,5 minutos. El tiempo posterior es de 0,5 min. La temperatura del horno fue de 50 °C. El volumen de inyección es de 2 ul. (Polaridad de MS: positiva) Método 3

Además del procedimiento general A: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Phenomenex Luna-C18 (5 µm, 2,0 x 50 mm) con un caudal de 0,8 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A: agua con TFA al 0,1 %; fase móvil B: acetronilo con 0,05 % de TFA) se usaron. Primero, el 90 % de A se mantuvo durante 0,8 minutos. A continuación se aplicó un gradiente a 20 % de A y 80 % de B en 3,7 minutos y se mantuvo durante 3 minutos. Y a continuación se devuelve al 90 % de A en 2 minutos y se mantiene durante 0,5 minutos. El tiempo posterior es de 0,5 min. La temperatura del horno fue de 50 °C. El volumen de inyección es de 2 ul. (Polaridad de MS: positiva) Procedimiento general B

La medición LCMS se realizó usando un sistema de serie Agilent1200 que comprende una bomba cuaternaria con desgasificador, un automuestreador, un horno de columna (ajustado a 50 °C, salvo que se indique lo contrario), un detector de matriz de diodos (DAD) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. El flujo de la columna se dividió en un espectrómetro de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 usando un tiempo de ciclo de 0,52 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue de 2,5 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 350 °C. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La adquisición de datos se realizó con un sistema de datos LC/MSD ChemStation. Método 4

Además del procedimiento general B: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Xtimate C18 (2,1*30 mm, 3 um) con un caudal de 1,2 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A:agua(4 L)+ TFA (1,5 ml); fase móvil B:acetonitrilo(4 L)+TFA (0,75 ml) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 100 % de A a 40 % de A, 60 % de B en 0,9 minutos y mantener en estas condiciones durante 0,6 minutos, hasta 40 % de A y 60 % de B en 0,01 minutos y se reequilibraron con 40 % de A durante 0,49 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Método 5

Además del procedimiento general B: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna MERCK C18 (RP-18e 25-2 mm) con un caudal de 1,2 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A:agua(4 L)+ TFA (1,5 ml); fase móvil B:acetonitrilo(4 L)+TFA (0,75 ml) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 95 % de A al 5 % de A, 95 % de B en 0,7 minutos, y mantener en estas condiciones durante 0,4 minutos, hasta 95 % de A y 5 % de B en 0,01 minutos y reequilibrar con 95 % de A durante 0,49 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Método 6

Además del procedimiento general B: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Xbridge Shield RP-18 (5 um, 2,1*50 mm) con un caudal de 1,0 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A: agua (1 l)+NH3H2O (0,5 ml); fase móvil B: acetonitrilo) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 90 % de A a 20 % de A, 80 % de B en 2 minutos y mantener en estas condiciones durante 0,48 minutos, hasta 90 % de A y 10 % de B en 0,01 minutos y reequilibrar con 90 % de A durante 0,11 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Procedimiento general C

La medición LCMS se realizó usando un sistema de serie EV LCMS-2010 Shimadzu que comprende una bomba cuaternaria con desgasificador, un automuestreador, un horno de columna (ajustado a 50 °C, salvo que se indique lo contrario), un detector de matriz de diodos (DAD) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. El flujo de la columna se dividió en un espectrómetro de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 usando un tiempo de ciclo de 0,25 segundos. El voltaje del detector fue de 1,6 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 250 °C. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La adquisición de datos se realizó con un sistema de datos de solución LCMS.

Método 7

Además del procedimiento general C: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Xtimate C18 (2,1*30 mm, 3 um) con un caudal de 1,2 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A:agua(4 L)+ TFA (1,5 ml); fase móvil B:acetonitrilo(4 L)+TFA (0,75 ml) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 100 % de A a 40 % de A, 60 % de B en 6 minutos y mantener en estas condiciones durante 0,5 minutos, hasta 40 % de A y 60 % de B en 0,01 minutos y se reequilibraron con 40 % de A durante 0,49 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Método 8

Además del procedimiento general C: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna Xtimate C18 (2,1*30 mm, 3 um) con un caudal de 0,8 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A:agua(4 L)+ TFA (1,5 ml); fase móvil B:acetonitrilo(4 L)+TFA (0,75 ml) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 90 % de A a 20 % de A, 80 % de B en 6 minutos y mantener en estas condiciones durante 0,5 minutos, hasta 90 % de A y 10 % de B en 0,01 minutos y se reequilibraron con 90 % de A durante 0,49 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Método 9

Además del procedimiento general C: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna MERCK C18 (RP-18e 25- 2 mm) con un caudal de 1,2 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil A:agua(4l)+ TFA (1,5 ml); fase móvil B:acetonitrilo (4 l)+TFA (0,75 ml)) se emplearon para ejecutar una condición de gradiente del 95 % de A al 5 % de A, 95 % de B en 0,7 minutos, y mantener en estas condiciones durante 0,4 minutos, hasta 95 % de A y 5 % de B en 0,01 minutos y se reequilibraron con 95 % de A durante 0,49 minutos. Se usó un volumen de inyección de 0,1-20 µl. El voltaje de cono fue de 70 V para el modo de ionización positiva.

Procedimiento general A-2 para LC-MS

La medición LCMS se realizó usando un sistema Waters UPLC-QDa que comprende una bomba cuaternaria, un automuestreador, un horno de columna (ajustado a 50 °C, salvo que se indique lo contrario), un detector de matriz de fotodiodos (PDA) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. El flujo de la columna se dividió en un espectrómetro de MS. El detector de MS fue un detector QDa y se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Los espectros de masas se adquirieron al escanear de 100 a 1000. El voltaje de la aguja capilar fue de 0,8 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 120 °C. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La adquisición de datos se realizó con un sistema de datos Waters-Micromass MassLynx-Openlynx. Método 2 (90:10)

Además del procedimiento general A-2: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna ACQUITY UPLC BEH C18 (1,7 µm 2,1 x 50 mm) con un caudal de 0,6 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil C: ácido fórmico al 0,1 % en agua; fase móvil D: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 90 % de C y 10 % de D durante 1,2 minutos, a continuación mantener 5 % de C y 95 % de D durante 0,8 minutos. Un volumen de inyección entre 0,3-5 µl dependía de la concentración de muestra. El voltaje de cono fue de 15 V para el modo de ionización positiva.

Método 4 (70:30)

Además del procedimiento general A-2: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en una columna ACQUITY UPLC BEH C18 (1,7 µm 2,1 x 50 mm) con un caudal de 0,6 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil C: ácido fórmico al 0,1 % en agua; fase móvil D: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 70 % de C y 30 % de D durante 1,2 minutos, a continuación mantener 5 % de C y 95 % de D durante 0,8 minutos. Un volumen de inyección entre 0,3-5 µl dependía de la concentración de muestra. El voltaje de cono fue de 15 V para el modo de ionización positiva.

Procedimiento general B-2 para LC-MS

La medición LCMS se realizó usando un sistema Shimadzu LC-MS2020 que comprende una bomba (LC-20AD) con desgasificador (DG-20A3), un automuestreador (SIL-20AHT), un horno de columna (CTO-20A) (establecido a 40 °C, salvo que se indique lo contrario), un detector de matriz de fotodiodos (PDA) (SPD-M20A), un detector de dispersión de luz por evaporación (ELSD)(Alltech 3300ELSD) y una columna como se especifica en los métodos respectivos a continuación. El flujo de la columna se dividió en un espectrómetro de MS. El detector de MS se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Los espectros de masas se adquirieron al escanear de 80 a 1000. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La adquisición de datos se realizó con un sistema de datos de Labsolution. Método 2

Además del procedimiento general B-2: La UPLC de fase inversa se llevó a cabo en un SunFire C18 (5 µm 50*4,6 mm) con un caudal de 2,0 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil A: ácido fórmico al 0,1 % en agua; fase móvil B: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 90 % de A y 10 % de B durante 1,6 minutos, a continuación mantener 5 % de A y 95 % de B durante 1,0 minuto. Un volumen de inyección entre 0,3-5 µl dependía de la concentración de muestra. El voltaje de cono fue de 20 V para el modo de ionización positiva y negativa. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 en 0,2 segundos usando un retardo entre barrido de 0,1 segundos. Método 3

Además del procedimiento general B-2: La UPLC de fase inversa se llevó a cabo en un SunFire C18 (5 µm 50*4,6 mm) con un caudal de 2,0 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil A: ácido fórmico al 0,1 % en agua; fase móvil B: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 80 % de A y 20 % de B durante 1,6 minutos, a continuación mantener 5 % de A y 95 % de B durante 1,0 minuto. Un volumen de inyección entre 0,3-5 µl dependía de la concentración de muestra. El voltaje de cono fue de 20 V para el modo de ionización positiva y negativa. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 en 0,2 segundos usando un retardo entre barrido de 0,1 segundos.

Método 4

Además del procedimiento general B-2: La UPLC de fase inversa se llevó a cabo en un SunFire C18 (5 µm 50*4,6 mm) con un caudal de 2,0 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil A: ácido fórmico al 0,1 % en agua; fase móvil B: ácido fórmico al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 70 % de A y 30 % de B durante 1,6 minutos, a continuación mantener 5 % de A y 95 % de B durante 1,0 minuto. Un volumen de inyección entre 0,3-5 µl dependía de la concentración de muestra. El voltaje de cono fue de 20 V para el modo de ionización positiva y negativa. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 en 0,2 segundos usando un retardo entre barrido de 0,1 segundos. Procedimiento general C-2 para LC-MS

La medición LCMS se realizó mediante el uso de un sistema AB que comprende una bomba cuaternaria (G1311A), un muestreador automático (CTC Analytic HTS), un horno de columna (G1316A TCC, ajustado a 40 °C, salvo que se indique lo contrario), un detector DAD (G1315B) y una columna como se especifica en los métodos respectivos más abajo. El flujo de la columna se dividió en un espectrómetro de MS. El MS (API3000) se configuró con una fuente de ionización por electropulverización. Los espectros de masas se adquirieron al escanear de 80 a 1000. Se usó nitrógeno como gas nebulizador.

Método 2 (90:10)

Además del procedimiento general C-2: La HPLC de fase inversa se llevó a cabo en un SunFire C18 (5 µm 50*4,6 mm) con un caudal de 1,0 ml/min. Se emplearon dos fases móviles (fase móvil C: 0,1 % de NH3H2O en agua; fase móvil D: NH3H2O al 0,1 % en acetonitrilo) para mantener 95 % de C y 5 % de D durante 3 minutos, a continuación mantener 5 % de C y 95 % de D durante 1 minutos. Un volumen de inyección dependía de la concentración de muestra.

RMN

Procedimiento general A para RMN

Los experimentos de RMN a continuación se llevaron a cabo usando un espectrómetro Bruker Avance III 400 y un Varian 400 a temperatura ambiente, usando un bloqueo interno de deuterio y equipado con un cabezal de sonda BBO 400 MHz para el Bruker Avance III 400 y con Varian 400 ASW PFG 4nuc (<1>H,<13>C,<19>F,<31>P) cabezal de la sonda para el Varian 400. Los desplazamientos químicos (δ) se indican en partes por millón (ppm).

Procedimiento general A-2 para RMN

Los experimentos de RMN a continuación se llevaron a cabo usando un espectrómetro Bruker Avance III400 a temperatura ambiente, usando un bloqueo interno de deuterio y equipado con 5 mm de PABBO (<1>H,<13>C,<15>N,<31>P,<19>F) cabezal de sonda. Los desplazamientos químicos (□) se indican en partes por millón (ppm).

HPLC quiral/SFC

Procedimiento general D

La prueba SFC-MS se realizó usando un sistema de SFC Berger que comprende una bomba binaria, un muestreador automático, un calentador de columna, un detector de matriz de diodos (DAD), una válvula de conmutación de columna de 6 posiciones, una válvula de conmutación de disolvente y un regulador de contrapresión (BPR). Típicamente, la temperatura de la columna y la BPR se ajustaron a 40 C y 100 bar, respectivamente. El flujo desde el DAD se dividió en un espectrómetro de MS (Agilent 6110). El detector de MS se configuró con una fuente de ionización química a presión atmosférica. Se usó nitrógeno como gas nebulizador. La temperatura del gas de secado se mantuvo a 250 °C. El voltaje capilar fue de 3000 V para el modo de ionización positiva y 3000 V para el modo de ionización negativa. Los espectros de masas se adquirieron al escanear desde 100 hasta 1000 en un tamaño de paso 0,1. El tiempo de ciclo es de 1,06 segundos/ciclo. La adquisición de datos se realizó con una Chemstation B.04.03

Método 10

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralpak AD-350*4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 4 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: isopropanol (0,05 % DEA). El gradiente contenía 40 %. La temperatura de la columna fue 40 °C. (Polaridad de MS: positiva)

Método 11

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralcel OJ-350*4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 4 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: etanol (0,05 % DEA). El gradiente fue de 5 % a 40 % de B en 5 min y se mantuvo 40 % durante 2,5 min, a continuación 5 % de B durante 2,5 min. La temperatura de la columna fue de 40 °C. (Polaridad de MS: positiva) Método 12

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralcel OD-350*4,6 mm I.D., 5 um con un caudal de 4 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: etanol (0,05 % DEA). El gradiente fue de 5 % a 40 % de B en 5 min y se mantuvo 40 % durante 2,5 min, a continuación 5 % de B durante 2,5 min. La temperatura de la columna fue de 40 °C. (Polaridad de MS: positiva) Método 13

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralpak AD-350*4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 4 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: etanol (0,05 % DEA). El gradiente contenía 40 %. La temperatura de la columna fue 40 °C. (Polaridad de MS: positiva)

Método 14

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralpak AD-350*4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 4 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: Metanol (0,05 % DEA)). El gradiente contenía 40 %. La temperatura de la columna fue 40 °C. (Polaridad de MS: positiva)

Método 15

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralpak AD-350*4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 4 l/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: isopropanol (0,1 % de Etanolamina). El gradiente fue 40 % de isopropanol (0,1 % de Etanolamina) en CO2. La temperatura de la columna fue 40 °C. (Polaridad de MS: positiva)

Procedimiento general F

La prueba SFC se realizó usando un sistema Waters UPC^2 que comprende un desgasificador, una bomba binaria, un muestreador automático, un calentador de columna, un detector de matriz de diodos (PDA), una válvula de conmutación de columna de 6 posiciones, una válvula de conmutación de disolvente y un regulador de contrapresión (BPR). Típicamente, la temperatura de la columna y la BPR se establecieron en 35C y 1500 psi, respectivamente. Método 20

SFC se llevó a cabo en una columna Chiralpak AS-3150 x 4,6 mm I.D., 3 um con un caudal de 2,5 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: CO2B: isopropanol (0,05 % DEA). El gradiente contenía 40 %. La temperatura de la columna fue 40 °C. (Polaridad de MS: positiva)

Procedimiento general H

La prueba de HPLC quiral se realizó usando un sistema Shimadzu LC-20AB que comprende un desgasificador, una bomba binaria, un muestreador automático, un calentador de columna, una válvula de conmutación de columna de 6 posiciones y un detector de matriz de diodos (DAD). Típicamente, la temperatura de la columna se fijó a 30 °C. Método 22

La HPLC quiral se llevó a cabo en un CD-PH 250*4,6 mm I.D., columna de suma con un caudal de 0,8 ml/min. Dos fases móviles (fase móvil: A: Agua con 0,069 % de TFA B: acetonitrilo). El gradiente fue de 10 % a 80 % de B en 15 min, de 80 % a 10 % de B en 2 min, y mantuvo 10 % durante 13 min. La temperatura de la columna fue 30 °C. Parte farmacológica

Ensayos biológicos

Ensayo de cambio de movilidad de tipo silvestre FGFR3 (ensayo enzimático)

En un volumen de reacción final de 25 µl, 0,04 ng/µl de enzima natural de FGFR3 humano (dominio citoplasmático, de Carna Biosciences) se incubó con ATP 75 µM, sustrato de FL-péptido 30 1 µM y 250 nL del compuesto de prueba (DMSO al 1 % final) en regulador de ensayo (HEPES 100 mM pH 7,4, MgCl210 mM, 0,003 % de Brij35, DTT 1 mM). Después de la incubación durante 50 minutos a 30 °C, la reacción se detuvo con 10 µl de EDTA 0,5 M pH 8,0, y después se transfirieron 25 µl de la mezcla de reacción a la placa de lectura y se midió en el lector de Caliper EZ II. La tasa de conversión del producto de sustrato se usó como datos sin procesar para la normalización y la curva de concentración-respuesta (10 puntos de dosis con dilución en serie 4 x, comenzando con 10 µM) se representó usando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope).

Ensayo de cambio de movilidad de FGFR3 V555M (ensayo enzimático)

En un volumen de reacción final de 25 µl, 0,04 ng/µl de enzima de FGFR3 V555M (dominio citoplasmático que porta la mutación V555M, de Carna Biosciences) se incubó con ATP 30 µM, 1 µM de FL-péptido 30 sustrato y 250 nl del compuesto de ensayo (1 % de DMSO final) en regulador de ensayo (HEPES 100 mM pH 7,4, MgCl210 mM, 0,003 % de Brij35, DTT 1 mM). Después de la incubación durante 45 minutos a 30 °C, la reacción se detuvo con 10 µl de EDTA 0,5 M pH 8,0, y después se transfirieron 25 µl de la mezcla de reacción a la placa de lectura y se midió en el lector de Caliper EZ II. La tasa de conversión del producto de sustrato se usó como datos sin procesar para la normalización y la curva de concentración-respuesta (10 puntos de dosis con dilución en serie 4 x, comenzando con 10 µM) se representó usando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope). Ensayo de cambio de movilidad de FGFR3 V555L (ensayo enzimático)

En un volumen de reacción final de 25 µl, 0,04 ng/µl de enzima V555L humana de FGFR3 (dominio citoplasmático que porta la mutación V555L, de Carna Biosciences) se incubó con ATP 40 µM, 1 µM de FL-péptido 30 sustrato y 250 nl del compuesto de ensayo (1 % de DMSO final) en regulador de ensayo (HEPES 100 mM pH 7,4, 10 mM de MgCl2, 0,003 % de Brij35, DTT 1 mM). Después de la incubación durante 50 minutos a 30 °C, la reacción se detuvo con 10 µl de EDTA 0,5 M pH 8,0, y después se transfirieron 25 µl de la mezcla de reacción a la placa de lectura y se midió en el lector de Caliper EZ II. La tasa de conversión del producto de sustrato se usó como datos sin procesar para la normalización y la curva de concentración-respuesta (10 puntos de dosis con dilución en serie 4 x, comenzando con 10 µM) se representó usando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope). Ensayo de proliferación celular NIH/3T3 FGFR3 WT-TACC3

En el día 1, se sembraron 90 µl de suspensión celular (células NIH/3T3 que sobreexpresan proteína de fusión FGFR3 WT-TACC3) (30.000 células por pocillo en medio de crecimiento (DMEM que contiene 1 % de Glutamax, 10 % de FBS y 1 % Pen/Strep) en una placa de 96 pocillos y a continuación se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO2. En el día 2, se añadieron 10 µl de medio de crecimiento que contenía solución madre 10 veces del compuesto de prueba en cultivos celulares (9 puntos de dosis con 4 x dilución en serie, comenzando con 10 µM, 0,1 % de DMSO final). Después de 72 horas de incubación a 37 °C y 5 % de CO2en el día 5, se añadió un volumen de 50 µl de reactivo CellTiter Glo (CTG) en una placa de 96 pocillos que contenía células y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de medir las RLU (unidad de luz relativa) en un lector de microplacas con módulo de detección de luminiscencia. El valor de RLU se normalizó al % de supervivencia y la curva de concentración-respuesta se representó utilizando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope).

Ensayo de proliferación celular NIH/3T3 FGFR3 V555M-TACC3

En el día 1, se sembraron 90 µl de suspensión celular (células NIH/3T3 que sobreexpresan proteína de fusión FGFR3 V555M-TACC3) (30.000 células por pocillo en medio de crecimiento (DMEM que contiene 1 % de Glutamax, 10 % de FBS y 1 % Pen/Strep) en una placa de 96 pocillos y a continuación se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO2. En el día 2, se añadieron 10 µl de medio de crecimiento que contenía solución madre 10 veces del compuesto de prueba en cultivos celulares (9 puntos de dosis con 4 x dilución en serie, comenzando con 10 µM, 0,1 % de DMSO final). Después de 72 horas de incubación a 37 °C y 5 % de CO2en el día 5, se añadió un volumen de 50 µl de reactivo CellTiter Glo (CTG) en una placa de 96 pocillos que contenía células y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de medir las RLU (unidad de luz relativa) en un lector de microplacas con módulo de detección de luminiscencia. El valor de RLU se normalizó al % de supervivencia y la curva de concentración-respuesta se representó utilizando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope).

Ensayo de proliferación celular simulada de NIH/3T3

En el día 1, se sembraron 90 µl de suspensión celular (células NIH/3T3 transfectadas con el mismo vector de control que en los dos ensayos de proliferación anteriores) (30.000 células por pocillo en medio de crecimiento (DMEM que contenía Glutamax 1 %, FBS al 10 % y Pen/Estrep al 1 %) en una placa de 96 pocillos y a continuación se incubaron durante la noche a 37 °C y 5 % de CO2. En el día 2, se añadieron 10 µl de medio de crecimiento que contenía solución madre 10 veces del compuesto de prueba en cultivos celulares (9 puntos de dosis con 3 x dilución en serie, comenzando con 30 µM, 0,3 % de DMSO final). Después de 72 horas de incubación a 37 °C y 5 % de CO2en el día 5, se añadió un volumen de 50 µl de reactivo CellTiter Glo (CTG) en una placa de 96 pocillos que contenía células y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de medir las RLU (unidad de luz relativa) en un lector de microplacas con módulo de detección de luminiscencia. El valor de RLU se normalizó al % de supervivencia y la curva de concentración-respuesta se representó utilizando Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope). Este ensayo sirvió como un ensayo de recuento para los ensayos de proliferación de células NIH/3T3 WT/VM-TACC3 para indicar la toxicidad general de los compuestos de prueba causados por un efecto fuera de la diana.

Ensayo de fosfo-ERK celular NIH/3T3 FGFR3 WT-TACC3 (ensayo de PD in vitro)

Se sembraron 50 µl de suspensión celular (células NIH/3T3 que sobreexpresan la proteína de fusión FGFR3 WT-TACC3) (10.000 células por pocillo en medio de crecimiento (DMEM que contenía 1 % de Glutamax, 10 % de FBS y 1 % de Pen/Strep) en una placa de 384 pocillos. Después de la incubación durante la noche a 37 °C y 5 % de CO2, se añadieron 5,5 µl de medio de crecimiento que contenía 10 x compuesto de prueba en cultivos celulares (10 puntos de dosis con 4 x dilución en serie, comenzando con 10 µM, 0,1 % de DMSO final). Después de 1 hora de incubación a 37 °C y 5 % de CO2el medio se redujo y el kit de ensayo AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (de PerkinElmer) se aplicó para la detección del nivel de fosfo-ERK según las instrucciones del kit. Las RFU (unidades de fluorescencia relativa se midieron en un lector de microplacas EnVision (ex. 680 nm, em; 615 nm) y la curva de concentración-respuesta se representó mediante el uso de Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope).

Ensayo de fosfo-ERK celular de FGFR3 V555M-TACC3 NIH/3T3) en ensayo PD in vitro)

Se sembraron 50 µl de suspensión celular (células NIH/3T3 que sobreexpresan proteína de fusión de FGFR3 V555M-TACC3) (10.000 células por pocillo en medio de crecimiento (DMEM que contenía 1 % de Glutamax, 10 % de FBS y 1 % Pen/Strep) en una placa de 384 pocillos. Después de la incubación durante la noche a 37 °C y 5 % de CO2, se añadieron 5,5 µl de medio de crecimiento que contenía 10 x compuesto de prueba en cultivos celulares (10 puntos de dosis con 4 x dilución en serie, comenzando con 10 µM, 0,1 % de DMSO final). Después de 1 hora de incubación a 37 °C y 5 % de CO2el medio se redujo y el kit de ensayo AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204) (de PerkinElmer) se aplicó para la detección del nivel de fosfo-ERK según las instrucciones del kit. Las RFU (unidades de fluorescencia relativa se midieron en un lector de microplacas EnVision (ex. 680 nm, em; 615 nm) y la curva de concentración-respuesta se representó mediante el uso de Prism para calcular la IC50(M), pIC50(-logIC50) y el valor de pendiente (HillSlope).

Tabla 2: Datos farmacológicos (IC50; unidad nM)

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I)
incluyendo cualquier forma tautomérica y estereoquímicamente isomérica de la misma, en donde A1, A2, A3y A4cada uno representa independientemente CH, CR<a1>, CR<a2>o N; siempre que uno o más de A1, A2, A3y A4representen un átomo de carbono sustituido, al menos uno de dichos átomos de carbono sustituidos representa CR<a1>, y siempre que máximo tres de A1, A2, A3y A4puedan representar CR<a1>o CR<a2>; C1 es hidrógeno o alquilo C1-4; C2 es hidrógeno, alquilo C1-4, hidroxilo o alcoxi C1-4; o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos; cada R<a1>es independientemente halo, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, ciano, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, -S(=O)-alquilo C1-6, -S(=O)2-alquilo C1-6o cicloalquilo C3-6; cada R<a2>es independientemente alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, halo, alcoxi C1-6, carboxilo, alquiloxicarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, ciano, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, o un heterociclilo saturado monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; R<c>es hidrógeno, alquilo C1-4o alquiloxi C1-4alquilo C1-4; Res hidrógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquiloxicarbonilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cianoalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, -C(=O)-NH2, -C(=O)-NH(alquilo C1-4), -C(=O)-N(alquilo C1-4)2, cicloalquilo C3-6, fenilo, un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, o alquilo C1-6sustituido con cicloalquilo C3-6o con fenilo o con un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; B es un carbociclilo de 3 a 12 miembros o un heterociclilo de 3 a 12 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho carbociclilo y heterociclilo se sustituyen opcionalmente con 1 a 5 sustituyentes de R; cada R es independientemente alquilo C1-6, ciano, halo, alcoxi C1-6, haloalcoxi C1-6, hidroxilo, hidroxialquilo C1-6, haloalquilo C1-6, oxo, -SO2-NH2, -SO2-NH(alquilo C1-4), -SO2-N (alquilo C1-4)2, -NH-C(=O)-alquenilo C2-6, -C(=O)-alquilo C1-6, -C(=O)-alquenilo C2-6, alquilo C1-6-O-C (=O)-, cicloalquilo C3-6, fenilo o un heterociclilo monocíclico de 3 a 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo. 2. El compuesto según la reivindicación 1 que tiene la siguiente fórmula (I-a)
3. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada R<a1>es independientemente halo, -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2, en particular cada R<a1>es independientemente -OR<c>, -N(R<c>)2, -C(=O)-N(R<c>)2.
4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la siguiente fórmula (I-A) o (I-A-a)

en donde n representa un número entero igual a 0, 1 o 2.
5. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la siguiente fórmula (I-B) o (I-B-a)

en donde n representa un número entero igual a 0, 1 o 2.
6. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la siguiente fórmula (I-C) o (I-C-a)

en donde n representa un número entero igual a 0, 1 o 2.
7. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la siguiente fórmula (I-D) o (I-D-a)

en donde n representa un número entero igual a 0, 1 o 2.
8. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cada R<a2>es independientemente halo o alcoxi C1-6.
9. El compuesto según la reivindicación 1 o 2 que tiene la siguiente fórmula (I-E) o (I-E-a)
10. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde C1es hidrógeno y C2es alquilo C1-4.
11. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde C1y C2son hidrógeno.
12. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde C1y C2son alquilo C1-4.
13. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde Res alquilo C1-6.
14. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde B es un heterociclilo de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 a 5 sustituyentes de R.
15. El compuesto según la reivindicación 14, en donde B es un heterociclilo aromático.
16. El compuesto según la reivindicación 1 o 2, en donde A1, A2, A3y A4cada uno representa independientemente CH, CR<a1>, CR<a2>; o uno de A1, A2, A3y A4representa N y los sustituyentes de A restantes representan cada uno independientemente CH, CR<a1>o CR<a2>. C1 es hidrógeno o alquilo C1-4, en particular hidrógeno o metilo; C2 es hidrógeno o alquilo C1-4o alcoxi C1-4, en particular hidrógeno, metilo o metoxi; o C1 y C2 se toman juntos para formar un cicloalquilo C3-6junto con el átomo de carbono al que están unidos, en particular ciclopropilo; cada R<a1>es independientemente halo (p. ej., fluoro), -OR<c>, -N(R<c>)2, o -C(=O)-N(R<c>)2; en particular halo, -O-alquilo C1-4, -O-alquiloxi C1-4alquilo C1-4, -NH2, -N(alquilo C1-4)2, -C(=O)-NHz o -C(=O)-N(alquilo C1-4)2; cada R<a2>es independientemente halo (p. ej., fluoro) o alcoxi C1-6, en particular halo o alcoxi C1-4; Res alquilo C1-6, en particular alquilo C1-4; B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S, en donde dicho heterociclilo se sustituye opcionalmente con 1 sustituyente de R; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo u oxazolilo; o B es un heterociclilo monocíclico aromático de 5 o 6 miembros no sustituido que contiene al menos un heteroátomo seleccionado de N, O o S; en particular B es piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, más en particular B es piridilo, pirimidinilo o oxazolilo.
17. El compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
18. El compuesto según la reivindicación 17, en donde el compuesto es

, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
19. El compuesto según la reivindicación 17, en donde el compuesto es

, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
20. El compuesto según la reivindicación 17, en donde el compuesto es

, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
21. El compuesto según la reivindicación 17, en donde el compuesto es

, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
22. El compuesto según la reivindicación 17, en donde el compuesto es

, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo.
23. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 y un portador farmacéuticamente aceptable.
24. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 (i)para su uso en terapia; (ii)para su uso en la profilaxis o tratamiento de una patología o afección mediada por una quinasa de FGFR; (iii)para su uso en el tratamiento del cáncer; o (iv)para su uso en el tratamiento del cáncer en donde el cáncer es un cáncer que alberga FGFR3 V555M.