ES2955820T3

ES2955820T3 - Gotas oculares basadas en una formulación liposomal esterilizable basada en curcumina y uso oftálmico de la misma

Info

Publication number: ES2955820T3
Application number: ES20771921T
Authority: ES
Inventors: Alessandro Zanini; Marco Vellante; Eugenio Sodo; Giovanni Cavallo; Fulvio Foschini; Roberto Giuva
Original assignee: Offhealth SpA
Current assignee: Offhealth SpA
Priority date: 2019-09-02
Filing date: 2020-08-31
Publication date: 2023-12-07
Anticipated expiration: 2040-08-31
Also published as: EP4003298A1; EP4003298B1; IT201900015408A1; WO2021044283A1

Abstract

Una formulación liposomal con curcumina, donde la cantidad de curcumina varía del 0,025% al 0,050% en peso del peso total, es estable en el tiempo, incluso sin conservantes y es esterilizable mediante filtración en filtro de 0,2 μm, de modo que pueda utilizarse como ocular. gotas. Los colirios a base de esta formulación liposomal con curcumina incluyen adicionalmente el uso de vitamina ED-α-tocoferol polietilenglicol (TPGS) con el doble propósito de favorecer la formación y estabilidad de los liposomas y al mismo tiempo proporcionar un fuerte efecto antioxidante. La vitamina E-TGPS está presente en una cantidad entre 0,025 y 0,5% en peso respecto a la composición final. Se describe un método para preparar estas gotas para los ojos y su uso para el tratamiento tópico del síndrome del ojo seco. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Gotas oculares basadas en una formulación liposomal esterilizable basada en curcumina y uso oftálmico de la misma CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La presente invención se refiere a gotas oculares basadas en una formulación liposomal con curcumina y al uso oftálmico de la misma. Más en particular, el objeto de la invención es una formulación liposómica con curcumina que es estable en el tiempo, incluso sin conservantes, y que es esterilizable por filtración en un filtro de 0,2 um, para poder usarse como gotas oculares. En detalle, la cantidad de curcumina varía del 0,025 % al 0,050 % en peso. Además, la formulación liposomal incluye el uso de vitamina E - D-a-tocoferol polietilenglicol (TPGS) con el doble propósito de promover la formación y estabilidad de los liposomas y simultáneamente proporcionar un fuerte efecto antioxidante. De acuerdo con una característica peculiar de la invención, Vit-E/TGPS está presente en una cantidad entre 0,025 y 0,5, incluso mejor entre 0,021 y 0,1 en peso con respecto al peso de la composición final, valores por debajo del umbral de citotoxicidad ocular reconocido en la literatura sobre la base de evidencia científica y que conducen a un efecto solubilizante de la curcumina solo si la relación con esta última es de al menos 10/1. (vitamina E-TPGS/curcumina). Dichas gotas oculares para su uso en el tratamiento tópico del síndrome del ojo seco también son un objeto de la invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] La curcumina es un componente natural activo muy valioso que se extrae de la raíz de cúrcuma (Curcuma fanga L.). Utilizada desde hace algún tiempo, la cúrcuma es actualmente una especia muy popular en nuestras mesas, la raíz de cúrcuma es el ingrediente principal del curry, se llama la especia dorada, no solo por el característico color amarillo-naranja intenso con el que tiñe los platos en los que está presente, sino también por los numerosos beneficios para la salud que es capaz de aportar. La cúrcuma tiene una importante acción antioxidante: la curcumina, uno de sus componentes más preciados, es capaz de llegar al cerebro, ya que es capaz de atravesar la barrera hematoencefálica. Ahora se sabe por la bibliografía que la curcumina tiene una clara actividad antiinflamatoria. De hecho, la acción de los mismos en la inhibición y regulación negativa de la expresión de ciclooxigenasa 2 (COX-2) es bien conocida. Algunas publicaciones recientes demuestran su capacidad para interactuar con una clase particular de receptores del dolor, los nociceptores. Sobre la base de estos datos, su potencial calmante también se contemplaría para el dolor agudo, a menudo presente en pacientes con diversos tipos de enfermedades crónicas. Según estos datos, la curcumina desensibilizaría el nociceptor TRPAl, incluso capaz de mediar el efecto analgésico del paracetamol. Dado que se conoce su acción en la inhibición y regulación negativa de la expresión de COX-2, la diana preferencial de la molécula antiinflamatoria nimesulida, se llevó a cabo un estudio piloto comparativo sobre la capacidad de la curcumina para aliviar el dolor agudo en comparación con el paracetamol y la nimesulida.

[0003] También se ha demostrado que el potencial antiinflamatorio de la curcumina es eficaz contra la artritis, que se sabe que es una enfermedad inflamatoria. Todos los medicamentos para la artritis aprobados actualmente son antiinflamatorios. La terapia anti-TNF (factor de necrosis tumoral) se ha aprobado recientemente para esta enfermedad. Se ha demostrado que la curcumina puede detener la producción de TNF y bloquear su acción. Aplicada tópicamente, se ha demostrado que la curcumina tiene actividad contra la artritis.

TÉCNICA ANTERIOR

[0004] El principal desafío cuando se desea el uso de la curcumina es mejorar la biodisponibilidad de la misma, es decir, la absorción y el uso por parte del cuerpo. En los últimos años, se han desarrollado varios procedimientos y estrategias para optimizarlo. Además, la escasa solubilidad de la curcumina en agua hace que su uso en forma inyectable y en forma específica de gota ocular sea particularmente difícil debido a la imposibilidad de esterilizar el producto por filtración incluso a baja concentración. La situación se complica aún más por el hecho de que el producto no se puede esterilizar mediante esterilización con vapor de flujo libre a 121 °C durante al menos 15 minutos a una presión de 1 atm, según lo prescrito por la Farmacopea, porque la alta temperatura degrada la molécula.

[0005] En la técnica anterior se conocen varios productos con características específicas, todos dirigidos a hacer que la curcumina sea soluble y fácilmente asimilable. Actualmente, el principal modo de administración de la curcumina, ya que está en forma de polvo, es por vía oral, se sabe que no tiene toxicidad, incluso a dosis altas (Lao CD y col., 2006). En detalle, nos gustaría destacar:

- UniCunTM: Para mejorar la absorción después de la administración por vía oral, la curcumina se complejó con un sistema de fosfolípidos que aumenta la biodisponibilidad de la misma en el cuerpo 29 veces, en promedio, en comparación con el extracto seco no complejado (Cuomo J y col., 2011). Este complejo, presente en UniCurTM, se llama Curcumin Fitosoma®, que es una patente internacional. La forma sólida es el producto Meriva®. En un estudio realizado por Di Pierro F y col., (Comparative evaluation of the pain-relieving properties of a lecithinized formulation of curcumin (Meriva®), nimesulide, and acetaminophen. Journal of Pain Research 2013:6201-205), fue posible obtener una curcumina de alta biodisponibilidad oral para su uso en el tratamiento del dolor y la inflamación. El producto mostró una clara actividad analgésica, comparable a la del paracetamol, pero ligeramente inferior a la de una dosis terapéutica de nimesulida. La actividad analgésica de Meriva® a dosis más bajas (1,5 g) fue menos satisfactoria. El tiempo de inicio del efecto analgésico de Meriva® fue posterior y el producto tardó más que la nimesulida en reducir el dolor en ambas dosis (1,5 y 2,0 g). En cuanto a los efectos secundarios, por el contrario, la tolerabilidad gástrica de Meriva® es significativamente mejor que la de la nimesulida y comparable a la del paracetamol. En conjunto, estos resultados demuestran que las propiedades analgésicas hipotéticas de la curcumina (en forma fitosómica) han encontrado una mayor confirmación y relevancia clínica en este estudio, al menos en lo que respecta a la dosis de 2 g. Si, por un lado, esta dosis es mayor que la utilizada en afecciones inflamatorias crónicas (1,2 g/día), por otro lado, la actividad analgésica de la misma podría beneficiarse de la reducción de la respuesta inflamatoria inducida por la curcumina, especialmente teniendo en cuenta que los mecanismos de analgesia mediados por los receptores del dolor aumentan por la atenuación de los fenómenos inflamatorios. En pacientes que reciben tratamiento para enfermedades inflamatorias crónicas, esto se traduce en un mejor control del dolor agudo y proporciona una justificación capaz de explicar los efectos analgésicos demostrados por la curcumina fitosómica.

- Cu RCUMINE REDOX: utiliza una tecnología única y exclusiva (NovaSOL® es una marca de AQUANOVA AG) gracias a la cual la curcumina es más fácilmente asimilable por el organismo, ya que imita los procesos digestivos naturales. La matriz en la que se encuentra la curcumina es estable a la acidez gástrica y la curcumina se libera directamente a la pared intestinal para una máxima absorción. Es suficiente usar una sola perla por día. La técnica Novasol consiste en la solubilización mediante la adición de tensioactivos como polisorbato 80 y polisorbato 20 a una alta concentración (10/15 %). La solubilización de la curcumina así obtenida permite administrar la curcumina por vía oral.

[0006] Sin embargo, la presencia de tensioactivos le da a la formulación una toxicidad inherente que la hace inutilizable a nivel de las membranas oculares.

[0007] Además, se debe considerar que estudios recientes han llevado a la identificación de efectos negativos debido a la administración por vía oral de curcumina, debido a que la alta absorción provoca la precipitación de la curcumina en el colédoco con la consiguiente posible hepatitis. Por lo tanto, en la hipótesis de que la administración por vía oral de curcumina puede ser útil para el bienestar del ojo, en particular en enfermedades con un componente inflamatorio, estos estudios refuerzan la idea de que una administración tópica de curcumina a nivel ocular es la solución óptima.

[0008] Recientemente se han presentado algunos estudios (Bianco y col., 2013; Davis y col., 2017) en el que se utilizaron nanoportadores para crear una nanoformulación micelar para administrar curcumina a los tejidos oculares. En estos estudios, se utilizaron compuestos inorgánicos como Calixarene y Pluronic F-127 para obtener micelas capaces de administrar curcumina en los tejidos oculares, en forma de gotas oculares y/o gel. Ambos estudios utilizan tensioactivos inorgánicos y, aunque se obtuvo una nanoformulación micelar, no hay evidencia empírica y/o indicación de que la solución resultante sea esterilizable. Se sabe que la curcumina es termolábil y, por lo tanto, no es posible esterilizar ninguna formulación a base de curcumina mediante esterilización con vapor de flujo libre. Además, el uso de tensioactivos, citados en los estudios informados anteriormente, produce principalmente soluciones micelares en la fase de gel, que son difíciles de esterilizar por microfiltración.

PROBLEMA A RESOLVER

[0009] Como se puede observar a partir de la técnica anterior, uno de los factores limitantes en el uso de la curcumina es la mala biodisponibilidad de la misma, particularmente sistémica, y la solubilidad. Aunque ha habido varios intentos de administración tópica local, un estudio ha demostrado que solo el 3 % de la curcumina llega al área a tratar. La baja solubilidad en agua de la curcumina dificulta su uso. En la técnica anterior y para los expertos en la materia, se conocen diversos procedimientos para la solubilización de los mismos, tales como solubilización en tampón alcalino, en disolventes tales como DMSO (dimetilsulfóxido), pero estos son a menudo tóxicos para los tejidos celulares y no aplicables a los tejidos oculares. La incorporación en nanopartículas para el transporte es conocida, pero el uso de tensioactivos para la estabilización de estas partículas a menudo no permite su uso en el campo oftálmico y no permite una esterilización de las mismas por filtración, la única alternativa a la esterilización con vapor de flujo libre a 121 °C durante 15 minutos a una presión de 1 atm, lo que degradaría la curcumina.

[0010] Hasta la fecha, sigue existiendo la necesidad de una formulación que sea fácilmente esterilizable y que permita que la curcumina se transporte eficazmente a los tejidos oculares, incluso para uso tópico.

[0011] En el documento de patente chino CN102008439, se describe una preparación liposómica recubierta de curcumina perteneciente al campo técnico de las aplicaciones médicas. En particular, se describe una formulación liposomal que comprende 10 mg de curcumina, 400 mg de lecitina y 10 mg de vitamina E TPGS en 20 ml de tampón fosfato, capaz de facilitar la absorción oral de fármacos poco solubles. Aquí, la relación de vitamina E TPGS y curcumina es 1/1, una relación que no da ninguna solubilización de la curcumina, pero mejora la absorción oral debido a la vitamina ETPGS.

[0012] El documento de patente CN102379850 describe un liposoma destinado a la administración de fármacos, incluida la curcumina, que atraviesa la barrera mucosa humana, particularmente adecuado para los pulmones y los ojos. En particular, se describe una formulación liposomal que comprende 0,1 % en peso de curcumina, 1 % en peso de Vitamina E TPGS y que se filtra a través de membranas de filtro de 0,22 micras. En este caso, se destaca la necesidad de tener una relación de vitamina E TPGS y curcumina de 10/1 para que la curcumina se solubilice, pero esta concentración de vitamina E TPGS es alta y citotóxica para el ojo.

[0013] El documento de patente CN 1824255 A describe un grano nanométrico de lípido sólido de aceite de cúrcuma de zedoaria y su procedimiento de preparación. Dicho grano nanométrico de lípidos sólidos es un nuevo sistema de administración de fármacos coloidales que puede sustituir el grano nanométrico de emulsión, liposoma y polímero y contiene fosfolípido muy medicinal, emulsionante, antioxidante de material lipídico sólido, etc. Sin embargo, no se proporciona ninguna enseñanza en relación con su posible uso oftálmico, ya que en sus ejemplos la presencia de Vit E TPGS nunca es inferior al 1 % en peso, es decir, alta y citotóxica para los ojos como en el caso anterior.

[0014] Como parte de la investigación realizada por el Solicitante sobre el desarrollo de una formulación liposómica de composiciones oftálmicas basadas en curcumina para el tratamiento tópico de estados inflamatorios de los tejidos oculares, se ha descubierto que numerosos estudios científicos muestran que altas concentraciones de vitamina E TGPS tienen un efecto solubilizante significativo en productos insolubles en agua, incluida la curcumina. Además, parece que la alta concentración de vitamina ETPGS paradójicamente minimiza el efecto portador de los liposomas formados por fosfolípidos y que cuando aumenta la concentración de vitamina ETPGS (tensioactivo HLB = 13), estos pueden ser destruidos.

[0015] A lo que se acaba de decir hay que añadir que con una concentración superior al 0,5 % en peso, la vitamina E TGPS tiene un efecto citotóxico (irritante) en el ojo: este hecho limita su uso a nivel oftálmico, al ser una sustancia con efecto tensioactivo.

[0016] Por lo tanto, se ha definido experimentalmente una formulación en la que, solo con un intervalo definido de concentraciones, la vitamina E TPGS es compatible con el uso ocular de la misma, dejando a los liposomas el papel principal del portador para transportar la curcumina y mejorando el efecto oxidante de la misma: específicamente, la mejor relación de vitamina E TPGS y curcumina es 1/1 en peso y la relación de vitamina E TPGS y fosfolípidos es 1/20 en peso (0,050 % de vitamina E TPGS / 1 % de fosfolípidos)

[0017] Por lo tanto, la presente invención sugiere una formulación liposomal a base de curcumina según las reivindicaciones que es fácilmente esterilizable por filtración de 0,2 micras, donde la presencia de vitamina TPGS, entre 0,05 % y 0,5 % en peso, incluso mejor entre 0,05 y 0,100 % en peso, permite el uso de la misma como gotas oculares, resultando por debajo del umbral de citotoxicidad mencionado anteriormente, mientras se mantiene intacta la capacidad portadora de los liposomas, siendo la relación entre la vitamina E TPGS y los fosfolípidos 1/20 o 1/10 respectivamente.

[0018] Ventajosamente, también debido a la presencia de vitamina E - TPGS y la potente actividad antioxidante de la misma, el objeto de la presente invención es capaz de reducir los fenómenos inflamatorios.

OBJETO DE LA INVENCIÓN

[0019] El primer objeto de la presente invención es la formulación liposomal de composiciones oftálmicas a base de curcumina para el tratamiento tópico de estados inflamatorios de los tejidos oculares, que es fácilmente esterilizable por filtración.

[0020] Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición oftálmica de liposomas de curcumina, fácilmente esterilizable mediante filtración de 0,2 micrómetros, que comprende además vitamina E - TPGS, otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición oftálmica de liposomas de curcumina fácilmente esterilizable, que comprende además vitamina E-TPGS en la que la relación en peso de curcumina y vitamina E TPGS es 1:1.

[0021] Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición oftálmica de liposomas de curcumina fácilmente esterilizable que comprende además vitamina E-TPGS, como constituyente de los propios liposomas, en la que la relación en peso de curcumina y vitamina E TPGS es 1:1, para su uso en el tratamiento tópico del síndrome del ojo seco.

[0022] Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición oftálmica de liposomas de curcumina, que comprende además vitamina E-TPGS, como constituyente de los propios liposomas, en la que la relación en peso de curcumina y vitamina E TPGS es 1:1, y en la que los liposomas consisten en fosfolípidos no hidrogenados, y tienen un diámetro promedio inferior a 200 nm.

[0023] Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición oftálmica de liposomas de curcumina, que comprende además vitamina E-TPGS, como constituyente de los propios liposomas, en la que la relación en peso de curcumina y vitamina E TPGS es 1:1, y en la que los liposomas consisten en fosfolípidos hidrogenados, y tienen un diámetro promedio inferior a 200 nm.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0024]

La figura 1 muestra la distribución gaussiana de las dimensiones de los liposomas de la formulación objeto de la presente invención, obtenida usando dispersión de luz en modo de intensidad, después de la extrusión, antes de la filtración de 0,2 um;

La figura 2 muestra la distribución gaussiana de las dimensiones de los liposomas de la formulación objeto de la presente invención, después de una filtración de 0,2 um.

[0025] Los dos gráficos demuestran cómo el procedimiento de preparación y extrusión utilizado conduce a un tamaño de partícula claramente inferior a 200 nm, lo que permite la filtrabilidad del producto, mientras se mantiene el título inicial de curcumina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0026] El componente fundamental de la formulación liposomal según la presente invención es la curcumina, extraída de la raíz de cúrcuma y conocida por sus propiedades antioxidantes y antiinflamatorias. Otro componente presente en la formulación objeto de la presente invención es la vitamina E-TPGS, que mejora la filtrabilidad de los liposomas y, al tener un poder antioxidante, actúa mejorando aún más la capacidad antioxidante de la curcumina en sí, además, estabilizando la formulación en sí.

[0027] Se llevaron a cabo pruebas de filtración experimentales en diversas formulaciones posibles en las que la concentración de curcumina variaba del 0,1 % p/p al 0,025 % p/p y se descubrió que las formulaciones filtrables a 0,2 micrómetros eran aquellas en las que esta concentración variaba del 0,025 % p/p al 0,050 % en peso sobre el peso total.

[0028] Además, la concentración de vitamina E-TGPS varió de 0,025 % p/p a 0,5 % p/p.

[0029] Según la presente invención, en una formulación liposomal oftálmica preferida, la relación en peso de Vit E TPGS y curcumina es 1:1.

[0030] Preferentemente, en esta formulación liposomal, los fosfolípidos son fosfolípidos hidrogenados con una concentración de fosfatidilcolina entre 80 y 90 %.

[0031] Una característica fundamental de la formulación así obtenida es que la población liposomal obtenida tiene un diámetro promedio menor a 200 nm.

[0032] Además, se debe evitar la posible formación de micro y/o macroagregados con dimensiones superiores a 200 nm. Además, se pueden añadir excipientes, sistemas tampón y otros agentes comúnmente conocidos por los expertos en la materia y utilizados en gotas oculares oftálmicas a la formulación liposómica objeto de la presente invención.

[0033] Además, la formulación debe estar dentro de los límites de los parámetros de osmolaridad (275 - 310 mOsmol/kg) y pH (7 - 7,4) requeridos para su uso como gotas oculares y conocidos por los expertos en la materia. FORMAS FARMACÉUTICAS Y DOSIS DE LA COMPOSICIÓN OBJETO COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS

[0034] En un aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéuticas liposomales que comprenden curcumina como agente terapéutico, que puede comprender vitamina E-TGPS. Algunas realizaciones pueden comprender uno o más agentes terapéuticos, portadores y/o excipientes farmacológicamente aceptables adicionales conocidos por los expertos en la materia, que siempre permiten la filtrabilidad de las gotas oculares.

[0035] Antes de informar los ejemplos de los prototipos que llevaron al desarrollo de una gota ocular liposomal estéril precisa por filtración de 0,2 micras, indicamos a continuación el procedimiento general que utilizamos para la preparación de los liposomas que contienen curcumina:

i) Los fosfolípidos no hidrogenados con curcumina se solubilizan en un disolvente orgánico, tal como etanol, para permitir la inclusión específica del principio activo en los fosfolípidos. La mezcla orgánica que consiste en los fosfolípidos y la curcumina se seca al vacío hasta la eliminación completa de los disolventes.

ii) La pasta fosfolipídica seca que contiene curcumina se hidrata en agua que contiene el tampón y otros excipientes, durante un tiempo de hidratación adecuado, luego se homogeneiza con un homogeneizador de cizallamiento durante un período de tiempo adecuado para obtener una mezcla de estructuras fosfolipídicas muy grandes, con un tamaño entre 10-20 micras, que llamaremos preliposomas a continuación.

iii) La solución preliposómica se extruye a alta presión de 9.119*107 Pa a 1.013*108 Pa (900-1000 atm) durante al menos 5 veces para obtener el tamaño deseado inferior a 200 nm.

iv) La solución de liposomas recién extruida se filtra en línea a 0,2 micrómetros.

v) La solución de liposomas esterilizada por filtración de 0,2 micrómetros se recoge en un recipiente estéril.

[0036] El procedimiento indicado anteriormente se llevó a cabo para todas las formulaciones indicadas a continuación.

[0037] Ahora se informan algunos ejemplos de formulación con fines puramente ilustrativos y no limitativos de la invención, en los que se han llevado a cabo pruebas experimentales para verificar la posibilidad de esterilización por medio de una filtración de 0,2 micrómetros y no por medio de un tratamiento a 121 °C.

[0038] Otros aspectos, ventajas o modificaciones dentro del alcance de la invención serán evidentes para los expertos en la materia relacionada con la invención.

1) Formulación 1: liposomas de curcumina 0,1 % gotas oculares (no según las reivindicaciones)

[0039]

[0040] Como se ve en la tabla 1, la formulación número 1 en liposomas de curcumina al 0,1 %, mientras que contiene fosfolípidos no hidrogenados (específicamente Phospholipon S80), es decir, representado por 80 % de fosfatidilcolina, con una transición de fase entre -5 °C y 30 °C, por lo tanto, particularmente flexible, fluido, no es filtrable a 0,2 micras: la concentración de curcumina del 0,1 % es el factor limitante.

[0041] Para resolver el problema de la esterilización, que es la condición requerida para el desarrollo de gotas oculares, se ha planteado la hipótesis de la posibilidad de esterilización con vapor a 121 °C durante 15 minutos a una presión de 1 atm según lo prescrito por la Farmacopea.

[0042] Pero la esterilización con vapor de la preparación condujo a la degradación de la curcumina, que de un color amarillo original se convirtió en un verde oscuro, que es el índice inequívoco de un efecto de degradación causado por la esterilización a 121 °C durante 20 minutos.

[0043] El pardeamiento de la solución fue acompañado por una precipitación de los cristales de curcumina a lo largo del tiempo. Esto indicaba la destrucción, al menos parcial, de los liposomas compuestos por fosfolípidos no hidrogenados.

2) Formulación 2: liposomas de curcumina 0,05 % colirio (no según las reivindicaciones)

[0044]

[0045] La formulación número 2 en liposomas de curcumina al 0,05 % tiene un pH de 7,16 y una osmolaridad (mOsmol/kg) de 287. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7,74; mOsmol/kg: 275-310). La formulación es solo parcialmente filtrable a 0,2 micras, después de un corto período de tiempo el filtro está completamente ocluido, por lo tanto, el producto no es esterilizable y, por lo tanto, se excluye su uso como gotas oculares. Es evidente a partir de este ejemplo que incluso con una disminución en la concentración de curcumina desde el 0,100 % inicial hasta la concentración de 0,50 %, la filtrabilidad del producto es muy pobre, especialmente si se considera la preparación industrial de 100-200 litros de gotas oculares. Al igual que la Formulación número 1, el intento de esterilizar al vapor la preparación condujo a la degradación de la curcumina y la consiguiente descomposición de los liposomas con depósitos de cristales de curcumina.

3) Formulación 3: Liposomas de curcumina 0,025 % (no según las reivindicaciones)

[0046]

[0047] La formulación número 3 en liposomas de curcumina al 0,025 % tiene un pH de 7,2 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 295. Ambos valores se encuentran dentro de los límites de aceptación conocidos en el estado de la técnica.

[0048] A pesar de haber disminuido la concentración de curcumina del 0,05 % inicial al 0,025 %, se encontró que la formulación número 3 era filtrable, pero aún con gran dificultad. Además, la disminución en la concentración de curcumina es, además, a expensas del posible efecto antiinflamatorio requerido.

[0049] Con el fin de resolver eficazmente el problema de la filtración de 0,2 micras, como único procedimiento de esterilización, se desarrolló la siguiente fórmula:

4) Formulación 4: Liposomas de curcumina 0,025 % (no según las reivindicaciones)

[0050]

[0051] La formulación número 4 en liposomas de curcumina al 0,025 % tiene un pH de 7.3 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 292. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7.4; mOsmol/kg: 275-310).

[0052] Se encontró que la formulación número 4 era filtrable, habiendo disminuido la concentración al 0,025 % desde el 0,05 % inicial, como en la formulación número 3, pero con la adición de Vitamina E-TPGS en la formulación, fuera de los liposomas.

[0053] Se agrega vitamina E-TPGS a una concentración de 0,5% en la etapa ii) del procedimiento de preparación de la formulación como se informó anteriormente, durante la hidratación de la pasta de fosfolípidos que contiene curcumina en agua y antes de la homogeneización de la misma. De este modo, se garantiza la presencia de vitamina E-TGPS especialmente en el exterior de los liposomas, mejorando la filtrabilidad de los liposomas de curcumina.

[0054] Aunque la vitamina E-TGPS tiene un efecto significativo en la filtrabilidad de los liposomas y asegura un efecto antioxidante sinérgico de la propia curcumina, podría tener, a una concentración del 0,5 %, una posible toxicidad en la superficie ocular, ya que además de ser una vitamina también es un tensioactivo. Con este fin, según la invención, se desarrolló una formulación de curcumina al 0,025% con vitamina E-TPGS a una concentración inferior al 0,1 % para limitar los posibles efectos indeseables. Sin embargo, para asegurar la actividad fluidificante de la misma, se inserta vitamina E-TGPS (con una concentración de 0,1 %) dentro de la estructura liposómica, añadiéndola ventajosamente en la fase de solubilización de los fosfolípidos no hidrogenados y la curcumina, es decir, la etapa i) del procedimiento de preparación de la formulación descrita anteriormente. La formulación así obtenida es la siguiente: Formulación 5. Liposomas de curcumina 0,025 %/Vitamina E - TPGS 0,100 % (dentro de la estructura liposómica) [0055]

[0056] La formulación número 5 en liposomas de curcumina al 0,025 % tiene un pH de 7.22 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 280. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7.4; mOsmol/kg: 275-310). Además, el diámetro medio de las partículas liposomales es inferior a 200 nm. La formulación de liposomas de curcumina al 0,025 % y vitamina E-TPGS al 0,100 % (como constituyente de los propios liposomas) es filtrable a 0,2 micras; el producto es, por lo tanto, esterilizable y, por lo tanto, permite su uso como gotas oculares sin conservantes, lo que hace que su desarrollo industrial sea viable.

[0057] Siguiendo la idea de incluir Vitamina E-TGPS dentro de los liposomas, se intentó reducir la concentración de la misma del 0,1 % al 0,050 %, y simultáneamente aumentar la concentración de curcumina del 0,025 % al 0,050 %, con el fin de asegurar una mayor eficacia antiinflamatoria a nivel ocular.

[0058] Se obtiene la siguiente formulación:

Formulación 6: liposomas de curcumina 0,05 %/Vitamina E - TPGS 0,05 % (dentro de la estructura liposómica) [0059]

[0060] La formulación número 6 en liposomas de curcumina al 0,050 % tiene un pH de 7.17 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 285. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7.4; mOsmol/kg: 275-310). Además, el diámetro medio de las partículas liposomales es inferior a 200 nm. La formulación de liposomas de curcumina al 0,050 % y vitamina E-TPGS al 0,05 % (como constituyente de los propios liposomas) es bien filtrable a 0,2 micras, lo que permite su uso como gotas oculares, sin añadir conservantes.

[0061] Habiendo obtenido un excelente resultado, la formulación anterior se mejoró aún más, reemplazando los fosfolípidos no hidrogenados (S80), que tienen una transición de fase a baja temperatura (-5 y 30 ° C) que es muy flexible y, por lo tanto, fácilmente filtrable, con fosfolípidos hidrogenados (específicamente PHOSPOLIPON 90H, es decir, con una concentración de fosfatidilcolina entre 80-90 %), mucho más rígido que tiene una transición de fase (45 55 ° C) y, por lo tanto, menos flexible y fluido y, por lo tanto, difícilmente filtrable a 0,2 micras.

[0062] Esta elección se hizo para mejorar la estabilidad general de la formulación, ya que aunque los fosfolípidos no hidrogenados son más fácilmente filtrables, son menos estables que los fosfolípidos hidrogenados: de hecho, estos últimos pueden degradarse con el tiempo debido al oxígeno e incluso a la temperatura con posibles cambios de color y posible presencia de peróxidos. Además, debido a la rigidez intrínseca de los mismos, son portadores más resistentes evitando la liberación de los principios activos a lo largo del tiempo.

[0063] En consideración a lo anterior, informamos la siguiente formulación número 7 aquí, que ha sido estudiada desde un punto de vista farmacológico.

Formulación Número 7: Liposomas de curcumina 0,05 %/Vitamina E - TPGS 0,05 % con fosfolípidos hidrogenados (dentro de los liposomas)

[0064]

(continuación)

[0065] La formulación número 7 en liposomas de curcumina al 0,050 % tiene un pH de 7.10 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 285. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7.4; mOsmol/kg: 275-310). Además, el diámetro medio de las partículas liposomales es inferior a 200 nm, como se muestra en la Figura 1. A pesar de la sustitución de los fosfolípidos no hidrogenados (más flexibles y filtrables) por otros hidrogenados (más rígidos y menos filtrables), la formulación de liposomas de curcumina al 0,050 % y vitamina E-TPGS al 0,05 % (como constituyente de los propios liposomas) sigue siendo bien filtrable a 0,2 micras, como se ve en la Figura 2, por lo tanto, esterilizable y utilizable para su uso como gotas oculares.

[0066] Con base en lo anterior, la formulación número 7 se analizó, por lo tanto, en las pruebas experimentales que se describen a continuación, con el objetivo de evaluar la eficacia antiinflamatoria de la misma.

[0067] Es importante tener en cuenta que en el experimento farmacológico que se ilustra a continuación, se informa un ensayo de viabilidad celular con excelentes resultados que demuestran que la estrategia de contener la concentración del tensioactivo VITAMINA E TPGS en la medida de lo posible fue apropiada y correcta (ver la siguiente tabla 2) que se acompaña de una excelente capacidad antiinflamatoria (ver la siguiente tabla 3) (inhibición de citocinas).

[0068] Además, la formulación número 7 se mejoró aún más reemplazando el tampón fosfato, utilizado en todas las formulaciones anteriores 1 a 7, con el tampón borato, que se sabe que es mucho más aceptado a nivel ocular.

[0069] La formulación desarrollada es la siguiente.

Formulación 8: Liposomas de curcumina 0,05 %/Vitamina E - TPGS 0,05 % con fosfolípidos hidrogenados (dentro de los liposomas)

[0070]

[0071] La formulación número 8 en liposomas de curcumina al 0,050 % tiene un pH de 7.24 y una osmolalidad (mOsmol/kg) de 286. Ambos valores están dentro de los límites de aceptación (pH: 7-7.4; mOsmol/kg: 275-310). Además, el diámetro medio de las partículas liposomales es inferior a 200 nm, lo que lo hace filtrable a 0,2 micras, por lo tanto, esterilizable y utilizable para su uso como gotas oculares.

PARTE EXPERIMENTAL EVALUACIÓN IN VITRO DEL POTENCIAL ANTIINFLAMATORIO DE LA FORMULACIÓN OFTÁLMICA LIPOSOMAL FORMULACIÓN NÚMERO 7

[0072] Para verificar el efecto antiinflamatorio de la formulación oftálmica liposomal a base de curcumina objeto de la presente invención, se llevó a cabo una prueba experimental, evaluando in vitro, en detalle, el potencial antiinflamatorio en la epidermis humana reconstruida.

[0073] El objetivo de la prueba fue determinar cuantitativamente los efectos de la formulación en cuestión en la protección de las células epiteliales y en la inhibición de la reacción inflamatoria causada por un irritante moderado como el lauril sulfato de sodio (SLS) mediante un modelo in vitro de células epiteliales multicapa. La inhibición de la liberación mediada por SLS de la citocina IL-1a después de la exposición de la formulación en cuestión y por comparación con la epidermis no tratada se evaluó por medio de un ensayo ELISA. El ensayo incluyó un ensayo de MTT de sensibilización al final de la incubación: ensayo de supervivencia celular utilizando la epidermis humana artificial 3D reconstruida in vitro para evaluar el potencial citotóxico de la muestra. Además, habrá inhibición de la liberación mediada por SLS de mediadores inflamatorios (IL-1 a).

Procedimientos de prueba

I. Modelo celular

[0074] Los sistemas de prueba in vitro utilizados consisten en un sistema tridimensional artificial de la epidermis humana. Se preparó un modelo reconstruido de piel humana artificial que comprende queratinocitos epidérmicos humanos normales, que se cultivó como un modelo de cultivo celular tridimensional integrado, imitando perfectamente la piel humana in vitro. El modelo presenta funciones de barrera normales (presencia de un estrato córneo bien diferenciado). Fue proporcionado por CELLSYSTEMS (Troisdorf, lote 100-AHl244-1).

II. Tratamiento y exposición

[0075] La epidermis se pretrató durante 60 minutos con SLS al 0,25 % y se obtuvo para inducir la síntesis y liberación de IL-1a. Posteriormente se aplicaron 30 ml de la formulación objeto de la invención sobre dos porciones de la epidermis en dos réplicas, y se llevó a cabo la exposición durante 24 horas a 37 °C, 5 % C02. Como control negativo, se trataron dos unidades epidérmicas con tampón fosfato, mientras que la epidermis tratada durante 60 minutos con SLS al 0,25 % se utilizó como control positivo. El ensayo se realizó en dos réplicas. Al final del período de exposición, la formulación de la muestra y los controles se retiraron lavando con tampón fosfato (PBS) y se realizó el ensayo MTT para evaluar la supervivencia celular. Para la prueba de IL 1a, el medio de cultivo se recolectó a las 6 y 24 horas. Solo el medio de cultivo de las unidades tratadas con PBS y los medios de las unidades epidérmicas no irritadas tratadas con muestra se usaron como controles negativos; mientras que los medios de las 2 unidades tratadas con SLS al 0,25 % se utilizaron como controles positivos.

III. Prueba de viabilidad de células MTT

[0076] Las unidades epidérmicas se tratan con 1 mg de solución MD de bromuro de (3-4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazolio) durante 3 horas a 37 °C. A continuación, la solución se retira y se reemplaza con isopropanol, con 2 horas adicionales de incubación a temperatura ambiente; Se transfieren 2 alícuotas de cada muestra a una placa de 96 pocillos para su lectura. La absorbancia se lee a la longitud de onda de 570 nm con un colorímetro (modelo remoto Tecan Sunrise) provisto de un lector de microplacas.

IV. Ensayo de IL-1 a

[0077] En este estudio, se determinó IL-1a en el medio de cultivo de epidermis tratada y no tratada, utilizando un ensayo ELIS directo (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas). La señal colorimétrica es directamente proporcional a la cantidad de citocina en el medio de cultivo. Las muestras se leen a 450 nm. El límite de detección es inferior a 10 μg/ml.

V. Expresión de los resultados.

[0078] Los resultados se expresan en términos de viabilidad celular:

% de viabilidad celular = [OD(570 nm) muestra de prueba/OD (570 nm) CN] x 100

IL-1a

[0079] La concentración de citocinas se determina utilizando una curva estándar. La inhibición de la liberación de IL-1a se determinó como: % de inhibición de IL-1 a:

100-(pa/ml _WIL_W-1 a liberado de muestras ¡rritadas/μg/ml _WIL_W-1 a control _Ipositivo) _/*100 VI. Criterios de aceptación del procedimiento

Prueba/dosis de MTT

[0080]

para el control negativo (CN): valor de OD entre 1,0-3,0.

la desviación típica debe ser <18 %

para el control positivo (CP): la viabilidad media (expresada como % del NC) debe ser <70 % la desviación típica debe ser < 18 %

para la muestra: la desviación estándar debe ser <18 %.

Tabla 1. Criterios para la aceptación del ensayo.

Tabla 2. Valores medios de viabilidad celular (%)

Tabla 3. Cantidad de IL-1a expresada en μg/ml

(continuación)

Resultados

[0081] En función de los resultados que se muestran aquí, la muestra de la Formulación número 7 NLL-103 (Niolip S.r.l.) - solución oftálmica muestra actividad antiinflamatoria in vitro. Ya después de 6 horas de incubación, se destaca una reducción en la liberación de IL-1a (50,57 %).

CONCLUSIONES

[0082] La eficacia antiinflamatoria de la formulación liposomal según la invención se determinó mediante pruebas experimentales estándar realizadas en cultivos celulares de epidermis humana reconstruida. Los datos así obtenidos se utilizaron para determinar las formulaciones anteriores como los intervalos de dosis óptimos para el uso de la composición en humanos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación liposómica oftálmica con curcumina y vitamina E-D-a-polietilenglicol (TPGS), caracterizada porque la cantidad de curcumina varía de 0,025 % a 0,050 % en peso, en peso total, de modo que esta formulación es filtrable y esterilizable a 0,2 micras, y la vitamina E-D-a-polietilenglicol (TPGS) se inserta dentro de la estructura liposómica en una cantidad entre 0,05 y 0,5 % en peso, con el doble propósito de promover la formación y filtrabilidad de los liposomas y simultáneamente proporcionar una estabilidad general de la formulación y un fuerte efecto antioxidante, estando dicha formulación dentro de los límites de aceptación de la osmolalidad de 275 310 mOsM/kg y el pH 7-7,4.

2. La formulación liposómica oftálmica según la reivindicación 1, caracterizada porque la curcumina y la vitamina E TPGS están ambas a una concentración del 0,050 % en peso con respecto al peso total de la formulación.

3. La formulación liposómica oftálmica según las reivindicaciones 1 y 2, caracterizada porque comprende además excipientes, sistemas tampón y otros agentes comúnmente conocidos por los expertos en la materia y utilizados en gotas oculares oftálmicas para permitir la inclusión específica del ingrediente activo en fosfolípidos.

4. La formulación liposómica oftálmica según las reivindicaciones 2 y 3, que tiene la siguiente composición:

que es estéril por filtración a 0,2 micras, con una osmolalidad de 285 mOsm/kg y un pH de 7,17, donde los fosfolípidos (S80) no están hidrogenados, y el fosfato de sodio dibásico dihidrato se usa como sistema tampón.

5. La formulación liposómica oftálmica según la reivindicación 2 y 3 que tiene la siguiente composición:

que es estéril por filtración, con una osmolalidad de 286 mOsM/kg y un pH de 7,24, donde se hidrogenan los fosfolípidos (90H), y se usa el fosfato de sodio dibásico dihidrato como sistema tampón.

6. La formulación liposómica oftálmica según las reivindicaciones 2 y 3, que tiene la siguiente composición:

que es estéril por filtración, con una osmolalidad de 286 mOsM/kg y un pH de 7,24, donde se hidrogenan los fosfolípidos (90H), y se usa el ácido bórico como sistema tampón.

7. La formulación liposómica oftálmica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso como gotas oculares, después de la esterilización por filtración.

8. La formulación liposómica oftálmica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso después de la esterilización por filtración, como gotas oculares para el tratamiento del síndrome del ojo seco.

9. Un procedimiento para preparar la formulación liposomal oftálmica con curcumina y Vit. E TPGS según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque comprende las siguientes etapas operativas:

i) Solubilización de fosfolípidos con curcumina y Vit E TPGS en un disolvente orgánico para la inclusión específica del principio activo y de Vit. E TPGS en los fosfolípidos, y secado al vacío de la mezcla orgánica que consiste en los fosfolípidos, curcumina y Vit. E TPGS hasta la eliminación completa de los disolventes.

ii) La pasta de fosfolípidos seca así obtenida se hidrata en agua que contiene el tampón y otros excipientes durante un tiempo de hidratación adecuado, con posterior homogeneización con un homogeneizador de cizallamiento durante un período de tiempo adecuado para obtener una mezcla de pro-liposomas.

iii) Extrusión de la solución de pro-liposomas a alta presión 9,119*107 Pa a 1,013*108 Pa ( 900-1000 atm ) durante al menos 5 veces para obtener el tamaño deseado inferior a 200 nm.

iv) Filtración en línea de 0,2 micrómetros de la solución de liposomas recién extruida.

v) Recolección de la solución de liposomas esterilizada por filtración de 0,2 micras en un recipiente estéril.

10. El procedimiento para preparar la formulación liposómica oftálmica según la reivindicación 9, caracterizado porque en la etapa i) se utilizan fosfolípidos hidrogenados.

11. El procedimiento para preparar la formulación liposómica oftálmica según la reivindicación 9, caracterizado porque en la etapa i) se utilizan fosfolípidos no hidrogenados.

12. Una composición liposómica oftálmica de curcumina con vitamina E-TPGS intercalada desde el principio en una película lipídica para obtener una mayor protección, obtenida según el procedimiento de la reivindicación 9, para su uso después de una filtración de 0,2 μm, como gotas oculares para el tratamiento tópico del síndrome del ojo seco.