ES2951864T9 - Combinación de un anticuerpo biespecífico ERBB-2/ERBB-3 con terapia endocrina para el cáncer de mama - Google Patents

Combinación de un anticuerpo biespecífico ERBB-2/ERBB-3 con terapia endocrina para el cáncer de mama Download PDF

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Description

DESCRIPCIÓN
Combinación de un anticuerpo biespecífico ERBB-2/ERBB-3 con terapia endocrina para el cáncer de mama
Descripción
Campo de la invención
La invención se relaciona con el campo de los anticuerpos. En particular, se relaciona con el campo de los anticuerpos terapéuticos (humanos) para el tratamiento de enfermedades que involucran células aberrantes. Más en particular, se refiere a anticuerpos que pueden unirse a ErbB-2 y ErbB-3 y al tratamiento de sujetos con cáncer de mama con estos anticuerpos en combinación con un fármaco de terapia endocrina.
Antecedentes
Algunos tipos de cáncer de mama se ven afectados por las hormonas en la sangre. Las células de cáncer de mama con receptor de estrógeno (ER) positivo y receptor de progesterona (PR) positivo tienen receptores que se adhieren a las hormonas, lo que les ayuda a crecer. Alrededor de 2 de cada 3 cánceres de mama son receptores de hormonas positivos. Sus células tienen receptores que se unen a las hormonas estrógeno (cánceres con ER positivo) y/o progesterona (cánceres con PR positivo). Para estos tipos de cáncer, los niveles altos de estrógeno ayudan a que las células cancerosas crezcan y se propaguen.
Hay varios fármacos que interfieren con este mecanismo.
Fármacos que bloquean los receptores de estrógeno
Estos fármacos funcionan impidiendo que el estrógeno afecte las células cancerosas de la mama. Un ejemplo de una droga de este tipo es el tamoxifeno. Este fármaco bloquea los receptores de estrógeno en las células de cáncer de mama. Esto evita que el estrógeno se una a las células cancerosas y les indique que crezcan y se dividan. Mientras que el tamoxifeno actúa como un antiestrógeno en las células mamarias, actúa como un estrógeno en otros tejidos, como el útero y los huesos. Debido a esto, se le llama modulador selectivo del receptor de estrógeno (SERM). El tamoxifeno se encuentra entre los SERM más conocidos. Otros SERM que han sido aprobados para uso médico incluyen bazedoxifeno (Duavee), broparestrol (Acnestrol), clomifeno (Clomid), ciclofenil (Sexovid), lasofoxifeno (Fablyn), ormeloxifeno (Centron, Novex, Novex-DS, Sevista), ospemifeno (Osphena), raloxifeno (Evista), tamoxifeno (Nolvadex) y toremifeno (Fareston), algunos de los cuales han sido aprobados para el tratamiento del cáncer de mama con receptor hormonal positivo. Muchos más SERMS no han sido (todavía) aprobados pero también son funcionales.
El tamoxifeno puede iniciarse después de la cirugía (terapia adyuvante) o antes de la cirugía (terapia neoadyuvante) y generalmente se toma durante 5 a 10 años. Después de la menopausia, se pueden usar inhibidores de la aromatasa.
En mujeres con alto riesgo de cáncer de mama, el tamoxifeno puede usarse para ayudar a reducir el riesgo de desarrollar cáncer de mama.
El toremifeno (Fareston) es otro SERM actualmente aprobado para tratar el cáncer de mama metastásico. La mayoría de estos fármacos se toman por vía oral, con mayor frecuencia en forma de píldora.
Fulvestrant (Faslodex)
Fulvestrant es un fármaco que bloquea los receptores de estrógeno y también los elimina temporalmente. Fulvestrant es un degradador selectivo del receptor de estrógeno (SERD). Otros SERD incluyen Brilanestrant y Elacestrant. Fulvestrant se usa para tratar el cáncer de mama metastásico, incluso después de que otros fármacos hormonales (como el tamoxifeno y, a menudo, un inhibidor de la aromatasa) hayan dejado de funcionar.
Se puede administrar por inyección intramuscular. Fulvestrant está actualmente aprobado para su uso en mujeres posmenopáusicas.
Inhibidores de la aromatasa (IA)
Los inhibidores de la aromatasa (IA) son fármacos que detienen la producción de estrógeno. Antes de la menopausia, los ovarios producen la mayor parte del estrógeno. Pero para las mujeres cuyos ovarios ya no funcionan, ya sea debido a la menopausia oa tratamientos médicos, una enzima (llamada aromatasa) todavía produce una pequeña cantidad de estrógeno en el tejido adiposo, el seno o la piel. Se entiende que los IA funcionan bloqueando la aromatasa para que no produzca estrógeno.
Estos fármacos se utilizan en mujeres posmenopáusicas, aunque también se pueden utilizar en mujeres premenopáusicas si se combinan con la ablación ovárica.
Hay varias IA. Los ejemplos de IA incluyen: Letrozol (Femara); Anastrozol (Arimidex) y Exemestane (Aromasin)
Estos fármacos son pastillas que se pueden tomar a diario.
Para las mujeres posmenopáusicas cuyos cánceres tienen receptores hormonales positivos, los médicos pueden recomendar tomar un IA durante la terapia adyuvante.
Análogos de la hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH): Estos fármacos se usan con más frecuencia que la ovariectomía. Se entiende que detienen la señal que el cuerpo envía a los ovarios para producir estrógeno, lo que provoca una menopausia temporal. Los fármacos LHRH comunes incluyen Goserelin (Zoladex) y Leuprolide (Lupron). Se pueden usar solos o con otros fármacos hormonales (tamoxifeno, inhibidores de la aromatasa, fulvestrant) como terapia hormonal en mujeres premenopáusicas.
Fármacos de quimioterapia: Algunos fármacos quimioterapéuticos pueden dañar los ovarios de las mujeres premenopáusicas para que ya no produzcan estrógeno. Para algunas mujeres, la función ovárica regresa meses o años después, pero en otras, el daño a los ovarios es permanente y conduce a la menopausia.
Los fármacos mencionados anteriormente se denominan colectivamente como fármacos de terapia endocrina del cáncer de mama. La terapia endocrina y los fármacos que la acompañan han sido revisados recientemente por Lumachi et al (Lumachi, F., et al. “Endocrine therapy of breast cancer.” Current medicinal chemistry 18.4 (2011): 513­ 522). En el contexto de la presente invención, los fármacos de terapia endocrina se refieren a fármacos que se utilizan para la terapia endocrina del cáncer de mama.
En el contexto de una invención descrita en el presente documento, el término terapia endocrina incluye fármacos terapéuticos que interfieren con la acción de una hormona, típicamente la hormona estrógeno o progesterona en la célula cancerosa. Esto puede ser directamente por la acción del fármaco en la célula cancerosa o indirectamente, por ejemplo, al reducir la cantidad de estrógeno que puede llegar a la célula cancerosa, incluso al interferir directa o indirectamente con la acción del estrógeno sobre el tumor.
La inmunoterapia del cáncer de mama también está disponible. Los anticuerpos biespecíficos ErbB-2/ErbB-3 se describen en WO2015130173, US2014/056898. En particular, US2014/056898 divulga MM-111, un anticuerpo biespecífico ErbB2/ErbB3, en combinación con tamoxifeno o con fulvestrant; las combinaciones se usaron para tratar ratones implantados con células BT474-M3 derivadas de cáncer de mama. También se demostró que una combinación de MM-111 y letrozol inhibía el crecimiento de esferoides de células BT474-M3.
Resumen de la invención
La invención tal como se reivindica se proporciona en el conjunto de reivindicaciones adjunto.
La invención proporciona una combinación de un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y un fármaco de terapia endocrina para usar en el tratamiento del cáncer de mama en un sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener dicho cáncer, donde el anticuerpo biespecífico tiene un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-2 y un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-3, en el que dicho anticuerpo comprende
un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 AYYIN, RIYPGSGYTSYAQKFQG y PPVYYDSAWFAY, respectivamente, de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-2,
un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 GYYMH, WINPNSGGTNYAQKFQG y DHGSRHFWSYWGFDY, respectivamente, de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-3, y
una cadena ligera común que tiene una secuencia
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAA SSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQG LSSPVTKSFNRGEC,
y
en el que el fármaco de terapia endocrina comprende tamoxifeno, fulvestrant o letrozol.
Otras realizaciones de la invención se proporcionan, entre otras cosas, en las reivindicaciones.
El anticuerpo puede ser MCLA-128.
En una realización, el cáncer es un cáncer inmunohistoquímico ErbB-2 o un cáncer ErbB-2 + inmunohistoquímico sin amplificación del gen ErbB-2.
En una realización, el cáncer de mama es ER-positivo con baja expresión de HER2 de cáncer de mama metastásico MBC IHC 1+ o IHC 2+ combinado con FISH negativo.
En una realización, el método comprende además administrar al paciente un inhibidor de quinasa 4/6 dependiente de ciclina. El inhibidor de quinasa 4/6 dependiente de ciclina puede ser, por ejemplo, Palbociclib, Ribociclib o Abemaciclib.
En una realización, el sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener dicho cáncer que incluye sujetos en riesgo de recaída es un sujeto que ha recibido 1 y preferiblemente 2 tratamientos de terapia endocrina antes del inicio de un tratamiento con un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB -3 como se describe en este documento. El sujeto recibió preferentemente estos tratamientos previos para el tratamiento de una metástasis. El sujeto además había recibido preferiblemente un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina antes de iniciar un tratamiento con un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 como se describe en este documento.
Descripción detallada de la invención
La invención proporciona una combinación de un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y un fármaco de terapia endocrina para uso en el tratamiento del cáncer de mama, como se define en las reivindicaciones adjuntas.
La divulgación técnica que se establece a continuación puede, en algunos aspectos, ir más allá del alcance de la invención, que se define en las reivindicaciones adjuntas. Los elementos de la divulgación que no caen dentro del alcance de las reivindicaciones se proporcionan a título informativo, es decir, para situar la invención real reivindicada en un contexto técnico más amplio.
En una realización, el cáncer de mama es un cáncer de mama con receptor hormonal positivo. En una realización, el cáncer de mama con hormona positiva es un cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo. En una realización, el cáncer de mama positivo para hormonas es un cáncer de mama positivo para receptores de progesterona. Los cánceres de mama se prueban rutinariamente para determinar la presencia de los receptores hormonales mencionados y las clasificaciones y pruebas generalmente aceptadas están disponibles para el experto en la materia. Se hace referencia a Hammond et al. (2010: J. of Clinical Oncology Vol 28:pp 2784-2794) que describen las pruebas adecuadas y proporciona directrices para ello. Por ejemplo, un paciente adecuado para el tratamiento de acuerdo con la invención es aquel en el que al menos el 1 % de los núcleos tumorales, por ejemplo en una biopsia tumoral, son inmunorreactivos; positivo al receptor de estrógeno y/o al receptor de progesterona determinado por inmunohistoquímica.
Además, otro ejemplo de un paciente adecuado para el tratamiento de acuerdo con la invención es uno con un cáncer con estado positivo de receptor hormonal documentado, receptor de estrógeno positivo [ER+] y/o receptor de progesterona positivo [PR+]), que incluye > 1 % de células teñidas positivas de acuerdo con los estándares locales, con base en el análisis local de la biopsia tumoral más reciente.
Además, otro ejemplo de un paciente adecuado para el tratamiento de acuerdo con la invención es uno con un cáncer con un estado de receptor hormonal positivo documentado (receptor de estrógeno positivo [ER+] y/o receptor de progesterona positivo [PR+]), para > 1 % de células positivas según se determina por inmunohistoquímica en una biopsia de tumor.
El cáncer de mama puede ser ErbB-2 negativo o ErbB-2 positivo. Wolff et al. (2013: J. of Clinical Oncology Vol 31: pp 3997-4013) describen dichas pruebas y proporcionan recomendaciones. Una estratificación generalmente aceptada de los cánceres de mama sobre la base de la expresión de ErbB-2 es ErbB-2 -; ErbB-2 ; ErbB-2 + sin amplificación del gen ErbB-2; ErbB-2 + con amplificación del gen ErbB-2 y ErbB-2 ++. En una realización, el cáncer de mama es un ErbB-2 o un cáncer de mama ErbB-2 + sin amplificación del gen ErbB-2, que incluye la ausencia de amplificación del gen al nivel de detección.
La hibridación in situ con fluorescencia (FISH) se puede utilizar para determinar la presencia o ausencia de amplificación génica. En consecuencia, un paciente adecuado para el tratamiento de acuerdo con la invención puede ser uno con un cáncer que no muestra amplificación del gen ErbB-2 de acuerdo con el análisis FISH, entendido por el experto en la materia como FISH negativo.
Un paciente adecuado para el tratamiento de acuerdo con la invención puede ser uno que sea positivo para ER con cáncer de mama metastásico (MBC) de baja expresión de HER2 (inmunohistoquímica (IHC) 1+ o IHC 2+ combinado con hibridación in situ con fluorescencia negativa (FISH).
En una realización, el cáncer de mama es un cáncer de mama ErbB-3 positivo.
En una realización, el anticuerpo biespecífico puede reducir una función de receptor inducida por ligando de ErbB-3 en una célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3.
Como se usa en el presente documento, el término “sitio de unión al antígeno” se refiere a un sitio derivado de un anticuerpo que es capaz de unirse al antígeno y preferiblemente como presente en él. Un sitio de unión a antígeno no modificado está típicamente formado y presente en el dominio variable del anticuerpo. El dominio variable contiene dicho sitio de unión a antígeno. Un dominio variable que se une a un antígeno es un dominio variable que comprende un sitio de unión a antígeno que se une al antígeno.
Un dominio variable de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada (VH) y una región variable de cadena ligera (VL). El sitio de unión al antígeno puede estar presente en el dominio variable Vh /V L combinado, o solo en la región VH o solo en la región VL. Cuando el sitio de unión al antígeno está presente en solo una de las dos regiones del dominio variable, la región variable contraparte puede contribuir al plegamiento y/o estabilidad de la región variable de unión, pero no contribuye significativamente a la unión del antígeno en sí mismo.
Como se usa en este documento, unión a antígeno se refiere a la capacidad de unión típica de un anticuerpo a su antígeno. Un anticuerpo que comprende un sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, se une a ErbB-3 y, en condiciones idénticas, no a los receptores homólogos ErbB-1 y ErbB-4 de la misma especie. Teniendo en cuenta que la familia ErbB es una familia de receptores de superficie celular, la unión normalmente se evalúa en células que expresan el (los) receptor (es). Un anticuerpo de la invención se une al ErbB-2 humano y al ErbB-3 humano.
La unión del antígeno por un anticuerpo generalmente está mediada a través de las regiones complementarias del anticuerpo y la estructura tridimensional específica tanto del antígeno como del dominio variable, lo que permite que estas dos estructuras se unan con precisión (una interacción similar a un candado y una llave), a diferencia de la adherencia aleatoria e inespecífica de anticuerpos. Como un anticuerpo generalmente reconoce un epítopo de un antígeno, y como tal epítopo también puede estar presente en otros compuestos, los anticuerpos descritos en las reivindicaciones que se unen a ErbB-2 y ErbB-3 también pueden reconocer otras proteínas, si tales otros compuestos contienen el mismo epítopo. Por tanto, el término “unión” no excluye la unión de los anticuerpos a otra proteína o proteínas que contienen el mismo epítopo. Dicha(s) otra(s) proteína(s) preferiblemente no es una proteína humana. Un sitio de unión al antígeno ErbB-2 y un sitio de unión al antígeno ErbB-3 como se define en las reivindicaciones normalmente no se unen a otras proteínas en la membrana de las células en un ser humano posnatal, preferiblemente adulto. Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones normalmente es capaz de unirse a ErbB-2 o ErbB-3 con una afinidad de unión de al menos 1x10e-6 M, como se describe con más detalle a continuación.
El término “interfiere con la unión”, tal como se usa aquí, significa que el anticuerpo se dirige a un epítopo en ErbB-3 y el anticuerpo compite con el ligando por la unión a ErbB-3. El anticuerpo puede disminuir la unión del ligando, desplazar al ligando cuando éste ya está unido a ErbB-3 o puede, por ejemplo, mediante impedimento estérico, impedir al menos parcialmente que el ligando se una a ErbB-3.
El término “anticuerpo”, como se usa en el presente documento, significa una molécula proteínica, preferiblemente perteneciente a la clase de proteínas de las inmunoglobulinas, que contiene uno o más dominios variables que se unen a un epítopo en un antígeno, donde dichos dominios se derivan o comparten homología de secuencia con el dominio variable de un anticuerpo. Los anticuerpos para uso terapéutico son preferiblemente lo más parecidos posible a los anticuerpos naturales del sujeto a tratar (por ejemplo, anticuerpos humanos para sujetos humanos). La unión de anticuerpos se puede expresar en términos de especificidad y afinidad. La especificidad determina qué antígeno o epítopo del mismo se une específicamente al dominio de unión. La afinidad es una medida de la fuerza de unión a un antígeno o epítopo en particular. La unión específica se define como unión con afinidades (KD) de al menos 1x10e-6 M, más preferiblemente 1x10e-7 M, más preferiblemente superior a 1x10e-9 M. Normalmente, los anticuerpos para aplicaciones terapéuticas tienen afinidades de hasta 1x10e-10 M o superior. Los anticuerpos tales como los anticuerpos biespecíficos descritos en las reivindicaciones pueden comprender los dominios constantes (parte Fc) de un anticuerpo natural. Un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones es típicamente un anticuerpo biespecífico de longitud completa, preferiblemente de la subclase IgG humana. Preferiblemente, un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones es de la subclase IgG1 humana. Dichos anticuerpos tienen buenas propiedades ADCC, tienen una semivida favorable tras la administración in vivo a seres humanos y existe tecnología de ingeniería de CH3 que puede proporcionar cadenas pesadas modificadas que preferentemente forman heterodímeros sobre homodímeros tras la coexpresión en células clonales.
Un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones es preferiblemente un anticuerpo de “longitud completa”. El término “de longitud completa” de acuerdo con la invención se define como que comprende un anticuerpo esencialmente completo, que sin embargo no tiene necesariamente todas las funciones de un anticuerpo intacto. Para evitar dudas, un anticuerpo completo contiene dos cadenas pesadas y dos ligeras. Cada cadena contiene regiones constantes (C) y variables (V), que pueden dividirse en dominios denominados CH1, CH2, CH3, VH y CL, VL. Un anticuerpo se une al antígeno a través de los dominios variables contenidos en la porción Fab y, después de la unión, puede interactuar con moléculas y células del sistema inmunitario a través de los dominios constantes, principalmente a través de la porción Fc. Los términos 'dominio variable', 'par VH/VL', 'VH/V L' se usan aquí de manera intercambiable. Los anticuerpos de longitud completa abarcan anticuerpos en los que pueden estar presentes mutaciones que proporcionan las características deseadas. Tales mutaciones no deberían ser deleciones de porciones sustanciales de ninguna de las regiones. Sin embargo, los anticuerpos en los que se eliminan uno o varios residuos de aminoácidos, sin alterar esencialmente las características de unión del anticuerpo resultante, se incluyen dentro del término “anticuerpo de longitud completa”. Por ejemplo, un anticuerpo IgG puede tener de 1 a 20 inserciones, deleciones o combinaciones de residuos de aminoácidos en la región constante. Por ejemplo, la actividad ADCC de un anticuerpo se puede mejorar cuando el propio anticuerpo tiene una actividad ADCC baja, modificando ligeramente la región constante del anticuerpo (Junttila, T.T,, K. Parsons, et al. (2010). “Superior In vivo Efficacy of Afucosylated Trastuzumab in the Treatment of HER2-Amplified Breast Cancer.” Cancer Research 70(11): 4481-4489)
Se prefieren los anticuerpos IgG de longitud completa debido a su vida media favorable y la necesidad de permanecer tan cerca de las moléculas completamente autólogas (humanas) por razones de inmunogenicidad. Un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones es preferiblemente un anticuerpo IgG biespecífico, preferiblemente un anticuerpo IgG1 biespecífico de longitud completa. El IgG1 se ve favorecida en base a su larga vida media circulatoria en el hombre. Con el fin de prevenir cualquier inmunogenicidad en humanos, se prefiere que el anticuerpo IgG biespecífico como se describe en las reivindicaciones sea un IgG1 humano.
El término “biespecífico” (bs) significa que una parte del anticuerpo (como se define anteriormente) se une a un epítopo en un antígeno mientras que una segunda parte se une a un epítopo diferente. El epítopo diferente está típicamente presente en un antígeno diferente. En un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones, dichos primer y segundo antígenos son de hecho dos proteínas diferentes. Un anticuerpo biespecífico preferido como se describe en las reivindicaciones es un anticuerpo que comprende partes de dos anticuerpos monoclonales diferentes y, en consecuencia, se une a dos tipos diferentes de antígeno. Un brazo del anticuerpo biespecífico contiene el dominio variable de un anticuerpo y el otro brazo contiene el dominio variable de otro anticuerpo. Las regiones variables de cadena pesada del anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones son normalmente diferentes entre sí, mientras que las regiones variables de cadena ligera son las mismas en los anticuerpos biespecíficos como se describe en las reivindicaciones. Un anticuerpo biespecífico en el que las diferentes regiones variables de la cadena pesada están asociadas con una cadena ligera común se denomina anticuerpo biespecífico con una cadena ligera común.
Los anticuerpos biespecíficos preferidos se pueden obtener mediante la coexpresión de dos cadenas pesadas diferentes y una cadena ligera común en una sola célula. Cuando se utilizan dominios CH3 de tipo silvestre, la coexpresión de dos cadenas pesadas diferentes y una cadena ligera común dará como resultado tres especies diferentes, AA, AB y BB. Para aumentar el porcentaje del producto biespecífico (AB) deseado se puede emplear la ingeniería de CH3, o en otras palabras, se pueden usar cadenas pesadas con dominios de heterodimerización compatibles, como se define a continuación.
El término “dominios de heterodimerización compatibles”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a dominios de proteínas que están diseñados de tal manera que el dominio A' diseñado formará preferentemente heterodímeros con el dominio B' diseñado y viceversa, mientras que la homodimerización entre A'-A' y B'-B' está disminuido.
El término “cadena ligera común” como se describe en las reivindicaciones se refiere a una cadena ligera que tiene una secuencia DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAA SSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQG LSSPVTKSFNRGEC. Los términos “cadena ligera común”, “VL común”, “cadena ligera única”, “VL única”, con o sin la adición del término “reordenado” se usan aquí de forma intercambiable. Como cadena ligera común se prefiere una cadena ligera humana que se puede combinar con diferentes cadenas pesadas para formar anticuerpos con dominios de unión a antígeno funcionales (WO2004/009618, WO2009/157771, Merchant et al. 1998 y Nissim et al. 1994). Dicha cadena ligera común tiene una secuencia de línea germinal. Dicha secuencia de línea germinal es una región variable de cadena ligera que se usa con frecuencia en el repertorio humano y tiene buena estabilidad termodinámica, rendimiento y solubilidad. Dicha cadena ligera de la línea germinal es la cadena ligera kappa 012 humana de la línea germinal reorganizada IgVK1-39*01/IGJk1*01 (nomenclatura según la base de datos IMGT en la red mundial en imgt.org). Los términos cadena ligera kappa humana de línea germinal reorganizada IgVK1-39*01/IGJK1*01, IGKV1-39/IGKJ1, cadena ligera huVK1-39 o, en resumen, huVK1-39 se usan indistintamente en toda la solicitud. Dicha cadena ligera común comprende la secuencia
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAA SSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQG LSSPVTKSFNRGEC.
El término 'ErbB-2' como se usa en el presente documento se refiere a la proteína que en humanos está codificada por el gen ERBB-2. Los nombres alternativos para el gen o la proteína incluyen CD340; HER-2; HER-2/neu; MLN 19; NUE; LGN; TKR1. El gen ERBB-2 se denomina con frecuencia HER2 (del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano). Cuando se hace referencia aquí a ErbB-2, la referencia se refiere a ErbB-2 humana. Un anticuerpo que comprende un sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2, se une a ErbB-2 humano. El sitio de unión al antígeno ErbB-2 puede, debido a la similitud de secuencia y estructura terciaria entre los ortólogos humanos y de otros mamíferos, también unirse a tal ortólogo pero no necesariamente. Los números de acceso a la base de datos para la proteína ErbB-2 humana y el gen que la codifica son (NP_001005862.1, NP_004439.2 NC_000017.10 NT_010783.l5 NC_018928.2). Los números de acceso se dan principalmente para proporcionar un método adicional de identificación de ErbB-2 como objetivo, la secuencia real de la proteína ErbB-2 unida al anticuerpo puede variar, por ejemplo, debido a una mutación en el gen codificante como las que ocurren en algunos cánceres o similares. El sitio de unión al antígeno ErbB-2 se une a ErbB-2 y una variedad de variantes del mismo, como las expresadas por algunas células tumorales positivas para ErbB-2.
El término 'ErbB-3' como se usa en el presente documento se refiere a la proteína que en humanos está codificada por el gen ERBB-3. Los nombres alternativos para el gen o la proteína son HER3; LCCS2; MDA-BF-1; c-ErbB-3; cerbb-3; erbb-3-S; p180-Erbb-3; p45-sErbb-3; y p85-sErbb-3. Cuando se hace referencia aquí a ErbB-3, la referencia se refiere a ErbB-3 humano. Un anticuerpo que comprende un sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3 se une a ErbB-3 humano. El sitio de unión al antígeno ErbB-3, debido a la similitud de secuencia y estructura terciaria entre los ortólogos humanos y de otros mamíferos, también puede unirse a tal ortólogo pero no necesariamente. Los números de acceso a la base de datos para la proteína ErbB-3 humana y el gen que la codifica son (NP_001005915.1 NP_001973.2, NC_000012.11 NC_018923.2 NT_029419.12). Los números de acceso se dan principalmente para proporcionar un método adicional de identificación de ErbB-3 como objetivo, la secuencia real de la proteína ErbB-3 unida por un anticuerpo puede variar, por ejemplo, debido a una mutación en el gen codificante como los que ocurren en algunos tipos de cáncer o similares. El sitio de unión al antígeno ErbB-3 se une a ErbB-3 y una variedad de variantes del mismo, como las expresadas por algunas células tumorales positivas para ErbB-2.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, puede reducir o reduce una función de receptor inducida por ligando de ErbB-3 en un Célula ErbB-2 y ErbB-3 positiva. En presencia de un exceso de ErbB-2, los heterodímeros ErbB-2/ErbB-3 pueden proporcionar una señal de crecimiento a la célula que se expresa en ausencia de un ligando detectable para la cadena ErbB-3 en el heterodímero. Esta función del receptor ErbB-3 se denomina en el presente documento función del receptor independiente del ligando de ErbB-3. El heterodímero ErbB-2/ErbB-3 también proporciona una señal de crecimiento a la célula que se expresa en presencia de un ligando ErbB-3. Esta función del receptor de ErbB-3 se denomina en el presente documento función del receptor de ErbB-3 inducida por ligando.
El término “ligando de ErbB-3”, como se usa en el presente documento, se refiere a polipéptidos que se unen y activan ErbB-3. Los ejemplos de ligandos de ErbB-3 incluyen, pero no se limitan a, neurregulina 1 (NRG) y neurregulina 2, betacelulina, factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina y epirregulina. El término incluye fragmentos biológicamente activos y/o variantes de un polipéptido natural.
El término “función del receptor de ErbB-3 inducida por ligando” se refiere preferiblemente al crecimiento inducido por ligando de ErbB-3 de una célula ErbB-2 y ErbB-3 positiva. Dicha celda es preferentemente una célula MCF-7 (ATCC® HTB-22™); una célula SκΒR3 (ATCC® HTB-30™); una célula NCI-87 (ATCC® CRL-5822™); una celda BxPC-3-luc2 (Perkin Elmer 125058), una célula BT-474 (ATCC® HTB-20™) o una célula JIMT 1 (DSMZ No.: CAC 589).
En una realización preferida, la célula positiva ErbB-2 y ErbB-3 comprende al menos 50.000 receptores ErbB-2 en la superficie celular. En una realización preferida al menos 100.000 receptores ErbB-2. En una realización preferida, la célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3 comprende al menos 1.000.000 de receptores ErbB-2 en la superficie celular. En otra realización preferida, la célula positiva ErbB-2 y ErbB-3 comprende no más de 1.000.000 de receptores ErbB-2 en la superficie celular. Las terapias utilizadas actualmente como trastuzumab (Herceptin) y pertuzumab solo se prescriben para pacientes con células malignas ErbB-2 positivas que tienen más de 1.000.000 de receptores ErbB-2 en su superficie celular, con el fin de obtener una respuesta clínica. Los pacientes con células tumorales ErbB-2 positivas con más de 1.000.000 de receptores ErbB-2 en su superficie celular se clasifican típicamente como ErbB-2 [+++]. Los pacientes se clasifican, por ejemplo, utilizando HercepTestTM y/o HER2 FISH (pharm Dx™), comercializado por Dako Denmark A/S y/o usando un ensayo HERmark®, comercializado por Monogram Biosciences. Trastuzumab y pertuzumab solo se recetan a pacientes con ErbB-2 [+++] porque los pacientes con concentraciones más bajas de ErbB-2 normalmente no muestran una respuesta clínica suficiente cuando se tratan con trastuzumab y pertuzumab. Los anticuerpos biespecíficos que se describen en las reivindicaciones también tienen una afinidad de unión mejorada por células con una concentración de receptor ErbB-2 más baja, en comparación con trastuzumab. Como se muestra en los Ejemplos, la proliferación de tales células con menor expresión de ErbB2 se contrarresta eficazmente con un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones. Esta concentración más baja del receptor ErbB-2 está presente en células malignas de pacientes que se clasifican como ErbB-2 [++] o ErbB-2 [+]. Además, los tumores ErbB-2 positivos recidivantes a menudo tienen una concentración de receptor ErbB-2 inferior a 1.000.000 de receptores por célula. Dichos pacientes ErbB-2 [++] o ErbB-2 [+], así como pacientes con un tumor ErbB-2 positivo en recaída, por lo tanto, se tratan preferiblemente con un fármaco de terapia endocrina y un anticuerpo biespecífico como se menciona en las reivindicaciones.
Por lo tanto, se proporciona además un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que el anticuerpo puede reducir el crecimiento inducido por ligando de una célula positiva ErbB-2 y ErbB-3 que tiene menos de 1.000.000 de receptores de superficie celular ErbB-2. También se proporciona un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para usar en un método para el tratamiento de un sujeto que tiene un tumor ErbB-2, ErbB-3 o ErbB-2/ErbB-3 positivo o en riesgo de tener dicho tumor, en el que dicho tumor tiene menos de 1.000.000 de receptores de superficie celular ErbB-2 por célula, el método comprende administrar al sujeto dicho anticuerpo biespecífico. Dicho anticuerpo, como se describe en las reivindicaciones, normalmente es capaz de reducir la función del receptor inducida por ligando, preferiblemente el crecimiento inducido por ligando, de ErbB-3 en una célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3. Dicho anticuerpo como se describe en las reivindicaciones comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une al dominio I de ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une al dominio III de ErbB-3. La afinidad de dicho segundo sitio de unión a antígeno por una célula positiva para ErbB-3 es preferiblemente igual o mayor que la afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula positiva para ErbB-2, como se explica más adelante en el presente documento con más detalle. La afinidad de dicho segundo sitio de unión a antígeno por una célula ErbB-3 positiva es preferentemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.39 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.99 nM. La afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula ErbB-2 positiva es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, preferentemente inferior o igual a 4.0 nM.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprende preferiblemente un sitio de unión a antígeno que se une a al menos un aminoácido del dominio I de ErbB-2 seleccionado del grupo que consiste en T144, T164, R166, P172, G179, S180 y R181, y residuos de aminoácidos de superficie expuesta que están ubicados dentro de aproximadamente 5 posiciones de aminoácidos desde T144, T164, R166, P172, G179, S180 o R181.
Dicho anticuerpo, como se describe en las reivindicaciones, comprende preferiblemente un sitio de unión a antígeno que se une a al menos un aminoácido del dominio III de ErbB-3 seleccionado del grupo que consiste en R426 y residuos de aminoácidos expuestos en la superficie que se encuentran dentro de 11.2 A de R426 en la proteína nativa ErbB-3.
Para establecer si un tumor es positivo para ErbB-3, el experto en la materia puede, por ejemplo, determinar la amplificación y/o tinción del gen ErbB-3 en inmunohistoquímica. Al menos el 10 % de las células tumorales en una biopsia deben ser positivas. La biopsia también puede contener 20 %, 30 % 40 % 50 % 60 % 70 % o más células positivas.
Como se usa aquí, la función del receptor inducida por ligando se reduce en al menos un 20 %, preferiblemente al menos un 30, 40, 50, 60, o al menos un 70 %. En una realización particularmente preferida, la función del receptor inducida por ligando se reduce en un 80, más preferiblemente en un 90 %. La reducción se determina preferiblemente determinando una función del receptor inducida por ligando en presencia de un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, y comparándola con la misma función en ausencia del anticuerpo, en condiciones por lo demás idénticas. Las condiciones comprenden al menos la presencia de un ligando ErbB-3. La cantidad de ligando presente es preferiblemente una cantidad que induce la mitad del crecimiento máximo de una estirpe celular ErbB-2 y ErbB-3 positiva. La estirpe celular ErbB-2 y ErbB-3 positiva para esta prueba es preferiblemente la estirpe celular MCF-7 (ATCC® HTB-22™), la estirpe celular SκΒR3 (ATCC® HTB-30™), la estirpe celular JIMT 1 (DSMZ ACC 589) o la estirpe celular NCI-87 (ATCC® CRL-5822™). La prueba y/o el ligando para determinar la función del receptor inducida por el ligando ErbB-3 es preferiblemente una prueba para la reducción del crecimiento inducida por el ligando ErbB-3 como se especifica en los ejemplos.
La proteína ErbB-2 contiene varios dominios (consulte la figura de referencia 1 de Landgraf, R Cáncer de mama Res.
2007; 9(1): 202-). Los dominios extracelulares se denominan dominios I-IV. Se ha mapeado el lugar de unión a los dominios respectivos de los sitios de unión a antígeno de los anticuerpos descritos en el presente documento (véanse los ejemplos). Se encontró que los anticuerpos biespecíficos con un sitio de unión a antígeno (primer sitio de unión a antígeno) que se une al dominio I de ErbB-2 (primer sitio de unión a antígeno) y un sitio de unión a antígeno para ErbB-3 (segundo sitio de unión a antígeno) son más eficaces para reducir la función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 en comparación con un anticuerpo biespecífico que comprende un sitio de unión a antígeno (primer sitio de unión a antígeno) que se une a otro dominio extracelular de ErbB-2. En las reivindicaciones se utiliza un anticuerpo biespecífico que comprende un sitio de unión a antígeno (primer sitio de unión a antígeno) que se une a ErbB-2, en el que dicho sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2. Se encontró que un anticuerpo biespecífico con un sitio de unión a antígeno (primer sitio de unión a antígeno) que se une a ErbB-2, y que además comprende ADCC, es más efectivo que otros anticuerpos de unión a ErbB-2 que no tenían una actividad significativa de ADCC, particularmente en Vivo. Por lo tanto, se prefiere un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones que exhibe ADCC. Se encontró que los anticuerpos en los que dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio IV de ErbB-2 tenían actividad ADCC intrínseca. Un anticuerpo de unión a ErbB-2 que se une al dominio I que tiene una actividad de ADCC intrínseca baja puede diseñarse para potenciar la actividad de ADCC. Las regiones Fc median la función de los anticuerpos uniéndose a diferentes receptores en células efectoras inmunitarias como macrófagos, linfocitos citolíticos naturales, células B y neutrófilos. Algunos de estos receptores, como CD16A (FcyRIIIA) y CD32A (FcyRIIA), activan las células para generar una respuesta contra los antígenos. Otros receptores, como el CD32B, inhiben la activación de las células inmunitarias. Mediante la ingeniería de regiones Fc (mediante la introducción de sustituciones de aminoácidos) que se unen a receptores activadores con mayor selectividad, se pueden crear anticuerpos que tengan una mayor capacidad para mediar en las actividades citotóxicas deseadas por un Mab anticanceroso.
Una técnica para potenciar la ADCC de un anticuerpo es la afucosilación. (Ver por ejemplo Junttila, T.T., K. Parsons, et al. (2010). “Superior In vivo Efficacy of Afucosylated Trastuzumab in the Treatment of HER2-Amplified Breast Cancer.” Cancer Research 70(11): 4481-4489). Por lo tanto, se proporciona además un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, que está afucosilado. Alternativamente, o además, se pueden usar muchas otras estrategias para lograr la mejora de ADCC, por ejemplo, incluida la glicoingeniería (Kyowa Hakko/Biowa, GlycArt (Roche) y Eureka Therapeutics) y la mutagénesis (Xencor y Macrogenics), todas las cuales buscan mejorar la unión de Fc a la activación de FcyRIIIa de baja afinidad, y/o para reducir la unión al FcyRIIb inhibidor de baja afinidad.
Existen varios métodos in vitro para determinar la eficacia de anticuerpos o células efectoras para provocar ADCC. Entre estos se encuentran los ensayos de liberación de cromo-51 [Cr51], los ensayos de liberación de europio [Eu] y los ensayos de liberación de azufre-35 [S35]. Por lo general, una estirpe celular diana marcada que expresa un determinado antígeno expuesto en la superficie se incuba con un anticuerpo específico para ese antígeno. Después del lavado, las células efectoras que expresan el receptor Fc CD 16 normalmente se coincuban con las células diana marcadas con anticuerpos. La lisis de la célula diana se mide posteriormente normalmente mediante la liberación de un marcador intracelular, por ejemplo mediante un contador de centelleo o espectrofotometría. Una prueba preferida se detalla en los Ejemplos.
Una ventaja de los anticuerpos biespecíficos como se describe en las reivindicaciones es el hecho de que la unión de estos anticuerpos, como por ejemplo PB4188, a células positivas para ErbB-2 y ErbB-3 da como resultado una internalización en la misma medida en comparación con trastuzumab. Si se usa una combinación de trastuzumab y pertuzumab, se potencia la internalización de estos anticuerpos. Esta internalización mejorada, sin embargo, da como resultado un ADCC reducido. Por lo tanto, se prefiere un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones que da como resultado una internalización que es esencialmente en la misma medida en comparación con trastuzumab sobre una combinación de trastuzumab y pertuzumab porque con dicho anticuerpo se mantiene mejor la actividad ADCC.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, que comprende un sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, interfiere con la unión de un ligando de ErbB-3 a ErbB-3. Dichos anticuerpos son más efectivos para reducir la función del receptor de ErbB-3 inducida por ligando en una estirpe celular positiva para ErbB-2 y ErbB-3, particularmente en el contexto de un anticuerpo biespecífico que también comprende un sitio de unión al antígeno que se une a ErbB- 2.
Las realizaciones preferidas de la presente invención, como se describe en las reivindicaciones, proporcionan un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une al dominio I de ErbB-2. En particular, y como se muestra en los Ejemplos, los anticuerpos biespecíficos que comprenden un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB- 2, son muy capaces de unirse a células positivas para ErbB-2 y ErbB-3 y contrarrestar su actividad (como la función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 y el crecimiento inducido por ligando de una célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3). Además, dichos anticuerpos biespecíficos que comprenden un primer sitio de unión a antígeno que se une al dominio I de ErbB-2 son particularmente adecuados para su uso en combinación con terapias anti-ErbB-2 existentes como trastuzumab y pertuzumab, porque trastuzumab y pertuzumab se unen a diferentes dominios de ErbB- 2. Trastuzumab se une al dominio IV de ErbB-2 y pertuzumab se une al dominio II de ErbB-2. Por lo tanto, los anticuerpos biespecíficos como se describe en las reivindicaciones que se unen al dominio I de ErbB-2 no compiten con trastuzumab y pertuzumab por el mismo epítopo.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que dicho segundo sitio de unión a antígeno se une al dominio III de ErbB-3. Dicho anticuerpo es particularmente adecuado para la terapia de combinación con moléculas de unión anti-ErbB-3 utilizadas actualmente que no se unen al dominio III de ErbB-3, como MM-121 (Merrimack Pharmaceuticals; también denominado #Ab6) y RG7116 (Roche) que se unen al dominio I de ErbB-3, porque entonces las diferentes moléculas de unión no compiten entre sí por el mismo epítopo.
Un anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2 y dicho segundo sitio de unión a antígeno se une al dominio III de ErbB-3 es particularmente adecuado para la terapia combinada con moléculas de unión anti-ErbB-2 que no se unen al dominio I de ErbB-2, como trastuzumab y pertuzumab, y con moléculas de unión anti-ErbB-3 que no se unen se unen al dominio III de ErbB-3, como MM-121 (#Ab6) y RG7116.
Dicho anticuerpo biespecífico que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2 y dicho segundo sitio de unión a antígeno se une el dominio III de ErbB-3 preferiblemente puede reducir una función de receptor inducida por ligando de ErbB-3 en una célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3. Dicho anticuerpo puede reducir el crecimiento inducido por ligando de una célula positiva para ErbB-2 y ErbB-3.
El anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que la afinidad (KD) de dicho segundo sitio de unión a antígeno por un ErbB -3 célula positiva es igual o mayor que la afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula ErbB-2 positiva. A diferencia de los compuestos biespecíficos como, por ejemplo, MM 111 de Merrimack Pharmaceuticals, que tienen una mayor afinidad por ErbB-2 que por ErbB-3, los anticuerpos biespecíficos descritos en las reivindicaciones tienen un brazo específico de ErbB-3 con afinidad por ErbB-3 en células que es mayor que la afinidad del brazo específico de ErbB-2 por ErbB-2 en células. Dichos anticuerpos biespecíficos son más capaces de unirse a ErbB-3, a pesar de la baja concentración de ErbB-3 en la superficie celular. Esto proporciona la ventaja de que la actividad funcional contra ErbB-3 mejora en comparación con los compuestos de la técnica anterior, lo que significa que estos anticuerpos biespecíficos, como se describe en las reivindicaciones, son más capaces de contrarrestar la actividad de ErbB-3 (como el crecimiento inducido por ligando).
Como se usa aquí, el término “afinidad” se refiere al valor KD.
La afinidad (KD) de dicho segundo sitio de unión al antígeno por una célula ErbB-3 positiva es preferentemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.39 nM, más preferiblemente inferior o igual a 0.99 nM. La afinidad de dicho segundo sitio de unión al antígeno por ErbB-3 en las células SK BR 3 es preferentemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.39 nM, preferentemente inferior que o igual a 0.99 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 1.39-0.59 nM. La afinidad de dicho segundo sitio de unión al antígeno por ErbB-3 en las células BT 474 es preferentemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 1.0 nM, más preferentemente inferior de 0.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.31 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.23 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 0.31-0.15 nM. Las afinidades antes mencionadas se miden preferiblemente usando medidas de afinidad celular en estado estacionario, en donde las células se incuban a 4 °C usando un anticuerpo marcado radiactivamente, y después se mide la radiactividad unida a la célula, como se describe en los Ejemplos.
La afinidad (KD) de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula ErbB-2 positiva es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.9 nM. La afinidad de dicho primer sitio de unión al antígeno por ErbB-2 en las células SK BR 3 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior menor o igual a 3.5 nM, más preferiblemente menor o igual a 3.0 nM, más preferiblemente menor o igual a 2.3 nM. Dicha afinidad preferiblemente está dentro del rango de 3.0-1.6 nM. La afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por ErbB-2 en células BT 474 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.9 nM. Dicha afinidad está dentro del rango de 4.5-3.3 nM. Las afinidades antes mencionadas se miden preferiblemente usando medidas de afinidad celular en estado estacionario, en el que las células se incuban a 4 °C usando un anticuerpo marcado radiactivamente, y después se mide la radiactividad unida a la célula, como se describe en los Ejemplos.
La afinidad (KD) de dicho anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones para las células BT 474 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior menor o igual a 3.5 nM, más preferiblemente menor o igual a 3.7 nM, preferiblemente menor o igual a 3.2 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 3.7-2.7 nM. La afinidad de dicho anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones para las células SK BR 3 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, igual a 3.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.0 nM, preferentemente inferior o igual a 2.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 2.0 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 2.4-1.6 nM. Nuevamente, las afinidades antes mencionadas se miden preferiblemente usando medidas de afinidad celular en estado estacionario, en el que las células se incuban a 4 °C usando un anticuerpo marcado radiactivamente, y después se mide la radiactividad unida a la célula, como se describe en los Ejemplos.
El anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprime un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que la afinidad (KD) de dicho segundo sitio de unión a antígeno por un ErbB- 3 de células positivas es igual o mayor que la afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula positiva para ErbB-2, y en el que el anticuerpo puede reducir una función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 en un ErbB-2 y Célula ErbB-3 positiva. Dicho anticuerpo puede reducir preferiblemente el crecimiento inducido por ligando de una célula ErbB-2 y ErbB-3 positiva.
El anticuerpo biespecífico como se describe en este documento comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une al dominio I de ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une al dominio III de ErbB-3, en el que la afinidad de dicho segundo sitio de unión a antígeno por un ErbB -3 célula positiva es igual o mayor que la afinidad de dicho primer sitio de unión a antígeno por una célula ErbB-2 positiva.
Dicho segundo sitio de unión a antígeno se une al dominio III de ErbB-3 y tiene una afinidad (KD) por una célula ErbB-3 positiva que es preferiblemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferiblemente inferior o igual a 1.5 nM, preferiblemente inferior igual o inferior a 1.39 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.99 nM. Dicho segundo sitio de unión a antígeno se une al dominio III de ErbB-3 y tiene una afinidad por ErbB-3 en células SK BR 3 que es preferiblemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferiblemente inferior o igual a 1.5 nM, preferiblemente inferior a o igual a 1.39 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.99 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 1.39-0.59 nM. Dicho segundo sitio de unión a antígeno se une al dominio III de ErbB-3 y tiene una afinidad por ErbB-3 en células BT 474 que es preferiblemente inferior o igual a 2.0 nM, más preferiblemente inferior o igual a 1.5 nM, más preferiblemente inferior a o igual a 1.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.31 nM, más preferentemente inferior o igual a 0.23 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 0.31-0.15 nM.
Dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2 y tiene una afinidad (KD) por una célula ErbB-2 positiva que es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.9 nM. Dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2 y tiene una afinidad por ErbB-2 en las células SK BR 3 que es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior mayor o igual a 4.0 nM, más preferiblemente menor o igual a 3.5 nM, más preferiblemente menor o igual a 3.0 nM, más preferiblemente menor o igual a 2.5 nM, más preferiblemente menor o igual a 2.3 nM. Dicha afinidad preferiblemente está dentro del rango de 3.0-1.6 nM. La afinidad de dicho anticuerpo biespecífico por las células SK BR 3 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.5 nM , más preferentemente inferior o igual a 3.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 2.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 2.4 nM, más preferentemente inferior o igual a 2.0 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 2.4-1.6 nM.
Dicho primer sitio de unión a antígeno se une al dominio I de ErbB-2 y tiene una afinidad (KD) por ErbB-2 en células BT 474 que es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, preferentemente inferior o igual a 3.9 nM. Dicha afinidad preferiblemente está dentro del rango de 4.5 a 3.3 nM. La afinidad de dicho anticuerpo biespecífico por las células BT 474 es preferentemente inferior o igual a 5.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.5 nM, más preferentemente inferior o igual a 4.0 nM, más preferentemente inferior o igual a 3.7 nM, más preferiblemente inferior o igual a 3.2 nM. Dicha afinidad está preferentemente dentro del rango de 3.7-2.7 nM.
Nuevamente, las afinidades antes mencionadas se miden preferiblemente usando medidas de afinidad celular en estado estacionario, donde las células se incuban a 4 °C usando un anticuerpo marcado radiactivamente, y después se mide la radiactividad unida a la célula, como se describe en los Ejemplos.
El anticuerpo biespecífico descrito en las reivindicaciones preferiblemente no afecta significativamente a la supervivencia de los cardiomiocitos. La cardiotoxicidad es un factor de riesgo conocido en las terapias dirigidas a ErbB-2 y la frecuencia de complicaciones aumenta cuando se usa trastuzumab junto con antraciclinas, lo que induce estrés cardíaco. Por ejemplo, la combinación de doxiciclina (DOX) con trastuzumab induce efectos secundarios cardíacos graves. Los estudios clínicos han estimado que entre el 5 % y el 10 % de los pacientes que reciben trastuzumab como tratamiento adyuvante del cáncer de mama desarrollan disfunción cardíaca (Guarneri et al., J Clin Oncol., 1985, 3:818-26; Ewer MS et al., Nat Rev Cardiol 2010;7:564-75). Sin embargo, en un estudio retrospectivo, se demostró que el riesgo de desarrollar disfunción cardíaca asintomática es en realidad tan alto como del 25 % cuando se usa trastuzumab en adyuvancia con DOX.Wadhwa et al., Breast Cancer Res Treat 2009;117:357-64). Como se muestra en los Ejemplos, la presente invención proporciona anticuerpos descritos en las reivindicaciones que se dirigen a ErbB-2 y que no afectan, o en un grado significativamente menor en comparación con trastuzumab y pertuzumab, la supervivencia de los cardiomiocitos. Esto proporciona una ventaja importante ya que se reduce la cardiotoxicidad. Esto ya es ventajoso para las personas que no padecen una función cardíaca alterada, y más aún para las personas que sí padecen una función cardíaca deteriorada, o que corren el riesgo de sufrirla, como por ejemplo los sujetos que padecen insuficiencia cardíaca congestiva (CHF), disfunción del ventrículo izquierdo (DVI) y/o fracción de eyección del ventrículo izquierdo (LVEF) disminuida > 10 %, y/o sujetos que han sufrido un infarto de miocardio. Por lo tanto, se prefieren los anticuerpos biespecíficos como se describe en las reivindicaciones que no afectan significativamente a la supervivencia de los cardiomiocitos. In vitro, la función de los cardiomiocitos se mide, por ejemplo, determinando la viabilidad de los cardiomiocitos, determinando el BNP (péptido natriurético de tipo B, que es un biomarcador cardíaco), determinando la prolongación del intervalo QT y/o determinando el potencial de membrana mitocondrial.
Dicho anticuerpo que no afecta significativamente la supervivencia de los cardiomiocitos como se describe en las reivindicaciones comprende:
al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3, de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-2 de MF3958 como se muestra en la Figura 10A o la Figura 10E, y
al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-3 de MF3178 como se muestra en la Figura 10B o la Figura 10E o la Figura 11. En una realización preferida, dicho anticuerpo es PB4188.
Dicho anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, comprende un sitio de unión a antígeno que se une al menos a un residuo de aminoácido del dominio I de ErbB-2 seleccionado del grupo que consta de T144, T164, R166, P172, G179, S180 y R181, y residuos de aminoácidos expuestos en la superficie que se encuentran dentro de aproximadamente 5 posiciones de aminoácidos de T144, Tl64, R166, P172, G179 , S l80 o R181. La numeración de los residuos de aminoácidos es la del Protein Data Bank (PDB) ID #1S78. Como se muestra en los ejemplos, los anticuerpos que se unen a esta región del dominio I de ErbB-2 exhiben características de unión particularmente buenas y son capaces de contrarrestar la actividad de las células positivas para ErbB-2 (como la función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 en unas células positivas para ErbB-2 y ErbB-3, y/o crecimiento de dichas células inducido por ligando). Además, dichos anticuerpos son particularmente adecuados para la terapia de combinación con anticuerpos monoclonales anti-ErbB-2 actualmente conocidos como trastuzumab (que se une al dominio IV de ErbB-2) y pertuzumab (que se une al dominio II de ErbB-2) porque se unen a diferentes dominios de ErbB-2. Por lo tanto, estos anticuerpos se pueden usar simultáneamente sin competencia por el mismo epítopo. El término “residuos de aminoácidos expuestos en la superficie que se encuentran dentro de aproximadamente 5 posiciones de aminoácidos desde T144, T164, R166, P172, G179, S180 o R181” se refiere a los residuos de aminoácidos que se encuentran en la secuencia de aminoácidos primaria ubicada dentro de aproximadamente el primeros cinco residuos de aminoácidos adyacentes a los residuos enumerados y que están, al menos en parte, expuestos al exterior de la proteína, para que puedan unirse a los anticuerpos (ver, por ejemplo, la Figura 21B de WO2015/130173). Preferiblemente, dicho residuo de aminoácido ubicado dentro de aproximadamente 5 posiciones de aminoácidos desde T144, T164, R166, P172, G179, S180 o R181 se selecciona del grupo que consiste en L139, C140, Y141, Q142, D143, 1145, L146, W147, K148, D149, L159, T160, L161, 1162, D163, N165, S167, R168, A169, C170, H171, C173, S174, P175, M176, C177, K178, C182, W183, G184, E185 y S186. Preferiblemente, dicho anticuerpo comprende un sitio de unión a antígeno que se une al menos a 2 o al menos 3 residuos de aminoácidos del dominio I de ErbB-2 seleccionados del grupo que consiste en T144, T164, R166, P172, G179, S180 y R181, y superficie -residuos de aminoácidos expuestos que están ubicados dentro de 5 posiciones de aminoácidos desde T144, T164, R166, P172, G179, S180 o R181.
El anticuerpo biespecífico descrito en las reivindicaciones comprende preferiblemente un sitio de unión a antígeno que se une al menos a T144, R166 y R181 del dominio I de ErbB-2. En otra realización, el anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprende un sitio de unión a antígeno que se une al menos a T144, R166, P172, G179 y R181 del dominio I de ErbB-2. En otra realización, el anticuerpo descrito en las reivindicaciones comprende un sitio de unión a antígeno que se une al menos a T144, T164, R166, P172, G179, S180 y R181 del dominio I de ErbB-2.
El anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones, que comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, comprende un sitio de unión a antígeno que se une al menos a un aminoácido del dominio III de ErbB-3 seleccionados del grupo que consiste en R426 y residuos de aminoácidos expuestos en la superficie que están ubicados dentro de 11.2 A de R426 en la proteína ErbB-3 nativa. La numeración de los residuos de aminoácidos es la del Protein Data Bank (PDB) ID #4P59. Como se muestra en los ejemplos, los anticuerpos que se unen a esta región del dominio III de ErbB-3 exhiben características de unión particularmente buenas y son capaces de contrarrestar la actividad de las células positivas para ErbB-3 (como la función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 en unas células positivas para ErbB-2 y ErbB-3, y/o crecimiento de dichas células inducido por ligando). El término “residuos de aminoácidos expuestos en la superficie que están ubicados dentro de 11.2 A de R426 en la proteína ErbB-3 nativa” se refiere a los residuos de aminoácidos que están en la estructura terciaria de la proteína ErbB-3 posicionados espacialmente dentro de 11.2 A de R426 y que están, al menos en parte, expuestos al exterior de la proteína, para que puedan unirse a los anticuerpos. Preferiblemente, dichos residuos de aminoácidos que están ubicados dentro de 11.2 A de R426 en la proteína ErbB-3 nativa se seleccionan del grupo que consiste en L423, Y424, N425, G427, G452, R453, Y455, E480, R481, L482, D483 y K485 (ver por ejemplo la Figura 21C y la Tabla 15 de WO2015/130173). El anticuerpo biespecífico descrito en las reivindicaciones comprende preferiblemente un sitio de unión a antígeno que se une al menos a R426 del dominio III de ErbB-3.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones preferiblemente se afucosila para potenciar la actividad de ADCC. Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprende preferiblemente una cantidad reducida de fucosilación de la estructura del carbohidrato unido a N en la región Fc, en comparación con el mismo anticuerpo producido en una célula CHO normal.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones se usa preferiblemente en seres humanos. Con este fin, un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones es preferiblemente un anticuerpo humano o humanizado.
La tolerancia de un ser humano a un polipéptido se rige por muchos aspectos diferentes. La inmunidad, ya sea mediada por células T, mediada por células B u otra, es una de las variables que se incluyen en la tolerancia del ser humano a un polipéptido. La región constante de un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones es preferiblemente una región constante humana. La región constante puede contener una o más, preferiblemente no más de 10, preferiblemente no más de 5 diferencias de aminoácidos con la región constante de un anticuerpo humano de origen natural. Se prefiere que la parte constante se derive completamente de un anticuerpo humano natural. Varios anticuerpos producidos aquí se derivan de una biblioteca de dominios variables de anticuerpos humanos. Como tales, estos dominios variables son humanos. Las regiones CDR únicas pueden derivar de humanos, ser sintéticas o derivar de otro organismo. La región variable se considera una región variable humana cuando tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica a una secuencia de aminoácidos de la región variable de un anticuerpo humano natural, pero para la región CDR. La región variable de un VH que se une a ErbB-2, un VH que se une a ErbB-3 o una cadena ligera en un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones puede contener uno o más, preferiblemente no más de 10, preferiblemente no más de 5 diferencias de aminoácidos con la región variable de un anticuerpo humano natural, sin contar las posibles diferencias en la secuencia de aminoácidos de las regiones CDR. Tales mutaciones también ocurren en la naturaleza en el contexto de la hipermutación somática.
Los anticuerpos pueden proceder de varias especies animales, al menos con respecto a la región variable de la cadena pesada. Es una práctica común humanizar tales, por ejemplo, regiones variables de cadena pesada murina. Hay varias formas en las que esto se puede lograr, entre las que se encuentran el injerto de CDR en una región variable de cadena pesada humana con una estructura 3D que coincide con la estructura 3D de la región variable de cadena pesada murina; desinmunización de la región variable de la cadena pesada murina, preferiblemente realizada mediante la eliminación de epítopos de células T o B conocidos o sospechosos de la región variable de la cadena pesada murina. La eliminación se realiza típicamente mediante la sustitución de uno o más de los aminoácidos en el epítopo por otro aminoácido (típicamente conservativo), de modo que la secuencia del epítopo se modifica de manera que ya no es un epítopo de células T o B.
Dichas regiones variables de cadena pesada murina desinmunizadas son menos inmunogénicas en seres humanos que la región variable de cadena pesada murina original. Preferiblemente, una región o dominio variable como se describe en las reivindicaciones se humaniza aún más, como por ejemplo, se recubre. Mediante el uso de técnicas de revestimiento, los residuos exteriores que el sistema inmunitario encuentra fácilmente se reemplazan selectivamente con residuos humanos para proporcionar una molécula híbrida que comprende una superficie de revestimiento débilmente inmunogénica o sustancialmente no inmunogénica. Un animal como se describe aquí es preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un primate, lo más preferiblemente un ser humano.
Un anticuerpo biespecífico como se describe en las reivindicaciones comprende preferiblemente una región constante de un anticuerpo humano. De acuerdo con las diferencias en sus dominios constantes de cadena pesada, los anticuerpos se agrupan en cinco clases o isotipos: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE. Estas clases o isotipos comprenden al menos una de dichas cadenas pesadas que se denomina con una letra griega correspondiente. Un anticuerpo como se describe en las reivindicaciones comprende preferiblemente una región constante que se selecciona del grupo de regiones constantes de IgG, IgA, IgM, IgD e IgE, más preferiblemente dicha región constante comprende una región constante de IgG, más preferiblemente una región constante de IgG1, preferiblemente una región constante de IgG1 mutada. En la naturaleza se produce alguna variación en la región constante de IgG1, como por ejemplo los alotipos G1m1, 17 y G1m3, y/o se permite sin cambiar las propiedades inmunológicas del anticuerpo resultante. Típicamente se permiten entre aproximadamente 1-10 inserciones de aminoácidos, deleciones, sustituciones o una combinación de los mismos en la región constante.
Dicho anticuerpo comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de una región variable de cadena pesada específica de MF3958 ErbB-2, como se representa en la Figura 10A o la Figura 10E.
Dicho anticuerpo que comprende un dominio variable que se une a ErbB-3 comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de una región variable de cadena pesada específica de MF3178 ErbB-3 como se muestra en la Figura 10B o la Figura 10E o la Figura 11.
El anticuerpo biespecífico como se describe en el presente documento comprende un primer sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-2 y un segundo sitio de unión a antígeno que se une a ErbB-3, en el que dicho primer sitio de unión a antígeno comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de MF3958 y en el que dicho segundo sitio de unión a antígeno comprende al menos la secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 de MF3178.
La cadena VH del dominio variable que se une a ErbB-2 comprende preferiblemente la secuencia de aminoácidos de MF3958; o comprende la secuencia de aminoácidos de MF3958 representada en la figura 10A que tiene como máximo 15, preferiblemente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, más preferiblemente como máximo 1, 2, 3, 4 o 5, inserciones, deleciones, sustituciones de aminoácidos o una combinación de las mismas con respecto a la secuencia de la cadena VH. La cadena VH del dominio variable que se une a ErbB-3 comprende la secuencia de aminoácidos de MF3178; o comprende la secuencia de aminoácidos de MF3178 representada en la Figura 10B que tiene como máximo 15, preferiblemente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, más preferiblemente como máximo 1,2, 3, 4 o 5, inserciones, deleciones, sustituciones de aminoácidos o una combinación de las mismas con respecto a la secuencia de la cadena VH. Las inserciones, deleciones y sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente no están presentes en la región CDR3, las regiones c DR1 y CDR2. Las inserciones, deleciones y sustituciones de aminoácidos mencionadas anteriormente tampoco están presentes preferiblemente en la región FR4.
El anticuerpo específico de ErbB-2/ErbB-3 como se divulga en el presente documento es un anticuerpo biespecífico. El anticuerpo preferiblemente comprende un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos la secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-2 de MF3958 como se muestra en la Figura 10, y un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos la secuencia CDR1, CDR2 y CDR3 de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-3 de MF3178 como se representa en la Figura 10.
El anticuerpo específico de ErbB-2/ErbB-3 que tiene las CDR de MF3958 y MF3178 antes mencionadas comprende preferiblemente un dominio variable específico de ErbB-2 con una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de MF3958 como se muestra en la Figura 10 con 0-10, preferiblemente 0-5, preferiblemente 0, 1 o 2 sustituciones de aminoácidos y un dominio variable específico de ErbB-3 con una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de MF3178 como se muestra en Figura 10 con 0-10, preferiblemente 0-5, preferiblemente 0, 1 ó 2 sustituciones de aminoácidos. La cadena ligera de estos anticuerpos es
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El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para usar en un método para tratar el cáncer de mama en un sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener cáncer de mama preferiblemente comprende además determinar la expresión nivel del receptor de estrógeno, ErbB-2, ErbB-3, o una combinación de los mismos en células de dicho cáncer.
El sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener cáncer de mama es preferiblemente un ser humano. Se dice que una persona está en riesgo de tener cáncer de mama si esa persona ha tenido cáncer de mama en el pasado pero está en remisión del mismo de tal manera que el cáncer no puede detectarse con chequeos de rutina. Tal persona puede considerarse curada, pero esta persona tiene un mayor riesgo de tener cáncer de mama en comparación con una persona sana normal de la misma edad. El cáncer de mama puede ser un cáncer recurrente en la posición del cáncer primario que estaba en remisión o una metástasis del cáncer de mama típicamente en una posición diferente de la posición del sitio del cáncer primario.
La invención proporciona un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y un fármaco de terapia endocrina para usar en un método para tratar el cáncer de mama en un sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener dicho cáncer, que comprende administrar al sujeto que lo necesita del mismo una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo biespecífico que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-2 y que inhibe la dimerización de ErbB-2/ErbB-3 en la célula cancerosa, en el que el cáncer es preferiblemente un cáncer receptor hormonal positivo. El anticuerpo es un anticuerpo biespecífico que tiene un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-2 y un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-3. Dicho fármaco de terapia endocrina se combina preferiblemente con el anticuerpo en una cantidad terapéuticamente eficaz para administrar al sujeto que lo necesite. El cáncer es preferiblemente un cáncer ErbB-2 inmunohistoquímico o un cáncer ErbB-2 + inmunohistoquímico sin amplificación del gen ErbB-2.
Típicamente, la terapia endocrina y de anticuerpos biespecíficos puede usarse repetidamente, durante un curso de tratamiento, en un método de tratamiento como se describe en las reivindicaciones. Por ejemplo, dosis múltiples (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más) de una terapia endocrina y múltiples (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más) se pueden usar dosis de un anticuerpo biespecífico en un método para tratar a un sujeto que necesita dicho tratamiento.
La terapia endocrina de uso puede administrarse diariamente, varios días de la semana, semanalmente, quincenalmente, cada 3 o 4 semanas, o con intervalos más largos) y el anticuerpo biespecífico puede administrarse semanalmente, quincenalmente, cada 3 o 4 semanas, o con intervalos más largos. El anticuerpo biespecífico y la terapia endocrina pueden administrarse, pero no necesariamente, de acuerdo con el mismo régimen de administración. Por lo tanto, la terapia endocrina y el anticuerpo biespecífico pueden administrarse el mismo día o en días diferentes, en diferentes secuencias (primero endocrino, segundo biespecífico o viceversa). La terapia endocrina puede administrarse 1 o más días antes o después del anticuerpo biespecífico o viceversa.
La dosis del anticuerpo biespecífico y/o la terapia endocrina puede variar con el tiempo. La dosis de la terapia endocrina y/o biespecífica puede ser la misma a lo largo de todo el tratamiento. Alternativamente, la dosis de la terapia endocrina y/o la biespecífica puede ser más alta al principio, por ejemplo, una carga de dosis más alta (que puede ser una dosis única o varias) seguida de una dosis de mantenimiento. Alternativamente, la dosis de la terapia endocrina y/o la biespecífica puede ser menor al inicio (que puede ser una dosis única o varias) seguida de una dosis de mantenimiento. Además, o alternativamente, el régimen inicial de la terapia endocrina y/o el anticuerpo biespecífico que comenzó como un régimen semanal puede cambiar a un régimen quincenal u otro. Un médico puede utilizar dosis preferidas y/o regímenes de dosificación según lo justifique la condición del paciente que está siendo tratado.
El tratamiento con la terapia endocrina puede iniciarse con dosis más pequeñas que son menores que la dosis óptima del compuesto. Posteriormente, la dosis puede aumentarse en pequeñas cantidades hasta alcanzar el efecto óptimo según las circunstancias. Para mayor comodidad, la dosis diaria total se puede dividir en porciones durante el día si se desea. También se puede usar la terapia intermitente (por ejemplo, una semana de tres semanas o tres de cuatro semanas).
El anticuerpo biespecífico para su uso puede administrarse en una dosis fija de aproximadamente 750 mg cada 3 semanas, pero alternativamente puede administrarse en un rango de dosis de 300 mg a 900 mg en una dosis fija en un régimen de administración semanal, quincenal, cada 3 semanas, cada 4 semanas o con intervalos más largos.
Donde en el presente se dan rangos entre el número 1 y el número 2, el rango incluye el número 1 y el número 2. Por ejemplo, un rango de 2 a 5 incluye los números 2 y 5.
Cuando aquí se hace referencia a una afinidad superior a otra, la Kd = inferior a la otra Kd. Para evitar dudas, una Kd de 10e-9 M es menor que una Kd de 10e-8 M. La afinidad de un anticuerpo con una Kd de 10e-9 M por un objetivo es mayor que cuando la Kd es de 10e-8 M.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1. Cambios en el crecimiento tumoral medio e individual en xenoinjerto de tumor de mama humano HBCx-34. Los tratamientos comenzaron 36 días después de la implantación de HBCx-34. Vehículo MCLA-128 y MCLA-128 Se administraron 25 mg/kg en D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 y vehículo Letrozol y Letrozol 2.5 mg/kg se administraron diariamente durante 57 días. Tamaño inicial del grupo: 9-10 animales.
Figura 2. T/C % en xenoinjerto de tumor de mama humano HBCx-34. Los tratamientos comenzaron 36 días después de la implantación de HBCx-34. Vehículo MCLA-128 y MCLA-12825 mg/kg se administraron D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 y vehículo Letrozol y Letrozol 2.5 mg/kg diariamente durante 57 días. Tamaño inicial del grupo: 9-10 animales.
Figura 3. Cambios de peso corporal relativo medio e individual en xenoinjerto de tumor de mama humano HBCx-34. Los tratamientos comenzaron 36 días después de la implantación de HBCx-34. Vehículo MCLA-128, MCLA-128 Se administraron 25 mg/kg en D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 y vehículo Letrozol y Letrozol 2.5 mg/kg se administraron diariamente durante 57 días. Tamaño inicial del grupo: 9-10 animales.
Figura 4. Características de crecimiento in vivo del modelo HBCx-34 PDX. A, características IHC de los tumores HBCx-34 PDX. B, Se injertaron ratones desnudos atímicos s.c. con tumores HBCx-34. Los animales suplementados con estrógenos fueron tratados con vehículo de Fulvestrant y los animales que no recibieron estrógenos fueron tratados con vehículo o Letrozol. La suplementación con estrógenos indujo un crecimiento tumoral más rápido y Letrozol redujo significativamente la formación de tumores independientes de estrógenos. Se realizaron pruebas T para comparar los volúmenes tumorales de tumores independientes de estrógenos tratados con vehículo o letrozol (*, p<0.05, **, p<0.01, ***, p<0.001).
Figura 5. Volúmenes tumorales de ratones con xenoinjerto MCF-7 el día 25. Tratamientos iniciados
El vehículo MCLA-128, MCLA-128 25 mg/kg se administraron en D0, D1, D4, D8, D11, D15 D22 y D25 y el vehículo de terapia hormonal y el tamoxifeno se administraron en días alternos (D1, D3, D5, etc.). Fulvestrant se administró una vez por semana. Significación estadística para la prueba U de Kruskal Wallis Dunn o Mann-Whitney para la comparación con el grupo de vehículos: ns indica no significativo, * indica 0.01<P<0.05, ** indica 0.001<P<0.01, *** indica P<0.001. TGI>60 % indica actividad terapéutica potencial. MTV: volumen tumoral medio, G1 MTV: Grupo 1 (vehículo) MTV, TGI: inhibición del crecimiento tumoral.
Figura 6. Volúmenes tumorales de ratones con xenoinjerto MCF-7 tratados con MCLA-128, fulvestrant o tamoxifeno como agente único o terapias combinadas. Para cada punto de tiempo, una prueba t estadística comparó fulvestrant frente a fulvestrant MCLA-128 y tamoxifeno frente a tamoxifeno MCLA-128. ns indica no significativo, * indica P<0.05; ** indica P<0.01.
Figura 7. Correlación entre ensayos entre dos ensayos VeraTag independientes. Las puntuaciones de ensayo obtenidas en los ensayos Ronda 1 y Ronda 2 se trazaron en un gráfico XY y se compararon usando la regresión lineal x=y. Todos los ensayos mostraron una buena correlación entre los resultados de los dos puntos temporales y solo la muestra “Gr.7 An.3” mostró más del 20 % de variación del coeficiente (CV %).
Figura 8. Modulación de los niveles de HER2 total, HER3 total y dímeros HER2:HER3 en tumores MCF-7 después de un período de tratamiento de 8 días. Los ratones con xenoinjerto se trataron durante 8 días con un total de 3 dosis de MCLA-128 o 2 dosis de Fulvestrant o la combinación de los mismos. 24 horas después de la última dosis, se recolectaron los tumores, se procesaron en FFPE y se sometieron a análisis VeraTag para los ensayos indicados. Para el análisis final se utilizaron cinco tumores independientes por grupo de tratamiento. Una prueba t estadística comparó todos los grupos de forma independiente. ** indica P<0.01.
Figura 9. Matriz de proteínas de fase inversa (RPPA) en xenoinjertos tumorales MCF-7 tratados con vehículo, MCLA-128, fulvestrant, tamoxifeno, MCLA-128 fulvestrant o MCLA-128 tamoxifeno. Las proteínas detectadas en este ensayo incluyeron (fosfo)-Akt y (fosfo)-HER3 (los datos completos se proporcionan en el Apéndice 4). ANOVA unidireccional comparó los niveles en todos los tumores derivados de los grupos de tratamiento con los derivados del grupo PBS. ** indica P<0.01.
Figura 10. Secuencias de ácidos nucleicos y aminoácidos de cadenas VH, cadenas ligeras comunes y cadenas pesadas de anticuerpos. Donde en esta figura se indica una secuencia líder, ésta no es parte de la cadena VH o del anticuerpo, pero normalmente se escinde durante el procesamiento de la proteína en la célula que produce la proteína.
Figura 11. Alineaciones de aminoácidos y nucleótidos de las variantes de MF3178. Se indican las regiones CDR.
Figura 12. Diseño de estudio para terapia combinada: Tratamiento endocrino MCLA-128.
Figura 13. Administración del tratamiento para el estudio de terapia combinada: MCLA-128 tratamiento endocrino -todos los ciclos.
Ejemplos
Como se usa en el presente documento, “MFXXXX”, en el que X es independientemente un número 0-9, se refiere a un Fab que comprende un dominio variable en el que el VH tiene la secuencia de aminoácidos identificada por los 4 dígitos. A menos que se indique lo contrario, la región variable de la cadena ligera del dominio variable normalmente tiene una secuencia de la región variable de la cadena ligera de la Figura 10C. La cadena ligera es típicamente la cadena ligera como se indica en la figura 10C. “MFXXXX VH” se refiere a la secuencia de aminoácidos del VH identificado por los 4 dígitos. El MF comprende además una región constante de una cadena ligera y una región constante de una cadena pesada que normalmente interactúa con una región constante de una cadena ligera. PG se refiere a un anticuerpo monoespecífico que comprende cadenas pesadas y ligeras idénticas. PB se refiere a un anticuerpo biespecífico con dos cadenas pesadas diferentes. Las regiones variables VH de las cadenas pesadas difieren y típicamente también la región CH3, en la que una de las cadenas pesadas tiene una mutación KK de su dominio CH3 y la otra tiene la mutación DE complementaria de su dominio CH3 (WO2013/157954).
Ejemplo 1
La eficacia antitumoral de un anticuerpo dirigido a HER2/HER3 se determinó en el contexto de un tratamiento combinado junto con un inhibidor de la aromatasa. Se usó MCLA-128 como ejemplo preferido de un anticuerpo dirigido contra Her2/Her3 biespecífico. Se utilizó como agente único y en combinación con el inhibidor de la aromatasa Letrozol. El modelo de xenoinjerto de cáncer de mama derivado de paciente HBCx-34 dependiente de hormonas establecido en ratones inmunodeficientes se usó como un ejemplo de cáncer de mama.
Los modelos de xenoinjerto tumoral humano
Se obtuvieron muestras de tumores humanos de diversos orígenes histológicos con consentimiento informado de pacientes tratados en centros oncológicos y se establecieron como xenoinjertos trasplantables en ratones inmunodeficientes. Las muestras injertadas son material residual de tumores primarios o metástasis obtenidos antes o después del tratamiento. Estos modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) se han establecido sin cultivo in vitro previo y se han estudiado para histología, citogenética, genética y otros marcadores biológicos, y para su respuesta a las terapias estándar de atención (SOC).
El modelo HBCx-34 PDX se derivó de un carcinoma ductal infiltrante de mama primario sin tratamiento previo. El modelo HBCx-34 PDX tiene un ATM mutado (gen que codifica para una proteína implicada en la reparación del ADN de doble cadena) y wt p53, es ER+/PR+ y responde a docetaxel, capecitabina, tamoxifeno y la combinación adriamicina/ciclofosfamida y respondedor bajo a Letrozol.
El modelo de tumor HBCx-34 tarda unos 35 días en obtener el máximo de tumores en el rango de 60 a 200 mm3 y unos 80 días para llegar a 2000 mm3 desde el día de la implantación (con suplemento de estrógenos). HBCx-34 no tiene propiedades caquécticas manifiestas, pero no se observa aumento de peso corporal en ratones portadores de HBCx-34
MCLA-128 es un anticuerpo biespecífico IgG1 mejorado con ADCC que se dirige al dímero HER2:HER3. MCLA-128 demuestra una potencia in vitro superior a otros anticuerpos anti-HER2 y anti-HER3 en células estimuladas con altas concentraciones de herregulina (HRG), superando así uno de los mecanismos de resistencia de las terapias HER2 actuales.
Los ratones con tumor recibieron estrógeno diluido en agua de bebida (p-estradiol, 8.5 mg/l), desde la fecha de implantación del tumor hasta la fecha de inclusión. Durante el período de tratamiento, los ratones no recibieron suplementos de estrógeno.
Animales y condiciones de mantenimiento.
Ratones hembra (<< HSD : Sin pelo atímico atímico - Foxn1nu >>) exogámico atímico (nu/nu) con un peso de 18 a 25 gramos (Harlan Laboratories, Gannat, Francia) fueron asignados para aclimatar en el animalario con acceso a alimentos y agua ad libitum durante al menos 6 días antes de la manipulación (Esquema 4-1).
Esquema 4-1 Características de los animales
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Compuesto de prueba y formulaciones
El vehículo MCLA-128 estaba listo para usar y se usó para la dosificación desde el día 0 hasta el día 38 y se almacenó a 4 °C. Luego, desde el día 42 hasta el día 56 (fin del estudio), se utilizó NaCl al 0.9 % (CDM Lavoisier lote 6F134) como vehículo para la dosificación y preparación de MCLA-128. Las alícuotas de NaCl al 0.,9 % (CDM Lavoisier lote 6F134) se prepararon semanalmente desde el día 42 hasta el día 56 y se almacenaron a 4 °C. El vehículo Letrozol (CDM Lavoisier lote 6F134): NaCl al 0.9 % estaba listo para usar. Las alícuotas de NaCl al 0.9 % (CDM Lavoisier lote 6F134) se prepararon semanalmente y se almacenaron a 4 °C.
MCLA-128 estaba listo para usar y se usó para inyecciones desde el día 0 hasta el día 42. Posteriormente, se diluyeron alícuotas de MCLA-128 en NaCl al 0.9 % para obtener las soluciones de trabajo a 2.5 mg/ml que se prepararon antes de cada inyección. Se utilizaron para la dosificación desde el día 42 hasta el día 56 (final del estudio). Los comprimidos de letrozol (Letrozol Actavis) se disolvieron en NaCl al 0.9 % con agitación magnética para formar la solución final a 0.25 mg/ml. La solución de dosificación fue estable durante 7 días y se almacenó a 4 °C protegida de la luz.
Inducción de modelos de injerto tumoral
Los tumores del mismo pasaje se trasplantaron por vía subcutánea en 6-24 ratones (ratones donantes, pasaje (n-1)). Cuando estos tumores alcanzaron 1000 a 2000 mm3, los ratones donantes se sacrificaron por dislocación cervical, los tumores se extirparon asépticamente y se diseccionaron. Después de eliminar las áreas necróticas, los tumores se cortaron en fragmentos de aproximadamente 20 mm.3 y transferido en medio de cultivo antes del injerto.
Se anestesiaron 95 ratones con 100 mg/kg de clorhidrato de ketamina (lote 5D92, Exp: 2017/03, Virbac) y 10 mg/kg de xilazina (lote KP0AX9X, Exp: 2017/08, Bayer), y luego se aseptó la piel con una solución de clorhexidina, se realizó una incisión a nivel de la región interescapular y un orificio de 20 mm.3 fragmento tumoral se colocó en el tejido subcutáneo. La piel se cerró con clips. Todos los ratones del mismo experimento fueron implantados el mismo día.
Fase de tratamiento
40 ratones con un tumor HBCx-34 de crecimiento subcutáneo entre 62.5 y 256 mm3 fueron asignados, de acuerdo con su volumen tumoral para dar un volumen tumoral medio y mediano homogéneo en cada brazo de tratamiento. Los tratamientos se asignaron aleatoriamente a cajas que albergaban hasta 5 ratones y se iniciaron 36 días después de la implantación del tumor (tasa de inclusión del 42 %). El estudio se terminó después de 57 días después del inicio del tratamiento.
Medición de tumores y observaciones de animales.
El volumen del tumor se evaluó midiendo los diámetros de los tumores, con un calibrador, quincenalmente durante el período experimental.
Se utilizó la fórmula TV (mm3) = [largo (mm) * ancho (mm)2]/2, donde el largo y el ancho son los diámetros más largo y más corto del tumor, respectivamente.
Todos los animales fueron pesados quincenalmente durante el período experimental. La toxicidad de los diferentes tratamientos se determinó como: porcentaje de pérdida de peso corporal (% BWL) = 100 -(BWx medio/BW0 medio 100), donde BWx es el BW medio en cualquier día durante el tratamiento y BW0 es el BW medio en el primer día de tratamiento.
Se utilizaron un total de 4 grupos como se resume en el siguiente esquema. Cada grupo incluía inicialmente 10 ratones.
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En el grupo 1, el vehículo MCLA-128 y el vehículo Letrozol se dosificaron a 10 ml/kg, i.p. D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 y p.o. qdx 57 respectivamente;
En los grupos 2 y 4, se dosificó MCLA-128 a 25 mg/kg, i.p., D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56;
En los grupos 3 y 4, se dosificó letrozol a 2.5 mg/kg, p.o., qd * 57.
Todas las dosis de tratamiento se ajustaron al peso corporal en cada inyección.
Dosis y esquemas de dosis en el estudio de eficacia XTS-1521
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Resultados
El cambio porcentual medio del peso corporal durante el período de tratamiento se ilustra en la Figura 3.
En el grupo 1, el vehículo MCLA-128 recibió ip en D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 y el vehículo Letrozol recibió po qdx57, ambos administrados a 10 ml/kg, fueron bien tolerados con un 0.4 % de pérdida máxima de peso corporal medio el día 4 y un 3.7 % de pérdida máxima de peso corporal individual el día 49.
En el grupo 2, MCLA-128 administrado ip en D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 a 25 mg/kg, administrado a 10 ml/kg, fue bien tolerado con un 0.4 % de pérdida máxima de peso corporal medio el día 25 y un 8.3 % de pérdida máxima de peso corporal individual el día 39.
En el grupo 3, el letrozol administrado por vía oral a 2.5 mg/kg, administrado a 10 ml/kg, qdx57, fue bien tolerado sin pérdida media de peso corporal y 4.1 % de la pérdida máxima de peso corporal individual en el día 4.
En el grupo 4, MCLA-128, ip D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 dosificados a 25 mg/kg, i.p. y letrozol en dosis de 2.5 mg/kg, p.o. qdx57, ambos administrados a 10 ml/kg, fueron bien tolerados con un 0.7 % de pérdida máxima de peso corporal medio el día 4 y un 4.2 % de pérdida máxima de peso corporal individual el día 4.
Las curvas de crecimiento tumoral (volumen tumoral medio a lo largo del tiempo) se ilustran en la Figura 1. Los valores porcentuales de T/C para cada grupo de tratamiento se indican en la tabla 1 y se ilustran en la Figura 2. Las definiciones de respuestas parciales y completas se definen en la Tabla 2. El análisis estadístico se muestra en la Tabla 3 y la Tabla 4. En este estudio, los tumores se midieron quincenalmente durante el período experimental.
En el grupo 2, MCLA-128, ip D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 dosificados a 25 mg/kg, i.p. administrado a 10 ml/kg no indujo una inhibición del crecimiento tumoral estadísticamente significativa con TGDi = 0.93, mejor T/C % = 91.14 % el día 28; T/C % = 101.56 % (final del grupo control) y mejor TGI %= 31.59 % al final del grupo control. Sin embargo, se observaron 1/9 de estabilización del tumor y 1/9 de regresión parcial del tumor.
En el grupo 3, Letrozol dosificado a 2.5 mg/kg, administrado a 10 ml/kg, po qdx57, indujo una inhibición del crecimiento tumoral estadísticamente significativa (p<0.001 en comparación con el grupo vehículo, prueba de Mann Whitney y p<0.05 en comparación con el grupo control mediante la prueba de Dunn) con TGDi >1.1, mejor T/C % = 18,.68 % el día 56 (fin del grupo control) y mejor TGI %=145.70 % el día 35. Además, se observaron 7/10 regresión tumoral parcial y 1/10 regresión tumoral completa.
En el grupo 4, la combinación MCLA-128, ip D0, D3, D7, D10, D14, D17, D21, D24, D28, D31, D35, D38, D42, D45, D49, D52, D56 dosificados a 25 mg/kg, i.p. y Letrozol dosificado a 2.5 mg/kg, administrado a 10 ml/kg, p.o. qdx57, indujo una inhibición del crecimiento tumoral estadísticamente significativa (p<0.001 en comparación con el grupo vehículo, prueba de Mann Whitney y prueba de Dunn) con TGDi >1.1, mejor T/C % = 9.64 % el día 56 (final del grupo de control) y TGI %= 169.03 % al día 32. Además, se observaron 5/10 regresiones parciales del tumor y 5/10 regresiones completas del tumor, con 5/10 supervivientes sin tumor al final del estudio.
Discusión
Según los datos de peso corporal y las observaciones clínicas, todos los compuestos de prueba como agente único o en combinación fueron bien tolerados en las dosis y cronogramas probados.
En el modelo HBCx-34, MCLA-128 solo no indujo la inhibición del crecimiento tumoral, mientras que letrozol solo indujo una inhibición estadísticamente significativa del crecimiento tumoral. Letrozol en combinación con MCLA-128 indujo una inhibición sinérgica estadísticamente significativa del crecimiento tumoral.
La selección del tratamiento para pacientes con cáncer de mama se guía por tres biomarcadores: HER2, receptores de estrógeno (ER) y progesterona (PR). Los pacientes con sobreexpresión de HER2 son elegibles para terapias dirigidas a HER2, como Trastuzumab y Pertuzumab. Los pacientes con ER/PR positivo recibirán terapias antiestrógenos o inhibidores de la aromatasa. Los antiestrógenos (como el tamoxifeno y el fulvestrant) modulan la actividad del RE mientras que los inhibidores de la aromatasa (IA, como el letrozol o el exemestano) inhiben la conversión de andrógenos en estrógenos, lo que reduce los niveles de estímulo del RE en los pacientes. Los antiestrógenos y los inhibidores de la aromatasa se usan en diferentes poblaciones de pacientes con cáncer de mama ER+, por ejemplo IA se utiliza como tratamiento de primera línea en pacientes posmenopáusicas. En el ejemplo 2 se demuestra que la adición de MCLA-128 al tamoxifeno o al fulvestrant potencia la actividad de los tratamientos antiestrógenos.
Ejemplo 2
MCLA-128 se evaluó como monoterapia y en combinación con SERM Tamoxifeno y SERD Fulvestrant (Faslodex®) para la eficacia en un modelo de xenoinjerto de ratón desnudo de carcinoma de mama humano MCF-7 sensible a estrógenos. El diseño del estudio también incluyó la recolección de tumores para el análisis posterior.
Los tratamientos comenzaron en D1 en ratones con tumores MCF-7 subcutáneos establecidos. El criterio de valoración del estudio pretendía ser un criterio de valoración de volumen tumoral de 1000 mm345 días, lo que ocurriera primero. El estudio finalizó el D39 y el resultado del tratamiento se basó en el porcentaje de inhibición del crecimiento tumoral (%TGI), definido como la diferencia porcentual entre la mediana de los volúmenes tumorales (MTV) del D25 de los ratones tratados y de control. Se eligió D25 para el análisis porque era el último día antes de que los animales abandonaran el estudio por progresión tumoral. La respuesta al tratamiento se determinó a partir de un análisis del porcentaje de inhibición del crecimiento tumoral (% TGI), definido como la diferencia porcentual entre los volúmenes tumorales medios (MTV) finales (D25) de los grupos tratados y de control, con diferencias entre los grupos consideradas estadísticamente significativas en P ≤ 0.05 utilizando la prueba de Mann-Whitney. También se consideraron las regresiones tumorales, el crecimiento tumoral medio y la tolerabilidad del tratamiento.
Ratones
Ratones desnudos atímicos hembra (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu, Charles River) tenían diez semanas de edad y tenían un rango de peso corporal de 19.2 a 30.5 gramos en el D1 del estudio. Los animales fueron alimentados con agua ad libitum (ósmosis inversa, 1 ppm de Cl) y NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet®® compuesta por 18.0 % de proteína bruta, 5.0 % de grasa bruta y 5.0 % de fibra bruta. Los ratones se alojaron en Enrich-o'cobs™ Laboratory Animal Bedding en microaisladores estáticos en un ciclo de luz de 12 horas a 20-22 °C (68-72 °F) y 40-60 % de humedad.
Implantación de tumores
Tres días antes de la implantación de las células tumorales, se implantaron gránulos de estrógeno (0.36 mg de estradiol, liberación de 60 días, Innovative Research of America, Sarasota, FL) por vía subcutánea entre las escápulas de todos los animales de prueba utilizando un trocar esterilizado.
Los xenoinjertos se iniciaron con células de carcinoma de mama humano MCF-7 cultivadas. Las células tumorales se cultivaron hasta la fase logarítmica media en medio RPMI-1640 que contenía suero bovino fetal al 10 %, 100 unidades/ml de penicilina G, 100 μg/ml de sulfato de estreptomicina, glutamina 2 mM, HEPES 10 mM, bicarbonato de sodio al 0.075 % y 25 μg de /ml de gentamicina. El día del implante de células tumorales, las células se tripsinizaron, sedimentaron y resuspendieron en solución salina tamponada con fosfato (PBS) a una concentración de 1 * 10e8 células/ml. Cada ratón de prueba recibió 1 * 10e7 células MCF-7 implantadas por vía subcutánea en el flanco derecho y se controló el crecimiento del tumor a medida que su volumen medio se acercaba al rango deseado de 100 a 150 mm3.
Diecinueve días después de la implantación de las células tumorales, designadas como D1 del estudio, los ratones se colocaron en seis grupos de 15 animales y cuatro grupos de seis animales. Los volúmenes tumorales individuales oscilaron entre 75 y 196 mm3 y los volúmenes tumorales medios grupales de 134-137 mm3 en D1. El peso del tumor se estimó asumiendo que 1 mg es equivalente a 1 mm3 de volumen tumoral.
Agentes Terapéuticos
MCLA-128 se almacenó a 4 °C, se proporcionó preformulado a 2.5 mg/ml y listo para dosificar como 25 mg/kg en un volumen de dosis de 10 mL/kg, y se protegió de la luz durante el almacenamiento y la manipulación. El tamoxifeno (Sigma-Aldrich, Lote No. WXBB5732V) se recibió en forma de polvo y se almacenó a 4 °C protegido de la luz. Cada semana se preparó una solución de dosis de 5 mg/ml en aceite de maíz y cada ratón recibió 0.2 ml para una dosis de 1 mg/animal. La solución de dosis se almacenó a 4 °C. Fulvestrant nombre comercial Faslodex® (AstraZeneca, lote No. LV032, LW466 y LX432) se recibió como solución madre de 50 mg/ml que se almacenó a 4 °C. Cada día de dosificación, el stock se diluyó en aceite de maíz a 25 mg/ml y cada ratón recibió 0.2 ml para una dosis de 5 mg/animal.
Tratamiento
Los grupos 1 y 7 sirvieron como controles para la eficacia y el muestreo, respectivamente, y recibieron vehículo MCLA-128 por vía intraperitoneal (ip) en D1, 4, 8, 11, 15, 18, 22, 25 y 29 y aceite de maíz por vía subcutánea (sc) cada dos días por quince dosis (qod * 15). A los grupos 2 y 8 se les administró MCLA-128 a 25 mg/kg, i.p., en el mismo cronograma que el vehículo MCLA-128. A los grupos 3 y 9 se les administró Faslodex® a 5.0 mg/animal, sc, una vez a la semana durante cinco semanas (qwk * 5). Al grupo 4 se le administró tamoxifeno a 1 mg/animal, s.c., qod * 15. Los grupos 5 y 10 recibieron MCLA-128 y Faslodex®, en los regímenes descritos anteriormente. El grupo 6 recibió MCLA-128 y tamoxifeno en los regímenes descritos anteriormente.
Se administró MCLA-128 a una dosis de 10 ml/kg de volumen, ajustada al peso corporal individual de cada animal. Faslodex® y tamoxifeno se administraron a un volumen fijo de 0.2 ml.
Resultados
La Figura 5 es un diagrama de dispersión que muestra la distribución de tumores por grupo. La Figura 6 muestra las curvas de crecimiento tumoral de la mediana del grupo para todos los grupos del estudio.
Crecimiento de tumores MCF-7 en ratones de control (Grupo 1)
Los ratones del grupo 1 recibieron vehículo MCLA-128 y aceite de maíz como se indicó anteriormente y sirvieron como grupo de control para el cálculo del porcentaje de TGI y las comparaciones estadísticas. El volumen tumoral mediano fue de 600 mm3 con volúmenes tumorales individuales en D25 que oscilaron entre 288 y 936 mm3 (Figura 5) en este grupo. En el momento del análisis de datos, se registraron dos muertes de NTRu en D15 y D21, dejando trece animales evaluables. Se registraron muertes adicionales por NTRu después del D25; uno en D26 y dos en D35. Todas las muertes se debieron a sospechas de toxicidad relacionada con los estrógenos.
Respuesta a MCLA-128 (Grupo 2)
En el Grupo 2, se administró MCLA-128 como se indicó anteriormente. Este tratamiento dio como resultado un volumen tumoral mediano de 600 mm3, que corresponde a un TGI del 0 % no significativo en relación con el grupo de control (P > 0.05). En el momento del análisis de datos, se registraron seis muertes por NTRu; dos en D17 y D22, y uno en D19 y D20, dejando nueve animales evaluables.
Se registraron muertes adicionales por NTRu después del D25; uno en D29 y D36. Todas las muertes se debieron a sospechas de toxicidad relacionada con los estrógenos.
Respuesta a Faslodex® (Grupo 3)
En el Grupo 3, Faslodex® se administró como se indicó anteriormente. Este tratamiento dio como resultado un volumen tumoral medio de 288 mm3, que corresponde a un TGI significativo del 52 % en relación con el grupo de control (P < 0.001). Hubo dos muertes de NTRu registradas en D20 y D24, dejando trece animales evaluables. Todas las muertes se debieron a sospechas de toxicidad relacionada con los estrógenos.
Respuesta a Tamoxifeno (Grupo 4)
En el Grupo 4, se administró Tamoxifeno como se indicó anteriormente. Este tratamiento dio como resultado un volumen tumoral medio de 184 mm3, que corresponde a un TGI significativo del 69 % en relación con el grupo de control (P < 0.001). En el momento del análisis de datos, se registraron tres muertes de NTRu en D3, D10 y D22, dejando doce animales evaluables. También se registraron dos muertes en D26, que fue después del momento del análisis de datos. Todas las muertes se debieron a sospechas de toxicidad relacionada con los estrógenos.
Respuesta a MCLA-128 combinado con Faslodex® o Tamoxifeno (Grupos 5 y 6)
En el Grupo 5, MCLA-128 se combinó con Faslodex® y administrado como se indicó anteriormente. Este tratamiento dio como resultado un volumen tumoral mediano de 126 mm3 correspondiente a un TGI significativo del 79 %. Este resultado fue significativo en relación con los grupos de monoterapia de control y MCLA-128 (P < 0.001), así como con Faslodex® monoterapia (P < 0.05). En este grupo se registraron tres RP. Se registró una muerte de NTRu en D17, dejando catorce animales evaluables. Esta muerte se debió a la sospecha de toxicidad relacionada con los estrógenos.
En el Grupo 6, se combinó MCLA-128 con tamoxifeno y se administró según lo indicado. Este tratamiento dio como resultado un volumen tumoral mediano de 108 mm3 correspondiente a un TGI significativo del 82 %. Este resultado fue significativo en relación con el control y la monoterapia con MCLA-128 (P < 0.001), así como con la monoterapia con tamoxifeno (P < 0.05). En este grupo se registraron cuatro RP. En el momento del análisis de datos, se registró una muerte de NTRu en D15, lo que dejó catorce animales evaluables. También se registraron tres muertes adicionales después del momento del análisis de datos; dos en D30 y uno en D39. Estas muertes se debieron a sospechas de toxicidad relacionada con los estrógenos.
Discusión
Este ejemplo evaluó el agente MCLA-128 en comparación y combinado con Faslodex® y tamoxifeno para la eficacia en un modelo de xenoinjerto de ratón desnudo de carcinoma de mama humano MCF-7 sensible a estrógenos. Los tumores se midieron dos veces por semana hasta el día 39 y el análisis de TGI se realizó el día 25.
El día 25, la mediana del volumen tumoral para el grupo de control 1 fue de 600 mm3, con un rango tumoral individual de 288 a 936 mm3. Grupos administrados MCLA-128, Faslodex®, o tamoxifeno resultó en volúmenes tumorales medianos de 600, 288 y 184 mm3, correspondientes a TGI de 0, 52 y 69 % TGI. El resultado de la monoterapia con MCLA-128 no fue significativo en comparación con el control (P > 0.05), pero los resultados de tamoxifeno y Faslodex® fueron significativos en comparación con el control (P < 0.001). Tratamiento con MCLA-128 en combinación con Tamoxifeno o Faslodex® resultó en volúmenes tumorales medios de 126 y 108 mm3, correspondientes a 79 y 82 % de TGI, respectivamente. Cada uno de estos resultados fue significativo en comparación con el control y la monoterapia con MCLA-128 (P < 0.001), así como con tamoxifeno o Faslodex® respectivas terapias (P < 0.05). Se registraron tres PR en el MCLA-128/ Faslodex® y se registraron cuatro RP en el grupo MCLA-128/tamoxifeno. Todos los tratamientos fueron bien tolerados. Varias muertes en todos los grupos se atribuyeron a la toxicidad del estrógeno. En resumen, la terapia combinada de MCLA-128 con Faslodex® o el tamoxifeno ofreció un beneficio de supervivencia sinérgico significativo en comparación con las monoterapias respectivas en el modelo de xenoinjerto de ratón desnudo MCF-7. Todos los tratamientos fueron aceptablemente tolerados.
MCLA-128 no mostró eficacia antitumoral como agente único, mientras que el fulvestrant y el tamoxifeno redujeron significativamente el crecimiento tumoral. Hacia el final del período de tratamiento en el día 25, la terapia de combinación de MCLA-128 con fulvestrant o tamoxifeno ofreció un beneficio de supervivencia significativo en comparación con las monoterapias respectivas (Figura 5). Curiosamente, el efecto antitumoral beneficioso del tratamiento combinado continuó durante el período de observación sin tratamiento (Figura 6). Todos los tratamientos fueron aceptablemente tolerados.
Ejemplo 3
Análisis farmacodinámico
Ensayo VeraTag Ronda 1
Todos los tumores fijados en formalina del ejemplo 2 se procesaron en bloques FFPE. El análisis inicial del ensayo VeraTag (ronda 1) se realizó con 3 tumores por grupo
Antes del análisis VeraTag, los tumores se seccionaron y se tiñeron con hematoxilina-eosina para determinar el porcentaje de contenido tumoral. Se usó la captura con microláser para eliminar en gran medida cualquier contenido no tumoral. La ronda inicial de análisis incluyó los siguientes cinco ensayos VeraTag: HER2 total, HER3 total, dímeros HER2:HER3, complejos HER3-PI3K y HER3 fosforilado.
En relación con el vehículo, el tratamiento con MCLA-128 no mostró ningún efecto significativo en ninguno de los ensayos. Solo se observó una diferencia significativa entre los grupos en el ensayo HER2:HER3, donde el tratamiento con Fulvestrant aumentó significativamente la formación de dímeros HER2:HER3 y el tratamiento conjunto con MCLA-128 revirtió los niveles de dímeros HER2:HER3 a la situación en tumores tratados con vehículo.
Si bien no fue estadísticamente significativo, se observó una tendencia similar en los ensayos de HER2 y HER3. Dado que los datos incluían solo tres tumores por grupo de tratamiento, se necesitaban más puntos de datos para confirmar si esta tendencia era una indicación de un resultado similar al observado para el ensayo HER2:HER3. Por lo tanto, los tumores restantes de la Tabla 5 se incluyeron en una segunda ronda de ensayos VeraTag para HER2 total, HER3 total y dímeros HER2:HER3. Dado que no se observó ningún efecto significativo de Fulvestrant o la combinación con MCLA-128 en los ensayos de fosfo-HER3 y HER3-PI3K, estos ensayos no se incluyeron en la Ronda 2.
Ensayo VeraTag Ronda 2
Los tumores analizados en la Ronda 1 que tenían puntajes cercanos al valor promedio de los ensayos específicos se incluyeron en la Ronda 2 para estimar la reproducibilidad entre ensayos y garantizar que los datos de los dos experimentos independientes pudieran combinarse. Los resultados de los tumores analizados en ambas rondas se correlacionaron bien entre ensayos, con un coeficiente de variación (CV) inferior al 20 %, excepto el tumor “Gr.7 An.3”, que se excluyó del análisis final (Figura 7).
Los datos de ambas rondas se combinaron y los resultados confirmaron que Fulvestrant indujo significativamente la dimerización de HER2:HER3 en comparación con el vehículo, y que esto se revirtió mediante la administración conjunta de MCLA-128 (Figura 8).
Además, los niveles de expresión de HER2 en el grupo de Fulvestrant fueron significativamente más altos que en los grupos de tratamiento único o combinado de MCLA-128. El grupo de vehículos tuvo alguna variación entre las muestras y no mostró una diferencia significativa con el grupo de Fulvestrant. Finalmente, la expresión de HER3 no se alteró significativamente entre los diferentes grupos de tratamiento, aunque hubo un ligero aumento de HER3 en el grupo de Fulvestrant en relación con todos los demás grupos.
Análisis RPPA
Los tumores de los grupos 1-6 se recolectaron cuando alcanzaron el volumen máximo tolerado, o al final del experimento en el día 39, que fue 10 días después de la última dosis. Por grupo de tratamiento, se incluyeron seis tumores en la matriz de proteínas de fase inversa (RPPA). La selección de tumores se hizo de modo que el tamaño tumoral promedio de los 6 especímenes fuera cercano al de todo el grupo. El análisis RPPA se realizó de la siguiente manera: los tumores se seccionaron y se colocaron en portaobjetos de inmunohistoquímica. El contenido estromal e inflamatorio se macrodisectó para purificar las células tumorales. Se prepararon lisados de proteínas y se cuantificó el contenido de proteínas. Luego, las muestras de proteínas se colocaron en portaobjetos de nitrocelulosa por cuadruplicado a dos concentraciones diferentes y luego se incubaron con anticuerpos primarios específicos para Akt, ERK, HER2 y HER3, en sus formas total o fosforilada.
Los datos de la matriz de proteínas de fase inversa (RPPA) se analizaron mediante ANOVA unidireccional para detectar diferencias significativas entre los grupos de tratamiento y el grupo de vehículo. Los niveles de Akt total y fosforilada se incrementaron en el grupo Faslodex, no se observaron diferencias significativas en los otros grupos. Los niveles totales de ERK aumentaron solo en los grupos de agente único, no se midieron diferencias en los otros grupos o en el análisis de ERK fosforilado. Los niveles de HER2 total, pero no los de HER2 fosforilada, aumentaron significativamente en los grupos de Tamoxifeno y Faslodex. El tratamiento conjunto con MCLA-128 con terapia hormonal impidió esta inducción de la expresión de HER2. Los niveles totales de HER3 aumentaron significativamente solo en el grupo de Faslodex y se redujeron con el tratamiento conjunto de MCLA-128.
Discusión
Análisis farmacodinámico
Un hallazgo del análisis del ensayo VeraTag fue los niveles significativamente más altos de expresión de HER2 en tumores de ratones tratados con Fulvestrant. Las puntuaciones en el ensayo VeraTag se correlacionan con la positividad de HER2 determinada por inmunohistoquímica (IHC): Las puntuaciones de HER2 VeraTag inferiores a 10.5 son negativas en IHC, las puntuaciones entre 10.5 y 17.8 son equívocas y las puntuaciones superiores a 17.8 son positivas (Huang et al., 2010 Am J Clin Pathol. 134(2):303-11). Por lo tanto, parece que el tratamiento con fulvestrant puede cambiar el estado de HER2 de un tumor HER2 negativo (es decir, puntuado como 0 o 1 de acuerdo con las directrices de la ASCO, Wolff et al. 2013 J Clin Oncol. 31(31):3997-4013) a un estado de HER2 que es al menos equívoco (típicamente calificado como 2). Lo que es más importante, el análisis VeraTag mostró que el tratamiento con fulvestrant induce la formación de dímeros HER2:HER3, que pueden revertirse mediante la adición de MCLA-128 a este régimen de tratamiento.
Análisis de biomarcadores
Un hallazgo de este conjunto de experimentos, en el que medimos los niveles de un panel de biomarcadores usando RPPA, fue una expresión mejorada de Akt, HER2 y h ER3 en tumores tratados con terapia hormonal. El hecho de que este aumento inducido por la terapia hormonal pudiera revertirse mediante la administración conjunta de MCLA-128 sugiere que la activación de la vía de señalización de Akt está relacionada con la actividad del dímero HER2:HER3, que por lo tanto fue el objetivo de MCLA-128 en estos tumores. Esto está en consonancia con los datos obtenidos del ensayo VeraTag y corrobora aún más el efecto beneficioso de la administración conjunta de MCLA-128 con terapia hormonal in vivo.
Consideraciones Generales
El aumento de la expresión de la proteína HER2 tras el tratamiento con Fulvestrant en un xenoinjerto de MCF-7 está en consonancia con los mecanismos de resistencia a la terapia hormonal que se han observado en pacientes (Osborne y Schiff 2011 Osborne CK, Schiff R. Annu Rev Med. 62:233-47). También se ha descrito que fulvestrant aumenta la expresión de HER3 en células MCF-7 in vitro e in vivo (Morrison et al., 2013 J Clin Invest. 123(10):4329-43), que se observó con el análisis RPPA pero no con el análisis VeraTag. Esto puede deberse a un momento diferente para la recolección del tumor (al principio y al final del período de tratamiento para los ensayos VeraTag y RPPA, respectivamente).
La sinergia entre MCLA-128 y Fulvestrant puede explicarse por el aumento de la formación de dímeros HER2:HER3 que se observa en tumores derivados de ratones tratados con esta combinación. También se observó el aumento de la fosforilación de Akt en tumores de ratones tratados con Fulvestrant solo (análisis RPPA).
Ejemplo 4: Estudio de fase II de MCLA-128/terapia endocrina en MBC con receptor de estrógeno positivo y baja expresión de HER2
Si bien el Ejemplo describe la administración de MCLA-128 en combinación con la terapia endocrina, el Ejemplo no pretende limitar el uso de los agentes terapéuticos específicos establecidos y se aplica a los anticuerpos biespecíficos de unión a ErbB-2 y ErbB-3 divulgados en combinación con una terapia endocrina.
Objetivos: Receptor de estrógeno [ER]-positivo/expresión baja de HER2 MBC): MCLA-128 Terapia endocrina
Objetivo primario:
• Evaluar la eficacia de MCLA-128 combinado con terapia endocrina en términos de tasa de beneficio clínico (CBR) a las 24 semanas según RECIST 1.1 (por revisión del investigador) en pacientes con MBC con expresión baja de HER2 y ER positivo que han progresado previamente con la misma terapia endocrina
Objetivos secundarios:
• Evaluar CBR a las 24 semanas según RECIST 1.1 por revisión central
• Evaluar la supervivencia libre de progresión (PFS) (por investigador y revisión central)
• Evaluar la tasa de respuesta objetiva (ORR) según RECIST 1.1 (por investigador y revisión central)
• Evaluar el tiempo desde la respuesta (CR o PR) hasta la progresión o muerte por cáncer subyacente (DoR) según RECIST 1.1 (por investigador y revisión central)
• Evaluar el OS
• Evaluar la seguridad y tolerabilidad de MCLA-128 combinado con terapia endocrina
• Caracterizar PK de MCLA-128 combinado con terapia endocrina
• Caracterizar la inmunogenicidad de MCLA-128 combinado con terapia endocrina
Objetivo exploratorio:
Evaluar las posibles correlaciones entre biomarcadores en tumores o muestras de sangre y la actividad antitumoral (incluidos los dímeros HER2, HER3, HER2:HER3, herregulina y otros posibles biomarcadores).
Diseño del estudio
Se realiza un estudio internacional multicéntrico, abierto y de fase 2 para evaluar la eficacia de las combinaciones basadas en MCLA-128 en una población con cáncer de mama metastásico (MBC), ER-positivo/bajo HER2.
Los pacientes son ER positivos con cáncer de mama metastásico (MBC) de baja expresión de HER2 (inmunohistoquímica (IHC) 1+ o IHC 2+ combinado con hibridación in situ con fluorescencia negativa (FISH)) que han progresado según RECIST v1.1 en la última línea de terapia endocrina (administrada durante al menos 12 semanas) que incluía un inhibidor de la aromatasa o fulvestrant.
Los pacientes deben haber recibido 1 o 2 terapias endocrinas previas en el entorno metastásico y haber progresado (según RECIST v1.1) con un inhibidor de la cinasa dependiente de ciclina (en cualquier línea) son elegibles.
Para la inscripción, el estado de HER2 y HR y la documentación radiológica de progresión previa se basan en registros médicos. La elegibilidad se confirma lo antes posible para el estado de HER2/HR mediante una revisión del laboratorio central y para la progresión previa de la enfermedad mediante una revisión central de imágenes. Los pacientes que no son elegibles retrospectivamente no son evaluables para el objetivo principal y pueden ser reemplazados.
MCLA-128 se administra en combinación con la misma terapia endocrina previa en la que se documenta radiológicamente enfermedad progresiva. Se incluye un total de hasta 40 pacientes evaluables para la eficacia. Consulte la figura 12.
Población de estudio
Criterios de inclusión
Los pacientes deben cumplir con todos los siguientes requisitos para participar en el estudio:
1. Consentimiento informado firmado antes del inicio de cualquier procedimiento del estudio.
2. Mujeres con cáncer de mama confirmado histológica o citológicamente con evidencia de enfermedad metastásica o localmente avanzada que no son susceptibles de ninguna terapia local con intención curativa:
a. Estado positivo del receptor hormonal documentado (receptor de estrógeno positivo [ER+] y/o receptor de progesterona positivo [PR+]), que incluye > 1 % de células teñidas positivas, según el análisis de la biopsia tumoral más reciente.
b. Expresión documentada de HER2 de bajo nivel, definida como IHC HER2 1+ o IHC HER22+ combinada con FISH negativo, según el análisis local en una biopsia de tumor fresco o una biopsia de archivo recolectada dentro de los 12 meses antes de la selección (preferiblemente metastásico de lo contrario primario).
c. Una o dos estirpes de terapia endocrina previa (inhibidor de la aromatasa o fulvestrant) para la enfermedad metastásica, con progresión de la enfermedad documentada radiológicamente en la última línea, después de al menos 12 semanas de terapia.
d. Progresión en un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina.
e. No más de un régimen de quimioterapia previo para enfermedad avanzada/metastásica.
Nota: Las mujeres premenopáusicas o perimenopáusicas pueden inscribirse si pueden recibir tratamiento con goserelina, agonista de la hormona liberadora de hormona luteinizante LHRH. Dichos pacientes deben haber comenzado el tratamiento con goserelina o un agonista LHRH alternativo al menos 4 semanas antes del ingreso al estudio, y los pacientes que recibieron un agonista LHRH alternativo antes del ingreso al estudio deben cambiar a goserelina durante la duración del ensayo.
3. Enfermedad medible según lo definido por RECIST versión 1.1 por métodos radiológicos en o después de la línea de terapia más reciente. Para la Cohorte 2, las imágenes deben estar disponibles para revisión central.
4. Edad > 18 años a la firma del consentimiento informado.
5. Estado funcional del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) de 0 o 1.
6. Esperanza de vida de > 12 semanas, según el investigador.
7. Fracción de eyección del ventrículo izquierdo (LVEF) > 50 % por ecocardiograma (ECHO) o exploración de adquisición sincronizada múltiple (MUGA).
8. Función adecuada del órgano:
a. Recuento absoluto de neutrófilos (RAN) > 1.5 * 109/L
b. Hemoglobina > 9 g/dL
c. Plaquetas > 100 * 109/L
d. Calcio sérico dentro de los rangos normales (o corregido con suplementos)
e. Alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST) ≤ 2.5 * límite superior de la normalidad (ULN) y bilirrubina total ≤ 1.5 * ULN (en casos de afectación hepática, ALT/AST ≤ 5 * ULN y bilirrubina total dentro de los rangos normales se permitido)
f. Creatinina sérica ≤ 1.5 * ULN o aclaramiento de creatinina > 60 ml/min calculado según la fórmula de Cockroft y Gault o la fórmula de modificación de la dieta en enfermedad renal (MDRD) para pacientes mayores de 65 años (Apéndice 19.2)
g. Albúmina sérica > 3.0 g/dL
Terapias de investigación y acompañante
MCLA-128: Dosis plana intravenosa de 750 mg durante 2 horas, Día 1 cada 3 semanas (q3w).
La premedicación con paracetamol/acetaminofén, antihistamínicos y corticosteroides (según las prácticas estándar) es obligatoria para cada infusión de MCLA-128.
Terapia endocrina: Los pacientes reciben la misma dosis y régimen que el administrado bajo la última línea de terapia endocrina antes del ingreso al estudio en el que el paciente progresó.
Regímenes de tratamiento
Un ciclo es de 3 semanas (incluida la cohorte 2, que puede incluir una dosificación de fulvestrant q4w). Se implementa un período de observación de 6 horas después del inicio de la infusión para la administración inicial de MCLA-128 y de 2 horas para todas las administraciones posteriores.
Todos los pacientes reciben la administración de MCLA-128 el Día 1 q3w. Para la terapia endocrina, los pacientes reciben la misma dosis y régimen que el administrado bajo la última línea de terapia endocrina antes del ingreso al estudio y en la que progresó el paciente.
Fulvestrant se administra los días 1, 15, 29 y una vez cada 28 días a partir de entonces, o la terapia con inhibidores de la aromatasa (letrozol, anastrozol y exemestano) se administra diariamente desde el Día 1.
Administración del tratamiento (todos los ciclos)
Consulte la figura 13. Se implementa un período de observación de 6 horas después del inicio de la infusión para la administración inicial de MCLA-128 y de 2 horas para todas las administraciones posteriores.
• La misma terapia endocrina con la que progresó el paciente antes del ingreso al estudio. Puede administrarse antes, durante o inmediatamente después de la infusión de MCLA-128.
Asignación de tratamiento
No se requiere asignación de tratamiento específico.
Adaptación al tratamiento
No se permiten reducciones de dosis para MCLA-128 o agentes de terapia endocrina.
La infusión de MCLA-128 se interrumpirá en caso de una reacción relacionada con la infusión (IRR) y debe suspenderse definitivamente para las r Ri graves. Para eventos de leves a moderados, la infusión se puede reanudar a una tasa de infusión del 50 % y la duración de la infusión se puede extender a 4 horas.
La administración de MCLA-128 se puede retrasar un máximo de 6 semanas entre infusiones para controlar los eventos adversos (AA), específicamente para disminuciones clínicamente significativas de la LVEF, signos de insuficiencia cardíaca congestiva o diarrea persistente de grado 2 o grado 3-4.
Los fármacos de terapia hormonal se administran de acuerdo con el resumen de características del producto (SPC) de cada fármaco.
Duración del tratamiento
El tratamiento del estudio se administra hasta que se confirme la progresión de la enfermedad (según RECIST 1.1), toxicidad inaceptable, retirada del consentimiento, incumplimiento del paciente, decisión del investigador (por ejemplo, deterioro clínico), interrupción del tratamiento > 6 semanas consecutivas, retirada de cualquier fármaco del estudio. Se realiza un seguimiento de seguridad de los pacientes durante al menos 35 ± 5 días después de la última administración del fármaco del estudio y hasta la recuperación/estabilización de las toxicidades relacionadas, y para la progresión de la enfermedad y el estado de supervivencia durante 12 meses.
Medicamento profiláctico y concomitante
Permitido
• La administración de paracetamol/acetaminofén, antihistamínicos y corticosteroides es obligatoria con cada administración de MCLA-128. En caso de una RRP o hipersensibilidad, el paciente se trata de acuerdo con la práctica clínica local, según esté clínicamente indicado.
• Todos los fármacos necesarios para el bienestar del paciente y que no se espera que interfieran con la evaluación del fármaco del estudio, incluido el tratamiento de apoyo de los síntomas y los EA o el tratamiento estándar de las afecciones concomitantes, se administran a discreción del investigador.
• Goserelina en mujeres pre/perimenopáusicas que comenzaron un agonista n (LHRH) >4 semanas antes del ingreso al estudio.
Prohibido
Corticoides orales crónicos concomitantes (>10 mg/día de equivalente de prednisona), inhibidores del TNF-alfa, anticuerpos anti-células T (por riesgo de inmunosupresión).
Cualquier fármaco en investigación durante el estudio o 4 semanas antes de la primera dosis del tratamiento del estudio.
Terapia anticancerosa sistémica (que no sea la última terapia endocrina) durante el estudio o dentro de las 3 semanas posteriores a la primera dosis del tratamiento del estudio.
Evaluaciones de seguridad/tolerabilidad
AE (CTCAE versión 4.03), SAE
Parámetros de laboratorio: hematología, bioquímica, coagulación, análisis de orina, citoquinas
ECG, MUGA/ECO
Historial médico, signos vitales, estado funcional y examen físico
Medicaciones concomitantes
Modificaciones de dosis (reducciones, interrupciones, retrasos), discontinuación por toxicidad Evaluaciones de eficacia
La evaluación del tumor se basa en CT/MRI con contraste según RECIST 1.1, cada 6 semanas después del inicio del tratamiento. Las respuestas objetivas se confirman al menos 4 semanas después de la primera observación. Se realiza una revisión central de las imágenes por parte de un radiólogo independiente para todos los pacientes (detección y en el estudio). Las gammagrafías óseas se realizan según esté clínicamente indicado para pacientes con metástasis óseas al inicio del estudio o lesiones sospechosas en el estudio.
Los marcadores tumorales (CA15-3, CEA, CA27-29) se evalúan el día 1 de cada ciclo.
Biomarcadores
Los biomarcadores exploratorios candidatos se evalúan en tejido tumoral (detección, opcional después de 12 semanas y EOT) y sangre (antes de la dosis el día 1 cada 4 ciclos y al final del tratamiento).
Tumor: HER2, HER3, dimerización de HER2:HER3, proteínas de señalización posteriores (por ejemplo, PIK3CA), herregulina, fosforilación de HER2, HER3 y proteínas en la vía de señalización de MAPK y AKT, expresión de inhibidores como PTEN, mutaciones en genes relacionados con el cáncer, incluidos HER2 y Señalización de HER3, fusiones del gen de la herregulina.
Sangre: Polimorfismo del receptor Fcy, mutaciones del ADN tumoral circulante en plasma, biomarcadores séricos exploratorios (por ejemplo, HER2 soluble, herregulina).
Farmacocinética
Se recogen muestras de sangre para medir el MCLA-128 en suero. No se realiza muestreo farmacocinético para fulvestrant o inhibidores de aromatasa.
El muestreo PK se realiza en los siguientes momentos:
• Ciclo 1: Día 1, antes de la dosis, EOI y a las 2, 4 y 22 horas después de la EOI, luego en cualquier momento el día 8;
• Ciclo 2, 3, 5: Día 1, antes de la dosis, EOI
• Cada 4 ciclos a partir de entonces: antes de la dosis
Inmunogenicidad
Se recolectan muestras de sangre (5 ml) en todos los pacientes para evaluar los títulos séricos de anticuerpos anti-MCLA-128 antes de la dosis en el día 1 antes de la dosis para los ciclos 1, 3, 5, cada 4 ciclos a partir de entonces y al final del tratamiento.
Definiciones
Todos los criterios de valoración de la eficacia se definirán y analizarán en función de la evaluación del tumor por RECIST 1.1.
CBR: la proporción de pacientes con una mejor respuesta global de RC, PR o SD > 24 semanas.
ORR: la proporción de pacientes con la mejor respuesta global de RC o PR.
PFS: el tiempo desde el inicio del tratamiento hasta la progresión radiológica o muerte por cualquier causa.
Proporción de PFS: la proporción de PFS con el régimen anterior a la PFS en el tratamiento del estudio.
DoR: el tiempo desde la respuesta (CR o PR) hasta la progresión o muerte debido al cáncer subyacente.
OS: el tiempo desde el inicio del tratamiento hasta la muerte por cualquier causa.
Criterios de valoración
Primario
CBR por revisión radiológica del investigador a las 24 semanas
Clave secundaria
CBR a las 24 semanas por revisión central y PFS por investigador y revisión central
Otros secundarios
Seguridad: Incidencia, gravedad y relación de AE, anomalías de laboratorio, SAE, mediciones de ECG y LVEF y signos vitales
tolerabilidad: interrupciones debido a AE, modificaciones de dosis debido a AE, inmunogenicidad y evaluaciones de citoquinas
Otra eficacia: DoR, relación PFS, ORR y OS
Farmacocinética: Cmáx, Coh, AUC, CL, Vss, tmáx y T1/2 para MCLA-128
Poblaciones de análisis
Población tratada: pacientes que reciben al menos una dosis de MCLA-128.
Evaluable para la eficacia: pacientes que reciben al menos 2 ciclos completos (6 semanas) de tratamiento y se han sometido a una evaluación inicial y una evaluación del tumor en el estudio, o que interrumpen el tratamiento antes de tiempo debido a la progresión de la enfermedad.
Análisis
La disposición del paciente y la demografía se analizan en la población tratada, la eficacia se analizará en la población evaluable para la eficacia y la seguridad se analizará en la población tratada.
Las variables cuantitativas se resumirán utilizando estadísticas descriptivas. Las variables continuas se presentarán como N, media y/o mediana, desviación estándar, rango. Las variables categóricas se presentarán mediante frecuencias y porcentajes.
Criterios para el criterio de valoración primario de éxito: Se asume como relevante una mediana de PFS de 5 meses, con el umbral de actividad para CBR a las 24 semanas establecido en 45 %.
CBR y ORR se resumen con un CI binomial exacto del 90 % adjunto. Para PFS, OS y DoR, la función de supervivencia se estima utilizando el método de límite de producto de Kaplan-Meier; se proporcionan estimaciones de probabilidad de CI del 90 % en puntos de tiempo específicos; también se proporciona la duración media y el CI del 90 %. DoR se estima solo para los respondedores. El número y la proporción de cualquier paciente con un índice de PFS > 1.3 se tabula para la cohorte 2 con un CI exacto del 90 %.
Los EA están tabulados por el Diccionario médico para actividades regulatorias (MedDRA®) término preferente y por clase de órgano según incidencia y gravedad. La gravedad de los EA se basa en la Terminología común para eventos adversos (CTCAE) 4.03.
La farmacocinética, la inmunogenicidad y los biomarcadores se analizan centralmente y se notifican por separado.
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Tabla 5. Pesos y volúmenes de tumores xenoinjertados MCF-7 preparados en Charles River para análisis farmacodinámico. Los tumores resaltados en rojo se incluyeron en la primera ronda de análisis VeraTag.
Figure imgf000034_0001
Lista de abreviaturas en el Ejemplo 1
bid: dos veces al día
BW: Peso Corporal
BWL: Pérdida de Peso Corporal
C: Ratones Control
CR: Regresión Completa del Tumor
inj: Inyección
i.v.: Intravenoso
i.p.: Intraperitoneal
IVC: Jaulas Ventiladas Individualmente
kg: Kilogramo
mg: Miligramo
ml: Mililitro
mut: Mutado
ns: No Significativo
p.o.: Por boca (alimentación forzosa)
PR: Regresión Parcial del Tumor
PSU: Polisulfona
qd Que die, todos los días
qwk Una vez a la semana
RBW: Peso Corporal Relativo
RTV: Volumen Tumoral Relativo
S: Significativo
s.c.: Subcutáneo
sem: Error Estándar de la Media
SoC: Estándar de Cuidado
T: Ratones Tratados
TGD: Retraso en el Crecimiento del Tumor
TGDI: Índice de Retraso en el Crecimiento del Tumor
TGI: Inhibición del Crecimiento Tumoral
TFS: Superviviente Libre de Tumor
TS: Estabilización del Tumor
% T/C: Porcentaje de cambio del volumen tumoral en el grupo tratado respecto al grupo de control ml: Microlitro
qd: Diario
Lista de abreviaturas en el Ejemplo 2
BW Peso corporal
CR Regresión tumoral completa
D Día de estudio
i.p. Intraperitoneal
MTD Dosis máxima tolerada
MTV Volumen tumoral mediano
NTR No relacionado con el tratamiento
PR Regresión tumoral parcial
qod x 15 Dosificación cada dos días durante quince dosis
qwk x 5 Dosificación semanal durante cinco semanas
s.c. Subcutáneo
TGI Inhibición del crecimiento tumoral
TR Muerte relacionada con el tratamiento
Lista de abreviaturas en el Ejemplo 4
AE Eventos adversos
ALT Alanina aminotransferasa
ANC Recuento absoluto de neutrófilos
AST Aspartato aminotransferasa
AUC Área bajo la curva
CBR Tasa de beneficio clínico
CHF Insuficiencia cardíaca congestiva
CR Regresión tumoral completa
DoR Tiempo desde la respuesta (CR o PR) hasta la progresión o muerte debido al cáncer subyacente. ECHO Ecocardiograma
ER Receptor de estrógeno
FISH Hibridación in situ por fluorescencia
IHC Inmunohistoquímica
IRR Reacción relacionada con la infusión
MBC Cáncer de mama metastásico
MDRD Modificación de la dieta en la enfermedad renal
MUGA Escaneo de adquisición múltiple con puertas
LVD Disfunción del ventrículo izquierdo
LVEF Fracción de eyección del ventrículo izquierdo
LHRH Hormona liberadora de hormona luteinizante
PFS Supervivencia libre de progresión
PR Receptor de progesterona o remisión parcial según el contexto
OCOG Grupo cooperativo oncológico del este
ORR Tasa de respuesta objetiva
OS Tiempo desde el inicio del tratamiento hasta la muerte por cualquier causa.
SPC Resumen de las características del producto
ULN Límite superior normal

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para usar en un método para tratar el cáncer de mama en un sujeto que tiene cáncer de mama o está en riesgo de tener dicho cáncer, en el que el anticuerpo biespecífico tiene un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-2 y un sitio de unión a antígeno que puede unirse a una parte extracelular de ErbB-3, en el que el fármaco de terapia endocrina comprende tamoxifeno, fulvestrant o letrozol, y en el que dicho anticuerpo comprende
un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 AYYIN, RIYPGSGYTSYAQKFQG y PPVYYDSAWFAY, respectivamente, de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-2,
un dominio variable con una región variable de cadena pesada que comprende al menos las secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 GYYMH, WINPNSGGTNYAQKFQG y DHGSRHFWSYWGFDY, respectivamente, de una región variable de cadena pesada específica de ErbB-3, y
una cadena ligera común que tiene una secuencia
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC.
2. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de la reivindicación 1, en el que el cáncer de mama es un cáncer de mama receptor hormonal positivo.
3. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cáncer de mama es un cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo.
4. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cáncer de mama es un cáncer de mama con receptor de progesterona positivo.
5. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cáncer de mama es ER-positivo con baja expresión de HER2 de cáncer de mama metastásico MBC IHC 1+, o IHC 2+ combinado con FISH negativo.
6. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo biespecífico puede reducir una función del receptor inducida por ligando de ErbB-3 en una célula positiva ErbB- 2 y ErbB-3.
7. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cáncer es un cáncer inmunohistoquímico ErbB-2 o un ErbB-2 + inmunohistoquímico sin cáncer de amplificación de gen ErbB-2.
8. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además administrar al paciente un inhibidor de quinasa 4/6 dependiente de ciclina.
9. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto había recibido uno o más tratamientos de terapia endocrina antes de iniciar un tratamiento con dicho Anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y dicha cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina.
10. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto había recibido un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina antes del inicio de un tratamiento con dicho Anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y dicha cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina.
11. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además determinar el nivel de expresión de un receptor de estrógeno, ErbB-2, ErbB-3 o una combinación de los mismos sobre células de dicho cáncer.
12. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el sujeto tiene un estado de receptor hormonal positivo (receptor de estrógeno positivo [ER+] y/o receptor de progesterona positivo [PR+]), para > 1 % de células positivas según lo determinado por inmunohistoquímica en una biopsia de tumor.
13. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el fármaco de terapia endocrina comprende tamoxifeno.
14. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el fármaco de terapia endocrina comprende letrazol.
15. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el fármaco de terapia endocrina comprende Fulvestrant.
16. El anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 y una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco de terapia endocrina para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo biespecífico ErbB-2/ErbB-3 se administra como una dosis intravenosa de alrededor de 300 mg a alrededor de 900 mg, por ejemplo, cada dos a cuatro semanas.
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