ES2940241T3 - Procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre un vidrio portante - Google Patents

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Abstract

La invención se refiere a un método para fijar un material de película delgada (18) sobre una superficie plana de un vidrio portador (16) para un dispositivo de microscopio por medio de un líquido. El método comprende los siguientes pasos: aplicar una cantidad de líquido a la superficie plana del vidrio portador (16), aplicar el material de película delgada (18) a la superficie del vidrio portador (16) que es al menos parcialmente, preferiblemente completamente humedecida con líquido, aplicando una muestra para ser examinada microscópicamente la superficie del material de película delgada (18) de espaldas a la superficie humedecida con líquido del vidrio portador (16), la superficie del material de película delgada (18) de cara lejos de la superficie humedecida con líquido del vidrio portador (16) que es hidrofílico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre un vidrio portante
La presente invención se encuentra dentro del área de los analizadores automáticos y hace referencia a un procedimiento para un analizador de hematología para analizar células en una muestra, mediante la utilización de un dispositivo de microscopio.
Para el análisis automatizado de células, cada vez con más éxito, se utilizan los así llamados "automated cell counters" (contadores de células automáticos). Como ejemplos de los mismos pueden mencionarse los sistemas Advia 2120, Sysmex XE-2100 y Cobas m 511. Los aparatos automáticos, además de su alto rendimiento, brindan algunas ventajas, como por ejemplo una objetividad elevada (sin variabilidad en función del observador), la eliminación de variaciones estadísticas que habitualmente están asociadas a un conteo manual (conteo de altos números de células), así como la determinación de numerosos parámetros que no se encontrarían a disposición en un conteo manual y, del modo ya mencionado, un manejo más eficiente y más efectivo con relación a los costes. Algunos de esos aparatos pueden procesar de 120 a 150 muestras de pacientes por hora.
Los principios técnicos del conteo de células individual automático, como por ejemplo en los aparatos Advia 2120 y Sysmex XE-2100, mayormente se basan en una medición de impedancia (de resistencia) o en un sistema óptico (medición de la luz dispersa o medición de la absorción). Además se han establecido sistemas que proporcionan imágenes, que por ejemplo reproducen y evalúan de forma automatizada las células de un frotis de sangre, como por ejemplo en los aparatos Cobas m 511, CellaVision DM96 y CellaVision 1200.
En el procedimiento de impedancia, el conteo de células, así como su determinación de tamaños, tiene lugar en base a la detección y a la medición de variaciones en la conductividad eléctrica (resistencia) que son provocadas debido a partículas que pasan a través de una abertura reducida. Las partículas, como por ejemplo células de sangre, en sí mismas no son conductoras, pero se suspenden en un diluyente eléctricamente conductor. Cuando una suspensión de células de esa clase es conducida a través de una abertura, al pasar una célula individual aumenta transitoriamente la impedancia (resistencia) de la ruta eléctrica entre los dos electrodos que se encuentran en cada lado de la abertura.
A diferencia del procedimiento de impedancia, el procedimiento óptico comprende la conducción de un haz de luz láser o de un haz de luz LED a través de una muestra de sangre diluida, que es detectada en un flujo continuo desde el haz láser o desde el haz de luz LED. El haz de luz correspondiente puede ser conducido hacia la celda de flujo por ejemplo mediante un cable de fibra óptica. Cada célula que pasa por la zona de detección de la celda de flujo dispersa la luz focalizada. La luz dispersa es detectada entonces por un fotodetector y es transformada en un pulso eléctrico. El número de pulsos aquí generado es directamente proporcional al número de células que pasa por la zona de detección en un intervalo de tiempo especial.
En los procedimientos ópticos, la dispersión de la luz de la célula individual que pasa por la zona de detección se mide en distintos ángulos. Debido a esto se detecta el comportamiento de dispersión de la respectiva célula para la radiación óptica, lo que permite llegar a conclusiones, por ejemplo sobre la estructura de la célula, la forma y la capacidad de reflexión. Ese comportamiento de dispersión puede utilizarse para diferenciar distintas clases de células de sangre y para utilizar los parámetros deducidos para el diagnóstico de desviaciones de las células de sangre de esa muestra de un estándar, que por ejemplo se obtuvo a partir de una pluralidad de muestras de referencia clasificadas como normales.
Para producir frotis de sangre para el diagnóstico diferencial, hasta el momento, una muestra de sangre se extiende sobre un portaobjetos de vidrio y se evalúa microscópicamente de forma manual o automatizada. Los portaobjetos de vidrio ocasionan costes elevados en la producción. Además, el vidrio es muy frágil y en caso de romperse pueden producirse bordes cortantes, lo cual implica un alto riesgo de lesiones para el personal del laboratorio. Los cortes son particularmente riesgosos en el laboratorio, porque debido a ello se daña la capa de barrera natural de la piel y es posible que penetren patógenos. Por ese motivo aumenta marcadamente el riesgo de una infección con organismos portadores de enfermedades.
Los portaobjetos de vidrio pueden reemplazarse por materiales de lámina fina, como por ejemplo láminas, como material portador para la aplicación de sangre y para su microscopía. La utilización de un material de lámina fina, como por ejemplo una lámina, como material soporte para la aplicación de sangre y para su microscopía, sin embargo, implica el problema de que la lámina es muy flexible y plegable en comparación con el vidrio, y por ese motivo no presenta una planeidad elevada. Para la microscopía, sin embargo, se necesita una planeidad elevada para posibilitar buenos registros de las células. En particular en la microscopía automatizada, una planeidad elevada también es importante para la orientación exacta de la muestra, para obtener imágenes de alta calidad.
En la solicitud US 4597982 A se describe un procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre una superficie plana de un vidrio portante para un dispositivo de microscopio mediante un líquido; el procedimiento comprende las siguientes etapas:
- aplicación de una cantidad de líquido sobre la superficie plana del vidrio portante,
- aplicación del material de lámina fina sobre la superficie del vidrio portante humedecida con líquido al menos de forma parcial, preferentemente por completo.
En la solicitud US 4597982 A se describe como líquido el alcohol, aceite para microscopio o adhesivo líquido. En la solicitud US 3551 023 A se describe el hecho de que un material de lámina fina, con un adhesivo líquido, se adhiere en la superficie superior de un vidrio portante. De este modo, una muestra que debe analizarse microscópicamente está aplicada sobre la superficie del material de lámina fina apartada de la superficie adherida del vidrio portante.
Por lo tanto, un objeto de la presente invención consiste en proporcionar un dispositivo y un procedimiento, mediante los cuales pueda lograrse un aplanamiento del material de lámina fina. Puesto que los microscopios de alta resolución actuales para la valoración automatizada de células en frotis de sangre trabajan con una apertura numérica elevada y, con ello, con inmersión entre el portaobjetos y el objetivo, y eventualmente también entre el portaobjetos y el condensador, el grosor de inserción de un portaobjetos de lámina, incluyendo un dispositivo para aplanar, está limitado a un grosor de aproximadamente 1,4 mm. De este modo, un dispositivo y un procedimiento, mediante los cuales tiene lugar un aplanamiento del material de lámina fina, disponen sólo de un espacio limitado en cuanto a ese grosor de inserción.
El objeto se soluciona mediante un procedimiento según la invención, una utilización correspondiente de un procedimiento, así como mediante un analizador según las reivindicaciones independientes. Los perfeccionamientos ventajosos de la invención se indican en particular también mediante las reivindicaciones dependientes.
La invención parte de la idea de fijar transitoriamente el material de lámina fina, con la ayuda de una cantidad de agua reducida, sobre un soporte transparente, con buenas propiedades ópticas y una planeidad elevada. Para la aplicación de sangre sobre el material de lámina fina, además, es importante que la superficie correspondiente, sobre la que debe aplicarse la sangre, sea una superficie hidrófila.
El objeto de la invención comprende en particular un procedimiento según la reivindicación 1.
El procedimiento según la invención ofrece la ventaja de que un aplanamiento del material de lámina fina puede lograrse de modo fiable con medios particularmente sencillos. Gracias a la utilización, que es posible de este modo, de material de lámina fina, como por ejemplo una lámina, los costes para producir un frotis de sangre pueden reducirse de forma considerable. Un portaobjetos de lámina, en la producción, es esencialmente más conveniente que un portaobjetos de vidrio. Además, un portaobjetos de lámina es hasta 10 veces más delgado que el vidrio. Gracias a esto es posible producir un casete con portaobjetos que, con el mismo tamaño, contenga hasta 10 veces más portaobjetos, con lo cual, al mismo tiempo, pueden cargarse más portaobjetos en un aparato correspondiente. Además, al utilizar portaobjetos de lámina se producen menos desechos que al utilizar portaobjetos de vidrio. Asimismo, un material de lámina fina, como por ejemplo una lámina, no es frágil en comparación con el vidrio, con lo cual se reduce marcadamente el riesgo de una lesión debido a bordes cortantes.
El vidrio portante preferentemente se trata de un portaobjetos que, a diferencia de los portaobjetos tradicionales, se compone de vidrio más seguro frente a roturas. Preferentemente, el vidrio portante presenta una calidad de los bordes elevada y/o una estabilidad elevada. Una calidad de los bordes elevada puede aumentar la estabilidad del vidrio. Una estabilidad elevada del vidrio portante en particular es ventajosa para una utilización múltiple, así como para la utilización reiterada en un analizador automático.
De manera especialmente preferente, el vidrio portante se compone de un vidrio Corning Gorilla™ de Corning Incorporated y/o de un vidrio de silicato de aluminio reforzado químicamente, como por ejemplo Xensation™ Cover de SCHOTT Technical Glass Solutions GmbH.
En una configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el vidrio portante se compone de plástico. En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el procedimiento presenta además la siguiente etapa: - microscopía de la muestra aplicada sobre la superficie del material de lámina fina. Esto ofrece la ventaja de que se obtiene una imagen correspondiente de la estructura microscópica de la muestra.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el procedimiento presenta además las siguientes etapas: separación del material de película fina con la muestra aplicada desde el vidrio portante; limpieza y secado de la superficie del vidrio portante humedecida con el líquido; reutilización del vidrio portante. Preferentemente, la limpieza tiene lugar con aire. Esto ofrece la ventaja de que el vidrio portante puede reutilizarse. Esto puede conducir a ventajas considerables en cuanto a los costes, evitando además contaminar el medio ambiente de forma innecesaria y reduciendo la demanda de energía total.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el grosor total del vidrio portante, con el líquido aplicado, el material de lámina fina y la muestra, es menor que 1,4 mm, donde el grosor total del vidrio portante con el líquido aplicado y el material de lámina fina sin muestra, de manera especialmente preferente es de 1 mm. Esto ofrece la ventaja de que una utilización del procedimiento en un microscopio de alta resolución es adecuada para la valoración automatizada de células en frotis de sangre con una apertura numérica elevada y con inmersión entre el portaobjetos y el objetivo, y eventualmente también entre el portaobjetos y el condensador, ya que el grosor total es menor o igual al grosor de inmersión máximo posible de 1,4 mm.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el material de lámina fina es una lámina flexible.
El líquido se compone de agua. Esto ofrece la ventaja de que la fijación con agua, de forma sencilla y económica, posibilita utilizar material de lámina fina, como por ejemplo una lámina, para la microscopía de alto rendimiento. La fijación de la lámina con agua, además, ofrece la ventaja de que la lámina puede separarse nuevamente del soporte después de la microscopía. La composición del agua permite una separación libre de residuos de la lámina desde el soporte y, con ello, una reutilización del soporte especialmente sencilla. A continuación, la lámina examinada con el microscopio y separada del soporte, es desechada. El soporte se limpia, por ejemplo con aire en el sistema, y después puede reutilizarse. La viscosidad reducida del agua permite una distribución uniforme del agua entre el material de lámina fina y el soporte. El agua, debido a su viscosidad reducida, forma una lámina fina muy uniforme entre el soporte y el material de lámina fina, fijando así transitoriamente el material de lámina fina en el soporte. De este modo, en la lámina se produce un aplanamiento igualmente elevado, como en el soporte. Además, mediante la utilización de agua se mantiene muy reducida la influencia de la fijación en las propiedades ópticas, así como, de manera ventajosa, no se produce ninguna variación de las propiedades ópticas debido a la fijación. Después de finalizado el proceso de microscopía, el material de lámina fina puede separarse nuevamente del soporte. Para reutilizar el soporte, el mismo preferentemente tan sólo debe secarse, y después puede reutilizarse. La composición del agua posibilita una separación libre de residuos del material de lámina fina, desde el soporte.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, la cantidad de líquido aplicada sobre la superficie plana del vidrio portante es de 3,7 a 11 nanolitros por mm2, preferentemente de 4,8 a 9,6 nanolitros por mm2, de modo especialmente preferente de 5,3 nanolitros por mm2.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el vidrio portante es transparente en el rango espectral visible.
En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, el material de lámina fina se cubre con un segundo material de lámina fina, por ejemplo con una segunda lámina, donde el grosor del segundo material de lámina fina, así como de la segunda lámina, preferentemente es de 0,1 a 0,17 mm. Esto ofrece la ventaja de que la segunda lámina se utiliza como cubreobjetos. En la hematología en general no se utilizan cubreobjetos, pero hay otras aplicaciones en las cuales es ventajosa la utilización de muestras cubiertas. A menudo, también debido a las condiciones técnicas del microscopio utilizado, no es posible examinar con el microscopio una muestra descubierta. En otra configuración ventajosa del procedimiento según la invención, la muestra comprende un líquido corporal humano y/o animal, preferentemente sangre. Preferentemente, la muestra contiene células de sangre.
Otro objeto de la presente invención consiste en un analizador automático según la reivindicación 13.
Preferentemente, el analizador según la invención consiste en un analizador automático, de forma especialmente preferente en un analizador para hematología semiautomático o automático. Preferentemente, el microscopio comprende una o varias cámaras. De manera preferente, la cámara comprende un dispositivo de registro digital que está diseñado para registrar el campo de luz reproducido en el microscopio. Preferentemente, el dispositivo de registro digital comprende un chip charge-coupled device (dispositivo de carga acoplada - CCD) o varios chips CCD. De manera especialmente preferente, el dispositivo de registro digital se basa en una técnica de semiconductor complementario de óxido metálico (CMOS) y/o comprende un chip CMOS.
La invención se basa en un microscopio óptico que por ejemplo está equipado con dispositivos para un contraste de interferencia diferencial. Los microscopios de esa clase, con respecto a la separación, pueden adaptarse a las exigencias de la hematología. Esa adaptación tiene lugar esencialmente mediante una selección específica del desplazamiento del haz en el recorrido del haz a través del objeto de medición. El objeto de medición se trata por ejemplo de una muestra de sangre extendida.
La invención se explica una vez más, con mayor detalle, mediante el dibujo que se adjunta, por medio de un ejemplo de ejecución concreto. El ejemplo mostrado representa una forma de ejecución preferente de la invención. Muestran:
Figura 1 una representación esquemática del desarrollo de un procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre una superficie plana de un vidrio portante,
Figura 2 un analizador automático que comprende medios para la realización automática de un procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre una superficie plana de un vidrio portante.
El procedimiento representado esquemáticamente en la figura 1 se utiliza para la fijación de un material de lámina fina sobre una superficie plana de un vidrio portante para un dispositivo de microscopio mediante un líquido. El procedimiento comprende las siguientes etapas: En primer lugar, una cantidad de líquido se aplica sobre la superficie plana del vidrio portante (1). Después, el material de lámina fina se aplica sobre la superficie del vidrio portante humedecida con líquido al menos de forma parcial, preferentemente por completo (2). A continuación, una muestra que debe analizarse microscópicamente se aplica sobre la superficie del material de lámina fina apartada de la superficie del vidrio portante (16) humedecida con el líquido. En este caso, la superficie del material de lámina fina (18) apartada de la superficie del vidrio portante (16) humedecida con líquido, es hidrófila. Después, la muestra aplicada sobre la superficie del material de lámina fina (18) se examina mediante el microscopio, por medio del registro de al menos una imagen microscópica de la muestra. A continuación, el material de lámina fina (18) con la muestra aplicada se separa del vidrio portante (16) y la superficie del vidrio portante (16) humedecida con líquido se limpia y se seca, donde el secado preferentemente tiene lugar con aire. Después, el vidrio portante (16) se reutiliza en otra ejecución del procedimiento.
El analizador automático (11) mostrado en la figura 2 comprende medios para la realización automática del procedimiento explicado en la figura 1. Los medios para la realización automática del procedimiento comprenden un dispositivo de control que está configurado de manera que el mismo puede controlar una realización automática del procedimiento.
El analizador (11) está configurado para analizar células de sangre (12) en una muestra y comprende un microscopio óptico (10) que comprende una fuente de luz (13) para iluminar una muestra y una lente convergente para concentrar y enfocar haces de luz (14) que parten desde la muestra iluminada, una cámara (15) conectada al microscopio (10), un pipeteador automático para el pipeteado de líquidos, así como un brazo de transferencia automático para transportar el material de película fina. La muestra se trata de una muestra de sangre que contiene las células de sangre (12).
En primer lugar, mediante el pipeteador, se pipetea agua sobre el vidrio portante (16), de manera que sobre el vidrio portante (16) se conforma una película de líquido (17). De ese modo, un material de lámina fina (18), en forma de una lámina flexible, se aplica sobre la película de líquido (17), mediante el brazo de transferencia. Después, mediante el pipeteador o mediante otro dispositivo automático adecuado, la muestra con las células de sangre (12) se aplica sobre la superficie hidrófila (19) del material de lámina fina (18). La superficie hidrófila (19) del material de lámina fina (18) se encuentra de este modo sobre el lado del material de lámina fina (18) que está apartado de la película de líquido (17).
Para la reproducción microscópica de la muestra, la misma, con ello, después de la realización del procedimiento, se encuentra sobre la superficie hidrófoba (19) del material de lámina fina (18). El material de lámina fina (18), mediante la película de líquido (17), de agua, se fija sobre el vidrio portante (16). El material de lámina fina está orientado paralelamente con respecto a la superficie plana del vidrio portante (16).
Después de la realización de la microscopía de la muestra (4), con un dispositivo automático para separar el material de lámina fina (18), el material de lámina fina (18) se despega del vidrio portante (16), y el material de lámina fina (18) se separa (5).
Además, el vidrio portante (16) se limpia y se seca mediante un dispositivo automático para limpiar y secar el vidrio portante (18) (6).
El material de lámina fina (18) y/o el vidrio portante (16), de manera opcional, respectivamente se colocan automáticamente en un espacio de almacenamiento para almacenar el material de lámina fina (18), así como los vidrios de apoyo (16).
De manera opcional, mediante un dispositivo automático para el marcado y/o la identificación de los vidrios de apoyo (16) tiene lugar un marcado y/o una identificación de los vidrios de apoyo (16). Preferentemente, el marcado o la identificación se trata de una identificación o marcado respectivamente unívoco.
De manera opcional, mediante un dispositivo automático para la identificación y/o el reconocimiento de vidrios de apoyo (16) defectuosos, tiene lugar una detección o reconocimiento de vidrios de apoyo (16) defectuosos, que después, por ejemplo se clasifican automáticamente y/o se trasladan a un contenedor de residuos.
Lista de símbolos de referencia
1 Aplicación de una cantidad de líquido
2 Aplicación del material de lámina fina
3 Aplicación de la muestra
4 Microscopía de la muestra
5 Separación del material de lámina fina
6 Limpieza y secado
7 Reutilización del vidrio portante
10 Microscopio
11 Analizador
12 Célula de sangre
13 Fuente de luz
14 Haces de luz
15 Cámara
16 Vidrio portante
17 Película de líquido
18 Material de lámina fina
19 Superficie hidrófila

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para la fijación de un material de lámina fina (18) sobre una superficie plana de un vidrio portante (16) para un dispositivo de microscopio mediante un líquido; el procedimiento comprende las siguientes etapas:
- aplicación de una cantidad de líquido sobre la superficie plana del vidrio portante (16),
- aplicación del material de lámina fina (18) sobre la superficie del vidrio portante (16) humedecida con líquido al menos de forma parcial, preferentemente por completo,
- aplicación de una muestra que debe analizarse microscópicamente sobre la superficie del material de lámina fina (18) apartada de la superficie del vidrio portante humedecida con el líquido, caracterizado porque la superficie (19) del material de lámina fina (18), apartada de la superficie del vidrio portante (16) humedecida con el líquido, es hidrófila, y donde el líquido se compone de agua.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, el procedimiento presenta además la siguiente etapa:
- microscopía de la muestra aplicada sobre la superficie del material de lámina fina (18).
3. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, el procedimiento presenta además la siguiente etapa:
- separación del material de lámina fina (18) con la muestra aplicada, desde el vidrio portante (16),
- limpieza y secado de la superficie del vidrio portante (16) humedecida con el líquido,
- reutilización del vidrio portante (16).
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde el grosor total del vidrio portante (16) con el líquido aplicado, el material de lámina fina (18) y la muestra, es de un grosor menor a 1,4 mm, donde el grosor total del vidrio portante (16) con el líquido aplicado y el material de lámina fina (18) sin muestra, de manera especialmente preferente es de 1 mm.
5. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde el material de lámina fina (18) es una lámina flexible.
6. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde la cantidad de líquido aplicada sobre la superficie plana del vidrio portante (16) es de 3,7 a 11 nanolitros por mm2, preferentemente de 4,8 a 9,6 nanolitros por mm2, de modo especialmente preferente de 5,3 nanolitros por mm2.
7. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde el vidrio portante (16) es transparente en el rango espectral visible.
8. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde el vidrio portante (16) se compone de plástico.
9. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde el material de lámina fina (18) se cubre con un segundo material de lámina fina, de manera que el segundo material de lámina fina se utiliza como cubreobjetos de la muestra, y donde el grosor del segundo material de lámina fina preferentemente es de 0,1 a 0,17 mm.
10. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, donde la muestra comprende un líquido corporal humano y/o animal, preferentemente sangre.
11. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10 en un dispositivo de microscopio.
12. Utilización de un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10 en un analizador automático (11), donde el analizador preferentemente comprende un dispositivo de microscopio.
13. Analizador automático (11) que comprende un pipeteador automático para pipetear líquidos; un brazo de transferencia automático para transportar el material de lámina fina (18); el material de lámina fina, donde una superficie (19) del material de lámina fina es hidrófila; un líquido, donde el líquido se compone de agua; un dispositivo de control que está configurado de manera que el mismo controla una realización automática de un procedimiento para la fijación de un material de lámina fina sobre una superficie plana de un vidrio portante (16) para un dispositivo de microscopio mediante el líquido, el procedimiento comprende
- la aplicación de una cantidad de líquido sobre la superficie plana del vidrio portante mediante el pipeteador automático,
- la aplicación del material de lámina fina sobre la superficie del vidrio portante humedecida con líquido al menos de forma parcial, preferentemente por completo, mediante el brazo de transferencia automático, donde la superficie del material de lámina fina apartada de la superficie del vidrio portante humedecida con líquido, es hidrófila,
- la aplicación de una muestra que debe analizarse microscópicamente sobre la superficie del material de lámina fina apartada de la superficie del vidrio portante humedecida con líquido mediante el pipeteador automático o mediante otro dispositivo automático adecuado, en cuyo caso el analizador automático comprende el dispositivo automático.
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