ES2939509T3 - Procedimiento para la identificación de la sensibilidad de un paciente a una terapia de inhibición de la telomerasa - Google Patents

Procedimiento para la identificación de la sensibilidad de un paciente a una terapia de inhibición de la telomerasa Download PDF

Info

Publication number
ES2939509T3
ES2939509T3 ES20156494T ES20156494T ES2939509T3 ES 2939509 T3 ES2939509 T3 ES 2939509T3 ES 20156494 T ES20156494 T ES 20156494T ES 20156494 T ES20156494 T ES 20156494T ES 2939509 T3 ES2939509 T3 ES 2939509T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
cancer
telomerase
treatment
patient
telomerase inhibitor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES20156494T
Other languages
English (en)
Inventor
Calvin B Harley
Laurence Elias
Jennifer Smith
Mark J Ratain
Fabio Benedetti
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Geron Corp
Original Assignee
Geron Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Geron Corp filed Critical Geron Corp
Application granted granted Critical
Publication of ES2939509T3 publication Critical patent/ES2939509T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B30/00—ICT specially adapted for sequence analysis involving nucleotides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)

Abstract

La invención proporciona métodos para determinar la susceptibilidad de los pacientes con cáncer a desarrollar reacciones adversas si se tratan con un fármaco inhibidor de la telomerasa mediante la medición de la longitud de los telómeros en células apropiadas del paciente antes del inicio del tratamiento con el inhibidor de la telomerasa. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimiento para la identificación de la sensibilidad de un paciente a una terapia de inhibición de la telomerasa
Campo de la invención
La invención se refiere, en general, al campo de la identificación de pacientes que son sensibles a los agentes inhibidores de la telomerasa. En particular, la invención proporciona procedimientos para detectar pacientes que deberían limitar o modificar el uso de inhibidores de la telomerasa porque están en una categoría de riesgo de desarrollar sensibilidad limitante tal como trombocitopenia.
Antecedentes
Los telómeros son elementos genéticos ubicados en los extremos de todos los cromosomas eucarióticos que preservan la estabilidad del genoma y la viabilidad celular al evitar la recombinación aberrante y la degradación del ADN (McClintock, 1941, Genetics vol. 26, (2) pág. 234-282; Muller, (1938) The collecting net, vol. 13, (8) pág. 181198). En humanos, la secuencia telomérica se compone de 10-20 kilobases de repeticiones TTAGGG (Harley y col., 1990) Nature vol. 345 pág. 458-460; Blackburn, (1991) Nature vol. 350 pág. 569-573; de Lange y col., (1990) Mol. Cell Biol. Vol. 10, (2) pág. 518-527). Existen evidencias crecientes de que la pérdida gradual de las secuencias de repetición teloméricas (TTAGGG) puede ser un mecanismo de temporización ("reloj") que limita el número de divisiones celulares en las células humanas normales (Allsopp y col., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., vol. 89, pág. 10114-10118; Harley y col., (1990) Nature, vol. 345, pág. 458-460; Hastie y col., (1990) Nature, vol. 346, pág. 866-868; Vaziri y col., (1993) Amer. J. Hum. Genet., vol. 52, pág. 661-667). Por el contrario, las células inmortales son capaces de mantener una longitud del telómero estable mediante la regulación positiva o reactivación de la telomerasa, una enzima ribonucleoproteína que puede añadir repeticiones teloméricas a los extremos de los cromosomas (Greider y Blackburn, (1985) Cell, vol. 43, pág. 405-413; Greider y Blackburn, (1989) Nature, vol. 337, pág. 331-337; Morin, (1989) Cell, vol.
59, pág. 521-529).
La telomerasa es una enzima que añade nucleótidos a los telómeros en los extremos de los cromosomas, lo que ayuda a evitar el acortamiento telomérico a longitudes críticas. La telomerasa, estructuralmente, es un complejo macromolecular único que incorpora una cadena de ARN en su sitio activo. Este ARN incluye la secuencia telomérica complementaria (3'-AUCCCAAUC-5‘), que funciona tanto para anclar la telomerasa al telómero que como una plantilla para añadir repeticiones al extremo del cromosoma. La telomerasa es activa esencialmente en todos los cánceres, pero se presenta generalmente a niveles muy bajos o no detectables en el tejido adulto normal. Por lo tanto, la longitud promedio de los telómeros de las células normales varía entre los individuos y disminuye con la edad (ver la Figura 7). El acortamiento de los telómeros en los tejidos normales también puede acelerarse por el estrés oxidativo, fisiológico o inmunológico y la exposición a agentes tóxicos.
Las células cancerosas generalmente se someten a rondas repetidas de división celular y tienen telómeros que son estables, pero más cortos que los de las células normales. La activación de la telomerasa es necesaria para que la mayoría de las células cancerosas se repliquen indefinidamente y de esta manera permitir el crecimiento tumoral y la metástasis. (Kim y col., Science vol. 266 pág. 2011-2015; Greider CW, Blackburn Eh . Sci Am Feb:92-97, 1996; Shay JW y Wright WE. "Senescence and immortalization: role of telomeres and telomerase" Carcinogenesis 26:86774, 2005). Por lo tanto, la inhibición de la telomerasa se considera una estrategia de tratamiento prometedora para una amplia variedad de tipos de tumores sólidos y neoplasias malignas hematológicas (Harley CB, Nature Rev. Cancer, vol. 8 pág. 167-179, 2008).
GRN163L es un oligonucleótido de tiofosforamidato con una "cola" de palmitoilo 5'. Inhibe la actividad de la telomerasa intracelular mediante la unión a la región plantilla del componente ARN de la holoenzima telomerasa. (Shea-Herbert y col., Oncogene 24:5262-8, 2005) GRN163L ha demostrado inhibición de la telomerasa y efectos de inhibición del crecimiento de células cancerosas tanto in vitro como in vivo (Dikmen ZG y col., Cancer Res. 65:7866-73, 2005; Djojosobruto M W y col., Hepatol 42:1-11, 2005; Hochreiter AE y col., Clin Cancer Res 12:3184922006) GRN163L se encuentra actualmente en ensayos clínicos en tumores sólidos y cánceres hematológicos.
En cualquier tratamiento contra el cáncer, la toxicidad inducida por la quimioterapia puede resultar en reducciones de la intensidad de dosis relativa de la quimioterapia. Las toxicidades inducidas por el tratamiento pueden incluir anemia, neutropenia, leucopenia y trombocitopenia. La trombocitopenia es una toxicidad inducida por la quimioterapia que se produce típicamente en la primera ronda del tratamiento de quimioterapia y puede volverse más grave durante rondas repetidas de tratamiento. Los fármacos que resultan en toxicidades pueden tener aplicaciones limitadas debido a la reducción de la intensidad de dosis (RDI), retrasos de la dosis y reducciones de la dosis relativa. Tales reducciones de la dosis, reducción de la intensidad de la dosis o retrasos de la dosis usados como un medio para reducir la toxicidad pueden socavar el control de la enfermedad y la supervivencia general, particularmente en pacientes con neoplasias malignas potencialmente curables. Generalmente, se recomienda que para obtener la máxima relación beneficioriesgo de la quimioterapia, la dosis prescrita debe individualizarse de acuerdo con el objetivo de la terapia y la respuesta.
El tratamiento de la trombocitopenia se determina por la etiología y la gravedad de la enfermedad. El concepto principal en el tratamiento de la trombocitopenia es eliminar el problema subyacente, ya sea que eso signifique interrumpir los fármacos sospechosos que provocan trombocitopenia, o tratar los factores inmunológicos o inflamatorios contribuyentes. Los pacientes con trombocitopenia grave pueden controlarse con transfusiones de plaquetas de donantes por un periodo de tiempo. Además, el Oprelvekin (NEUMEGA™, Wyeth) se aprobó para la prevención de la trombocitopenia grave después de la quimioterapia mielosupresora en pacientes adultos con neoplasias malignas no mieloides. Otro fármaco, Romiplostin (NPLATE™, Amgen Inc.) se ha aprobado para el tratamiento de la púrpura trombocitopénica idiopática crónica (ITP).
En este contexto, una prueba altamente predictiva para pacientes que son sensibles a desarrollar toxicidad inducida por la terapia de inhibición de la telomerasa proporcionaría una reducción significativa en la carga total de toxicidad asociada con la terapia de inhibición de la telomerasa, y permitiría el uso más seguro de la terapia de inhibición de la telomerasa sin una negación inapropiada de acceso a su uso.
La presente invención pretende presentar un procedimiento para determinar la susceptibilidad de los pacientes con cáncer a desarrollar toxicidades limitantes del tratamiento, tales como trombocitopenia, a partir de la terapia de inhibición de la telomerasa.
Sumario de la invención
De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un inhibidor de la telomerasa para su uso en un procedimiento para el tratamiento del cáncer en un paciente, en el que el procedimiento comprende analizar una muestra biológica del paciente para determinar la longitud o la distribución de la longitud de los telómeros e identificar la probabilidad de que el paciente presente un evento adverso al tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa.
El paciente puede ser un ser humano. El evento adverso puede seleccionarse de trombocitopenia, anemia, leucopenia o neutropenia. La reacción adversa puede ser trombocitopenia de los grados 3 o 4. La muestra biológica puede ser células sanguíneas obtenidas del paciente. Las células sanguíneas pueden ser glóbulos blancos, por ejemplo, granulocitos, opcionalmente los granulocitos pueden ser neutrófilos, basófilos o eosinófilos. Alternativamente las células sanguíneas pueden ser linfocitos, monocitos o macrófagos.
El inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la invención puede ser un oligonucleótido, por ejemplo, el inhibidor de la telomerasa puede ser GRN163L. El cáncer a tratar puede seleccionarse del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cáncer de faringe, cáncer rectal, cáncer pancreático, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer del tracto urinario, cáncer de tiroides, cáncer renal, cáncer de piel, cáncer de cerebro, carcinoma, melanoma, leucemia y linfoma
De acuerdo con la invención, el paciente puede controlarse mediante
(a) la determinación del promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y la multiplicación del promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) la multiplicación de la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis; y (c) el cálculo de la suma del componente del telómero, el componente de dosis y una constante; y
(d) la determinación de la probabilidad esperada de una reacción adversa en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
Cuando el evento adverso sea trombocitopenia, anemia, leucopenia o neutropenia, el paciente puede monitorearse mediante
(a) la determinación del promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y la multiplicación del promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) la multiplicación de la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis; y (c) el cálculo de la suma del componente del telómero, el componente de dosis y el log del número de plaquetas inicial del sujeto para determinar el nadir de plaquetas predicho durante las primeras semanas de tratamiento; y (d) la determinación de la probabilidad esperada de trombocitopenia en el paciente a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
La divulgación que no forma parte de la invención proporciona procedimientos para determinar la susceptibilidad de los pacientes con cáncer a desarrollar toxicidades si se tratan con un fármaco inhibidor de la telomerasa. La invención requiere la medición de las longitudes de los telómeros en las células apropiadas del paciente antes de iniciar el tratamiento con el inhibidor de la telomerasa y la correlación de la medición de la longitud del telómero con la susceptibilidad a la trombocitopenia. En una realización, se proporciona un algoritmo para ayudar con la correlación.
La divulgación que no forma parte de la invención proporciona un procedimiento para monitorear un paciente en busca de un evento adverso relacionado con la terapia de inhibición de la telomerasa en el que el procedimiento comprende analizar una muestra biológica del paciente para determinar la longitud o la distribución de la longitud de los telómeros. El procedimiento puede comprender, además, la etapa de identificar la probabilidad de que un sujeto mamífero presente una reacción adversa al tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa.
La divulgación que no forma parte de la invención incluye un procedimiento para identificar la probabilidad de que un sujeto mamífero presente una reacción adversa a la terapia de inhibición de la telomerasa que comprende,
(a) determinar el promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y multiplicar el promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) multiplicar la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis;
(c) calcular la suma del componente del telómero, el componente de dosis y una constante; y
(d) determinar la probabilidad esperada de una reacción adversa en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
En un aspecto del procedimiento, el sujeto mamífero es un humano.
En un aspecto del procedimiento, la reacción adversa se selecciona entre trombocitopenia, anemia, leucopenia o neutropenia.
El procedimiento en el que la reacción adversa es trombocitopenia y la suma del componente del telómero, el componente de dosis y la constante determinan la disminución porcentual del número de plaquetas del sujeto mamífero a partir del número de plaquetas iniciales del sujeto antes del tratamiento. El procedimiento en el que la reacción adversa es cualquier grado de trombocitopenia. El procedimiento en el que la reacción adversa es trombocitopenia de grados 3 o 4.
En un aspecto del procedimiento, la muestra biológica son células sanguíneas obtenidas del sujeto mamífero. En un aspecto, las células sanguíneas son glóbulos blancos. El procedimiento en el que los glóbulos blancos se seleccionan de granulocitos o linfocitos. En un aspecto, las células sanguíneas son granulocitos. Los granulocitos se seleccionan de neutrófilos, basófilos o eosinófilos. En otro aspecto, las células sanguíneas son linfocitos. En otro aspecto, las células sanguíneas son monocitos o macrófagos.
En un aspecto del procedimiento, el sujeto mamífero se trata con el inhibidor de la telomerasa para tratar el cáncer. En un aspecto del procedimiento, el inhibidor de la telomerasa es un oligonucleótido. En un aspecto del procedimiento, el inhibidor de la telomerasa es el GRN163L.
En un aspecto del procedimiento, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cáncer de faringe, cáncer rectal, cáncer pancreático, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer del tracto urinario, cáncer de tiroides, cáncer renal, cáncer de piel, cáncer de cerebro, leucemia, mieloma y linfoma.
En un aspecto del procedimiento, el componente de longitud del telómero es un componente positivo cuando se calcula el cambio porcentual.
En un aspecto del procedimiento, el componente de dosis es un componente negativo cuando se calcula el cambio porcentual.
En un aspecto del procedimiento, el procedimiento comprende, además, la etapa de asignar al sujeto la probabilidad de tener una reacción adversa al tratamiento con un inhibidor de la telomerasa.
En un aspecto del procedimiento, las longitudes iniciales de los telómeros más cortas se asocian con un aumento del riesgo de una reacción adversa.
En un aspecto del procedimiento, el aumento de la dosis se asocia con un aumento del riesgo de una reacción adversa.
En un aspecto del procedimiento, la longitud inicial del telómero se determina mediante análisis FISH, análisis de transferencia de Southern, análisis de PCR o análisis STELA.
En un aspecto del procedimiento, la longitud inicial del telómero se determina mediante análisis FISH.
De acuerdo con otro aspecto de la presente divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para determinar la probabilidad de que un sujeto mamífero experimental trombocitopenia relacionada con la terapia de inhibición de la telomerasa en la que el procedimiento comprende,
(a) determinar el promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y multiplicar el promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) multiplicar la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis;
(c) calcular la suma del componente del telómero y el componente de dosis y el log del número de plaquetas inicial del sujeto para determinar el nadir de plaquetas predicho durante las primeras semanas de tratamiento; y (d) determinar la probabilidad esperada de trombocitopenia en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
De acuerdo con otro aspecto divulgación que no forma parte de la de la presente invención, se proporciona un procedimiento para identificar a un paciente que potencialmente requiere un nivel de dosis de inhibidor de la telomerasa por debajo del nivel de dosis máximo recomendado, en el que el procedimiento comprende
(a) determinar el promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y multiplicar el promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) multiplicar la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis;
(c) calcular la suma del componente del telómero y el componente de dosis y el log del número de plaquetas inicial del sujeto para determinar el nadir de plaquetas predicho durante las primeras semanas de tratamiento;
(d) determinar la probabilidad esperada de trombocitopenia en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa; y
(e) administrar una dosis reducida del inhibidor de la telomerasa o un régimen de dosificación reducido del inhibidor de la telomerasa.
De acuerdo con otro aspecto de la presente divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para identificar un sujeto mamífero que requiere que se administre un producto farmacéutico mejorador junto con un inhibidor de la telomerasa en el que el procedimiento comprende
(a) determinar el promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y multiplicar el promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) multiplicar la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis; y (c) calcular la suma del componente del telómero y el componente de dosis y el log del número de plaquetas inicial del sujeto para determinar el nadir de plaquetas predicho durante las primeras semanas de tratamiento; y (d) determinar la probabilidad esperada de trombocitopenia en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa
(e) administrar una dosis apropiada de un producto farmacéutico mejorador junto con el inhibidor de la telomerasa.
De acuerdo con otro aspecto de la divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para identificar a un sujeto mamífero en terapia de inhibición de la telomerasa que requiere monitorear los eventos adversos que comprende analizar una muestra biológica no cancerosa del sujeto mamífero para determinar la longitud del telómero antes de la terapia de inhibición de la telomerasa.
Preferentemente, el procedimiento comprende, además, monitorear el sujeto mamífero en busca de una reacción adversa relacionada con el tratamiento con el inhibidor de la telomerasa.
De acuerdo con otro aspecto de la divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un medio accesible por computadora que comprende una base de datos que incluye una pluralidad de registros, en el que cada registro asocia (a) información que identifica a un sujeto mamífero, con (b) información que indica si el sujeto tiene telómeros acortados y en el que cada registro asocia, además, (a) con (c) información que identifica la presencia o ausencia de un evento adverso en el sujeto resultante de la administración de un inhibidor de la telomerasa al sujeto.
De acuerdo con otro aspecto de la divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para la administración de GRN163L que comprende la administración de aproximadamente 1,6mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de GRN163L en el día 1 y aproximadamente en el día 8 de un ciclo de 21 días.
De acuerdo con otro aspecto de la divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para la administración de GRN163L que comprende la administración de aproximadamente 1,6 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de GRN163L en el día 1 y aproximadamente en el día 15 de un ciclo de 28 días.
De acuerdo con otro aspecto de la divulgación que no forma parte de la invención, se proporciona un procedimiento para la administración de GRN163L que comprende la administración de aproximadamente 1,6 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de GRN163L dos veces en la primera semana en un ciclo de 14 días.
Otros aspectos y ventajas de la divulgación que no forma parte de la invención se volverán completamente evidentes cuando la siguiente descripción detallada de la invención se lea junto con los dibujos adjuntos.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es un gráfico que muestra los niveles de plaquetas en el tiempo para pacientes individuales en las cohortes 1-3 del estudio. Las líneas horizontales discontinuas muestran los intervalos para los diferentes niveles de trombocitopenia. Los círculos en los puntos temporales indican que los pacientes recibieron una dosis de GRN163L y que se recolectaron las plaquetas.
La Figura 2 es un gráfico que muestra los niveles de plaquetas en el tiempo para pacientes individuales en la cohorte 4 del estudio. Las líneas horizontales discontinuas muestran los intervalos para los diferentes niveles de trombocitopenia. Los círculos en los puntos temporales indican que los pacientes recibieron una dosis de GRN163L y que se recolectaron las plaquetas.
La Figura 3 es un gráfico que muestra los niveles de plaquetas en el tiempo para pacientes individuales en la cohorte 5 del estudio. Las líneas horizontales discontinuas muestran los intervalos para los diferentes niveles de trombocitopenia. Los círculos en los puntos temporales indican que los pacientes recibieron una dosis de GRN163L y que se recolectaron las plaquetas.
La Figura 4 es un gráfico que muestra los niveles de plaquetas en el tiempo para pacientes individuales en la cohorte 6 del estudio. Las líneas horizontales discontinuas muestran los intervalos para los diferentes niveles de trombocitopenia. Los círculos en los puntos temporales indican que los pacientes recibieron una dosis de GRN163L y que se recolectaron las plaquetas.
La Figura 5 es un gráfico que muestra el cambio en los niveles de plaquetas en el nadir en la semana 5 frente a la longitud inicial de lostelómeros de los granulocitos en los pacientes del estudio. Los círculos indican los pacientes dosificados con 0,4, 0,8 y 1,5 mg/kg. Los triángulos indican los pacientes dosificados con 4,8 mg/kg.
La Figura 6 es un gráfico que muestra el cambio en la longitud inicial de los telómeros de los granulocitos en el nadir en la semana 5 frente al número de regímenes citotóxicos experimentados por los pacientes antes de la inscripción en este estudio.
La Figura 7 es un gráfico que muestra el cambio en la longitud de los telómeros en función de la edad.
Descripción detallada de la invención
Los expertos en la técnica apreciarán que la invención descrita en el presente documento se define únicamente por las reivindicaciones adjuntas y que otra divulgación que no forme parte de la invención es susceptible a variaciones y modificaciones distintas de las descritas específicamente, lo que incluye la adición de otros componentes de factores de riesgo que pueden ser relevantes para diferentes poblaciones de pacientes o combinaciones de la terapia de inhibición de la telomerasa con otros tratamientos. Debe entenderse que la divulgación que no forma parte de la invención incluye todas estas variaciones y modificaciones. La divulgación que no forma parte de la invención incluye, además, todas las etapas, características, composiciones y compuestos referidos o indicados en la memoria descriptiva, individual o colectivamente, y cualquiera y todas las combinaciones o cualquiera de dos o más de las etapas o características.
La presente divulgación que no forma parte de la invención no se limita en su ámbito por las realizaciones específicas descritas en el presente documento, las que se destinan para el propósito de ejemplificación solamente.
A. Definiciones
Los términos más abajo tienen los siguientes significados, a menos que se indique de cualquier otra manera. Un "sujeto mamífero", "sujeto" o "paciente" se refiere a un mamífero. Para los propósitos de la presente invención, mamíferos incluye humanos; mamíferos agrícolamente importantes, tales como ganado vacuno, caballos, ovejas; y/o mamíferos veterinarios, tales como gatos, conejos, roedores y perros. Un "paciente" significa un sujeto que recibe tratamiento médico o veterinario.
Una "dosis" significa la cantidad que se administra en un tiempo, tal como una cantidad específica de medicamento. Para GRN163L, la dosis inicial para adultos es de aproximadamente 0,8 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg; de aproximadamente 1,6 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg. La dosis para adultos de GRN163L es de aproximadamente 1,6 mg/kg; o aproximadamente 3,2 mg/kg; o aproximadamente 4,8 mg/kg; o aproximadamente 6,2 mg/kg; o aproximadamente 7,2 mg/kg; o aproximadamente 9 mg/kg; o aproximadamente 12 mg/kg; a aproximadamente 20 mg/kg. La dosis puede administrarse dos veces a la semana, una vez a la semana o a otras tasas de administración. Pueden requerirse dosis más altas para producir la remisión deseada en algunos pacientes. Las dosis pueden administrarse mediante una infusión de 2 - 24 horas, con mayor preferencia, mediante una infusión de 2 - 4 horas.
La expresión "longitud inicial del telómero" o "el promedio o la mediana de la longitud inicial del telómero" significa la longitud promedio o mediana de los telómeros del paciente en las células apropiadas antes o al mismo tiempo que el paciente recibe el primer tratamiento del inhibidor de la telomerasa.
La expresión "nadir de plaquetas durante las primeras semanas de tratamiento" significa el número de plaquetas presentes en la sangre del paciente o de sujetos en el punto más bajo en las primeras semanas después del tratamiento. Las primeras semanas de tratamiento significan en semanas 1-12 de tratamiento, preferentemente, 1-8 de tratamiento, preferentemente, 1-6 de tratamiento, preferentemente, 1-4 de tratamiento.
"Evento adverso" o "reacción adversa" significa el desarrollo de una condición médica indeseable o el deterioro de una condición médica preexistente después o durante la exposición a un producto farmacéutico. Puede seleccionarse una reacción adversa entre trombocitopenia, anemia, leucopenia o neutropenia. Cuando la reacción adversa es trombocitopenia y la suma del componente del telómero y el componente de dosis y una constante determina la disminución en el porcentaje del conteo de plaquetas del sujeto mamífero a partir del conteo de plaquetas del sujeto antes del tratamiento. Cuando la reacción adversa es trombocitopenia, la reacción adversa puede ser cualquier grado de trombocitopenia. La reacción adversa puede ser trombocitopenia de grados 3 o 4.
La trombocitopenia se ha clasificado en diferentes grados en dependencia del número de plaquetas en la sangre del sujeto mamífero.
Figure imgf000007_0001
El término "neutropenia" significa la presencia de cantidades anormalmente pequeñas de neutrófilos en la sangre.
El término "leucopenia" significa un número anormalmente bajo de glóbulos blancos en la sangre.
El término "anemia" significa una deficiencia en el componente de la sangre que transporta el oxígeno, medido en concentraciones de volumen unitario de hemoglobina, volumen de glóbulos rojos o número de glóbulos rojos.
La expresión "número de plaquetas inicial" significa el número de plaquetas por microlitro de sangre del sujeto mamífero antes del tratamiento con el inhibidor de la telomerasa.
"Relación beneficio-riesgo" significa la relación entre los riesgos y beneficios de un tratamiento o procedimiento dado. Un riesgo aceptable se relaciona con el potencial de experimentar una enfermedad o lesión que se tolerara por un individuo a cambio de los beneficios de usar una sustancia o procedimiento que provocara tal enfermedad o lesión. La aceptabilidad del riesgo depende de datos científicos, factores sociales y económicos, y de los beneficios percibidos que surgen de una sustancia química o fármaco que crea el(los) riesgo(s) en cuestión.
Una "muestra biológica" es una muestra de sangre o muestra de tejido del sujeto mamífero. En un aspecto, la muestra biológica es sangre que contiene glóbulos blancos. En un aspecto, los glóbulos blancos son granulocitos. Los granulocitos son uno o más de neutrófilos, basófilos o eosinófilos. En otro aspecto, los glóbulos blancos son uno o más de linfocitos, monocitos o macrófagos. Preferentemente, las células son células no cancerosas o normales.
Un "inhibidor de la telomerasa" es un compuesto que inhibe o bloquea directa o indirectamente la expresión o actividad de la telomerasa. Un inhibidor de la telomerasa se dice que inhibe o bloquea la telomerasa si la actividad de la telomerasa en presencia del compuesto es menor que la observada en ausencia del compuesto. Preferentemente, la telomerasa es telomerasa humana. Preferentemente, el inhibidor de la telomerasa es un inhibidor del sitio activo. Con mayor preferencia, el inhibidor de la telomerasa es un antagonista de la plantilla de hTR.
Un "polinucleótido" u "oligonucleótido" se refiere a un polímero u oligómero de subunidad de ribosa y/o desoxirribosa nucleósido que tiene de aproximadamente 2 a aproximadamente 200 subunidades contiguas, de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 subunidades contiguas, de aproximadamente 10 a aproximadamente 15 subunidades. Las subunidades de nucleósidos pueden unirse mediante una variedad de enlaces entre subunidades, lo que incluye, pero no se limita a, enlaces fosfodiéster, fosfotriéster, metilfosfonato, fosforamidato P3'^N5', tiofosforamidato N3'^P5', tiofosforamidato N3'^'P5' y fosforotioato. El término también incluye los polímeros u oligómeros que tienen modificaciones, conocidas por un experto en la técnica, en el azúcar (por ejemplo, sustituciones 2'), la base (ver la definición de "nucleósido" más abajo) y los extremos terminales 3' y 5'. En realizaciones donde el resto oligonucleótido incluye una pluralidad de enlaces entre subunidades, cada enlace puede formarse mediante el uso de la misma química, o puede usarse una mezcla de químicas de enlace. Cuando un oligonucleótido se representa mediante una secuencia de letras, tales como "ATGUCCTG", se entenderá que los nucleótidos están en el orden 5 '^3 ' de izquierda a derecha. La representación de la secuencia de bases del oligonucleótido de esta manera no implica el uso de ningún tipo particular de subunidad internucleosídica o de modificaciones en el componente base o en cualquier otra parte del oligonucleótido.
El término "nucleósido" incluye los nucleósidos naturales, lo que incluye las formas 2'-desoxi y 2'-hidroxilo, por ejemplo, como se describe en Komberg y Baker, DNA Replication, 2a Ed. (Freeman, San Francisco, 1992) y los análogos. Los "análogos", en referencia a los nucleósidos, incluyen nucleósidos sintéticos que tienen restos de nucleobase modificados (ver la definición de "nucleobase" más abajo) y/o restos de azúcar modificados, por ejemplo, los descritos generalmente por Scheit, Nucleotide Analogs (John Wiley, Nueva York, 1980)). Tales análogos incluyen nucleósidos sintéticos diseñados para mejorar las propiedades de unión, por ejemplo, estabilidad, especificidad o similares, tal como los desvelados por Uhlmann y Peyman (Chemical Reviews 90:543-584, 1990). Un oligonucleótido que contiene tales nucleósidos, y que contiene típicamente enlaces internucleosídicos sintéticos resistentes a nucleasas, puede denominarse en sí mismo como un "análogo".
Una "nucleobase" incluye (i) nucleobases de ADN y ARN nativas (uracilo, timina, adenina, guanina y citosina), (ii) nucleobases modificadas o análogos de nucleobase (por ejemplo, 5-metilcitosina, 5-bromouracilo o inosina) y (iii) análogos de nucleobases. Un análogo de nucleobase es un compuesto cuya estructura molecular imita la de una base de ADN o ARN típica.
Un oligonucleótido que tiene "enlaces resistentes a nucleasas" se refiere a uno cuya cadena principal tiene enlaces de subunidades que son sustancialmente resistentes a la escisión por nucleasas, en forma no hibridada o hibridada, por nucleasas extracelulares e intracelulares comunes en el cuerpo; es decir, el oligonucleótido muestra poca o ninguna escisión por nucleasa en condiciones normales de nucleasa en el cuerpo al que se expone el oligonucleótido. Los enlaces fosforamidato N 3'^P5' (NP) o tiofosforamidato N 3'^P5' (NPS) descritos más abajo son resistentes a las nucleasas.
El término "lípido" se usa ampliamente en el presente documento para abarcar sustancias que son solubles en solventes orgánicos, pero escasamente solubles, si acaso, en agua. El término lípido incluye, pero no se limita a, hidrocarburos, aceites, grasas (tales como ácidos grasos y glicéridos), esteroles, esteroides y formas derivadas de estos compuestos. Los lípidos preferidos son los ácidos grasos y sus derivados, los hidrocarburos y sus derivados, y los esteroles, tales como el colesterol.
Los ácidos grasos contienen generalmente números pares de átomos de carbono en una cadena lineal (comúnmente 12-24 carbonos) y pueden ser saturados o insaturados, y pueden contener, o modificarse para contener, una variedad de grupos sustituyentes. Por simplicidad, la expresión "ácido graso" también abarca derivados de ácidos grasos, tales como grasas o ésteres.
El término "hidrocarburo" abarca compuestos que consisten únicamente en hidrógeno y carbono, unidos por enlaces covalentes. El término abarca los hidrocarburos de cadena abierta (alifáticos), lo que incluye los hidrocarburos de cadena lineal y ramificada, y los saturados, así como también los hidrocarburos mono y poliinsaturados. El término también abarca hidrocarburos que contienen uno o más anillos aromáticos.
Como se usa en el presente documento, el término "lípido" también incluye compuestos anfipáticos que contienen tanto restos lipídicos como hidrofílicos.
El término "tumor", como se usa en el presente documento, se refiere a todo crecimiento y proliferación de células neoplásicas, ya sean malignas o benignas, y a todas las células y tejidos precancerosos y cancerosos.
Un "producto farmacéutico mejorador" es un producto farmacéutico que puede disminuir o eliminar el riesgo de desarrollar la reacción adversa. Por ejemplo, el Oprelvekin (NEUMEGA™, Wyeth) se aprobó para la prevención de trombocitopenia grave después de la quimioterapia mielosupresora en pacientes adultos con neoplasias malignas no mieloides. Otro fármaco, Romiplostin (NPLATE™, Amgen Inc.) se ha aprobado para el tratamiento de la púrpura trombocitopénica idiopática crónica (ITP).
Un "cáncer" puede ser un tumor maligno. Al menos el 80 % de todos los cánceres son carcinomas, e incluyen, pero no se limitan a, cáncer de mama, tanto carcinomas ductales como lobulares de la mama; cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cáncer de faringe, cáncer rectal, cáncer pancreático, cáncer cervical, cáncer de ovario; cáncer de hígado (o que incluye el carcinoma hepatocelular), cáncer de vejiga, cáncer del tracto urinario, cáncer de tiroides, cáncer renal, cáncer de piel (lo que incluye el carcinoma de células basales, el cáncer de piel distinto de melanoma más común y el carcinoma de células escamosas, una forma común de cáncer de piel) y cáncer de cerebro. Las células cancerosas que forman un carcinoma se denominan "células de carcinoma". También se incluyen en el término "cáncer" los cánceres de las células sanguíneas tales como leucemias, linfomas y mielomas y los cánceres de otros tipos de tejidos tales como sarcomas, mesoteliomas, gliomas, melanoma, neuroblastoma, etcétera.
En el presente documento se usa un "pronóstico" para referirse a la predicción de la probabilidad de una reacción adversa al tratamiento con un inhibidor de la telomerasa. El término "predicción" se usa en el presente documento para referirse a la probabilidad de que un paciente o sujeto mamífero responda ya sea de manera favorable o desfavorable a un fármaco o un conjunto de fármacos, y también al grado de esas respuestas. La expresión "terapia adyuvante" se usa generalmente para referirse al tratamiento que se administra adicionalmente a un tratamiento primario (inicial). En el tratamiento del cáncer, la expresión "terapia adyuvante" se usa para referirse a la quimioterapia, la terapia hormonal y/o la radioterapia después de la extirpación quirúrgica del tumor, con el objetivo principal de reducir el riesgo de recurrencia del cáncer.
B. Descripción detallada
La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique de cualquier otra manera, técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, biología celular y bioquímica, que están dentro de la experiencia de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura, tales como "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edición (Sambrook y col., 1989); Oligonucleotide Synthesis: A practical Approach (ed M.J. Gait, 1984); "Current Protocols in Molecular Biology" (F.M. Ausubel y col., eds. 1987) y "PCR: The Polymerase Chain Reaction" (Mullís y col., eds., 1994).
La presente divulgación proporciona un algoritmo para determinar la probabilidad de una reacción adversa al tratamiento con un inhibidor de la telomerasa. El procedimiento es basándose en la identificación de (1) el promedio o la mediana de la longitud de los telómeros en unas células de un paciente y la dosis del inhibidor de la telomerasa recibida puede servir para determinar la probabilidad de que el paciente experimente una reacción adversa a la terapia con el inhibidor de la telomerasa, (2) ciertos pesos asignados al promedio o la mediana de la longitud de los telómeros y a la dosis reflejan su valor en predecir la respuesta a la terapia y se usan en una fórmula; y (3) la determinación de los valores umbrales usados para dividir a los pacientes en grupos con diversos grados de riesgo de desarrollar una reacción adversa, tales como grupos de bajo, mediano y alto riesgo o grupos en los que la probabilidad de una reacción adversa a los inhibidores de la telomerasa es baja, media o alta. El algoritmo produce una puntuación numérica que puede usarse para tomar decisiones de tratamiento relacionadas con la terapia de pacientes con cáncer.
1. Técnicas para la determinación de la longitud del telómero.
Se dispone de diversos procedimientos para medir la longitud de las repeticiones de telómeros en células. Generalmente, las células cuyos telómeros se medirán se aíslan a partir de la muestra biológica del paciente. El ADN se aísla de las células mediante procedimientos que se conocen en la técnica, tales como, por ejemplo, protocolos de proteinasa K, ARNasa A y fenol/cloroformo (Sambrook y col. Molecular Cloning: a Laboratory Manual 2a ed. (1989) o el uso de kits de purificación de ADN disponibles comercialmente.
A. Análisis de transferencia de Southern
Un procedimiento para el análisis de las longitudes de los telómeros es medir la longitud del fragmento de restricción terminal (TRF) mediante análisis de transferencia de Southern. En este procedimiento, el ADN celular se digiere con las enzimas de restricción, tales como Hinfl y Rsal, y se procesa en geles de agarosa para transferencia a filtros Nytran. Los filtros se hibridan con una sonda específica de telómero tal como (TTAGGG)3. Las autorradiografías se generan sin pantalla intensificadora mediante el uso del intervalo de respuesta lineal de la película y se exploran con un densitómetro. La salida se digitaliza. La longitud media del telómero se define como I(0D¡)/I(0D /L¡) donde ODi es la salida del densitómetro (unidades arbitrarias) y Li es la longitud del ADN en la posición i. Las sumas se calculan a lo largo del intervalo de 3-17 KB. Este calculo asume que el ADN se transfiere con la misma eficiencia desde todos los puntos en el gel y que el número de secuencias objetivo (repeticiones de telómeros) por fragmento de ADN es proporcional a la longitud del ADN. La señal desde los geles puede normalizarse con respecto a la señal de otras transferencias de Southern mediante el uso de una sonda control para estimar la cantidad total de ADN telomérico, así como también su longitud. (Harley y col., Nature 345:458-460 (1990), Englehardty col., Leukemia 12:13-24 (1998)). Este procedimiento también proporciona la distribución del tamaño de las longitudes de los telómeros en la población celular a partir de la que se aisló el ADN. Dado que los telómeros cortos son particularmente susceptibles a la disfunción de los telómeros, las modificaciones a la presente invención podrían incluir cálculos basándose en la media o la mediana de la longitud del telómero de los telómeros cortos (por ejemplo, para el cuartil más corto de los telómeros).
B. Reacción en cadena de la polimerasa
Se han desarrollado procedimientos de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para medir el promedio y las longitudes de telómeros específicos en cromosomas. El primer procedimiento proporciona una medida de ADN telomérico con relación al a Dn genómico (típicamente un gen de copia única) como un valor de relación único de una muestra de ADN genómico (Cawthon RM, Nucl. Acids Res. Vol. 30, pág. E47).
En el análisis de longitud de telómero único (STELA) se determinan las longitudes de los telómeros de cromosomas individuales (Baird y col., Nature Genetics 33 203-207 (2003)). En este procedimiento, el ADN se digiere con una enzima de restricción tal como EcoRI y se cuantifica mediante fluorometría Hoechst. Un enlazador o "telorette" comprende varias bases complementarias a la región monocatenaria TTAGGG del cromosoma, precedida en el extremo 5' por unos 20 nucleótidos de una secuencia de ADN única. Este telorette se hibrida al saliente TTAGGG al final del telómero y se liga al extremo 5' de la cadena complementaria rica en C del cromosoma. Esto etiqueta eficazmente el extremo del telómero con una cola de telorette que tiene una secuencia única capaz de unirse a uno de los cebadores de PCR. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se realiza mediante el uso de un cebador ('teltail") que es complementario a la cola del telorette, junto con un cebador que corresponde a la región cromosómica adyacente al telómero. El cebador correspondiente a la región cromosómica adyacente al telómero también puede hacerse específico para el cromosoma al explotar los polimorfismos cromosómicos. Después de la PCR. Los fragmentos de ADN se resuelven con electroforesis en gel de agarosa y se detectan mediante hibridación por transferencia de Southern con una sonda adyacente al telómero cebado aleatoriamente. El tamaño de los fragmentos hibridados puede determinarse a partir de estándares de tamaño en el gel y usarse para calcular la longitud de los telómeros individuales. Este procedimiento proporciona, además, la distribución del tamaño de los telómeros del cromosoma específico tomado como objetivo en la población celular de la que se aisló el ADN. Dado que la PCR sesga la amplificación de fragmentos cortos de ADN, el análisis STELA es particularmente útil para el análisis de los telómeros más cortos en una célula. Esto tiene aplicación en la presente invención como se describió anteriormente.
C. Citometría de flujo y análisis de FISH
El promedio o la mediana de la longitud de las repeticiones de telómeros en las células también puede determinarse mediante el uso de hibridación fluorescente in situ (FISH) con sondas de ácido nucleico peptídico (PNA) marcado específicas para repeticiones de telómeros en combinación con mediciones de fluorescencia mediante citometría de flujo (Flow FlSH). (Ver Baerlochery col., Nature Protocols vol. 12365-2376 (2006)). La ventaja de Flow FISH es que proporciona información de múltiples parámetros sobre la longitud de las repeticiones de telómeros en miles de células individuales. El Flow FISH multicolor automatizado es uno de los procedimientos más rápidos y sensibles disponibles para medir el promedio o la mediana de la longitud de los telómeros en granulocitos, células T vírgenes, células T de memoria, células B y células asesinas naturales (NK) en sangre humana. (Baerlocher y Lansdorp, Methods in Cell boil. 75, 719-750 (2004). En el Flow FISH se centrifuga la sangre completa, se lisan los glóbulos rojos y se separa el lisado de glóbulos rojos del sedimento celular que consiste en granulocitos, monocitos, linfocitos, plaquetas y cualquier resto de glóbulos rojos. El sedimento de glóbulos blancos se resuspende en un tampón de hibridación y se cuenta. Las células sanguíneas humanas nucleadas se mezclan con timocitos bovinos, que se incluyen como control interno, ya que estas células se obtienen fácilmente y debido a que la longitud de los telómeros en los timocitos bovinos es aproximadamente 2-3 veces más larga de lo que miden normalmente en las células humanas. En consecuencia, estas células de control se distinguen fácilmente de las células de prueba humanas y proporcionan un punto de referencia para las mediciones por fluorescencia de los telómeros. La mezcla de células humanas y timocitos bovinos se hibrida con la sonda de PNA (ácido nucleico peptídico) marcado con Cy5 o fluoresceína que es complementaria a la secuencia de repetición de telómeros. Una segunda mezcla de las células no se hibrida con la sonda. Esto ultimo se requiere para medir el nivel de autofluorescencia en las células de interés y para permitir que se calcule la longitud de los telómeros a partir de la hibridación con el PNA específico. La sonda de PNA con fluorescencia o Cy5 esta disponible comercialmente. Después de la hibridación, las células sedimentan y el sedimento celular se lava. Las células pueden contrateñirse con concentraciones no saturantes de un colorante de ADN y diversos anticuerpos. Las muestras de células se analizaron en un citómetro de flujo.
La primera etapa en el análisis posterior es identificar las células mediante el uso de dispersión de luz frontal y lateral en un gráfico de puntos bivariado. Pueden observarse tres poblaciones celulares. Los timocitos bovinos pueden distinguirse de los linfocitos humanos, que a su vez pueden distinguirse de los granulocitos. Al combinar la fluorescencia en los gráficos de contorno, pueden obtenerse histogramas de fluorescencia de las diferentes poblaciones celulares, que se usan para los cálculos posteriores de la longitud de los telómeros. Pueden usarse anticuerpos específicos para las células CD45RA y CD20 para realizar el análisis de la longitud de los telómeros de poblaciones específicas dentro de la población de linfocitos. La longitud promedio de los telómeros puede determinarse al restar la fluorescencia de las poblaciones de glóbulos blancos sin teñir del nivel de fluorescencia de las células teñidas con PNA. Este procedimiento recolecta una señal de telómero promedio de cada célula individual, por lo tanto, puede obtenerse la distribución del tamaño de los telómeros de la población general, y podría analizarse el subconjunto de células con telómeros cortos. Esto tiene aplicación en la presente invención como se describió anteriormente.
2. Algoritmo para predecir los niveles de plaquetas, o los cambios después de la terapia de inhibición de la telomerasa y para generar la probabilidad de reacción adversa
Un aspecto desvelado es el uso de la longitud promedio de los telómeros medida en las células del paciente para proporcionar información con respecto a la probabilidad de una reacción adversa a un inhibidor de la telomerasa antes de la administración de un inhibidor de la telomerasa.
En la siguiente etapa, la longitud promedio de los telómeros medida se multiplica por un coeficiente que refleja su contribución relativa al riesgo de reacción adversa al tratamiento con un inhibidor de la telomerasa para determinar el componente de longitud del telómero.
La siguiente etapa es tomar la dosis prevista del inhibidor de la telomerasa y multiplicar la dosis por un coeficiente que refleja su contribución relativa al riesgo de reacción adversa al tratamiento con un inhibidor de la telomerasa para determinar el componente de dosis. El componente de longitud del telómero y el componente de dosis se suman con un factor de intercepto para determinar la probabilidad de la reacción adversa.
Por ejemplo, la ecuación para describir el número predicho de plaquetas en el nadir de plaquetas en un paciente después de 4 semanas completas de tratamiento es la siguiente:
Número predicho de plaquetas = número de plaquetas iniciales - (número de plaquetas iniciales x % de cambio en las plaquetas/100).
% de cambio en número de plaquetas = (-73,8) - 6,6 x dosis del inhibidor (mg/kg) 11,2 x longitud promedio de los telómeros (kpb)
La ecuación para describir el número predicho de plaquetas en el nadir de plaquetas en un paciente durante las primeras 4 semanas de tratamiento es la siguiente:
Número predicho de plaquetas = £ K'°’38>' ° ’13 x dosis de inhibidor <m9/k9> ° ’25 x lon9itud Promedio de los telómeros (kpb) 0,80 x log del número de plaquetas iniciales]
Los intervalos de predicción pueden calcularse, por ejemplo, para predecir un probable cambio porcentual en los niveles de plaquetas o el nadir de plaquetas para pacientes o sujetos con un conjunto particular de valores iniciales y de tratamiento, por ejemplo, longitud de los telómeros, plaquetas basales y nivel de dosis. La ecuación de regresión proporciona el valor esperado para un futuro individuo con covariantes especificas (J. Neter y col. Applied linear statistical models: regression, analysis of variance, and experimental designs, 3a edición pág. 81-83 (1990)). Sin embargo, debido al error de distribución del muestreo, así como también a la variabilidad entre individuos, un paciente puede tener niveles de plaquetas que se encuentran por encima o por debajo de ese valor predicho. Puede crearse una serie de intervalos de predicción con una cobertura decreciente. Por ejemplo, puede crearse un intervalo de predicción del 99 % con límites superiores e inferiores Pu99 y Pl99 y en promedio, contendría el 99 % de los niveles de plaquetas observados en los pacientes. Puede crearse un intervalo de predicción del 90 % con límites superiores e inferiores Pu90 (< Pu99) y Pl90 (> Pl99) y en promedio, contendría el 90 % de los niveles futuros de plaquetas observados. Esto permite determinar la probabilidad de que el paciente desarrolle una trombocitopenia de grado 3 o 4.
La probabilidad de riesgo de una reacción adversa, según se determina mediante el algoritmo de la presente invención, proporciona herramientas valiosas para que el médico en ejercicio tome decisiones fundamentales de tratamiento. De esta forma, si el riesgo de un paciente en particular es bajo, el médico podría decidir que después de la extirpación quirúrgica del cáncer, el paciente puede tratarse agresivamente con altas dosis y alta frecuencia de administración del inhibidor de la telomerasa. Si, por otro lado, se determina que el nivel de riesgo es alto, esta información puede usarse para decidir el nivel de dosis del inhibidor de la telomerasa a administrar, el régimen de dosificación a usar, lo que incluye el uso de semanas sin administrar dosis, llamadas semanas de "descanso". El médico puede decidir monitorear el paciente más estrechamente para detectar reacciones adversas, tales como trombocitopenia. El médico puede decidir administrar un producto farmacéutico mejorador simultáneamente con el inhibidor de la telomerasa. Si el riesgo del paciente de sufrir una reacción adversa es alto, pueden usarse otras modalidades de tratamiento para combatir el cáncer en ese paciente en particular. Otras modalidades de tratamiento para un cáncer en particular incluyen, por ejemplo, otras quimioterapias tales como tratamientos basados en antraciclina y/o taxanos, inhibidores de h Er , inhibidores de EGFR y/u otras opciones de tratamiento, tales como solo radioterapia, antes o después de la quimioterapia.
3. Inhibidores de la telomerasa y tratamiento del cáncer con un inhibidor de la telomerasa
La telomerasa es una ribonucleoproteína que cataliza la adición de secuencias de repetición teloméricas (que tienen la secuencia 5-TTAGGG-3' en humanos) a los extremos cromosómicos. Se ha demostrado que una variedad de células cancerosas son positivas a la telomerasa, lo que incluye las células de cáncer de piel, tejido conectivo, adiposo, mama, pulmón, estomago, páncreas, ovario, cuello uterino, útero, riñón, vejiga, colon, próstata, sistema nervioso central (SNC), retina y tumores hematológicos (tales como mieloma, leucemia y linfoma). El direccionamiento de la telomerasa puede ser eficaz al proporcionar tratamientos que discriminan en gran medida entre las células malignas y las normales, lo que evita muchos de los efectos secundarios nocivos que pueden acompañar a los regímenes quimioterapéuticos que se dirigen indiscriminadamente a las células en división.
Los inhibidores de la telomerasa identificados hasta la fecha incluyen oligonucleótidos, preferentemente, oligonucleótidos que tienen enlaces resistentes a nucleasas, así como también compuestos de moléculas pequeñas.
A. Compuestos de Moléculas Pequeñas
Los inhibidores de moléculas pequeñas de la telomerasa incluyen, por ejemplo, BRACO19 ((9-(4-(N,N-dimetilamino)fenilamino)-3,6-bis(3-pirrolodino propionamido)acridina (ver Mol. Pharmacol. 61(5):1154-62, 2002); DODC (dietiloxadicarbocianina) y telomestatina. Estos compuestos pueden actuar como estabilizadores G-quad, que promueven la formación de una configuración G-quad inactiva en el componente de ARN de la telomerasa. Otros inhibidores de molécula pequeña de la telomerasa incluyen BIBR1532 (ácido 2-[(E)-3-naften-2-il but-2-enoilamino]benzoico) (ver Ward y Autexier, Mol. Pharmacol. 68:779-786, 2005; además, J. Biol. Chem. 277(18):15566-72, 2002); AZT y otros análogos de nucleósidos, tales como ddG y ara-G (ver, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos núm. 5.695.932 y 6.368.789) y ciertos derivados de tiopiridina, benzo[b]tiofeno y pirido[b]tiofeno, descritos por Gaeta y col. en las patentes de Estados Unidos núm. 5.767.278, 5.770.613, 5.863.936, 5.656.638 y 5.760.062. Un ejemplo es la 3-clorobenzo[b]tiofeno-2-carboxi-2'-[(2,5- diclorofenilamino)tia]hidrazina, descrito en la patente de Estados Unidos núm. 5.760.062.
B. Inhibidores de la Telomerasa basados en oligonucleótidos: Secuencia y composición
Los genes que codifican tanto los componentes de proteína como de ARN de la telomerasa humana se han clonado y secuenciado (ver las patentes de Estados Unidos Núm. 6.261.836 y 5.583.016, respectivamente). Los oligonucleótidos pueden dirigirse contra el ARNm que codifica el componente de proteína de la telomerasa (cuya forma humana se conoce como transcriptasa inversa de la telomerasa humana, o hTERT) o el componente de ARN de la holoenzima de la telomerasa (cuya forma humana se conoce como ARN telomerasa humana, o hTR). patentes de Estados Unidos núm. 5.583.016; 5.776.679; 5.837.857.
La secuencia plantilla del componente de ARN de la telomerasa se ubica dentro de la región definida por los nucleótidos 46-56 (5'-CUAACCCUAAC-3‘) (SEQ ID NO: 1), que es complementaria a una secuencia telomérica compuesta de aproximadamente uno y dos tercios de unidades de repetición teloméricas. La región plantilla funciona para especificar la secuencia de las repeticiones teloméricas que la telomerasa añade a los extremos del cromosoma y es esencial para la actividad de la enzima telomerasa (ver, por ejemplo, Chen y col., Cell 100:503514, 2000; Kim y col., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU. 98 (14):7982-7987, 2001). El diseño de agentes antisentido, ribozima o Ar N interferente pequeño (ARNip) para inhibir o provocar la destrucción de los ARNm se conoce bien (ver, por ejemplo, Lebedeva, I, y col. Annual Review of Pharmacology and Toxicology, vol. 41: 403-419, abril de 2001; Macejak, D, y col., Journal of Virology, vol. 73 (9): 7745-7751, septiembre de 1999 y Zeng, Y. y col., PNAS vol. 100 (17) pág. 9779-9784, 19 de agosto de 2003) y tales agentes pueden diseñarse para dirigirse el ARNm de la hTERT y de esta manera, inhibir la producción de proteína hTERT en una célula objetivo, tal como una célula cancerosa (ver, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos núm. 6.444.650 y 6.331.399).
Los oligonucleótidos que se dirigen a la hTR (es decir, el componente de ARN de la enzima) actúan como inhibidores de la actividad de la enzima telomerasa al bloquear o interferir de cualquier otra manera con la interacción de la hTR con la proteína hTERT, cuya interacción es necesaria para la función de la telomerasa. Ver, por ejemplo, Villeponteau y col., patente de los Estados Unidos núm. 6.548.298.
Una región objetivo preferida de hTR es la región plantilla, que abarca los nucleótidos 30-67 del componente de ARN de la telomerasa humana. Los oligonucleótidos que se dirigen a esta región se denominan en el presente documento "inhibidores de la plantilla de hTR" (ver por ejemplo Herbert y col., Oncogene 21(4):638-42 (2002).) Preferentemente, tal oligonucleótido incluye una secuencia que es complementaria o casi complementaria a alguna porción de la región de 11 nucleótidos que tiene la secuencia 5'-CUAACCCUAAC-3' (SEQ ID NO: 1), que abarca los nucleótidos 46-56 del componente de ARN de la telomerasa humana (hTR).
Otra región objetivo preferida es la región que abarca los nucleótidos 137-179 de la telomerasa humana (hTR) (ver Pruzan y col., Nucl. Acids Research, 30:559-568, 2002). Dentro de esta región, la secuencia que abarca 141-153 es un objetivo preferido. La Publicación PCT WO 98/28442 describe el uso de oligonucleótidos de al menos 7 nucleótidos de longitud para inhibir la telomerasa, donde los oligonucleótidos se diseñan para ser complementarios a las porciones accesibles de la secuencia de hTR fuera de la región plantilla, lo que incluye los nucleótidos 137-196, 290-319 y 350­ 380 de la hTR.
La región del oligonucleótido terapéutico que se dirige a la secuencia de hTR es, preferentemente, exactamente complementaria a la secuencia de hTR correspondiente. Si bien pueden tolerarse errores de apareamiento en ciertos casos, se espera que disminuyan la especificidad y la actividad del conjugado oligonucleotídico resultante. En realizaciones particulares, la secuencia de bases del oligonucleótido se selecciona por lo tanto para incluir una secuencia de al menos 5 nucleótidos exactamente complementarios al objetivo de hTR, y puede obtenerse una inhibición de la telomerasa mejorada si se emplean longitudes crecientes de secuencia complementaria, tales como al menos 8, al menos 10, al menos 12, al menos 13 o al menos 15 nucleótidos exactamente complementarios al objetivo hTR. En otras realizaciones, la secuencia del oligonucleótido incluye una secuencia de al menos 5 a 20, de al menos 8 a 20, de al menos 10 a 20 o de al menos 10 a 15 nucleótidos exactamente complementarios a la secuencia objetivo de la hTR.
Puede obtenerse una actividad inhibidora de la telomerasa optima cuando se selecciona la longitud completa del oligonucleótido para que sea complementaria a la secuencia objetivo de la hTR. Sin embargo, no es necesario que la longitud completa del oligonucleótido sea exactamente complementaria a la secuencia objetivo, y la secuencia de oligonucleótidos puede incluir regiones que no son complementarias a la secuencia objetivo. Tales regiones pueden añadirse, por ejemplo, para conferir otras propiedades al compuesto, tales como secuencias que facilitan la purificación. Alternativamente, un oligonucleótido puede incluir múltiples repeticiones de una secuencia complementaria a una secuencia objetivo de la hTR.
El procedimiento incluye administrar al sujeto un inhibidor de la telomerasa de oligonucleótidos del tipo compuesto por un oligonucleótido que tiene enlaces entre subunidades resistentes a nucleasas y una secuencia de oligonucleótidos eficaz para unirse mediante hibridación específica de secuencia a una región plantilla de la hTR. Preferentemente, la cantidad del inhibidor de la telomerasa es eficaz para inhibir la proliferación de células cancerosas en el sujeto cuando solo se administra el inhibidor de la telomerasa.
El oligonucleótido puede tener 10-20 bases de longitud. Preferentemente, el oligonucleótido tiene una longitud de 13­ 20 bases e incluye la secuencia (5'-TAGGGTTAGACAA-3') (SEQ ID NO: 2). Un inhibidor de la telomerasa ilustrativo es el compuesto identificado como GRN163L, o un análogo de este. Este compuesto tiene (i) enlaces internucleósidos de tiofosforamidato N3'^P5'; (ii) la secuencia 5'-TAGGGTTAGACAA-3' (SEQ Id NO: 2); y (iii) un resto palmitoilo (C16) unido al extremo 5' del oligonucleótido a través de un enlazador de glicerol o aminoglicerol.
Los enlaces internucleósidos en el oligonucleótido pueden incluir cualquiera de las químicas de oligonucleótidos disponibles, por ejemplo, fosfodiéster, fosfotriéster, metilfosfonato, fosforamidato P3'^N5', fosforamidato N3'^P5', tiofosforamidato N 3'^P5' y fosforotioato. Típicamente, pero no necesariamente, todos los enlaces internucleósidos dentro del oligonucleótido serán del mismo tipo, aunque el componente oligonucleótido puede sintetizarse mediante el uso de una mezcla de enlaces diferentes.
En realizaciones preferentes, el oligonucleótido tiene al menos un enlace fosforamidato N 3'^P5' (NP) o tiofosforamidato N3'^P5' (NPS), cuyo enlace puede representarse mediante la estructura: 3'-(-NH-P(=O)(-XR)-O-)-5', en el que X es O o S y R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo y arilo; y sales farmacéuticamente aceptables de estos, cuando XR es OH o SH. Con mayor preferencia, el oligonucleótido incluye todos los enlaces NP o, con la máxima preferencia, todos los NPS.
Una secuencia particularmente preferida para un oligonucleótido inhibidor de plantilla de hTR es la secuencia complementaria a los nucleótidos 42-54 de la hTR. El oligonucleótido que tiene esta secuencia (TAGGGTTAGACAA) (SEQ ID NO: 2) y enlaces de tiofosforamidato N 3'^P5' (NPS) se designa en el presente documento como GRN163. Ver, por ejemplo, Asai y col., Cancer Research 63:3931-3939 (2003); Gryaznovy col., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 22(5-8):577-81 (2003).
Estos compuestos pueden prepararse como se describe, por ejemplo, en McCurdy y col., Tetrahedron Letters 38:207-210 (1997) o Pongracz y Gryaznov, Tetrahedron Letters 49:7661-7664 (1999). Los monómeros de 3'-amino nucleósidos de partida pueden prepararse como se describe en Nelson y col., J. Org. Chem. 62:7278-7287 (1997) o mediante los procedimientos descritos en Gryaznov y col., Publicación de Solicitud de Estados Unidos Núm.
2006/0009636.
Puede usarse una variedad de enfoques sintéticos para conjugar un resto lipídico L con el oligonucleótido, en dependencia de la naturaleza del enlace seleccionado; ver, por ejemplo, Mishra y col., Biochim. Et Biophys. Acta 1264:229-237 (1995), Shea y col., Nucleic Acids Res. 18:3777-3783 (1995) o Rump y col., Bioconj. Chem. 9:341349 (1995). Típicamente, la conjugación se logra mediante el uso de grupos funcionales adecuados en un extremo terminal del oligonucleótido. Por ejemplo, el grupo 3'-amino presente en el extremo terminal 3' de los oligonucleótidos NP y NPS puede hacerse reaccionar con ácidos carboxílicos, cloruros de ácido, anhídridos y ésteres activos, mediante el uso de catalizadores de acoplamiento adecuados, para formar un enlace amida. Los grupos tiol también son adecuados como grupos funcionales (ver Kupihar y col., Bioorg. Med. Chem. 9:1241-1247 (2001)). Diversos modificadores funcionalizados con amino y tiol de diferentes longitudes de cadena están disponibles comercialmente para la síntesis de oligonucleótidos.
Los enfoques específicos para unir grupos lipídicos a un extremo terminal de un oligonucleótido NP o NPS incluyen aquellos descritos en la Publicación de Solicitud de Estados Unidos Núm. 2005/0113325. Además de los enlaces amida mencionados anteriormente, por ejemplo, los lípidos también pueden unirse a la cadena de oligonucleótidos mediante el uso de un derivado de fosforamidito del lípido, para producir un enlace fosforamidato o tiofosforamidato que conecta el lípido y el oligonucleótido. El grupo 3'-amino libre del oligonucleótido totalmente protegido unido al soporte también puede hacerse reaccionar con un aldehído lipídico adecuado, seguido de reducción con cianoborohidruro de sodio, lo que produce un enlace amina.
El oligonucleótido GRN163 administrado solo, ha mostrado actividad inhibitoria in vitro en cultivo celular, lo que incluye carcinoma epidermoide, epitelio de mama, carcinoma renal, adenocarcinoma renal, células de cáncer pancreático, de cerebro, de colon, de próstata, leucemia, linfoma, mieloma, epidérmico, cervical, de ovario y de hígado.
El oligonucleótido GRN163 también se ha probado y demostrado ser terapéuticamente eficaz en una variedad de modelos tumorales en animales, lo que incluye ovario y pulmón, tanto de células pequeñas como no pequeñas.
C. Conjugados lípido-oligonucleótido
Preferentemente, el inhibidor de enzima basado en oligonucleótidos incluye al menos un grupo lipídico unido covalentemente (ver Publicación de Estados Unidos Núm. 2005/0113325). Esta modificación proporciona propiedades superiores de captación celular, de modo que puede obtenerse un efecto biológico equivalente mediante el uso de cantidades más pequeñas del oligonucleótido conjugado en comparación con la forma no modificada. Cuando se aplica al contexto terapéutico humano, esto puede traducirse en menores riesgos de toxicidad y ahorro de costos.
El grupo lipídico L es típicamente un hidrocarburo alifático o ácido graso, lo que incluye derivados de hidrocarburos y ácidos grasos, donde los ejemplos son compuestos saturados de cadena lineal que tienen de 14-20 carbonos, tales como ácido mirístico (tetradecanoico), ácido palmítico (hexadecanoico) y ácido esteárico (octadeacanoico) y sus correspondientes formas hidrocarbonadas alifáticas, tetradecano, hexadecano y octadecano. Ejemplos de otros grupos lipídicos adecuados que pueden emplearse son los esteroles, tales como el colesterol, y los ácidos grasos e hidrocarburos sustituidos, particularmente las formas polifluoradas de estos grupos. El ámbito del grupo lipídico L incluye derivados tales como derivados de amina, amida, éster y carbamato. El tipo de derivado se determina a menudo por el modo de enlace con el oligonucleótido, como se ejemplifica más abajo.
En una estructura ilustrativa, el resto lipídico es palmitoilamida (derivado del ácido palmítico), conjugado a través de un enlazador de aminoglicerol al grupo 5'-tiofosfato de un oligonucleótido unido por NPS. El oligonucleótido NPS que tiene la secuencia mostrada para GRN163 y conjugada de esta manera (como se muestra más abajo) se designa en el presente documento GRN163L. En una segunda estructura ilustrativa, el lípido, como una palmitoilamida, se conjuga a través del grupo amino terminal 3' de un oligonucleótido NPS.
Figure imgf000014_0003
o)
Para la unión de un lípido al extremo terminal 5', como también se describe en la Publicación de Solicitud de Estados Unidos Núm. 2005/0113325, el oligonucleótido puede sintetizarse mediante el uso de un soporte sólido modificado que contiene lípidos. La reacción del 3-amino-1,2-propanodiol con un cloruro de acilo graso (RC(O)Cl), seguido de la dimetoxitritilación del alcohol primario y la succinilación del alcohol secundario, proporciona un intermedio que después se acopla, a través del grupo succinil carboxilo libre, al soporte sólido. A continuación, se muestra un ejemplo de un soporte modificado, donde S-- representa un soporte CPG de alquilamina de cadena larga y R representa un lípido.
Figure imgf000014_0001
Este procedimiento se sigue de la síntesis del oligonucleótido en la dirección 5' a 3', como se describe, por ejemplo, en PongraczyGryaznov(1999), que comienza con la desprotección y la fosforilación del grupo-ODMT. Esto es eficaz para producir, por ejemplo, la siguiente estructura, después de la escisión a partir del soporte sólido:
Figure imgf000014_0002
La estructura anterior, cuando -R es -(CH2)-mCH3 (palmitoilo), se designa en el presente documento como GRN163L.
IV. Administración
El cáncer también debe ser uno que responda a la inhibición de las células cancerosas mediante la inhibición de la telomerasa. Como se señaló anteriormente, los oligonucleótidos inhibidores de la telomerasa, como se ejemplifica mediante GRN163 y GRN163L, han mostrado actividad inhibitoria in vitro contra las células cancerosas humanas de riñón, de pulmón, pancreáticas, de cerebro, de colon, de próstata, de mama, leucemia, linfoma, mieloma, epidérmico, cervical, de ovario y de hígado, e in vivo, a través del suministro local y sistémico, contra las células de cáncer de cerebro, próstata, linfoma, mieloma, cuello uterino, pulmón e hígado. Otros objetivos preferidos incluyen cánceres de pulmón de células pequeñas, esófago, cabeza y cuello y estómago.
La dosis administrada y el programa de dosificación seguirán, por ejemplo, las dosis conocidas o recomendadas para el inhibidor empleado, como se indica, por ejemplo, en el prospecto del fármaco o en los datos clínicos o en modelos animales publicados. Para GRN163L, la dosis inicial para adultos es de aproximadamente 0,8 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg; de aproximadamente 1,6 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg. La dosis para adultos de GRN163L es de aproximadamente 1,6 mg/kg; o aproximadamente 3,2 mg/kg; o aproximadamente 4,8 mg/kg; o aproximadamente 6,2 mg/kg; o aproximadamente 7,2 mg/kg; o aproximadamente 9 mg/kg; o aproximadamente 12 mg/kg; a aproximadamente 20 mg/kg. La dosis puede administrarse dos veces a la semana, una vez a la semana o a otras tasas de administración. Pueden requerirse dosis más altas para producir la remisión deseada en algunos pacientes.
GRN163L puede administrarse a un paciente a una dosis de al menos aproximadamente 4,8 mg/kg de GRN163L el día 1 y aproximadamente el día 8 de un ciclo de 21 días. Alternativamente, puede administrarse a una dosis de al menos aproximadamente 4,8 mg/kg de GRN163L el día 1 y aproximadamente el día 15 de un ciclo de 28 días. Alternativamente, GRN163L puede administrarse a un paciente a una dosis de al menos aproximadamente 1,6 mg/kg de GRN163L dos veces en la primera semana de un ciclo de 14 días.
El protocolo terapéutico para administrar el inhibidor de la telomerasa en la terapia dependerá de diversos factores lo que incluye, pero no se limita a, el tipo de cáncer, la edad y la salud general del paciente, la agresividad de la progresión de la enfermedad, la longitud de los telómeros y la actividad de la telomerasa de las células enfermas a tratar y la capacidad del paciente para tolerar los agentes que comprenden la combinación, que pueden depender de la actividad de la telomerasa y la longitud de los telómeros en diversas células normales, particularmente células normales en tejidos altamente proliferativos, particularmente, pero no se limitan a, la médula ósea.
En general, se contempla el tratamiento de todos los tipos de cáncer y neoplasias malignas hematológicas. En realizaciones seleccionadas, la enfermedad objetivo comprende un tumor sólido; en otras realizaciones, la enfermedad objetivo comprende una neoplasia maligna hematológica. Un curso de tratamiento ilustrativo implica múltiples dosis. La secuencia de los tratamientos combinados se determinará mediante criterios de cumplimiento clínico y/o datos preclínicos o clínicos que respalden las estrategias de optimización de la dosis para aumentar la eficacia o reducir la toxicidad del tratamiento combinado. El tiempo entre las dosis puede ser un periodo de aproximadamente 1-6 horas, hasta aproximadamente 6-12 horas, hasta aproximadamente 12-24 horas, hasta aproximadamente 1-2 días, hasta aproximadamente 1-2 semanas o más después del inicio del tratamiento. Durante un curso de tratamiento, la necesidad de completar las dosis planificadas puede reevaluarse.
Los compuestos pueden administrarse mediante inyección directa a un tumor o su vasculatura. Alternativamente, el tumor puede infundirse o perfundirse con los compuestos terapéuticos mediante el uso de cualquier vehículo de suministro adecuado. Los compuestos pueden administrarse localmente a un órgano afectado. También puede realizarse la administración sistémica. La administración continua puede aplicarse cuando sea apropiado; por ejemplo, cuando se extirpa un tumor y se trata el lecho tumoral para eliminar la enfermedad residual. Se prefiere el suministro mediante jeringa o cateterismo. Tal perfusión continua puede tener lugar durante un periodo de aproximadamente 1­ 6 horas, hasta aproximadamente 6-12 horas, hasta aproximadamente 12-24 horas, hasta aproximadamente 1-2 días, hasta aproximadamente 1-2 semanas o más después del inicio del tratamiento. Generalmente, la dosis de la composición terapéutica mediante perfusión de forma continua será equivalente a la administrada mediante una única 0 múltiples inyecciones, ajustadas por un periodo de tiempo durante el cual se produce la perfusión.
Los agentes terapéuticos se administran a un sujeto, tal como un paciente humano, en una formulación y en una cantidad eficaz para lograr un resultado clínicamente deseable. Para el tratamiento del cáncer, los resultados deseables incluyen la reducción de la masa tumoral (según se determina por palpación u obtención de imágenes; por ejemplo, mediante radiografía, exploración con radionucleótidos, exploración porCAT o MRI), reducción en la tasa de crecimiento tumoral, reducción en la tasa de formación de metástasis (según se determina, por ejemplo, mediante análisis histoquímico de especímenes de biopsia), reducción de marcadores bioquímicos (lo que incluye marcadores generales tales como ESR y marcadores tumorales específicos tales como PSA en suero) y mejora en la calidad de vida (según se determina por la evaluación clínica, por ejemplo, puntuación de Karnofsky), aumento del tiempo de progresión, supervivencia libre de enfermedad y supervivencia general. La cantidad de cada agente por dosis y el número de dosis requeridas para lograr tales efectos variarán en dependencia de muchos factores, lo que incluye la indicación de la enfermedad, las características del paciente a tratar y el modo de administración. Típicamente, la formulación y la vía de administración proporcionarán una concentración local en el sitio de la enfermedad de entre 1 nM y 100 pM de cada agente. El médico podrá variar la cantidad de los compuestos, el portador, la frecuencia de dosificación y similares, al tener en cuenta factores tales como el estado de la enfermedad neoplásica en particular y su gravedad; la condición general del paciente; la edad, el sexo y el peso del paciente; el modo de administración; la idoneidad de administrar simultáneamente agentes antitoxicidad sistémicos; monitorear las funciones vitales de los órganos del paciente; y otros factores típicamente monitoreados durante la quimioterapia contra el cáncer. En general, los compuestos se administran a una concentración que proporciona resultados eficaces sin provocar efectos secundarios dañinos o perjudiciales excesivos.
Los modos de administración y formulación pueden depender del fármaco y su modo de administración aprobado. Cuando el inhibidor de la telomerasa es GRN163L, la formulación en cloruro de sodio al 0,9 % (solución salina normal) y la administración i.v. es una vía preferida, preferentemente, mediante infusión durante 1 a 24 horas, con mayor preferencia, durante 2 a 8 horas, por ejemplo, una infusión de 6 horas. Si bien los oligonucleótidos conjugados con lípidos descritos en el presente documento, tales como GRN163L, tienen características superiores para la penetración celular y tisular, estos y otros compuestos pueden formularse para proporcionar un beneficio adicional en esta área. Otros adyuvantes útiles incluyen sustratos para la migración transendotelial, tales como sistemas de captación de glucosa para facilitar la salida desde el espacio vascular al microambiente tumoral.
Los siguientes ejemplos se ofrecen en forma de Ilustración y no en forma de limitación.
Ejemplos
Ejemplo 1: Estudio de diversos parámetros en pacientes a los que se les recetaron Inhibidores de la Telomerasa
Se diseñó y realizó un estudio para determinar la probabilidad de desarrollo de trombocitopenia en una población de pacientes con cáncer de tumor sólido tratados con el inhibidor de la telomerasa GRN163L. GRN163L es un inhibidor oligonucleotídico de 13-mer de la actividad de la telomerasa. El estudio usó células sanguíneas archivadas como una fuente de longitud de telómeros celulares antes del estudio y registros de pacientes archivados coincidentes.
Diseño del estudio
Los pacientes aceptados fueron adultos con tumores sólidos refractarios avanzados y tratados con GRN163L en un ensayo clínico de fase I. El GRN163L se administró semanalmente mediante dosificación i.v. continua. Además, se presentan datos provisionales sobre una cohorte 6 tratada con un régimen de dosificación alternativo diseñado para reducir el potencial de trombocitopenia. Este fue un ensayo clínico de Fase I multicéntrico con cohortes secuenciales de escalado de dosis. Los pacientes se inscribieron en cohortes sucesivas de 0,4 a 4,8 mg/kg. Las cohortes 1-5 recibieron infusiones intravenosas de 2 horas de GRN163L semanalmente. La cohorte 6 recibió un programa de dosificación intermitente de infusiones i.v. semanales de GRN163L (4,8 mg/kg) X2, seguido de un descanso de 13 días. Se requirió completar 1 ciclo (4 infusiones semanales) para la evaluación de la Toxicidad limitante de la dosis (DLT)
Los pacientes se excluyeron del estudio si teman una neoplasia maligna primaria o metástasis activa en el Sistema Nervioso Central; neoplasias malignas hematológicas; hemoglobina <9,0 g/dl; ANC <1.500/mm3; conteo de plaquetas <100.000/mm3; o una anormalidad en la química sérica (bilirrubina, AST, ALT, albumina, creatinina).
La población de pacientes incluyo 28 pacientes. Los pacientes habían recibido hasta 9 terapias anteriores para este tumor; más de la mitad recibieron 4 o más. Ver la Tabla 1
Tabla 1. Características demográficas al inicio
Figure imgf000016_0002
28 pacientes en las cohortes 1-5 recibieron al menos 1 infusión de GRN163L. Se administraron un total de 177 dosis. Ver la Tabla 2. Los 28 pacientes interrumpieron el estudio; las razones para la interrupción incluyeron enfermedad progresiva (22/28; 78 %), muerte (3/28; 11 %) y trombocitopenia (3/28; 11 %).
Tabla 2 Dosificación
Figure imgf000016_0001
Se tomaron muestras de sangre de los pacientes en diferentes momentos durante el estudio. Las Figuras 1-4 muestran los niveles de plaquetas en los pacientes en el tiempo en las diversas cohortes.
Materiales y procedimientos:
Se recolectaron muestras de sangre de cada paciente antes de comenzar el tratamiento. La mediana de la longitud de los telómeros se determinó por Repeat Diagnostics, Vancouver, Canadá, mediante el uso del procedimiento Flow-FISH, con selección de poblaciones de granulocitos y linfocitos mediante el procedimiento descrito en Baerlocher y col., "Flow cytometry and FISH to measure the average length of telomeres (flow FISH) Nature Protocols Vol. 1, Núm.
5: 2365-2376 (2006).
Brevemente, se obtuvo sangre completa de los 28 pacientes. El sobrenadante se aspiró sin alterar los glóbulos blancos o el sedimento de glóbulos rojos. Las células se mezclaron con NH4CI frío para lisar los glóbulos rojos. Las células se centrifugaron. Se aspiró el sobrenadante y se extrajo el lisado de glóbulos rojos. Los glóbulos blancos resultantes se suspendieron en tampón de hibridación (5 % de dextrosa/10 mM de Hepes/0/1 % de BSA). Las células se contaron y se diluyeron a aproximadamente 5 x 106 células/200 pl de tampón de hibridación.
Los timocitos bovinos se aislaron del timo bovino fresco y se fijaron en formaldehído. Los timocitos bovinos fijados se mezclaron con tampón de hibridación (Tris, NaCl, BSA, formamida dionizada). Para el control de hibridación sin marcar, se añadió a las células una solución madre de mezcla de hibridación sin marcar. Para la mezcla de hibridación marcada, se añadió a las células una sonda de ácido nucleico peptídico (PNA) de hibridación (CCC TAA CCC TAA CCC TAA marcada con Cy5 o fluoresceína) (SEQ ID NO: 3). Las células se hibridaron con la sonda de PNA. Después, las células se centrifugaron y el sedimento celular se lavó para eliminar la sonda no unida.
El citómetro de flujo se calibró y las células se analizaron en el citómetro de flujo. A partir del programa informático de análisis de datos de citometría de flujo, se usó la plantilla de análisis Flow FISH para calcular la fluorescencia de las diversas poblaciones celulares. La fluorescencia se usó para calcular la longitud promedio de los telómeros.
Resultados
Se llevaron a cabo análisis univariados y multivariados para explorar los factores predictivos para determinar las disminuciones posteriores al tratamiento en los niveles de plaquetas y la longitud inicial de los telómeros. Los factores incluyeron edad, sexo, conteo inicial de plaquetas, tiempo desde el diagnostico de cáncer, número de regímenes de quimioterapia citotóxica o mielosupresora anteriores, terapia con radiación previa y longitud de los telómeros de granulocitos y linfocitos iniciales.
Las infusiones de GRN163L se toleraron bien generalmente. Los eventos adversos (AE) que se consideraron relacionados o posiblemente/probablemente relacionados con el tratamiento se informaron en 16/28 (57,1 %) pacientes. Ver la Tabla 3. Los eventos adversos más posiblemente/probablemente relacionados fueron reversibles y de grado 1-2.
No se observaron toxicidades limitantes de la dosis (DLT) en las Cohortes 1-3. En la Cohorte 4 (3,2 mg/kg), un paciente que toleraba bien la terapia murió de causa desconocida después de la 4a dosis, y esto se consideró una d Lt . En la Cohorte 5 (4,8 mg/kg), se observaron dos DLT, ambas trombocitopenia (una de grado 4 y una de grado 2 que provocaron un retraso de >2 semanas en el tratamiento).
Tabla 3: Eventos adversos informados (posiblemente/probablemente) relacionados con el tratamiento en >1 paciente+
Figure imgf000017_0001
Los niveles de plaquetas en el tiempo para pacientes individuales que reciben infusiones de GRN163L semanalmente se muestran por cohorte de dosis en las Figuras 1-3. Los puntos de datos en círculo indican que el paciente recibió tratamiento en esa visita. Los niveles de plaquetas en el tiempo para 5 de 6 pacientes en el programa de dosificación intermitente de 4,8 mg/kg (Cohorte 6) se muestran en la Figura 4.
Para comprender mejor los factores del paciente y del tratamiento que influyen potencialmente en las disminuciones (o aumentos) de las plaquetas, se desarrolló un modelo para identificar predictores de cambio en por ciento en los niveles de plaquetas a las 4 semanas.
El cambio en los niveles de plaquetas después de 4 semanas de tratamiento con GRN163L se trazo con relación a la mediana de la longitud de los telómeros en cada paciente en la Figura 5.
El primer modelo incluyo 20/28 pacientes. La dosis y la longitud inicial de los telómeros de granulocitos fueron predictores significativos. No se encontró interacción de la dosis con la longitud del telómero.
Tabla 4: Análisis multivariado
Figure imgf000018_0002
El modelo se extendió para incluir 8 pacientes adicionales (los 28 pacientes en las cohortes 1-5). Las relaciones detectadas en el modelo anterior continuaron significativas. Tanto el nivel de dosis inicial de GRN163L como la mediana de la longitud inicial de los telómeros de granulocitos fueron predictores del % de disminución de los niveles de plaquetas durante las primeras 4 semanas de tratamiento
Tabla 5: Análisis multivariado
Figure imgf000018_0003
La Figura 5 muestra el cambio en por ciento desde el valor basal hasta el nadir en los niveles de plaquetas en la semana 4 en función de la longitud inicial de los telómeros de granulocitos. Las líneas indican el cambio en porcentaje en función del nivel de dosis de GRN163L.
La ecuación para describir el número predicho de plaquetas en un paciente durante las primeras 4 semanas de tratamiento es la siguiente;
Número predicho de plaquetas = número de plaquetas iniciales -(número de plaquetas iniciales x % de cambio en las plaquetas/100).
% de cambio en número de plaquetas = (-73,0) - 6,6 x dosis del inhibidor (mg/kg) 11,2 x longitud promedio de los telómeros (kpb)
En los análisis univariados de predictores de cambio en por ciento en los niveles de plaquetas, solo la longitud de los telómeros de granulocitos fue significativa (p=0,024).
Tabla 6: Análisis univariado
Figure imgf000018_0004
Después se desarrolló otro modelo para identificar predictores del log del nadir de los niveles de plaquetas durante las primeras 4 semanas. Este modelo resultó en un valor de R2 más alto lo que indica un mejor ajuste a los datos.
Tabla 7: Análisis multivariado
Figure imgf000018_0001
La ecuación para describir el número predicho de plaquetas en un paciente en el nadir durante las primeras 4 semanas de tratamiento es la siguiente:
Número predicho de plaquetas £ [('° ’38) - ° .13 x dosis del inhibidor (mg/kg) 0,25 x longitud promedio de los telómeros (kpb) 0.80 x log del número de plaquetas iniciales]
En los análisis univariados de predictores del log del nadir de los niveles de plaquetas, la longitud de los telómeros de granulocitos, sola, fue significativa (p=0,004).
Tabla 8: Análisis univariado
Figure imgf000019_0001
Los intervalos de predicción pueden calcularse, por ejemplo, para predecir un probable cambio en por ciento en los niveles de plaquetas o el nadir de plaquetas para pacientes o sujetos con un conjunto particular de valores basales y de tratamiento, por ejemplo, longitud de los telómeros, plaquetas iniciales y nivel de dosis. La ecuación de regresión proporciona el valor esperado para un futuro individuo con covariantes específicas (J. Neter y col. Applied linear statistical models: regression, analysis of variance, and experimental designs, 3a edición pág. 81-83 (1990)). Sin embargo, debido al error de distribución del muestreo, así como también a la variabilidad entre individuos, un paciente puede tener niveles de plaquetas que se encuentran por encima o por debajo de ese valor predicho. Puede crearse una serie de intervalos de predicción con una cobertura decreciente. Por ejemplo, puede crearse un intervalo de predicción del 99 % con límites superiores e inferiores Pu99 y PL99 y en promedio, contendría el 99 % de los niveles de plaquetas observados en los pacientes. Puede crearse un intervalo de predicción del 90 % con límites superiores e inferiores Pu90 (< Pu99) y PL90 (> PL99) y en promedio, contendría el 90 % de los niveles futuros de plaquetas observados. Esto permite determinar la probabilidad de que el paciente desarrolle una trombocitopenia de grado 3 o 4.
La longitud promedio de los telómeros de las células normales difiere entre individuos y disminuye con la edad, como lo muestran los percentiles en la Figura 7. Las longitudes de los telómeros de granulocitos en los 28 pacientes en este estudio son generalmente más cortas de lo normal, lo que es consistente con los efectos del estrés fisiológico y la quimioterapia. Aunque el antecedente previo de quimioterapia como se tabula aquí no fue predictivo de la disminución de las plaquetas, en un análisis univariado se correlacionó altamente con las longitudes iniciales de los telómeros. La medición de la longitud de los telómeros refleja los efectos del tratamiento previo junto con otras influencias hereditarias o adquiridas con alta precisión. La edad también fue un predictor significativo de la longitud de los telómeros.
Los resultados de este estudio demuestran una estrecha correspondencia entre los valores iniciales de longitud de los telómeros según se determina mediante la prueba descrita y el riesgo de que el paciente desarrolle trombocitopenia limitante de la dosis.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un inhibidor de la telomerasa para su uso en un procedimiento para el tratamiento del cáncer en un paciente, en el que el procedimiento comprende analizar una muestra biológica del paciente para determinar la longitud o la distribución de la longitud de los telómeros e identificar la probabilidad de que el paciente presente una reacción adversa al tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa.
2. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el paciente es un ser humano.
3. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el evento adverso se selecciona de trombocitopenia, anemia, leucopenia o neutropenia.
4. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la reacción adversa es trombocitopenia de grados 3 o 4.
5. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la muestra biológica son células sanguíneas obtenidas del paciente.
6. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en las que las células sanguíneas son glóbulos blancos.
7. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en los que los glóbulos blancos son granulocitos.
8. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en los que los granulocitos son neutrófilos, basófilos o eosinófilos.
9. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en las que las células sanguíneas son linfocitos, monocitos o macrófagos.
10. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el inhibidor de la telomerasa es un oligonucleótido.
11. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en el que el inhibidor de la telomerasa es GRN163L.
12. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cáncer de faringe, cáncer rectal, cáncer pancreático, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, cáncer de tracto urinario, cáncer de tiroides, cáncer renal, cáncer de piel, cáncer de cerebro, carcinoma, melanoma, leucemia y linfoma.
13. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho paciente se monitoriza mediante
(a) la determinación del promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y la multiplicación del promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) la multiplicación de la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis; y (c) el cálculo de la suma del componente del telómero, el componente de dosis y una constante; y
(d) la determinación de la probabilidad esperada de una reacción adversa en el sujeto mamífero a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
14. Un inhibidor de la telomerasa para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho paciente se monitoriza mediante
(a) la determinación del promedio o la mediana de la longitud del telómero en una muestra biológica que comprende células obtenidas del sujeto mamífero antes o en el momento del tratamiento con una terapia de inhibición de la telomerasa y la multiplicación del promedio o la mediana de la longitud del telómero por un coeficiente para llegar a un componente de longitud del telómero;
(b) la multiplicación de la dosis de tratamiento prevista por un coeficiente para llegar a un componente de dosis; y (c) el cálculo de la suma del componente del telómero, el componente de dosis y el log del número de plaquetas inicial del sujeto para determinar el nadir de plaquetas predicho durante las primeras semanas de tratamiento; y (d) la determinación de la probabilidad esperada de trombocitopenia en el paciente a partir del tratamiento con la terapia de inhibición de la telomerasa.
ES20156494T 2008-10-17 2009-10-13 Procedimiento para la identificación de la sensibilidad de un paciente a una terapia de inhibición de la telomerasa Active ES2939509T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10649108P 2008-10-17 2008-10-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2939509T3 true ES2939509T3 (es) 2023-04-24

Family

ID=42106854

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15202042.6T Active ES2645872T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Método para la identificación de la sensibilidad de un paciente a la terapia de inhibición de la telomerasa
ES17194587T Active ES2789580T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Grn163l para su uso como inhibidor de la telomerasa en el tratamiento del cáncer
ES20156494T Active ES2939509T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Procedimiento para la identificación de la sensibilidad de un paciente a una terapia de inhibición de la telomerasa
ES09821131.1T Active ES2566338T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Método para identificación de la sensibilidad de un paciente a la terapia de inhibición de la telomerasa

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15202042.6T Active ES2645872T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Método para la identificación de la sensibilidad de un paciente a la terapia de inhibición de la telomerasa
ES17194587T Active ES2789580T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Grn163l para su uso como inhibidor de la telomerasa en el tratamiento del cáncer

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES09821131.1T Active ES2566338T3 (es) 2008-10-17 2009-10-13 Método para identificación de la sensibilidad de un paciente a la terapia de inhibición de la telomerasa

Country Status (15)

Country Link
US (7) US8877723B2 (es)
EP (4) EP3330383B1 (es)
CY (2) CY1117234T1 (es)
DK (2) DK3029154T3 (es)
ES (4) ES2645872T3 (es)
HK (2) HK1224341A1 (es)
HR (2) HRP20160067T1 (es)
HU (2) HUE027213T2 (es)
LT (1) LT3029154T (es)
NO (1) NO3029154T3 (es)
PL (2) PL3029154T3 (es)
PT (3) PT3330383T (es)
SI (2) SI3029154T1 (es)
SM (1) SMT201600087B (es)
WO (1) WO2010045245A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201504209YA (en) * 2012-11-30 2015-06-29 Geron Corp Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors
US9200327B2 (en) 2012-11-30 2015-12-01 Geron Corporation Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors
US9375485B2 (en) 2012-12-07 2016-06-28 Geron Corporation Use of telomerase inhibitors for the treatment of myeloproliferative disorders and myeloproliferative neoplasms
EP3318276A1 (en) 2016-11-04 2018-05-09 Janssen Biotech, Inc. Combinations of a telomerase inhibitor and a bcl-2 inhibitor for the treatment of hematological cancers
CN109662968B (zh) * 2017-10-13 2021-05-18 上海奥奇医药科技有限公司 含A-失碳-5α雄甾烷化合物的升白制剂及其应用

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5489508A (en) * 1992-05-13 1996-02-06 University Of Texas System Board Of Regents Therapy and diagnosis of conditions related to telomere length and/or telomerase activity
US5958680A (en) 1994-07-07 1999-09-28 Geron Corporation Mammalian telomerase
US5583016A (en) 1994-07-07 1996-12-10 Geron Corporation Mammalian telomerase
US5776679A (en) 1994-07-07 1998-07-07 Geron Corporation Assays for the DNA component of human telomerase
US5760062A (en) 1995-04-18 1998-06-02 Geron Corporation Telomerase inhibitors
US5863936A (en) 1995-04-18 1999-01-26 Geron Corporation Telomerase inhibitors
US5656638A (en) 1995-04-18 1997-08-12 Geron Corporation Telomerase inhibitors
US5840490A (en) 1995-06-07 1998-11-24 Mcmaster University Telomerase activity associated with hematological and colorectal malignancies
US5741677A (en) 1995-06-07 1998-04-21 Geron Corporation Methods for measuring telomere length
US5770613A (en) 1995-09-29 1998-06-23 Geron Corporation Telomerase inhibitors
US5767278A (en) 1995-10-06 1998-06-16 Geron Corporation Telomerase inhibitors
ATE362546T1 (de) 1995-10-12 2007-06-15 Lansdorp Peter M Verfahren zum nachweis von mehrfachkopien einer wiederholungssequenz in einem nukleinsäuremolekül
US6444650B1 (en) 1996-10-01 2002-09-03 Geron Corporation Antisense compositions for detecting and inhibiting telomerase reverse transcriptase
US6261836B1 (en) 1996-10-01 2001-07-17 Geron Corporation Telomerase
EP0951568A1 (en) 1996-12-20 1999-10-27 Geron Corporation Methods for detecting and inhibiting the rna component of telomerase
AU2494799A (en) * 1998-02-04 1999-08-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Inhibition of human telomerase by a g-quadruplex-interaction compound
US6995145B1 (en) 1999-06-04 2006-02-07 Au Jessie L-S Methods and compositions for modulating drug activity through telomere damage
ATE391134T1 (de) 1999-09-10 2008-04-15 Geron Corp Oligonukleotid n3'-p5' thiophosphoramidate: ihre synthese und verwendung
US6331399B1 (en) 2000-05-16 2001-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of tert expression
ES2331646T3 (es) 2000-05-19 2010-01-12 Genentech, Inc. Ensayo para la deteccion de genes para mejorar la probabilidad de una respuesta eficaz a una terapia contra el cancer basada en antagonistas de erbb.
US7563618B2 (en) 2001-03-23 2009-07-21 Geron Corporation Oligonucleotide conjugates
US9777312B2 (en) * 2001-06-30 2017-10-03 Enzo Life Sciences, Inc. Dual polarity analysis of nucleic acids
JP4515767B2 (ja) 2002-01-31 2010-08-04 ユニバーシティ・オブ・ユタ 非標的核酸依存性増幅の低減：反復核酸配列の増幅
US20040234961A1 (en) 2002-04-22 2004-11-25 Fordyce Colleen A. Telomere length determination and applications
CA2513747C (en) 2003-01-24 2017-03-07 University Of Utah Methods of predicting mortality risk by determining telomere length
BRPI0414222B8 (pt) 2003-09-09 2021-05-25 Geron Corp compostos oligonucleotídeos modificados para inibição da telomerase, métodos, composição farmacêutica e usos relacionados
US7485717B2 (en) 2004-07-02 2009-02-03 Geron Corporation Synthesis of protected 3′-amino nucleoside monomers
DE102005024834B3 (de) 2005-05-31 2007-01-04 Lucas Automotive Gmbh Verfahren und System zur Steuerung einer Kraftfahrzeug-Feststellbremse während eines Halts
RU2447889C2 (ru) * 2005-07-18 2012-04-20 Бипар Сайенсиз, Инк. Способ лечения рака (варианты)
WO2007067602A1 (en) * 2005-12-06 2007-06-14 Wyeth Interleukin-11 compositions and methods of use
ES2407957T3 (es) * 2007-03-09 2013-06-17 Geron Corporation Tratamiento de carcinomas con una combinación de inhibidores de la vía EGF y de la telomerasa
WO2008119027A2 (en) 2007-03-27 2008-10-02 The Johns Hopkins University Genetic testing of telomere-associated genes in dyskeratosis congenita and related disorders
WO2009073751A2 (en) 2007-12-04 2009-06-11 Geron Corporation Hair follicle pharmacodynamic assay for telomerase activity
US20090298709A1 (en) 2008-05-28 2009-12-03 Affymetrix, Inc. Assays for determining telomere length and repeated sequence copy number
US20110207128A1 (en) 2010-02-16 2011-08-25 Cawthon Richard M Methods and kits for determining biological age and longevity based on gene expression profiles
SG11201504209YA (en) 2012-11-30 2015-06-29 Geron Corp Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors
US9200327B2 (en) 2012-11-30 2015-12-01 Geron Corporation Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EP3029154A1 (en) 2016-06-08
HUE027213T2 (en) 2016-10-28
US10196677B2 (en) 2019-02-05
US20210269861A1 (en) 2021-09-02
US20150152488A1 (en) 2015-06-04
LT3029154T (lt) 2017-12-27
HRP20160067T1 (hr) 2016-03-25
SMT201600087B (it) 2016-07-01
EP3719139A1 (en) 2020-10-07
PT3029154T (pt) 2017-12-06
HK1256479A1 (zh) 2019-09-27
NO3029154T3 (es) 2018-03-03
PT3330383T (pt) 2020-05-06
SI3029154T1 (en) 2018-02-28
SI2342360T1 (sl) 2016-04-29
CY1119653T1 (el) 2018-04-04
US20220325327A1 (en) 2022-10-13
CY1117234T1 (el) 2017-04-05
HUE037447T2 (hu) 2018-08-28
DK3029154T3 (en) 2017-12-11
EP2342360A1 (en) 2011-07-13
DK2342360T3 (en) 2016-04-11
ES2566338T3 (es) 2016-04-12
EP2342360A4 (en) 2012-10-03
PL3029154T3 (pl) 2018-03-30
EP3719139B1 (en) 2022-11-30
US8877723B2 (en) 2014-11-04
EP3330383B1 (en) 2020-02-12
US9617583B2 (en) 2017-04-11
ES2789580T3 (es) 2020-10-26
EP2342360B1 (en) 2016-01-06
WO2010045245A1 (en) 2010-04-22
US20190382829A1 (en) 2019-12-19
PL2342360T3 (pl) 2016-06-30
HRP20171536T1 (hr) 2018-01-26
PT3719139T (pt) 2023-03-06
US20230114322A1 (en) 2023-04-13
HK1224341A1 (zh) 2017-08-18
US20170298421A1 (en) 2017-10-19
EP3029154B1 (en) 2017-10-04
US20110263685A1 (en) 2011-10-27
ES2645872T3 (es) 2017-12-11
EP3330383A1 (en) 2018-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230114322A1 (en) Method for Identification of Sensitivity of a Patient to Telomerase Inhibition Therapy
ES2865446T3 (es) Marcadores diagnósticos para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares con inhibidores de la telomerasa
US9951389B2 (en) Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors
ES2906454T3 (es) Método para determinar la sensibilidad al inhibidor simultáneo contra PARP y Tanquirasa
US20150344963A1 (en) Diagnostic markers for treating cell proliferative disorders with telomerase inhibitors