ES2939494T3 - Conjugados de fármaco anticuerpo que comprenden derivados de ecteinascidina - Google Patents

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Abstract

Conjugados de fármacos que tienen la fórmula [D-(X) b -(AA) w -(T) g -(L)-] n -Ab en la que: D es un resto de fármaco que tiene la siguiente fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, solvato, tautómero o estereoisómero del mismo, (I) en el que D está unido covalentemente a través de un grupo hidroxi o amina a (X) b, si lo hay, o (AA) w, si lo hay, o a (T) g, si lo hay, o (L); que son útiles en el tratamiento del cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Conjugados de fármaco anticuerpo que comprenden derivados de ecteinascidina
Campo de la Invención
La presente invención se refiere a nuevos conjugados de fármacos, compuestos enlazantes de fármacos, métodos para su preparación, composiciones farmacéuticas que contienen tales conjugados de fármacos y dichos conjugados para su uso como agentes antitumorales.
Antecedentes de la Invención
La solicitud de patente de invención internacional número PCT/EP2018/060868 se refiere a nuevos derivados de ecteinascidina que muestran actividad antitumoral muy prometedora. Uno de los compuestos descriptos en dicha solicitud de patente se encuentra actualmente en ensayos clínicos de Fase I para la prevención y tratamiento de tumores sólidos.
El tratamiento del cáncer ha avanzado significativamente en los últimos años con el desarrollo de entidades farmacéuticas que se dirigen a las células cancerígenas y las matan de manera más eficaz. Los investigadores han tomado ventaja de los receptores de superficie celular y antígenos expresados selectivamente por las células objetivo como, por ejemplo, células cancerígenas, a los efectos de desarrollar entidades farmacéuticas basadas en anticuerpos que se unen, en el ejemplo de los tumores, a antígenos asociados a tumores o específicos de tumores. A los efectos de lograr esto, las moléculas citotóxicas como, por ejemplo fármacos quimioterapéuticos, bacterias y toxinas vegetales y bacterianas y radionúclidos se han unido químicamente a anticuerpos monoclonales que se unen a antígenos de superficie celular específicos de tumores o asociados a tumores.
Por lo tanto, los conjugados de fármaco-anticuerpo (ADC, por sus siglas en inglés) representan un área de desarrollo desafiante dada la carga compleja, la estructura de anticuerpo y enlazante pero permanece la necesidad de desarrollar otros conjugados de fármaco-anticuerpo.
Dan etal., “Antibody-Drug Conjugates for Cancer Therapy: Chemistry to Clinical Implications”, Pharmaceuticals, 2018, vol. 11, n.° 2, página 32 se refiere a una revisión de los métodos de conjugación específicos de sitio para producir ADC homogéneos con una proporción fármaco-anticuerpo (DAR) constante.
El documento WO 03/014127 A1 se refiere a derivados de la ecteinascidina 736.
Leal et al., “PM01183, a new DNA minor groove covalent binder with potent in vitro and in vivo anti-tumour activity”, British Journal of Pharmacology, 2010, vol. 161, n.° 5, páginas 1099-1110 se refiere a un estudio de las interacciones del PM01183 con las moléculas de ADN seleccionadas de la secuencia definida y su citotoxicidad in vitro e in vivo.
Calvo et al., “Antitumor activity of lurbinectedin (PM01183) and doxorubicin in relapsed small-cell lung cancer: results from a phase I study”, Annals of Oncology, 2017, vol. 20, n.° 10, páginas 2559-2566 se refiere a un ensayo de fase I de doxorrubicina y PM01183.
Sumario de la Invención
Existe la necesidad de nuevos conjugados de fármacos activos. La presente invención aborda esta necesidad. Además, provee nuevos compuestos enlazantes de fármacos para usar en la preparación de conjugados de fármacos de la presente invención, procesos para la preparación de los nuevos conjugados de fármacos de la presente invención, composiciones farmacéuticas que contienen tales conjugados de fármacos y dichos conjugados para su uso como agentes antitumorales, así como también un conjunto que comprende el conjugado de fármaco de la presente invención para usar en el tratamiento del cáncer.
En un primer aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco que contiene una fracción de fármaco covalentemente unida al resto del conjugado de fármaco, y el conjugado de fármaco posee la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab donde:
D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (I) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000003_0001
donde:
D está unido covalentemente por medio de un grupo hidroxi o amina a (X)b, si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno, o a (L);
Y es -NH- u - O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
L es un grupo enlazante;
w es un número entero de 0 a 12;
b es un número entero de 0 o 1;
g es un número entero de 0 o 1;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20;
donde la fracción de fármaco D se conjuga a través de la posición R4.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco que comprende una fracción de fármaco unida covalentemente al resto del conjugado de fármaco, y el compuesto posee la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, donde:
D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (IH) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000003_0002
donde:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, (AA)w si hubiere alguno, (T)g si hubiere alguno, o a (L);
cada Y y Z se selecciona de manera independiente de -NH- y -O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx; Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx;
Los sustituyentes Rx se seleccionan del grupo que consta de grupos alquilo C1-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, grupos alquenilo C2-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, grupos alquinilo C2-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, átomos de halógeno, grupos oxo, grupos tio, grupos ciano, grupos nitro, ORy, OCORy, OCOORy, CORy, COORy, OCONRyRz, CONRyRz, S(O)Ry, SO2Ry, P(O)(Ry)ORz, NRyRz, NRyCORz, NRyC(=O)NRyRz, NRyC(=NRy)NRyRz, grupos arilo que poseen de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, que pueden ser iguales o diferentes seleccionados del grupo que consta de Ry, ORy, OCORy, OCOORy, NRyRz, NRyCORz, y NRyC(=NRy)NRyRz, grupos aralquilo que comprenden un grupo alquilo que posee de 1 a 12 átomos de carbono sustituidos con un grupo arilo opcionalmente sustituido de acuerdo con lo definido anteriormente, grupos aralquiloxi que comprenden un grupo alcoxi que posee de 1 a 12 átomos de carbono substituidos con un grupo arilo opcionalmente sustituido de acuerdo con lo definido anteriormente, y un grupo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 14 miembros que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, el grupo heterocíclico se encuentra opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Ry, y donde existen más de un sustituyente opcional sobre cualquier grupo dado y los sustituyentes opcionales Ry pueden ser iguales o diferentes;
cada Ry y Rz se seleccionan de manera independiente del grupo que consta de hidrógeno, grupos alquilo C1-C12, grupos alquilo C1-C12 que están sustituidos con al menos un átomo de hidrógeno, grupos aralquilo que comprenden un grupo alquilo C1-C12 que está sustituido con un grupo arilo que posee de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos y grupos heterocicloalquilo que comprenden un grupo alquilo C1-C12 que está sustituido con un grupo heterocíclico saturado o insaturado, de 5 a 14 miembros, que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos;
X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
L es un grupo enlazante;
w es un número entero de 0 a 12;
b es un número entero de 0 o 1;
g es un número entero de 0 o 1;
donde b+g+w opcionalmente no es 0;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco que comprende una fracción de fármaco covalentemente unida al resto del conjugado de fármaco y el conjugado de fármaco posee la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, donde:
D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (I) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000005_0001
donde:
D se une de manera covalente por medio de un grupo hidroxi o amina a (X)b si hubiere alguno, (AA)w si hubiere alguno, (T)g si hubiere alguno, o a (L);
Y es -NH- u - O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
L es un grupo enlazante;
w es un número entero de 0 a 12;
b es 1;
g es un número entero de 0 o 1;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20;
donde la fracción de fármaco D se conjuga a través de la posición R4.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco que comprende una fracción de fármaco covalentemente unida al resto del conjugado de fármaco, y el conjugado de fármaco posee la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, donde:
D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (I) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000006_0001
donde:
D se une covalentemente por medio de un grupo hidroxi o amina a (X)b si hubiere alguno, (AA)w si hubiere alguno, (T)g si hubiere alguno, o a (L);
Y es -NH- u - O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
L es un grupo enlazante;
w es 2;
b es 1;
g es un número entero de 0 o 1;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20;
donde la fracción de fármaco D se conjuga a través de la posición R4.
Tal como explicaremos y ejemplificaremos de manera más detallada a continuación, los conjugados de fármacos de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de la presente invención representan un descubrimiento en el abordaje de los problemas reseñados anteriormente que requieren otros conjugados de fármacos además de aquellos basados en las tres familias principales de fármacos citotóxicos que se han utilizados como cargas útiles hasta la fecha, que muestren una excelente actividad antitumoral.
En las formas de realización preferentes de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco de acuerdo con lo definido en la presente, o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde D es una fracción de fármaco seleccionada de las fórmulas (IHa) y (IHb):
Figure imgf000007_0001
donde las líneas onduladas, Ri , R2, R3, Y, y Z son como se definen para la fórmula (IH).
En otro aspecto de la presente invención, se provee un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li , donde:
Li es un enlazante seleccionado del grupo de las fórmulas que constan de:
Figure imgf000007_0002
cada una de las líneas onduladas indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, (AA)w si hubiere alguno, (X)b si hubiere alguno, o a D;
G se selecciona de halo, -O-mesilo y -O-tosilo;
J se selecciona de halo, hidroxi, -N-succinimidoxi, -O-(4-nitrofenilo), -O-pentafluorofenilo, -O-tetrafluorofenilo y -O-C(O)-OR2o;
R19 se selecciona de alquileno C1-C12, carbociclo C3-C8, -O-(alquileno C1-C12), arileno C6-C18 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, alquileno C1-C12- arileno C6-C18, donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, arileno C6-C18 - alquileno C1-C12, donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, alquileno C1-C12 - carbociclo (C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)- alquileno C1-C12-, heterociclo C5-C14, donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, alquileno Ci -C12 -(heterociclo C5-C14)- donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-C14)- alquileno C1-C12 , donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2V- y -CH2-(OCH2C H )r-, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, ya sea solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
R20 es un alquilo C1-C12 o un grupo arilo que posee de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos aromáticos, dichos grupos arilo son opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx;
r es un número entero de 1-10;
g es un número entero de 0 o 1;
b es un número entero de 0 o 1;
w es un número entero de 0 a 12; y
cada uno de D, Rx, X, T, y AA es como se definió en el primer aspecto de la invención.
En las formas de realización preferentes de la presente invención, b+g+w no es 0. En otras formas de realización, b+w no es 0. En incluso otras formas de realización, cuando w no es 0, entonces b es 1. En otra forma de realización, cuando w es 0, entonces b es 1.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde cada uno de D, X, AA, T, Li , b, g y w son como se definen en la presente.
En una forma de realización preferente de acuerdo con los aspectos de la presente invención, n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20. En otras formas de realización, n se halla en el intervalo de 1-12, 1-8, 3-8, 3-6, 3-5 o es 1,2, 3, 4, 5 o 6 con preferencia, 3, 4, o 5 o 4.
En otro aspecto de la presente invención, se provee una fracción de fármaco D para usar en un conjugado de fármacoanticuerpo. En otro aspecto de la presente invención, se provee una fracción de fármaco D para usar como carga útil en un conjugado de fármaco-anticuerpo. En otro aspecto de la presente invención, se provee el uso de una fracción de fármaco D de acuerdo con lo descripto en la presente, en la preparación de un conjugado de fármaco-anticuerpo. En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención para usar como medicamento.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención para usar en el tratamiento del cáncer, y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico. El cáncer de mayor preferencia es cáncer de mama.
En otro aspecto de la presente invención, se provee una composición farmacéutica que comprende un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un conjunto que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El conjunto se ha de usar en el tratamiento del cáncer y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico. El cáncer de mayor preferencia es el cáncer de mama. Un conjunto de acuerdo con la presente invención puede comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención y, opcionalmente, instrucciones para usar el conjugado de fármaco en el tratamiento del cáncer, particularmente un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico; con la mayor preferencia para usar el conjugado de fármaco en el tratamiento del cáncer de mama.
En otro aspecto de la presente invención, se provee un proceso para la preparación de un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención que comprende conjugar una fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y un fármaco D, Ab y D que son como se definen en la presente.
Descripción detallada de las formas de realización preferentes
Lo siguiente se aplica a todos los aspectos de la presente invención:
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquilo pueden ser ramificados o no ramificados y, preferentemente, poseen de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono. Una clase de mayor preferencia de grupos alquilo posee de 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Se prefieren aún más los grupos alquilo que poseen 1,2, 3 o 4 átomos de carbono. Metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y butilo, que incluye n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ter-butilo, son grupos alquilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención.
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquenilo pueden ser ramificados o no ramificados, poseen uno o más dobles enlaces y de 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono. Una clase de mayor preferencia de grupos alquenilo posee de 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Se prefieren más aún los grupos alquenilo que poseen 2, 3 o 4 átomos de carbono. Etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-metiletenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, y 3-butenilo son grupos alquenilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención.
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquinilo pueden ser ramificados o no ramificados, poseen uno o más triples enlaces y de 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono. Una clase de mayor preferencia de grupos alquinilo posee de 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Se prefieren más aún los grupos alquinilo que poseen 2, 3 o 4 átomos de carbono.
Los grupos arilo adecuados en los compuestos de la presente invención incluyen compuestos de un anillo o de múltiples anillos, incluso compuestos de múltiples anillos que contienen grupos arilo separados y/o fusionados. Los grupos arilo típicos contienen de 1 a 3 anillos separados y/o fusionados y de 6 hasta aproximadamente 18 átomos de anillo de carbono. Preferentemente, los grupos arilo contienen de 6 hasta aproximadamente 10 átomos de anillo de carbono. Los grupos arilo especialmente preferidos incluyeron fenilo sustituido o no sustituido, naftilo sustituido o no sustituido, bifenilo sustituido o no sustituido, fenantrilo sustituido o no sustituido y antrilo sustituido o no sustituido.
Los grupos heterocíclicos adecuados incluyen grupos heteroaromáticos y heteroalicíclicos que contienen de 1 a 3 anillos separados y/o fusionados y de 5 hasta aproximadamente 18 átomos de anillo. Preferentemente, los grupos heteroaromáticos y heteroalicíclicos contienen de 5 hasta aproximadamente 10 átomos de anillo, con la mayor preferencia 5, 6, o 7 átomos de anillo. Los grupos heteroaromáticos adecuados en los compuestos de la presente invención contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de átomos de N, O o S e incluyen, por ejemplo, cumarinilo, que incluye 8-cumarinilo, quinolilo, que incluye 8-quinolilo, isoquinolilo, piridilo, pirazinilo, pirazolilo, pirimidinilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, imidazolilo, indolilo, isoindolilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, pteridilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, piridazinilo, triazinilo, cinolinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridilo. Los grupos heteroalicílicos adecuados en los compuestos de la presente invención contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de N, O o S e incluyen, por ejemplo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tioxanilo, piperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptilo, 3H-indolilo, y quinolizinilo.
Los grupos mencionados anteriormente pueden ser sustituidos en una o más posiciones disponibles por uno o más grupos adecuados, tales como OR', =O, SR', SOR', SO2R', NO2, NHR', NR'R', =N-R', NHCo R', N(Co R')2, NHSO2R', NR'C(=NR')NR'R', CN, halógeno, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCONR'R', CONHR', CONR'R', OH protegido, amino protegido, SH protegido, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, y grupo heterocíclico sustituido o no sustituido, donde cada uno de los grupos R' se selecciona de manera independiente del grupo que consta de hidrógeno, OH, NO2, NH2, SH, CN, halógeno, COH, COalquilo, CO2H, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, y grupo heterocíclico sustituido o no sustituido. Donde dichos grupos se sustituyen por sí mismos, los sustituyentes se pueden seleccionar de la lista precedente. Además, cuando hay más de un grupo R' sobre el sustituyente, cada R' puede ser igual o diferente.
En los compuestos para la presente invención, los sustituyentes de halógeno incluyen F, Cl, Br, e I.
Más particularmente, en los compuestos de la presente invención, los grupos alquilo en las definiciones de R20, Ra, Rb, Rx, Ry y Rz pueden ser grupos de cadena recta o de alquilo de cadena ramificada que poseen de 1 a 12 átomos de carbono y, preferentemente, son un grupo alquilo que posee de 1 a 6 átomos de carbono, con mayor preferencia un grupo metilo, un grupo etilo, o un grupo /-propilo, y, con la mayor preferencia, un grupo metilo. En las definiciones de M y Q, pueden ser grupos de cadena recta o de cadena de alquilo ramificada que poseen de 1 a 6 átomos de carbono. Metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y butilo, que incluye n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ter-butilo, son grupos alquilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención.
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquenilo en las definiciones de Ra, Rb, y Rx son ramificados o no ramificados, y pueden tener uno o más enlaces dobles y de 2 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, poseen de 2 a 6 átomos de carbono, y, con mayor preferencia, son grupos alquenilo ramificados o no ramificados que poseen 2, 3 o 4 átomos de carbono. Etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1-metiletenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, y 3-butenilo son grupos alquenilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención.
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquinilo en las definiciones de Ra, Rb, y Rx son ramificados o no ramificados, y pueden tener uno o más triples enlaces y de 2 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, poseen de 2 a 6 átomos de carbono, y, con mayor preferencia, son grupos alquinilo ramificados o no ramificados que poseen 2, 3 o 4 átomos de carbono.
En los compuestos de la presente invención, los sustituyentes de halógeno en las definiciones de Rx, Ry y Rz incluyen F, Cl, Br e I, preferentemente Cl.
En los compuestos de la presente invención, el grupo heterocíclico saturado o insaturado, de 5 a 14 miembros, en las definiciones de Rx, es un grupo heterocíclico que posee uno o más anillos, que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos. El grupo heterocíclico es un grupo que puede ser un grupo heteroaromático o un grupo heteroalicíclico, de los cuales el último mencionado puede ser parcialmente insaturado, y tanto el grupo heterocíclico aromático como también alicíclico contienen de 1 a 3 anillos separados o fusionados. Preferentemente, el grupo heteroaromático y heteroalicíclico contienen de 5 a 10 átomos de anillo. Los grupos heteroaromáticos adecuados en los compuestos de la presente invención contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de átomos de N, O y S e incluyen, por ejemplo, quinolilo que incluye 8-quinolilo, isoquinolilo, cumarinilo, que incluye 8-cumarinilo, piridilo, pirazinilo, pirazolilo, pirimidinilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, oxazolilo, imidazolilo, indolilo, isoindolilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, piridazinilo, triazinilo, cinolinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridilo. Los grupos heteroalicíclicos adecuados en los compuestos de la presente invención contienen uno, dos, o tres heteroátomos seleccionados de átomos de N, O y S e incluyen, por ejemplo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tioxanilo, piperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptilo, 3H-indolilo, y quinolizinilo.
En los compuestos de la presente invención, el grupo arilo en la definición de Rx y R20 es un compuesto de un único anillo o de múltiples anillos que contienen grupos arilo separados y/o fusionados, posee de 6 a 18 átomos de anillo y es opcionalmente sustituido. Los grupos arilo típicos contienen de 1 a 3 anillos separados o fusionados. Preferentemente, los grupos arilo contienen de 6 a 12 átomos de anillos de carbono. Los grupos arilo particularmente preferidos incluyen fenilo sustituido o no sustituido, naftilo sustituido o no sustituido, bifenilo sustituido o no sustituido, fenantrilo sustituido o no sustituido y antrilo sustituido o no sustituido y, con la mayor preferencia, fenilo sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes son como se indicaron anteriormente.
En los compuestos de la presente invención, los grupos aralquilo en las definiciones de Rx, Ry y Rz comprenden un grupo alquilo como se definió y ejemplificó anteriormente que se encuentra sustituido por uno o más grupos arilo como se definió y ejemplificó anteriormente. Los ejemplos preferidos incluyen bencilo opcionalmente sustituido, feniletilo opcionalmente sustituido y naftilmetilo opcionalmente sustituido.
En los compuestos de la presente invención, los grupos aralquiloxi en las definiciones de Rx comprenden un grupo alcoxi que posee de 1 a 12 átomos de carbono que está sustituido con uno o más grupos arilo de acuerdo con lo definido y ejemplificado anteriormente. Con preferencia, la fracción alcoxi posee de 1 a 6 átomos de carbono y el grupo arilo contiene de 6 hasta aproximadamente 12 átomos de anillos de carbono, y con la mayor preferencia, el grupo aralquiloxi es benciloxi opcionalmente sustituido, feniletoxi opcionalmente sustituido y naftilmetoxi opcionalmente sustituido.
En los compuestos de la presente invención, los grupos heterocicloalquilo en las definiciones de Ry y Rz comprenden un grupo alquilo como se definió y ejemplificó anteriormente que se sustituye con uno o más grupos heterociclilo de acuerdo con lo definido y ejemplificado anteriormente. Con preferencia, los grupos heterocicloalquilo comprenden un grupo alquilo que posee de 1 a 6 átomos de carbono y que se sustituye con un grupo heterociclilo que posee de 5 a 10 átomos de anillo en 1 o 2 átomos de anillo y puede ser aromático, parcial o totalmente saturado. Con mayor preferencia, los grupos heterocicloalquilo comprenden un grupo metilo o etilo sustituido con un grupo heterociclilo seleccionado del grupo que consta de pirrolidinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tetrahidrofuranilo, oxanilo, tianilo, 8-quinolilo, isoquinolilo, piridilo, pirazinilo, pirazolilo, pirimidinilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, isotiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, oxazolilo y bencimidazol.
En los compuestos de la presente invención, los grupos alquileno en la definición de R19 son grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 1 a 12 átomos de carbono y los grupos alquileno en las definiciones de M, X, T, y R30 son grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 1 a 6 átomos de carbono. Preferentemente, los grupos alquileno en la definición de R19 son grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 1 a 8 átomos de carbono, con mayor preferencia grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 1 a 6 átomos de carbono. Para M, se prefieren grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 1 a 3 átomos de carbono. En la definición de X, los grupos alquileno en la definición de X son, preferentemente, grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 2 a 4 átomos de carbono. Para T, se prefieren grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 2 a 4 átomos de carbono. En la definición de R30, se prefieren grupos alquileno rectos o ramificados que poseen de 2 a 4 átomos de carbono, con la mayor preferencia un grupo alquileno recto que posee 3 átomos de carbono. A los efectos de evitar cualquier duda, el término "alquileno" se usa para referirse a grupos alcandiilo.
En los compuestos de la presente invención, los grupos carbociclo en las definiciones de R19 y M son grupos cicloalquilo que poseen de 3 a 8 átomos de carbono que poseen dos enlaces covalentes en cualquier posición sobre el anillo cicloalquilo que conecta el grupo cicloalquilo con el resto del conjugado de fármaco. Preferentemente, los grupos carbociclo en las definiciones de R19 y M son grupos cicloalquilo que poseen de 3 a 7 átomos de carbono, y, con mayor preferencia, grupos carbociclo que poseen de 5 a 7 átomos de carbono.
En los compuestos de la presente invención, los grupos arileno en la definición de R19 son grupos arilo que poseen de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos que poseen dos enlaces covalentes en cualquier posición en el sistema de anillo aromático que conecta los grupos arileno con el resto del conjugado de fármaco. Preferentemente, los grupos arileno en la definición de R19 son grupos arilo que poseen de 6 a 12 átomos de carbono en uno o más anillos que poseen dos enlaces covalentes en cualquier posición en el sistema de anillo aromático, y, con la mayor preferencia, son grupos fenileno.
En los compuestos de la presente invención, los grupos heterociclo en la definición de R19 son grupos heterociclilo que contienen de 1 a 3 anillos separados o fusionados que poseen de 5 a 14 átomos de anillo y que comprenden al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, donde hay dos enlaces covalentes en cualquier posición sobre el sistema de anillo de dichos grupos heterocíclicos. Los grupos heterocíclicos son grupos que pueden ser grupos heteroaromáticos o grupos heteroalicíclicos (de los cuales los grupos heteroalicíclicos pueden ser parcialmente insaturados). Preferentemente, los grupos heterociclo en la definición de R19 son grupos heterocíclicos que contienen de 1 a 3 anillos separados o fusionados que poseen de 5 a 12 átomos de anillo y que comprenden al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, donde hay dos enlaces covalentes en cualquier posición en el sistema de anillo de dichos grupos heterocíclicos.
Cuando existen más de un sustituyente opcional Rx, Ry o Rz sobre un sustituyente, cada sustituyente Rx puede ser igual o diferente, cada sustituyente Ry puede ser igual o diferente y cada Rz puede ser igual o diferente.
En una forma de realización, D es un compuesto de fórmula I o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000011_0001
donde:
Y es -NH- u - O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de-CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
En otra forma de realización, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula IC, o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000012_0001
donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
Rb se selecciona entre alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
En otra realización más, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula ID o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000012_0002
donde:
Y es -O-;
R1 es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
Rb se selecciona entre alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
En otra realización más, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula IE o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000013_0001
donde:
Y es -NH- u -O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)R;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R 4 es -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
y Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido
En incluso otra forma de realización, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula IA, o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000013_0002
donde:
Y es NH- u -O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R 3 es hidrógeno;
R 4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- y
Ra se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C1-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C1-C12 sustituido o no sustituido.
En otra realización más, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de formula IB o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000014_0001
donde:
Y es -NH- u -O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R3 es un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
En incluso otra forma de realización, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula IF, o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000014_0002
donde:
Y es -NH- u -O-;
R1 es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra;
R 3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R 4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido y
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido, y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
En incluso otra forma de realización, el compuesto de fórmula I puede ser un compuesto de fórmula IG o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000015_0001
donde:
Y es -NH- u - O-;
Ri es -OH o -CN;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- y
Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
Los compuestos preferidos de los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, o IG, son aquellos que poseen la fórmula general a o b, o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000015_0002
A los efectos de evitar cualquier duda, los compuestos mencionados anteriormente pueden ser la fracción de fármaco D y se encuentran unidos covalentemente por medio de un grupo hidroxi o amina a (X)b si hubiere alguno, (AA)w si hubiere alguno, (T)g si hubiere alguno, o a (L). Por ende, cuando se encuentra conjugado, un enlace covalente reemplaza un protón sobre un grupo hidroxi o amina en el compuesto.
Los compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
y Ri ; R2; R3; R4; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Los compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
y Ri ; R2; R3; R4; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, ID, IE, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, e IGb, donde:
Ri es -OH;
e Y; R2; R3; R4; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, la, lAa, IBa, ICa, IDa, lEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, e IFb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R2 de mayor preferencia es acetilo;
e Y; Ri ; R3; R4 y Rb; son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, o IGb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Rb particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Los R3 de mayor preferencia son hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
e Y; Ri ; R2; R4 y Ra son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. El R4 más preferido es -CH2O-;
e Y; Ri ; R2; R3; Ra; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
y R2; R3; R4; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. El Ra particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R2 de mayor preferencia es acetilo;
y Ri ; R3; R4 y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo Ci -C6 sustituido o no sustituido. Rb de particular preferencia se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R3 de mayor preferencia es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 más preferido;
y Ri ; R2; R4 y Ra son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, ICa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. De mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y Ri ; R2; R3; Ra; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. De mayor preferencia, R2 es acetilo;
y R3; R4 y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Rb particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R3 de mayor preferencia es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y R2; R4 y Ra son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. De mayor preferencia R4 es -CH2O-;
y R2; R3; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb y IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, la, lAa, IBa, ICa, lEa, IFa, Ib, lAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Ra particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R2 de mayor preferencia es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Rb particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. R3 de mayor preferencia es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y Ri y R4 son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, ICa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Ra particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido o n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y terc-butilo sustituido o no sustituido. El R2 de mayor preferencia es acetilo;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. El R4 de mayor preferencia es -CH2O-;
y Ri ; R3; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Rb particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Los R3 de mayor preferencia son hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 más preferido;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH-, para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. R4 de mayor preferencia es -CH2O-;
y Ri ; R2; y Ra; son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. De preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y R4 es como se definió anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R4 se selecciona de -CH2O-, y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. De mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y R3; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia R4 puede ser be -CH2NH-. El R4 de mayor preferencia es -CH2O-;
y Ri es como se definió anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, la, lAa, IBa, ICa, lEa, IFa, Ib, lAb, IBb, ICb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con particular preferencia, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, o IGb; y R4 es CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R1 es -OH;
y R2; R3; R4; Ra y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
y Ri ; R3; R4 y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y terc-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y Ri ; R2; R4 y Ra son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y Ri ; R2; R3; Ra; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, la, lAa, IBa, IDa, lEa, IFa, Ib, lAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
y R3; R4 y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y R2; R4 y Ra son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y R2; R3; Ra; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y terc-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y Ri y R4 son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y Ri ; R3; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y Ri ; R2; y Ra; son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
y R4 es como se definió anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y R3; y Rb son como se definieron anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y terc-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-;
y Ri es como se definió anteriormente.
Otros compuestos preferidos incluyen los compuestos de fórmula general I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
Ri es -OH;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb; donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Ra se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; y R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb; donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Con preferencia en particular, Rb se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia;
R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con mayor preferencia, R4 puede ser -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-.
Los siguientes sustituyentes preferidos (donde los grupos de sustituyentes posibles lo permitan( se aplican a los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, ICa, IDa, IEa, iFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb y IGb:
En los compuestos de la presente invención, Ri particularmente preferido es -OH.
En los compuestos de la presente invención, R2 particularmente preferido es un grupo -C(=O)Ra donde Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Ra particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, n-butilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con la mayor preferencia, R2 es acetilo.
En los compuestos de la presente invención, R3 particularmente preferido es hidrógeno o un grupo -ORb, donde Rb es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido. Rb particularmente preferido se selecciona de metilo sustituido o no sustituido, etilo sustituido o no sustituido, n-propilo sustituido o no sustituido, isopropilo sustituido o no sustituido, nbutilo sustituido o no sustituido, isobutilo sustituido o no sustituido, sec-butilo sustituido o no sustituido y ter-butilo sustituido o no sustituido. Con mayor preferencia, R3 es hidrógeno y metoxi, de los cuales hidrógeno es el grupo R3 de mayor preferencia.
En los compuestos de la presente invención, R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-.
En los compuestos de fórmula general I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH- para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IFb, o IGb; y R4 es -CH2NH- para los compuestos de fórmula IE, IEa o IEb. Con la mayor preferencia, R4 es -CH2O-.
Se prefieren particularmente los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa cuando R4 es -CH2O- y los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb cuando R4 es -CH2NH-.
En los compuestos de la presente invención, con preferencia en particular, Y es -NH-.
Alternativamente, en los compuestos de la presente invención, con preferencia en particular, Y es -O-.
Los compuestos preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen:
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IFb, e IGb, donde:
R4 es -CH2O-.
Se prefieren particularmente los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, e IGa y/o compuestos en los que R4 es -CH2O-.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R4 es -CH2NH-.
Se prefieren particularmente los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Los compuestos particularmente preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen:
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, y IGb, donde:
Y es -NH- y
R4 es -CH2O-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa y/o compuestos en los que R4 es -CH2O-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, IDb, IFb, e IGb, donde: Y es -O- y
R4 es -CH2O-.
Se prefieren más aún, los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa y/o los compuestos en los que R4 es -CH2O-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH- y
R4 es -CH2NH-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, ICb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O- y
R4 es -CH2NH-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, IDb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IFb, IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O-;
Ra se selecciona de hidrógeno, y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa y/o los compuestos en los que R4 es -CH2O-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno, y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, lAb, IBb, ICb, IDb, lEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Los compuestos de mayor preferencia de acuerdo con la presente invención incluyen:
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, la, lAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IF, IG, Ia, ICa, IFa, IGa, Ib, ICb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O-;
Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido; y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula la, IAa, o IBa, ICa, IFa, IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, la, IAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, IDb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IF, IG, Ia, IDa, IFa, IGa, Ib, IDb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O-;
Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido; y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula la, IAa, IBa, IDa, IFa, o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, ICa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, lEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula Ib, lAb, IBb, ICb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, la, lAa, IBa, IDa, lEa, IFa, Ib, lAb, IBb, IDb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH-;
Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula Ib, lAb, IBb, IDb, IEb, IFb, IGb y/o compuestos en los que R4 es CH2NH-.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IFb, e IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O-;
Ra es un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido; y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es un grupo -ORb para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH-;
Ra es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido y
Rb es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
De mayor preferencia en particular son los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Los compuestos de mayor preferencia en particular de acuerdo con la presente invención incluyen:
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o metoxi para los compuestos de fórmula I, IC, IF, IG, Ia, ICa, IFa, IGa, Ib, ICb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, lAa o lAb y R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O- y
Ra es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula la, lAa, IBa, ICa, IFa, IGa.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, IG, la, lAa, IBa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, IDb, IFb, e IGb, donde: Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o metoxi para los compuestos de fórmula I, ID, IF, IG, Ia, IDa, IFa, IGa, Ib, IDb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O-; y
Ra es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula la, IAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, ICa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, lEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o metoxi para los compuestos de fórmula I, IC, IE, IF, IG, Ia, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH- y
Ra es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, lAb, IBb, ICb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, IG, la, IAa, IBa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, IDb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o metoxi para los compuestos de fórmula I, ID, IE, IF, IG, Ia, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IDb, IEb, IFb, o IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH- y
Ra es alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, lAb, IBb, IDb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, IG, la, IAa, IBa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, IDb, IFb, e IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IF, la, lAa, IBa, ICa, IDa, IFa, Ib, lAb, IBb, ICb, IDb, o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o metoxi para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IFb, e IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2O- y
Ra se selecciona de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y butilo, que incluye n-butilo, sec-butilo, isobutilo y ter-butilo.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula la, lAa, IBa, ICa, IDa, lEa, IFa, o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb, donde:
R2 es un grupo -C(=O)Ra para los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb o IFb; y R2 es acetilo para los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb;
R3 es hidrógeno o un metoxi para los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, y IGb; R3 es hidrógeno para los compuestos de fórmula IA, IAa o IAb; o R3 es metoxi para los compuestos de fórmula IB, IBa o IBb;
R4 es -CH2NH- y
Ra se selecciona de metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y butilo, que incluye n-butilo, sec-butilo, isobutilo y terbutilo.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb y/o los compuestos en los que R4 es -CH2NH-.
Los compuestos de mayor preferencia aún de acuerdo con la presente invención incluyen:
• Compuestos de fórmula I, IA, IC, IF, IG, Ia, IAa, ICa, IFa, IGa, Ib, IAb, ICb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2O-.
De mayor preferencia aún son los compuestos de fórmula Ia, IAa, ICa, IFa, o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, ID, IF, IG, Ia, IAa, IDa, IFa, IGa, Ib, IAb, IDb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2O-.
De mayor preferencia aún son los compuestos de fórmula Ia, IAa, IDa, IFa, o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IC, IE, IF, IG, Ia, IAa, ICa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, ICb, IEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -NH-;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2NH-.
De mayor preferencia aún son los compuestos de fórmula Ib, lAb, ICb, lEb, IFb, o IGb.
• Compuestos de fórmula I, IA, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IDb, lEb, IFb, e IGb, donde:
Y es -O-;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2NH-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, lAb, IDb, lEb, IFb, o IGb.
• Compuestos de fórmula I, IA, IC, ID, IF, IG, la, lAa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, ICb, IDb, IFb, e IGb, donde:
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2O-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula la, lAa, ICa, IDa, IFa o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IC, ID, IF, IG, la, lAa, ICa, IDa, IFa, IGa, Ib, lAb, ICb, IDb, IFb, y IGb donde Ri es -OH;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno y
R4 es -CH2O-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula la, lAa, ICa, IDa, IFa o IGa.
• Compuestos de fórmula I, IA, IC, ID, IE, IF, IG, la, lAa, ICa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, ICb, IDb, lEb, IFb, e IGb, donde:
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno; y
R4 es -CH2NH-.
Se prefieren más aún los compuestos de fórmula Ib, lAb, ICb, IDb, lEb, IFb, o IGb.
• Un compuesto de acuerdo con la presente invención de fórmula:
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Se prefiere en particular un compuesto de fórmula:
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Un compuesto de acuerdo con la presente invención de fórmula:
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Se prefiere particularmente un compuesto de fórmula:
Figure imgf000037_0002
Figure imgf000038_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Se prefiere más particularmente un compuesto de fórmula:
Figure imgf000038_0002
Figure imgf000039_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Los compuestos más preferidos aún de acuerdo con la presente invención son los compuestos de fórmula:
Figure imgf000040_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Otros compuestos preferidos de acuerdo con la presente invención son compuestos de fórmula:
Figure imgf000040_0002
Figure imgf000041_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
En otra forma de realización, de acuerdo con la presente invención, los compuestos preferidos son compuestos de fórmula:
Figure imgf000041_0002
Figure imgf000042_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Otros compuestos preferidos incluyen un compuesto de fórmula:
Figure imgf000042_0002
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000044_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
Otros compuestos preferidos incluyen un compuesto de fórmula:
Figure imgf000044_0002
Figure imgf000045_0001
o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables, donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA) w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
En las formas de realización preferentes adicionales, se combinan las preferencias descriptas anteriormente para los diferentes sustituyentes. La presente invención se refiere también a tales combinaciones de sustituciones preferentes (cuando los grupos de sustituyentes posibles lo permitan) en compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, o IGb de acuerdo con la presente invención.
A los efectos de evitar dudas, los compuestos mencionados anteriormente pueden ser la fracción de fármaco D y se encuentran covalentemente unidos por medio de un grupo hidroxi o amina a (X)b si hubiere alguno, (AA) w si hubiere alguno, (T)g si hubiere alguno, o a (L). Por ende, cuando se encuentra conjugado, un enlace covalente reemplaza un protón en un grupo hidroxi o amina en el compuesto.
Los conjugados de fármacos preferidos de acuerdo con la presente invención se indican a continuación. Las definiciones preferentes de (X)b, (AA) w , (T)g, y (L) tal como se establecen a continuación son aplicables a todos los compuestos de fracción de fármaco D descriptos anteriormente. Los conjugados de fármacos preferidos de acuerdo con la presente invención incluyen:
• un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L es un grupo enlazante seleccionado del grupo que consta de:
Figure imgf000045_0002
Figure imgf000046_0001
donde:
las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a Ab (la línea ondulada hacia la derecha) y a (T)g si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (X)b si hubiere alguno, o a D (la línea ondulada hacia la izquierda);
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C12 -, -carbociclo C3-C8, -O-(alquileno C1-C12), arileno C6-C18 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 - arileno C 6 -Ci 8 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-C18 -alquileno C1-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 -(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C 3 -C 8 )-alquileno C1-C12-, -heterociclo C5-C14 - donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci -Ci2-(heterociclo C5-C14)- donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-C14)- alquileno C1-C12 - donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2)r-, y -CH2-(OCH2CH2)r-, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, sea que se encuentren solos o unidos a otra fracción, la cadena de carbono puede sustituirse opcionalmente por uno o más sustituyentes Rx;
R30 es un grupo alquileno C1-C6;
M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C6 -, -alquileno Ci -C 6 -(carbociclo C3-C8)-, -(CH2CH2O)s-, -alquileno C1-C6 -(carbociclo C 3 -C 8 )-CON(H o alquilo C1-C6)- alquileno C1-C6 -, fenileno, que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, fenileno - alquileno C1-C6 - donde la fracción fenileno puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes Rx y alquileno C1-C6 -CON(H o alquilo C1-C6) alquileno C1-C6 -;
Q se selecciona del grupo que consta de -N(H o alquilo Ci -C 6 )fenileno- y -N(H o alquilo Ci -C6)-(CH2)s;
r es un número entero de 1 a 10; y
s es un número entero de 1 a 10.
• un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L se selecciona del grupo que consta de:
Figure imgf000046_0002
donde:
las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a Ab (la línea ondulada hacia la derecha) y a (T)g si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (X)b si hubiere alguno, o a D (la línea ondulada hacia la izquierda);
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C12 -, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C12 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, alquileno -C1-C12 - arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-C12 - alquileno C1-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, - heterociclo C5-C12 - donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, - alquileno C1-C12 -(heterociclo C5-C12)- donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C 5 -Ci 2 )-alquileno C1-C12 - donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2)r-, y -CH2-(OCH2CH2V- y donde en cada uno de los sustituyentes alquileno, sea que se encuentren solos o unidos a otra fracción, la cadena de carbono puede estar opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes Rx;
R30 es un grupo -alquileno C1-C6-;
M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C6 -, -alquileno C1-C6 -(carbociclo C3-C8)- y fenileno que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx; y
r es un número entero de 1-6.
• un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
Figure imgf000047_0001
donde:
X y T son grupos de extensión de acuerdo con lo definido en la presente;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido como se define en la presente;
w es un número entero de 0 a 12;
b es un número entero de 0 o 1;
g es un número entero de 0 o 1;
donde b+g+w opcionalmente no es 0 ;
D es una fracción de fármaco;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno;
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI) respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20 ;
Ri 9 se selecciona de - alquileno C1-C8 -, -O-(alquileno C1-C8), -alquileno C1-C8 -arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, y -arileno C6-C12 -alquileno C1-C8 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, donde en cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, ya sea solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
R30 es un grupo -alquileno C2-C4 -; y
M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C3 - y -alquileno C1-C3 -(carbociclo C5-C7)-.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (Vi):
Figure imgf000048_0001
donde:
X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
w es un número entero de 0 a 12;
b es un número entero de 0 o 1;
g es un número entero de 0 o 1;
donde b+g+w opcionalmente no es 0 ;
D es una fracción de fármaco;
Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno;
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI), respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20 ;
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C6 -, fenileno- alquileno C1-C6 - donde el grupo fenileno puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, ya sea solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos arilo que poseen de 6 a 12 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, y, preferentemente, R19 es un grupo -alquileno C1-C6;
R30 es un grupo -alquileno C2-C4 -; y
M es -alquileno C1-C3 -(carbociclo C5-C7)-.
Se prefiere que en la definición del conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, L sea tal como se definió en las definiciones preferentes para dicho grupo mencionado anteriormente y (AA)w sea de fórmula (II):
Figure imgf000049_0001
donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, o a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha); y
R21, en cada caso, se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, bencilo, p-hidroxibencilo, -CH2OH, -CH(OH)CH 3 , -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2 , -(CH 2 ) 3 NH 2 , -(CH 2 ) 3 NHCOCH 3 , -(CH 2 ) 3 NHCHO, -(CH 2 ) 4 NHC(=NH)NH 2 , -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH 2 ) 4 NHCOCH 3 , -(CH 2 ) 4 NHCHO, -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , -(CH 2 ) 4 NHCONH 2 , -CH 2 CH 2 CH(OH)CH 2 NH 2 , 2-piridilmetilo-, 3-piridilmetilo-, 4-piridilmetilo-, fenilo, ciclohexilo,
Figure imgf000049_0002
y w es un número entero de 0 a 12.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención, donde L es como se definió en las definiciones preferentes para dicho grupo mencionado anteriormente y (AA)w es de fórmula (II), donde:
R21 se selecciona, en cada caso, del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, sec-butilo, bencilo, indolilmetilo, -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2 y -(CH 2 ) 4 NHC(=NH)NH 2 ; y
w es un número entero de 0 a 6.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención, donde L es como se definió en las definiciones preferentes para dicho grupo mencionado anteriormente, donde w es 0 o 2, y cuando w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III) donde:
Figure imgf000050_0001
las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, o a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha); R22 se selecciona de metilo, bencilo, isopropilo, sec-butilo e indolilmetilo; y
R23 se selecciona de metilo, -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH 2 ) 3 NHCONH y -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2 .
En las formas de realización de la presente invención, b+g+w no es 0. En otras formas de realización, b+w no es 0. En incluso otras formas de realización, cuando w no es 0, entonces b es 1. Además, se prefiere que en la definición del conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, L y (AA)w sean tal como se definieron en las definiciones preferentes para esos grupos mencionados anteriormente y X sea un grupo de extensión seleccionado de:
donde D se conjuga por medio de un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
-COO-(alquileno Ci -C6)NH-;
-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
-COO-(alquileno Ci -C6)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
-COCH 2 NH-COCH 2 -NH-;
-COCH 2 NH-;
-COO-(alquileno Ci -C 6 )S-;
-COO-(alquileno Ci -C 6 )NHCO(alquileno Ci -C 6 )S-; o
donde D se conjuga por medio de un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
-CONH-(alquileno Ci -Cs)NH-;
-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
-CONH-(alquileno Ci -C6)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
-COCH 2 NH-COCH 2 -NH-;
-COCH 2 NH-;
-CONH-(alquileno Ci -C 6 )S-;
-CONH-(alquileno Ci -C 6 )NHCO(alquileno Ci -C 6 )S-; y
b es 0 o 1, preferentemente 1.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L y (AA)w son como se definieron en las definiciones preferentes para dichos grupos mencionados anteriormente y X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
-COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-;
-COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede estar opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano; -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-
-COCH 2 NH-COCH 2 -NH-;
-COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-;
-COO-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-; o
donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
-CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NH-;
-COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano; -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-
-COCH 2 NH-COCH 2 -NH-;
-CONH-(alquileno C 2 -C 4 )S-;
-CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno C 1 -C 3 )S-; y
b es 0 o 1, preferentemente 1.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L y (AA)w son como se definieron en las definiciones preferentes para dichos grupos mencionados anteriormente y X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
-COO-CH2-fenileno-NH--COO(CH 2 ) 3 NHCOOCH 2 -fenileno-NH-;
-COO(CH 2 ) 3 NH-;
-COO(CH 2 ) 3 -S-;
-COO(CH 2 ) 3 NHCO(CH 2 ) 2 S-; o
donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
-COO-CH2-fenileno-NH--CONH(CH 2 ) 3 NHCOOCH 2 -fenileno-NH-;
-CONH(CH 2 ) 3 NH-;
-CONH(CH 2 ) 3 -S-;
-CONH(CH2)3NHCO(CH2)2S-; y
b es 0 o 1, preferentemente 1.
un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L, (AA)w, y (X)b son como se definieron en las definiciones preferentes para dichos grupos mencionados anteriormente y T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
-CO-(alquileno Ci -C6)-NH-;
-CO-(alquileno Ci -C 6 )-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-;
-COO-(alquileno Ci -C 6 )-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-;
donde j es un número entero de 1 a 25, y
g es 0 o 1.
Un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L, (AA)w, y (X)b son como se definieron en las definiciones preferentes para dichos grupos mencionados anteriormente y T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
-CO-(alquileno Ci -C4)NH-
-CO-(alquileno Ci -C4)-[O-(alquileno C2-C4XL-NH-;
-COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-;
donde j es un número entero de 1 a 10; y
g es 0 o 1.
Un conjugado de fármaco de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención, donde L, (AA)w, y (X)b son como se definieron en las definiciones preferentes para dichos grupos mencionados anteriormente y T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
-CO-(alquileno Ci -C4)NH-
-CO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-;
-COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-;
donde j es un número entero de 1 a 5; y
g es 0 o 1.
Un conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde Ri es CN o OH en los compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb); Ri es OH en los compuestos de fórmulas IF, IFa y IFb, y, con mayor preferencia, R1 es CN.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, (IH), (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde R2 es C(=O)Ra, donde Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx, y, con mayor preferencia, R2 es acetilo.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde R3 es hidrógeno o un grupo -ORb en los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb); R3 es hidrógeno en los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; R3 es un grupo -ORb en los compuestos de fórmula IB, IBa, o IBb, donde Rb es un grupo alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx, y, con mayor preferencia, R3 es hidrógeno o metoxi. Con la mayor preferencia, R3 es hidrógeno.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula (IH), (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde Y es -NH- u - O-.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula (IH), (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde Z es -NH- u - O-, y, con mayor preferencia, Z es -NH-.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
Ri es -CN o -OH;
R2 es -C(=O)Ra, donde Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb en el que Rb es un grupo alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx,
Y es -NH- u -O-; y
Z es -NH- u -O-.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula (IHa) o (IHb) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
R1 es -CN o-OH;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o metoxi, más preferentemente hidrógeno;
Y es -NH- u -O- y
Z es -NH- u -O-.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D es un compuesto de fórmula (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
R1 es -CN;
R2 es acetilo;
R 3 es hidrógeno;
Y es -NH- u -O-; y
Z es -NH-.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D se selecciona de:
Figure imgf000054_0001
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde las líneas onduladas indican el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno o a (L).
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, y (T)g son como se definieron anteriormente y donde D se selecciona de:
Figure imgf000054_0002
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde las líneas onduladas indican el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno o a (L).
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un péptido de unión a antígenos.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo, un único anticuerpo de dominio o un fragmento del mismo de unión a antígenos.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo monoclonal, policlonal o un anticuerpo biespecífico y donde el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo deriva de cualquier especie, preferentemente un humano, ratón o conejo.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno que se selecciona del grupo que consta de un anticuerpo humano, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo quimérico, un anticuerpo glicosilado y un fragmento de unión a antígeno glicosilado.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígenos, donde el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo es un fragmento de unión a antígeno seleccionado del grupo que consta de un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab')2 y un fragmento Fv.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definieron anteriormente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígeno donde el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno es un anticuerpo monoclonal que se une inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas, antígenos virales, antígenos de células que producen anticuerpos autoinmunes asociados a una enfermedad autoinmune, antígenos microbianos y, preferentemente, un anticuerpo monoclonal que se une de manera imunoespecífica a antígenos de células cancerosas.
Otro conjugado de fármaco preferido de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención es uno en el que L, (AA)w, (X)b, (T)g y D son como se definen en la presente y la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Coltuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Lifastuzumab, Lorvotuzumab, Milatuzumab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Pinatuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Sofituzumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte del mismo inmunológicamente activa, donde, con preferencia, el anticuerpo se selecciona de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte del mismo inmunológicamente activa y, con mayor preferencia aún, Abciximab, Alemtuzumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denosumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Siltuximab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo. De los mencionados, se prefieren particularmente Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; o el anticuerpo se selecciona de Trastuzumab y el anticuerpo anti-CD13 o de un fragmento del mismo de unión a antígeno o de una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o de un fragmento del mismo de unión a antígeno o de una parte inmunológicamente activa del mismo.
Los conjugados de fármaco particularmente preferidos de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de acuerdo con la presente invención incluyen los siguientes:
(a) un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención, en el que:
L se selecciona del grupo que consta de:
Figure imgf000056_0001
donde:
las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a un Ab (la línea ondulada hacia la derecha) y a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno, o a (D) (la línea ondulada hacia la izquierda);
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C12-, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C12 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 - arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-C12 - alquileno C1-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -heterociclo C5-C12 - donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 -(heterociclo C5-C12)- donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-C12)- alquileno C1-C12 - donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2V y -CH2-(OCH2CH2)r-, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solos o junto con otra fracción, en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
R30 es un grupo -alquileno C1-C6 -;
M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C6 -, -alquileno C1-C6 -(carbociclo C3-C8)- y fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx;
r es un número entero de 1-6;
(AA)w es de fórmula (II):
Figure imgf000056_0002
donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
R21, en cada caso, se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, bencilo, p-hidroxibencilo, -CH2OH, -CH(OH)CH3 , -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2 , -(CH2)3NH2 , -(CH2)3NHCOCH3 , -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2 , -(CH2)4NH2 , -(CH2)4NHCOCH3 , -(CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2 , -(CH2)4NHCONH2 , CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2 -piridilmetilo, 3 -piridilmetilo, 4 -piridilmetilo, fenilo, ciclohexilo,
Figure imgf000057_0001
w es un numero entero de 0 a 12;
donde X es un grupo de extensión seleccionado de:
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-): -COO-(alquileno C i -C6)NH-, -COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-, -CO O -(alquileno Ci-C6)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COCH2-NH-, -COO-(alquileno Ci-Cs)S-, -COO-(alquileno C i-C 6)NHCO(alquileno C i-C 6)S-; o
donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-): -CONH-(alquileno C i-C 6)NH-, -COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-, -CONH-(alquileno Ci-C6)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COCH2NH-, -CONH-(alquileno C i-C 6)S-, y -CONH-(alquileno C i-C 6)NHCO(alquileno C i-C 6)S-;
b es 0 o 1, preferentemente 1;
donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno C i-C 6)-NH-, -CO-(alquileno C i-C 6)-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-, y -COO-(alquileno C i-C 6)-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 2 5 ;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, IH, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
R2 es C(=O)Ra, en compuestos de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, (IH), (IHa) o (IHb); R2 es acetilo en los compuestos de fórmula IG, IGa o IGb, donde Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb en los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb); R3 es hidrógeno en los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; R3 es un grupo -ORb en los compuestos de fórmula IB, IBa, o IBb, donde Rb es un grupo alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx;
la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígeno y se selecciona del grupo que consta de un anticuerpo humano, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo quimérico, un anticuerpo glicosilado un fragmento de unión a antígeno glicosilado; y n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos y se halla en el intervalo de 1 a 12.
(b) un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
Figure imgf000058_0001
donde:
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C8 -, -O-(alquileno C1-C8), -alquileno C1-C8 - arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx y -arileno C6-C12 - alquileno C1-C8 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solos o unidos a otra fracción en la cadena de carbono, puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
R30 es un grupo -alquileno C2-C4 -;
M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C3 - y -alquileno C1-C3 - carbociclo (C5-C7)-;
(AA)w es de fórmula (II)
Figure imgf000058_0002
donde:
las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
R21, en cada caso, se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, sec-butilo, bencilo, indolilmetilo, -(CH 2 ) 3 NHCONH 2, -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2 y -(CH 2 ) 4 NHC(=NH)NH 2 ;
w es un número entero de 0 a 6 ;
X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-): -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido opcionalmente por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-; o
donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-): -CONH-(alquileno C2-C4)NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido opcionalmente por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-;
b es 0 o 1, preferentemente 1;
donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno C i -C 4 )-NH-, -CO-(alquileno C1-C4HO-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 10;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco de fórmula I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, IH, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o metoxi en los compuestos de fórmula I, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, ICb, IDb, IEb, IFb, IGb, (IH), (IHa) o (IHb); R3 es hidrógeno en los compuestos de fórmula IA, IAa, o IAb; R3 es un grupo metoxi en los compuestos de fórmula IB, IBa, o IBb, preferentemente R3 es hidrógeno;
la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígenos, donde el anticuerpo o el fragmento de unión a antígenos es un anticuerpo monoclonal que se une inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas, antígenos virales, antígenos de células que producen anticuerpos autoinmunes asociadas a una enfermedad autoinmune, agentes microbianos, y, preferentemente, un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a antígenos de células cancerosas; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI), respecto de la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos y se halla en el intervalo de 3 a 8.
(c) un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
Figure imgf000059_0001
donde:
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C6 -, -fenileno- alquileno C1-C6 - donde el grupo fenileno puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes Rx seleccionado del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede sustituirse opcionalmente por uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos arilo que poseen de 6 a 12 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, y, preferentemente, R19 es un grupo alquileno C1-C6;
R30 es un grupo -alquileno C2-C4 -;
M es -alquileno C1-C3 -(carbociclo C5-C7)-;
w es 0 o 2 , y donde w es 2 , entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000060_0001
en la que las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
R22 se selecciona de metilo, bencilo, isopropilo, sec-butilo e indolilmetilo;
R23 se selecciona de metilo, -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH2>NHCONH2 y -(CH2>NHC(=NH)NH2;
X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido opcionalmente por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro o grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-CoCH2-NH-,-COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-;
b es 0 o 1, preferentemente 1;
donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C4)-NH-, -CO-(alquileno C1-C4HO-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 5;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco de fórmula I, IA, IC, ID, IE, IG, IH, la, lAa, ICa, IDa, lEa, IGa, Ib, lAb, ICb, IDb, lEb, IGb, (IHa) o (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
R1 es CN;
R2 es acetilo:
R 3 es hidrógeno;
Y es -NH- u - O-;
Z es -NH-;
• la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es un anticuerpo monoclonal seleccionado del grupo que consta de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Coltuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Lifastuzumab, Lorvotuzumab, Milatuzumab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Pinatuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Sofituzumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, donde, preferentemente, el anticuerpo se selecciona de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia aún, Abciximab, Alemtuzumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denosumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Siltuximab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo. De estos mencionados, se prefieren particularmente Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; o el anticuerpo se selecciona de Trastuzumab y el anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; y n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI), respecto de la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos y se halla en el intervalo de 3 a 5.
(d) Un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
Figure imgf000061_0001
donde:
R19 es -alquileno C2-C6 -;
R30 es un -alquileno C2-C4 -;
M es -alquileno C1-C3 -(carbociclo C5-C7)-;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000062_0001
donde R22 es isopropilo, R23 se selecciona de metilo y -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, o a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, y al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-;
b es 0 o 1, preferentemente 1; donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C4)-NH-, -CO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 5;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco seleccionada de:
Figure imgf000062_0002
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno, o a (L);
la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos se selecciona de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia, se selecciona de Trastuzumab y el anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI), respecto de la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos y se halla en el intervalo de 3 a 5.
(e) Un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención seleccionado de las fórmulas (IV), (V), y (VI):
Figure imgf000063_0001
donde:
Ri 9 es -alquileno C2-C6 -;
R30 es -alquileno C2-C4 -;
M es -alquileno C1-C3 -(carbociclo C5-C7)-;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000063_0002
donde R22 es isopropilo, R23 se selecciona de metilo y -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , y las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, y al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-;
b es 0 o 1, preferentemente 1;
donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C4)-NH-, -CO-(alquileno Ci -C4)-[O-(alquileno C2-C4)]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C4)-[O-(alquileno C2-C4)]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 5;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco seleccionado de:
Figure imgf000064_0001
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables ; donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno, o a (L);
la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos se selecciona de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia, se selecciona de T rastuzumab y del anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), (V) o (VI), respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 3 a 5.
(f) Un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención de fórmula (IV):
Figure imgf000064_0002
donde:
R19 es alquileno C2-C5 -;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000065_0001
donde R22 es isopropilo, R23 se seleccio na de metilo y -( C H 2)3N H C O N H 2, y las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, y al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha); y
X es un grupo -C O O C H 2-fe n ile n o -N H ;
b es 1 ;
T es un grupo de extensión de fórmula -C O -(a lq u ile n o C i - C 4)-[O -(alquileno C 2- C 4)]4-N H -;
g es 0 o 1 ;
o de fórmula (V)
Figure imgf000065_0002
donde M es -m etil-ciclohexileno-;
b es 1 ;
w es 0 ;
X es un grupo de extensión seleccio nado de -( C H 2)3S - y -( C H 2)3N H C O (C H 2)2S -g es 0 ;
o de fórmula (VI)
Figure imgf000065_0003
donde R19 es -alquileno C2-C5 -;
R30 es -alquileno C3 -;
w es 0 o 2 , y donde w es 2 , entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000066_0001
donde R22 es isopropilo, R23 se selecciona de metilo y -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , y las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b (la línea ondulada hacia la izquierda) a (T)g si hubiere alguno, y al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha); y
X es un grupo -COOCH2-fenileno-NH;
b es 1;
T es un grupo de extensión de fórmula -CO-(alquileno Ci -C4)-[O-(alquileno C2-C4)]4-NH-;
g es 0 o 1;
D es una fracción de fármaco seleccionada de:
Figure imgf000066_0002
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b;
la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos es Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia, se selecciona de Trastuzumab y el anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; y
n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-], donde L es como se definió en la fórmula (IV), respecto de la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígenos y se halla en el intervalo de 3 a 5, y, con preferencia, 4.
g) un conjugado de fármaco-anticuerpo de acuerdo con la presente invención, seleccionado del grupo que consta de:
Figure imgf000067_0001
Figure imgf000068_0001
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y cada
Figure imgf000068_0002
se selecciona de manera independiente de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia, se selecciona de Trastuzumab y el anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
En una forma de realización, los conjugados de fármaco-anticuerpo de acuerdo con la presente invención excluyen:
Figure imgf000068_0003
Con mayor preferencia, el conjugado de fármaco-anticuerpo se selecciona del grupo que consta de:
Figure imgf000069_0001
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000069_0002
se selecciona de T rastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, con mayor preferencia es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000069_0003
donde n es de 2 a 6, más preferentemente 3, 4, o 5 y
Figure imgf000069_0004
es trastuzumab o fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000069_0005
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000070_0001
se selecciona de Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, con mayor preferencia es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000070_0002
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000070_0003
es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000070_0004
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000070_0005
es Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y
Figure imgf000071_0001
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000071_0002
se selecciona de Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, con mayor preferencia es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
h) un conjugado de fármaco-anticuerpo de acuerdo con la presente invención, seleccionado del grupo que consta de:
Figure imgf000071_0003
Figure imgf000072_0001
Figure imgf000073_0001
se selecciona de manera independiente de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con mayor preferencia, se selecciona de Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, particularmente Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; o
Figure imgf000074_0001
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000074_0002
es un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
Con mayor preferencia, el conjugado de fármaco-anticuerpo se selecciona del grupo que consta de:
Figure imgf000074_0003
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000074_0004
es un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
Figure imgf000074_0005
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000075_0001
es Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000075_0002
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000075_0003
es Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000075_0004
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000075_0005
es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000075_0006
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000076_0001
es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000076_0002
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000076_0003
es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000076_0004
es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000077_0001
es T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000077_0002
es T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000077_0003
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000077_0004
es T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Figure imgf000078_0001
donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
Figure imgf000078_0002
es T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo,
Con preferencia en particular, el conjugado de fármaco-anticuerpos de acuerdo con la presente invención debería hallarse en forma aislada o purificada.
Los compuestos preferidos de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención incluyen:
• un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li en el que cada D, X, AA, T, Li , b, g y w son como se definen en la presente invención.
• un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención, en el que:
L1 es un enlazante de fórmula:
Figure imgf000078_0003
donde:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno, o a D;
R19 se selecciona de -alquileno C1-C12 -, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C12 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 - arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-C12 - alquileno C1-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, -heterociclo C5-C12 - donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci -C i2-(heterociclo C5-C12)- donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C 5 -C i 2 )-alquileno C1-C12 - donde el grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y que comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2V- y -CH2-(OCH2CH2)r-, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o junto con otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
r es un número entero de 1-6 ; y
cada D, Rx, X, AA, T, b, g y w es como se definió en la presente invención.
un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención, donde:
Li es un enlazante de fórmula:
Figure imgf000079_0001
donde:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno, o a D;
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C8 -, -O-(alquileno C1-C8), -alquileno C1-C8 - arileno C6-C12 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, y -arileno C6-C12 - alquileno C1-C8 - donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes Rx, donde cada uno de los sustituyentes mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
(AA)w es de fórmula (II):
Figure imgf000079_0002
donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b, si hubiere alguno, a D (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, a Li (la línea ondulada hacia la derecha);
donde R21 se selecciona, en cada caso, del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, sec-butilo, bencilo, indolilmetilo, -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 , -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH2>NHC(=NH)NH y -(CH 2 ) 4 NHC-(=NH)NH 2 , y w es un número entero de 0 a 6 ;
X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-): -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH, donde el grupo fenileno puede ser sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -COO-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -COO-(alquileno C 2 -C 4 )-NHCO(alquileno Ci -C 3 )S- o
donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-): -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NH-, -COO-CH2-fenileno-NH-, donde el grupo fenileno puede ser sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NH-COO-CH 2 -(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-, -COCH2NH-COCH2-NH-, -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )S-, y -CONH-(alquileno C 2 -C 4 )NHCO(alquileno Ci -C 3 )S-;
T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C 4 )-NH-; -CO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH- y -COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 10; b es 0 o 1;
g es 0 o 1 y
D es una fracción de fármaco de fórmulas I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, la, lAa, IBa, ICa, IDa, lEa, IFa, IGa, Ib, lAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, e IGb; y se encuentra covalentemente unida por medio de un grupo hidroxi o amina; o es una fracción de fármaco de fórmula (IHa) o fórmula (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, donde:
Figure imgf000080_0001
donde las líneas onduladas de (IHa) y (IHb) indican el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno, o a Li ;
Ri es -OH o -CN;
R2 es un grupo -C(=O)Ra, donde Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx;
R3 es hidrógeno o un grupo -ORb, donde Rb es un grupo alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido, donde los sustituyentes opcionales son uno o más sustituyentes Rx.
Y es -NH- u - O-; y
Z es -NH- u - O-.
un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención, donde:
Li es un grupo de fórmula:
Figure imgf000080_0002
donde:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno, o a D;
Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C6 -, fenileno- alquileno C1-C6 - donde el grupo fenileno puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes Rx seleccionado del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos arilo que poseen de 6 a 12 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, y, preferentemente, R19 es un grupo alquileno C1-C6;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000081_0001
donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a X (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o a Li (la línea ondulada hacia la derecha);
R22 se selecciona de metilo, bencilo, isopropilo, sec-butilo e indolilmetilo;
R23 se selecciona de metilo, -(CH 2 ) 4 NH 2 , -(CH 2 ) 3 NHCONH y -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2 ;
X es un grupo de extensión seleccionado de:
donde D se conjuga mediante un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-): -COO-CH2-fenileno-NH-, -COO(CH 2 ) 3 NHCOO-CH 2 -fenileno-NH, -COO-(CH 2 ) 3 )NH-, -COO(CH 2 ) 3 -S-, y -COO-(CH 2 ) 3 NHCO-(CH 2 ) 2 S-, o donde D se conjuga mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-): -COO-CH2-fenileno-NH-, -CONH(CH 2 ) 3 NHCOOCH 2 -fenileno-NH-, -CONH(CH 2 ) 3 NH-, -CONH(CH 2 ) 3 -S-, y -CONH(CH 2 ) 3 NHCO(CH 2 ) 2 S-. donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C 4 )-NH-, -CO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C 4 )-[O-(alquileno C 2 -C 4 )]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 5;
b es 0 o 1;
g es 0 o 1 y
D es una fracción de fármaco de fórmulas I, IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, Ia, IAa, IBa, ICa, IDa, IEa, IFa, IGa, Ib, IAb, IBb, ICb, IDb, IEb, IFb, y IGb; y se encuentra unida covalentemente por medio de un grupo hidroxi o amina; o es una fracción de fármaco de fórmula (IHa) o fórmula (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000081_0002
donde las líneas onduladas de (IHa) y (IHb) indican el punto de unión covalente;
R1 es -CN o -OH;
R2 es acetilo;
R3 es hidrógeno o metoxi, preferentemente hidrógeno;
Y es -NH- u -O-; y
Z es -NH- u -O-.
un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención, en la que:
Li es un enlazante de fórmula:
Figure imgf000082_0001
donde:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno, o a D;
Ri 9 es -alquileno C2-C6 -;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000082_0002
R22 es isopropilo, R23 se selecciona de metilo y -(CH2)3NHCONH2, donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a X (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o a Li (la línea ondulada hacia la derecha);
X es un grupo de extensión seleccionado de -COO-CH2-fenileno-NH-, -COO(CH2)3NHCOO-CH2-fenileno-NH, -COO-(CH2)3)NH-, -COO(CH2)3-S-, y -COO-(CH2)3NHCO-(CH2)2S-;
donde T es un grupo de extensión seleccionado de -CO-(alquileno Ci -C4)-NH-, -CO-(alquileno C1-C4HO-(alquileno C2-C4)]j-NH-, y -COO-(alquileno Ci -C4)-[O-(alquileno C2-C4)]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 5;
b es 0 o 1;
g es 0 o 1 y
D es una fracción de fármaco seleccionada de:
Figure imgf000082_0003
y
Figure imgf000083_0001
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente.
un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li de acuerdo con la presente invención, donde:
Li es un grupo de fórmula:
Figure imgf000083_0002
en la que:
la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b, si hubiere alguno o a D;
Ri 9 es un -alquileno C2-C5 -;
w es 0 o 2, y donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
Figure imgf000083_0003
en la que R22 es isopropilo, R23 se selecciona de metilo y -(CH2)3NHCONH2, donde las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a X (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o a Li (la línea ondulada hacia la derecha);
X es un grupo -COO-CH2 -fenileno-NH-;
T es un grupo -CO-(CH2)2-[O-(CH2)2]4-NH-;
b es 0 o 1;
g es 0 o 1 y
D es una fracción de fármaco seleccionada de:
Figure imgf000084_0002
o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables; donde la línea ondulada indica el punto de unión covalente.
un compuesto de fórmula D-X-(AA)w-(T)g-Li seleccionado de:
Figure imgf000084_0001
Figure imgf000085_0002
un compuesto de fórmula D-X-(AA)w-(T)g-Li seleccionado de:
Figure imgf000085_0001
Figure imgf000086_0001
El término “sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables" en los conjugados de fármacos de la presente invención se refiere a cualquier forma salina, de éster, solvato, hidrato o estereoisomérica o cualquier otro compuesto que, ante la administración al paciente, es capaz de proporcionar un compuesto de acuerdo con lo descripto en la presente, ya sea en forma directa o indirecta. Sin embargo, se apreciará que las sales que no son farmacéuticamente aceptables también quedan comprendidas en el alcance de la invención dado que aquellas pueden ser útiles en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales, profármacos y derivados puede realizarse mediante métodos conocidos en el estado de la técnica.
Por ejemplo, las sales farmacéuticamente aceptables de compuestos provistos en la presente se sintetizan a partir del compuesto progenitor, que contiene una fracción básica o ácida, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales, por ejemplo, se preparan mediante la reacción de las formas de ácidos o bases libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido adecuado en agua o en un solvente orgánico o bien en una mezcla de ambos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos, tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales de adición de ácidos minerales como, por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, yohidrato, sulfato, nitrato, fosfato, y sales de adición de ácidos orgánicos como, por ejemplo, acetato, trifluoroacetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metansulfonato y p-toluensulfonato. Los ejemplos de las sales de adición álcali incluyen sales inorgánicas como, por ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio, y amonio, y sales álcali orgánicas como, por ejemplo, sales de etilendiamina, etanolamina, N,N-dialquilenetanolamina, trietanolamina y aminoácidos básicos.
Los conjugados de fármacos de la presente invención pueden hallarse en forma cristalina, ya sea como compuestos libres o como solvatos (por ejemplo, hidratos) y se pretende que ambas formas se hallen dentro del alcance de la presente invención. Los métodos de solvatación generalmente se conocen en la técnica.
Todo compuesto que sea un profármaco del conjugado de fármaco de la presente invención se encuentra dentro del alcance y espíritu de la invención. El término “profármaco” se utiliza en su sentido más amplio y abarca aquellos derivados que se convierten in vivo en los compuestos de la invención. Estos derivados deberían ocurrírseles fácilmente a los expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, compuestos en los que un grupo hidroxi libre se convierte en un derivado de éster. Muchos profármacos adecuados son muy conocidos por un experto en la técnica y se pueden hallar, por ejemplo, en Burger “Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 6a ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) y “Design and Applications of Prodrugs” (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers.
Con relación a los compuestos de la presente invención, los ésteres farmacológicamente aceptables no se encuentran limitados particularmente y pueden ser seleccionados por una persona con conocimiento básico en la técnica. En el caso de dichos ésteres, se prefiere que dichos ésteres puedan ser escindidos mediante un proceso biológico como, por ejemplo, una hidrólisis in vivo. El grupo que constituye tales ésteres (el grupo mostrado como R cuando se expresan sus ésteres como -COOR) puede ser, por ejemplo, un grupo alcoxi C1-C4 alquilo C1-C4 como, por ejemplo, metoxietilo, 1-etoxietilo, 1-metil-1-metoxietilo, 1-(isopropoxi)etilo, 2-metoxietilo, 2-etoxietilo, 1,1-dimetil-1-metoximetilo, etoximetilo, propoximetilo, isopropoximetilo, butoximetilo o t-butoximetilo; un grupo C1-C4 alcoxi C1-C4 alquilo C1-C4, por ejemplo 2-metoxietoximetilo; un grupo ariloxi C6-C10 alquilo C1-C4, por ejemplo fenoximetilo; un grupo alcoxi C1-C4 alquilo C1-C4 halogenado, por ejemplo 2,2,2-tricloroetoximetilo o bis(2-cloroetoxi)metilo; un grupo alcoxicarbonilo Ci -C4 alquilo C1-C4, por ejemplo metoxicarbonilmetilo; un grupo cianoalquilo C1-C4, por ejemplo, cianometilo o 2-cianoetilo; un grupo alquiltiometilo C1-C4, por ejemplo metiltiometilo o etiltiometilo; un grupo ariltiometilo C6-C10, por ejemplo feniltiometilo o naftiltiometilo; un alquilsulfonilo C1-C4 alquilo C1-C4 inferior, que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más átomos de halógeno como, por ejemplo, 2-metansulfoniletilo o 2-trifluorometansulfoniletilo; un grupo arilsulfonilo C6-C10 alquilo C1-C4, por ejemplo 2-bencensulfoniletilo o 2-toluensulfoniletilo; un grupo aciloxi Ci -C7 alquilo C1-C4 alifático, por ejemplo formiloximetilo, acetoximetilo, propioniloximetilo, butiriloximetilo, pivaloiloximetilo, valeriloximetilo, isovaleriloximetilo, hexanoiloximetilo, 1-formiloxietilo, 1-acetoxietilo, 1 -propioniloxietilo, 1-butiriloxietilo, 1 -pivaloiloxietilo, 1 -valeriloxietilo, 1 -isovaleriloxietilo, 1-hexanoiloxietilo, 2-formiloxietilo, 2-acetoxietilo, 2-propioniloxietilo, 2-butiriloxietilo, 2-pivaloiloxietilo, 2-valeriloxietilo, 2-isovaleriloxietilo, 2-hexanoiloxietilo, 1-formiloxipropilo, 1-acetoxipropilo, 1-propioniloxipropilo, 1-butiriloxipropilo, 1-pivaloiloxipropilo, 1-valeriloxipropilo, 1-isovaleriloxipropilo, 1-hexanoiloxipropilo, 1-acetoxibutilo, 1 -propioniloxibutilo, 1 -butiriloxibutilo, 1 -pivaloiloxibutilo, 1-acetoxipentilo, 1-propioniloxipentilo, 1-butiriloxipentilo, 1-pivaloiloxipentilo o 1-pivaloiloxihexilo; un grupo cicloalquilcarboniloxi C5-C6 alquilo C1-C4, como, por ejemplo, ciclopentilcarboniloximetilo, ciclohexilcarboniloximetilo, 1-ciclopentilcarboniloxietilo, 1-ciclohexilcarboniloxietilo, 1-ciclopentilcarboniloxipropilo, 1-ciclohexilcarboniloxipropilo, 1-ciclopentilcarboniloxibutilo o 1-ciclohexilcarboniloxibutilo; un grupo arilcarboniloxi C6-C10 alquilo C1-C4, por ejemplo benzoiloximetilo; un grupo alcoxicarboniloxi C1-C6 alquilo C1-C4, como, por ejemplo, metoxicarboniloximetilo, 1-(metoxicarboniloxi)etilo, 1-(metoxicarboniloxi)propilo, 1-(metoxicarboniloxi)butilo, 1-(metoxicarboniloxi)pentilo, 1-(metoxicarboniloxi)hexilo, etoxicarboniloximetilo, 1-(etoxicarboniloxi)etilo, 1-(etoxicarboniloxi)propilo, 1-(etoxicarboniloxi)butilo, 1-(etoxicarboniloxi)pentilo, 1-(etoxicarboniloxi)hexilo, propoxicarboniloximetilo, 1-(propoxicarboniloxi)etilo, 1-(propoxicarboniloxi)propilo, 1-(propoxicarboniloxi)butilo, isopropoxicarboniloximetilo, 1-(isopropoxicarboniloxi)etilo, 1-(isopropoxicarboniloxi)butilo, butoxicarboniloximetilo, 1-(butoxicarboniloxi)etilo, 1-(butoxicarboniloxi)propilo, 1-(butoxicarboniloxi)butilo, isobutoxicarboniloximetilo, 1-(isobutoxicarboniloxi)etilo, 1-(isobutoxicarboniloxi)propilo, 1-(isobutoxicarboniloxi)butilo, t-butoxicarboniloximetilo, 1-(t-butoxicarboniloxi)etilo, pentiloxicarboniloximetilo, 1-(pentiloxicarboniloxi)etilo, 1-(pentiloxicarboniloxi)propilo, hexiloxicarboniloximetilo, 1-(hexiloxicarboniloxi)etilo o 1-(hexiloxicarboniloxi)propilo; un grupo cicloalquiloxicarboniloxi C5-C6 alquilo C1-C4, como, por ejemplo, ciclopentiloxicarboniloximetilo, 1-(ciclopentiloxicarboniloxi)etilo, 1-(ciclopentiloxicarboniloxi)propilo, 1-(ciclopentiloxicarboniloxi)butilo, ciclohexiloxicarboniloximetilo, 1-(ciclohexiloxicarboniloxi)etilo, 1-(ciclohexiloxicarboniloxi)propilo o 1-(ciclohexiloxicarboniloxi)butilo; un grupo [5-(alquilo Ci -C4)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo como, por ejemplo, (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, (5-etil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, (5-propil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, (5-isopropil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo o (5-butil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo; un grupo [5-(fenilo, que puede ser opcionalmente sustituido con un alquilo C1-C4, alcoxi C1-C4 o uno o más átomos de halógeno)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo como, por ejemplo, (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, [5-(4-metilfenil)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo, [5-(4-metoxifenil)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo, [5-(4-fluorofenil)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo o [5-(4-clorofenil)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il]metilo; o un grupo ftalidilo, que puede ser opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C1-C4 o alcoxi C1-C4, como, por ejemplo, ftalidilo, dimetilftalidilo o dimetoxiftalidilo, y, preferentemente, es un grupo pivaloiloximetilo, un grupo ftalidilo o un grupo (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo, y, con mayor preferencia, un grupo (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo.
Todo compuesto mencionado en la presente tiene ha de representar a dicho compuesto específico así como también a ciertas variaciones o formas. En particular, los compuestos mencionados en la presente pueden tener centros asimétricos y, por ende, existen en diferentes formas enantioméricas. Todos los isómeros y estereoisómeros ópticos de los compuestos mencionados en la presente, y sus mezclas, se consideran dentro del alcance de la presente invención. Por ende, todo compuesto dado mencionado en la presente ha de representar cualesquiera entre un racemato, una o más formas enantioméricas, una o más formas diastereoméricas, una o más formas atropisoméricas, y sus mezclas. Particularmente, los conjugados de fármacos de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)]n-Ab y los compuestos de fórmula D-X-(AA)w-(T)g-Li pueden incluir enantiómeros según su asimetría o diastereoisómeros. También, es posible el estereoisomerismo alrededor del doble enlace, por lo que, en algunos casos, la molécula podría existir como (E)-isómero o (Z)-isómero. Si la molécula contiene varios dobles enlaces, cada enlace doble tendrá su propio estereoisomerismo, que podría ser igual o diferente de del estereoisomerismo de los otros enlaces dobles de la molécula. Los isómeros individuales y las mezclas de isómeros quedan comprendidos dentro del alcance de la presente invención.
Asimismo, los compuestos mencionados en la presente pueden existir como isómeros geométricos (es decir, isómeros cis y trans), como tautómeros, o como atropisómeros. Específicamente, el término tautómero se refiere a uno de dos o más isómeros estructurales de un compuesto que existe en equilibrio y se convierten fácilmente de una forma isomérica a otra. Los pares tautoméricos comunes son amina-imina, amida-imida, ceto-enol, lactama-lactima, etc. Adicionalmente, todo compuesto mencionado en la presente ha de representar hidratos, solvatos, y polimorfos, y sus mezclas cuando tales formas existen en el medio. Además, los compuestos mencionados en la presente pueden existir en formas isotópicamente etiquetadas. Todos los isómeros geométricos, tautómeros, atropisómeros, hidratos, solvatos, polimorfos y formas isotópicamente etiquetadas de los compuestos mencionados en la presente, y sus mezclas, se consideran dentro del alcance de la presente invención.
Las formas protegidas de los compuestos divulgados en la presente se consideran dentro del alcance de la presente invención. Los grupos protectores adecuados son muy conocidos por los expertos en la técnica. Una revisión general de grupos protectores en química orgánica se encuentra provista por Wuts, PGM y Greene TW en Protecting Groups in Organic Synthesis [Grupos Protectores en Síntesis Orgánica], 4a Ed. Wiley-Interscience, y por Kocienski PJ en Protecting Groups [Grupos Protectores], 3ra Ed. Georg Tieme Verlag. Estas referencias proveen secciones sobre grupos protectores para grupos OH, amino y SH.
Dentro del alcance de la presente invención, un grupo protector se define como la fracción unida a O que resulta de la protección del OH a través de la formación de un grupo OH protegido adecuado. Los ejemplos de grupos OH protegidos incluyen éteres, sililéteres, ésteres, sulfonatos, sulfenatos y sulfinatos, carbonatos, y carbamatos. En el caso de éteres, el grupo protector para el OH se puede seleccionar de metilo, metoximetilo, metiltiometilo, (fenildimetilsilil)metoximetilo, benciloximetilo, p-metoxibenciloximetilo, [(3,4-dimetoxibencil)oxi]metilo, pnitrobenciloximetilo, o-nitrobenciloximetilo, [(R)-1-(2-nitrofenil)etoxi]metilo, (4-metoxifenoxi)metilo, guaiacolmetilo, [(pfenilfenil)oxi]metilo, t-butoximetilo, 4-penteniloximetilo, siloximetilo, 2-metoxietoximetilo, 2-cianoetoximetilo, bis(2-cloroetoxi)metilo, 2,2,2-tricloroetoximetilo, 2-(trimetilsilil)etoximetilo, menthoximetilo, O-bis(2-acetoxi-etoxi)metilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiranilo fluoroso, 3-bromotetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, 1-metoxiciclohexilo, 4-metoxitetrahidropiranilo, 4-metoxi-tetrahidrotiopiranilo, S,S-dióxido de 4-metoxitetrahidrotiopiranilo, 1-[(2-cloro-4-metil)-fenil]-4-metoxipiperidin-4-ilo, 1-(2-fluorofenil)-4-metoxipiperidin-4-ilo, 1-(4-clorofenil)-4-metoxipiperidin-4-ilo, 1,4-dioxan-2-ilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofuranilo, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahidro-7,8,8-trimetil-4,7-methanobenzofuran-2-ilo, 1-etoxietilo, 1-(2-cloroetoxi)etilo, 2-hidroxietilo, 2-bromoetilo, 1-[2-(trimetilsilil)etoxi]etilo, 1-metil-1-metoxietilo, 1-metil-1-benciloxietilo, 1-metil-1-benciloxi-2-fluoroetilo, 1-metil-1-fenoxietilo, 2,2,2-tricloroetilo, 1,1-dian isil-2,2,2-tricloroetilo, 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-fenilisopropilo, 1-(2-cianoetoxi)etilo, 2-trimetilsililetilo, 2-(benciltio)etilo, 2-(fenilselenil)etilo, t-butilo, ciclohexilo, 1-metil-1'-ciclopropilmetilo, alilo, prenilo, cinamilo, 2-fenalilo, propargilo, pclorofenilo, p-metoxifenilo, p-nitrofenilo, 2,4-dinitrofenilo, 2,3,5,6-tetrafluoro-4-(trifluorometil)fenilo, bencilo, p-metoxibencilo, 3,4-dimetoxibencilo, 2,6-dimetoxibencilo, o-nitrobencilo, p-nitrobencilo, pentadienilnitrobencilo, pentadienilnitropiperonilo, halobencilo, 2,6-diclorobencilo, 2,4-diclorobencilo, 2,6-difluorobencilo, p-cianobencilo, bencilo fluoroso, 4-fluorousalcoxibencilo, trimetilsililxililo, p-fenilbencilo, 2-fenil-2-propilo, p-acilaminobencilo, pazidobencilo, 4-azido-3-clorobencilo, 2-trifluorometilbencilo, 4-trifluorometilbencilo, p-(metilsulfinil)bencilo, p-siletanilbencilo, 4-acetoxibencilo, 4-(2-trimetilsilil)etoximetoxibencilo, 2-naftilmetilo, 2-picolilo, 4-picolilo, N-óxido de 3-metil-2-picolilo, 2-quinolinilmetilo, 6-metoxi-2-(4-metilfenil)-4-quinolinmetilo, 1 -pirenilmetilo, difenilmetilo, 4-metoxidifenilmetilo, 4-fenildifenilmetilo, p,p'-dinitrobencidrilo, 5-dibenzosuberilo, trifenilmetilo, tris(4-t-butilfenil)metilo, a-naftildifenilmetilo, p-metoxifenildifenilmetilo, di(p-metoxifenil)fenil-metilo, tri(p-metoxifenil)metilo, 4-(4'-bromofenaciloxi)fenildifenilmetilo, 4,4',4” -tris(4,5-dicloroftalimidofenil)metilo, 4,4',4''-tris(levulinoiloxifenil)metilo, 4,4',4” -tris(benzoiloxifenil)metilo, 4,4'-dimetoxi-3''-[N-(imidazolilmetil)]tritilo, 4,4'-dimetoxi-3” -[N-(imidazoliletil)carbamoil]tritilo, bis(4-metoxifenil)-1'-pirenilmetilo, 4-(17-tetrabenzo[a,c,g,/]fluorenilmetil)-4,4” -dimetoxitritilo, 9-antrilo, 9-(9-fenil)xantenilo, 9-feniltioxantilo, 9-(9-fenil-10-oxo)antrilo, 1,3-benzoditiolan-2-ilo, 4,5-bis(etoxicarbonil)-[1,3]-dioxolan-2-ilo, S,S-dióxido de bencisotiazolilo. En el caso de éteres de sililo, el grupo protector para el OH se puede seleccionar de trimetilsililo, trietilsililo, triisopropilsililo, dimetilisopropilsililo, dietilisopropilsililo, dimetilhexilsililo, 2-norbornildimetilsililo, t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo, tribencilsililo, tri-p-xililsililo, trifenilsililo, difenilmetilsililo, di-t-butilmetilsililo, bis(t-butil)-1-pirenilmetoxisililo, tris(trimetilsilil)sililo, (2-hidroxistiril)dimetilsililo, (2-hidroxistiril)diisopropilsililo, t-butilmetoxifenilsililo, t-butoxidifenilsililo, 1,1,3,3-tetraisopropil-3-[2-(trifenilmetoxi)etoxi]disiloxane-1-ilo, y sililo fluoroso. En el caso de ésteres, el grupo protector para el OH junto con el átomo de oxígeno del OH no protegido al que se encuentra unido forman un éster que se puede seleccionar de formiato, benzoilformiato, acetato, cloroacetato, dicloroacetato, tricloroacetato, tricloroacetamidato, trifluoroacetato, metoxiacetato, trifenilmetoxiacetato, fenoxiacetato, p-clorofenoxiacetato, fenilacetato, difenilacetato, 3-fenilpropionato, propanolilo del tipo cadena bisfluorada, 4-pentenoato, 4-oxopentanoato, 4,4-(etilenditio)pentanoato, 5[3-bis(4-metoxifenil)hidro-ximetilfenoxi]levulinato, pivaloato, 1-adamantoato, crotonato, 4-metoxicrotonato, benzoato, pfenilbenzoato, 2,4,6-trimetilbenzoato, 4-bromobenzoato, 2,5-difluorobenzoato, p-nitrobenzoato, picolinato, nicotinato, 2- (azidometil)benzoato, 4-azido-butirato, (2-azidometil)fenilacetato, 2-{[(tritiltio)oxi]metil}benzoato, 2-{[(4-metoxitritiltio)oxi]metil}benzoato, 2-{[metil(tritiltio)amino]metil}benzoato, 2-{{[(4-metoxitritil)tio]metilamino}metil}benzoato, 2-(aliloxi)fenilacetato, 2-(preniloximetil)benzoato, 6-(levuliniloximetil)-3-metoxi-2-nitrobenzoato, 6-(levuliniloximetil)-3-metoxi-4-nitrobenzoato, 4-benciloxibutirato, 4-trialquilsililoxi-butirato, 4-acetoxi-2,2-dimetilbutirato, 2,2-dimetil-4-pentenoato, 2-yodobenzoato, 4-nitro-4-metilpentanoato, o-(dibromometil)benzoato, 2-formilbencensulfonato, 4-(metiltio-metoxi)butirato, 2-(metiltiometoximetil)benzoato, 2-(cloroacetoximetil)benzoato, 2-[(2-cloroacetoxi)etil]benzoato, 2-[2-(benciloxi)etil]benzoato, 2-[2-(4-metoxibenciloxi)etil]benzoato, 2,6-dicloro-4-metilfenoxiacetato, 2,6-dicloro-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenoxiacetato, 2,4-bis(1,1-dimetilpropil)fenoxiacetato, clorodifenil-acetato, isobutirato, monosuccinoato, (E)-2-metil-2-butenoato, o-(metoxicarbonil)benzoato, a-naftoato, nitrato, N,N,W\W’-tetrametilfosforodiamidato de alquilo, y 2-clorobenzoato. En el caso de sulfonatos, sulfenatos y sulfinatos, el grupo protector para OH junto con el átomo de oxígeno del OH no protegido al que se une forman un sulfonato, sulfenato o sulfinato que se puede seleccionar de sulfato, alilsulfonato, metansulfonato, bencilsulfonato, tosilato, 2-[(4-nitrofenil)etil]sulfonato, 2-trifluorometilbencensulfonato, 4-monometoxitritilsulfenato, 2,4-dinitrofenilsulfenato de alquilo, 2,2,5,5-tetrametilpirrolidin-3-ona-1-sulfinato, y dimetilfosfinotioilo. En el caso de carbonatos, el grupo protector para el OH junto con el átomo de oxígeno del OH no protegido al que se une forman un carbonato que se puede seleccionar de carbonato de metilo, carbonato de metoximetil, carbonato de 9-fluorenilmetilo, carbonato de etilo, carbonato de bromoetilo, carbonato de 2-(metiltiometoxi)etilo, carbonato de 2 ,2 ,2-tricloroetilo, carbonato de 1,1-dimetil-2 ,2 ,2 -tricloroetilo, carbonato de 2 -(trimetilsilil)etilo, carbonato de 2 -[dimetil(2 -naftilmetil)silil]etilo, carbonato de 2 -(fenilsulfonil)etilo, carbonato de 2-(trifenilfosfonio)etilo, carbonato de c/s-[4-[[(metoxitritil)sulfenil]oxi]tetrahidrofuran-3-il]oxi, carbonato de isobutilo, carbonato de t-butilo, carbonato de vinilo, carbonato de alilo, carbonato de cinamilo, carbonato de propargilo, carbonato de p-clorofenilo, carbonato de p-nitrofenilo, carbonato de 4-etoxi-1-naftilo, carbonato de 6-bromo-7-hidroxicumarin-4-ilmetilo, carbonato de bencilo, carbonato de o-nitrobencilo, carbonato de p-nitrobencilo, carbonato de p-metoxibencilo, carbonato de 3,4-dimetoxibencilo, carbonato de antraquinon-2-ilmetilo, carbonato de 2-dansiletilo, carbonato de 2-(4-nitrofenil)etilo, carbonato de 2-(2,4-dinitrofenil)etilo, carbonato de 2-(2-nitrofenil)propilo, carbonato de 2-(3,4-metilendioxi-6 -nitrofenil)propilo, carbonato de 2 -ciano-1-feniletilo, carbonato de 2 -(2 -piridil)amino-1-feniletilo, carbonato de 2-[N-metil-N-(2-piridil)]amino-1-feniletilo, carbonato de fenacilo, carbonato de 3’,5’-dimetoxibenzoina, ditiocarbonato de metilo, y tiocarbonato de S-bencilo. Y, en el caso de carbamatos, el grupo protector para OH junto con el átomo de oxígeno del OH no protegido al que se une forma un carbamato que se puede seleccionar de tiocarbamato de dimetilo, carbamato de N-fenilo, y carbamato de N-metil-N-(o-nitrofenilo).
Dentro del alcance de la presente invención, un grupo protector amino se define como la fracción unida a N que resulta de la protección del grupo amino a través de la formación de un grupo amino protegido adecuado. Los ejemplos de grupos amino protegidos incluyen carbamatos, ureas, amidas, sistemas heterocíclicos, N-alquilaminas, N-alquenilaminas, N-alquinilaminas, N-arilaminas, iminas, enaminas, derivados de N-metales, derivados de N-N, derivados de N-P, derivados de N-Si, y derivados de N-S. En el caso de carbamatos, el grupo protector para el grupo amino junto con el grupo amino al que se une forman un carbamato que se puede seleccionar de carbamato de metilo, carbamato de etilo, carbamato de 9-fluorenilmetilo, carbamato de 2,6-di-t-butil-9-fluorenilmetilo, carbamato de 2,7-bis(trimetilsilil)fluorenilmetilo, carbamato de 9-(2-sulfo)fluorenilmetilo, carbamato de 9-(2,7-dibromo)fluorenilmetilo, carbamato de 17-tetrabenzo[a,c,g,/]fluorenilmetilo, carbamato de 2-cloro-3-indenilmetilo, carbamato de benz[f]inden-3- ilmetilo, carbamato de 1,1-dioxobenzo[b]-tiofen-2-ilmetilo, carbamato de 2-metilsulfonil-3-fenil-1-prop-2-enilo, carbamato de 2,7-di-t-butil-[9,(10,10-dioxo-10,10,10,10-tetrahidrotioxanthil)]metilo, carbamato de 2,2,2-tricloroetilo, carbamato de 2-trimetilsililetilo, carbamato de (2 -fenil-2 -trimetilsilil)etilo, carbamato de 2 -feniletilo, carbamato de 2 -cloroetilo, carbamato de 1, 1 -dimetil-2 -haloetilo, carbamato de 1,1-dimetil-2 ,2 -dibromoetilo, carbamato de 1, 1 -dimetil-2,2,2-tricloroetilo, carbamato de 2-(2'-piridil)etilo, carbamato de 2-(4'-piridil)etilo, carbamato de 2,2-bis(4'-nitrofenil)etilo, carbamato de 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1 -feniletilo, carbamato de 2-(N,N-diciclohexilcarboxamido)etilo, carbamato de tbutilo, carbamato de BOC fluoroso, carbamato de 1-adamantilo, carbamato de 2-adamantilo, carbamato de 1-(1-adamantil)-1-metiletilo, carbamato de 1-metil-1-(4-bifenilil)etilo, carbamato de 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletilo, carbamato de triisopropilsililoxi, carbamato de vinilo, carbamato de alilo, carbamato de prenilo, carbamato de 1-isopropilalilo, carbamato de cinamilo, carbamato de 4-nitrocinamilo, carbamato de 3-(3'-piridil)prop-2-enilo, carbamato de hexadienilo, carbamato de propargilo, biscarbamato de 1,4-but-2-inilo, carbamato de 8-quinolilo, carbamato de N-hidroxipiperidinilo, ditiocarbamato de alquilo, carbamato de bencilo, carbamato de 3,5-di-t-butilbencilo, carbamato de p-metoxibencilo, carbamato de p-nitrobencilo, carbamato de p-bromobencilo, carbamato de p-clorobencilo, carbamato de 2,4-diclorobencilo, carbamato de 4-metilsulfinilbencilo, carbamato de 4-trifluorometilbencilo, carbamato de bencilo fluoroso, carbamato de 2-naftilmetilo, carbamato de 9-antrilmetilo, carbamato de difenilmetilo, carbamato de 4-fenilacetoxibencilo, carbamato de 4-azidobencilo, carbamato de 4-azido-metoxibencilo, carbamato de m-cloro-paciloxibencilo, carbamato de p-(dihidroxiboril)-bencilo, carbamato de 5-bencisoxazolilmetilo, carbamato de 2-(trifluorometil)-6 -cromonilmetilo, carbamato de 2 -metiltioetilo, carbamato de 2 -metilsulfoniletilo, carbamato de 2-(ptoluenesulfonil)etilo, carbamato de 2-(4-nitrofenilsulfonil)etilo, carbamato de 2-(2,4-dinitrofenilsulfonil)etilo, carbamato de 2-(4-trifluorometilfenilsulfonil)etilo, carbamato de [2-(1,3-ditianil)]metilo, carbamato de 2-fosfonioetilo, carbamato de 2 -[fenil(metil)sulfonio]etilo, carbamato de 1-metil-1-(trifenilfosfonio)etilo, carbamato de 1,1-dimetil-2 -cianoetilo, carbamato de 2-dansiletilo, carbamato de 2-(4-nitrofenil)etilo, carbamato de 4-metiltiofenilo, carbamato de 2,4-dimetiltiofenilo, carbamato de m-nitrofenilo, carbamato de 3,5-dimetoxibencilo, carbamato de 1-metil-1-(3,5- dimetoxifenil)etilo, carbamato de a-metilnitropiperonilo, carbamato de o-nitrobencilo, carbamato de 3,4-dimetoxi-6-nitrobencilo, carbamato de fenil(o-nitrofenil)metilo, carbamato de 2 -nitrofeniletilo, carbamato de 6 -nitroveratrilo, carbamato de 4-metoxifenacilo, carbamato de 3',5'-dimetoxibenzoina, carbamato de 9-xantenilmetilo, carbamato de N-metil-N-(o-nitrofenilo), carbamato de t-amilo, carbamato de 1-metilciclobutilo, carbamato de 1-metilciclohexilo, carbamato de 1-metil-1-ciclopropilmetilo, carbamato de ciclobutilo, carbamato de ciclopentilo, carbamato de ciclohexilo, carbamato de isobutilo, carbamato de isobornilo, carbamato de ciclopropilmetilo, carbamato de pdeciloxibencilo, carbamato de diisopropilmetilo, carbamato de 2,2-dimetoxi-carbonilvinilo, carbamato de o-(N,N-dimetilcarboxamido)bencilo, carbamato de 1,1-dimetil-3-(N,N-dimetil-carboxamido)propilo, carbamato de butinilo, carbamato de 1,1-dimetilpropinilo, carbamato de 2-yodoetilo, carbamato de 1-metil-1-(4'-piridil)etilo, carbamato de 1-metil-1-(p-fenilazofenil)etilo, carbamato de p-(p'-metoxifenilazo)bencilo, carbamato de p-(fenilazo)bencilo, carbamato de 2,4,6-trimetilbencilo, carbamato de isonicotinilo, carbamato de 4-(trimetil-amonio)bencilo, carbamato de pcianobencilo, carbamato de di(2-piridil)metilo, carbamato de 2-furanilmetilo, carbamato de fenilo, carbamato de 2,4,6-tri-t-butilfenilo, carbamato de 1 -metil-1-feniletilo, y tiocarbamato de S-bencilo. En el caso de ureas, los gruposprotectores para el grupo amino se pueden seleccionar de fenotiazinil-(10)-carbonilo, N ’-ptoluensulfonilaminocarbonilo, N'-fenilaminotiocarbonilo, 4-hidroxifenilaminocarbonilo, 3-hidroxitriptaminocarbonilo, y N'-fenilaminotiocarbonilo. En el caso de amidas, el grupo protector para el amino junto con el grupo amino al que se une forman una amida que se puede seleccionar de formamida, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, trifluoroacetamida, fenilacetamida, 3-fenilpropanamida, pent-4-enamida, picolinamida, 3-piridilcarboxamida, N-benzoilfenilalanilamida, benzamida, p-fenilbenzamida, o-nitrofenilacetamida, 2 ,2 -dimetil-2 -(o-nitrofenil)acetamida, onitrofenoxiacetamida, 3-(o-nitrofenil)propanamida, 2-metil-2-(o-nitrofenoxi)propanamida, 3-metil-3-nitrobutanamida, onitrocinamida, o-nitrobenzamida, 3-(4-t-butil-2,6-dinitrofenil)-2,2-dimetilpropanamida, o-(benzoiloxima-til)benzamida, 2-(acetoximetil)benzamida, 2-[(t-butildifenilsiloxi)metil]benzamida, 3-(3',6'-dioxo-2',4',5'-trimetilciclohexa-1',4'-dieno)-3,3-dimetilpropionamida, o-hidroxi-trans-cinamida, 2-metil-2 -(o-fenilazofenoxi)propanamida, 4-clorobutanamida, aceto-acetamida, 3-(p-hidroxifenil)propanamida, (N'-ditiobenciloxicarbonilamino)acetamida, y N-acetilmetionina amida. En el caso de sistemas heterocíclicos, el grupo protector para el grupo amino junto con el grupo amino al que se une forman un sistema heterocíclico que se puede seleccionar de 4,5-difenil-3-oxazolin-2-ona, N-ftalimida, N-dicloroftalimida, N-tetracloroftalimida, N-4-nitroftalimida, N-tiodiglicoloilo, N-ditiasuccinimida, N-2,3-difenilmaleimida, N-2,3-dimetilmaleimida, N-2,5-dimetilpirrola, N-2,5-bis(triisopropilsiloxi)pirrola, aducto N-1,1,4,4-tetrametildisililazaciclopentano, N-1,1,3,3-tetrametil-1,3-disilaisoindolina, N-difenilsilildietileno, N-5-sustituido-1,3-dimetil-1,3,5-triazaciclohexan-2-ona, N-5-sustituido-1,3-bencil-1,3,5-triazaciclohexan-2-ona, 3,5-dinitro-4-piridona 1-sustituido, y 1,3,5-dioxazina. En el caso de N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo o N-arilaminas, el grupo protector para el grupo amino se puede seleccionar de N-metilo, N-t-butilo, N-alilo, N-prenilo, N-cinamilo, N-fenilalilo, N-propargilo, N-metoximet0ilo, N-[2-(trimetilsilil)etoxi]metilo, N-3-acetoxipropilo, N-cianometilo, N-2-azanorbornenos, N-bencilo, N-4-metoxibencilo, N-2,4-dimetoxibencilo, N-2-hidroxibencilo, N-ferrocenilmetilo, N-2,4-dinitrofenilo, o-metoxifenilo, pmetoxifenilo, N-9-fenilfluorenilo, N-fluorenilo, N'-óxido de N-2-picolilamina, N-7-metoxicumar-4-ilmetilo, N-difenilmetilo, N-bis(4-metoxifenil)metilo, N-5-dibenzosuberilo, N-trifenilmetilo, N-(4-metilfenil)difenilmetilo, y N-(4-metoxifenil)difenilmetilo. En el caso de iminas, el grupo protector para el grupo amino se puede seleccionar de N-1,1-dimetiltiometileno, N-bencilideno, N-p-metoxibencilideno, N-difenilmetileno, N-[2-piridil)mesitil]metileno, N-(W,W-dimetilaminometileno), N-(W,W-dibencilaminometileno), N-(W-t-butilaminometileno), N,W-isopropilideno, N-pnitrobencilideno, N-salicilideno, N-5-clorosalicilideno, N-(5-cloro-2-hidroxifenil)fenilmetileno, N-ciclohexilideno, y N-tbutilideno. En el caso de enaminas, el grupo protector para el grupo amino se puede seleccionar de N-(5,5-dimetil-3-oxo-1-ciclohexenilo), N-2,7-dicloro-9-fluorenilmetileno, N-1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo, N-(1,3-dimetil-2,4,6-(1H,3H,5H)-trioxopirimidin-5-iliden)-metilo, N-4,4,4-trifluoro-3-oxo-1-butenilo, y N-(1-isopropil-4-nitro-2-oxo-3-pirrolin-3-ilo). En el caso de derivados de N-metal, el grupo protector para el grupo amino se puede seleccionar de N-borano, éster N-difenilborínico, éster N-dietilborínico, N-9-borabiciclononano, éster N-difluoroborínico, y ácido 3,5-bis(trifluorometil)fenilborónico; y también incluye N-fenil(pentacarbonilcromo)carbenilo, N-fenil(pentacarboniltungsten)carbenilo, N-metil(pentacarbonilcromo)carbenilo, N-metil(pentacarboniltungsten)carbenilo, quelato de N-cobre, quelato de N-zinc, y un derivado de 18-corona-6-. En el caso de derivados de N-N, el grupo protector para el grupo amino junto con el grupo amino al que se une forman un derivado de N-N que se puede seleccionar de N-nitroamino, N-nitrosoamino, N-óxido de amina, azida, derivado de triazeno, y N-trimetilsililmetil-N-bencilhidrazina. En el caso de derivados de N-P, el grupo protegido para el grupo amino con el grupo amino al que se une forman un derivado N-P que se puede seleccionar de difenilfosfinamida, dimetiltiofosfinamida, difeniltiofosfinamida, fosforoamidato de dialquilo, fosforoamidato de dibencilo, fosforamidato de difenilo, e iminotrifenilfosforano. En el caso de derivados de N-Si, el grupo protector para el NH2 se puede seleccionar de t-butildifenilsililo y trifenilsililo. En el caso de derivados de N-S, el grupo amino protegido se puede seleccionar de derivados de N-sulfenilo o N-sulfonilo. Los derivados de N-sulfenilo se pueden seleccionar de bencensulfenamida, 2-nitrobencensulfenamida, 2,4-dinitrobencensulfenamida, pentaclorobencensulfenamida, 2-nitro-4-metoxibencensulfenamida, trifenilmetilsulfenamida, 1-(2,2,2-trifluoro-1,1-difenil)etilsulfenamida, y N-3-nitro-2-piridinsulfenamida. Los derivados de N-sulfonilo se pueden seleccionar de metansulfonamida, trifluorometansulfonamida, t-butilsulfonamida, bencilsulfonamida, 2 -(trimetilsilil)etansulfonamida, p-toluensulfonamida, bencensulfonamida, o-anisilsulfonamida, 2-nitrobencensulfonamida, 4-nitrobencensulfonamida, 2,4-dinitrobencensulfonamida, 2-naftalensulfonamida, 4-(4',8'-dimetoxinaftilmetil)bencensulfonamida, 2-(4-metilfenil)-6-metoxi-4-metilsulfonamida, 9-antracensulfonamida, piridin-2-sulfonamida, benzotiazol-2-sulfonamida, fenacilsulfonamida, 2,3,6-trimetil-4-metoxibencensulfonamida, 2,4,6-trimetoxibencensulfonamida, 2,6-dimetil-4-metoxi-bencensulfonamida, pentametilbencensulfonamida, 2,3,5,6-tetrametil-4-metoxibencensulfonamida, 4-metoxibencensulfonamida, 2,4,6-trimetilbencensulfonamida, 2,6-dimetoxi-4-metilbencensulfonamida, 3-metoxi-4-t-butilbencensulfonamida, y 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonamida.
Dentro del alcance de la presente invención, un grupo protector para SH se define como la fracción unida a S que resulta de la protección del grupo SH a través de la formación de un grupo SH protegido adecuado. Los ejemplos de tales grupos Sh protegidos incluyen tioéteres, disulfuros, tioéteres de sililo, tioésteres, tiocarbonatos, y tiocarbamatos. En el caso de tioéteres, el grupo protector para el SH se puede seleccionar de S-alquilo, S-bencilo, S-p-metoxibencilo, S-o-hidroxibencilo, S-p-hidroxibencilo, S-o-acetoxibencilo, S-p-acetoxibencilo, S-p-nitrobencilo, S-o-nitrobencilo, S-2,4,6-trimetilbencilo, S-2,4,6-trimetoxibencilo, S-4-picolilo, S-2-picolil-N-óxido, S-2-quinolinilmetilo, S-9-antrilmetilo, S-9-fluorenilmetilo, S-xantenilo, S-ferrocenilmetilo, S-difenilmetilo, S-bis(4-metoxifenil)metilo, S-5-dibenzosuberilo, S-trifenilmetilo, 4-metoxitritilo, S-difenil-4-piridilmetilo, S-fenilo, S-2,4-dinitrofenilo, S-2-quinolilo, S-t-butilo, S-1-adamantilo, S-metoximetilo, S-isobutoximetilo, S-benciloximetilo, S-1-etoxietilo, S-2-tetrahidropiranilo, S-benciltiometilo, S-feniltiometilo, S-acetamidometil (Acm), S-trimetilacetamidometilo, S-benzamidometilo, S-aliloxicarbonilaminometilo, S-W-[2,3,5,6-tetrafluoro-4-(W-piperidino)-fenil-W-aliloxicarbonilaminometilo, S-ftalimidometilo, S-fenilacetamidometilo, S-acetilmetilo, S-carboximetilo, S-cianometilo, S-(2-nitro-1-fenil)etilo, S-2-(2,4-dinitrofenil)etilo, S-2-(4'-piridil)etilo, S-2-cianoetilo, S-2-(trimetilsilil)etilo, S-2,2-bis(carboetoxi)etilo, S-(1-m-nitrofenil-2-benzoil)etilo, S-2-fenilsulfoniletilo, S-1-(4-metilfenilsulfonil)-2-metilprop-2-ilo, y S-p-hidroxifenacilo. En el caso de disulfuros, el grupo SH protegido se puede seleccionar de disulfuro de S-etilo, disulfuro de S-t-butilo, disulfuro de S-2-nitrofenilo, disulfuro de S-2,4-dinitrofenilo, disulfuro de S-2-fenilazofenilo, disulfuro de S-2-carboxifenilo, y disulfuro de S-3-nitro-2-piridilo. En el caso de tioéteres de sililo, el grupo protector para el SH se puede seleccionar de la lista de grupos que se proveyó anteriormente para la protección de OH con éteres de sililo. En el caso de tioésteres, el grupo protector para el SH se puede seleccionar de S-acetilo, S-benzoílo, S-2-metoxiisobutirilo, S-trifluoroacetilo, S-N-[[pbifenilil)-isopropiloxi]carbonil]-W-metil-Y-aminotiobutirato, y S-N-(t-butoxicarbonil)-N-metil-Y-aminotiobutirato. En el caso de tiocarbonato, el grupo protector para el SH se puede seleccionar de S-2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, S-tbutoxicarbonilo, S-benciloxicarbonilo, S-p-metoxibenciloxicarbonilo, y S-fluorenilmetilcarbonilo. En el caso de tiocarbamato, el grupo SH protegido se puede seleccionar S-(N-etilcarbamato) y S-(N-metoximetilcarbamato).
La mención de estos grupos no se debería interpretar como una limitación del alcance de la invención dado que se mencionaron como una mera ilustración de grupos protectores para los grupos OH, amino y SH, y otros grupos que poseen dicha función pueden ser conocidos por los expertos en la técnica y tales grupos se han de entender como comprendidos también por la presente invención.
A los efectos de proporcionar una descripción más concisa, algunas de las expresiones cuantitativas provistas en la presente no se encuentran calificadas con el término “aproximadamente". Se entiende que, ya sea que el término "aproximadamente" se use en forma explícita o no, cada cantidad indicada en la presente se ha de referir al valor real dado, como también se refiere a la aproximación a dicho valor dado que se podría inferir razonablemente sobre la base de un conocimiento común en la técnica, con inclusión de los equivalentes y las aproximaciones debido a las condiciones experimentales y/o de medición para dicho valor dado.
“Conjugados de fármaco-anticuerpo (ADC, por sus s/g/as en /ng/és)” representan una estrategia dirigida a administrar una molécula citotóxica a una célula cancerosa (véase, por ejemplo, las solicitudes de patentes de invención internacionales WO-A-2004/010957, WO-A-2006/060533 y WO-A-2007/024536). Estos compuestos se mencionan generalmente como "conjugados" de fármacos-toxinas y radionúclidos. La matanza de células tumorales se produce al unir el conjugado de fármaco a una célula tumoral y liberar y/o activar la actividad citotóxica de la fracción de fármaco. La selectividad proporcionada por los conjugados de fármacos minimiza la toxicidad para las células normales, con lo cual mejora la tolerancia del fármaco en el paciente. Tres ejemplos de conjugados de fármacoanticuerpo de este tipo que recibieron aprobación para la comercialización son: Gemtuzumab ozogamicina para la leucemia mielógena aguda, Brentuximab vedotin para el linfoma de Hodgkin refractario y recidivante y linfoma de células grandes anaplásico, y ado-Trastuzumab emtansina para el cáncer de mama, especialmente HER2+.
La efectividad de los fármacos para la quimioterapia del cáncer generalmente depende de las diferencias en las tasas de crecimiento, los senderos bioquímicos y las características fisiológicas entre los tejidos cancerosos y normales. Por consiguiente, la mayoría de las quimioterapias estándar son relativamente no específicas y presentan toxicidades limitadas por las dosis que contribuyen a efectos terapéuticos subóptimos. Un abordaje para dirigirse selectivamente a células malignas y no a los tejidos sanos consiste en usar anticuerpos monoclonales específicos (mAbs) que reconocen antígenos asociados a tumores expresados sobre la superficie de las células tumorales [Meyer, D.L. & Senter, P.D. (2003) Recent advances in antibody drug conjugates for cancer therapy [Avances rec/entes en conyugados de fármacos-ant/cuerpos para /a terap/a contra e/ cáncer]. Annu. Rep. Med. Chem., 38, 229-237; Chari, R.V. (2008) Targeted cancer therapy: conferring specificity to cytotoxic drugs [Terap/a d/rfg/da contra e/ cáncer: otorgam/ento de espec/f/c/dad a fármacos c/totóx/cos]. Acc. Chem. Res. 41, 98-107]. Más de 30 agentes relacionados con inmunoglobulinas tipo G (IgG) se aprobaron en los últimos 25 años, principalmente para cánceres y enfermedades inflamatorias.
Una estrategia alternativa consiste en recurrir a la conjugación química de moléculas antineoplásicas pequeñas a mAbs, usadas tanto como vehículos (vida media aumentada) como también como agentes de direccionamiento (selectividad). Se ha dirigido un esfuerzo considerable hacia el uso de anticuerpos monoclonales (mAbs) para la administración dirigida de fármacos debido a sus elevadas selectividades para antígenos asociados a tumores, farmacocinética favorable, y toxicidades intrínsecas relativamente bajas. Los conjugados de mAb-fármaco (ADC) se forman mediante la unión covalente de fármacos anticáncer a mAbs, generalmente a través de un sistema enlazante condicionalmente estable. Al unir los antígenos de superficie celular, los mAbs usados para la mayoría de los ADC se transportan activamente a lisosomas u otros compartimientos intracelulares, donde las enzimas, el pH bajo o los agentes reductores facilitan la liberación del fármaco. Sin embargo, existen actualmente ADC en desarrollo limitados.
Los antígenos deben tener una elevada selectividad de células tumorales para limitar la toxicidad y los efectos fuera del objetivo. Una plétora de antígenos asociados a tumores se investigó en modelos preclínicos y en ensayos clínicos que incluían antígenos sobreexpresados en células B (por ejemplo, CD20, CD22, CD40, CD79), células T (CD25, CD30), células de carcinomas (He R2, EGFR, EpCAM, EphB2, PSMA), células endoteliales (endoglina), o estromales (proteína activada por fibroblastos), por nombrar algunas [Teicher BA. Antibody-drug conjugate targets [Objetivos de conjugados de fármacos-anticuerpos], Curr Cancer Drug Targets 9(8):982-1004, 2009]. Una propiedad importante para objetivos de ADC es su capacidad para ser internalizados. Esta puede ser una característica intrínseca del antígeno mismo, o bien se puede inducir mediante la unión del anticuerpo a su antígeno. Verdaderamente, la internalización del ADC es crucial para reducir la toxicidad asociada a una administración extracelular de la carga útil del fármaco.
Con respecto a las moléculas pequeñas conjugadas y en contraposición a la vasta diversidad de objetivos de antígenos putativos, una cantidad limitada de familias de fármacos citotóxicos utilizados como cargas útiles en los ADC se encuentra actualmente en investigación activa en ensayos clínicos: caliqueamicina (Pfizer), duocarmicinas (Synthon), pirrolobenzodiacepinas (Spirogen), irinotecan (Immunomedics), maitansinoides (DM1 y DM4; ImmunoGen Genentech/Roche, Sanofi-Aventis, Biogen Idec, Centocor/Johnson & Johnson, Millennium/Takeda), y auristatinas (MMAE y MMAF; Seattle Genetics Genentech/Roche, MedImmune/AstraZeneca, Bayer-Schering, Celldex, Progenics, Genmab). La caliqueamicina, duocarmicinas, y pirrolobenzodiazepinas son enlazadores de surcos menores de ADN, irinotecan es un inhibidor de la topoisomerasa I, mientras que los maitansinoides y las auristatinas son agentes de despolimerización de tubulinas.
Interesantemente, un representante de tres de estos ADC derivados de citotóxicos llegó a las etapas finales de los ensayos clínicos. Trastuzumab emtansina (T-DM1), trastuzumab unido a un fármaco hemisintético maitansinoide por medio de un enlazante estable (aprobación de la FDA de fecha 22 de febrero de 2013 para el cáncer de mama positivo HER2 avanzado); Inotuzumab ozogamicina (CMC-544), un mAb anti-CD22 humanizado (G5/44, IgG4) conjugado a una caliqueamicina con un enlazante lábil de ácido (acetilfenoxi-butanoico) (linfoma no de Hodgkin de células B); Brentuximab vedotin, un mAb anti-CD30 humanizado unido a una monometilauristatina E (MMAE), por medio de un enlazante de maleimidecaproil-valil-citrulinil-p-aminobencilcarbamato (aprobación de la FDA con fecha 19 de agosto de 2011 para linfoma anaplásico de células grandes y linfoma de Hodking).
Los enlazantes representan el componente clave de estructuras de ADC. Se han investigado varias clases de enlazantes de segunda generación, con inclusión de enlazantes de hidrazona lábil ante ácidos (lisosomas) (por ejemplo, gemtuzumab e inotuzumab ozogamicina); enlazantes basados en disulfuro (ambiente intracelular reductor); enlazantes de tioéter no escindibles (degradación catabólica en lisosomas) (por ejemplo, trastuzumab emtansina); enlazantes peptídicos (por ejemplo, citrulina-valina) (proteasas lisosomales como catepsina B) (por ejemplo, brentuximab vedotin): véanse, por ejemplo, WO-A-2004/010957, WO-A-2006/060533 y WO-A-2007/024536. La purificación de conjugados de fármaco-anticuerpo mediante cromatografía por exclusión de tamaño (CET) también se ha descripto [véase, por ejemplo, Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 8618-8623 (1996), y Chari et al., Cancer Research, 52: 127-131 (1992)].
Trastuzumab (Herceptin) es un anticuerpo monoclonal que interfiere con el receptor de HER2/neu. Su uso principal es tratar ciertos cánceres de mama. Los receptores de HER son proteínas que están incrustadas en la membrana celular y comunican señales moleculares del exterior de la célula (moléculas denominadas EGF) hacia el interior de la célula, y encienden y apagan genes. Las proteínas HER estimulan la proliferación celular. En algunos cánceres, notablemente ciertos tipos de cánceres de mama, HER2 se sobreexpresa y hace que las células cancerosas se reproduzcan descontroladamente.
El gen HER2 se amplifica en 20-30 % de los cánceres de mama de etapa temprana, lo cual hace que sobreexprese receptores del factor de crecimiento epidérmico (FCE) en la membrana celular. En algunos tipos de cáncer, HER2 puede enviar señales sin que los factores de crecimiento lleguen al receptor y se unan al receptor, por lo que su efecto en la célula es constitutivo; sin embargo, trastuzumab no es efectivo en este caso.
El sendero de HER2 promueve el crecimiento y la división celular cuando funciona normalmente; sin embargo, cuando se sobreexpresa, el crecimiento celular se acelera más allá de sus límites normales. En algunos tipos de cáncer, el sendero se explota para promover el rápido crecimiento y proliferación celular y, por ende, la formación de tumores. En las células cancerosas, la proteína HER2 se puede expresar hasta 100 veces más que en las células normales (2 millones contra 20.000 por célula). Esta sobreexpresión conduce a una señalización proliferante fuerte y constante y, por ende, a la formación de tumores. La sobreexpresión de HER2 también causa la desactivación de los puntos de revisión, por lo que da lugar a mayores aumentos en la proliferación.
En los compuestos de la presente invención, Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno.
En una forma de realización, Ab puede ser cualquier agente adecuado que es capaz de unirse a una célula objetivo, preferentemente una célula animal y, con mayor preferencia, una célula humana. Los ejemplos de tales agentes incluyen linfoquinas, hormonas, factores de crecimiento y moléculas de transporte de nutrientes (por ejemplo, transferrina). En otro ejemplo, Ab puede ser un aptámero, y puede incluir un ácido nucleico o un aptámero peptídico.
Cuando Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno, la fracción es, preferentemente, un péptido o polipéptido de unión a antígeno. En una forma de realización preferente, la fracción es un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígenos.
El término "anticuerpo" en los conjugados de fármacos de la presente invención se refiere a cualquier inmunolglobulina, preferentemente una inmunoglobulina de longitud completa. Preferentemente, el término abarca anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos, como, por ejemplo, anticuerpos biespecíficos, y sus fragmentos de anticuerpo, con la condición que presenten la actividad biológica deseada. Los anticuerpos pueden derivar de cualquier especie, pero, preferentemente, son de roedores, por ejemplo, rata o ratón, de conejo o de origen humano. Alternativamente, los anticuerpos, preferentemente anticuerpos monoclonales, pueden ser humanizados, quiméricos o fragmentos de anticuerpos de los mismos. El término "anticuerpos quiméricos" también puede incluir anticuerpos "primatizados" que contienen secuencias de unión a antígenos de dominio variable derivadas de un primate no humano (por ejemplo, Old World Monkey, Ape etc) y secuencias de regiones constantes humanas. Las inmunoglobulinas también pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, e IgA), clase (por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) o subclase de molécula de inmunoglobulina.
El término "anticuerpo monoclonal" se refiere a una población sustancialmente homogénea de moléculas de anticuerpos (es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por mutaciones que se producen naturalmente que pueden estar presentes en cantidades menores), producida por un único clon de células de linaje B, con frecuencia hibridoma. De manera importante, cada monoclonal posee la misma especificidad antigénica; es decir, se dirige contra un único determinante sobre el antígeno.
La producción de anticuerpos monoclonales se puede realizar mediante métodos conocidos en la técnica. Sin embargo, como ejemplo, los anticuerpos monoclonales se pueden hacer mediante el método de hibridoma (Kohler et al (1975) Nature 256:495), la técnica de hibridoma de células B humanas (Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72), o la técnica de hibridoma EBV (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96). Alternativamente, el anticuerpo monoclonal se puede producir con el uso de métodos de ADN recombinante (véase US 4816567) o se puede aislar de bibliotecas de anticuerpos de fagos con el uso de las técnicas descriptas en Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. MoI. Biol., 222:581-597.
Los anticuerpos policlonales son anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos). Esta población heterogénea de anticuerpo se puede derivar de los sueros de animales inmunizados mediante diversos procedimientos muy conocidos en el estado de la técnica.
El término "anticuerpo biespecífico" se refiere a un anticuerpo artificial compuesto por dos anticuerpos monoclonales diferentes. Se pueden diseñar para unirse ya sea a dos epítopos adyacentes sobre un único antígeno, por lo que aumenta tanto la avidez como también la especificidad, o para unir dos antígenos diferentes para numerosas aplicaciones, pero particularmente para el reclutamiento de células asesinas naturales (NK, por sus siglas en inglés) y T citotóxicas o para el redireccionamiento de toxinas, radionúclidos o fármacos citotóxicos para el tratamiento del cáncer (Holliger & Hudson, Nature Biotechnology, 2005, 23(9), 1126-1136). El anticuerpo biespecífico puede tener una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida con una primera especificidad de unión en un grupo, y un par de cadenas, cadena pesada-cadena liviana, de inmunoglobulina híbrida (que provee una segunda especificidad de unión) en el otro grupo. Esta estructura asimétrica facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de combinaciones de cadena de inmunoglobulina no deseada, como la presencia de una cadena liviana de inmunoglobulina en solamente una mitad de la molécula biespecífica para un modo fácil de separación (WO 94/04690; Suresh et al., Methods in Enzymology, 1986, 121:210; Rodrigues et al., 1993, J. of Immunology 151:6954-6961; Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et al., 1995, J. of Hematotherapy 4:463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681.
Los métodos para preparar anticuerpos híbridos o biespecíficos son conocidos en la técnica. En un método, se pueden producir anticuerpos biespecíficos mediante fusión de dos hibridomas en un único "cuadroma" mediante reticulación química o fusión genética de dos módulos Fab o scFv diferentes (Holliger & Hudson, Nature Biotechnology, 2005, 23(9), 1126-1136).
El término anticuerpo "quimérico" se refiere a un anticuerpo en el que se derivan diferentes partes de diferentes especies animales. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede derivar la región variable de un ratón y la región constante de un humano. Por el contrario, un "anticuerpo humanizado" proviene predominantemente de un humano aunque contiene partes no humanas. Específicamente, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una región hipervariable del receptor se reemplazan por residuos de regiones hipervariables de una especie no humana (anticuerpo donante) como, por ejemplo, ratón, rata, conejo, o primate no humano, que posee la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos de la región marco (RM) de la inmunoglobulina humana se reemplazan por residuos no humanos correspondientes. Asimismo, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se hallan en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se efectúan para refinar más aún el desempeño del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de al menos uno y generalmente dos dominios variables en los que la totalidad o casi la totalidad de los bucles hipervariables corresponden a aquellos de una inmunoglobulina no humana y la totalidad o casi la totalidad de las RM son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado, opcionalmente, también comprenderá al menos una parte de una región constante de inmunoglobulina (Fc), generalmente aquella de una inmunoglobulina humana.
Los anticuerpos recombinantes como, por ejemplo, los anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados se pueden producir mediante técnicas de ADN recombinantes conocidas en la técnica. Los anticuerpos completamente humanos se pueden producir con el uso de ratones transgénicos que son incapaces de expresar genes de cadenas pesadas y livianas de inmunoglobulinas endógenas, pero que pueden expresar genes humanos de cadenas pesadas y livianas. Los ratones transgénicos son inmunizados de manera normal con un antígeno seleccionado. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno se pueden obtener mediante una tecnología de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana alojados por los ratones transgénicos se reordenan durante la diferenciación de células B y, posteriormente, sufren un cambio de clase y una mutación somática. Por ende, con el uso de una técnica de este tipo, es posible producir anticuerpos IgG, IgA, IgM e IgE terapéuticamente útiles. Para una reseña de esta tecnología para producir anticuerpos humanos, véase Lonberg y Huszar (1995, Int. Rev. Immunol.
13:65-93). Para una explicación detallada de esta tecnología para producir anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos y protocolos para producir tales anticuerpos, véanse, por ejemplo, las patentes de invención estadounidenses números 5625126; 5633425; 5569825; 5661016; 5545806.
Otros anticuerpos humanos se pueden obtener en el comercio, por ejemplo, de Abgenix, Inc. (Freemont, CA) y Genpharm (San Jose, CA).
El término "fragmento de unión a antígeno" en los conjugados de fármacos de la presente invención se refiere a una parte de un anticuerpo de longitud completa en el que tales fragmentos de anticuerpos de unión a antígenos retienen la función de unión a antígenos de un anticuerpo de longitud completa correspondiente. El fragmento de unión a antígenos puede comprender una parte de una región variable de un anticuerpo, dicha parte comprende al menos uno, dos, preferentemente tres c Dr seleccionados de CDR1, CDR2 y CDR3. El fragmento de unión a antígeno también puede comprender una parte de una cadena liviana y pesada de inmunoglobulina. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen Fab, Fab', F(ab')2, scFv, di-scFv, sdAb, y BiTE (enlazadores biespecíficos de células T), fragmentos Fv que incluyen nanocuerpos, diacuerpos, fusiones de diacuerpo-Fc, triacuerpos y, tetracuerpos; minicuerpos; anticuerpos lineales; fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id), CDR (región determinante complementaria), y fragmentos de unión a epítopos de cualquiera de los mencionados anteriormente que se unen inmunoespecíficamente a un antígeno objetivo como, por ejemplo, antígenos de células cancerosas, antígenos virales o antígenos microbianos, moléculas de anticuerpos de dominio único o cadena única que incluyen anticuerpos de cadenas pesadas solamente, por ejemplo, dominios de VHH de camélidos y V-NAR de tiburón; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. Para fines comparativos, un anticuerpo de longitud completa, denominado "anticuerpo" es un anticuerpo que comprende dominios VL y VH, así como también dominios constantes de cadenas livianas y pesadas completas.
El anticuerpo también puede tener una o más funciones efectoras, que se refieren a las actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de secuencia nativa o región de Fc variante de secuencia de aminoácidos diseñada de acuerdo con los métodos del estado de la técnica para alterar la unión de receptores) de un anticuerpo. Los ejemplos de funciones efectoras de anticuerpos incluyen la unión de CIq; citotoxicidad dependiente del complemento; unión de receptores de Fc; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulación descendente de receptores de superficie celular (por ejemplo, receptores de células B; BCR), etc.
El anticuerpo también puede ser un fragmento funcionalmente activo (mencionado también en la presente como una parte inmunológicamente activa), derivado o análogo de un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a un antígeno objetivo como, por ejemplo, un antígeno de células cancerosas, un antígeno viral, o un antígeno microbiano u otros anticuerpos unidos a células tumorales. En este respecto, funcionalmente activo significa que el fragmento, derivado o análogo puede producir anticuerpos anti-idiotipos que reconocen al mismo antígeno que el anticuerpo del cual deriva reconocido el fragmento, derivado o análogo. Específicamente, en una forma de realización a modo de ejemplo, la antigenicidad del idiotipo de la molécula de inmunoglobulina se puede mejorar mediante la supresión de las secuencias de CDR y marco que son de terminal C hacia la secuencia de CDR que reconoce específicamente al antígeno. A los efectos de determinar qué secuencias CDR se unen al antígeno, se pueden usar péptidos sintéticos que contienen secuencias CDR en ensayos de unión con el antígeno mediante cualquier método de ensayo de unión conocido en el estado de la técnica (por ejemplo, el ensayo de núcleo BIA), véase, por ejemplo, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest [Secuencias de Proteínas de Interés Inmunológico], Quinta Edición, National Institute of Health, Bethesda, Md; Kabat E et al., 1980, J. of Immunology 125(3):961-969).
El término "anticuerpo" puede incluir también una proteína de fusión de un anticuerpo o un fragmento funcionalmente activo del mismo, por ejemplo en el que el anticuerpo se fusiona por medio de un enlace covalente (por ejemplo, un enlace peptídico), ya sea en el terminal N o en el terminal C con una secuencia de aminoácidos de otra proteína (o a una parte de ella, como, por ejemplo, una parte de al menos 10, 20 o 50 aminoácidos de la proteína) que no es el anticuerpo. El anticuerpo o su fragmento se puede unir covalentemente a la otra proteína en el terminal N del dominio constante.
Asimismo, el anticuerpo o los fragmentos de unión a antígeno de la presente invención puede incluir análogos y derivados de anticuerpos o sus fragmentos de unión a antígeno que son modificados, como, por ejemplo, mediante la unión covalente de cualquier tipo de molécula con la condición de que tal unión covalente permita que el anticuerpo retenga su inmunoespecificidad de unión a antígeno. Los ejemplos de modificaciones incluyen glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivación por grupos protectores/de bloqueo conocidos, escisión proteolítica, unión a una unidad de anticuerpo celular o a otra proteína, etc. Cualquiera de numerosas modificaciones químicas se puede llevar a cabo mediante técnicas conocidas que incluyen, en forma no taxativa, escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica, en presencia de tunicamicina, etc. Adicionalmente, el análogo o derivado puede contener uno o más aminoácidos no naturales.
Los anticuerpos o fragmentos de unión a antígenos de la presente invención pueden también tener modificaciones (por ejemplo, sustituciones, supresiones o adiciones) en el dominio Fc del anticuerpo. Específicamente, las modificaciones pueden ser en la región bisagra de Fc y resultar en un mayor unión para el receptor FcRn (WO 97/34631).
En una forma de realización, el anticuerpo en el conjugado de fármaco de la presente invención puede ser cualquier anticuerpo o fragmento del mismo de unión a antígeno, preferentemente un anticuerpo monoclonal que es útil en el tratamiento de una enfermedad, preferentemente cáncer. El cáncer puede ser cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer endometrial, cáncer de riñón, melanoma, leucemias, cáncer pulmonar, mieloma múltiple, linfomas (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin), tumores sólidos como, por ejemplo, sarcomas y carcinomas, melanoma, mesotelioma, osteosarcoma, cáncer ovárico y cáncer renal. En una forma de realización preferente, el cáncer es cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico. En una forma de realización de mayor preferencia, el cáncer es cáncer colorrectal, cáncer de mama, leucemia, linfoma, y cáncer ovárico.
Los anticuerpos que pueden ser útiles en el tratamiento del cáncer incluyen, en forma no taxativa, anticuerpos contra los siguientes antígenos: CA125 (ovárico), CA15-3 (carcinomas), CA19-9 (carcinomas), L6 (carcinomas), Lewis Y (carcinomas), Lewis X (carcinomas), fetoproteína alfa (carcinomas), CA 242 (colorrectal), fosfatasa alcalina placentaria (carcinomas), antígeno específico de próstata (próstata), fosfatasa de ácido prostático (próstata), factor de crecimiento epidérmico (carcinomas), por ejemplo, proteína del receptor 2 de EGF (cáncer de mama), MAGE-I (carcinomas), MAGE-2 (carcinomas), MAGE-3 (carcinomas), MAGE-4 (carcinomas), receptor antitransferrina (carcinomas), p97 (melanoma), MUCl-KLH (cáncer de mama), CEA (colorrectal), gplOO (melanoma), MARTl (melanoma), PSA (próstata), receptor de IL-2 (leucemia y linfomas de células T), CD20 (linfoma no de Hodgkin), CD52 (leucemia), CD33 (leucemia),CD22 (linfoma), gonadotropina coriónica humana (carcinoma), CD38 (mieloma múltiple), CD40 (linfoma), mucina (carcinomas), P21 (carcinomas), MPG (melanoma), y producto oncogénico Neu (carcinomas). Algunos anticuerpos útiles específicos incluyen, en forma no taxativa, b R96 mAb (Trail, P. A., et al Science (1993) 261, 212­ 215), b R64 (Trail, PA, et al Cancer Research (1997) 57, 100-105, mAbs contra el antígeno de CD40, como, por ejemplo, S2C6 mAb (Francisco, J. A., et al Cancer Res. (2000) 60:3225-3231), mAbs contra el antígeno de CD70, como, por ejemplo, 1F6 mAb, y mAbs contra el antígeno de CD30, como, por ejemplo, AClO (Bowen, M. A., et al (1993) J. Immunol., 151:5896- 5906; Wahl et al., 2002 Cancer Res. 62(13):3736-3742). Se pueden usar muchos otros anticuerpos de internalización que se unen a antígenos asociados a tumores y que fueron revisados (Franke, A. E., et al Cancer Biother Radiopharm. (2000) 15:459-476; Murray, J. L., (2000) Semin Oncol, 27:64-70; Breitling, F., y Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, Nueva York, 1998).
La presente invención comprende el tratamiento de cánceres asociados a estos anticuerpos.
Otros antígenos asociados a tumores incluyen, en forma no taxativa, BMPR1B, E16, STEAP1, STEAP2, 0772P. MPF, Napi3b, Sema5b, PSCA hlg, ETBR, MSG783, TrpM4, CRIPTO, CD21, CD79b, FcRH2, HER2, NCA, MDP, IL20Ra, Brevican, EphB2R, ASLG659, PSCA, GEDA, BAFF-R, CD79A, CXCR5, HLA-DOB, P2X5, CD72, LY64, FCRH1, IRTA2 y TENB2.
En una forma de realización alternativa, el anticuerpo en el conjugado de fármaco de la presente invención puede ser un anticuerpo o un fragmento del mismo de unión a antígeno, preferentemente un anticuerpo monoclonal, que se une inmunoespecíficamente a un antígeno viral, un antígeno microbiano o un antígeno de una célula que produce anticuerpos autoinmunes asociados a una enfermedad autoinmune.
El antígeno viral puede incluir, en forma no taxativa, cualquier péptido, polipéptido o proteína viral como, por ejemplo, gpl20 del VIH, nef del HIV glicoproteína F del RSV, neuraminidasa del virus influenza, hemaglutinina del virus influenza, tax del HTLV, glicoproteína del virus de herpes simple (por ejemplo, Gb, Gc, Gd, y Ge) y el antígeno de superficie de la hepatitis B que es capaz de producir una respuesta inmune.
El antígeno microbiano puede incluir, en forma no taxativa, cualquier péptido, polipéptido, proteína, sacárido, polisacárido, o molécula lipídica microbiana (por ejemplo, un polipéptido bacteriano, de hongo, de protozoo patógeno o de levadura que incluye, por ejemplo, LPS y polisacárido capsular) que es capaz de producir una respuesta inmune.
En otra forma de realización, el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno se une a un epítopo que se halla presente en una célula, como, por ejemplo, una célula tumoral. Preferentemente, cuando la célula es una célula tumoral, el epítopo de la célula tumoral no se encuentra presente en células no tumorales, o se halla presente en una concentración menor o en una configuración estérica diferente de aquella de las células tumorales.
En una forma de realización, el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno se une a un epítopo presente en el contexto de uno de los siguientes antígenos: CA125, CA15-3, CA19-9 L6, Lewis Y, Lewis X, fetoproteína alfa, CA 242, fosfatasa alcalina placentaria, antígeno específico de próstata, fosfatasa de ácido prostático, factor de crecimiento epidérmico, por ejemplo, la proteína del receptor 2 del EGF, MAGE-I, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, receptor de antitransferrina, p97, MUCl-KLH, CEA, gplOO, MARTl, PSA, receptor de IL-2, CD20, CD52, CD33, CD22, gonadotropina coriónica humana, CD38, CD40, mucina, P21, MPG, producto oncogénico Neu, BMPR1B, E16, STEAP1, STeAp2, 0772P. MPF, Napi3b, Sema5b, PSCA hlg, ETBR, MSG783, TrpM4, CRIPTO, CD21, CD79b, FcRH2, HER2, NCA, MDP, IL20Ra, Brevican, EphB2R, ASLG659, PSCA, GEDA, BAFF-R, CD79A, CXCR5, HLA-DOB, P2X5, CD72, LY64, FCRH1, IRTA2, TENB2, un antígeno viral (como, por ejemplo, cualquier péptido, polipéptido o proteína viral, como, por ejemplo, gpl20 del VIH, nef del VIH, glicoproteína F del RSV, neuraminidasa del virus influenza, hemaglutinina del virus influenza, tax del HTLV, glicoproteína del virus de herpes simple (por ejemplo, Gb, Gc, Gd, y Ge) y antígeno de superficie de la hepatitis B) que es capaz de producir una respuesta inmune), antígeno microbiano (cualquier péptido, polipéptido, proteína, sacárido, polisacárido, o molécula lipídica microbiana (por ejemplo, un polipéptido bacteriano, de hongo, de protozoo patógeno, o de levadura, que incluye, por ejemplo, un polisacárido capsular o LPS) que es capaz de producir una respuesta inmune) o un antígeno de una célula que produce anticuerpos autoinmunes asociados a una enfermedad autoinmune.
En una forma de realización, cuando el antígeno es ErBB2 (también conocido como ERBB2, CD340 o HER2; tales términos se pueden usar indistintamente), el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno se puede unir a uno o más de los siguientes epítopos: ARHC L (SEC ID Nro.: 1), QNGS (SEC ID Nro.: 2) y PPFCVARC PSG (SEC ID Nro.: 3). Estos epítopos corresponden a las posiciones 557-561, 570-573 y 593-603, respectivamente de la secuencia polipeptídica de HER2 humana (Acceso: NM_004448, Versión: NM_004448.3).
En otra forma de realización, el anticuerpo puede ser cualquier anticuerpo conocido para el tratamiento o la prevención de una infección viral o microbiana; es decir, una enfermedad infecciosa. Los ejemplos de tales anticuerpos incluyen, en forma no taxativa, PRO542 (Progenies) que es un anticuerpo de fusión de CD4 útil para el tratamiento de una infección por VIH; OsTAVIR (Protein Design Labs, Inc., CA) que es un anticuerpo humano útil para el tratamiento del virus de la hepatitis B; PROTOVIR. (Protein Design Labs, Inc., CA) que es un anticuerpo de IgG 1 humanizado útil para el tratamiento del citomegalovirus (CMV); y anticuerpos anti-LPS.
Otros anticuerpos útiles en el tratamiento de enfermedades infecciosas incluyen, en forma no taxativa, anticuerpos contra los antígenos de cepas de bacterias patógenas (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrheae, Neisseria meningitidis, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenas, Klebsiella rhinoscleromotis, Staphilococcus aureus, Vibrio colerae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Campilobacter (Vibrio) fetus, Aeromonas hidrophila, Bacillus cereus, Edwardsiella tarda, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Salmonella typhimurium, T reponema pallidum, T reponema pertenue, T reponema carateneum, Borrelia vincentii, Borrelia burgdorferi, Leptospira icterohernorrhagiae, Mycobacterium tuberculosis, Pneumocystis carinii, Francisella tularensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsia prowazeki, Rickettsia tsutsugumushi, Chlamydia spp.); hongos patógenos (Coccidioides immitis, Aspergillus fumigatus, Candida albicans, Blastomyces dermatitidis, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum); protozoos (Entomoeba histolytica, Toxoplasma gondii, Trichomonas tenas, Trichomonas hominis, Trichomonas vaginalis, Tryoanosoma gambiense, Trypanosoma rhodesiense, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Leishmania tropica, Leishmania braziliensis, Pneumocystis pneumonia, Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Plasmodium malaria); o Helmintos (Enterobius vermicularis, Trichuris trichiura, Ascaris lumbricoides, Trichinella spiralis, Strongiloides stercoralis, Schistosoma japonicum, Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, y gusanos de gancho).
Otros anticuerpos útiles para el tratamiento de enfermedades virales incluyen, en forma no taxativa, anticuerpos contra antígenos de virus patógenos, que incluyen, como ejemplo y en forma no taxativa: Poxviridae, Herpesviridae, virus 1 del Herpes Simplex, virus 2 del Herpes Simplex, Adenoviridae, Papovaviridae, Enteroviridae, Picornaviridae, Parvoviridae, Reoviridae, Retroviridae, virus influenza, virus parainfluenza, paperas, sarampión, virus sincicial respiratorio, rubéola, Arboviridae, Rhabdoviridae, Arenaviridae, virus de Hepatitis A, virus de Hepatitis B, virus de Hepatitis C, virus de Hepatitis E, virus de hepatitis no A/no B, Rhinoviridae, Coronaviridae, Rotoviridae, y virus de inmunodeficiencia humana.
En una forma de realización alternativa, el anticuerpo del conjugado de fármaco de la presente invención también puede ser cualquier anticuerpo conocido para el tratamiento de la prevención de trastornos autoinmunes, como, por ejemplo, en forma no taxativa, trastornos relacionados con linfocitos Th2 (por ejemplo, dermatitis atópica, asma atópica, rinoconjuntivitis, rinitis alérgica, síndrome de Omenn, esclerosis sistémica, y enfermedad de injerto contra huésped); trastornos relacionados con linfocitos Th1 (por ejemplo, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, síndrome de Sjorgren, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Grave, cirrosis biliar primaria, granulomatosis de Wegener, y tuberculosis); trastornos relacionados con linfocitos B activados (por ejemplo, lupus sistémico eritematoso, síndrome de Goodpasture, artritis reumatoide, y diabetes tipo I); y hepatitis crónica activa, enfermedad de Addison, alveolitis alérgica, reacción alérgica, rinitis alérgica, síndrome de Alport, Anafilaxis, espondilitis anquilosante, síndrome de antifosfolípidos, Artritis, Ascariasis, Aspergilosis, alergia atópica, dermatitis atrópica, rinitis atrópica, enfermedad de Behcet, pulmón de Bird-Fancier, asma bronquial, síndrome de Caplan, cardiomiopatía, enfermedad celíaca, enfermedad de Chagas, glomerulonefritis crónica, síndrome de Cogan, enfermedad de aglutininas frías, infección de rubéola congénita, síndrome de CREST, enfermedad de Crohn, crioglobulinemia, síndrome de Cushing, dermatomiositis, lupus discoide, síndrome de Dresser, síndrome de Eaton-Lambert, infección por Echovirus, encefalomielitis, oftalmopatía endócrina, infección por virus de Epstein-Barr, tirones equinos, eritematosis, síndrome de Evan, síndrome de Felty, fibromialgia, ciclitis de Fuch, atrofia gástrica, alergia gastrointestinal, arteritis de células gigantes, glomerulonefritis, síndrome de Goodpasture, enfermedad de injerto contra huésped, enfermedad de Graves, enfermedad de Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, anemia hemolítica, púrpura de Henoch-Schonlein, atrofia adrenal idiopática, fibritis pulmonar idiopática, nefropatía de IgA, enfermedades inflamatorias del intestino, Diabetes Mellitus dependiente de insulina, artritis juvenil, Diabetes Mellitus juvenil (Tipo I), síndrome de Lambert-Eaton, laminitis, líquen plano, hepatitis lupoide, linfopenia por lupus, enfermedad de Meniere, enfermedad mixta del tejido conectivo, esclerosis múltiple, Myasthenia Gravis, anemia perniciosa, síndromes poliglandulares, demencia presenil, agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, psoriasis, artritis psoriática, fenómeno de Raynaud, aborto recurrente, síndrome de Reiter, fiebre reumática, artritis reumatoide, síndrome de Sampter, esquistosomiasis, síndrome de Schmidt, escleroderma, síndrome de Shulman, síndrome de Sjorgen, síndrome de Stiff-Man, oftalmia simpática, lupus eritematoso sistémico, arteritis de Takayasu, arteritis temporal, tiroiditis, trombocitopenia, tirotoxicosis, necrólisis epidérmica tóxica, resistencia a la insulina tipo B, Diabetes Mellitus tipo I, colitis ulcerativa, uveitis, vitiligo, macroglobulinemia de Waldenstrom y granulomatosis de Wegener.
Los anticuerpos inmunoespecíficos para un antígeno de una célula que es responsable de la producción de anticuerpos autoinmunes se pueden obtener mediante cualquier método conocido por los expertos en la técnica como, por ejemplo, síntesis química o técnicas de expresión recombinante. Los ejemplos de anticuerpos autoinmunes incluyen, en forma no taxativa, anticuerpos antinucleares; ADN anti-ds; ADN anti-ss, anticuerpo anticardiolipina IgM, IgG; anticuerpo antifosfolípidos IgM, IgG; anticuerpo anti SM; anticuerpo antimitocondrial; anticuerpo tiroideo; anticuerpo microsomal; anticuerpo de tiroglobulina; Anti SCL-70; Anti- Jo; Anti-U1RNP; Anti- La/SSB; Anti SSA; Anti SSB; anticuerpo anticélulas peritales; antihistonas; Anti-RNP; C-ANCA; P-ANCA; anticentrómero; antifibrilarina, y anticuerpo anti-GBM.
En otra forma de realización, el anticuerpo del conjugado de fármaco de la presente invención puede ser un anticuerpo que se une tanto a un receptor como también a un complejo de receptores expresados en un linfocito activado, como, por ejemplo, uno asociado a una enfermedad autoinmune. El receptor o complejo de receptores puede comprender un miembro de la superfamilia de genes de las inmunoglobulinas, un miembro de la superfamilia de receptores de TNF, una integrina, una interleucina, un receptor de citocina, un receptor de quimiocinas, una proteína de histocompatibilidad mayor, una lectina, o una proteína de control del complemento. Los ejemplos no taxativos de miembros adecuados de la superfamilia de las inmunoglobulinas son CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD13, CD19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-I, e ICOS. Los ejemplos no taxativos de miembros adecuados de la superfamilia de receptores de TNF son CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNF-Rl, TNFR-2, rAn K, TACI, BCMA, osteoprotegerina, Apo2/TRAEL-Rl, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRABL-R4, y APO-3. Los ejemplos no taxativos de integrinas adecuadas son Cd I Ia, CDlIb, CDlIc, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD103, y CD104. Los ejemplos no taxativos de lectinas adecuadas son lectina tipo C, tipo S y tipo I.
Un anticuerpo que se une a un objetivo molecular o a un antígeno de interés, por ejemplo, el antígeno ErbB2, es un anticuerpo capaz de unirse a ese antígeno con una afinidad suficiente de manera que el anticuerpo sea útil en el direccionamiento de una célula que expresa el antígeno. Cuando el anticuerpo es un anticuerpo que se une a ErbB2, generalmente, con preferencia, se unirá a ErbB2 en contraposición a otros receptores de ErbB, y puede ser un anticuerpo que no reaccione significativamente en forma cruzada con otras proteínas como, por ejemplo, EGFR, ErbB 3 o ErbB4. En tales formas de realización, el grado de unión del anticuerpo a estas proteínas que no son ErbB2 (por ejemplo, una unión de superficie celular a un receptor endógeno) será inferior a 10 % de acuerdo con lo determinado mediante un análisis de clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS, por sus siglas en inglés) o radioinmunoprecipitación (RIA). A veces, el anticuerpo anti ErbB2 no reaccionará significativamente en forma cruzada con la proteína neu de rata, por ejemplo, de acuerdo con lo descripto por Schecter et al., en Nature 312:513-516 (1984) y por Drebin et al., en Nature 312:545-548 (1984).
En otra forma de realización, el anticuerpo del conjugado de fármaco u objetivo de la presente invención se puede seleccionar de un anticuerpo u objetivo mencionado en la siguiente tabla. Estos anticuerpos son inmunoespecíficos para un antígeno objetivo o se pueden obtener comercialmente o producir mediante cualquier método conocido en el estado de la técnica como, por ejemplo, técnicas de expresión recombinante.
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Además de los mencionados anteriormente, el anticuerpo del conjugado de fármaco-anticuerpo de la presente invención puede ser Vitaxin, que es un anticuerpo humanizado para el tratamiento de sarcomas; Smart IDlO que es un anticuerpo anti-HLA-DR humanizado para el tratamiento de linfomas no de Hodgkin; Oncolym que es un anticuerpo anti-HLA-DrlO murino radioetiquetado para el tratamiento de linfoma no de Hodgkin; y Allomune, que es un mAb anti-CD2 humanizado para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin o del linfoma no de Hodgkin.
El anticuerpo del conjugado de fármaco de la presente invención también puede ser cualquier fragmento de anticuerpo conocido para el tratamiento de cualquier enfermedad, preferentemente cáncer. Nuevamente, dichos fragmentos de anticuerpo son inmunoespecíficos para un antígeno objetivo y se pueden obtener en el comercio o se pueden producir mediante cualquier método conocido en el estado de la técnica, por ejemplo, técnicas de expresión recombinante. Los ejemplos de dichos anticuerpos disponibles incluyen cualquiera de la siguiente tabla.
T l 2: Fr m n ni r m n l n l r i
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En una forma de realización preferente, el anticuerpo en los conjugados de fármacos de la presente invención se dirige a un antígeno de superficie celular.
En otras formas de realización preferentes, el anticuerpo en los conjugados de fármacos de la presente invención se puede unir a un receptor codificado por el gen de ErbB. El anticuerpo se puede unir específicamente a un receptor de ErbB seleccionado de EGFR, HER2, HER3 y HER4. Preferentemente, el anticuerpo en el conjugado de fármaco se puede unir específicamente al dominio extracelular del receptor de HER2 e inhibir el crecimiento de células tumorales que sobreexpresan el receptor de HER2. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, o un anticuerpo humanizado. Preferentemente, el anticuerpo humanizado puede ser huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 o huMAb4D5-8 (Trastuzumab), con preferencia en particular Trastuzumab. El anticuerpo también puede ser un fragmento de anticuerpo, por ejemplo un fragmento Fab.
Otros anticuerpos preferidos incluyen:
(i) anticuerpos anti-CD4. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado;
(ii) anticuerpos anti-CD5. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado;
(iii) anticuerpos anti-CD13. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado;
(iv) anticuerpos anti-CD20. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado. Preferentemente, el anticuerpo humanizado es Rituximab o un fragmento de anticuerpo del mismo, por ejemplo, un fragmento Fab; y
(v) anticuerpos anti-CD30. El anticuerpo del conjugado de fármaco puede ser un anticuerpo monoclonal, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado. Preferentemente, el anticuerpo humanizado es Brentuximab vedotin o un fragmento de anticuerpo del mismo.
En una forma de realización de la invención, el conjugado de fármaco-anticuerpo puede demostrar una o más de las siguientes: (i) citotoxicidad aumentada (o una disminución en la supervivencia celular), (ii) actividad citostática aumentada (citostasis), (iii) afinidad de unión aumentada respecto del antígeno o epítopo objetivo, (iv) internalización aumentada del conjugado, (v) reducción de efectos secundarios en el paciente, y/o (vi) perfil de toxicidad mejorado. Este aumento puede ser relacionado con un conjugado de fármaco-anticuerpo conocido en la técnica que se une al mismo epítopo o antígeno o a un epítopo o antígeno diferente.
Procesos para la preparación de los conjugados de fármaco-anticuerpo
Los conjugados de fármaco-anticuerpo de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con las técnicas muy conocidas en el estado de la técnica. Los procesos para conjugar fracciones que comprenden al menos un anticuerpo de sitio de unión a antígeno o como, por ejemplo, anticuerpos, a una cantidad de diferentes fármacos con el uso de diferentes procesos se describieron y ejemplificaron anteriormente, por ejemplo, en WO-A-2004/010957, WO-A-2006/060533 y WO-A-2007/024536.
Estos comprenden el uso de un grupo enlazante que deriva el fármaco, toxina o radionúclido de manera tal que se pueda unir a la fracción como, por ejemplo, un anticuerpo. La unión a la fracción como, por ejemplo, un anticuerpo, se realiza generalmente mediante una de tres vías: mediante grupos tiol libres en cisteínas luego de la reducción parcial de grupos disulfuro en el anticuerpo; mediante grupos amino libres en lisinas en el anticuerpo; y mediante grupos hidroxilo libres en serinas y/o treoninas en el anticuerpo. El método de unión varía según el sitio de unión en la fracción, por ejemplo, un anticuerpo. La purificación de conjugados de fármaco-anticuerpo mediante cromatografía por exclusión de tamaño (CET) también se ha descripto [véanse, por ejemplo, Liu et al., Proc. Natl. Acad. Set (EE.u U.), 93: 8618-8623 (1996), y Chari et al., Cancer Research, 52: 127-131 (1992)].
De acuerdo con lo observado anteriormente, las cargas útiles de los fármacos de los conjugados de fármacos de la presente invención son derivados de ecteinascidina divulgadas o que caen en el alcance de la solicitud internacional de patente de invención nro. PCT/EP2018/060868.
Estos compuestos se sintetizan de acuerdo con los procesos descriptos en la presente solicitud.
Tal como se observó anteriormente, se provee un proceso para la preparación de un conjugado de fármacos de acuerdo con la presente invención que comprende conjugar una fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y un fármaco D de fórmula (IH), (IHa) o (IHb), Ab y D que son como se encuentran definidos en la presente.
Un ejemplo de un proceso para la preparación de un conjugado de fármaco de la presente invención comprende la preparación de los conjugados de anticuerpo-fármaco de fórmula (G) o (G’) de la presente invención de la siguiente manera:
Figure imgf000111_0001
(i) hacer reaccionar un fármaco (D-H) de fórmula (IH)-H:
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donde los sustituyentes en las definiciones de (IH)-H son como se definieron anteriormente para la fórmula (IH), con un compuesto de fórmula (D') o (E):
Figure imgf000112_0002
para proporcionar un compuesto de fórmula (F) o (F'), respectivamente:
Figure imgf000112_0003
Figure imgf000113_0001
(ii) reducción parcial de uno o más enlaces de disulfuro en el anticuerpo que se ha de conjugar para proporcionar un anticuerpo Ab-SH reducido que posee grupos tiol libres:
Figure imgf000113_0003
y
(iii) reacción del anticuerpo Ab-SH parcialmente reducido que posee grupos tiol libres con el compuesto de fórmula (f ) o (F') producido en el paso (i) para proporcionar el conjugado de fármaco-anticuerpo deseado de fórmula (G) o (G'), respectivamente:
Figure imgf000113_0002
En otra forma de realización preferente de este proceso, el anticuerpo se selecciona de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, T rastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, o se selecciona de Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con la mayor preferencia, es T rastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo. Asimismo, la reducción parcial de este anticuerpo monoclonal se realiza con el uso de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP).
Otro ejemplo de un proceso para la preparación de un conjugado de fármaco de la presente invención comprende la preparación de conjugados de fármaco-anticuerpo de fórmula (W) o (W') de la presente invención de la siguiente manera:
Figure imgf000114_0001
dicho proceso comprende los siguientes pasos:
(i) hacer reaccionar el anticuerpo con clorhidrato de 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar un anticuerpo activado por tiol:
Figure imgf000114_0002
(ii) hacer reaccionar el anticuerpo activado por tiol con el compuesto de fórmula (F) o (F'), para proporcionar el conjugado de fármaco-anticuerpo deseado de fórmula (W) o (W), respectivamente.
Figure imgf000114_0003
En otra forma de realización preferente de este proceso, el anticuerpo se selecciona de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, o se selecciona de T rastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, y, con la mayor preferencia, es Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo. Otro ejemplo de un proceso para la preparación de un conjugado de fármaco-anticuerpo de la presente invención comprende la preparación de conjugados de fármaco-anticuerpo de fórmula (O) o (P) de la siguiente manera:
Figure imgf000115_0001
dicho proceso comprende los siguientes pasos:
(i) ya sea:
(a) hacer reaccionar un fármaco (D-H) de fórmula (IH)-H:
Figure imgf000115_0002
donde los sustituyentes en las definiciones de (IH)-H son como se definieron anteriormente, con un compuesto de fórmula X 2 -C(O )-Xi donde Xi y X 2 son grupos salientes para proporcionar un compuesto de fórmula (B):
Figure imgf000115_0003
y el punto de unión de la fracción -(C=O)Xi es el grupo -NH2 libre del compuesto de fórmula D-H, o
(b) hacer reaccionar dicho fármaco (D-H) de fórmula (IH)-H como se definió anteriormente con 4-nitrofenilcloroformiato para proporcionar un compuesto de fórmula (J):
Figure imgf000115_0004
y el punto de unión del grupo (4-nitrofenil)-O-CO- es el mismo que aquel de la fracción Xi(CO) en (a) precedente;
(ii) ya sea:
(c) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (B) producido en el paso (i) con un compuesto hidroxi de fórmula HO-(CH2) i - 6 NHProtNH y retirar el grupo ProtNH del compuesto acoplado para proporcionar un compuesto de fórmula (C):
Figure imgf000116_0001
y, posteriormente, hacer reaccionar el compuesto resultante de fórmula (C) con un compuesto de fórmula Me-S-S-(CH2)i -3-CO2H para proporcionar un compuesto de fórmula (K):
Figure imgf000116_0002
o
(d) hacer reaccionar el compuesto (J) producido en el paso (i) con un compuesto de fórmula HO-(CH2) i-3SProtSH y retirar el grupo ProtSH del compuesto acoplado para proporcionar un compuesto de fórmula (L):
Figure imgf000116_0004
(iii) hacer reaccionar (K) o (L) producido en el paso (ii) con ditiotreitol en condiciones reductoras de disulfuro para proporcionar compuestos de fórmulas (M) y (N), respectivamente:
Figure imgf000116_0005
Figure imgf000116_0006
(iv) hacer reaccionar el anticuerpo que se ha de conjugar con succininimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexan-1-carboxilato para derivar dicho anticuerpo en uno o más grupos lisina con un grupo succininimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carbonilo:
Figure imgf000116_0003
(v) hacer reaccionar el anticuerpo derivado producido en el paso (iv) con (M) o (N) producido en el paso (iii) para proporcionar el conjugado de fármaco-anticuerpo deseado de fórmula (O) o (P):
Figure imgf000117_0001
El compuesto de fórmula X2 -C(O)-Xi es, preferentemente, 1,1'-carbonildiimidazol. De manera similar, el compuesto hidroxi reaccionado con el compuesto de fórmula (B) es, preferentemente, HO-(CH2)2-4-NHProtNH, y, con mayor preferencia, HO-(CH2)3-NHProtNH.
En una forma de realización preferente de la presente invención, el compuesto reaccionado con el compuesto de fórmula (C) para proporcionar el compuesto de fórmula (K) es el ácido 3-(metildisulfanil)propanoico.
En otra forma de realización preferente, el compuesto HO-(CH2)i -3 SProtSH que se hace reaccionar con un compuesto de fórmula (J) para proporcionar un compuesto de fórmula (L) es HO-(CH2)3SProtSH.
Cuando la unión a la fracción de enlace de fármaco se produce por medio de grupos tiol libres en cisteínas luego de una reducción parcial de grupos disulfuro en la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno como, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, la reducción parcial se conduce generalmente primero mediante la disolución a una concentración adecuada y el tamponado de la solución antes de la reducción parcial de los enlaces disulfuro por medio de la adición de un agente reductor adecuado como, por ejemplo, clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) o ditiotreitol (DTT). Mediante la elección de relaciones adecuadas de la fracción que se ha de reducir como, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal y el agente reductor, las condiciones de reacción y el tiempo de reducción, es posible obtener una relación deseada de tiol libre-fracción, por ejemplo cuatro grupos tiol libres por anticuerpo monoclonal.
La fracción parcialmente reducida como, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal parcialmente reducido que posee los grupos tiol libres, preparados de acuerdo con lo descripto anteriormente, se hace reaccionar luego con compuestos enlazadores de fármacos de la invención de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li (donde el grupo Li en dicho compuesto es un grupo maleimida que es libre para reaccionar con los grupos tiol). Los conjugados de fármaco-anticuerpo resultantes se purifican mediante cualquier medio adecuado conocido en el estado de la técnica, por ejemplo, mediante cromatografía por exclusión de tamaño (CET) [véanse, por ejemplo, Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 8618­ 8623 (1996), y Chari et al., Cancer Research, 52: 127-131 (1992)].
En una forma de realización preferente de la presente invención, el anticuerpo monoclonal parcialmente reducido es Trastuzumab o un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, preferentemente, Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo; o preferentemente, un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
En una forma de realización alternativa de la invención, las lisinas en la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno como, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal, se puede hacer reaccionar primero con succinimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexan-1-carboxilato. Un grupo amino libre en un anticuerpo puede reaccionar con el éster de N-hidroxisuccinimida para proporcionar un anticuerpo activado por maleimida:
Figure imgf000118_0001
En una forma de realización alternativa de la invención, las lisinas en la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno, como, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal se pueden hacer reaccionar primero con clorhidrato de 2-iminotiolano (reactivo de T raut). Un grupo amino libre en un anticuerpo puede reaccionar con la tiolactona imídica para proporcionar un anticuerpo activado por tiol.
Figure imgf000118_0002
Un ejemplo específico de procesos para la preparación de conjugados de fármaco-anticuerpo de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de la presente invención mediante conjugación por medio de grupos tiol libres en cisteínas luego de una reducción parcial de grupos disulfuro en el anticuerpo se muestra en la Figura 1.
Otro ejemplo específico de los procesos para la preparación de los conjugados de fármaco-anticuerpo de fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de la presente invención mediante conjugación con grupos amino libres en lisinas luego de la reacción del anticuerpo con un reactivo de Traut se muestra en la Figura 2.
Composiciones que comprenden el conjugado de fármaco-anticuerpo de la invención y sus usos
Se provee también una composición farmacéutica que contiene un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de las formas de administración de un conjugado de fármaco que posee la fórmula general [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab de la presente invención incluyen, en forma no taxativa, las vías oral, tópica, parenteral, sublingual, rectal, vaginal, ocular, e intranasal. La administración parenteral incluye inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intraesternal o técnicas de infusión. Preferentemente, las composiciones se administran parenteralmente. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden formular de manera tal que sea posible que un conjugado de fármaco de la presente invención se encuentre biodisponible luego de la administración de la composición a un animal, preferentemente un humano. Las composiciones pueden tomar la forma de una o más unidades de dosificación, cuando, por ejemplo, un comprimido puede ser una única unidad de dosis, y un recipiente de un conjugado de fármaco-anticuerpo de la presente invención en forma en aerosol puede contener una pluralidad de unidades de dosis.
El portador o vehículo farmacéuticamente aceptable puede hallarse en forma de partículas, de manera que las composiciones se encuentren, por ejemplo, en forma de comprimidos o polvo. Los vehículos pueden ser líquidos, con las composiciones, por ejemplo, en forma de jarabe oral o líquido inyectable. Además, los vehículos pueden ser gaseosos, de manera de proporcionar una composición en aerosol útil, por ejemplo, en la administración por inhalación. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante o excipiente, con el que se administra un conjugado de fármaco-anticuerpo de la presente invención. Estos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos, por ejemplo agua y aceites, que incluyen aquellos de origen animal, vegetal, sintéticos o de petróleo, por ejemplo aceite de maní, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. Los vehículos pueden ser solución salina, goma arábiga, gelatina, pasta de almidón, talco, keratina, sílice coloidal, urea, y similares. Además, se pueden usar agentes auxiliares, estabilizantes, espesantes, lubricantes y colorantes. En una forma de realización, cuando se administran a un animal, los conjugados de fármaco-anticuerpo de la presente invención o las composiciones y vehículos farmacéuticamente aceptables son estériles. El agua es un vehículo preferido cuando los conjugados de fármacoanticuerpo de la presente invención se administran en forma intravenosa. Las soluciones salinas y las soluciones acuosas de dextrosa y glicerol también se pueden emplear como vehículos líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los vehículos farmacéuticos adecuados también incluyen excipientes como, por ejemplo, almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestereato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada secada, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. Las composiciones de la presente, si se deseare, también pueden contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes de tamponamiento de pH.
Cuando se pretenden para administración oral, la composición se halla, preferentemente, en forma sólida o líquida, cuando las formas en gel, suspensión, semisólidas, o semilíquidas se incluyen dentro de las formas consideradas en la presente como sólidas o líquidas.
Como composición sólida para la administración oral, la composición se puede formular en forma de polvo, gránulo, comprimido, píldora, cápsula, goma de mascar, oblea o similares. Una composición sólida de este tipo generalmente contiene uno o más diluyentes inertes. Además, uno o más de los siguientes pueden hallarse presentes: aglutinantes como, por ejemplo carboximetilcelulosa, etilcelulosa, celulosa microcristalina, o gelatina; excipientes como, por ejemplo almidón, lactosa o dextrinas, agentes desintegrantes como, por ejemplo, ácido algínico, alginato sódico, almidón de maíz, y similares; lubricantes como, por ejemplo, estearato de magnesio; agentes de deslizamiento como, por ejemplo, dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes como, por ejemplo, sacarosa o sacarina; un agente saborizante como, por ejemplo, menta, salicilato de metilo o saborizante de naranja; y un agente colorante.
Cuando la composición se halla en forma de una cápsula (por ejemplo, una cápsula de gelatina), puede contener, además de materiales del tipo mencionado anteriormente, un vehículo líquido como, por ejemplo, polietilenglicol, ciclodextrina o un aceite graso.
La composición puede hallarse en forma de un líquido, por ejemplo un elixir, un jarabe, una solución, emulsión o suspensión. El líquido puede ser útil para la administración oral o para la administración por inyección. Cuando se pretende para la administración oral, una composición puede comprender uno o más de un agente edulcorante, conservantes, tintura/colorante y un mejorador del sabor. En una composición para la administración mediante inyección, también se pueden incluir uno o más de un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, tampón, estabilizante, y un agente isotónico.
La vía de administración preferente es la administración parenteral que incluye, en forma no taxativa, la administración intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural, intranasal, intracerebral, intraventricular, intratecal, intravaginal o transdérmica. El modo preferido de administración se deja a criterio del profesional y dependerá, en parte, del sitio de la afección médica (como, por ejemplo, el sitio en el que se halla el cáncer). En una forma de realización más preferente, estos conjugados de fármaco-anticuerpos de la presente invención se administran de manera intravenosa.
Las composiciones líquidas de la invención, ya sea que se encuentren en forma de soluciones, suspensiones o similares, también pueden incluir uno o más de los siguientes: diluyentes estériles como, por ejemplo, agua para inyección, solución salina, preferentemente solución salina fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites fijos como, por ejemplo, monoglicéridos o diglicéridos sintéticos, polietilenglicoles, glicerina, u otros solventes; agentes antibacterianos como, por ejemplo, alcohol bencílico o parabeno metílico; y agentes para el ajuste de la tonicidad como, por ejemplo, cloruro de sodio o dextrosa. Una composición parenteral puede estar contenida en una ampolla, una jeringa desechable, o un matraz de vidrio de múltiples dosis, un material de plástico u otro material. La solución salina fisiológica es un adyuvante preferido.
La cantidad del conjugado de fármaco de la presente invención que es efectiva en el tratamiento de un trastorno o una afección en particular dependerá de la naturaleza del trastorno o afección y puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Además, se pueden emplear ensayos in vitro o in vivo para ayudar a identificar intervalos de dosis óptimos. La dosis precisa que se ha de emplear en las composiciones dependerá también de la vía de administración, y la gravedad de la enfermedad o trastorno y se debería decidir de acuerdo con el criterio del profesional o de las circunstancias de cada paciente.
Las composiciones comprenden una cantidad efectiva de un conjugado de fármaco de la presente invención de manera que se obtenga una dosis adecuada. La dosis correcta de los compuestos variará según la formulación particular, el modo de aplicación, y su sitio particular, el huésped y la enfermedad en tratamiento, por ejemplo cáncer y, en ese caso, el tipo de tumor. Se tomarán en cuenta otros factores tales como la edad, el peso corporal, sexo, dieta, momento de administración, tasa de excreción, estado del huésped, combinaciones de fármacos, sensibilidades de reacción y gravedad de la enfermedad. La administración se puede efectuar en forma continua o periódica dentro de la dosis máxima tolerada.
El conjugado de fármaco de la presente invención o las composiciones se pueden administrar mediante cualquier vía conveniente, por ejemplo por infusión o inyección de bolo, mediante absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos.
En las formas de realización específicas, puede ser deseable administrar uno o más conjugados de fármaco de la presente invención o composiciones localmente a la zona que necesita el tratamiento. En una forma de realización, la administración se puede efectuar mediante inyección directa en el sitio (o sitio anterior) de un cáncer, tumor o tejido neoplásico o preneoplásico. En otra forma de realización, la administración se puede efectuar mediante inyección directa en el sitio (o sitio anterior) de una manifestación de una enfermedad autoinmune.
Se puede emplear también una administración pulmonar, por ejemplo, con el uso de un inhalador o nebulizador y la formulación con un agente atomizador, o por perfusión en un tensioactivo pulmonar sintético o de fluorocarbono. En ciertas formas de realización, el conjugado de fármaco-anticuerpo de la presente invención o las composiciones se pueden formular como supositorio, con aglutinantes y vehículos tradicionales como, por ejemplo, triglicéridos.
Las composiciones de la presente pueden tomar forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, cápsulas que contienen líquido, polvos, formulaciones de liberación sostenida, supositorios, emulsiones, aerosoles, atomizaciones, suspensiones, o cualquier otra forma adecuada de uso. Otros ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se encuentran descriptos en "Remington's Pharmaceutical Sciences" [Ciencias Farmacéuticas de Remington] por E. W. Martin.
Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar mediante una metodología muy conocida en el estado de la técnica farmacéutica. Por ejemplo, una composición que se ha de administrar por inyección se puede preparar mediante la combinación de un conjugado de fármaco de la presente invención con agua de manera de formar una solución. Un tensioactivo se puede agregar para facilitar la formación de una solución o suspensión homogénea.
Hemos hallado que los conjugados de fármacos y las composiciones de la presente invención son particularmente efectivos en el tratamiento del cáncer.
Por ende, de acuerdo con lo descripto anteriormente, la presente invención provee un conjugado de fármaco para su uso en un método para tratar a un paciente que lo necesite, notablemente un humano, afectado por cáncer que comprende administrar a la persona afectada una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de fármaco o una composición de la presente invención. La presente invención provee un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención para usar en el tratamiento del cáncer, y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico. El cáncer de mayor preferencia es el cáncer de mama.
Los conjugados de fármacos y las composiciones de la presente invención son útiles para inhibir la multiplicación de una célula tumoral o célula de cáncer, o para tratar el cáncer en un animal. Los conjugados de fármacos y las composiciones de la presente invención se pueden usar acordemente en diversas situaciones para el tratamiento de cánceres de animales. Los conjugados de la invención que contienen una fracción de enlace a fármacos que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se pueden usar para administrar un fármaco o una unidad farmacológica a una célula tumoral o a una célula de cáncer. Sin limitarnos a la teoría, en una forma de realización, la fracción que contiene al menos un sitio de unión a antígeno de un conjugado de fármaco de la presente invención se une o asocia a una célula cancerosa o un antígeno asociado a una célula tumoral y el conjugado de fármaco de la presente invención se puede tomar dentro de una célula tumoral o célula cancerosa a través de una endocitosis mediada por receptores. El antígeno se puede unir a una célula tumoral o célula cancerosa o puede ser una proteína de matriz extracelular asociada a la célula tumoral o célula cancerosa. Una vez dentro de la célula, una o más secuencias específicas dentro de la unidad de enlace son escindidas hidrolíticamente por una o más proteasas o hidrolasas asociadas a células tumorales o células cancerosas, lo cual resulta en la liberación de un fármaco o un compuesto enlazador de fármaco. El fármaco o el compuesto enlazador de fármaco liberado se encuentra entonces libre para migrar en la célula e inducir actividades citotóxicas. En una forma de realización alternativa, el fármaco o unidad de fármaco es escindido del conjugado de fármaco de la presente invención fuera de la célula tumoral o célula cancerosa, y el fármaco o compuesto enlazador de fármaco penetra posteriormente en la célula.
En una forma de realización, la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se une a la célula tumoral o célula cancerosa. En otra forma de realización, la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se une a un antígeno de célula tumoral o célula cancerosa que se halla en la superficie de la célula tumoral o célula cancerosa. En incluso otra forma de realización, la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se une a un antígeno de célula tumoral o célula cancerosa que es una proteína de matriz extracelular asociada a la célula tumoral o célula cancerosa.
La especificidad de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno para una célula tumoral o célula cancerosa en particular puede ser importante para determinar aquellos tumores o cánceres que se tratan con mayor efectividad. Por ejemplo, los conjugados de fármaco de la presente invención que poseen una unidad de Trastuzumab pueden ser útiles para tratar carcinomas de antígenos positivos que incluyen leucemias, cáncer pulmonar, cáncer colon, linfomas (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin), tumores sólidos como, por ejemplo, sarcomas y carcinomas, mieloma múltiple, cáncer de riñón y melanoma. El cáncer puede ser, preferentemente, cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma o cáncer ovárico. Por ejemplo, los conjugados de fármaco de la presente invención que poseen una unidad de Rituximab pueden ser útiles para tratar tumores que expresan CD-20 como, por ejemplo, cánceres hematológicos que incluyen leucemias y linfomas. Por ejemplo, los conjugados de fármacos de la presente invención que poseen una unidad de anticuerpo anti-CD4 pueden ser útiles para tratar tumores que expresan CD-4 como, por ejemplo, cánceres hematológicos que incluyen linfomas. Por ejemplo, los conjugados de fármacos de la presente invención que poseen una unidad de anticuerpo anti-CD5 pueden ser útiles para tratar tumores que expresan CD-5 como, por ejemplo, cánceres hematológicos que incluyen leucemias y linfomas. Por ejemplo, los conjugados de fármacos de la presente invención que poseen una unidad de anticuerpo anti-CD13 pueden ser útiles para tratar tumores que expresan CD-13 como, por ejemplo, cánceres hematológicos que incluyen leucemias y linfomas.
Otros tipos particulares de cánceres que se pueden tratar con conjugados de fármacos de la presente invención incluyen, en forma no taxativa: cánceres de origen sanguíneo que incluyen todas las formas de leucemia; linfomas, como, por ejemplo, enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin y mieloma múltiple.
En particular, los conjugados de fármaco y las composiciones de la presente invención muestran una excelente actividad en el tratamiento del cáncer de mama.
Los conjugados de fármacos y las composiciones de la presente invención proveen un direccionamiento al tumor o cáncer específico de la conjugación, por lo que se reduce la toxicidad general de estos conjugados. Las unidades de enlace estabilizan los conjugados de fármaco-anticuerpo en la sangre, y aún son escindibles por proteasas e hidrolasas específicas de tumores dentro de la célula, por lo que se libera un fármaco.
Los conjugados de fármacos y las composiciones de la presente invención se pueden administrar a un animal que también ha sufrido una cirugía como tratamiento para el cáncer. En una forma de realización de la presente invención, el método adicional de tratamiento es la terapia de radiación.
En una forma de realización específica de la presente invención, el conjugado de fármaco o la composición de la presente invención se puede administrar con radioterapia. La radioterapia se puede administrar al mismo tiempo, antes o después del tratamiento con el conjugado de fármaco o la composición de la presente invención. En una forma de realización, el conjugado de fármaco o la composición de la presente invención se administra concurrentemente con la terapia de radiación. En otra forma de realización específica, la terapia de radiación se administra antes o después de la administración de un conjugado de fármaco o de la composición de la presente invención, preferentemente al menos una hora, cinco horas, 12 horas, un día, una semana, un mes, con mayor preferencia varios meses (por ejemplo, hasta tres meses), antes o después de la administración de un conjugado de anticuerpo-fármaco o de la composición de la presente invención.
Con respecto a la radiación, es posible usar cualquier protocolo de terapia de radiación según el tipo de cáncer que se ha de tratar. Por ejemplo, en forma no taxativa, se puede administrar radiación de rayos X; en particular, se puede usar un megavoltaje de alta energía (radiación superior a 1 MeV de energía) para tumores profundos, y radiación de rayos x de ortovoltaje y haz de electrones se puede usar para cánceres de piel. También, se pueden administrar radioisótopos emisores de rayos gamma, como, por ejemplo, isótopos radioactivos de radio, cobalto, y otros elementos.
En la presente invención, se provee un conjunto que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de fármaco de acuerdo con la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una forma de realización, se provee un conjunto que comprende una composición de acuerdo con la presente invención y, opcionalmente, instrucciones de uso para el tratamiento del cáncer y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico.
En una forma de realización, el conjunto de acuerdo con este aspecto para usar en el tratamiento del cáncer y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico. Con la mayor preferencia, el conjunto está destinado a usarse en el tratamiento del cáncer de mama.
Breve descripción de los dibujos
La invención se ilustra en forma diagramática, a modo de ejemplo, en los dibujos que se acompañan, en los que:
La Figura 1 es una ilustración esquemática de un proceso de acuerdo con la presente invención en el que la conjugación al anticuerpo se efectúa por medio de grupos tiol libres;
La Figura 2 es una ilustración esquemática de un proceso de acuerdo con la presente invención en el que la conjugación al anticuerpo se efectúa por medio de grupos amino libres.
Figura 3. Curvas de respuesta a la dosis correspondiente a un experimento representativo conducido para evaluar el potencial antiproliferativo de ADC 1 en líneas celulares de HER2-positivo (símbolos negros) o HER2-negativo (símbolos huecos). Los puntos corresponden al promedio de triplicados con barras de error que denotan el DE, las líneas de dibujo corresponden a la mejor adecuación por regresión no lineal de los puntos experimentales a una curva logística de cuatro parámetros para obtener los valores de IC50 informados en la Tabla 13.
Figura 4. Histogramas que muestran el efecto en la supervivencia celular de T rastuzumab a 20 |jg/ml o de ADC 1 a 16 o 2,5 jg/ml en varias líneas celulares, ya sea HER2-positivo (SK-BR-3 y HCC-1954) o HER2-negativo (MDA-MB-231 y MCF-7). Las barras corresponden al promedio de tres determinaciones con barras de errores que denotan el DE. La significancia estadística se midió con el uso de una prueba t de dos colas no emparejadas, los valores p se resumen de la siguiente manera: ***, p<0,001; **, p<0,01; *, p< 0,05
Figura 5. Curvas de respuesta a la dosis que muestran el potencial antiproliferativo del ADC 2 en las líneas celulares de HER2-positivo (símbolos negros) o HER2-negativo (símbolos huecos). Los puntos corresponden al promedio de triplicados con barras de errores que denotan el DE, líneas de dibujo corresponden a la mejor adecuación mediante regresión no lineal de los puntos experimentales a una curva logística de cuatro parámetros utilizada para obtener los valores IC50 informados en la Tabla 15.
Figura 6. Los histogramas muestran el efecto en la supervivencia celular de Trastuzumab a 20 jg/ml o de ADC 2 a 16 o 2,5 jg/ml en varias líneas celulares, ya sea HER2-positivo (SK-BR-3 y HCC-1954) o HER2-negativo (MDA-MB-231 y MCF-7). Las barras corresponden al promedio de tres determinaciones con barras de errores que denotan el DE. La significancia estadística se midió con el uso de una prueba t de dos colas no emparejadas, y los valores p se resumen de la siguiente manera: ***, p<0,001; **, p<0,01; *, p< 0,05.
Figura 7. Curvas de respuestas a las dosis que muestran el potencial antiproliferativo del conjugado de fármacoanticuerpo ADC 3 en líneas celulares de HER2-positivo (símbolos negros) o HER2-negativo (símbolos huecos). Los puntos corresponden al promedio de triplicados con barras de errores que denotan el DE, las líneas de dibujo corresponden a la mejor adecuación por regresión lineal de los puntos experimentales a una curva logística de cuatro parámetros utilizada para obtener los valores de IC50 informados en la Tabla 17.
Figura 8. Histogramas que muestran el efecto en la supervivencia celular de a 20 jg/ml o el ADC 3 a 20 o 3 jg/ml en varias líneas celulares, ya sea HER2-positivo (SK-Br -3 y HCC-1954) o HER2-negativo (MDA-MB-231 y MCF-7). Las barras corresponden al promedio de tres determinaciones con barras de errores que denotan el DE. La significancia estadística se midió con el uso de una prueba t de dos colas no emparejadas, los valores p se resumen de la siguiente manera: ***, p<0,001; **, p<0,01; *, p< 0,05.
Figura 9. Curvas de respuesta a la dosis que muestran el potencial antiproliferativo del ADC 4 en líneas celulares de HER2-positivo (símbolos negros) o HER2-negativo (símbolos huecos). Los puntos corresponden al promedio de triplicados con barras de errores que denotan el DE, las líneas de dibujo corresponden a la mejor adecuación por regresión lineal de los puntos experimentales a una curva logística de cuatro parámetros utilizada para obtener los valores de IC50 informados en la Tabla 18.
Figura 10. Histogramas que muestran el efecto en la supervivencia celular de T rastuzumab a 3 jg/ml o de ADC 4 a 3 o 0,2 jg/ml en varias líneas celulares, ya sea HER2-positivo (SK-BR-3 y HCC-1954) o HER2-negativo (MDA-MB-231 y MCF-7). Las barras corresponden al promedio de tres determinaciones con barras de errores que denotan el DE. La significancia estadística se midió con el uso de una prueba t de dos colas no emparejadas, los valores p se resumen de la siguiente manera: ***, p<0,001; **, p<0,01; *, p< 0,05.
Figura 11. Curvas de respuesta a la dosis que muestran el potencial antiproliferativo del ADC 6 en líneas celulares de HER2-positivo (símbolos negros) o HER2 negativo (símbolos huecos). Los puntos corresponden al promedio de triplicados con barras de errores que denotan el DE, las líneas de dibujo corresponden a la mejor adecuación por regresión lineal de los puntos experimentales a una curva logística de cuatro parámetros utilizada para obtener los valores de IC50 informados en la Tabla 21.
Figura 12. Evaluación del volumen tumoral de tumores BT-474 en ratones tratados con placebo, 11-R (a 5 mg/kg), ADC 1 (2,2 TCEP) (a 1,6 y 6,5 mg/kg) y ADC 1 (a 2,24 mg/kg).
Figura 13. Evaluación del volumen tumoral de tumores JIMT-1 en ratones tratados con placebo, 11-R (a 5,0 mg/kg) y ADC 1 (a 5, 10 y 30 mg/kg).
Figura 14. Evaluación del volumen tumoral de tumores SKOV3 en ratones tratados con placebo, 11-R (a 5,0 mg/kg) y ADC 1 (a 5, 10 y 30 mg/kg).
Figura 15. Evaluación del volumen tumoral de tumores N87 en ratones tratados con placebo, 11-R (a 5 mg/kg) y ADC 1 (2,2 TCEP) (a 5, 10 y 30 mg/kg)-
Figura 16. Evaluación del volumen tumoral de tumores Gastric-008 (PDX) en ratones tratados con placebo, 11-R (a 5 mg/kg) y ADC-1 (a 5, 10 y 30 mg/kg).
Ejemplos
La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos. En los ejemplos, se utilizan las siguientes abreviaturas:
CDI, 1,1'-Carbonildiimidazol
DIPEA, W,N-Diisopropiletilamina
Hex, Hexano
EtOAc, Acetato de etilo
DCM, Diclorometano
NMP, N-Metil-2-pirrolidona
DMF, Dimetilformamida
EDC, Clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W’-etilcarbodiimida
EDTA, Ácido etilendiamintetraacético
MeOH, Metanol
DTT, Ditiotreitol
Py, Piridina
THF, Tetrahidrofurano
TCEP, Clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino
MC, 6 -Maleimidocaproilo
Fmoc, 9-Fluorenilmetoxicarbonilo
Cit, Citrulina
Val, Valina
DMSO, Dimetilsulfóxido
Trt, Trifenilmetilo
HOBt, 1-Hidroxibenzotriazol
DIPCDI, N,N’-Diisopropilcarbodiimida
TFA, Ácido trifluoroacético
PABOH, Alcohol 4-aminobencílico
bis-PNP, bis(4-nitrofenil) carbonato
NAC, N-Acetilcisteína
SET, Cromatografía de exclusión por tamaño
HPLC, Cromatografía líquida de alto desempeño
ADC, Conjugado de fármaco-anticuerpo
ATCC, Colección de cultivos de tipo americano
DMEM, Medio de Eagle modificado de Dulbecco
RPMI, Medio del Rosmell Park Memorial Institute
ITS, suplemento de medios de selenito de insulina-transferrina-sodio
FCS, Suero bovino fetal
SRB, Sulforodamina B
PBS, Solución salina tamponada con fosfato
RD, Respuesta a la dosis
UV, Ultravioleta
SMCC, Succinimidil-4-(N-maleimidometil)ciclohexan-1-carboxilato
LAR, Relación de enlazante-anticuerpo
Síntesis de los compuestos
El compuesto 1 se preparó de acuerdo con lo descripto en el Ejemplo 20 de WO 01/87895.
Ejemplo 0-1.
A)
Figure imgf000124_0001
A una solución de 1 (0,5 g, 0,80 mmol) en ácido acético (20 ml, 0,04 M) se agregó L-triptofanol (2-S) (533 mg, 3,0 mmol, Sigma-Aldrich). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 16 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporcionó los compuestos 3-S (616 mg, 97 %) y 3a-S (12 mg, 2 %).
3-S
Rf= 0,50 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (300 MHz, CDCb): 57,71 (s, 1H), 7,36 (dd, J = 7,9, 1,0 Hz, 1H), 7,27 (dd, J = 8,2, 0,9 Hz, 1H), 7,13 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 7,03 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,26 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,04 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,75 (s, 1 h), 5,14 (dd, J = 11,7, 1,2 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,36-4,24 (m, 2H), 4,21 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,52 (s, 1H), 3,50-3,47 (m, 1H), 3,45 (dq, J = 8,4, 2,2 Hz, 1H), 3,35 (t, J = 10,1 Hz, 1H), 3,01-2,78 (m, 5H), 2,62 (dd, J = 15,3, 4,7 Hz, 1H), 2,41 (s, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,37-2,31 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,06 (s, 3H). ESI-MS m/z: 794,2 (M+H)+.
3a-S
Rf= 0,70 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (500 MHz, CDCb): 57,83 (s, 1H), 7,38 (dt, J = 7,9, 0,9 Hz, 1H), 7,25 (dt, J = 8,3, 0,9 Hz, 1H), 7,11 (ddd, J = 8.2, 7,1, 1,2 Hz, 1H), 7,02 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,24 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,13 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,39 (s, 1H), 4,36-4,22 (m, 3H), 4,17-4,09 (m, 1H), 3,91 (dd, J = 10,5, 8,6 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,51-3,41 (m, 2H), 3,04-2,92 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 15,1,4,0 Hz, 1H), 2,54-2,41 (m, 2H), 2,38 (s, 3h), 2,35-2,30 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,21-2,16 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,12 (s, 3H); 2,05 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CDCb): 5 171,2, 170,7, 168,6, 147,5, 145,8, 143,0, 141,1, 140,4, 135,6, 130,1, 129,5, 126,7, 122.2, 121,2, 120,9, 119,4, 118,4, 118,2, 118,2, 113,6, 113,5, 110,9, 110,0, 109,1, 102,1,91,4, 67,2, 63,4, 61,3, 60,4, 59,7, 59,1, 54,8, 54,6, 47,7, 42,0, 41,6, 31,6, 24,0, 22,6, 21,0, 15,9, 14,2, 9,7.
ESI-MS m/z: 836,2 (M+H)+.
B)
Figure imgf000124_0002
A una solución de 3-S (616 mg, 0,77 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 51 ml, 0,015 M) se agregó AgNO3 (3,40 g, 23,3 mmol). Luego de 3 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2 Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2 Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 4-S (471 mg, 78 %).
Rf= 0,50 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CDCb): 57,71 (s, 1H), 7,36 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H), 7,12 (ddd, J = 8.2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 7,03 (ddd, J = 8,0, 7,1, 1,0 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,23 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,25 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,52 (br s, 3H), 4,22 (dd, J = 11,4, 2,2 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,54 (br s, 2H), 3,35 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 3,26 (s, 1h), 3,01-2,93 (m, 3H), 2,88 (br s, 3H), 2,63 (dd, J = 15.2, 4,8 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,36-2,31 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CDCb): 5 171,9, 168,6, 147,5, 145,4, 142,9, 141,2, 140,7, 135,5, 130,4, 126,8, 122,3, 122,0, 121,3, 119,4, 118,4, 115,2, 112,8, 111,0, 110,0, 109,6, 101,8, 81,9, 76,8, 65,2, 62,8, 62,5, 60,4, 58,1,57,9, 55,9, 55,1, 53,4, 51,6, 41,8, 41,3, 39,6, 24,1,23,8, 20,5, 15,8, 9,7.
ESI-MS m/z: 767,3 (M-H2 O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-EM m/z 767,2788 [M-H2 O+H]+ (Calculado para C41 H43 N4 O9 S: 767,2745).
B')
Figure imgf000125_0001
A una solución de 3a-S (30 mg, 0,035 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 2,4 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (180 mg, 1,07 mmol). Transcurridas 3 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3 , se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2 Cl2 , se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2 Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Cb:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 4a-S (24 mg, 83 %).
Rf= 0,60 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,81 (s, 1H), 7,37 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,30-7,21 (m, 1H), 7,06 (dddt, J = 34,7, 8,0, 7,1, 1,1 Hz, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,22 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,02 (dd, J = 12,9, 1,4 Hz, 1h), 5,74 (s, 1H), 5,25-5,21 (m, 1H), 4,89 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,30-4,18 (m, 1H), 4,14 (dd, J = 10,5, 4,2 Hz, 1H), 4,00-3,88 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,56-3,44 (m, 2H), 3,23 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 15,7 Hz, 2H), 2,87-2,78 (m, 2H), 2,71 (dd, J = 15,0, 3,9 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 15,1, 9,6 Hz, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,35-2,29 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,22-2,16 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 809,2 (M-H2 O+H)+.
-
Figure imgf000126_0002
A una solución de 1 (0,5 g, 0,80 mmol) en ácido acético (20 ml, 0,04 M), se agregó D-triptofanol (2-R) (533 mg, 3,0 mmol, Sigma-Aldrich). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 16 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. La cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporcionó el compuesto 3-R (479 mg, 75 %).
Rf= 0,44 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,61 (s, 1H), 7,39 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,12 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,03 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,04 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,62 (s, 1h), 4,37 (s, 1H), 4,32-4,25 (m, 1h), 4,22 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,19-4,09 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,77 (s, 1H), 3,64 (d, J = 9,0 Hz, 1 h), 3,49-3,41 (m, 2h), 3,02-2,90 (m, 2H), 2,60-2,52 (m, 2H), 2,45 (d, J = 14,7 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,10 (m, 3H).
ESI-MS m/z: 794,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000126_0001
A una solución de 3-R (479 mg, 0,60 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,40 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (3,03 g, 18,1 mmol). Transcurridas 3 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2 Cl2 , se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2 Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 4-R (428 mg, 91 %).
Rf= 0,45 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,62 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,11 (ddd, J = 8,2, 7,0, I , 2 Hz, 1H), 7,02 (ddd, J = 7,9, 7,1, 1,0 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,22 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,99 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,17 (dd, J = 11,5, 1,2 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,56-4,47 (m, 2H), 4,17 (dd, J = 5,1, 1,6 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = I I , 5, 2,1 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,78 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 3,64 (dd, J = 10,8, 3,8 Hz, 2H), 3,51 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,48­ 3,43 (m, 2H), 3,24 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,00-2,80 (m, 2H), 2,57 (s, 1H), 2,55-2,43 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,19-2,12 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CDCb): 5 171,8, 168,6, 147,6, 145,4, 143,0, 141,3, 140,7, 136,0, 131,1, 130,0, 129,6, 126,6, 122,1, 121,6, 121,2, 119,4, 118,4, 115,6, 112,9, 111,1, 110,6, 101,8, 81,7, 65,8, 62,7, 61,8, 60,4, 60,3, 57,9, 57,8, 56,1, 55,0, 52,1,42,2, 41,3, 41,1, 23,8, 23,4, 20,5, 15,7, 9,8.
ESI-MS m/z: 767,6 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-EM m/z: 767,2799 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H43N4O9S: 767,2745).
Ejemplo 0-3. Síntesis de N-[(R)-(2-amino-3-(7H-indol-3-il)propil)]carbamato de alilo (9-R)
Figure imgf000127_0001
A)
Figure imgf000127_0002
A una solución de D-triptofanol (2-R) (2,0 g, 10,4 mmol) en CH3CN (42 ml, 4 ml/mmol), se agregó dicarbonato de diter-butilo (4,6 g, 20,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 3 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH de 99:1 a 85:15) para proporcionar 5-R (2,2 g, 73 %).
Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,13 (s, 1H), 7,67 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,29-7,10 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,00 (s, 1H), 3,71 (dd, J = 11,0, 3,8 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 11,0, 5,5 Hz, 1H), 3,01 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 2,14 (s, 1H), 1,44 (s, 9H).
B)
Figure imgf000127_0003
A una solución de 5-R (2,4 g, 8,2 mmol) en CH2Ch (50 ml, 6 ml/mmol), se agregó ftalimida (2,7 g, 18,2 mmol), trifenilfosfino (4,8 g, 18,2 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Una solución de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en CH2Cl2 (25 ml, 3 ml/mmol) se agregó durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 16 h, se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 6-R (3,3 g, 96 %).
Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,50 (s, 1H), 7,81 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 2H), 7,66 (dd, J = 5,6, 3,2 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,19-7,04 (m, 3H), 4,81 (s, 1H), 4,40 (s, 1H), 3,83 (dd, J = 13,9, 3,7 Hz, 1h), 3,72 (dd, J = 13,9, 9,9 Hz, 1H), 3,08-3,01 (m, 2H), 1,23 (s, 9H).
C)
Figure imgf000128_0001
A una solución de 6-R (3,25 g, 7,74 mmol) en etanol (231 ml, 30 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (37 ml, 774 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2,25 h, y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 50:50) proporcionó 7-R (2,15 g, 96 %).
Rf= 0,2 (EtOAc:CH3OH, 6:4).
1H RMN (400 MHz, CD3 OD): 57,60 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,13-7,04 (m, 2H), 7,05-6,96 (m, 1H), 4,02-3,94 (m, 1H), 2,99-2,87 (m, 3H), 2,78 (dd, J = 13,1, 9,7 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 290,2 (M+H)+.
D)
Figure imgf000128_0002
A una solución de 7-R (2,15 g, 7,4 mmol) en CH3 CN (74 ml, 10 ml/mmol) y DMF (7,4 ml, 1 ml/mmol), se agregó N,N-diisopropiletilamina (1,06 ml, 5,9 mmol) y cloroformiato de alilo (7,9 ml, 74 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 16 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 8-R (1,69 g, 61 %).
Rf= 0,4 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,25 (s, 1H), 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 8,1,0,9 Hz, 1H), 7,16 (dddd, J = 27,8, 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,90 (ddt, J = 17,3, 10,7, 5,6 Hz, 1H), 5,34-5,22 (m, 1H), 5,20 (dt, J = 10,5, 1,4 Hz, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,55 (dq, J = 5,4, 1,7 Hz, 2H), 4,02 (s, 1H), 3,35 (dt, J = 10,0, 4,7 Hz, 1H), 3,21 (s, 1H), 2,95 (ddd, J = 21,6, 15,4, 9,1 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 274,3 (M-Boc+H)+.
E)
Figure imgf000128_0003
A una solución de 8-R (1,30 g, 3,50 mmol) en CH2Ch (58 ml, 16,6 ml/mmol), se agregó ácido trifluoroacético (30 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 1,5 h, y se concentró bajo vacío para proporcionar 9-R bruto que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,95 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,09 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,87 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1H), 5,34-5,13 (m, 2H), 4,50 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,62 (bs, 1H), 3,42 (dd, J = 14,9, 3,9 Hz, 1H), 3,36-3,20 (m, 1H), 3,11-3,00 (m, 2H).
ESI-MS m/z: 274,3 (M+H)+.
Ejemplo 0-4. Síntesis de N-[(S)-(2-amino-3-(7H-indol-3-il)propil)]carbamato de alilo (9-S)
Figure imgf000129_0001
A)
Figure imgf000129_0002
A una solución de L-triptofanol (2-S) (2,0 g, 10,4 mmol) en CH3CN (42 ml, 4 ml/mmol), se agregó dicarbonato de di-ter-butilo (4,6 g, 20,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 3 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 5-S (2,24 g, 73 %).
Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCl3): 5 8,10 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,23-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,99 (s, 1H), 3,70 (dd, J = 11,0, 3,8 Hz, 1H), 3,61 (dd, J = 11,0, 5,5 Hz, 1H), 3,00 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 2,01 (s, 1H), 1,42 (s, 9H).
B)
Figure imgf000129_0003
A una solución de 5-S (1,2 g, 4,13 mmol) en CH2W2 (24,8 ml, 6 ml/mmol), se agregó ftalimida (1,33 g, 9,1 mmol), trifenilfosfino (2,4 g, 9,1 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Se agregó una solución de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) (3 ml, 10,32 mmol) en CH2Ch (12,4 ml, 3 ml/mmol) durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 16 h y se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 6-S (2,8 g, >100 %).
Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,49 (s, 1H), 7,80 (dd, J = 5,4, 3,1 Hz, 2H), 7,66 (dd, J = 5,6, 3,2 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,21-7,04 (m, 3H), 4,74 (s, 1H), 4,42 (s, 1H), 3,83 (dd, J = 13,9, 3,7 Hz, 1h), 3,72 (dd, J = 13,9, 9,9 Hz, 1H), 3,10-3,01 (m, 2h), 1,23 (s, 9H).
C)
Figure imgf000130_0001
A una solución de 6-S (0,86 g, 2,07 mmol) en etanol (72 ml, 36 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (10 ml, 207 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2,25 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 50:50) se realizó para proporcionar 7-S (1,0 g, 84 %).
Rf= 0,2 (EtOAc:CH3OH, 6:4).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,61 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,13-6,97 (m, 2H), 7,09 (s, 1H), 4,06­ 3,96 (m, 1H), 3,01-2,76 (m, 4H), 1,38 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 290,3 (M+H)+.
D)
Figure imgf000130_0002
A una solución de 7-S (0,95 g, 3,3 mmol) en CH3CN (33 ml, 10 ml/mmol) y DMF (3,3 ml, 1 ml/mmol), se agregó N,N-diisopropiletilamina (0,5 ml, 2,6 mmol) y cloroformiato de alilo (3,5 ml, 33 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 20 h. La mezcla se diluyó con EtoAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 8-S (0,88 g, 73 %).
Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,17 (s, 1H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 8,1,0,9 Hz, 1H), 7,13 (dddd, J = 27,8, 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,90 (ddt, J = 17,3, 10,7, 5,6 Hz, 1H), 5,31-5,18 (m, 2H), 5,09 (s, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,59-4,52 (m, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,37 (dt, J = 10,0, 4,7 Hz, 1H), 3,21 (s, 1H), 3,05-2,87 (m, 2H), 1,42 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 274,3 (M-Boc+H)+.
E)
Figure imgf000130_0003
A una solución de 8-S (0,875 g, 2,3 mmol) en CH2Ch (38 ml, 16,6 ml/mmol), se agregó ácido trifluoroacético (19 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 2 h y se concentró bajo vacío para proporcionar 9-S bruto, que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,56 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,13 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,94 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1H), 5,34-5,16 (m, 2H), 4,56 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,60 (bs, 1H), 3,43 (dd, J = 14,9, 3,9 Hz, 1H), 3,37-3,31 (m, 1H), 3,14-2,99 (m, 2H).
ESI-MS m/z: 274,3 (M+H)+.
Ejemplo 0-5
A)
Figure imgf000131_0001
A una solución de 1 (1,45 g, 2,33 mmol) en ácido acético (58 ml, 0,08 M), se agregó 9-R (0,95 g, 3,50 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 18 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporciona el compuesto 10-R (1,3 g, 64 %).
Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,66 (s, 1H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,10 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,3 Hz, 1H), 7,01 (td, J = 7,5, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,23 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,99-5,89 (m, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,44-5,21 (m, 2H), 5,14-4,99 (m, 2H), 4,63 (ddd, J = 7,3, 4,4, 1,5 Hz, 2H), 4,36 (s, 1 h), 4,33-4,24 (m, 1H), 4,29-4,26 (m, 1H), 4,21 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,19-4,13 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,56 (s, 1H), 3,48-3,43 (m, 3H), 3,27 (dt, J = 13,2, 4,0 Hz, 1H), 3,04-2,88 (m, 2H), 2,56 (dd, J = 15,2, 3,8 Hz, 1H), 2,49-2,35 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,07 (s, 3h).
ESI-MS m/z: 877,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000131_0002
A una solución de 10-R (600 mg, 0,68 mmol) en CH2Ch (12 ml, 18 ml/mmol), se agregó dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio(N) (77 mg, 0,1 mmol) y ácido acético (0,4 ml, 6,8 mmol). Se agregó hidruro de tributilestaño (1,1 ml, 4,08 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 0,5 h y se concentró bajo vacío. El producto bruto obtenido se diluyó con EtOAc, se agregó una solución acuosa saturada de NH4Cl, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 11-R (440 mg, 82 %).
Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,64 (s, 1H), 7,38 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,11 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1H), 7,03 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,24 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,28 (d, J = 5,1 Hz, 1h), 4,21 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,16 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,51-3,39 (m, 4H), 3,32-3,13 (m, 3H), 2,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 2,89-2,76 (m, 2h ), 2,73-2,57 (m, 1H), 2,42 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 793,2 (M+H)+.
C)
Figure imgf000132_0001
A una solución de 11-R (850 mg, 1,07 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,70 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (3,64 g, 21,4 mmol). Luego de 17 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 12-R (553 mg, 66 %).
Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CDCl3): 57,60 (s, 1H), 7,38 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,11 (ddt, J = 8,3, 7,1, 1,2 Hz, 1H), 7,02 (ddt, J = 8,3, 7,1, 1,2 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,22 (s, 1h), 6,00 (s, 1H), 5,16 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,87 (s, 1 h), 4,54 (s, 1H), 4,51 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 11,3, 2,2 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,52 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,24 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,99-2,78 (m, 4H), 2,66 (dd, J = 14,9, 3,5 Hz, 1H), 2,49-2,39 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,21-2,16 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CD3OD): 5 171,7, 169,4, 148,7, 145,9, 143,7, 141,4, 140,9, 136,9, 130,8, 130,0, 129,7, 126,0, 121,4, 121,0, 119,7, 119,1, 118,4, 117,5, 114,9, 110,8, 107,5, 106,4, 102,1, 91,3, 63,2, 60,0, 59,0, 58,6, 55,3, 54,6, 52,7, 52,4, 48,4, 45,8, 42,5, 40,2, 24,5, 23,2, 19,2, 15,0, 8,2.
ESI-MS m/z: 766,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-EM m/z: 766,2972 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H44N5O8S+: 766,2905).
C')
Figure imgf000132_0002
A una solución de 10-R (700 mg, 0,8 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,52,5 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,66 g, 16 mmol). Luego de 20 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch: CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 13-R (438 mg, 63 %).
Rf= 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,64 (s, 1H), 7,37 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,32-7,20 (m, 1H), 7,11 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,21 (s, 1H), 6,05-5,90 (m, 1H), 5,99 (s, 1H), 5,75 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,40-5,07 (m, 4H), 4,88 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,68-4,50 (m, 3H), 4,28-4,13 (m, 1H), 4,08 (dt, J = 11,4, 2,4 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,68-3,40 (m, 4H), 3,37-3,19 (m, 2H), 2,98-2,79 (m, 2H), 2,59-2,36 (m, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10-2,16 (m, 1H), 2,08 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 850,3 (M-H2O+H)+.
Ejemplo 0-6
A)
Figure imgf000133_0001
A una solución de 1 (955 mg, 1,5 mmol) en ácido acético (37,5 ml, 0,08 M), se agregó 9-S (627 mg, 2,29 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 18 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporciona el compuesto 10-S (756 mg, 58 %).
Rf= 0,4 (Hexano: EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,78 (s, 1H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,10 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,3 Hz, 1H), 7,01 (td, J = 7,5, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,23 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,07-5,93 (m, 1H), 5,82 (s, 1h), 5,41-5,19 (m, 2H), 5,1 (d, J = 11,7 Hz, 1h ), 4,66 (dt, J = 5,9, 1,3 Hz, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,33-4,20 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,46 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 3,22-3,13 (m, 1H), 3,11-2,88 (m, 4H), 2,66 (dd, J = 15,2, 4,2 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 15,3, 6,0 Hz, 1H), 2,43-2,32 (m, 2H), 2,31 (s, 3h), 2,26 (s, 3H), 2,19 (s, 3h), 2,04 (s, 3H). ESI-MS m/z: 877,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000133_0002
A una solución de 10-S (650 mg, 0,72 mmol) en CH2Ch (13,3 ml, 18 ml/mmol), se agregó dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio(II) (83 mg, 0,11 mmol) y ácido acético (0,42 ml, 7,4 mmol). Se agregó hidruro de tributilestaño (1,2 ml, 4,4 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 0,5 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 11-S (445 mg, 78 %).
Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,74 (s, 1H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,12 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1H), 7,02 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,26 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,42 (s, 1H), 4,36-4,17 (m, 3h), 3,81 (s, 3H), 3,51-3,39 (m, 3H), 2,98-2,75 (m, 4H), 2,69­ 2,60 (m, 2H), 2,47 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,35-2,17 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 793,3 (M+H)+.
C)
Figure imgf000134_0001
A una solución de 11-S (435 mg, 0,55 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,38,5 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (1,84 g, 11 mmol). Luego de 24 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 12-S (152 mg, 35 %).
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CD3OD): 57,34 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H), 7,28 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H), 7,04 (ddt, J = 8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 6,95 (ddt, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,31-6,25 (m, 1H), 6,15-6,05 (m, 1H), 5,31 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,91 (s, 1H), 4,64 (s, 1 h ), 4,40-4,19 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,64 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,44 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,03­ 2,85 (m, 4h), 2,85-2,65 (m, 2H), 2,59 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,52-2,39 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,00 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CD3OD): 5 171,4, 169,3, 148,6, 145,8, 143,5, 141,2, 140,8, 136,5, 131,2, 130,3, 129,5, 126,3, 121,6, 121,2, 119,8, 119,4, 118,6, 117,5, 114,9, 111,0, 107,5, 107,4, 102,2, 91,1, 63,5, 60,5, 59,2, 58,5, 55,3, 54,7, 53,4, 52,7, 48,6, 44,7, 42,7, 39,9, 24,3, 23,4, 19,2, 15,1,8,2.
ESI-MS m/z: 766,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 766,2958 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H44N5O8S: 766,2905).
C')
Figure imgf000134_0002
A una solución de 10-S (5 mg, 0,006 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,0,5 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (29 mg, 0,17 mmol). Luego de 20 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 13-S (5 mg, 100 %).
Rf= 0,40 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,75 (s, 1H), 7,37 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,32-7,20 (m, 1H), 7,12 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 6,08-5,97 (m, 1H), 6,01 (s, 1H), 5,87 (s, 1h), 5,42-5,19 (m, 4H), 4,88 (s, 1H), 4,69-4,65 (m, 2h), 4,58 (s, 1H), 4,28-4,13 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,68-3,40 (m, 2H), 3,24-3,15 (m, 2H), 3,08-2,90 (m, 2H), 2,73-2,57 (m, 2H), 2,53-2,37 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10-2,16 (m, 1H), 2,03 (s, 3H). ESI-MS m/z: 850,3 (M-H2O+H)+.
Ejemplo 0-7.
A) Síntesis de (S)-5-metoxi-triptofanol (17-S)
Figure imgf000135_0001
A una solución de LÍAIH4 (23,4 ml, 1,0 M en THF, 23,4 mmol) a -40 °C, se agregaron cuidadosamente H2 SO4 (0,31 ml, 5,57 mmol) y una suspensión de 5-metoxi-L-triptofan (16-S) (1,0 g, 4,26 mmol, Chem-Impex) en THF (13,4 ml, 0,3 M). La mezcla de reacción se dejó desarrollar a 23 °C, se calentó durante 3 h a 80 °C y 18 h a 23 °C. Se enfrió a -21 °C La mezcla de reacción se templó cuidadosamente con NaOH 2N hasta obtener un pH básico. Se agregó EtOAc y la mezcla se filtró a través de Celite® y se lavó con CH3 OH. El producto bruto se concentró bajo vacío para proporcionar 17-S en forma de un producto bruto que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,19 (dt, J = 8,8, 0,7 Hz, 1H), 7,06-7,00 (m, 2H), 6,72 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,63-3,48 (m, 1H), 3,42-3,33 (m, 1H), 3,17-3,06 (m, 1H), 2,86 (ddt, J = 14,3, 6,1, 0,8 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 14,3, 7,5 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: 221,4 (M+H)+.
B) Síntesis de (R)-5-metoxi-triptofanol (17-R)
Figure imgf000135_0002
A una solución de LiAlH4 (11,7 ml, 1,0 M en THF, 11,7 mmol) a -40 °C, se agregaron cuidadosamente H2 SO4 (0,31 ml, 5,75 mmol) y una suspensión de 5-metoxi-D-triptofan (16-R) (0,5 g, 2,13 mmol, Aldrich) en THF (6,7 ml, 0,3 M). La mezcla de reacción se dejó desarrollar a 23 °C, se calentó durante 3,5 h a 80 °C y 18 h a 23 °C. Se enfrió a -21 °C La mezcla de reacción se templó cuidadosamente con NaOH 2N hasta obtener un pH básico. Se agregó EtOAc y la mezcla se filtró a través de Celite® y se lavó con CH3 OH. El producto bruto se concentró bajo vacío para proporcionar 17-R en forma de un producto bruto que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).
1H RMN (400 MHz, CD3 OD): 57,20 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,06-6,96 (m, 2H), 6,71 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,62-3,52 (m, 1H), 3,37 (dd, J = 10,8, 7,0 Hz, 1H), 3,09 (br s, 1H), 2,82 (dd, J = 14,3, 5,9 Hz, 1H), 2,62 (dd, J = 14,4, 7,6 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: 221,6 (M+H)+.
empo -A)
Figure imgf000136_0001
A una solución de 1 (530 mg, 0,85 mmol) en ácido acético (10,6 ml, 0,08 M), se agregó 17-S (469 mg, 2,13 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 18 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporcionó el compuesto 18-S (420 mg, 60 %).
Rf= 0,3 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1 H RMN (400 MHz, CD3OD): 5 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,66 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 6,27 (s, 1 h), 6,11 (s, 1H), 5,21 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,67 (s, 1H), 4,49-4,29 (m, 4H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3 3,47 (t, J = 5,8 Hz, 3H), 3,37 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,01-2,81 (m, 2h ), 2,75 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 15,1,4,1 Hz,
1H), 2,55-2,35 (m, 4h), 2,34 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,99 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 824,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000136_0002
A una solución de 18-S (420 mg, 0,519 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,36 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,60 g, 15,3 mmol). Transcurridas 3 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para obtener 19-S
(250 mg, 60 %).
Rf= 0,45 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1 H RMN (500 MHz, CD3OD): 5 7,15 (dd, J = 8,9, 0,6 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 2,4, 0,6 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz,
1H), 6,54 (s, 1H), 6,27 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,34 (dd, J
= 11,4, 2,0 Hz, 1H), 4,31-4,27 (m, 2H), 3,76 (s, 3h), 3,75 (s, 3H), 3,66-3,58 (m, 1H), 3,55-3,45 (m, 2h), 3,42 (d, J = 7,8
Hz, 1H), 2,93-2,73 (m, 3H), 2,68 (dd, J = 15,1,4,2 Hz, 1H), 2,54 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 2,42 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 2H),
2,35 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,00 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CD3OD): 5 172,7, 170,8, 155,1, 149,9, 147,2, 145,0, 142,6, 142,2, 133,1, 132,4, 132,1, 131,3, 128,1, 122,5, 121,6, 120,3, 116,4, 113,0, 112,9, 111,4, 109,0, 103,6, 100,8, 92,5, 66,6, 65,0, 61,7, 60,4, 59,9, 56,7, 56,1,54,8, 54,1,51,7, 44,1,41,3, 30,7, 25,4, 24,7, 20,6, 16,3, 9,5.
ESI-MS m/z: 798,1 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 797,2899 [M-H2O+H]+ (Calculado para C42H45N4O10S 797,2851).
Ejemplo 0-9
A)
Figure imgf000137_0001
A una solución de 1 (311 mg, 0,50 mmol) en ácido acético (6,25 ml, 0,08 M), se agregó 17-R (220 mg, 1,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 18 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporcionó el compuesto 18-R (280 mg, 68 %).
Rf= 0,3 (Hexano: EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 7,53 (s, 1H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, J = 8,6, 2,3 Hz, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,23 (s, 1H), 6,02 (s, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,04 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,28 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,24-4,09 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,64 (s, 1H), 3,47-3,40 (m, 3H), 3,01-2,90 (m, 2h ), 2,53 (d, J = 6,9 Hz, 2h), 2,45-2,41 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 824,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000137_0002
A una solución de 18-R (330 mg, 0,40 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,28 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,04 g, 12,0 mmol). Transcurridas 3 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHC03, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para obtener 19-R (224 mg, 69 %).
Rf= 0,44 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1 H RMN (500 MHz, CD3OD): 5 7,14 (dd, J = 8,8, 0,5 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 6,26 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,07 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,68-4,55 (m, 1H), 4,32-4,25 (m, 2H), 4,12 (dd, J = 11,5, 2,1 Hz, 1H), 3,75 (s, 3h), 3,74 (s, 3H), 3,60 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,57-3,45 (m, 3H), 3,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 2,97-2,83 (m, 3H), 2,73 (dd, J = 15,0, 3,4 Hz, 1H), 2,69 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,20 (dd, J = 15,1, 10,4 Hz, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,11-2,08 (m, 1H), 2,05 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CD3OD): 5 173,0, 170,8, 155,0, 149,8, 147,3, 145,0, 142,8, 142,3, 133,5, 133,1, 132,2, 132,1, 131,1, 130,5, 127,8, 122,5, 121,7, 120,0, 116,4, 113,5, 112,9, 111,4, 110,2, 103,5, 100,9, 92,6, 66,8, 64,5, 61,3, 60,4, 60,0, 56,8, 56,1,55,9, 54,1,44,1,41,3, 25,6, 24,5, 20,6, 16,2, 9,6.
ESI-MS m/z: 797,4 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 797,2896 [M-H2O+H]+ (Calculado para C42H45N4O10S 797,2851).
Ejemplo 0-10. Síntesis de N-[(S)-2-amino-3-(5-metoxi-7H-indol-3-il)propil)]carbamato de alilo (24-S)
Figure imgf000138_0001
A)
Figure imgf000138_0002
A una solución de 17-S (6,9 g, 31,4 mmol) en CH3CN (126 ml, 4 ml/mmol), se agregó dicarbonato de di-ter-butilo (13,7 g, 62,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 5,5 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (CH2Cl2:CH3OH, de 99:1 a 85:15) proporciona 20-S (4,5 g, 45 %).
Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,04 (s, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,87 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,73-3,58 (m, 2H), 2,96 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).
B)
Figure imgf000138_0003
A una solución de 20-S (4,5 g, 14 mmol) en CH2Ch (84 ml, 6 ml/mmol), se agregó ftalimida (4,5 g, 30,9 mmol), trifenilfosfino (8,1 g, 30,9 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Se agregó una solución de 40 % de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en CH2Cl2 (10,4 ml, 35 mmol) durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 18 h y se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 21-S (5,8 g, 92 %).
Rf= 0,55 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 8,48 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 2H), 7,69-7,61 (m, 2H), 7,21 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 18,5, 2,4 Hz, 2H), 6,81 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 4,87 (s, 1H); 4,39 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,83-3,66 (m, 2H), 2,98 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 1,20 (s, 9H).
C)
Figure imgf000139_0001
A una solución de 21-S (6,29 g, 14 mmol) en etanol (420 ml, 30 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (61,1 ml, 1260 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) provee 22-S (4,2 g, 95 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,76 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 4,06-3,97 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,06-2,82 (m, 4H), 1,37 (s, 9H).
D)
Figure imgf000139_0002
A una solución de 22-S (4,0 g, 12,52 mmol) en CH3CN (125 ml, 10 ml/mmol) y DMF (12 ml, 1 ml/mmol), se agregaron N,N-diisopropiletilamina (1,8 ml, 10 mmol) y cloroformiato de alilo (13,3 ml, 125 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 5 h. La mezcla se diluyó con EtoAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para obtener 23-S (2,65 g, 52 %).
Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,11 (s, 1H), 7,28-7,20 (m, 1H), 7,04 (d, J = 13,1 Hz, 2H), 6,85 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 5,97-5,82 (m, 1H), 5,33-5,24 (m, 1H), 5,19 (dt, J = 10,4, 1,3 Hz, 1H), 5,11 (s, 1H), 4,82 (s, 1H), 4,55 (d, J = 5,6 Hz, 2h), 4,01 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,37 (d, J = 13,7 Hz, 1H), 3,21 (s, 1H), 2,89 (dd, J = 14,5, 7,0 Hz, 1H), 1,41 (s, 9H).
E)
Figure imgf000139_0003
A una solución de 23-S (2,60 g, 6,44 mmol) en CH2Ch (106 ml, 16,6 ml/mmol), se agregó ácido trifluoroacético (54 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 1,5 h y se concentró bajo vacío para proporcionar 24-S (3,9 g, 100 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 58,27 (s, 1H), 7,25 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,96 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,87 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 5,81 (ddt, J = 16,3, 10,9, 5,7 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 19,3, 13,6 Hz, 2H), 4,49 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,81-3,55 (m, 1h), 3,62-3,39 (m, 2H), 3,08 (qd, J = 15,1,7,3 Hz, 2H).
Ejemplo 0-11
A)
Figure imgf000140_0001
A una solución de 1 (120 mg, 0,19 mmol) en ácido acético (6 ml, 0,08 M), se agregó 24-S (117 mg, 0,35 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 18 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporciona el compuesto 25-S (95 mg, 54 %).
Rf= 0,4 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,64 (s, 1H), 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,77 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 6,03 (s, 1H), 6,02-5,93 (m, 1H), 5,76 (s, 1h), 5,38 (d, J = 10,5 Hz, 1h), 5,26 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,57 (s, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,33-4,19 (m, 3h), 3,82 (s, 3H), 3,79 (s, 3h ), 3,46 (s, 2h), 3,17 (s, 1H), 3,10-2,90 (m, 3H), 2,68-2,45 (m, 2H), 2,38-2,33 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,04 (s, 2H).
ESI-MS m/z: 907,1 (M+H)+.
B)
Figure imgf000140_0002
A una solución de 25-S (90 mg, 0,1 mmol) en CH2Ch (2 ml, 18 ml/mmol) se agregaron dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio(II) (12 mg, 0,1 mmol) y ácido acético (0,056 ml, 0,99 mmol). Se agregó hidruro de tributilestaño (0,16 ml, 0,60 mmol) a 0 °C, La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 0,5 h, y se concentró bajo vacío. Se llevó a cabo una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 26-S (75 mg, 92 %).
Rf= 0,25 (CH2Ch:CH3OH, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,62 (s, 1H), 7,15 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,81-6,76 (m, 2H), 6,72 (s, 1H), 6,25 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 1,2 Hz, 1h), 5,12 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,36-4,24 (m, 2H), 4,20 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,44 (dd, J = 22,0, 7,1 Hz, 2H), 3,08-2,78 (m, 4H), 2,73-2,64 (m, 2H), 2,41­ 2,22 (m, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25-2,15 (m, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 823,3 (M+H)+.
C)
Figure imgf000141_0001
A una solución de 26-S (70 mg, 0,085 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,6 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (335 mg, 1,7 mmol). Luego de 18 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 27-S (23 mg, 33 %).
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,62 (s, 1H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,21 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,22 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,58-4,42 (m, 3H), 4,29-4,10 (m, 2H), 3,84-3,80 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3h), 3,53-3,48 (m, 2H), 3,22 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,12 (s, 1H), 3,02 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 2,89-2,64 (m, 3h), 2,46 (s, 3H), 2,42-2,34 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CDCb): 5 172,1, 168,7, 154,0, 147,6, 145,6, 143,0, 141,2, 140,8, 131,6, 130,6, 129,6, 127,1, 121,8, 120,9, 118,4, 115,2, 112,5, 111,8, 101,8, 100,2, 81,5, 62,6, 60,6, 58,0, 57,8, 56,0, 55,8, 55,0, 42,3, 41,4, 31,9, 29,7, 27,8, 26,9, 25,6, 24,0, 22,7, 20,5, 16,0, 14,1, 13,6, 9,7.
ESI-MS m/z: 796,3 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 796,3062 [M-H2O+H]+ (Calculado para C42H46N5O9S 796,3011).
Ejemplo 0-12. Síntesis de N-[(R)-2-amino-3-(5-metoxi-7H-indol-3-il)propil)]carbamato de alilo (24-R)
Figure imgf000141_0002
A)
Figure imgf000141_0003
A una solución de 17-R (2,35 g, 10,7 mmol) en CH3CN (43 ml, 4 ml/mmol), se agregó dicarbonato de di-ter-butilo (4,67 g, 21,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 2,5 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (CH2Cl2:CH3OH, de 99:1 a 85:15) proporcionó 20-R (1,7 g, 50 %).
Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,05 (s, 1H), 7,25 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 8 ,8 , 2,4 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,69 (td, J = 9,2, 7,5, 5,3 Hz, 1H), 3,61 (dd, J = 10,9, 5,6 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).
B)
Figure imgf000142_0001
A una solución de 20-R (1,7 g, 5,3 mmol) en CH2Cl2 (32 ml, 6 ml/mmol), se agregaron ftalimida (1,72 g, 11,7 mmol), trifenilfosfino (3,06 g, 11,7 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Se agregó una solución de 40 % de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en CH2Cl2 (4,0 ml, 13,2 mmol) durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 16 h y se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 21-R (2,0 g, 84 %).
Rf= 0,45 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 58,31 (s, 1H), 7,80 (dd, J = 5,4, 3,0 Hz, 2H), 7,67 (dd, J = 5,4, 3,0 Hz, 2H), 7,30-7,12 (m, 2H), 7,08 (dd, J = 15,2, 2,4 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 8 ,8 , 2,4 Hz, 1H), 4,85 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,43 (q, J = 5,3 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,83-3,68 (m, 2H), 3,01 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 1,22 (s, 9H).
C)
Figure imgf000142_0002
A una solución de 21-R (2,0 g, 4,45 mmol) en etanol (133 ml, 30 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (21,6 ml, 445 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2 h y se concentró bajo vacío. Se llevó a cabo una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) para proporcionar 22-R (1,15 g, 81 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,21 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,75 (dd, J = 8 ,8 , 2,4 Hz, 1H), 3,95 (ddd, J = 10,7, 8,7, 5,4 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,98-2,79 (m, 3H), 2,75 (dd, J = 13,1,9,4 Hz, 1H), 1,37 (s, 9H).
D)
Figure imgf000142_0003
A una solución de 22-R (1,1 g, 3,4 mmol) en CH3CN (34 ml, 10 ml/mmol) y DMF (3,4 ml, 1 ml/mmol), se agregaron W,N-diisopropiletilamina (0,5 ml, 2,7 mmol) y cloroformiato de alilo (3,7 ml, 34 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 19 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 23-R (0,95 g, 69 %). Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 8,55 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,98-6,87 (m, 1H), 6,82 (dt, J = 8,8, 1,8 Hz, 1H), 5,96-5,81 (m, 1H), 5,37-5,22 (m, 2H), 5,22-5,14 (m, 1H), 5,02-4,97 (m, 1h), 4,60-4,47 (m, 2H), 4,00 (s, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,31 (s, 1H), 3,19 (s, 1H), 2,88 (td, J = 14,5, 13,3, 5,9 Hz, 2H), 1,40 (s, 9h).
E)
Figure imgf000143_0001
A una solución de 23-R (0,94 g, 2,3 mmol) en CH2Cl2 (39 ml, 16,6 ml/mmol), se agregó ácido trifluoroacético (19 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 1,5 h y se concentró bajo vacío para proporcionar 24-R (0,72 g, 100 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1 H RMN (400 MHz, CD3OD): 5 7,27 (d, J = 8,8, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,80 (ddd, J = 8,8, 2,4, 0,9 Hz, 1H), 5,95 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,60-4,53 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,59 (dt, J = 11,4, 5,5 Hz, 1H), 3,47-3,30 (m, 2H), 3,13-2,94 (m, 2h ).
Ejemplo 0-13
A)
Figure imgf000143_0002
A una solución de 1 (0,71 g, 1,14 mmol) en ácido acético (45 ml, 0,08 M), se agregó 24-R (0,54 mg, 1,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 7 h y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2C L Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporciona el compuesto 25-R (670 mg, 65 %).
Rf= 0,4 (Hexano: EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 7,52 (s, 1H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,83-6,73 (m, 2H), 6,61 (s, 1H), 6,23 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,05-5,89 (m, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,44-5,30 (m, 1H), 5,25 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,13­ 4,99 (m, 2H), 4,71-4,59 (m, 2H), 4,36 (s, 1h), 4,30-4,07 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,61-3,53 (m, 1h); 3,48­ 3,41 (m, 3H), 3,26 (dt, J = 13,3, 3,8 Hz, 1H), 3,04-2,88 (m, 2H), 2,52 (dd, J = 14,9, 3,7 Hz, 1H), 2,46-2,35 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,12-2,02 (m, 1H), 2,09 (s, 3h).
ESI-MS m/z: 907,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000144_0001
A una solución de 25-R (745 mg, 0,82 mmol) en CH2CI2 (15 ml, 18 ml/mmol), se agregaron dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio(N) (92 mg, 0,1 mmol) y ácido acético (0,47 ml, 8,2 mmol). Se agregó hidruro de tributilestaño (1,33 ml, 4,9 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 0,75 h y se concentró bajo vacío. Se llevó a cabo una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar 26-R (680 mg, >100 %).
Rf= 0,25 (CH2Ch:CH3OH, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 5 7,57 (s, 1H), 7,16 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,85-6,72 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,21 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,00 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,05-4,97 (m, 1H), 4,63 (s, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,31-4,09 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 3h), 3,50-3,40 (m, 3h), 3,24 (dq, J = 9,9, 5,3 Hz, 1H), 2,95 (s, 1H), 2,91-2,75 (m, 2h ), 2,62 (dd, J = 14,8, 3,6 Hz, 1H), 2,43-2,28 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 823,3 (M+H)+.
C)
Figure imgf000144_0002
A una solución de 26-R (660 mg, 0,80 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,56 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,70 g, 16,0 mmol). Luego de 16,5 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar 27-R (271 mg, 42 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,46 (s, 1H), 7,16 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,72 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 6,20 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 5,99 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,15 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,52 (m, 2h), 4,17 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,55-3,43 (m, 2H), 3,32-3,20 (m, 2h), 3,01-2,82 (m, 4H), 2,68-2,59 (m, 1H), 2,44-2,31 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,30-2,19 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,15 (s, 3h), 2,07 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CD3OD): 5 171,7, 171,3, 153,8, 153,3, 148,0, 147,6, 145,4, 145,4, 143,1, 141,3, 140,7, 131,6, 131,4, 131,2, 129,3, 126,8, 121,6, 120,9, 118,3, 115,6, 112,2, 111,8, 101,8, 100,2, 81,7, 63,5, 63,1,61,7, 58,0, 57,8, 56,1,55,8, 55,0, 42,2, 42,1,41,4, 41,0, 25,1,23,8, 20,5, 16,0, 9,7.
ESI-MS m/z: 796,3 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 796,3045 [M-H2O+H]+ (Calculado para C42H46N5O9S 796,3011).
Ejemplo de referencia 0-14
A)
Figure imgf000145_0001
A una solución del compuesto 1 (2,0 g, 3,21 mmol) en acetonitrilo (200 ml, 0,01 M), se agregaron clorhidrato de 2-benzofuran-3-il-etilamina (30) (1,90 g, 9,65 mmol, Sigma Aldrich) y cloruro cianúrico (TCT) (200 mg, 10 %). La mezcla de reacción se agitó a 85 °C durante 24 h. Posteriormente, se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 9:1 a 1:9) proporciona el compuesto 31 (1,95 g, 79 %).
Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,38-7,36 (m, 2H), 7,19-7,10 (m, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,20 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,05 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,54 (s, 1H), 4,33-4,24 (m, 2H), 4,23-4,16 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,49-3,38 (m, 2H), 3,28-3,21 (m, 1H), 3,06-2,78 (m, 5H), 2,57-2,50 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (m, 3h), 2,08 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 765,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000145_0002
A una solución del compuesto 31 (380 mg, 0,49 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 25 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (1,30 g, 7,45 mmol). Luego de 5 h a 23 °C, se agregó una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 32 (175 mg, 47 %).
Rf= 0,40 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,35 (ddd, J = 10,7, 7,6, 1,1 Hz, 2H), 7,14 (dtd, J = 19,7, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 6,65 (s, 1H), 6,16 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,15 (dd, J = 11,5, 1,2 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,48 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,44 (s, 1H), 4,20-4,06 (m, 2H), 3,81 (s, 1H), 3,50 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 3,30 (ddd, J = 12,6, 7,9, 5,1 Hz, 1H), 3,22 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 2,84 (dd, J = 19,2, 12,0 Hz, 3H), 2,59-2,49 (m, 2H), 2,36 (s, 3h), 2,27 (s, 3H), 2,21-2,14 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CDCla): 5 171,2, 168,7, 154,4, 150,0, 147,9, 145,5, 142,9, 140,9, 140,8, 131,3, 129,0, 127,7, 123,7, 122,2, 121,2, 120,8, 118,9, 118,3, 115,5, 113,5, 111,7, 101,7, 82,1,62,7, 61,7, 60,3, 57,8, 57,4, 55,9, 55,0, 42,2, 41,3, 39,7, 38,2, 29,7, 23,7, 21,3, 20,6, 15,9, 9,7. ESI-MS m/z: 738,6 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 756,2654 [M+H]+ (Calculado para C40H42N3O10S 756,2585).
Ejemplo de referencia 0-15
A)
Figure imgf000146_0001
A una solución de 1 (500 mg, 0,80 mmol) en ácido acético (10 ml, 0,08 M), se agregó clorhidrato de 2-(5-metoxibenzofuran-3-il)-etilamina (33) (Diverchim, ref: DW04590) (444 mg, 1,60 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50 °C durante 6 días y luego se evaporó el ácido acético. Se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, 1:1) proporciona 34 (270 mg, 43 %).
Rf= 0,3 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,25 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,80-6,73 (m, 2H), 6,63 (s, 1H), 6,18 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H), 5,03 (dd, J = 11,5, 1,3 Hz, 1H), 4,52 (s, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,26 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 1H), 4,23-4,16 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,46-3,43 (m, 1h ), 3,43-3,37 (m, 1h ), 3,24 (s, 1H), 3,03 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 17,9, 9,2 Hz, 1H), 2,87-2,72 (m, 2H), 2,53-2,47 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 795,8 (M+H)+.
B)
Figure imgf000146_0002
A una solución de 34 (345 mg, 0,43 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 30 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,20 g, 13,0 mmol). Transcurridas 3 h a 23 °C, se agregó una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Ch, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Ch. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para obtener 35 (175 mg, 51 %).
Rf= 0,35 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CD3OD): 57,27 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,23 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 11,5 Hz, 1 h), 4,27-4,08 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,63 (d, J = 14,1 Hz, 2H), 3,40-3,34 (m, 2H), 2,93-2,87 (m, 5H), 2,80 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 2,57-2,54 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CD3OD): 5 171,9, 170,6, 157,5, 147,0, 145,0, 142,3, 141,0, 132,2, 131,1, 129,1, 122,2, 120,9, 120,2, 116,3, 115,1, 114,0, 112,7, 111,4, 103,5, 102,7, 92,9, 62,0, 60,3, 59,8, 59,4, 56,5, 56,2, 56,0, 54,0, 43,8, 41,2, 40,7, 30,8, 30,3, 28,7, 24,5, 21,6, 20,6, 16,2, 9,6. ESI-MS m/z: 768,6 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 768,2630 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H42N3O10S 768,2585).
Ejemplo 0-16
Figure imgf000147_0001
A una solución de LÍAIH4 (148 ml, 1,0 M en THF, 148 mmol) a -40 °C, se agregaron cuidadosamente H2SO4 (7,14 ml, 72,9 mmol) y una suspensión de ácido (S)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propanoico (36-S) (preparado de acuerdo con lo descripto en Tetrahedron Asymmetry 2O08 , 19, 500-511) (5,54 g, 26,9 mmol) en THF (85 ml, 0,003 M). La mezcla de reacción se dejó desarrollar a 23 °C, se calentó a 80 °C durante 3 h y 18 h a 23 °C. Se enfrió a -21 °C La mezcla de reacción se templó cuidadosamente con NaOH 2N hasta que se obtuvo un pH básico. Se agregó EtOAc, la mezcla se filtró a través de Celite® y se lavó con CH3OH. El producto bruto se concentró bajo vacío para proporcionar el compuesto 37-S (3,93 g, >100 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,67-7,62 (m, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,51-7,41 (m, 1H), 7,34-7,18 (m, 2H), 3,69-3,48 (m, 1H), 3,44 (dd, J = 10,8, 6,6 Hz, 1H), 3,18 (dtd, J = 7,4, 6,4, 4,6 Hz, 1H), 2,88 (ddd, J = 14,4, 6,1, 1,0 Hz, 1H), 2,68 (ddd, J = 14,4, 7 ,5, 0,9 Hz, 1H).
Ejemplo 0-17
Figure imgf000147_0002
A una solución de LiAlH4 (118 ml, 1,0 M en THF, 118 mmol) a -40 °C, se agregaron cuidadosamente H2SO4 (3,1 ml, 57,8 mmol) y una suspensión de ácido (R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propanoico (36-R) (preparado de acuerdo con lo descripto en Tetrahedron Asymmetry 2O08 , 19, 500-511) (4,4 g, 21,4 mmol) en THF (67,4 ml, 0,003 M). La mezcla de reacción se dejó desarrollar a 23 °C, se calentó a 80 °C durante 3 h y 18 h a 23 °C. Se enfrió a -21 °C La mezcla de reacción se templó cuidadosamente con NaOH 2N hasta que se obtuvo un pH básico. Se agregó EtOAc y la mezcla se filtró a través de Celite® y se lavó con CH3OH. El producto bruto se concentró bajo vacío. Se llevó a cabo una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15, Sílice amina) para proporcionar el compuesto 37-R (2,77 g, 68 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,63-7,52 (m, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,46-7,33 (m, 1H), 7,21 (dtd, J = 19,9, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 3,57 (dd, J = 10,7, 4,6 Hz, 1H), 3,42 (dd, J = 10,8, 6,6 Hz, 1h), 3,15 (dtd, J = 7,6, 6,3, 4,6 Hz, 1H), 2,84 (ddd, J = 14,4, 6,0, 1,0 Hz, 1H), 2,64 (ddd, J = 14,4, 7,5, 0,9 Hz, 1H).
Ejemplo 0-18
A)
Figure imgf000148_0001
A una solución del compuesto 1 (850 mg, 1,36 mmol) en CH3CN (136 ml, 0,01 M), se agregaron (S)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propan-1-ol (37-S) (1,30 g, 6,83 mmol) y cloruro cianúrico (TCT) (170 mg, 20 %). La mezcla de reacción se agitó a 85 °C durante 24 h. Posteriormente, se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 9:1 a 1:9) proporciona el compuesto 38-S (750 mg, 69 %).
Rf= 0,25 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,39-7,33 (m, 1H), 7,33-7,29 (m, 1H), 7,20 (ddd, J = 8,3, 7,2, 1,4 Hz, 1H), 7,14 (td, J = 7,4, 1,0 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,21 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,08 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,32-4,23 (m, 2H), 4,19 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,52-3,41 (m, 3H), 3,36-3,29 (m, 1H), 3,13 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,00-2,81 (m, 3H), 2,57 (dd, J = 15,7, 4,9 Hz, 1H), 2,50 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,31-2,25 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 2,05 (s, 3h).
ESI-MS m/z: 795,2 (M)+.
B)
Figure imgf000148_0002
A una solución del compuesto 38-S (890 mg, 1,12 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 75 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (4,70 g, 28,0 mmol). Luego de 18 h a 23 °C, se agregó una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 39-S (500 mg, 57 %).
Rf= 0,30 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,38-7,33 (m, 1H), 7,33-7,28 (m, 1H), 7,23-7,16 (m, 1H), 7,16-7,09 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,18 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,19 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,49 (s, 2h), 4,24-4,10 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,54 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 2,3 Hz, 3H), 3,33 (t, J = 10,1 Hz, 2H), 3,22 (s, 1H), 2,98 (s, 1H), 2,84 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 2,62-2,53 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,30-2,24 (m, 1H), 2,28 (s, 3h), 2,14 (s, 3h), 2,04 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CDCb): 5 172,0, 170,7, 156,1, 150,6, 149,9, 147,1, 145,0, 142,4, 142,2, 132,0, 131,4, 128,7, 125,5, 123,8, 122,6, 121,6, 120,1, 116,5, 114,4, 112,3, 103,5, 92,6, 66,0, 65,1,62,2, 60,4, 59,7, 56,6, 56,1,54,8, 54,1, 51,6, 44,0, 41,3, 38,3, 30,8, 24,8, 20,6, 16,3, 9,6. ESI-MS m/z: 768,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 768,2652 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H42N3O10S 768,2585)
Ejemplo 0-19
A)
Figure imgf000149_0001
A una solución del compuesto 1 (100 mg, 0,16 mmol) en CH3CN (16 ml, 0,01 M), se agregaron (R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propan-1-ol (37-R) (307 mg, 1,6 mmol) y cloruro cianúrico (TCT) (40 mg, 40 %). La mezcla de reacción se agitó a 85 °C durante 44 h. Posteriormente, se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2C L Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 9:1 a 1:9) proporciona el compuesto 38-R (95 mg, 75 %).
Rf= 0,3 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,42-7,27 (m, 2H), 7,28 -7,09 (m, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,20 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,00 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,31-4,16 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,79­ 3,76 (m, 1H), 3,63 (s, 1h), 3,54-3,40 (m, 4H), 2,99-2,87 (m, 2H), 2,68 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 2,56-2,47 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 795,2 (M+H)+.
B)
Figure imgf000149_0002
A una solución del compuesto 38-R (95 mg, 0,11 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 11 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (601 mg, 3,58 mmol). Luego de 18 h a 23 °C, se agregó una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Cb:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 39-R (66 mg, 70 %).
Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,39-7,31 (m, 2H), 7,23-7,07 (m, 2H), 6,59 (s, 1H), 6,17 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,12 (dd, J = 11,3, 1,2 Hz, 1H), 4,84 (s, 1h), 4,56-4,43 (m, 2H), 4,19-4,07 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,83-3,74 (m, 1H), 3,66-3,51 (m, 3H), 3,24 (s, 1H), 2,99-2,79 (m, 2H), 2,75-2,64 (m, 1h ), 2,59-2,43 (m, 2h), 2,38 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CD3OD): 5 170,5, 169,1, 154,9, 148,9, 148,5, 145,7, 143,6, 141,1, 140,8, 130,6, 129,9, 127,1, 124,1, 122,4, 122,4, 121,2, 120,3, 118,7, 118,2, 115,1, 113,6, 110,9, 102,1, 91,1, 65,0, 63,3, 60,2, 59,0, 58,4, 55,4, 54,5, 52,7, 52,3, 42,5, 38,7, 29,4, 23,5, 23,2, 19,1, 14,8, 8,3.
ESI-MS m/z: 768,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2628 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H42N3O10S 768,2585).
Ejemplo 0-20. Síntesis de alil-N-[(S)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propil]carbamato (44-S).
Figure imgf000150_0001
A)
Figure imgf000150_0002
A una solución del compuesto 37-S (1,0 g, 5,22 mmol) en CH3CN (21 ml, 4 ml/mmol) se agregó dicarbonato de di-terbutilo (2,28 g, 10,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 2 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 40-S (0,5 g, 33 %).
Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,64 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,36-7,19 (m, 2H), 4,94 (s, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,71-3,56 (m, 2H), 2,93 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,41 (s, 9h).
B)
Figure imgf000150_0003
A una solución del compuesto 40-S (0,5 g, 1,71 mmol) en CH2Cl2 (11 ml, 6 ml/mmol), se agregaron ftalimida (0,55 g, 3,77 mmol) y trifenilfosfino (0,99 g, 3,77 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Una solución de 40 % de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en CH2Ch (1,26 ml, 4,29 mmol) se agregó durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 18 h y se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 99:1 a 40:60) para proporcionar el compuesto 41-S (0,68 g, 94 %).
Rf= 0,8 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCI3): 57,89-7,79 (m, 2H), 7,83-7,62 (m, 2H), 7,65-7,55 (m, 2H), 7,49-7,42 (m, 1H), 7,33-7,20 (m, 2H), 4,83 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,39 (ddt, J = 12,1,6,3, 2,9 Hz, 1H), 3,88-3,70 (m, 2H), 2,96 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,24 (s, 9H).
C)
Figure imgf000151_0001
A una solución del compuesto 41-S (345 mg, 0,82 mmol) en etanol (25 ml, 30 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (3,6 ml, 73,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2 h y se concentró bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) para proporcionar el compuesto 42-S (233 mg, 98 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,62 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,49-7,42 (m, 2H), 7,33-7,18 (m, 2H), 4,85 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,91 (s, 1H), 2,91-2,76 (m, 3H), 2,67 (dd, J = 13,1, 6,8 Hz, 1h), 1,25 (s, 9H).
D)
Figure imgf000151_0002
A una solución del compuesto 42-S (280 mg, 0,96 mmol) en CH3CN (10 ml, 10 ml/mmol) y DMF (16 ml, 1 ml/mmol) se agregaron N,N-diisopropiletilamina (0,14 ml, 0,77 mmol) y cloroformiato de alilo (1,02 ml, 9,64 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 2 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para proporcionar el compuesto 43-S (445 mg, >100 %).
Rf= 0,5 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,60 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,52-7,43 (m, 2H), 7,34-7,20 (m, 2H), 5,90 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1H), 5,32-5,17 (m, 2H), 4,93-4,86 (m, 1H), 4,56 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,08-3,98 (m, 1H), 3,40-3,21 (m, 2h), 2,88 (m, 2H), 1,25 (s, 9H).
E)
TFA/DCM
^ / ) ^ / N ^ ~ ~ NHAIIoc
' 'qJJ NHBoc Q j p Ioc
N H r NHAI
2
43-S 44-S
A una solución del compuesto 43-S (160 mg, 0,43 mmol) en CH2Ch (8 ml, 16,6 ml/mmol), se agregó ácido trifluoroacético (4 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 1,5 h y se concentró bajo vacío. Se llevó a cabo una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) para proporcionar el compuesto 44-S (175 mg, >100 %).
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,72 (s, 1H), 7,64 (dt, J = 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,49 (dt, J = 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,37-7,22 (m, 2H), 5,94 (ddt, J = 16,3, 10,7, 5,5 Hz, 1H), 5,32 (dq, J = 17,3, 1,7 Hz, 1h ), 5,19 (dq, J = 10,6, 1,5 Hz, 1H), 4,56 (dt, J = 5,7, 1,5 Hz, 2H), 3,56 (qd, J = 7,0, 4,4 Hz, 1H), 3,46-3,32 (m, 1H), 3,32-3,24 (m, 1H), 3,03 (dd, J = 14,8, 6,9 Hz, 1H), 2,91 (ddd, J = 14,8, 7,1, 0,9 Hz, 1H).
Ejemplo 0-21. Síntesis de alil-N-[(R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propil]carbamato (44-R).
Figure imgf000152_0001
A)
Figure imgf000152_0002
A una solución del compuesto 37-R (2,75 g, 14,4 mmol) en CH3CN (58 ml, 4 ml/mmol) se agregó dicarbonato de diter-butilo (6,27 g, 28,76 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 2,5 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 40-R (3,7 g, 88 %).
Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCl3): 57,64 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,52-7,43 (m, 2H), 7,35-7,20 (m, 2H), 4,85 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,00 (bs, 1H), 3,69 (dd, J = 11,0, 4,0 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 10,9, 5,1 Hz, 1h), 2,94 (d, J = 6,9 Hz, 2h), 1,42 (s, 9H). B)
Figure imgf000152_0003
A una solución del compuesto 40-R (3,7 g, 12,7 mmol) en CH2Cl2 (76 ml, 6 ml/mmol), se agregaron ftalimida (4,1 g, 28 mmol) y trifenilfosfino (7,3 g, 28 mmol) y la mezcla se enfrió a 0 °C. Una solución de 40 % de azodicarboxilato de dietilo (DEAD) en CH2O 2 (9,4 ml, 31,7 mmol) se agregó durante 15 min. La reacción se agitó a 23 °C durante 16 h y se concentró bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 41-R (4,05 g, 76 %).
Rf= 0,8 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,67-7,68 (m, 4H), 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,46 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,27 (dtd, J = 17,2, 7,3, 1,4 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,46-4,30 (m, 1H), 3,89-3,66 (m, 2H), 2,97 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,24 (s, 9H).
C)
Figure imgf000153_0001
A una solución del compuesto 41-R (4,0 g, 9,5 mmol) en etanol (285 ml, 30 ml/mmol), se agregó monohidrato de hidrazina (41,5 ml, 856 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 80 °C en un tubo sellado durante 2 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) para proporcionar el compuesto 42-R (2,2 g, 80 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,60 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,44 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,25 (dtd, J = 18,8, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 4,94 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,98-3,78 (m, 1H), 2,90-2,77 (m, 2H), 2,65 (dd, J = 13,1, 7,0 Hz, 1H), 1,40 (s, 9H).
D)
Figure imgf000153_0002
A una solución del compuesto 42-R (2,2 g, 7,6 mmol) en CH3CN (76 ml, 10 ml/mmol) y DMF (7,6 ml, 1 ml/mmol) se agregaron N,N-diisopropiletilamina (1,1 ml, 6,08 mmol) y cloroformiato de alilo (8,05 ml, 76 mmol). La reacción se agitó a 23 °C durante 7 h. La mezcla se diluyó con EtOAc, se agregó NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100) para proporcionar el compuesto 43-R (2,3 g, 81 %).
Rf= 0,7 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,60 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,52-7,43 (m, 2H), 7,34-7,20 (m, 2H), 5,90 (ddt, J = 17,3, 10,8, 5,6 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 17,2, 1H), 5,20 (d, J = 10,4, 1H), 5,10 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 5,4, 2H), 4,08-3,97 (m, 1H), 3,36 (dt, J = 10,7, 4,7 Hz, 1H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,87 (td, J = 14,8, 6,5 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).
E)
Figure imgf000153_0003
A una solución del compuesto 43-R (1,32 g, 3,52 mmol) en CH2Cl2 (60 ml, 16,6 ml/mmol) se agregó ácido trifluoroacético (30 ml, 8,3 ml/mmol). La mezcla de reacción se agitó a 23 °C durante 1,5 h y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 50:50) para proporcionar el compuesto 44-R (0,90 g, 94 %).
Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,75 (s, 1H), 7,69-7,61 (m, 1H), 7,54-7,46 (m, 1H), 7,39-7,24 (m, 2H), 5,95 (ddt, J = 16,3, 10,8, 5,5 Hz, 1H), 5,32 (dd, J = 17,3, 1,8 Hz, 1H), 5,24-5,16 (m, 1h), 4,57 (dt, J = 5,7, 1,5 Hz, 2H), 3,68 (qd, J = 7,1, 4,2 Hz, 1H), 3,48 (dd, J = 14,8, 4,2 Hz, 1H), 3,42-3,30 (m, 1h), 3,14-2,95 (m, 2H).
Ejemplo 0-22
A)
Figure imgf000154_0001
A una solución del compuesto 1 (750 mg, 1,2 mmol) en CH3CN (120 ml, 0,01 M), se agregaron el compuesto 44-S (1370 mg, 6 mmol) y cloruro cianúrico (TCT) (184 mg, 20 %). La mezcla de reacción se agitó a 85 °C durante 23 h y, posteriormente, se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2O 2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 9:1 a 1:9) proporciona el compuesto 45-S (755 mg, 72 %).
Rf= 0,36 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,38-7,28 (m, 2H), 7,23-7,08 (m, 2H), 6,67 (s, 1H), 6,19 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,09-5,95 (m, 1H), 6,04 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,80 (s, 1H), 5,44-5,34 (m, 1H), 5,26 (dq, J = 10,4, 1,3 Hz, 1H), 5,08 (dd, J = 11,4, 1,1 Hz, 1H), 4,70-4,63 (m, 2H), 4,56 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,31-4,18 (m, 3h), 3,80 (s, 3H), 3,50-3,39 (m, 2H), 3,24-3,15 (m, 1H), 3,00 (dt, J = 12,2, 6,0 Hz, 2H), 2,95 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,60 (dd, J = 15,4, 4,5 Hz, 2H), 2,44 (dd, J = 15,6, 5,2 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,25-2,20 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,12 (s, 1H), 2,04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 878,2 (M+H)+.
B)
Figure imgf000154_0002
A una solución del compuesto 45-S (750 mg, 0,85 mmol) en CH2Cl2 (15,3 ml, 18 ml/mmol), se agregaron dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio(II) (96 mg, 0,14 mmol) y ácido acético (0,5 ml, 8,5 mmol). Se agregó hidruro de tributilestaño (1,4 ml, 5,1 mmol) a 0 °C, la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos y se concentró bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y CH2Ch:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar el compuesto 46-S (430 mg, 64 %).
Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,37-7,29 (m, 2H), 7,22-7,11 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,21 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,29-4,23 (m, 2H), 4,14 (s, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,50­ 3,47 (m, 2h), 3,38 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,95-2,71 (m, 4H), 2,68-2,52 (m, 2H), 2,51-2,38 (m, 1H), 2,35 (s, 3h), 2,33-2,26 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,17-2,08 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 794,3 (M+H)+.
C)
Figure imgf000155_0001
A una solución del compuesto 46-S (550 mg, 0,7 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 49 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (2,4 g, 14 mmol). Luego de 16 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4,anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Cb:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 47-S (53 mg, 10 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CDCb): 57,36 (d, 7,9 Hz, 1H), 7,33 (d, 7,4 Hz, 1H), 7,23 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,20 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,20 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,90 (s, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,46-4,39 (m, 1H), 4,25 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,20 (s, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,81 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,58 (s, 1H), 3,40-3,14 (m, 3H), 2,90 (t, J = 13,0 Hz, 1H), 2,76 (m, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,46-2,37 (m, 1H), 2,32-2,26 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).
13C RMN (126 MHz, CD3OD): 5 170,5, 169,2, 154,6, 149,1, 148,7, 145,7, 143,5, 141,0, 140,9, 131,2, 129,6, 126,9, 124,4, 122,5, 121,4, 119,7, 118,7, 115,0, 112,7, 111,0, 110,7, 102,1,91,2, 63,5, 61,2, 59,2, 58,5, 55,3, 54,7, 53,4, 52,7, 43,3, 42,5, 39,9, 36,9, 29,3, 24,1,23,6, 19,1, 15,0, 8,2.
ESI-MS m/z: 767,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2794 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H43N4O9S 767,2745).
Ejemplo 0-23.
A)
Figure imgf000155_0002
A una solución del compuesto 1 (621 mg, 1 mmol) en CH3CN (100 ml, 0,01 M), se agregaron el compuesto 44-R (825 mg, 3 mmol) y cloruro cianúrico (TCT) (248 mg, 40 %). La mezcla de reacción se agitó a 85 °C durante 66 h. Posteriormente, se agregó una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 9:1 a 1:9) proporciona el compuesto 45-R (530 mg, 58 %).
Rf= 0,4 (Hexano:EtOAc, 1:1).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,42-7,28 (m, 2H), 7,23-7,08 (m, 2H), 6,60 (s, 1H), 6,20 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,04 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,01-5,92 (m, 1H), 5,77 (s, 1H), 5,44-5,20 (m, 2H), 5,09 (s, 1H), 5,04-4,96 (m, 1H), 4,71-4,55 (m, 2H), 4,34 (s, 1H), 4,30-4,18 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,53 (dd, J = 10,2, 4,4 Hz, 1H), 3,46 (m, 2H), 3,50-3,40 (m, 1H), 3,03-2,87 (m, 2H), 2,67 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 2,47 (dd, J = 15,6, 3,7 Hz, 1H), 2,40-2,32 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,19-2,12 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 878,3 (M+H)+.
B)
Figure imgf000156_0001
A una solución del compuesto 45-R (552 mg, 0,63 mmol) en CH2CI2 (11,3 ml, 18 ml/mmol), se agregaron dicloruro de bis(trifenilfosfino)paladio II) (70,7 mg, 0,1 mmol) y ácido acético (0,36 ml, 6,3 mmol). Se agregó cloruro de tributilestaño (1,02 ml, 3,8 mmol) a 0 °C y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 0,5 h y se concentró bajo vacío El producto bruto obtenido se diluyó con EtOAc, se agregó una solución acuosa saturada de NH4Cl y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. Se realizó una cromatografía ultrarrápida (Hexano:EtOAc, de 100:1 a 1:100 y EtOAc:CH3OH, de 100:1 a 1:100) para proporcionar el compuesto 46-R (423 mg, 85 %).
Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 1 :1 ).
1H RMN (400 MHz, CDCh): 57,45-7,28 (m, 2H), 7,23-7,08 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 6,19 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,05 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 4,98 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,27 (dd, J = 5,1, 1,7 Hz, 1H), 4,22-4,16 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,49-3,39 (m, 2H), 3,31 (dq, J = 9,8, 5,5, 4,5 Hz, 2H), 2,95 (s, 1H), 2,83 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 2,74-2,51 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,32-2,21 (m, 2H), 2,26 (s, 3H); 2,16 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 794,3 (M+H)+.
C)
Figure imgf000156_0002
A una solución del compuesto 46-R (412 mg, 0,52 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,36 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (1,76 g, 10,4 mmol). Luego de 22 h a 23 °C, la reacción se templó con una mezcla 1:1 de soluciones acuosas saturadas de NaCl y NaHCO3, se agitó durante 15 min, se diluyó con CH2Cl2, se agitó durante 5 min, y se extrajo con CH2Cl2. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 85:15) para proporcionar el compuesto 47-R (175 mg, 43 %).
Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (500 MHz, CDCh): 57,34 (dd, J = 11,1,7,9 Hz, 2H), 7,22-7,07 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,17 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,01 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,11 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,53-4,47 (m, 2H), 4,21-4,07 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,56 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,43 (s, 1H), 3,24 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 2,98-2,78 (m, 4H), 2,72-2,58 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,35-2,27 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
13C RMN (101 MHz, CD3OD): 5 170,6, 169,1, 155,0, 148,8, 145,6, 143,7, 141,1, 140,8, 130,9, 129,7, 126,9, 124,2, 122,4, 121,1, 119,6, 118,9, 118,7, 115,0, 113,2, 112,5, 111,0, 102,1,91,3, 63,3, 60,4, 59,0, 58,4, 55,3, 54,6, 52,6, 51,1, 44,9, 42,4, 39,8, 38,7, 29,4, 24,0, 23,2, 19,1, 15,0, 8,3.
ESI-MS m /z : 767,2 (M-H2O+H)+.
(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2806 [M-H2O+H]+ (Calculado para C41H43N4O9S 767,2745).
Ejemplo de bioactividad de las cargas útiles
El objetivo de este ensayo consiste en evaluar la actividad citostática in vitro (capacidad de retrasar o detener el crecimiento de las células tumorales) o citotóxica (capacidad de matar células tumorales) de las muestras objeto del ensayo.
LÍNEAS CELULARES
Figure imgf000157_0001
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA MEDIANTE ENSAYOS COLORIMÉTRICOS SRB Y MTT
Se adaptó un ensayo colorimétrico, con el uso de una reacción de sulforodamina B (SRB) para proporcionar una medición cuantitativa del crecimiento y la viabilidad celular (de acuerdo con la técnica descripta por Skehan et al. J. Nati. C ánce r Inst. 1990, 82, 1107-1112). Asimismo, se usó otro ensayo colorimétrico basado en una reducción de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) a formazán púrpura a los efectos de evaluar la actividad proliferativa (de acuerdo con la técnica descripta por Mosmann et al. J. Immunoi. M e th .1983, 65, 55-63).
Estas formas de ensayos emplean microplacas de cultivo de 96 pocillos de acuerdo con los estándares del American National Standards Institute [Instituto Estadounidense de E stándares Nacionales] y la Society for Laboratory Automation and Screening [Sociedad para la A utom atización de Laboratorio y Cribaje] (ANSI SLAS 1-2004 (R2012) 12/10/2011. Todas las líneas celulares utilizadas en este estudio se obtuvieron de la American Type Culture Collection [Colección Estadounidense de Cultivos Tipo] (ATCC) y derivan de diferentes tipos de cánceres humanos.
Se mantuvieron células A549, HT29, MDA-MB-231 y PSN1 en un medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) mientras se mantenían células PC-3 y 22Rv1 en un medio del Roswell Park Memorial Institute [Instituto M em oria l R osw ell Park] (RPMI). Todas las líneas celulares se complementaron con 10 % de suero bovino fetal (FBS), 2mM de L-glutamina, 100 U/ml de penicilina, y 100 U/ml de estreptomicina a 37 °C, 5 % de CO2 y 98 % de humedad. Para los experimentos, las células se cosecharon de cultivos subconfluentes con el uso de una tripsinización y se resuspendieron en un medio nuevo antes del conteo y colocación en placas.
Se sembraron células A549, HT29, MDA-MB-231 y PSN1 en placas de microtitulación de 96 pocillos, a 5000 células por pocillo en fracciones de 150 |jl y se dejaron fijar a la superficie de las placas durante 18 horas (durante la noche) en un medio libre de fármacos. Posteriormente, se fijó una placa de control (no tratada) de cada línea celular (de acuerdo con lo descripto a continuación) y se utilizó como valor de referencia de inicio o tiempo cero. Las placas de cultivo se trataron luego con compuestos de prueba (fracciones de 50 j l de 4X soluciones de acervo en un medio de cultivo completo más 4 % de DMSO) con el uso de diez diluciones seriales de 2/5 (concentraciones que oscilaban de 10 a 0,003 ^g/ml) y cultivos por triplicado (1 % de concentración final en DMSO). Luego de 72 horas de tratamiento, el efecto antitumoral se midió con el uso de la metodología SRB: En síntesis, se realizó un lavado de las células dos veces con PBS, se fijaron durante 15 min en 1 % de solución de glutaraldehído a temperatura ambiente, se enjuagaron dos veces en PBS y se mancharon en 0,4 % de solución de SRB durante 30 min a temperatura ambiente. Posteriormente, se procedió a enjuagar las células varias veces con una solución de ácido acético al 1 % y se secaron al aire a temperatura ambiente. Se extrajo luego SRB en una solución base de trizma 10 mM y se midió la absorbancia en un lector de placas espectofotométrico automatizado a 490 nm.
Se sembró una cantidad adecuada de células PC-3 y 22Rv1 en placas de 96 pocillos para llegar a una densidad final celular en el ensayo que oscilaba de 5000 a 15000 células por pocillo según la línea celular y se dejaron reposar en un medio de cultivo durante 24 h a 37 °C bajo 5 % de CO2 y 98 % de humedad. Posteriormente, se agregaron los compuestos o DMSO en un medio de cultivo para obtener un volumen final de 200 j l y la concentración de compuesto pretendida en un intervalo que abarcaba diez diluciones en serie de 2/5 a partir de 0,1jg/ml en 1 % (v/v) de DMSO. En este punto, un conjunto de “placas de control de tiempo cero" tratadas con 1 % (v/v) de DMSO se procesaron con MTT de acuerdo con lo descripto a continuación. El resto de las placas se incubó durante 72 horas en las condiciones ambientales mencionadas anteriormente. A continuación, se agregaron 50 j l de una solución de MTT 1 mg/ml en un medio de cultivo a los pacillos y se incubaron durante 6-8 horas a 37 °C para permitir la generación de cristales de formazán. Luego, se retiró el medio de cultivo y se agregaron 100 pl de DMSO puro a cada pocillo para disolver el producto de formazán en una solución coloreada cuya absorbancia a 540 nm se midió finalmente en un lector de multietiquetas de microplacas PolarStar Omega (BMG Labtech, Ortenberg, Alemania).
Los efectos en el crecimiento celular y la supervivencia celular se estimaron mediante la aplicación del algoritmo NCI (Boyd MR y Paull KD. Drug Dev. Res. 1995, 34, 91-104). Los valores obtenidos en cultivos por triplicado se adecuaron mediante un análisis de regresión no lineal a una curva logística de cuatro parámetros. Se calcularon tres parámetros de referencia (de acuerdo con el algoritmo NCl mencionado anteriormente) mediante una interpolación automática de las curvas obtenidas mediante dicha adecuación: GI50 = concentración de compuesto que produce 50 % de inhibición del crecimiento celular, en comparación con los cultivos de control; TGI = inhibición total del crecimiento celular (efecto citostático) en comparación con los cultivos de control, y LC50 = concentración de compuesto que produce 50 % neto de efecto citotóxico de matanza celular).
Las tablas 3-9 ilustran los datos sobre la actividad biológica de los compuestos de la presente divulgación.
T l . A ivi i l i m l r
Figure imgf000158_0001
T l 4. A ivi i l i m lr
Figure imgf000159_0001
Tabla 5. Actividad bioló ica molar
Figure imgf000160_0001
Tabla 6. Actividad bioló ica molar
Figure imgf000161_0001
Tabla 7. Actividad bioló ica molar
Figure imgf000162_0001
Tabla 8. Actividad bioló ica molar
Figure imgf000163_0001
Tabla 9. Actividad bioló ica molar
Figure imgf000164_0002
Estos datos muestran que las cargas útiles empleadas en la presente invención poseen una elevada potencia in vitro.
Síntesis de enlazantes
Preparación de LIN 1: MC-Val-Cit-PABC-PNP
Esquema de reacción
Figure imgf000164_0001
(a) Preparación de LIN 1-1: MC-Val-Cit-OH
LIN 1-1
Figure imgf000165_0001
2-clorotritilo (malla 200-400, 1 % de DVB, 1,0-1,6 mmol/g), CAS 42074-68-0). Se agregaron 100 ml de DCM a la resina y la mezcla se agitó durante 1 h. El solvente se eliminó mediante filtración bajo vacío. Se agregó una solución de Fmoc-Cit-OH (11,83 g, 29,78 mmol) y DIPEA (17,15 ml, 98,45 mmol) en DCM (80 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min. Posteriormente, se agregó DIPEa (34,82 mmol, 199,98 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h. La reacción se terminó mediante la adición de MeOH (30 ml) luego de agitar durante 15 minutos. La resina de Fmoc-Cit-O-TrtCl que se produjo como resultado se sometió a los siguientes lavados/tratamientos: DCM (5 x 50 ml x 0,5 min), DMF (5 x 50 ml x 0,5 min), piperidina:DMF (1:4, 1 x 1 min, 2 x 10 min), DMF (5 x 50 ml x 0,5 min), DCM (5 x 50 ml x 0,5 min). El lavado final de piperidina proporcionó NH2-Cit-O-TrtCl-resina. La carga se calculó: 1,15 mmol/g.
La NH2-Cit-O-TrtCl-resina producida anteriormente se lavó con DMF (5 x 50 ml x 0,5 min) y se agregó una solución de Fmoc-Val-OH (31,22 g, 91,98 mmol), HOBt (11,23 g, 91,98 mmol) en DMF (100 ml) a la NH2-Cit-O-TrtCl-resina, se agitó, se agregó DIPCDI (14,24 ml, 91,98 mmol) y la mezcla se agitó durante 1,5 h. La reacción se terminó mediante un lavado con DMF (5 x 50 ml x 0,5 min). La Fmoc-Val-Cit-O-TrtCl-resina producida de este modo se trató con piperidina:DMF (1:4, 1 x 1 min, 2 x 10 min) y se lavó con DMF (5 x 50 ml x 0,5 min). El lavado final con piperidina proporcionó NH2-Val-Cit-O-TrtCl-resina.
Una solución de ácido 6-maleimidocaproico (MC-OH) (9,7 g, 45,92 mmol), HOBt (6,21 g, 45,92 mmol) en DMF (100 ml) se agregó a la NH2-Val-Cit-O-TrtCl-resina producida anteriormente, se agitó, se agregó DIPCDI (7,12 ml, 45,92 mmol) y la mezcla se agitó durante 1,5 h. La reacción se terminó mediante un lavado con DMF (5 x 50 ml x 0,5 min) y DCM (5 x 50 ml x 0,5 min).
El péptido se escindió de la resina mediante tratamientos con TFA:DCM (1:99, 5 x 100 ml). La resina se lavó con DCM (7 x 50 ml x 0,5 min). Los filtrados combinados se evaporaron hasta secarse bajo presión reducida y el sólido obtenido se trituró con Et2O y se filtró para obtener LIN 1-1 (7,60 g, 71 %) en forma de sólido blanco.
1H RMN (500 MHz, DMSO-ds): 512,47 (s, 1H), 8,13 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,99 (s, 2H), 5,93 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 4,20 (dd, J = 9,0, 6,8 Hz, 1H), 4,15-4,07 (m, 1H), 3,36 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,00-2,88 (m, 2H), 2,21­ 2,12 (m, 1H), 2,11-2,03 (m, 1H), 1,98-1,86 (m, 1H), 1,74-1,62 (m, 1H), 1,61-1,50 (m, 1H), 1,50-1,31 (m, 6h), 1,21-1,11 (m, 2H), 0,84 (d, J = 6,8 Hz, 3h ), 0,80 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: Calculado para C21H33N5O7: 467,2. Hallado: 468,3 (M+H)+.
(b) Preparación de LIN 1-2: MC-Val-Cit-PABOH
LIN 1-2
Figure imgf000165_0002
A una solución de LIN 1-1 (1,6 g, 3,42 mmol) y alcohol 4-aminobencílico (PABOH) (0,84 g, 6,84 mmol) en DCM (60 ml), se agregó una solución de HOBt (0,92 g, 6,84 mmol) en DMF (5 ml). Se agregó DIPCDI (1,05 ml, 6,84 mmol), mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23 °C, se agregó Et2O (150 ml) y el sólido obtenido se filtró en una placa de filtro bajo vacío para obtener LIN 1-2 (1,31 g, 67 %).
1H RMN (500 MHz, DMSO-d;): 59,88 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,77 (dd, J = 12,2, 8,5 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,99 (s, 3h), 6,01-5,92 (m, 1H), 5,39 (s, 2h), 5,07 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,39-4,31 (m, 1 h), 4,23-4,12 (m, 1H), 3,36 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,06-2,97 (m, 1H), 2,96-2,90 (m, 1H), 2,22-2,03 (m, 2h), 2,01-1,88 (m, 1H), 1,76-1,62 (m, 1H), 1,63-1,28 (m, 6H), 1,25-1,11 (m, 2H), 0,84 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,81 (d, J = 6,8 Hz, 3H). ESI-MS m/z: Calculado para C28H40N6O7: 572,3. Hallado: 573,3 (M+H)+.
(c) Preparación de LIN 1: MC-Val-Cit-PAB-PNP
LIN 1
Figure imgf000166_0001
A una solución de LIN 1-2 (500 mg, 0,87 mmol) y bis(4-nitrofenil) carbonato (bis-PNP) (2,64 g, 8,72 mmol) en DCM:DMF (8:2, 25 ml) se agregó DIPEA (0,45 ml, 2,61 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 20 h a 23 °C y se vertió sobre una columna de gel de sílice (DCM:CH3OH, de 50:1 a 10:1) para proporcionar el objetivo puro LIN 1 (364 mg, 57 %).
Rf= 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
1H RMN (400 MHz, C D W C D 3OD): 5 9,45 (s, 1H), 8,23 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,65 (s, 2H), 5,20 (s, 2h), 4,56 (dt, J = 10,5, 5,4 Hz, 1H), 4,15 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,46 (dd, J = 8,0, 6,4 Hz, 2H), 3,16-2,89 (m, 2H), 2,21 (dd, J = 8,3, 6,6 Hz, 2H), 2,06-1,97 (m, 1H), 1,90-1,83 (m, 1h), 1,73-1,46 (m, 7H), 1,34-1,20 (m, 2H), 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H).
13C RMN (125 MHz, C D W C D 3OD) 5 174,4, 172,4, 171,1, 170,6, 160,5, 155,5, 152,5, 145,3, 138,7, 134,1, 129,9, 129,5, 125,2, 121,8, 120,0, 70,6, 59,0, 53,2, 37,5, 35,8, 30,6, 29,6, 29,3, 28,1,26,2, 26,2, 25,1, 19,1, 18,1.
ESI-MS m/z: Calculado para C35H43N7O11: 737,3. Hallado: 738,3 (M+H)+.
Preparación de LIN-2: MC2-PEG4-Val-Cit-PABC-PNP
Esquema de reacción
Figure imgf000166_0002
a) Preparación de LIN 2-1: MC2-PEG4-Val-Cit-OH
LIN 2-1
Figure imgf000167_0001
Se colocó Cl-TrtCl-resina (5 g, 1,49 mmol/g) en una placa de filtro. A la resina, se agregó CH2CI2 (25 ml) y la mezcla se agitó durante 1 h a 23 °C. El solvente se eliminó mediante filtración con vacío. Se agregó una solución de Fmoc-Cit-OH (2,95 g, 7,44 mmol) y DIPEA (4,29 ml, 24,61 mmol) en CH2Cl2 (20 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min a 23 °C. Se agregó adicionalmente DIPEA (8,70 ml, 49,99 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de MeOH (10 ml) y se agitó 15 min a 23 °C. La Fmoc-Cit-O-TrtCl-resina se sometió a los siguientes lavados/tratamientos: CH2Ch (5 x 15 ml x 0,5 min), DMF (5 x 15 ml x 0,5 min), piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min), DMF (5 x 15 ml x 0,5 min), CH2Ch (5 x 15 ml x 0,5 min). Se calculó la carga: 1,17 mmol/g.
La NH2-Cit-O-TrtCl-resina se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min) y se agregó una solución de Fmoc-Val-OH (7,80 g, 22,99 mmol) y HOBt (2,80 g, 24,5 mmol) en Dm F (25 ml) a la NH2-Cit-O-TrtCl-resina seguido por la adición de DIPCDI (3,56 ml, 24,5 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min). La Fmoc-Val-Cit-O-TrtCl-resina se trató con piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min) y se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min).
Una solución de ácido 15-(9-fluorenilmetiloxicarbonil)amino-4,7,10,13-tetraoxa-pentadecanoico (Fmoc-NH-PEG4-OH) (4,27 g, 8,75 mmol) y HOBt (1,18 g, 8,72 mmol) en DMF (30 ml) se agregó a la NH2-Val-Cit-O-TrtCl-resina, seguido por la adición de DiPc d I (1,35 ml, 8,72 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con d Mf (5 x 15 ml x 0,5 min). La Fmoc-NH-PEG4-Val-Cit-O-TrtCl-resina se trató con piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min) y se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min).
Una solución de ácido 3-(maleimido)propiónico (MC2-OH) (3,95 g, 23,35 mmol) y HOBt (3,16 g, 23,37 mmol) en DMF (30 ml) se agregó a la NH2-PEG4-Val-Cit-O-TrtCl-resina seguido por la adición de DIPc Di (3,62 ml, 23,37 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min) y CH2Ch (5 x 15 ml x 0,5 min).
El péptido se escindió de la resina mediante tratamientos con TFA:CH2Ch (1:99, 5 x 50 ml). La resina se lavó con CH2Cl2 (7 x 50 ml x 0,5 min). Los filtrados combinados se evaporaron hasta secarse bajo presión reducida, el sólido obtenido se trituró con Et2O y se filtró para obtener LIN 2-1 (4,59 g, 87 % de rendimiento) en forma de sólido blanco.
1H RMN (300 MHz, CDCb): 57,67-7,57 (m, 1H), 7,44 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,11 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 6,73 (s, 2H), 4,49 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,35 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 3,82 (t, J = 7,0 Hz, 2h), 3,74 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,68-3,56 (m, 13H), 3,56-3,45 (m, 2H), 3,39 (q, J = 5,4 Hz, 2H), 3,17 (s, 2H), 2,55 (q, J = 7,0, 6,0 Hz, 4H), 2,16-1,99 (m, 1H), 1,91 (s, 1H), 1,75 (s, 1H), 1,43 (s, 2h), 0,94 (d, = 9,7 Hz, 3H), 0,93 (d, = 9,7 Hz, 3H).
ESI-MS m/z: 673,3 (M+H)+.
(b) Preparación de LIN 2-2: MC2-PEG4-Val-Cit-PABOH
LIN 2-2
Figure imgf000167_0002
A una solución de LIN 2-1 (1,5 g, 2,22 mmol) y alcohol 4-aminobencílico (PABOH) (0,55 g, 4,45 mmol) en CH2CI2 (60 ml) se agregó una solución de HOBt (0,60 g, 4,45 mmol) en DMF (5 ml) seguido por la adición de DIPCDI (0,69 ml, 4,45 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 5 h a 23 °C, se agregó Et2O (150 ml) y el sólido obtenido se filtró bajo vacío para obtener LIN 2-2 bruto (2,37 g, >100 % de rendimiento) que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
1H RMN (500 MHz, DMSO-de): 57,57 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,81 (s, 2H), 4,58 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,50 (dd, J = 9,1,5,1 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,80-3,68 (m, 4H), 3,65-3,59 (m, 12H), 3,55-3,47 (m, 1H), 3,20 (dd, J = 13,6, 6,9 Hz, 1H), 3,12 (dt, J = 13,5, 6,7 Hz, 1H), 2,55 (td, J = 6,1,2,1 Hz, 2h), 2,46 (t, J = 6,9 Hz, 2h), 2,15-2,07 (m, 1H), 1,95-1,88 (m, 1H), 1,79-1,70 (m, 1H), 1,67-1,50 (m, 2H), 0,99 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 7,0 Hz, 3H). ESI-MS m/z: 778,4 (M+H)+.
(c) Preparación de LIN 2: MC2-PEG4-Val-Cit-PABC-PNP
Figure imgf000168_0001
A una solución de LIN 2-2 (1,73 g, 2,22 mmol) y bis(4-nitrofenil) carbonato (bis-PNP) (3,38 g, 11,12 mmol) en DCM:DMF (8:2, 75 ml) se agregó DIPEA (1,16 ml, 6,07 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 19 h a 23 °C y se vertió sobre una columna de gel de sílice (CH2Ch:CH3OH, de 50:1 a 10:1) para proporcionar LIN 2 puro (945 mg, 45 % de rendimiento).
1H RMN (500 MHz, CD3OD): 58,22 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,33 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,67 (s, 2H), 4,57-4,47 (m, 1H), 4,23-4,12 (m, 1h ), 3,78-3,76 (m, 12H), 3,63-3,50 (m, 16H), 3,49-3,41 (m, 2H), 3,34-3,25 (m, 2H), 3,18-3,03 (m, 2H), 2,51 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,13-1,99 (m, 1H), 1,92­ 1,84 (m, 1H), 1,73-1,62 (m, 1 h), 1,55-1,45 (m, 2H), 0,92 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (75 MHz, CDCb/CD3OD): 5 174,4, 172,9, 172,4, 172,4, 171,6, 170,9, 170,8, 170,7, 163,7, 155,8, 155,7, 152,5, 145,4, 138,8, 134,1, 131,3, 130,4, 129,2, 128,7, 125,7, 124,9, 121,8, 119,8 (x2), 115,1, 70,2 (x2), 70,1 (x2), 70,0, 69,9, 69,8, 69,0, 66,9, 59,2, 53,5, 39,0, 36,0, 34,4, 34,1,30,4, 29,0, 18,5, 17,5.
ESI-MS m/z: 943,4 (M+H)+.
Rf= 0,20 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
Preparación de LIN 3: MC2-PEG4-Val-Ala-PABC-PNP
Esquema de reacción
Figure imgf000168_0002
(a) Preparación de LIN 3-1: MC2-PEG4-Val-Ala-OH
LIN 3-1
Figure imgf000169_0001
Se colocó Cl-TrtCl-resina (5 g, 1,49 mmol/g) en una placa de filtro. A la resina, se agregó CH2CI2 (25 ml) y la mezcla se agitó durante 1 h a 23 °C. El solvente se eliminó mediante filtración con vacío. Se agregó una solución de Fmoc-Ala-OH (2,31 g, 7,41 mmol) y DIPEA (4,28 ml, 24,61 mmol) en CH2Ch (20 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min a 23 °C. Se agregó adicionalmente DIPEa (8,60 ml, 49,37 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de MeOH (10 ml) y se agitó 15 min a 23 °C. La Fmoc-Ala-O-TrtCl-resina se sometió a los siguientes lavados/tratamientos: CH2Ch (5 x 15 ml x 0,5 min), DMF (5 x 15 ml x 0,5 min), piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min), DMF (5 x 15 ml x 0,5 min), CH2Cl2 (5 x 15 ml x 0,5 min). Se calculó la carga: 1,34 mmol/g.
La NH2-Ala-O-T rtCl-resina se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min) y una solución de Fmoc-Val-OH (9,09 g, 26,79 mmol) y HOBt (3,62 g, 26,79 mmol) en DMF (25 ml) se agregó a la NH2-Ala-O-TrtCl-resina seguido de la adición de DIPCDI (4,14 ml, 26,79 mmol) a 23 °C. La mezcla se agitó durante 1,5 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min). La Fmoc-Val-Ala-O-TrtCl-resina se trató con piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min) y se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min).
Una solución de ácido 15-(9-fluorenilmetiloxicarbonil)amino-4,7,10,13-tetraoxa-pentadecanoico (Fmoc-NH-PEG4-OH) (4,90 g, 8,75 mmol) y HOBt (1,35 g, 9,98 mmol) en DMF (30 ml) se agregó a la NH2-Val-Ala-O-TrtCl-resina seguido de la adición de DIPCDI (1,55 ml, 10,0 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 22 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min). La Fmoc-NH-PEG4-Val-Ala-O-TrtCl-resina se trató con piperidina:DMF (1:4, 15 ml, 1 x 1 min, 2 x 10 min) y se lavó con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min).
Una solución de ácido 3-(maleimido)propiónico (MC2-OH) (4,53 g, 26,78 mmol) y HOBt (3,62 g, 26,77 mmol) en DMF (30 ml) se agregó a la NH2-PEG4-Val-Ala-O-TrtCl-resina seguido por la adición de DIPc Di (4,15 ml, 26,80 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a 23 °C. La reacción se detuvo mediante un lavado con DMF (5 x 15 ml x 0,5 min) y CH2Cl2 (5 x 15 ml x 0,5 min).
El péptido se escindió de la resina mediante tratamientos con TFA:CH2Ch (1:99, 5 x 50 ml). La resina se lavó con CH2Cl2 (7 x 50 ml x 0,5 min). Los filtrados combinados se evaporaron hasta secarse bajo presión reducida, el sólido obtenido se trituró con Et2O y se filtró para obtener L 3-1 (4,73 g, 87 % de rendimiento) en forma de sólido blanco.
1H RMN (500 MHz, CDCb): 57,67 (bs, 1H), 7,31 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,85 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 6,72 (s, 2H), 4,51 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,38 (dd, J = 8,9, 6,9 Hz, 1 h), 3,84 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 3,75 (t, J = 5,9 Hz, 2h), 3,69-3,59 (m, 12H), 3,55 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,41 (qd, J = 5,0, 1,7 Hz, 2H), 2,62-2,49 (m, 4H), 2,19-2,01 (m, 1H), 1,44 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 0,94 (d, J = 11,9 Hz, 1H).
(b) Preparación de LIN 3-2: MC2-PEG4-Val-Ala-PABOH
LIN 3-2
Figure imgf000169_0002
A una solución de LIN 3-1 (1,84 g, 3,13 mmol) y alcohol 4-aminobencílico (PABOH) (0,77 g, 6,27 mmol) en CH2Ch (70 ml), se agregó una solución de HOBt (0,84 g, 6,27 mmol) en DMF (5 ml) seguido de la adición de DIPCDI (0,97 ml, 6,27 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 5 h a 23 °C, se agregó Et2O (150 ml) y el sólido obtenido se filtró bajo vacío para obtener LIN 3-2 bruto (1,74 g, 81 % de rendimiento) que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional.
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe): 57,58 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,81 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,52-4,41 (m, 1H), 4,21 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 3,91 (p, J = 6,5 Hz, 1H), 3,81-3,67 (m, 4H), 3,65-3,54 (m, 12H), 3,49 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,56 (dd, J = 6,6, 5,5 Hz, 2H), 2,46 (t, J = 6,9 Hz, 2h), 2,12 (h, J = 6,8 Hz, 1H), 1,45 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 12,1 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 12,1 Hz, 3H).
(c) Preparación de LIN 3: MC2-PEG4-Val-Ala-PABC-PNP
LIN 3
Figure imgf000170_0001
A una solución de LIN 3-2 (1,74 g, 2,51 mmol) y bis(4-nitrofenil) carbonato (bis-PNP) (3,82 g, 12,57 mmol) en CH2Cl2:DMF (8:1, 70 ml), se agregó DIPEA (1,31 ml, 7,54 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 20 h a 23 °C y se vertió sobre una columna de gel de sílice (CH2Ch:CH3OH, de 50:1 a 10:1) para proporcionar LIN 3 puro (1,26 g, 59 % de rendimiento).
1H RMN (500 MHz, CDCb): 58,82 (s, 1H), 8,27 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 9,1 Hz, 4H), 7,15 (dd, J = 21,8, 7,2 Hz, 2H), 6,69 (s, 2H), 6,62 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,67 (p, J = 7,2 Hz, 1H), 4,24 (dd, J = 6,8, 5,7 Hz, 1H), 3,91-3,76 (m, 2H), 3,71 (ddd, J = 10,1,6,1,4,3 Hz, 1H), 3,66-3,54 (m, 14H), 3,53 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,46-3,33 (m, 2H), 2,76-2,57 (m, 1H), 2,57-2,42 (m, 2H), 2,33-2,19 (m, 1H), 1,46 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 12,1 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 12,1 Hz, 3H).
13C RMN (75 MHz, CD3OD): 5173,0, 172,1, 171,6 (x2), 170,7, 163,8, 155,7, 152,5, 145,4, 140,3, 138,9, 134,1, 130,4, 129.1, 125,6, 124,8, 121,9, 119,7, 115,1,70,2, 70,1 (x3), 70,0, 69,9, 69,8, 69,0, 66,9, 59,1, 53,4, 49,7, 39,0, 36,0, 34,3, 34.1, 30,4, 18,3, 17,3, 16,6.
ESI-MS m/z: 857,3 (M+H)+.
Rf= 0,45 (CH2Ch:CH3OH, 9:1).
Ejemplo 1: Síntesis de un compuesto de fórmula D-X-(AA)w-(T)g-Li
Preparación del compuesto DL-1
Figure imgf000170_0002
A una solución de 11-R (100 mg, 0,12 mmol) y LIN 1 (465 mg, 0,63 mmol) en N-metil-2-pirrolidona (NMP) (15 ml), se agregó N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (111 |jl, 0,63 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 3 días a 23 °C, se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con H2O (4 x 30 ml) y una solución acuosa saturada de NaCl (30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 90:10) para obtener DL 1, que se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 1 puro (69 mg, 40 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD/CDCb): 57,85 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,72 (s, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,26 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 5,25-5,14 (m, 2H), 5,14-5,01 (m, 2H), 4,67 (bs, 1H), 4,51 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 4,28 (dd, J = 16,2, 7,1 Hz, 4H), 4,21-4,05 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,51-3,40 (m, 2H), 3,36-3,32 (m, 2H), 3,23-2,99 (m, 2h ), 2,99-2,72 (m, 2h), 2,65 (d, J = 14,9 Hz, 2H), 2,28 (s,3H), 2,25 (s,3H), 2,10 (s,3H), 2,04 (s ,3H ) 1,96-1,83 (m, 1h ), 1,80-1,68 (m, 2h), 1,65-1,50 (m, 10H), 1,35-1,23 (m, 2H), 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (75 MHz, CD3OH/CDCI3): 5 174,9, 172,5, 171,5, 171,1, 170,7, 169,5, 160,8, 157,4, 148,6, 146,1, 143,6, 141,1, 140,9, 138,0, 136,8, 133,9, 132,6, 130,5, 129,8, 129,6, 128,6, 126,0, 121,6, 120,4, 119,8, 119,0, 118,6, 118,0, 117,8, 116,7, 113,5, 112,8, 110,9, 109,1, 102,3, 66,0, 63,1,62,9, 61,6, 60,2, 59,9, 59,2, 59,1, 58,9, 54,6, 54,6, 53,5, 50,7, 45,3, 42,1,40,5, 37,1, 35,3, 30,3, 29,1,27,9, 26,3, 26,0, 25,0, 24,5, 23,6, 19,4, 18,6, 17,7, 15,1,8,6.
ESI-MS m/z: 1391,4 (M+H)+.
Rf= 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
Preparación del compuesto DL 2
Figure imgf000171_0001
A una solución de 11-R (50 mg, 0,063 mmol) y LIN 2 (118 mg, 0,12 mmol) en CH2CI2 (2 ml), se agregó N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (22 |jl, 0,12 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a 23 °C y se vertió sobre una columna de gel de sílice (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 90:10) para proporcionar DL 2 que se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 2 puro (30 mg, 30 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CDCb): 57,63 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1h), 7,01 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,92 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,76 (s, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,25-5,14 (m, 2H), 5,14-5,01(m, 2H), 4,67 (bs, 1H), 4,51 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 4,36-4,24 (m, 4H), 4,23-4,15 (m, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,75-3,69 (m 3H), 3,58-3,50 (m, 14H), 3,51-3,40 (m, 2H), 3,36-3,32 (m, 2H), 3,23-3,05 (m, 2H), 2,99-2,88 (m, 2H), 2,68 (d, J = 14,9 Hz, 2H), 2,56-2,41 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,05 (s,3H), 1,96-1,83 (m, 1H), 1,80-1,68 (m, 2H), 1,65-1,50 (m, 10H), 1,35-1,23 (m, 2H), 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (75 MHz, CD3OD): 5173,0, 172,34, 171,6, 171,5 (x2), 170,8 (x2), 170,7, 169,4, 160,8, 157,4, 155,8, 148,7, 148,5, 146,2, 146,1, 143,7, 141,2, 141,1, 140,9, 138,4, 136,9, 134,0, 131,3, 129,8, 128,7, 128,5, 126,0, 121,5, 120,5, 119,9, 119,7, 118,5, 117,7, 112,7, 102,4, 70,1 (x5), 70,0 (x2), 69,9, 69,8, 69,7, 69,0, 68,9, 66,8, 61,6, 59,9, 59,2, 54,6, 54,0, 53,5, 40,4, 40,0, 39,0, 36,0, 35,1, 34,4, 34,1,30,4, 29,0, 26,4, 24,6, 23,6, 19,3, 18,5, 17,4, 15,1,8,4.
ESI-MS m/z: 1596,6 (M+H)+.
Rf= 0,48 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
Preparación del compuesto DL 3
Figure imgf000172_0001
A una solución de 11-R (50 mg, 0,063 mmol) y LIN 3 (108 mg, 0,12 mmol) en CH2CI2 (2 ml), se agregó N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (22 |jl, 0,12 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h a 23 °C y se vertió sobre una columna de gel de sílice (CH2Ch:CH3OH, de 99:1 a 90:10) para proporcionar DL 3 que se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 3 puro (25 mg, 26 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,64 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (dt, J = 7,8, 1,0 Hz, 1H), 7,23 (dt, J = 8,4, 0,9 Hz, 1H), 7,01 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,91 (ddd, J = 7,9, 7,0, 1,0 Hz, 1H), 6,76 (s, 2h), 6,61 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,10 (s, 1H), 5,26-5,15 (m, 1H), 5,07 (dd, J = 12,1,4,7 Hz, 2H), 4,66 (s, 1H), 4,57 (s, 1H), 4,47 (t, J = 7,1 Hz, 1 h ), 4,36 (s, 1H), 4,32-4,22 (m, 2H), 4,18 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 3,75-3,68 (m, 6h), 3,72 (s, 3H), 3,59-3,46 (m, 8H), 3,44 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,33-3,25 (m, 10H), 3,15 (dd, J = 9,7, 5,0 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 17,9 Hz, 1H), 2,81 (dd, J = 18,0, 9,9 Hz, 2H), 2,73-2,59 (m, 2H), 2,52 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,45 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 0,99 (d, J = 9,9 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 9,9 Hz, 3h ).
13C RMN (75 MHz, CD3OD): 5 173,1, 172,1, 172,1, 171,6, 171,5, 170,7, 169,4, 148,7, 146,1, 143,6, 140,9, 138,1, 136,9, 135,7, 134,0, 134,0, 132,7, 127,1, 126,0, 121,5, 120,5, 119,8, 119,7, 119,1, 118,5, 117,6, 113,4, 110,8, 105,8, 102,4, 99,9, 86,9, 70,1,70,1,70,1,70,0, 70,0, 69,9, 69,8, 69,0, 67,7, 66,8, 65,9, 63,0, 62,0, 61,6, 60,1,59,9, 59,2, 59,1, 54,7, 54,6, 50,8, 49,6, 42,1, 40,3, 40,0, 39,0, 36,0, 34,3, 34,1,30,4, 28,8, 23,6, 19,2, 18,4, 17,3, 16,6, 14,9, 8,4.
ESI-MS m/z: 1511,2 (M+H)+.
Rf= 0,50 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).
Preparación del compuesto DL 4
Figure imgf000173_0001
A una solución de 46-R (26 mg, 0,032 mmol) y LIN 1 (48 mg, 0,64 mmol) en DMF (2 ml), se agregó N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (12 |jl, 0,64 mmol) a 23 °C. La mezcla de reacción se agitó durante l8 horas a 23 °C, se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con H2O (4 x 30 ml) y una solución acuosa saturada de NaCl (30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 4 puro (14 mg, 31 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,88 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,39-7,36 (m, 3H), 7,20-7,11 (m, 3H), 6,74 (s, 2H), 6,57 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 5,30-5,05 (m, 2H), 4,64 (s, 1h), 4,50 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 4,34-4,27 (m, 4H), 4,21-4,13 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,45 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,19-3,06 (m, 4H), 2,93-2,76 (m, 2h ), 2,70-2,56 (m, 2H), 2,29-2,19 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,29-2,11 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,93-1,72 (m, 2h), 1,64-1,52 (m, 9h), 1,32-1,26 (m, 3H), 0,96-0,93 (m, 8H).
3C RMN (100 MHz, CD3OD): 5 173,4, 171,1, 169,7, 169,3, 169,1, 167,7, 159,3, 155,9, 153,5, 147,2, 147,1, 144,3, 142.1, 139,6, 139,2, 136,6, 132,5, 131,1, 129,1, 128,3, 127,2, 125,6, 122,7, 121,0, 119,2 (x2), 118,3, 117,5, 117,4, 112.2, 112,1, 111,7, 109,7, 100,8, 97,0, 64,6, 61,7, 60,0, 58,9, 58,4, 57,7 (x2), 57,4, 53,2, 53,1,52,0, 48,9, 43,6, 40,5, 39,0, 35,6, 33,8, 28,8, 28,1, 27,6, 26,5, 24,6, 23,6, 22,6, 22,2, 21,5, 17,9, 17,1, 16,2, 13,6, 7,1.
ESI-MS m/z: 1392,4 (M+H)+.
Preparación del compuesto DL 5
Figure imgf000174_0001
A una solución de DL 3 (30 mg, 0,026 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,6 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (132 mg, 0,79 mmol). Luego de 18 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una solución acuosa de NaHCO3 y se extrajo con CH2Cl2 (x3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó en un sistema automático para una cromatografía ultrarrápida (SiO2, CH2Ch:CH3OH, de 95:5 a 50:50) para obtener DL 5 puro (34 mg, 87 %).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,00 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,91 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 6,75 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,25 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,23-5,06 (m, 3H), 4,60 (s, 1H), 4,47 (q, J = 7,1 Hz, 1 h ), 4,31 (dd, J = 16,3, 4,1 Hz, 2H), 4,18 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,76-3,66 (m, 2H), 3,61 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 3,57-3,48 (m, 16H), 3,44 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 3,27 (t, J = 5,3 Hz, 3H), 3,13 (dd, J = 13,4, 6,7 Hz, 1H), 2,96 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 18,1,9,3 Hz, 1H), 2,75-2,61 (m, 2H), 2,56-2,48 (m, 2H), 2,43 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,28 (s, 6H), 2,24 (s, 1H), 2,14 (s, 3H), 2,12-2,05 (m, 2h), 2,04 (s, 3H), 1,43 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,99 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5 173,1, 172,1, 171,7, 171,6, 171,5, 170,7, 169,3, 162,5, 157,5, 148,9, 146,1, 144,1, 141.4, 140,9, 138,2, 136,9, 134,0, 132,7, 131,2, 129,7, 128,4, 126,0, 121,4, 120,1, 119,8, 119,7, 118,5, 117,6, 114,3, 112.5, 110,8, 102,3, 90,5, 70,1 (x2), 70,0 (x2), 69,9, 69,8, 69,0, 66,8, 65,9, 63,1, 60,2, 59,2, 59,1, 57,9, 55,6, 55,1, 53,6, 50,8, 49,6, 45,4, 42,1, 40,3, 39,5, 39,0, 35,9, 34,3, 34,0 (x2), 29,3, 24,7, 23,2, 19,1, 18,3, 17,3, 16,5, 15,0, 8,2.
ESI-MS m/z: 1483,4 (M-H2O+H)+.
Preparación del compuesto DL 6
Figure imgf000175_0001
A una solución de DL 1 (50 mg, 0,035 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1, 2,39 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (181 mg, 1,07 mmol). Luego de 18 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una solución acuosa de NaHCO3:NaCl (1:1) y se extrajo con CH2Ch (x3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó mediante HPLC preparativa para obtener DL 6 puro (23 mg, 47 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,62 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,12 (ddd, J = 8,0, 7,0, 0,9 Hz, 1H), 7,01 (ddd, J = 8,0, 7,0, 0,9 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,75 (s, 2H), 6,32 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 5,24-5,12 (m, 3H), 4,81 (m, 2H), 4,65 (s, 1h), 4,47 (s, 1H), 4,31 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,93-3,83 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,65 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,44 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 3,23-2,99 (m, 2H), 2,92 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 2,62 (s, 3h), 2,45 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,28 (d, J = 13,3 Hz, 6H), 2,07 (s, 3H), 2,13-2,00 (m, 2H), 1,90 (m, 1H), 1,80­ 1,70 (m, 2H), 1,65-1,50 (m, 4H), 1,34-1,22 (m, 2H), 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5 175,0, 172,6, 171,1, 170,9, 169,2, 169,1, 160,9, 157,7, 149,5, 147,0, 146,0, 144,8, 141.7, 141,2, 137,3, 136,8, 133,9, 132,5, 130,5, 129,8, 129,6, 128,5, 127,9, 122,6, 120,3, 119,8, 119,2, 118,4, 117,9, 116.7, 113,1, 112,8, 111,1, 108,4, 102,7, 101,5, 89,1, 66,2, 63,1, 62,9, 61,6, 59,3, 56,9, 56,1, 55,5, 54,7, 53,6, 50,7, 45,3, 42,2, 39,0, 38,9, 37,0, 35,1, 30,1,29,3, 27,9, 26,5, 26,3, 26,0, 25,0, 23,1, 19,1, 18,4, 17,6, 15,2, 8,3.
ESI-MS m/z: 1364,4 (M-H2O+H)+.
Preparación del compuesto DL 7
Figure imgf000176_0001
A una solución de 12-R (100 mg, 0,12 mmol) y LIN 2 (180 mg, 0,19 mmol) en dimetilformamida (DMF) (2 ml, 0,06 M), se agregó W,W-diisopropiletilamina (DIPEA) (90 |jl, 0,51 mmol) a 23 °C. Luego de 18 horas La mezcla de reacción se purificó mediante HpLC preparativa para proporcionar DL 7 puro (125 mg, 62 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,65 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,13 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 7,01 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,76 (s, 2H), 6,32 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,12 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,64 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,47 (s, 1H), 4,33 (dd, J = 12,0, 2,1 Hz, 1H), 4,22-4,12 (m, 2H), 3,96 (bs, 1H), 3,88 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,78-3,67 (m, 8H), 3,60-3,52 (m, 14H), 3,56-3,41 (m, 3H), 3,27 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,22-3,04 (m, 4H), 2,93 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,70-2,58 (m, 3H), 2,55 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,36 (s, 3h), 2,30 (s, 3H), 2,15-2,07 (m, 1H), 2,06 (s, 3H), 2,02 (s, 2H), 1,95-1,87 (m, 1H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,65-1,50 (m, 2H), 0,97 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H). 13C RMN (125 MHz, CD3OD): 5173,1, 172,5, 171,6, 171,0, 170,7 (x2), 169,3, 168,5, 160,9, 160,0, 149,6, 147,1, 144,9, 141,8, 141,3, 138,2, 137,4, 134,1, 132,4, 128,6, 127,9, 125,2, 122,9, 120,2, 119,9, 119,4, 118,1 (x2), 117,1, 114,8, 113,2, 112,7, 111,3, 108,3, 102,7, 89,0, 70,2, 70,1 (x2), 70,0, 69,9, 69,8, 69,0, 66,9, 66,3, 65,5, 65,4, 61,9, 59,4, 56,9, 56,1, 55,4 (x2), 54,6, 53,7, 43,7, 42,4, 39,1, 39,0, 36,0, 34,4, 34,1, 31,4, 30,3, 28,9, 26,5, 23,1, 22,3, 19,2, 18,5, 17,5, 15,3, 13,2, 8,5.
ESI-MS m/z: 1570,4 (M-H2O+H)+.
Preparación del compuesto DL 8
Figure imgf000177_0001
A una solución de 11-S (30 mg, 0,037 mmol) y LIN 1 (56 mg, 0,075 mmol) en dimetilformamida (DMF) (2 ml, 0,018 M), se agregó W,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (26 |jl, 0,15 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (HOBt, 10 mg, 0,075 mmol) a 23 °C. Luego de 18 horas, la mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 8 puro (30 mg, 58 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,59 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,00 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 2H), 6,50 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,20­ 5,03 (m, 2H), 4,65 (bs, 1H), 4,54-4,46 (m, 1H), 4,43-4,37 (m, 1H), 4,34-4,30 (m, 1H), 4,17-4,12 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,45 (t, J = 7,0 Hz, 4H), 3,32-3,23 (m, 2H), 3,38 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,23-2,99 (m, 2H), 3,21-2,97 (m, 3H), 2,94-2,83 (m, 3H), 2,61-2,53 (m, 2H), 2,48-2,34 (m, 2H), 2,28 (s,3H), 2,27-2,22 (m, 1H), 2,21 (s,3H), 2,11 (s,3H), 2,08-2,02 (m, 1H), 1,99 (s,3H), 1,91-1,82 (m, 1H), 1,77-1,68 (m, 1H), 1,65-1,50 (m, 6H), 1,31-1,24 (m, 2H), 0,94 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5 174,9, 174,8, 172,5, 172,0, 171,2, 170,8, 169,4, 160,8, 157,5, 148,6, 146,0, 143,6, 140,9, 140,8, 138,0, 136,6, 136,5, 134,0, 132,7, 130,2, 129,9, 129,7, 128,7, 128,4, 126,3, 121,6, 120,5, 120,0, 119,8, 119,3, 118,7, 118,0, 117,7, 113,5, 112,9, 111,0, 107,8, 102,4, 65,9, 63,5, 61,4, 60,6, 59,7, 59,3, 59,2, 59,1,58,8, 54,6, 54,6, 53,4, 44,8, 42,3, 40,6, 38,3, 37,1, 35,3 (x2), 30,3, 29,1, 28,0, 26,3, 26,0, 25,1,24,0, 23,7, 19,5, 18,6, 17,7, 15,2, 8,6.
ESI-MS m /z : 1391,4 (M+H)+.
Preparación del compuesto DL 9
Figure imgf000178_0001
A una solución de 11-S (110 mg, 0,13 mmol) y LIN-3 (119 mg, 0,13 mmol) en dimetilformamida (DMF) (4 ml, 0,032 M), se agregaron N,W-diisopropiletilamina (DIPEA) (97 |j|, 0,55 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (HOBt, 38 mg, 0,27 mmol) a 23 °C. Luego de 18 horas, la mezcla de reacción se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 9 puro (120 mg, 57 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,62 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,00 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,91 (td, J = 7,5, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 6,75 (s, 2h), 6,50 (s, 1H), 6,26 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,08 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 11,4 Hz, 1h), 5,09 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 4,65 (s, 1H), 4,48 (p, J = 6,9 Hz, 1H), 4,42-4,38 (m, 2H), 4,34-4,30 (m, 2H), 4,22-4,14 (m, 1H), 3,78-3,64 (m, 5H), 3,61-3,50 (m, 8H), 3,45 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,38 (d, J = 5,1 Hz, 1h), 3,33-3,23 (m, 3H), 3,02 (dd, J = 13,5, 5,5 Hz, 1H), 2,89 (d, J = 9,4 Hz, 2H), 2,62-2,33 (m, 7H), 2,27 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,15-2,05 (m, 1H), 1,99 (m, 3H), 1,42 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,97 (dd, J = 6,8 Hz, 3H), 0,95 (dd, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5173,1 (x2), 172,1, 171,9, 171,6, 171,5, 171,5, 170,7, 169,3, 148,6, 146,0, 143,6, 140,9, 140,8, 138,1, 136,5, 134,1, 132,8, 130,3, 129,8, 128,4, 126,3, 121,6, 120,5, 120,0, 119,7, 119,3, 118,7, 118,0, 117,7, 113,5, 112,9, 111,0, 107,8, 102,4, 70,2, 70,1 (x2), 70,0 (x2), 69,8, 69,1,66,9, 65,9, 63,5, 61,4, 60,6, 59,7, 59,3, 59,2, 59,1, 58,8, 54,7, 54,6, 49,6, 42,3, 40,5, 39,1, 39,0, 36,0, 34,4 (x2), 34,1, 30,4, 24,0, 23,7, 19,4, 18,5, 17,4, 16,8, 15,1, 8,5.
ESI-MS m/z: 1511,4 (M+H)+.
Preparación del compuesto DL 10
Figure imgf000179_0001
A una solución de 12-S (30 mg, 0,058 mmol) y LIN 1 (98 mg, 0,13 mmol) en N-metil-2-pirrolidona (NMP) (4 ml, 0,014 M), se agregó N,W-diisopropiletilamina (DIPEA) (83 |jl, 0,13 mmol) a 23 °C. Luego de l8 horas, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (25 ml) y se lavó con H2O (4 x 25 ml) y una solución acuosa saturada de NaCl. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (CH2CE:CH3OH, de 99:1 a 90:10) y el compuesto obtenido se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar DL 10 puro (11 mg, 21 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,61 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,08 (ddd, J = 8,0, 7,0, 0,9 Hz, 1H), 6,98 (ddd, J = 8,0, 7,0, 0,9 Hz, 1H), 6,76 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,29 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,13 (q, J = 12,3 Hz, 2H), 4,93 -,4,81 (m, 3H), 4,69 (s, 1h ), 4,48 (s, 1h), 4,23 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 7,5, 4,0 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 5,0, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,49-3,41 (m, 2H), 3,40-3,27 (m, 1H), 3,28-3,24 (m, 4H), 3,22-3,05 (m, 4H), 2,80-2,65 (m, 3H), 2,63 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,13-2,00 (m, 2h), 2,03 (s, 3H), 1,93-1,83(m, 1H), 1,79-1,69 (m, 2H), 1,65-1,51 (m, 6H), 1,34-1,22 (m, 2H), 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5174,9, 172,7, 172,6, 171,1, 170,8 (x2), 169,1, 160,9, 149,4, 146,6, 144,7, 142,3, 141,5, 141,0, 138,1, 136,8, 133,9, 133,5, 132,6, 128,5, 127,5, 125,9, 122,2, 120,9, 119,8, 117,8, 113,2, 113,0, 111,2, 107,3, 102,6, 89,2, 66,2, 61,7, 61,3, 60,2, 59,4, 59,3, 57,4, 56,9, 55,8, 55,7, 55,2, 54,8, 53,5, 42,0, 39,1,37,1,35,2, 31,7, 30,2, 29,4, 29,1,29,0 (x2), 27,9, 26,4, 26,0, 25,0, 23,3, 22,4, 19,2, 18,5, 17,7, 15,2, 13,2, 8,5.
ESI-MS m/z: 1364,4 (M-H2O+H)+.
Preparación del compuesto DL 11
Figure imgf000180_0001
A una solución de DL 9 (90 mg, 0,059 mmol) en CH3CN:H2O (1,39:1,4 ml, 0,015 M), se agregó AgNO3 (298 mg, 1,78 mmol). Luego de 21 h a 23 °C, la mezcla de reacción se templó con una solución acuosa de NaHCO3:NaCl (1:1) y se extrajo con CH2Cl2 (x3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y concentraron bajo vacío. El residuo obtenido se purificó en un sistema automático para una cromatografía ultrarrápida (SiO2, CH2Cl2:CH3OH, de 95:5 a 50:50) para obtener DL 11 puro (65 mg, 73 % de rendimiento).
1H RMN (400 MHz, CD3OD): 57,62 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1 H),6,99 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1H), 6,90 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 1H), 6,76 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,25 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,59 (s, 1H), 4,47 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,33 (dd, J = 11,5, 1,9 Hz, 1H), 4,33-4,25 (m, 2H), 4,19 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,75-3,67 m, 3H), 3,61 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 3,58-3,51 (m, 12H), 3,45 (dd, J = 10,6, 5,2 Hz, 2H), 3,34 (s, 3H), 3,27 (t, J = 5,5 Hz, 3H), 3,04 (dd, J = 13,4, 6,7 Hz, 1H), 2,88-2,82 (m, 3H), 2,64-2,35 (m, 7H), 2,27 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,17-2,04 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,01 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 1,98 (s, 3H), 1,42 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,98 (dd, J = 6,8 Hz, 3H), 0,95 (dd, J = 6,8 Hz, 3H).
13C RMN (100 MHz, CD3OD): 5 173,1, 172,1, 172,0, 171,6, 171,5, 170,7, 169,4, 157,6, 148,6, 145,8, 143,7, 141,1, 140.8, 138,1, 136,5, 134,1, 132,8, 130,4, 130,0, 129,8, 128,4, 126,4, 126,2, 121,5, 120,9, 120,1, 119,8, 118,6, 117,7, 114.9, 112,4, 111,0, 107,7, 102,1, 91,0, 70,2, 70,1 (x2), 70,0 (x2), 69,8, 69,1, 66,9, 65,9, 63,5, 60,5, 59,3, 59,1, 58,2, 55,2, 54,7, 52,9, 49,6, 44,9, 42,6, 40,0, 39,0, 38,3, 36,0, 34,4, 34,1,30,4, 29,4, 24,0, 23,3, 19,4, 18,5, 17,4, 16,8, 15,1, 8,4.
ESI-MS m/z: 1483,4 (M-H2O+H)+.
Ejemplo 2: Preparación de conjugados de fármaco-anticuerpo (ADC)
En este ejemplo, se describen síntesis de los conjugados de fármaco-anticuerpo de la presente invención. Ha de observarse que estas síntesis son a modo de ejemplo y que los procesos descriptos se pueden aplicar a todos los compuestos y anticuerpos que se describen en la presente.
Ejemplo 2a. Preparación del anticuerpo monoclonal anti-CD13
Se obtuvieron anticuerpos monoclonales Anti-CD13 mediante procedimientos muy conocidos que se utilizan generalmente en la técnica. En resumen, se inmunizaron ratones BALB/c con células endoteliales humanas aisladas de cordón umbilical. Para este objetivo, se inyectaron 1,5E7 de las células a los ratones por vía interaperitoneana los días -45 y -30 y por vía intravenosa el día -3. El día 0, se extirpó el bazo de estos animales y se fusionaron las células de los bazos con células de mieloma de ratón SP2 a una relación de 4:1 de acuerdo con técnicas estándar para producir el hibridoma y se distribuyeron en placas de cultivo tisular de 98 pocillos (Costar Corp., Cambridge, MA). Luego de 2 semanas, se cosecharon los sobrenadantes de los cultivos de hibridomas y se sometió a prueba mediante citometría de flujo su reactividad contra la línea celular utilizada en el paso de inmunización. Se ensayaron los sobrenadantes positivos mediante un manchado con inmunofluorescencia en las células correspondientes utilizadas como antígenos. Se seleccionaron hibridomas que mostraban un manchado específico, un patrón de inmunoprecipitación y distribución celular y se clonaron y subclonaron mediante una dilución limitativa.
Una vez seleccionados los clones, las células se cultivaron en un medio de RPMI-1640 complementado con 10 % (v/v) de suero bovino fetal, 2 mM de glutamina, 100 U/ml de penicilina y 100 |jg/ml de estreptomicina a 37 °C durante 3-4 días hasta que el medio se tornó amarillo pálido. En ese momento, se retiraron dos tercios del volumen del medio, se centrifugaron a 1.000xg durante 10 min para la formación de pellas de las células y el sobrenadante se centrifugó nuevamente para una limpieza adicional a 3,000xg durante 10 min o bien se filtró a través de membranas que tenían un tamaño de poro de 22 jm . El sobrenadante clarificado se sometió a una precipitación con 55 % de sulfato de amonio saturado y la pella resultante se resuspendió en 100 mM de Tris-HCl pH 7,8 (1 ml cada 100 ml del sobrenadante clarificado original) y se dializó a 4 C durante 16-24 h contra 5 L de 100 mM Tris-HCl, pH 7,8, con 150 mM de NaCl, con cambios de la solución de dialización realizados al menos tres veces. El material dializado se cargó finalmente en una columna de proteína A-Sefarosa y levigó el anticuerpo monoclonal correspondiente con 100 mM de citrato de sodio, pH 3,0, o alternativamente con 1M de glicina, pH 3,0. Aquellas fracciones que contenían el anticuerpo se neutralizaron con 2M de T ris-HCl, pH 9,0, y, finalmente, se dializaron contra PBS y se almacenaron a -80 °C hasta que se necesitó su uso.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC1 con Trastuzumab y DL 1
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido.
Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) se disolvió en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (13,9 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,33 ml, 4,6 mg, 30,6 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). Se realizó una reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino 5,0 mM (TCEP) (17,5 j l , 87,6 nmol, 3 eq.) La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre-anticuerpo (FTAR) de 4,0.
(b) Preparación de ADC 1.
A la solución del Trastuzumab parcialmente reducido (140 j l , 1,4 mg, 9 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (28,2 j l) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 1 (10 mM en DMA, 6,8 j l , 67,5 nmol, 7,5 eq.). Ante la adición de DL 1, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 30 min a 20 °C y la turbidez desapareció durante la reacción de conjugación. El exceso de fármaco se templó con la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 6,8 j l , 67,5 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en un tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 1 se concentró hasta una concentración final de 6,05 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 232 j l (1,4 mg, 9,3 nmol, 103 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (89 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 2 con Trastuzumab y DL 2.
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido.
Se diluyó una solución de Trastuzumab (0,33 ml, 4,6 mg, 30,6 nmol) hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino 5,0 mM (TCEP) (17,5 j l , 87,6 nmol, 3 eq.) La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 3,9.
(b) Preparación de ADC 2.
A la solución de Trastuzumab parcialmente reducida (140 j l , 1,4 mg, 9 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (28,2 jl), seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 2 (10 mM en DMA, 6,8 j l , 67,5 nmol, 7,5 eq.). Luego de la adición de DL 2, la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 6,8 j l , 67,5 nmol) seguido por una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 2 se concentró hasta una concentración final de 5,19 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 270 pl (1,4 mg, 9,3 nmol, 103 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (65 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 3 con Trastuzumab y el compuesto DL 3.
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido.
Una solución de Trastuzumab (0,33 ml, 4,6 mg, 30,6 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino 5,0 mM (TCEP) (17,5 pl, 87,6 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 3,9.
(b) Preparación de ADC 3.
A la solución de T rastuzumab parcialmente reducido (140 pl, 1,4 mg, 9 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (28,2 pl), seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 3 (10 mM en DMA, 6,8 pl, 67,5 nmol, 7,5 eq.). Luego de la adición de DL 3, la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 6,8 pl, 67,5 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 3 se concentró hasta una concentración final de 5,15 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 280 pl (1,44 mg, 9,6 nmol, 107 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (93 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 4 con Trastuzumab modificado por Traut y el compuesto DL 1
(a) Reacción de Trastuzumab con clorhidrato de 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Una solución de T rastuzumab (0,65 ml, 9 mg, 60 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de tampón de fosfato (50 mM de fosfato, 2 mM de EDTA, pH 8). El reactivo de Traut se agregó (64,4 pl, 900 nmol, 15 eq.) y la reacción se agitó durante 2 h a 25 °C. Se intercambió el tampón de la mezcla con dos columnas Sephadex G25 nAP-5 en tampón de PBS, y se concentró hasta obtener un volumen de 1,2 ml (7,5 mg/ml). Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 7,9.
(b) Preparación de ADC 4
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (300 pl, 2,25 mg, 15 nmol), se agregó DMA (59,8 pl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 1 (10 mM en DMA, 2,.5 pl, 225 nmol, 15 eq.). Ante la dilución de DL 1, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 4 se concentró hasta una concentración final de 3,49 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 252 pl (0,88 mg, 5,86 nmol, 39 %) de una solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 5 con Trastuzumab y el compuesto DL 4.
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (17,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,5 ml, 8,55 mg, 57 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (24,5 pl, 122,4 nmol, 2,2 eq.) La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 3,4.
(b) Preparación de ADC 5.
A la solución de Trastuzumab parcialmente reducido (200 pl, 1,9 mg, 13,2 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (42,1 |jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 4 (10 mM en DMA, 7,9 |jl, 79,2 nmol, 6 eq.). Luego de la adición de DL 4, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 30 min a 20 °C y la turbidez desapareció durante la reacción de conjugación. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 7,9 jl, 79,2 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 5 se concentró hasta una concentración final de 5,30 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 290 jl (1,54 mg, 1,0 nmol, 81 %) de solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (91 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 6 con Trastuzumab y el compuesto DL 5.
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (17,6 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
Se diluyó una solución de Trastuzumab (0,55 ml, 9,7 mg, 64,6 nmol) hasta obtener una concentración de 12,8 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (29,2 jl, 146 nmol, 2,2 eq.) La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 3,4.
(b) Preparación de ADC 6.
A la solución de Trastuzumab parcialmente reducido (140 jl, 1,8 mg, 12 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (28,2 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 5 (10 mM en DMA, 6,8 jl, 67,5 nmol, 5,6 eq.) Luego de la adición de DL 5, la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 6,8 jl, 67,5 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 6 se concentró hasta una concentración final de 4,29 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 320 jl (1,37 mg, 9,1 nmol, 76 %) de solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (83 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 7 con Anti-CD13 y el compuesto DL 1.
(a) Reducción parcial de Anti-CD13 para proporcionar Anti-CD13 parcialmente reducido
Una solución de Anti-CD13 (0,5 ml, 8,2 mg, 54,6 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (31,9 jl, 159 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,7.
(b) Preparación de ADC 7.
A la solución de Anti-CD13 parcialmente reducido (200 jl, 2,0 mg, 13,3 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (40 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 1 (10 mM en DMA, 10 jl, 100 nmol, 7,5 eq.) Luego de la adición de DL 1, la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 10 jl, 100 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 7 se concentró hasta una concentración final de 5,58 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante Uv y se obtuvieron 350 jl (1,95 mg, 13 nmol, 98 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (90 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 8 con Anti-CD13 y el compuesto DL 3
(a) Reducción parcial de Anti-CD13 para proporcionar Anti-CD13 parcialmente reducido
Una solución de Anti-CD13 (0,5 ml, 8,2 mg, 54,6 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (31,9 jl, 159 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,7.
(b) Preparación de ADC 8.
A la solución de Anti-CD13 parcialmente reducido (200 |j|, 2,0 mg, 13,3 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (40 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 3 (10 mM in DMA, 10 jl, 100 nmol, 7,5 eq.) Luego de la adición de DL 3 la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 10 jl, 100 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 8 se concentró hasta una concentración final de 5,83 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 380 jl (2,21 mg, 14,7 nmol, 111 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HlC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (94 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 9 con Anti-CD13 y el compuesto DL 5
(a) Reducción parcial de Anti-CD13 para proporcionar Anti-CD13 parcialmente reducido
Se diluyó una solución anti-CD13 (0,5 ml, 8,2 mg, 54,6 nmol) hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (31,9 jl, 159 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,7.
(b) Preparación de ADC 9.
A la solución de Anti-CD13 parcialmente reducido (200 jl, 2,0 mg, 13,3 nmol), se agregó N,N-dimetilacetamida (DMA) (40 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 5 (10 mM en DMA, 10 jl, 100 nmol, 7,5 eq.) Luego de la adición de DL 5, la solución se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 10 jl, 100 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 9 se concentró hasta una concentración final de 5,82 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 380 jl (2,21 mg, 14,7 nmol, 111 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HlC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (89 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 10 con Anti-CD13 y el compuesto DL 2.
(a) Reducción parcial de Anti-CD13 para proporcionar Anti-CD13 parcialmente reducido
Se diluyó una solución anti-CD13 (0,5 ml, 8,2 mg, 54,6 nmol) hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (31,9 jl, 159,6 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,7.
(b) Preparación de ADC 10.
A la solución de Anti-CD13 parcialmente reducido (200 jl, 2 mg, 13,3 nmol), se agregó DMA (40 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 2 (10 mM en DMA, 10 jl, 100 nmol, 7,5 eq.). Luego de la adición de DL 2, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 10 jl, 100 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 10 se concentró hasta una concentración final de 6,61 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 250 jl (1,65 mg, 11 nmol, 85 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (23 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 11 con Trastuzumab y el compuesto DL 6
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (13,9 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,33 ml, 4,6 mg, 30,6 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (17,5 jl, 87,6 nmol, 3 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,0.
(b) Preparación de ADC 11
A la solución de Trastuzumab parcialmente reducido (140 |jl, 1,4 mg, 9 nmol), se agregó DMA (28,2 |jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 6 (10 mM en DMA, 6,8 jl, 67,5 nmol, 7,5 eq.). Luego de la adición de DL 6, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 6,8 jl, 67,5 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 11 se concentró hasta una concentración final de 6,14 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 218 jl (1,33 mg, 8,9 nmol, 99 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (38 %).
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 12 con Trastuzumab y el compuesto DL 7
(a) Reducción parcial de Trastuzumab para proporcionar Trastuzumab parcialmente reducido
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (17,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,5 ml, 8,5 mg, 57 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con tampón de fosfato (50 mM, pH 8). La reducción parcial de los enlaces de disulfuro en el anticuerpo se realizó mediante la adición de una solución de clorhidrato de tris[2-carboxietil]fosfino (TCEP) 5,0 mM (24,5 jl, 122,4 nmol, 2,2 eq.). La reacción de reducción se dejó agitar durante 90 min a 20 °C. Inmediatamente luego de la reducción, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 3,4.
(b) Preparación de ADC 12
A la solución de Trastuzumab parcialmente reducido (200 jl, 2 mg, 13,2 nmol), se agregó DMA (42,1 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 7 (10 mM en DMA, 7,9 jl, 79 nmol, 6 eq.). Luego de la adición de DL 7, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 30 min a 20 °C. El exceso de fármaco se templó mediante la adición de N-acetilcisteína (NAC) (10 mM, 7,9 jl, 79 nmol) seguido de una agitación de la solución durante 20 min. La reacción de conjugación templada se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 12 se concentró hasta una concentración final de 5,38 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 270 jl (1,45 mg, 9,6 nmol, 72 %) de una solución de ADC. Se realizaron ejecuciones de HPLC de HIC para determinar el porcentaje de reacción de conjugación (76 %).
Preparación del conjugado de fármaco anticuerpo ADC 13 con Trastuzumab modificado por Traut y el compuesto DL 2
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido en Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (16,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,5 ml, 8,0 mg, 53,7 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de tampón de fosfato (fosfato 50 mM, EDTA 2 mM, pH 8). Se agregó un reactivo de Traut (14 mM, 46,0 jl, 644 nmol, 12 eq.), y la reacción se agitó durante 2 h a 20 °C. Se realizó un intercambio de tampón en la mezcla con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS y se concentró hasta obtener un volumen de 0,8 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,4.
(b) Preparación of ADC 13
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (200 jl, 2,0 mg, 13 nmol), se le agregó DMA (37 jl) seguido de la adición de una solución recién preparada de DL 2 (10 mM en DMA, 13 jl, 130 nmol, 10 eq.). Luego de la adición de DL 2, la solución se enturbió. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 13 se concentró hasta una concentración final de 2,83 mg/ml según se determinó mediante UV y se obtuvieron 340 pl (0,96 mg, 6,4 nmol, 49 %) de solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 14 con Trastuzumab modificado con Traut y el compuesto DL 3
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (16,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,5 ml, 8,0 mg, 53,7 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (50 mM de fosfato, 2 mM de EDTA, pH 8). Se agregó un reactivo de Traut (14 mM, 46.0 |jl, 644 nmol, 12 eq.) y la reacción se agitó durante 2 h a 20 °C. Se realizó un intercambio de tampones en la mezcla con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS y se concentró hasta obtener un volumen de 0,8 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,4.
(b) Preparación de ADC 14
A la solución de T rastuzumab activado por tiol (200 pl, 2,0 mg, 13 nmol), se agregó DMA (37 pl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 3 (10 mM en DMA, 13 pl, 130 nmol, 10 eq.). Luego de la adición de DL 3, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante una desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 14 se concentró hasta una concentración final de 0,75 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 380 pl (0,28 mg, 1,9 nmol, 15 %) Se obtuvo una solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 15 con Trastuzumab modificado por Traut y el compuesto DL 5
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (16,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,5 ml, 8,0 mg, 53,7 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (50 mM de fosfato, 2 mM de EDTA, pH 8). Se agregó un reactivo de Traut (14 mM, 46.0 pl, 644 nmol, 12 eq.) y la reacción se agitó durante 2 h a 20 °C. Se realizó un intercambio de tampón en la mezcla con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS y se concentró hasta obtener un volumen de 0,8 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,4.
(b) Preparación de ADC 15
A la solución de T rastuzumab activado por tiol (200 pl, 2,0 mg, 13 nmol), se agregó DMA (37 pl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 5 (10 mM en DMA, 13 pl, 130 nmol, 10 eq.). Luego de la adición de DL 5, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante una desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 15 se concentró hasta una concentración final de 1,79 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 440 pl (0,79 mg, 5,2 nmol, 40 %) de solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 16 con Trastuzumab modificado con Traut y el compuesto DL 6
(a) Reacción de Trastuzumab con clorhidrato de 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de Trastuzumab (17,1 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (0,25 ml, 4,3 mg, 28,5 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (50 mM de fosfato, 2 mM de EDTA, pH 8). Se agregó un reactivo de Traut (14 mM, 24,4 |jl, 342 nmol, 12 eq.) y la reacción se agitó durante 2 h a 20 °C. Se realizó un intercambio de tampón en la mezcla con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS y se concentró hasta obtener un volumen de 0,43 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 4,6.
(b) Preparación de ADC 16
A la solución de T rastuzumab activado por tiol (200 jl, 2,0 mg, 13 nmol), se agregó DMA (37 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 6 (10 mM en DMA, 13 jl, 130 nmol, 10 eq.). Luego de la adición de DL 6, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante una desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 16 se concentró hasta una concentración final de 5,63 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 230 jl (1,29 mg, 8,6 nmol, 66 %) ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 17 con Trastuzumab modificado por Traut y el Compuesto DL 8
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante una desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (17,7 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
La solución de Trastuzumab (1,5 ml, 26,5 mg, 177 nmol) se diluyó hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (fosfato 50 mM, 2 mM de EDTA, pH 8) y se fraccionó en dos matraces (1,3 ml cada uno). El reactivo de Traut se agregó (14 mM, 61,8 jl, 866 nmol, 10 eq.) en cada matraz y las reacciones se agitaron durante 2 h a 20 °C. Las reacciones se mezclaron y se intercambió el tampón con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-10 en tampón de PBS y se concentraron hasta obtener un volumen de 2,6 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 5,6.
(b) Preparación de ADC 17
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (500 jl, 5,0 mg, 33 nmol), se agregó DMA (98,6 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 8 (10 mM en DMA, 26,4 jl, 264 nmol, 8 eq.). Luego de la adición de DL 8, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante una desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 17 se concentró hasta una concentración final de 3,21 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 390 jl (1,25 mg, 8,3 nmol, 25 %) de una solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 18 con Trastuzumab modificado con Traut y el Compuesto DL 9
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (17,7 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
Se diluyó una solución de T rastuzumab (1,5 ml, 26,5 mg, 177 nmol) hasta una concentración de 10 mg/ml usando un tampón de fosfato (fosfato 50 mM, EDTA 2 mM, pH 8) y se fraccionó en dos matraces (1,3 ml cada uno). Se agregó reactivo de Traut (14 mM, 61,8 jl, 866 nmol, 10 eq.) en cada matraz y las reacciones se agitaron durante 2 h a 20 °C. Las reacciones se mezclaron y se intercambió el tampón usando columnas Sephadex G25 NAP-10 en tampón de PBS y se concentraron hasta un volumen de 2,6 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 5,6.
(b) Preparación de ADC 18
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (500 jl, 5,0 mg, 33 nmol), se le agregó DMA (98,6 jl) seguido de la adición de una solución recién preparada de DL 9 (10 mM en DMA, 26,4 |jl, 264 nmol, 8 eq.). Luego de la adición de DL 9, la solución se enturbió. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 18 se concentró hasta una concentración final de 3,16 mg/ml según se determinó mediante UV y se obtuvieron 390 jl (1,23 mg, 8,2 nmol, 25 %) de una solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco de anticuerpo ADC 19 con Trastuzumab modificado con Traut y el compuesto DL 10
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido en Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (17,7 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
Se diluyó solución de Trastuzumab (1,5 ml, 26,5 mg, 177 nmol) hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (fosfato 50 mM, EDTA 2 mM, pH 8) y se fraccionó en dos matraces (1,3 ml cada uno). Se agregó reactivo de Traut (14 mM, 61,8 jl, 866 nmol, 10 eq.) en cada matraz y las reacciones se agitaron durante 2 h a 20 °C. Las reacciones se mezclaron y se realizó un intercambio de tampón con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-10 en tampón de PBS y se concentraron hasta un volumen de 2,6 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 5,6.
(b) Preparación de ADC 19
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (500 jl, 5,0 mg, 33 nmol), se le agregó DMA (98,6 jl) seguido de la adición de una solución recién preparada de DL 10 (10 mM en DMA, 26,4 jl, 264 nmol, 8 eq.). Luego de la adición de DL 10, la solución se enturbió. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 19 se concentró hasta una concentración final de 11,3 mg/ml según se determinó mediante UV y se obtuvieron 290 jl (3,2 mg, 21,3 nmol, 64 %) de una solución de ADC.
Preparación del conjugado de fármaco-anticuerpo ADC 20 con Trastuzumab modificado por Traut y el compuesto DL 11
(a) Reacción de Trastuzumab con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) para proporcionar Trastuzumab activado por tiol
Se disolvió Trastuzumab (Trastuzumab adquirido de Roche en forma de polvo blanco liofilizado para la preparación de una solución concentrada para infusión) en 5 ml de tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0) y se purificó mediante desalinización con el uso de columnas Sephadex G25 PD-10 en tampón de fosfato (50 mM, pH 8,0). La concentración de T rastuzumab (17,7 mg/ml) se determinó mediante la medición de la absorbancia a 280 nm.
Se diluyó una solución de Trastuzumab (1,5 ml, 26,5 mg, 177 nmol) hasta obtener una concentración de 10 mg/ml con el uso de un tampón de fosfato (50 mM de fosfato, 2 mM de EDTA, pH 8) y se fraccionó en dos matraces (1,3 ml cada uno). Se agregó reactivo de Traut (14 mM, 61,8 jl, 866 nmol, 10 eq.) en cada matraz y las reacciones se agitaron durante 2 h a 20 °C. Las reacciones se mezclaron y se intercambió el tampón con el uso de columnas Sephadex G25 NAP-10 en tampón de PBS y se concentraron hasta obtener un volumen de 2,6 ml. Inmediatamente después, se realizó un ensayo Ellman para proporcionar una relación de tiol libre respecto del anticuerpo (FTAR) de 5,6.
(b) Preparación de ADC 20
A la solución de Trastuzumab activado por tiol (500 jl, 5,0 mg, 33 nmol), se agregó DMA (98,6 jl) seguido por la adición de una solución recién preparada de DL 11 (10 mM en DMA, 26,4 jl, 264 nmol, 8 eq.). Luego de la adición de DL 11, la solución se tornó turbia. La reacción de conjugación se agitó durante 2 h a 25 °C y se purificó mediante una desalinización con el uso de una columna Sephadex G25 NAP-5 en tampón de PBS. El producto objetivo final ADC 20 se concentró hasta una concentración final de 3,73 mg/ml de acuerdo con lo determinado mediante UV y se obtuvieron 440 jl (1,6 mg, 10,6 nmol, 32 %) de una solución de ADC.
Ejemplo 3: Demostración de la citotoxicidad de los conjugados de fármaco-anticuerpo de la presente invención
Bioensayos para la detección de la actividad antitumoral
El objetivo del ensayo consistió en evaluar la actividad citostática in vitro (capacidad para retrasar o detener el crecimiento de las células tumorales) o citotóxica (capacidad para matar las células tumorales) de las muestras objeto del ensayo.
Líneas celulares y cultivo celular
Se obtuvieron las siguientes líneas celulares humanas de la Colección Estadounidense de Cultivos Tipo (ATCC, por sus s ig las en inglés): SK-BR-3 (ATCC HB-30), HCC-1954 (ATCC CRL-2338) (Cáncer de mama, HER2+); MDA-MB-231 (ATCC HTB-26) y MCF-7 (ATCC HTB-22) (Cáncer de mama, HER2-), HT-1080 (ATCC CCL-121, fibrosarcoma, CD13+), Raji (ATCC CCL-86, linfoma de Burkitt, CD13-) y RPMI 8226 (ATCC CRM-CCL-155, mieloma, CD13-). La línea celular de leucemia promielocítica aguda humana n B 4 (ACC 207, CD13+) se obtuvo del Leibniz-Institut DSMZ (Braunschweig, Alemania). Se mantuvieron las células a 37 °C, 5 % de CO2 y 95 % de humedad en un medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (para las células SK-BR-3, MDA-MB-231 y MCF-7), medio esencial mínimo de Eagle (EMEM) (para las células HT-1080) o RPMI-1640 (para el resto de las líneas celulares), todos los medios se complementaron con 10 % de suero bovino fetal (FCS), 2mM de L-glutamina y 100 unidades/ml de penicilina y estreptomicina.
Ensayo de la Citotoxicidad
Para las células SK-BR-3, HCC-1954, MDA-MB-231 y MCF-7, se adaptó un ensayo colorimétrico con el uso de sulforodamina B (SRB) para una medición cuantitativa del crecimiento celular y la citotoxicidad, de acuerdo con lo descripto por V. Vichai y K. Kirtikara. Sulforhodamine B colorimetric assay for cytotoxicity screening [Ensayo colorim étrico de su lforodam ina B para cribaje de la c ito tox ic idad- Nature P rotocols , 2006, 1, 1112-1116. En resumen, se sembraron células en placas de microtitulación de 96 pocillos y se dejaron reposar durante 24 horas en un medio libre de fármacos antes del tratamiento con el vehículo solamente o con las sustancias sometidas a prueba durante 72 horas. Para la cuantificación, se lavaron las células dos veces con tampón de solución salina fosfatada (PBS), se fijaron durante 15 min en 1 % de solución de glutaraldehído, se enjuagaron dos veces con PBS, se mancharon en 0,4 % (p/v) de SRB con una solución al 1 % (v/v) de ácido acético durante 30 min, se enjuagaron varias veces con una solución al 1 % de ácido acético y se secaron al aire. Se extrajo posteriormente la s Rb en 10 mM de solución base Trizma y se midió la densidad óptica a 490 nm en un espectrofotómetro de microplaca.
Para las células HT-1080, NB 4, Raji y RPMI-8226, se usó un ensayo colorimétrico alternativo basado en la reducción de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) para la medición cuantitativa de la viabilidad de las células de acuerdo con lo descripto por T. Mosmann en “Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays” [Ensayo co lorim étrico rápido para e l crecim iento y la supervivencia celu lar: aplicación la pro liferación y ensayos de to x ic id a d J Im m unol M ethods , 1983, 65 : 55-63. En síntesis, se sembraron células en bandejas de 96 pocillos y se trataron del modo indicado anteriormente y luego de 72 horas de exposición a las sustancias sometidas a prueba se estimó la viabilidad celular a partir de la conversión de MTT (Sigma, St Louis, MO, EE.UU.) a su producto de reacción coloreado, MTT-formazán, que se disolvió en DMSO para medir su absorbancia a 540 nm en un espectrofotómetro de microplacas.
La supervivencia celular se expresó como porcentaje de supervivencia de células de control no tratadas. Todas las evaluaciones se realizaron por triplicado y los datos resultantes se adecuaron mediante una regresión no lineal a una curva logística de cuatro parámetros a partir de los cuales se calculó el valor de IC50 (la concentración de compuesto que causó el 50 % de muerte celular en comparación con la supervivencia de las células de control).
Ejemplo de bioactividad 1 - Citotoxicidad del conjugado ADC 1 y los reactivos relacionados contra células de cáncer de mama HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad in vitro del ADC 1 junto con los compuestos citotóxicos progenitores DL 1 y 11-R y Trastuzumab se evaluó contra cuatro líneas celulares humanas diferentes de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células positivas de HER2) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células negativas HER2). Se realizaron curvas de respuesta a la dosis estándar (DR) para una incubación de 72 horas con las sustancias sometidas a prueba.
Citotoxicidad de Trastuzumab
La citotoxicidad in vitro de Trastuzumab se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas DR de dilución de 2,5 veces por triplicado que oscilaban de 50 a 0,01 |jg/ml (3,33E-07-8,74E-11 M). El Trastuzumab se halló completamente inactivo, y no alcanzó el IC50 en ninguna de las líneas celulares sometidas a ensayo, independientemente de su estado de HER2 como se muestra en la Tabla 10, en la que se presentan los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores de IC50 obtenidos en tres experimentos independientes.
Tabla 10. Síntesis de la citotoxicidad in v itro de Trastuzumab.
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Citotoxicidad de 11-R
La citotoxicidad del compuesto intermediario 11-R se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR por triplicado de 10 puntos y 2,5 veces de dilución que oscilaban de 100 a 0,03 ng/ml (1,26E-07 - 3,3E-11 M).
Como se muestra en la Tabla 11, en la que se presentan los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en tres experimentos independientes, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 en el intervalo nanomolar bajo, de 0,4 a 1,4 ng/ml (5,04E-10 a 1,70E-09 M). El valor medio geométrico IC50 en todo el panel celular fue de 0,79 ng/ml (9,94E-10 M), con un desvío estándar geométrico de 1,8 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en todas las cuatro líneas celulares.
Tabla 11. Síntesis de la citotoxicidad in v it ro de 11-R
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Citotoxicidad de DL 1
La citotoxicidad del compuesto intermediario DL 1 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR por triplicado, de 10 puntos, y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 10 |jg/ml a 2,6 ng/ml (7,58E-06 - 1,99E-09 M).
Como se muestra en la Tabla 12, en la que se presentan los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en tres experimentos independientes, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 en el intervalo nanomolar elevado, de 0,07 a 0,43 |jg/ml (5,23E-08 a 3,11 E-07 M). El valor medio geométrico de IC50 en todo el panel celular fue de 0,16 jg/ml (1,15E-07 M), con el desvío geométrico estándar de 2,1 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 12. Síntesis de la citotoxicidad in v it ro de DL 1
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Citotoxicidad de ADC 1
La citotoxicidad del ADC 1 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR por triplicado, de 10 puntos, y dilución de 2,5 veces contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 - 1,75E-10 M). La evaluación se realizó en tres experimentos independientes. La Figura 3 muestra una curva de DR representativa correspondiente a uno de estos experimentos y en la Tabla 13 se resumen los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en los tres experimentos independientes.
Como se observa en la Tabla 13, el ADC 1 mostró una citotoxicidad similar a aquella mostrada por el fármaco progenitor 11-R solamente en las células de HER2-positivo. Sin embargo, las células de HER2-negativo, esa toxicidad es significativamente menor: casi 40 veces menor de acuerdo con la relación de selectividad obtenida al dividir el valor medio de IC50 en las células de HER2-negativo entre aquel de las células de HER2-positivo. Esta selectividad nos conduce a concluir que el conjugado actúa a través de la interacción del anticuerpo con el receptor de HER2 asociado a la membrana en las células tumorales, seguido por una administración intracelular del fármaco citotóxico.
Tabla 13. Síntesis de la citotoxicidad in v itro del ADC 1
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A los efectos de comparar gráficamente la citotoxicidad del anticuerpo monoclonal Trastuzumab solo con aquella del conjugado ADC 1, en la Figura 4, se presentan histogramas que muestran los porcentajes de supervivencia celular luego del tratamiento de las diferentes líneas celulares con el anticuerpo monoclonal solo (20 |jg/ml) o ADC 1 a 16 o 2,5 jg/m l. Tal como se observa, a concentraciones similares (20 contra 16 jg/ml), Trastuzumab mostró una citotoxicidad insignificante independientemente de los niveles de expresión de HER2 de las líneas celulares (supervivencia celular entre 68 % y 100 %) mientras que el ADC 1 mostró un efecto antiproliferativo potente contra las células HCC-1954 y SK-BR-3 que expresaban HER2 (supervivencia celular 23 % y 8 %, respectivamente) insignificante contra la línea celular MCF-7 con HER2-negativo (100 % de supervivencia celular). El efecto del ADC en MDA-MB-231 es observable a esta concentración (22 % de supervivencia celular) pero es muy moderado a concentraciones menores (83 % de supervivencia celular a 2,5 jg/m l) mientras que es aún destacable en las células que expresan HER2 (30 % de supervivencia celular para ambas SK-BR-3 y HCC-1954).
Estos resultados demuestran claramente la citotoxicidad y especificidad notables del ADC 1 contra las células tumorales humanas que expresan HER2 in vitro.
Ejemplo de bioactividad 2 - Citotoxicidad del conjugado ADC 2 y agentes relacionados contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad in vitro de ADC 2 junto con el compuesto citotóxico progenitor DL 2 se evaluó contra cuatro líneas celulares humanas de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2 positivo) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2 negativo). Se confeccionaron las curvas de respuesta a la dosis (RD) estándar para una incubación de 72 horas con las sustancias ensayadas. Los resultados también se comparan con el compuesto progenitor citotóxico 11-R y el anticuerpo monoclonal Trastuzumab descripto anteriormente.
Citotoxicidad de DL 2
La citotoxicidad del compuesto intermediario DL 2 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 10 |jg/ml a 2,6 ng/ml (6,26E-06 - 1,64E-09 M).
Tal como se muestra en la Tabla 14, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas celulares tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 en el intervalo submicromolar, de 0,2 a 0,47 jg/m l (1,25E-07 a 2,94E-07 M). Los valores IC50 medios geométricos en todo el panel celular fueron de 0,28 jg/m l (1,73E-07 M), con el desvío geométrico estándar de 1,5 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 14. Síntesis de la citotoxicidad in v it ro de DL 2
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Citotoxicidad de ADC 2
La citotoxicidad de ADC 2 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/m l a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). La Figura 5 muestra la curva de RD correspondiente a este experimento y la Tabla 15 resume los valores IC50 obtenidos.
Como se observa en la Tabla 15, ADC 2 mostró una mayor citotoxicidad en las células con HER2 positivo que en las células con HER2 negativo: el ADC es casi 10 veces más potente en el primero de acuerdo con la relación de selectividad al dividir el valor medio IC50 en las células con HER2 negativo entre las células con HER2 positivo. Si bien esta selectividad es más bien modesta, nos conduce a concluir que el conjugado actúa a través de la interacción del anticuerpo con el receptor de HER2 asociado a la membrana en las células tumorales, seguido por la administración intracelular del fármaco citotóxico.
Tabla 15. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 2
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A los efectos de comprar gráficamente la citotoxicidad del anticuerpo monoclonal Trastuzumab solo con aquella del conjugado ADC 2, se muestran en la Figura 6 histogramas que muestran los porcentajes de la supervivencia celular luego del tratamiento de las diferentes líneas celulares con el anticuerpo monoclonal solo (20 |jg/ml) o ADC 2 a 16 o 2,5 jg/ml. De acuerdo con lo observado, a concentraciones similares (20 contra 16 jg/ml), Trastuzumab mostró una citotoxicidad insignificante independientemente de los niveles de expresión de HER2 de las líneas celulares (supervivencia celular entre 68 % y 100 %), mientras que ADC 2 mostró un efecto antiproliferativo significativo contra las células HCC-1954 y SK-BR-3 que expresaban HER2 (supervivencia celular 31 % y 40 %, respectivamente), dicho efecto fue insignificante contra la línea celular MCF-7 con HER2 negativo (supervivencia celular 94 %). El efecto del ADC en la línea celular MDA-MB-231 con HER2 negativo también es insignificante a esta concentración (supervivencia celular 58 %) pero es nulo a concentraciones menores (100 % de supervivencia celular a 2,5 jg/ml) mientras que es aún destacable en las células que expresan HER2 (supervivencia celular 63 % para HCC-1954 y 51 % para SK-BR-3).
Ejemplo de bioactividad- Citotoxicidad del conjugado ADC 3 y reactivos relacionados contra las células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad in vitro del ADC 3 junto con el compuesto citotóxico progenitor DL 3 se evaluó contra cuatro líneas celulares humanas de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2 positivo) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2 negativo). Se confeccionaron las curvas de respuesta a la dosis (RD) estándar para una incubación de 72 horas con las sustancias ensayadas. Los resultados se comparan también con el compuesto citotóxico progenitor 11-R y con el anticuerpo monoclonal Trastuzumab descripto anteriormente.
Citotoxicidad de DL 3
La citotoxicidad del compuesto intermediario DL 3 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 10 |jg/ml a 2,6 ng/ml (6,62E-06 - 1,74E-09 M).
Como se muestra en la Tabla 16, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas celulares tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 en el intervalo submicromolar, de 0,15 a 0,28 jg/ml (9,93e -08 a 1,85E-07 M). El valor medio geométrico IC50 en todo el panel celular fue de 0,2 jg/ml (1,33E-07 m ), con el desvío geométrico estándar de 1,4 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 16. Resumen de la citotoxicidad in v itro de DL 3
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Citotoxicidad de ADC 3
La citotoxicidad del ADC 3 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 50 jg/ml a 13 ng/ml (3,33E-07 -8,74E-11 M). La Figura 7 muestra la curva de RD correspondiente a este experimento y la Tabla 17 resume los valores IC50 obtenidos.
Como se observa en la Tabla 17, ADC 3 mostró una citotoxicidad que solamente en las células con HER2 positivo es similar a la mostrada por el fármaco progenitor 11-R. Sin embargo, las células con HER2 negativo, esa toxicidad es significativamente menor: 23 veces menor de acuerdo con la relación de selectividad obtenida mediante la división del valor medio IC50 en las células con HER2 negativo entre aquella de las células con HER2 positivo. Esta selectividad nos conduce a concluir que el conjugado actúa a través de la interacción del anticuerpo con el receptor de HER2 asociado a la membrana en las células tumorales, seguido por la administración intracelular del fármaco citotóxico de acuerdo con lo previamente mencionado para ADC 1 y ADC 2.
Tabla 17. Síntesis de la citotoxicidad in v itro de ADC 3
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A los efectos de comparar gráficamente la citotoxicidad del anticuerpo monoclonal Trastuzumab solo con aquella del conjugado ADC 3, se muestran en la Figura 8 histogramas que indican los porcentajes de la supervivencia celular luego del tratamiento de las diferentes líneas celulares con el anticuerpo monoclonal solo (20 |jg/ml) o con ADC 3 a 20 o 3 jg/ml. Como se observa, a 20 jg/ml, Trastuzumab mostró una citotoxicidad insignificante independientemente de los niveles de expresión de HER2 de las líneas celulares (supervivencia celular entre 68 % y 100 %), mientras que el ADC 3 mostró un efecto antiproliferativo potente contra las células HCC-1954 y SK-BR-3 que expresan HER2 (supervivencia celular 23 % y 32 %, respectivamente) y solamente marginal contra la línea celular MCF-7 de HER2 negativo (88 % de supervivencia celular). El efecto del ADC en MDA-MB-231 es notable a esta concentración (32 % de supervivencia celular) pero es insignificante a concentraciones menores (91 % de supervivencia celular a 3 jg/ml) mientras que es aún notable en las células que expresaban HER2 (34 % de supervivencia celular para HCC-1954 y 45 % para SK-BR-3).
Ejemplo 4 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 4 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad in vitro del ADC ADC 4 se evaluó contra cuatro líneas celulares humanas diferentes de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2 positivo) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2 negativo). Se confeccionaron las curvas de respuesta a la dosis (RD) estándar para una incubación de 72 horas con el ADC. Los resultados se comparan también con los compuestos citotóxicos progenitores 11-R y DL 1 así como también el anticuerpo monoclonal Trastuzumab descripto anteriormente.
Citotoxicidad de ADC 4
La citotoxicidad del ADC 4 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 50 |jg/ml a 13 ng/ml (3,33E-07 -8,74E-11 M). La Figura 9 muestra la curva de RD correspondiente a este experimento y la Tabla 18 resume los valores IC50 obtenidos.
Como se observa en la Tabla 18, el ADC 4 mostró una citotoxicidad que solamente en las células con HER2 es similar a aquella mostrada por el fármaco progenitor 11-R. Sin embargo, en las células HER2 negativo esa citotoxicidad es casi 100 veces menor de acuerdo con la relación de selectividad al dividir el valor IC50 medio en las células con HER2 negativo entre aquel de las células positivas. Tal como se mencionó para el ADC 1, dicha selectividad nos conduce a concluir que el conjugado actúa a través de la interacción del anticuerpo con el receptor de HER2 asociado a la membrana en las células tumorales, seguido por una administración intracelular del fármaco citotóxico. Más aún, estos resultados obtenidos con ADC 4 demuestran que el potencial antitumoral provisto por la carga útil es similar independientemente del residuo de anticuerpo comprendido en el enlace covalente, ya sea Cys o Lys.
Tabla 18. Resumen de la citotoxicidad in v it ro de ADC 4
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A los efectos de comprar gráficamente la citotoxicidad del anticuerpo monoclonal Trastuzumab solo con aquella del conjugado ADC 4, se muestran en la Figura 10 histogramas que indican los porcentajes de supervivencia celular de las diferentes líneas celulares con el anticuerpo monoclonal solo a 3 jg/ml o con el ADC a 3 o 0,2 jg/ml. Tal como se observa, a 3 jg/ml, Trastuzumab mostró una citotoxicidad escasa independientemente de los niveles de expresión de HER2 de las líneas celulares (supervivencia celular entre 60 % y 90 %), mientras que ADC 4 mostró un efecto antiproliferativo potente contra las células HCC-1954 y SK-BR-3 que expresaban HER2 (supervivencia celular 11 % y 23 %, respectivamente) y casi ningún efecto sobre la línea celular MCF-7 con HER2-negativo. El efecto del ADC sobre la línea celular MDA-MB-231 es observable a esta concentración (55 % de supervivencia celular) pero es insignificante a menores concentraciones (97-100 % supervivencia celular a 0,2 |jg/ml) mientras que es claramente notable en las células que expresan HER2 (38 % de supervivencia celular para HCC-1954 y 26 % para SK-BR-3).
Ejemplo 5 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 6 y reactivos relacionados contra células con HER2 positivo y negativo de cáncer de mama
Se evaluó la citotoxicidad in vitro del ADC 6 junto con los compuestos citotóxicos progenitores DL 5 y 12 R contra cuatro líneas celulares humanas diferentes de cáncer de mama que expresaban o no expresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2-positivo) así como también MdA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2-negativo). Se confeccionaron las curvas de respuesta a la dosis (RD) estándar para una incubación de 72 horas con las sustancias ensayadas.
Citotoxicidad de 12-R
La citotoxicidad del compuesto intermediario 12-R se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 a 0,03 ng/ml (1,28E-07 - 3,83E-11 M).
Como se muestra en la Tabla 19, cuando se presentan resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en tres experimentos independientes, el compuesto fue similar en todas las líneas celulares tumorales independientemente de su expresión de HER2, con los valores IC50 en el intervalo nanomolar bajo, de 0,4 a 1,3 ng/ml (5,62E-10 a 1,62E-09 M). El valor medio geométrico IC50 en todo el panel celular fue de 0,71 ng/ml (9,06E-10 M), con el desvío geométrico estándar de 1,7 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 19. Síntesis de la citotoxicidad in v it ro de 12-R
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Citotoxicidad de DL 5
La citotoxicidad del compuesto intermediario DL 5 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 10 |jg/ml a 2,6 ng/ml (6,66E-06 - 1,73E-09 M).
Como se muestra en la Tabla 20, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 el intervalo nanomolar elevado, de 0,10 a 0,19 jg/ml (6,53e -08 a 1,27E-07 M). El valor medio geométrico IC50 en todo el panel celular fue de 0,13 jg/ml (8,84E-08 m ), con el desvío geométrico estándar de 1,4 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 20. Resumen de la citotoxicidad in v itro de DL 5
Figure imgf000194_0002
Citotoxicidad de ADC 6
La citotoxicidad del ADC 6 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). La Figura 11 muestra la curva de RD obtenida y la Tabla 21 resume los valores IC50 deducidos.
Como se observa en la Tabla 21, la citotoxicidad de ADC 6 es comparable con aquella mostrada por el fármaco progenitor 12-R solamente en las células HER2-positivo. Sin embargo, en las células HER2-negativo, esa toxicidad es menor: casi 10 veces menor de acuerdo con la relación de selectividad obtenida al dividir el valor medio IC50 en las células HER2-negativo entre aquella de las células HER2-positivo. Estos datos nos conducen a concluir que el conjugado actúa a través de la interacción del anticuerpo con el receptor de HER2 asociado a la membrana en las células tumorales, seguido por la administración intracelular del fármaco citotóxico.
Tabla 21. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 6
Figure imgf000195_0001
Ejemplo 6 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 11 y reactivos relacionados contra HER2 positivo y negativo de células mamarias
Se evaluó la citotoxicidad in vitro del ADC 11 junto con los compuestos citotóxicos progenitores DL 6 y 12 R y se evaluaron contra cuatro líneas celulares humanas de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2-positivo) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2-negativo). Se confeccionaron curvas de respuesta a la dosis (RD) estándar para una incubación de 72 horas con las sustancias ensayadas.
Citotoxicidad de DL 6
La citotoxicidad del compuesto intermedio DL 6 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la confección de curvas de RD con dilución de 2,5 veces que oscilaban de 1 |jg/ml a 0,26 ng/ml (7,23E-07 - 1,88E-10 M).
Como se muestra en la Tabla 22, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de HER2, con valores IC50 el intervalo nanomolar elevado, de 0,04 a 0,3 |jg/ml (3,lE-08 a 1,97E-07 M). El valor medio geométrico IC50 en todo el panel celular fue de 0,11 jg/ml (7,89E-08 m ), con el desvío geométrico estándar de 2,31 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 22. Resumen de la citotoxicidad in v itro de DL 6
Figure imgf000195_0003
Citotoxicidad de ADC 11
La citotoxicidad del ADC 11 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 50 jg/ml a 13 ng/ml (3,33E-07 -8,74E-11 M). La Tabla 23 resume los valores IC50 deducidos.
Tabla 23. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 11
Figure imgf000195_0002
Ejemplo 7 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 12 contra células de con HER2 positivo y negativo de cáncer de mama
La citotoxicidad in vitro del ADC 12 se evaluó contra cuatro líneas celulares humanas diferentes de cáncer de mama que sobreexpresaban o no sobreexpresaban el receptor de HER2, con inclusión de SK-BR-3, HCC-1954 (células con HER2-positivo) así como también MDA-MB-231 y MCF-7 (células con HER2-negativo). Se confeccionaron curvas de respuesta a la dosis (RD) para una incubación de 72 horas con las sustancias ensayadas.
La citotoxicidad del ADC 12 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 24 se resumen los valores IC50 deducidos. Como se observa, el ADC 12 es significativamente más activo en las células con HER2-positivo, y proporcionan una relación de la selectividad notable mayor que 20.
Tabla 24. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 12
Figure imgf000196_0001
Ejemplo 8 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 13 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 13 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 |jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 25, se resumen los valores IC50 deducidos. Como se observa, ADC 13 es significativamente más activo en las células con HER2-positivo, que proporciona una relación de selectividad destacable cercana a 100.
Tabla 25. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 13
Figure imgf000196_0003
Ejemplo 9 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 14 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 14 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 26, se resumen los valores IC50 deducidos. Notablemente, el ADC 14 mostró una actividad citotóxica en el intervalo bajo nM comparable a aquella del fármaco progenitor 11R pero solamente en las células que expresaban HER2, mientras que no mostró ninguna actividad en las células con HER2-negativo dentro del intervalo de concentraciones ensayadas, por lo que se confirma una selectividad destacable.
Tabla 26. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 14
Figure imgf000196_0004
Ejemplo 10 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 15 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 15 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 50 jg/ml a 13 ng/ml (3,33E-07 -8,74E-11 M). En la Tabla 27, se resumen los valores IC50 deducidos. Como se observa, el ADC 15 es significativamente más activo en las células con HER2-positivo, por lo que provee una relación de selectividad destacable cercana a 200.
Tabla 27. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 15
Figure imgf000196_0002
Ejemplo 11 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 16 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 16 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 |jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 28, se resumen los valores IC50 deducidos. Como se observa, el ADC 16 es significativamente más activo en las células con HER2-positivo, por lo que provee una relación de selectividad destacable superior a 100.
Tabla 28. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 16
Figure imgf000197_0001
Ejemplo 12 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 17 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 17 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 29 se resumen los valores IC50 deducidos.
Tabla 29. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 17
Figure imgf000197_0003
Ejemplo 13 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 18 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 18 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 30, se resumen los valores IC50 deducidos.
Tabla 30. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 18
Figure imgf000197_0004
Ejemplo 14 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 19 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 19, se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 31, se resumen los valores IC50 deducidos.
Tabla 31. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 19
Figure imgf000197_0002
Ejemplo 15 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 20 contra células de cáncer de mama con HER2 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 20, se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 |jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 32m se resumen los valores IC50.
Tabla 32. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 20
Figure imgf000198_0002
Ejemplo 16 de bioactividad- Citotoxicidad del conjugado ADC 7 y reactivos relacionados contra células de cáncer CD13 positivo y negativo
Citotoxicidad de 11-R
La citotoxicidad del compuesto intermedio 11-R se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 0,03 ng/ml (1,26E-07 - 3,3E-11 M).
Como se muestra en la Tabla 33, en la que se presentan los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en tres experimentos diferentes, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de CD13, con valores IC50 en el intervalo nanomolar bajo, de 0,5 a 1,2 ng/ml (5,8E-10 a 1,51E-09 M). El valor medio geométrico C50 en todo el panel celular fue de 0,84 ng/ml (1,06E-09 M) con el desvío geométrico estándar de 1,5 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 33. Resumen de la citotoxicidad in vitro de 11-R
Figure imgf000198_0003
Citotoxicidad de ADC 7
La citotoxicidad del ADC 7, se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 34, se resumen los valores IC50 deducidos. Notablemente, el ADC 7 mostró una actividad citotóxica en el intervalo nM bajo comparable a aquella del fármaco parental 11-R pero solamente en las células que expresaban CD13, mientras que la actividad en las células con CD13-negativo es más bien moderada. Consecuentemente, se puede observar una selectividad destacable bastante superior a 100 como una función de la expresión de CD13.
Tabla 34. Resumen de la citotoxicidad in v it ro de ADC 7
Figure imgf000198_0001
Ejemplo 17 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 8 contra células de cáncer con CD13 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 8, se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 35, se resumen los valores IC50 deducidos. El ADC 8 mostró una actividad citotóxica en el intervalo nM bajo comparable con aquel del fármaco parental 11-R pero solamente en las células que expresaban CD13, mientras que su actividad en las células con CD13 negativo es más bien moderada. Por consiguiente, se obtuvo una selectividad destacable cercana a 200 como una función de la expresión de CD13.
Tabla 35. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 8
Figure imgf000199_0001
Ejemplo 18 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 9 y reactivos relacionados contra células de cáncer CD13 positivo y negativo
Citotoxicidad de 12-R
La citotoxicidad del compuesto intermedio 12-R se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 a 0,03 ng/ml (1,28E-07 - 3,83E-11 M).
Como se muestra en la Tabla 36, en la que se presentan los resultados correspondientes a la media geométrica de los valores IC50 obtenidos en tres experimentos independientes, la citotoxicidad de este compuesto fue similar en todas las líneas de células tumorales independientemente de su expresión de CD13, con valores IC50 en el intervalo nanomolar bajo, de 0,3 a 1,1 ng/ml (4,21E-10 a 1,40E-09 M). El valor medio geométrico de IC50 en todo el panel celular fue de 0,6 ng/ml (7,8E-10 M), con el desvío geométrico estándar de 1,7 que concuerda con la homogeneidad de los resultados en las cuatro líneas celulares.
Tabla 36. Resumen de la citotoxicidad in vitro de 12-R.
Figure imgf000199_0003
Citotoxicidad de ADC-9
La citotoxicidad del ADC 9, se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 |jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 37, se resumen los valores IC50. El ADC 9 mostró una actividad citotóxica en el intervalo nM bajo comparable con aquel del fármaco parental 12-R pero solamente en células que expresaban CD13, mientras que la actividad en las células con CD13 negativo es más bien moderada. Por consiguiente, se proporcionó una relación de selectividad destacable superior a 200 como una función de la expresión de CD13.
Tabla 37. Resumen de la citotoxicidad in v it ro de ADC 9
Figure imgf000199_0002
Ejemplo 19 de bioactividad - Citotoxicidad del conjugado ADC 10 contra células de cáncer con CD13 positivo y negativo
La citotoxicidad del ADC 10 se evaluó contra las diferentes líneas de células tumorales mediante la generación de curvas de DR, por triplicado, de 10 puntos y dilución de 2,5 veces que oscilaban de 100 jg/ml a 26 ng/ml (6,67E-07 -1,75E-10 M). En la Tabla 38, se resumen los valores IC50 deducidos. El ADC 10 mostró una actividad citotóxica en el intervalo nM bajo comparable con aquel del fármaco parental 11-R pero solamente en células que expresaban CD13, mientras que su actividad en células con CD13-negativo es más bien moderada. Por consiguiente, se obtuvo una selectividad destacable cercana a 100 como una función de la expresión de CD13.
Tabla 38. Resumen de la citotoxicidad in v itro de ADC 10
Figure imgf000200_0001
Ejemplo 4: Demostración de la eficacia in v iv o de los conjugados de fármaco-anticuerpo de la presente invención
El conjugado de fármaco-anticuerpo basado en Trastuzumab ADC 1 se ensayó en varios modelos in vivo. Se prepararon los lotes de ADC-1 utilizados en estos estudios con el uso de 2,2 eq de TCEP (ADC 12,2 TCEP) o 3 eq de TCEP (ADC-1). Estos lotes se prepararon mediante los procedimientos descriptos anteriormente, excepto que la purificación final mediante cromatografía de exclusión por tamaño (CET) se realizó con una columna Hi Load 26/600 SuperdexTM 200 pg y PBS (pH 7,4) como levigante.
Se evaluaron ADC-1 y ADC 12,2 TCEP en un modelo BT-474 con HER2 positivo de mama, junto con su carga útil, el compuesto 11-R. Ha de observarse que, a pesar de la dosis baja (subóptima) administrada a ratones que portaban tumores en este experimento, se obtuvieron resultados positivos alentadores (Véase la Figura 12). Por lo tanto, se realizó un conjunto de experimentos con el objetivo de evaluar la actividad antitumoral en modelos con Her2 positivo de mama y no de mama. Se evaluó el ADC-1 a un nivel de dosis más elevado en el modelo de tumor de mama, JIMT-1 (Véase la Figura 13), en un modelo de tumor ovárico, SK-OV-3 (Figura 14) y en un modelo gástrico, Gastric-008, un xenoinjerto derivado de un paciente (PDX), (Figura 16). Adicionalmente, el ADC-1 2.2 TCEP) se evaluó en otro modelo gástrico, N87 (Figura 15).
En resumen, se implantó subcutáneamente a ratones de 4 a 6 semanas de edad, atímicos, nu/nu (N87, Gastric-008 o SK-OV-3) o SCID (BT-474 o JIMT-1) una suspensión de células tumorales (JIMT-1 o N87) o fragmentos tumorales (BT-474, Gastric-008 o SK-OV3) generados previamente en ratones donantes.
El tamaño de los tumores y los pesos corporales se registraron 3 veces por semana a partir del primer día de tratamiento (Día 0). Los tratamientos que produjeron una mortalidad >20 % y/o 20 % de pérdida neta de peso corporal se consideraron tóxicos. El volumen de los tumores se calculó con la ecuación (ab2)/2, donde a y b fueron los diámetros de mayor y menor longitud, respectivamente. Los animales se eutanasiaron cuando sus tumores alcanzaron aproximadamente 2.000 mm3 y/o se observó una necrosis severa. La media se calculó para el volumen tumoral en cada día de medición. La regresión tumoral completa (RC) se definió cuando el volumen de los tumores fue < 63 mm3 para 2 o más mediciones consecutivas.
Los animales fueron implantados de acuerdo con lo descripto anteriormente y cuando los tumores alcanzaron aproximadamente 150-200 mm3, los animales que portaban tumores (N = 8-10/grupo) se asignaron aleatoriamente en grupos de tratamiento de acuerdo con el siguiente diseño experimental:
Tumor Grupo Dosis (mg/kg)
JIMT-1 Control 0,0
11-R 5,0
ADC-1 30,0
ADC-1 10,0
ADC-1 5,0
N87 Control 0,0
11-R 5,0
ADC-1 (2.2 TCEP) 30,0
ADC-1 (2.2 TCEP) 10,0
ADC-1 (2.2 TCEP) 5,0 |
SK-OV-3 Control 0,0
11-R 5,0
ADC-1 30,0
ADC-1 10,0
ADC-1 5,0
(continuación)
Tumor Grupo Dosis (mg/kg) Gastric-008 Control 0,0
11-R 5,0
ADC-1 30,0
ADC-1 10,0
ADC-1 5,0
BT-474 Control 0,0
11-R 5,0
ADC-1 (2.2 TCEP) 6,5
ADC-1 2,24
ADC-1 (2.2 TCEP) 1,6

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un conjugado de fármaco que comprende una fracción de fármaco unida covalentemente al resto del conjugado de fármaco, teniendo el conjugado de fármaco la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab, en la que:
    D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (I) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables,
    Figure imgf000202_0001
    en la que:
    D está unido covalentemente por medio de un grupo hidroxi o un grupo amina a (X)b, si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno, o a (L);
    Y es -NH- u - O-;
    Ri es -OH o -CN;
    R2 es un grupo -C(=O)Ra;
    R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
    R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
    Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
    Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido;
    X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
    cada AA es, de manera independiente, una unidad de aminoácido;
    L es un grupo enlazante;
    w es un número entero de 0 a 12;
    b es un número entero de 0 o 1;
    g es un número entero de 0 o 1;
    Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
    n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] respecto de la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se halla en el intervalo de 1 a 20;
    en donde el fragmento de fármaco D se conjuga a través de la posición R4.
    2. El conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 1, en el que D se selecciona de las fórmulas Ia o Ib, o de una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables:
    Figure imgf000202_0002
    en las que:
    Y es -NH- o -O-;
    Ri es -OH o -CN;
    R2 es un grupo -C(=O) Ra;
    R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
    R4 se selecciona de -CH2O- y -CH2NH-;
    Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido; y
    Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido.
    3. El conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 1, en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000203_0001
    Figure imgf000204_0001
    a de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en las que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno o a (T)g si hubiere alguno o (L);
    preferentemente de fórmula:
    Figure imgf000204_0002
    Figure imgf000205_0001
    Figure imgf000206_0001
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    preferentemente de fórmula:
    Figure imgf000206_0002
    Figure imgf000207_0001
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables.
    4. El conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 1, en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000207_0002
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en la que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L);
    o
    en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000208_0001
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en la que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L);
    o
    en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000208_0002
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en la que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L);
    o
    en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000208_0003
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en la que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L);
    o
    en el que D es un compuesto de fórmula:
    Figure imgf000209_0001
    o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables;
    en la que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, o (AA)w si hubiere alguno, o a (T)g si hubiere alguno o (L).
    5. Un conjugado de fármaco que comprende una fracción de fármaco unida covalentemente al resto del conjugado de fármaco, donde el conjugado de fármaco posee la fórmula [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-]n-Ab en la que:
    D es una fracción de fármaco que posee la siguiente fórmula (IH) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables:
    Figure imgf000209_0002
    en la que:
    la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno, o (L);
    cada Y y Z se selecciona de manera independiente de -NH- y -O-;
    Ri es -OH o -CN;
    R2 es un grupo -C(=O)Ra;
    R3 es hidrógeno o un grupo -ORb;
    Ra se selecciona de hidrógeno, alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, en donde los sustituyentes óptimos son uno o más sustituyentes Rx; y Rb se selecciona de alquilo C1-C12 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C12 sustituido o no sustituido y alquinilo C2-C12 sustituido o no sustituido, en donde los sustituyentes óptimos son uno o más sustituyentes Rx;
    los sustituyentes Rx se seleccionan del grupo que consta de grupos alquilo C1-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, grupos alquenilo C2-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, grupos alquinilo C2-C12 que pueden ser opcionalmente sustituidos con al menos un grupo Ry, átomos de halógeno, grupos oxo, grupos tio, grupos ciano, grupos nitro, ORy, OCORy, OCOORy, CORy, COORy, OCONRyRz, CONRyRz, S(O)Ry, SO2Ry, P(O)(Ry)ORz, NRyRz, NRyCORz, NRyC(=O)NRyRz, NRyC(=NRy)NRyRz, grupos arilo que poseen de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes seleccionados del grupo que consta de Ry, ORy, OCORy, OCOORy, NRyRz, NRyCORz y NRyC(=NRy)NRyRz, grupos aralquilo que comprenden un grupo alquilo que posee de 1 a 12 átomos de carbono substituidos por un grupo arilo opcionalmente sustituido de acuerdo con lo definido anteriormente, grupos aralquiloxi que comprenden un grupo alcoxi que posee de 1 a 12 átomos de carbono substituidos por un grupo arilo opcionalmente sustituido de acuerdo con lo definido anteriormente, y un grupo heterocíclico de 5 a 14 miembros, saturado o insaturado, que posee uno o más anillos y al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, el grupo heterocíclico se encuentra opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Ry, y en donde existen más de un sustituyente opcional en cualquier grupo dado y los sustituyentes opcionales Ry pueden ser iguales o diferentes;
    cada Ry y Rz se selecciona de manera independiente del grupo que consta de hidrógeno, grupos alquilo C1-C12, grupos alquilo C1-C12 que se sustituyen con al menos un átomo de halógeno, grupos aralquilo que comprenden un grupo alquilo C1-C12 que se sustituye con un grupo arilo que posee de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos y grupos heterocicloalquilo que comprenden un grupo alquilo C1-C12 que se sustituye con un grupo heterocíclico de 5 a 14 miembros, saturado o insaturado, que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos;
    X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
    cada AA es de manera independiente una unidad de aminoácido;
    L es un grupo enlazante;
    w es un número entero que oscila de 0 a 12;
    b es un número entero de 0 o 1;
    g es un número entero de 0 o 1;
    Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno; y
    n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] con respecto a la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se encuentra en el intervalo de 1 a 20.
    6. Un conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 5, o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en donde D es una fracción de fármaco seleccionada de las fórmulas (IHa) e (IHb):
    Figure imgf000210_0001
    7. El conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la sal se selecciona de clorhidrato, bromhidrato, yohidrato, sulfato, nitrato, fosfato, acetato, trifluoracetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metansulfonato, p-toluensulfonato, sodio, potasio, calcio, amonio, etilendiamina, etanolamina, N,N-dialquilenetanolamina, trietanolamina y aminoácidos básicos.
    8. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que L es un grupo enlazante seleccionado del grupo que consta de:
    Figure imgf000210_0002
    Figure imgf000211_0001
    en los que:
    las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a un Ab (la línea ondulada hacia la derecha) y a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (X)b si hubiere alguno o a D (la línea ondulada hacia la izquierda); Ri9 se selecciona de -alquileno C1-C12, -carbociclo C3-C8, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C18 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci-Ci2-arileno C6-C18 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-Ci8-alquileno C1-C12 en donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 -(carbociclo C3-C8), -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C12, -heterociclo C5-C14 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 -(carbociclo C5-C14)- donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, nitrógeno o azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo se encuentra opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-C14)-alquileno C1-C12 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, dicho grupo se encuentra opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2V y -CH2-(OCH2CH2)r, donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
    R30 es un grupo - alquileno C1-C6;
    M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C6, -alquileno Ci-C6-(carbociclo C3-C8), -(CH2CH2O)s, -alquileno Ci-C6-(carbociclo C3-C8)-CON(H o alquilo Ci-C6)-alquileno C1-C6, fenileno que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, fenileno-alquileno C1-C6 en donde la fracción fenileno puede ser opcionalmente sustituida por uno o más sustituyentes Rx y -alquileno Ci-C6-CON(H o alquilo Ci-C6)alquileno Ci-Ce ;
    Q se selecciona del grupo que consta de -N(H o alquileno Ci-C6)fenileno y -N(H o alquilo Ci-C6)-(CH2)s;
    r es un número entero que oscila de 1 a 10; y
    s es un número entero que oscila de 1 a 10;
    o
    en donde L es un grupo enlazante seleccionado del grupo que consta de:
    Figure imgf000211_0002
    en los que:
    las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a un Ab (la línea ondulada hacia la derecha) y a (T)g si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno o a (X)b (la línea ondulada hacia la izquierda);
    Ri9 se selecciona de -alquileno C1-C12, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C12 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci-Ci2-arileno C6-C12 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-Ci2-alquileno C1-C12 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -heterociclo C5-C12 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci-Ci2-(heterociclo C5-C12) en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos que comprenden al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o deazufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-Ci2)-alquileno C1-C12 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, estando estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2V- y -CH2-(OCH2CH2)r-, en donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
    R30 es un grupo -alquileno C1-C6;
    M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C6, -alquileno Ci-C6-(carbociclo C3-C8) y fenileno que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx; y
    r es un número entero que oscila de 1-6.
    9. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
    Figure imgf000212_0001
    en las que:
    X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
    cada AA es de manera independiente una unidad de aminoácido;
    w es un número entero que oscila de 0 a 12;
    b es un número entero de 0 o 1;
    g es un número entero de 0 o 1;
    D es una fracción de fármaco;
    Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno;
    n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] en donde L es como se definió en las fórmulas (IV), (V) o (VI) con respecto a la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se encuentra en el intervalo de 1 a 20;
    R19 se selecciona de -alquileno C1-C8, -O-(alquileno C1-C8), -alquileno Ci-C8-arileno C6-C12 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, y -arileno C6-Ci2-alquileno C1-C8 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, donde cada uno de los sustituyentes mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
    R30 es un grupo -alquileno C2-C4; y
    M se selecciona del grupo que consta de -alquileno C1-C3 - y -alquileno Ci-C3-(carbociclo C5-C7)-; o
    seleccionado de las fórmulas (IV), (V) y (VI):
    Figure imgf000213_0001
    X y T son grupos de extensión que pueden ser iguales o diferentes;
    cada AA es de manera independiente una unidad de aminoácido;
    w es un número entero que oscila de 0 a 12;
    b es un número entero de 0 o 1;
    g es un número entero de 0 o 1;
    D es una fracción de fármaco;
    Ab es una fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno;
    n es la relación del grupo [D-(X)b-(AA)w-(T)g-(L)-] en donde L es como se definió en (IV), (V) o (VI) con respecto a la fracción que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y se encuentra en el intervalo de 1 a 20;
    Ri 9 se selecciona de -alquileno C1-C6, fenileno-alquileno C1-C6 en donde el grupo fenileno puede ser opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, en donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos arilo que poseen de 6 a 12 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano, y, preferentemente, R19 es un grupo alquileno C1-C6;
    R30 es un grupo -alquileno C2-C4- ; y
    M es -alquileno Ci-C3-(carbociclo C5-C7)-.
    10. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde (AA)w es de fórmula (II):
    Figure imgf000213_0002
    en la que las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, o a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha); y
    R21 se selecciona, en cada caso, del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, bencilo, p-hidroxibencilo, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, -(CH2)3NH2, -(CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, -(CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NHCONH2, -CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-piridilmetilo-, 3-piridilmetilo-, 4-piridilmetilo-, fenilo, ciclohexilo,
    Figure imgf000214_0001
    y w es un número entero que oscila de 0 a 12;
    o
    en el que (AA)w es de fórmula (II), en la que:
    R21 se selecciona, en cada caso, del grupo que consta de hidrógeno, metilo, isopropilo, sec-butilo, bencilo, indolilmetilo, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)3NHC(=NH)NH y -(CH2)4NHC(=NH)NH2; y
    w es un número entero que oscila de 0 a 6;
    o
    en donde w es 0 o 2, y en donde w es 2, entonces (AA)w es de fórmula (III):
    Figure imgf000214_0002
    en la que:
    las líneas onduladas indican el punto de uniones covalentes a (X)b si hubiere alguno, a la fracción de fármaco (la línea ondulada hacia la izquierda) y a (T)g si hubiere alguno, o al enlazante (la línea ondulada hacia la derecha);
    R22 se selecciona de metilo, bencilo, isopropilo, sec-butilo e indolilmetilo; y
    R23 se selecciona de metilo, -(CH2)4NH2, -(CH2)3NHCONH y -(CH2)3NHC(=NH)NH2.
    11. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que X es un grupo de extensión seleccionado de:
    donde D se encuentra covalentemente unido por medio de un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
    -COO-(alquileno Ci -C6)NH-;
    -COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
    -COO-(alquileno Ci-Ce)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
    -COCH2NH-COCH2-NH-;
    -COCH2NH-;
    -COO-(alquileno Ci-C6)S-;
    -COO-(alquileno Ci-Ce)NHCO(alquileno Ci-C6)S-; y
    donde D se encuentra unido de manera covalente por medio de un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
    -CONH-(alquileno Ci-Cs)NH-;
    -COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
    -CONH-(alquileno Ci-C6)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx)-NH-;
    -COCH2NH-COCH2-NH-;
    -COCH2NH-;
    -CONH-(alquileno Ci-C6)S-;
    -CONH-(alquileno Ci-Ce)NHCO(alquileno Ci-C6)S-; y
    b es 0 o 1, preferentemente 1;
    o
    donde X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
    donde D se encuentra covalentemente unido por medio de un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
    -COO-(alquileno C2-C4)NH-;
    -COO-CH2-fenileno-NH-, en donde dicho grupo fenileno puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano;
    -COO-(alquileno C2-C4)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-;
    -COCH2NH-COCH2-NH-;
    -COO-(alquileno C2-C4)S-;
    -COO-(alquileno C2-C4)NHCO(alquileno Ci-C3)S-; o
    donde D se encuentra covalentemente unido mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
    -CONH-(alquileno C2-C4)NH-;
    -COO-CH2-fenileno-NH-, en donde dicho grupo fenileno puede ser opcionalmente sustituido por de uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano;
    -CONH-(alquileno C2-C4)NH-COO-CH2-(fenileno que puede ser opcionalmente sustituido por de uno a cuatro sustituyentes Rx seleccionados del grupo que consta de grupos alquilo que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, grupos alcoxi que poseen de 1 a 6 átomos de carbono, átomos de halógeno, grupos nitro y grupos ciano)-NH-;
    -COCH2NH-COCH2-NH-;
    -CONH-(alquileno C2-C4)S-;
    -CONH-(alquileno C2-C4)NHCO(alquileno C1-C3)S-; y
    b es 0 o 1, preferentemente 1;
    o
    en donde X es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de:
    donde D se encuentra covalentemente unido por medio de un grupo amina (por ejemplo, donde Z es -NH-):
    -COO-CH2-fenileno-NH--COO(CH2)3NHCOOCH2-fenileno-NH-;
    -COO(CH2)3NH-;
    -COO(CH2)3-S-;
    -COO(CH2)3NHCO(CH2)2S-; o
    donde D se encuentra covalentemente unido mediante un grupo hidroxi (por ejemplo, donde Z es -O-):
    -COO-CH2-fenileno-NH--CONH(CH2)3NHCOOCH2-fenileno-NH-;
    -CONH(CH2)3NH-;
    -CONH(CH2)3-S-;
    -CONH(CH2)3NHCO(CH2)2S-; y
    b es 0 o 1, preferentemente 1.
    12. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -CO-(alquileno Ci -C6)-NH-, -CO-(alquileno Ci-C6)-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-, -COO-(alquileno Ci-C6)-[O-(alquileno C2-C6)]j-NH-; donde j es un número entero de 1 a 25, y g es 0 o 1 o en donde T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -CO-(alquileno C i -C 4)NH-, -C O -(alquileno Ci-C4)-[O-(alquileno C2-C4)]j-NH-, -COO-(alquileno Ci-C4)-[O-(alquileno C2-C4)]j-NH-, donde j es un número entero de 1 a 10; y g es 0 o 1;
    o
    donde T es un grupo de extensión seleccionado del grupo que consta de -CO-(alquileno C i -C4)NH-, -CO-(alquileno C i-C 4)-[O-(alquileno C 2 -C 4XL-NH-, -COO-(alquileno C i-C 4)-[O-(alquileno C 2 -C 4)]j-NH-; donde j es un número entero de 1 a 5; y g es 0 o 1.
    13. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, en donde D es una fracción de fármaco de fórmula (IHa) o fórmula (IHb) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en donde:
    Ri es CN u OH;
    R2 es C(=O)Ra, en donde Ra se selecciona de hidrógeno y alquilo C 1-C 6 sustituido o no sustituido, en donde los sustituyentes óptimos son uno o más sustituyentes Rx;
    R3 es hidrógeno o un grupo -ORb en donde Rb es un grupo alquilo C 1-C 6 sustituido o no sustituido, en donde los sustituyentes óptimos son uno o más sustituyentes Rx,
    Y es -NH- u -O-; y
    Z es -NH- u -O-;
    o
    en donde D es una fracción de fármaco de fórmula (IHa) o de fórmula (IHb) o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en donde:
    R1 es CN u OH;
    R2 es acetilo;
    R3 es hidrógeno o metoxi, con mayor preferencia hidrógeno;
    Y es -NH- u -O-; y
    Z es -NH- u -O-;
    o
    en donde D es una fracción de fármaco de fórmula (IHa) o de fórmula (IHb), o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en donde:
    R 1 es CN;
    R2 es acetilo:
    R3 es hidrógeno;
    Y es -NH- u -O-; y
    Z es -NH-.
    14. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1,2 o 5 a 13, en donde D se selecciona de:
    Figure imgf000216_0001
    y
    Figure imgf000217_0001
    o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en las que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno o a (L);
    o
    en donde D es
    Figure imgf000217_0002
    o una de sus sales, ésteres, solvatos, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, en las que la línea ondulada indica el punto de unión covalente a (X)b si hubiere alguno, a (AA)w si hubiere alguno, a (T)g si hubiere alguno o a (L).
    15. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un péptido de unión a antígeno;
    opcionalmente
    en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un anticuerpo, un anticuerpo de dominio único o un fragmento de unión a antígeno del mismo;
    opcionalmente
    en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un anticuerpo monoclonal, anticuerpo policlonal o anticuerpo biespecífico y en donde el anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo deriva de cualquier especie, preferentemente un ser humano, un ratón o un conejo;
    opcionalmente
    en donde el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno se seleccionan del grupo que consta de un anticuerpo humano, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un fragmento del mismo de unión a antígeno de un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo quimérico, un anticuerpo glicosilado y un fragmento de unión a antígeno glicosilado; opcionalmente
    en donde el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno es un fragmento de unión a antígeno seleccionado del grupo que consta de un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab')2 y un fragmento Fv; opcionalmente
    en donde el anticuerpo o su fragmento de unión a antígeno es un anticuerpo monoclonal que se une inmunoespecíficamente a antígenos de células de cáncer, antígenos virales, antígenos de células que producen anticuerpos autoinmunes asociados a una enfermedad autoinmune, antígenos microbianos, y, preferentemente, un anticuerpo monoclonal que se une inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas; opcionalmente
    en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Coltuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Lifastuzumab, Lorvotuzumab, Milatuzumab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Pinatuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Sofituzumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo;
    opcionalmente
    en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de Abciximab, Alemtuzumab, Anetumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denintuzumab, Denosumab, Depatuxizumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Enfortumab, Glembatumumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Indatuximab, Indusatumab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Ladiratuzumab, Laprituximab, Mirvetuximab, Naratuximab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Polatuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Sacituzumab, Siltuximab, Sirtratumab, Vadastuximab, Vorsetuzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo;
    opcionalmente
    en donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno es un anticuerpo seleccionado del grupo que consta de Abciximab, Alemtuzumab, Atezolizumab, Avelumab, Basiliximab, Bevacizumab, Blinatomumab, Brentuximab, Catumaxomab, Cetuximab, Daclizumab, Daratumumab, Denosumab, Dinutuximab, Durvalumab, Elotuzumab, Gemtuzumab, Ibritumomab, Inotuzumab, Ipilimumab, Labetuzumab, Necitumumab, Nimotuzumab, Nivolumab, Obinutuzumab, Ofatumumab, Olaratumab, Omalizumab, Palivizumab, Panitumumab, Pembrolizumab, Pertuzumab, Ramucirumab, Rovalpituzumab, Siltuximab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, con mayor preferencia Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, preferentemente Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, con mayor preferencia Trastuzumab o un fragmento del mismo de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
    16. Un conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 1, que es un conjugado de fármaco anticuerpo, seleccionado del grupo que consta de:
    Figure imgf000218_0001
    Figure imgf000219_0001
    en donde n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4 o 5 y cada uno de
    Figure imgf000220_0001
    se selecciona independientemente de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD 30, o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo y con mayor preferencia se selecciona de Trastuzumab y anticuerpo anti-CD13 o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, en particular Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte farmacológicamente activa del mismo;
    o
    un conjugado de fármaco, que es un conjugado de fármaco anticuerpo, seleccionado del grupo que consta de:
    Figure imgf000220_0002
    Figure imgf000221_0001
    Figure imgf000222_0001
    en donde n es de 2 a 6, de más preferencia 3, 4 o 5 y cada uno de
    Figure imgf000222_0002
    se selecciona independientemente de Brentuximab, Gemtuzumab, Inozutumab, Rovalpituzumab, Trastuzumab, un anticuerpo anti-CD4, un anticuerpo anti-CD5, un anticuerpo anti-CD13 y un anticuerpo anti-CD30, o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo y con mayor preferencia se selecciona de Trastuzumab y un anticuerpo anti-CD13 o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo, en particular Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte farmacológicamente activa del mismo o un conjugado de fármaco de formula
    Figure imgf000223_0001
    en la que n es de 2 a 6, con mayor preferencia 3, 4, o 5 y
    Figure imgf000223_0002
    es un anticuerpo anti-CD13 o
    un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
    17. Un conjugado de fármaco de acuerdo con la reivindicación 16, en el que la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se selecciona de Trastuzumab y anticuerpo anti-CD13 o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo;
    o
    donde la fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno se selecciona de Trastuzumab o un fragmento de unión a antígeno o una parte inmunológicamente activa del mismo.
    18. Un conjugado de fármaco de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que es un conjugado de fármaco anticuerpo en forma purificada aislada.
    19. Un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li, en donde:
    Li es un enlazante seleccionado del grupo de fórmulas que consta de:
    Figure imgf000223_0003
    en las que cada una de las líneas onduladas indica el punto de unión covalente a (T)g si hubiere alguno, o a (AA)w si hubiere alguno, o a (X)b si hubiere alguno, o a D;
    G se selecciona de halo, -O-mesilo y -O-tosilo;
    J se selecciona de halo, hidroxi, -N-succinimidoxi, -O-(4-nitrofenilo), -O-pentafluorofenilo, -O-tetrafluorofenilo y -O-C(O)-OR20
    R19 se selecciona de -alquileno C1-C12 -, carbociclo -C3-C8, -O-(alquileno C1-C12), -arileno C6-C18 en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -alquileno Ci-Ci2-arileno C6-C18 en donde el grupo arileno se halla en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, -arileno C6-C18 -alquileno C1-C12 en donde el grupo arileno se encuentra en uno o más anillos que pueden ser opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx, alquileno Ci-Ci2-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C12, -heterociclo C5-C14 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -alquileno C1-C12 -(heterociclo C5-C14) en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(heterociclo C5-Ci4)-alquileno C1-C12 en donde dicho grupo heterociclo puede ser un grupo saturado o insaturado que posee uno o más anillos y comprende al menos un átomo de oxígeno, de nitrógeno o de azufre en dichos uno o más anillos, estando dicho grupo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes Rx, -(OCH2CH2) y-CH2-(OCH2CH2)r, en donde cada uno de los sustituyentes alquileno mencionados anteriormente, solo o unido a otra fracción en la cadena de carbono, puede ser opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes Rx;
    R20 es un alquilo C1-C12 o un grupo arilo que posee de 6 a 18 átomos de carbono en uno o más anillos aromáticos, estando dichos grupos arilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes Rx;
    r es un número entero que oscila de 1-10;
    b es un número entero de 0 o 1;
    g es un número entero de 0 o 1;
    w es un número entero que oscila de 0 a 12;
    cada uno de D, Rx, X, T y AA es como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18; opcionalmente
    en donde el compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li se selecciona de:
    Figure imgf000224_0001
    Figure imgf000225_0001
    Figure imgf000226_0001
    20. Un compuesto de fórmula D-(X)b-(AA)w-(T)g-Li en el que cada uno de D, X, AA, T, Li, b, g y w es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.
    21. Un conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 o un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 20, en donde b+g+w no es 0;
    o
    en donde b+w no es 0;
    o
    en donde cuando w no es 0, entonces b es 1.
    22. Uso de una fracción de fármaco de acuerdo con lo descripto en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, como carga útil en un conjugado de fármaco-anticuerpo.
    23. Uso de una fracción de fármaco de acuerdo con lo descripto en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la preparación de un conjugado de fármaco-anticuerpo.
    24. Un conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, para su uso como un medicamento.
    25. Un conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, para su uso en el tratamiento del cáncer y, más preferentemente un cáncer seleccionado de cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma de páncreas, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y de ovarios.
    26. Una composición farmacéutica que comprende un conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
    27. Un kit que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
    28. El kit de acuerdo con la reivindicación 27 para usar en el tratamiento de cáncer y, con mayor preferencia, un cáncer seleccionado de cáncer pulmonar, cáncer colorrectal, cáncer de mama, carcinoma pancreático, cáncer de riñón, leucemia, mieloma múltiple, linfoma, cáncer gástrico y ovárico.
    29. El conjugado de fármaco de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que n se encuentra en el intervalo de 1-12, 1-8, 3-8, 3-6, 3-5, 1,2, 3, 4, 5 o 6; preferentemente 3, 4 o 5 o con mayor preferencia 4. 30. Un proceso para la preparación de un conjugado de fármaco-anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 que comprende conjugar una fracción Ab que comprende al menos un sitio de unión a antígeno y un fármaco D, Ab y D son como se definieron en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18;
    opcionalmente en donde la preparación de un conjugado de fármaco-anticuerpo de fórmula (G) o (G'):
    Figure imgf000227_0001
    (i) hacer reaccionar un fármaco D-H de fórmula (IH)-H:
    Figure imgf000228_0001
    en la que los sustituyentes en las definiciones de (IH)-H son como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, con un compuesto de fórmula (D’) o (E):
    Figure imgf000228_0002
    (ii) reducción parcial de uno o más enlaces disulfuro en el anticuerpo que se ha de conjugar para proporcionar un anticuerpo reducido Ab-SH que posee grupos tiol libres:
    Figure imgf000229_0001
    y
    (iii) reacción del anticuerpo Ab-SH parcialmente reducido que posee grupos tiol libres con el compuesto de fórmulas (F) o (F’) producido en el paso (i) para proporcionar el conjugado de fármaco-anticuerpo deseado de fórmulas (G) o (G’), respectivamente:
    Figure imgf000229_0002
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20190254A1 (ar) * 2017-04-27 2019-10-27 Pharma Mar Sa مركبات مضادة للأورام
TW202144369A (zh) * 2020-04-26 2021-12-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 海鞘素類衍生物及其製備方法與醫藥用途
IL308389A (en) * 2021-05-19 2024-01-01 Pharma Mar Sa Dosing regimens for acubactadine
KR102625740B1 (ko) * 2021-07-15 2024-01-17 주식회사 새한비엠 폐수지 재료 및 미네랄 바인더를 이용한 단열차음재의 제조 방법 및 그 단열차음재

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
AU668423B2 (en) 1992-08-17 1996-05-02 Genentech Inc. Bispecific immunoadhesins
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
MY130271A (en) 1999-05-14 2007-06-29 Pharma Mar Sa Hemisynthetic method and new compounds
GB0119243D0 (en) 2001-08-07 2001-10-03 Pharma Mar Sa Antitumoral analogs of ET-743
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
JP4993645B2 (ja) 2004-12-01 2012-08-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体薬剤結合体および方法
BRPI0615049B1 (pt) 2005-08-24 2023-04-25 Immunogen, Inc Processo para a preparação de um conjugado de anticorpo- maitansinóide
JOP20190254A1 (ar) * 2017-04-27 2019-10-27 Pharma Mar Sa مركبات مضادة للأورام

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