ES2933799T3 - Extracto de lenteja con actividad reductora del colesterol y prebiótica - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un extracto de lenteja con sorprendentes efectos hipocolesterolemiantes y prebióticos que lo hacen particularmente útil en aplicaciones terapéuticas y como nutracéutico. Dicho extracto de lenteja se caracteriza por la presencia de saponina de soya I en el rango de 50 a 300 mg kg-1 y saponina de soya βg en el rango de 0.5 a 5 mg kg-1. El proceso para la producción de dicho extracto y sus usos terapéuticos y nutracéuticos también están dentro del alcance de la presente invención. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Extracto de lenteja con actividad reductora del colesterol y prebiótica

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de los extractos vegetales, en particular de los extractos vegetales con actividad nutracéutica.

Más en particular, la presente invención se refiere a un extracto de lenteja con efectos reductores del colesterol y prebióticos.

Antecedente de la invención

Las legumbres son las semillas comestibles de diversos cultivos leguminosos, como las lentejas (Lens culinaris L.), las judías (Phaseolus vulgaris L.), los guisantes (Pisum sativum L.), los garbanzos (Cicer arietinum L.), los altramuces (Lupinus spp.), las habas (Vicia faba o Faba vulgaris), la soja (Glycine max) y otros. Cultivada desde hace miles de años (Messina M. J. Legumes and soybeans: overview of their nutritional profiles and health effects. Am. J. Clin. Nutr.

1997, 70, 439-450), las legumbres han desempeñado papeles importantes en las dietas tradicionales de muchas partes del mundo. Son ricas en proteínas de origen vegetal y en hidratos de carbono complejos, que están presentes principalmente en forma de fibra alimentaria. Contienen un bajo porcentaje de grasas predominantemente saturadas y son una buena fuente de diversas moléculas altamente bioactivas y micronutrientes.

En términos de características nutricionales y funcionales, las lentejas (Lens culinaris L.) son una de las legumbres más interesantes de todas. La FAO estima la producción mundial de lentejas (en 2008) en alrededor de 2,83 millones de toneladas, que se cultivan principalmente en Canadá (36,9 %) e India (28,7 %), seguidos de Nepal, China y Turquía. En cuanto a los macronutrientes, las lentejas son una buena fuente de proteínas (25,8 %) compuestas por aminoácidos esenciales y no esenciales, y ciertas proteínas biológicamente activas para el organismo humano; además, una fracción muy elevada (89 %) de todo el nitrógeno disponible en las lentejas está contenido precisamente en la fracción proteica de las mismas. Los hidratos de carbono totales son el principal componente de las lentejas (60,1 %), con el almidón ocupando una posición relevante, seguido de las fibras dietarias totales (30,5 %), de las cuales las fibras dietarias insolubles representan aproximadamente el 93-99,7 % del total (Faris, M.A.E.; Takruri, H.R.; Issa, A.Y.; Role of lentils (Lens Culinaris L.) in human health and nutrition: a review, Mediterr. J. Nutr. Metab. 2013, 6, 3-16). Las lentejas tienen un bajo contenido en grasa (1,1 %) y, por tanto, un bajo valor energético; también cabe destacar que entre todos los ácidos grasos predominan los ácidos grasos poliinsaturados (AGPI, 58,8 %), seguidos de los ácidos grasos monoinsaturados (AGMI, 23,7 %) y los ácidos grasos saturados (AGS, 16,7 %). En cuanto a los micronutrientes, están presentes altos niveles de Fe, Mg, P, Ca y S, con una baja concentración de Na y una relación K:Na de alrededor de 30:1-90:1. Las lentejas contienen también vitaminas como los folatos, la tiamina (vitamina B1) y la riboflavina (vitamina B2), además de niacina, ácido pantoténico y piridoxina. También se ha demostrado que el alfa (vitamina E), el beta y el gamma tocoferol están presentes en una concentración significativa (alrededor de 6 mg/100 g) en las lentejas.

Las lentejas son también una fuente importante de "fitoquímicos" y moléculas bioactivas, como polifenoles (flavonoles, taninos y ácidos fenólicos), fitatos, fitoesteroles y péptidos bioactivos, así como inhibidores de tripsina y defensina, isoflavonas y saponina. Un estudio de Xu et al. publicado en 2007 informa de que las lentejas presentan una mayor concentración de polifenoles y una capacidad antioxidante in vitro más eficaz que las demás legumbres analizadas: guisantes, judías y soja amarilla (B.J. Xu, S.H. Yuan, S.K.C. Chang, Comparative analyses of phenolic composition, antioxidant capacity, and color of cool season legumes and other selected food legumes, Journal of Food Science, 2007, 72, 167-177).

Se conocen extractos de lentejas para diversas aplicaciones terapéuticas y de salud.

El documento JP2008184440, por ejemplo, da a conocer un extracto de lenteja que se aplica sobre la piel para mitigar y remediar las quemaduras solares.

El documento UA63766 divulga un extracto de lenteja con actividad analgésica hepatoprotectora y un efecto regenerador del páncreas.

El documento US5762936 divulga un extracto obtenido de las cáscaras de las semillas de lenteja enriquecido con polifenoles caracterizado por su actividad antioxidante contra los radicales libres. El extracto puede utilizarse como suplemento antioxidante para prevenir o mejorar la inflamación crónica y las patologías causadas por los radicales libres.

Un conjunto creciente de evidencias científicas informa de que las legumbres en general y las lentejas en particular poseen efectos cardioprotectores, hipolipidémicos y de reducción de la homocisteína. Más específicamente, los estudios epidemiológicos han demostrado que el consumo de legumbres y lentejas está inversamente relacionado con el riesgo de contraer enfermedades cardiovasculares, diabetes de tipo 2 y obesidad, menores niveles de colesterol LDL y mayores niveles de colesterol HDL.

Se ha demostrado que la hipercolesterolemia es uno de los principales factores de riesgo que lideran, asociados con eventos cardiovasculares graves como el infarto agudo de miocardio. Además, se ha observado una estrecha relación entre estos trastornos y el aumento anormal de los lípidos, especialmente los niveles elevados de colesterol plasmático y la consiguiente hipertensión arterial.

Como se ha mencionado anteriormente, las propiedades beneficiosas de las lentejas se han atribuido a la presencia de moléculas bioactivas, como las saponinas, por ejemplo. Las lentejas son una excelente fuente dietaria de saponinas, los glucósidos triterpenoides o esteroideos estructurados presentes de forma natural en las plantas y considerados componentes de la fibra dietaria. Las saponinas de las lentejas, comúnmente conocidas como saponinas de soja porque también están presentes en la soja, han demostrado poseer muchas propiedades saludables, entre las que destacan la reducción de los niveles de colesterol en plasma, efectos anticancerígenos y antihepatotóxicos, y efectos antirreplicativos contra el virus del VIH. Las pruebas científicas demuestran que las saponinas dietarias son capaces de reducir los niveles de colesterol plasmático mediante un mecanismo que inhibe la absorción del colesterol exógeno por el intestino delgado o a través de un mecanismo indirecto de inhibición de la absorción de ácidos biliares. Las saponinas de soja de las lentejas son glucósidos triterpenoides que se dividen estructuralmente en dos grupos, uno conocido como A (bidesmosídico), con dos sitios potenciales de glicosilación, y el otro conocido como B (monodesmosídico), con un solo sitio de glicosilación. Las lentejas contienen principalmente saponina I de soja (saponina beta b de soja) y saponina ¡5g de soja (también denominada saponina VI de soja), ambas del grupo de la saponina B de soja. La saponina ¡5g de la soja contiene el grupo DDMP (5-hidroxi-6-metil-2H-pirano-4(3H)-ona) en la posición C-22 y puede considerarse el precursor natural de la saponina de soja I (Sagratini G., Zuo Y, Caprioli G., Cristalli G., Giardina D., Maggi F, Molin L., Ricciutelli M., Traldi P., Vittori S. Quantification of Soyasaponins I and pg in Italian Lentil Seeds by Solid Phase Extraction (SPE) and High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (HPLC-^m S) J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 11226-11233). En los trabajos de Raquel G. Ruiz Et Al ("Effect of Soaking and Cooking on the Saponin Content and Composition of Chickpeas (Cicer arietinum) and Lentils (Lens culinaris)", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY. vol. 44. no.6. 1 de enero de 1996, páginas 1526-1530y "A preliminary study on the effect of germination on saponin content and composition of lentils and chickpeas", ZEITSCHRIFT FUER LEBENSMITTELUNTERSUCHUNG UNO - FORSCHUNG, vol. 203. no.4. 1 de julio de 1996 (1996-07-01), páginas 366-369) se investiga el contenido de saponinas en las lentejas; las saponinas se extraen de las lentejas utilizando etanol acuoso que contiene ácido etilendiaminotetraacético (EDTA).

Con respecto a la actividad reductora del colesterol de las saponinas, algunos estudios, como la revisión de Oakenfull et al. (Oakenfull, D.; Sidhu, G.S. Could saponins be a useful treatment for hypocholesterolaemia? Europ. J. Clin. Nutr., 1990, 44, 79-88), informan de los resultados de un estudio realizado con 174 personas a las que se les administró una dieta rica en saponinas en donde se observaron reducciones convincentes (en torno al 20 %) del colesterol plasmático en algunos casos. Esta revisión también mencionó un estudio in vivo sobre el uso de extractos concentrados de saponina en el que se informó de reducciones sustanciales del colesterol plasmático y hepático. Los autores concluyen que existe evidencia sustancial de que las saponinas dietarias pueden reducir los niveles de colesterol. Lee et al. hacen referencia a un estudio in vivo en hámsters sirios dorados alimentados con una dieta rica en saponina de soja en el que se observó una reducción del colesterol total y LDL en comparación con otros alimentados con una dieta rica en caseína mediante un mecanismo que provoca una mayor expulsión de ácidos biliares y esteroles neutros (Lee, S.O.; Simons, A.L.; Murphy, P.A.; Hendrich, S. Soyasaponins lowered plasma cholesterol and increased fecal bile acids in female golden Syrian hamsters. Exp. Bio. Med. 2005, 230, 472-478).

Sin embargo, no se ha demostrado ninguna actividad hipocolesterolemiante de un extracto de lenteja, cuando se administra a un sujeto.

Los prebióticos se definen como "suplementos dietarios o ingredientes con capacidad para estimular el crecimiento y/o la actividad de una o un número limitado de especies de microbios presentes en la microbiota intestinal en beneficio de la salud del huésped" (Roberfroid, M.; Gibson, G.R.; Hoyles, L.; McCartney, A.L.; Rastall, R.; Rowland, I.; Wolvers, D.; Watzl, B.; Szajewska, H.; Stahl, B.; Guarner, F.; Respondek, F.; Whelan, K.; Coxam, V.; Davicco, M.J.; Léotoing, L.; Wittrant, Y.; Delzenne, N.M.; Cani, P.D.; Neyrinck, A.M.; Meheust, A. Prebiotic effects: metabolic and health benefits. Br. J Nutr. 2010, 104 Suppl 2:S1-63). Los prebióticos más conocidos son los galactooligosacáridos (GOS) y los fructooligosacáridos (FOS) no digeribles, como la inulina y la oligofructosa. Se ha demostrado que varias fibras dietarias, incluidos los polisacáridos no amiláceos, la celulosa, los dextranos, las quitinas, las pectinas, los betaglucanos y las ceras, tienen efectos beneficiosos similares a los de la inulina (Napolitano, A.; Costabile, A.; Martin-Pelaez, S.; Vitaglione, P. et al., Potential prebiotic activity of oligosaccharides obtained by enzymatic conversion of durum wheat insoluble dietary fibre into soluble dietary fibre. Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2009, 19, 283-290).

Las lentejas son ricas en FOS (fructo-oligosacáridos), entre ellos la kestosa y la nistosa, en GOS (galacto­ oligosacáridos), entre ellos la estaquiosa y la verbascosa, y en alcoholes de azúcar, como el manitol resistente al almidón y el sorbitol. Un estudio reciente de Johnson et al. informa de que las lentejas son capaces de suministrar 13 g de carbohidratos prebióticos por cada 100 g de producto, lo que presenta una actividad fisiológica de esta legumbre que aún no se ha explorado (Casey, R.J.; Thavarajah, D.; Combs, G.F.; Thavarajah, P. Lentil (Lens culinaris L.): A prebiotic-rich whole food legume. Food Res. Int. 2013, 51, 107-113).

Sin embargo, no existe en el estado de la técnica ninguna evidencia sobre el efecto prebiótico de los extractos de lenteja y su actividad in vivo , que aún se desconoce.

Se sabe que el uso de prebióticos tiene efectos positivos en la salud y el bienestar del organismo.

El documento WO2012108830, por ejemplo, divulga combinaciones simbióticas para la reconstitución de la microbiota intestinal que comprenden cepas bacterianas y prebióticos, en donde al menos una sustancia prebiótica es un almidón. El documento WO2009152089 describe una composición prebiótica para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales. La composición comprende material hemicelulósico extraído de una fuente lignocelulósica, como un prebiótico.

Gracias a su efecto de reequilibrio de la flora intestinal, los prebióticos son útiles para prevenir y/o tratar los trastornos gastrointestinales asociados a una alteración de la flora intestinal.

En efecto, los prebióticos son utilizados por la población microbiana intestinal para producir ácidos grasos de cadena corta que pueden conducir a la reducción de la incidencia de enfermedades gastrointestinales y otros efectos y, en particular, a una mejora de los perfiles lipídicos.

Además, los prebióticos también han ganado una atención creciente en los estudios sobre el colesterol debido a su papel en la promoción del crecimiento de los "microbios beneficiosos", los llamados probióticos que tienen un efecto hipocolesterolemiante bien documentado. Algunos estudios, realizados utilizando inulina como prebiótico, demostraron el efecto positivo en la reducción de la concentración plasmática de colesterol total y triacilglicerol en humanos (Brighenti, F.; Casiraghi, M.C.; Canzi, E.; Ferrari, A. Effect of Consumption of a ready-to-eat breakfast cereal containing inulin on the intestinal milieu and blood lipids in healthy male volunteers. Eur. J. Clin. Nutr. 1999, 53, 726­ 733).

Los prebióticos representan, pues, un ingrediente alimentario muy interesante para el desarrollo de suplementos dietarios y alimentos funcionales.

En vista de lo anterior, los compuestos capaces de ejercer efectos prebióticos son muy requeridos y deseables. En particular, la estimulación de algunas especies de microbios, como las Bifidobacterias, es particularmente deseable por los efectos beneficiosos que estas especies han demostrado ejercer en el organismo.

Objeto de la invención

Los inventores de la presente invención han encontrado ahora un extracto de lenteja que se caracteriza sorprendentemente, al mismo tiempo, por un efecto significativo de reducción del colesterol y una elevada actividad prebiótica.

Estas características hacen que este extracto esté especialmente indicado tanto para uso terapéutico como nutracéutico gracias a su actividad beneficiosa tanto sobre la microbiota intestinal como sobre el nivel de colesterol. Además, se ha encontrado que la administración del extracto de lenteja de acuerdo con la invención proporciona un efecto sinérgico de las actividades prebiótica e hipocolesterolemiante que da lugar a una potente disminución del nivel de colesterol.

Un extracto de lenteja (Lens culinaris L.) caracterizado por la presencia de saponina I de soja en el intervalo comprendido entre 50 y 300 mg kg_1 y de saponina pg de soja en el intervalo comprendido entre 0,5 y 5 mg kg_1 es obtenido mediante un procedimiento caracterizado por las etapas siguientes:

a) Adición de una mezcla 70:30 de agua y etanol a una muestra de lenteja (Lens culinaris L.) triturada, con la condición de que dicha mezcla no contenga ácido etilendiaminotetraacético (EDTA);

b) agitación de la mezcla obtenida;

c) filtración de la mezcla obtenida;

d) concentración de la mezcla obtenida hasta la completa evaporación del etanol.

Opcionalmente, el proceso anterior comprende una etapa de concentración adicional y la posterior liofilización de la mezcla obtenida.

El extracto liofilizado obtenido con el proceso anterior es también un objeto de la presente invención.

El extracto de lenteja de la invención tiene las ventajas, cuando se consume, de ejercer el efecto de reducir el nivel de colesterol plasmático total con una acción prebiótica simultánea, proporcionando así al organismo numerosos beneficios para la salud, por ejemplo, la salud intestinal. Además, la flora beneficiosa estimulada por el efecto prebiótico del extracto (en particular, los lactobacilos y las Bifidobacterias) contribuye al efecto reductor del nivel de colesterol, proporcionando así un efecto sinérgico en la reducción del colesterol.

También se divulga el uso del extracto, de acuerdo con la invención, en el tratamiento o en la prevención de enfermedades y condiciones en las que es deseable una actividad reductora del colesterol.

También es objeto de la presente invención el extracto de acuerdo con la invención para su uso como prebiótico, en particular como estimulante de Bifidobacterias y/o lactobacilos, para la conservación y/o restauración de la flora bacteriana intestinal.

Un nutracéutico, un alimento funcional o un suplemento dietario que comprende el extracto o el extracto liofilizado de acuerdo con la invención son también objetos de la presente invención.

Una composición farmacéutica que comprende el extracto o el extracto liofilizado de acuerdo con la invención es otro objeto de la presente invención.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

En el contexto de la presente invención, el término "extracto" significa una preparación, generalmente un concentrado, obtenido a partir de material vegetal.

En el contexto de la presente invención, el término "liofilizado" o "extracto liofilizado" significa una preparación obtenida a través de un proceso de liofilización mediante el cual se elimina el agua contenida en la preparación.

En el contexto de la presente invención, el término "nutracéutico" significa una preparación que se supone que tiene una función beneficiosa para la salud humana.

En el contexto de la presente invención, el término "alimento funcional" o "alimento farmacéutico" o "alicamento", significa un alimento que contiene moléculas con propiedades beneficiosas y protectoras para el organismo que ayudan a prevenir trastornos y desequilibrios de la salud cuando se incluyen en una dieta equilibrada.

En el contexto de la presente invención, el término "suplemento dietario" significa un producto que se consume además de una dieta regular y que está formulado para favorecer la asimilación de determinados nutrientes o para complementar una dieta incorrecta, desequilibrada o insuficiente.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Recuento total de Bifidobacterias durante toda la duración de la fermentación (después de 24, 48, 72 y 96 horas de fermentación semicontinua) del Grupo de Control, el Grupo de Control Positivo de Inulina y el Grupo de Extracto de Lenteja.

Figura 2. Nivel de ácidos biliares excretados por las heces analizados por HPLC-MS.

El extracto de lenteja de la invención se caracteriza por la presencia de saponina I de soja en el intervalo de concentración comprendido entre 50 y 300 mg kg-1 y saponina pg de soja en el intervalo de concentración comprendido entre 0,5 y 5 mg kg-1.

Preferentemente, la saponina de soja I está presente en el extracto en un intervalo de concentración comprendido entre 80 y 200 mg kg-1, más preferentemente entre 100 y 150 mg kg-1. Preferentemente, la saponina pg de soja está presente en el extracto en un intervalo de concentración comprendido entre 0,5 y 2 mg kg-1, más preferentemente entre 0,8 y 1 mg kg-1.

Se divulga un extracto que comprende saponina de soja I en una concentración de aproximadamente 103 mg kg-1 y saponina pg de soja en una concentración de aproximadamente 0,96 mg kg-1.

El extracto objeto de la presente invención se obtiene a partir de semillas de lenteja. En particular, dichas semillas son de la especie Lens culinaris L.

Las lentejas utilizadas pueden ser de cualquier subespecie, en particular pueden ser de las subespecies Lens culinaris subsp. culinaris (lentejas de cultivo), Lens culinaris subsp. Odemensis, Lens culinaris subsp. Orientalis, Lens culinaris subsp. Tomentosus. Preferentemente, son lentejas de la subespecie Lens culinaris subsp. culinaris (lentejas de cultivo).

Las lentejas pueden ser de cualquier variedad, como, por ejemplo, la lenteja Castelluccio di Norcia (IGP, DOP), la lenteja Colfiorito, la lenteja Santo Stefano di Sessanio y la lenteja Onano. Las variedades preferidas son la lenteja Colfiorito y la lenteja Castelluccio di Norcia.

Después de moler finamente las semillas de lentejas, se añade una mezcla de agua y etanol (etapa a). Preferentemente, el agua y el etanol están presentes en dicha mezcla en una proporción agua:etanol comprendida entre 20:80 y 80:20. Por ejemplo, dicha relación agua:etanol puede ser 20:80, 30:70, 50:50, 70:30 u 80:20. Preferentemente, dicha relación agua:etanol es de 30:70.

A continuación, se agita la mezcla (etapa b), por ejemplo, durante un período comprendido entre 1 y 6 horas, preferentemente durante 3 horas.

A continuación, la mezcla se filtra (etapa c), preferentemente al vacío.

La solución así obtenida se concentra hasta la completa evaporación del etanol. La evaporación se realiza preferentemente en un evaporador rotativo, preferentemente a una temperatura inferior a 30 °C.

Se obtiene así un extracto objeto de la presente invención.

Opcionalmente, el extracto así obtenido puede concentrarse aún más y luego liofilizarse hasta obtener un polvo utilizando métodos conocidos en el campo.

Dicho extracto liofilizado es también un objeto de la presente invención.

Dicho extracto liofilizado puede presentarse, por ejemplo, en forma de píldora o comprimido y mezclarse adecuadamente con excipientes adecuados.

El extracto o el extracto liofilizado de acuerdo con la invención puede mezclarse con compuestos o extractos con actividad reductora del colesterol conocida, como por ejemplo, fitoestanoles, fitoesteroles, arroz rojo fermentado, berberina, silimarina, y/o compuestos o extractos con actividad prebiótica, como inulina, fructooligosacáridos (FOS), pectinas y sustancias similares.

En una realización preferida de la invención, las lentejas finamente molidas de la variedad Colfiorito son sometidas a la extracción mediante agitación magnética durante 3 horas, junto con una mezcla de agua y etanol (aproximadamente 30:70); la mezcla se filtra entonces al vacío y se somete a evaporación hasta que el etanol se evapora completamente. El extracto de lenteja descrito anteriormente ofrece las ventajas, al ser consumido, de ejercer el efecto de disminución del nivel de colesterol plasmático total con una acción prebiótica simultánea, proporcionando así numerosos beneficios al organismo. También se ha encontrado que cuando se administra dicho extracto aumenta el nivel de la flora microbiana intestinal beneficiosa, por ejemplo los probióticos, capaces de ejercer efectos hipocolesterolemiantes. Por lo tanto, dicho extracto suministra un potente efecto en la reducción del nivel de colesterol.

En virtud de estas características, el extracto de acuerdo con la invención puede utilizarse en todos los casos en los que se desee una actividad reductora del colesterol. En particular, puede utilizarse para el tratamiento de un sujeto que sufre un trastorno asociado a la hipercolesterolemia.

Por ejemplo, el extracto puede utilizarse en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, como el infarto de miocardio, la diabetes de tipo 2, la obesidad, la hipertensión arterial y trastornos similares.

Además, puede utilizarse en todas las condiciones en las que se desee mantener el nivel de colesterol. Por ejemplo, puede utilizarse en condiciones en las que un sujeto está en riesgo de desarrollar una patología relacionada con niveles altos de colesterol. Por ejemplo, puede utilizarse en un sujeto predispuesto a desarrollar hipercolesterolemia. Además, puede utilizarse para prevenir el desarrollo de enfermedades relacionadas con los niveles altos de colesterol. Para el mantenimiento del nivel de colesterol se pretende mantener el nivel de colesterol dentro de los límites considerados aceptables para la salud de un sujeto. Un experto en la técnica, por ejemplo un médico, conoce los límites que se consideran aceptables en base a los conocimientos generales en la materia y de las condiciones del sujeto.

Utilizando sus conocimientos generales en el campo, un experto la técnica es capaz de evaluar las cantidades, procedimientos y tiempos más apropiados requeridos para el tratamiento sobre la base de las condiciones específicas del paciente.

Gracias a sus propiedades prebióticas, el extracto de acuerdo con la invención puede administrarse también como prebiótico, en particular para favorecer los microbios intestinales beneficiosos y sus actividades benéficas.

Los prebióticos son compuestos que promueven el crecimiento y la actividad de especies de bacterias beneficiosas que desempeñan funciones importantes en el mantenimiento de la salud del huésped. Estas especies son, en particular, las Bifidobacterias y los lactobacilos.

El extracto de acuerdo con la presente invención puede, por tanto, utilizarse en condiciones en donde se recomienda el uso de prebióticos. Estas condiciones son las que pueden beneficiarse de la administración de prebióticos.

En la técnica se conocen muchas condiciones y enfermedades que pueden beneficiarse de la administración de prebióticos. En particular, se trata de condiciones y enfermedades en donde se sabe que la estimulación del crecimiento y/o la actividad de algunas especies microbianas presentes en la microbiota intestinal es beneficiosa.

Más en particular, el extracto descrito en el presente documento puede utilizarse ventajosamente para la preservación y/o restauración de la flora bacteriana intestinal.

La alteración del equilibrio de la flora bacteriana intestinal se ha asociado a la manifestación y presencia de diversas patologías de origen intestinal y de otro tipo. En particular, la disbiosis intestinal, es decir, un desequilibrio o una mala adaptación microbiana que se produce en el intestino, como una microbiota deteriorada, está asociada a la patogénesis tanto de los trastornos intestinales (enfermedad inflamatoria intestinal, síndrome del intestino irritable (SII) y enfermedad celíaca) como de los extraintestinales (alergia, asma, síndrome metabólico, enfermedad cardiovascular y obesidad). Se sabe que la ingesta de prebióticos puede modular significativamente la microbiota colónica, aumentando el número de bacterias específicas y cambiando así positivamente la composición de la microbiota.

Por esta razón, gracias a su actividad prebiótica, el extracto de acuerdo con la invención puede ser utilizado válidamente en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades y trastornos gastrointestinales en donde está presente una alteración de la flora bacteriana intestinal. Se entiende por la enfermedad o el trastorno gastrointestinal en donde está presente una alteración de la flora bacteriana intestinal, una condición en donde está presente un desequilibrio microbiano en el intestino. En particular, se entiende una condición de disbiosis intestinal. Dichos trastornos pueden incluir, por ejemplo, el síndrome del intestino irritable, las enfermedades inflamatorias crónicas del intestino, la diarrea, las formas dispépticas, el meteorismo, la diverticulosis, el síndrome de sobrecrecimiento bacteriano en el intestino delgado, la alteración del sistema inmunitario y las alergias alimentarias.

Además, debido a sus propiedades nutricionales, se recomienda el uso de prebióticos para las personas que padecen diabetes y/o síndrome metabólico, obesidad y alergias alimentarias (Casey R. Johnson, Dil Thavarajah, Gerald F. Combs Jr., Pushparajah Thavarajah, Lentil (Lens culinaris L.): A prebiotic-rich whole food legume, Food Research International, 2013, 51, 107-113).

En particular, el extracto de acuerdo con la invención tiene propiedades bifidogénicas, es decir, es capaz de estimular el crecimiento de las Bifidobacterias. Las Bifidobacterias son bacterias anaerobias, entre los principales componentes de la microflora intestinal sana. Las Bifidobacterias ejercen una serie de efectos beneficiosos para la salud del organismo, como la regulación de la homeostasis de los microbios intestinales, la inhibición de patógenos y bacterias nocivas que colonizan o infectan la mucosa intestinal, la modulación de la respuesta del sistema inmunitario sistémico y local, la represión de la actividad enzimática procarcinogénica entre la microbiota, la producción de vitaminas y la bioconversión de una serie de compuestos alimentarios en moléculas bioactivas.

Por estas razones, el uso del extracto de acuerdo con la invención como prebiótico es particularmente ventajoso, en particular gracias a su efecto estimulante sobre las Bifidobacterias.

El experto en el campo es capaz de evaluar y elegir los métodos de tratamiento apropiados que deben adoptarse para el uso del extracto de acuerdo con la invención como prebiótico, particularmente para los trastornos mencionados anteriormente, según lo requieran las condiciones del paciente.

El extracto también puede presentarse en forma de nutracéutico, alimento funcional o suplemento dietario.

El extracto puede formularse de cualquier manera adecuada sobre la base de los conocimientos de que disponga un experto en el campo. En particular, se prefieren las formulaciones para uso oral, como en forma de píldoras, comprimidos, granulado, polvo, jarabe, gelatina, suspensión y emulsión. Cualquier otra forma también está dentro del alcance de la invención.

El extracto de acuerdo con la invención también puede formularse como una composición farmacéutica o como un alimento con funciones médicas utilizando los conocimientos generales en el campo. Dicha composición farmacéutica también puede comprender al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable como, por ejemplo, coadyuvantes de formulación particularmente útiles, por ejemplo, agentes solubilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión y agentes emulsionantes.

El extracto de acuerdo con la invención también puede utilizarse en combinación con otros compuestos, en particular con suplementos dietarios y/o probióticos. Más específicamente, el uso de prebióticos junto con probióticos es especialmente ventajoso, ya que ambos tienen actividades hipocolesterolemiantes. Por "probióticos" se entiende microorganismos vivos que, administrados en cantidades adecuadas, confieren un beneficio para la salud del huésped. Los probióticos son conocidos en la técnica.

La invención se ilustra adicionalmente con los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo 1

Cuantificación de la saponina de soja en muestras de lentejas

En nuestros laboratorios se han desarrollado métodos altamente específicos para la cuantificación de las concentraciones de las moléculas que, como se reporta en la literatura, parecen ser los agentes principalmente responsables del efecto reductor del colesterol ejercido por las lentejas (Sagratini, G.; Caprioli, G.; Maggi, F.; Font, F.; Giardina, D.; Mañes, G.; Meca, G.; Ricciutelli, M.; Sirocchi, V.; Torregiani, E.; Vittori, E. Determination of Soyasaponins I and pg in Raw and Cooked Legumes by Solid Phase Extraction (SPE) Coupled to Liquid Chromatography (LC)-Mass Spectrometry (MS) and Assessment of Their Bioaccessibility by an in Vitro Digestion Model, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61, 1702-1709; Pilar Vila Donat, Giovanni Caprioli, Paolo Conti, Filippo Maggi, Massimo Ricciutelli Elisabetta Torregiani, Sauro Vittori, Gianni Sagratini, Rapid Quantification of Soyasaponins I and pg in Italian Lentils by High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)-Tandem Mass Spectrometry (Ms /MS), Food Analytical Methods, 2014, 7, 1024-1031).

Estas moléculas son las saponinas I y pg de soja mencionadas y descritas anteriormente.

1 g de semillas de lentejas (lentejas Colfiorito) fueron finamente molidas y luego sometidas a extracción por agitación magnética durante 3 horas con una mezcla de 10 ml de agua y etanol (30:70); la mezcla fue luego filtrada al vacío e inyectada directamente en HPLC-MS/MS (triple cuadrupolo) para determinar la concentración de saponinas de soja en las lentejas estudiadas. La separación cromatográfica de las saponinas I y pg de soja se obtuvo mediante el uso de una columna analítica Gemini C18 (150 * 4,6 mm d.i., 5 pm, de Phenomenex, Chesire, Reino Unido). La fase móvil estaba compuesta por una mezcla (A) de agua y 0,25 % de ácido acético (v/v) y otra mezcla (B) de metanol con 0,25 % de ácido acético (v/v) con un flujo de 1 ml/min en las siguientes condiciones isocráticas: 20 % A, 80 % B. El volumen inyectado fue de 20 pl; la duración de la inyección fue de 10 min. El análisis HPLC-MS/MS se realizó con un instrumento Agilent 1290 de la serie Infinity y un analizador Agilent Technology Triple Quadrupole 6420 (Santa Clara, CA) equipado con una interfaz ESI en modo de ionización negativa.

Una vez validado este método, permitió cuantificar las saponinas I y pg de soja en las muestras de lentejas analizadas, con valores que oscilaban entre 54 y 226 mg kg_1 para la saponina I de soja y entre 436 y 1.272 mg kg_1 para la saponina pg de soja.

Ejemplo 2

Caracterización nutricional y adicional de los extractos de lentejas

Preparación del extracto

El extracto de lenteja se obtuvo mediante el siguiente proceso: se añadieron 50 g de lentejas finamente molidas a una mezcla de 500 ml de agua y etanol absoluto (70:30) y se sometieron a agitación magnética durante 3 horas. A continuación, se filtró la mezcla y se hizo evaporar la solución en un evaporador rotativo a T <30 °C hasta obtener un volumen de alrededor de 300 ml (y se evaporó completamente el alcohol etílico).

Después de ser diluida, de acuerdo con lo necesario, esta solución acuosa residual conocida como Extracto A se utilizó para la investigación in vivo en animales y la investigación in vitro para humanos con el fin de evaluar su efecto prebiótico.

El extracto A se concentró además en el evaporador rotativo a temperatura ambiente, y luego se liofilizó para obtener alrededor de 4 g de polvo, denominado a continuación extracto B, que se caracteriza por su contenido en moléculas bioactivas y sustancias nutricionales.

Extracto A

El método HPLC-MS/MS se utilizó para el análisis de las saponinas de soja en el Extracto A, utilizado para la investigación in vivo en animales, y proporcionó una concentración de 102,7 mg kg-1 para la saponina I de soja y 0,96 mg kg-1 para la saponina ¡5g de soja (concentración total de saponina de soja de 103,66 mg kg-1).

Extracto B

El análisis nutricional del Extracto B liofilizado final proporcionó los siguientes valores: a) Valor energético por 100 g de producto: 1.532 kJ o 366 Kcal; b) hidratos de carbono totales, tal como se presentan, 67,82 %; c) sustancias nitrogenadas, tal como se presentan, 21,06 %; d) sustancias grasas, tal como se presentan 1,13 %; e) cenizas, tal como se presentan, 0,60 %; f) sal, < 0,01 %; g) fibra bruta, tal como se presentan, 18 %, h) y humedad 9,18 %.

Ejemplo 3

Actividad reductora del colesterol del extracto

Para evaluar la actividad reductora del colesterol del extracto de lenteja, se utilizó un modelo animal en el que se indujo la hipercolesterolemia con el uso de una dieta rica en colesterol. Diecinueve ratas macho Sprague-Dawley (Charles River, Calco, Italia) fueron colocadas en jaulas individuales en una sala mantenida a temperatura constante (20-22 °C) y humedad (45-55 %). Su peso corporal inicial era de 225-250 g. Las ratas fueron sometidas a un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas y alimentadas con una dieta estándar (4RF18; Mucedola; 2,6 kcal/g) con agua ad libitum durante 2 semanas antes del experimento. Sus niveles medios de colesterol eran de 68 ± 2 mg/100 ml.

Todos los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con la Directiva Europea 2010/63/UE que regula el bienestar y la protección de los animales y con el Decreto Legislativo Italiano N. 116 del 27 de enero de 1992.

Después de la aclimatación, todas las ratas fueron alimentadas con una dieta comercialmente disponible rica en colesterol (dieta AIN-76 enriquecida con 1 % de colesterol y 0,5 % de ácido cólico, D04082702 Research Diet, New Brunswick, NJ 08901 EE.UU.). El peso corporal y la ingesta de alimentos se controlaron todos los días.

Las ratas tuvieron libre acceso a esta dieta durante 6 semanas, tras las cuales se observó que los niveles de colesterol habían aumentado significativamente (247 ± 24 mg/100 ml) con respecto a sus valores iniciales (68 ± 2 mg/100 ml).

Las ratas se dividieron en dos grupos experimentales sin diferencias significativas en el peso corporal [F(1,17) = 0,06, p>0,05], la ingesta de alimentos [F(1,17) = 4.03, p>0,05], los valores de colesterol en plasma [F(1,17) = 0,00, p>0,05], los triglicéridos [F(1,17) = 0,05, p>0,05], HDL [F(1,17) = 1,69, p>0,05] o LDL [F(1,17) = 0,05, p>0,05].

Los dos grupos experimentales recibieron los siguientes tratamientos durante 71 días:

1) Vehículo (agua) (n = 9)

2) Extracto A de lentejas que contiene saponina de soja (4 ml de extracto A /24 h) (n = 10).

Las muestras de sangre fueron analizadas por el laboratorio Fioroni (San Benedetto del Tronto (AP)).

Durante toda la duración del tratamiento, el peso corporal, la ingesta de alimentos (mostrados en la Tabla 1) y la actividad locomotora (evaluada por la prueba de campo abierto) no se vieron afectados por la administración del Extracto A.

Como se muestra en la Tabla 1, al final del tratamiento, los niveles de colesterol en sangre de las ratas alimentadas con 4 ml de Extracto A/24 h fueron significativamente menores que los de los grupos de control [F(1.17) = 5.06, p<0.05]. Además, se observó una tendencia no significativa en la reducción de los niveles de LDL [F(1,17) = 0,70, p>0,05] y en el aumento de los niveles de HDL [F(1,17) = 2,98, p>0,05].

Tabla 1. Resultados de actividad reductora de colesterol de Extracto A en un modelo animal

*Dato considerado significativo: p<0,05

La Tabla 1 muestra que se observó una disminución de los niveles de colesterol total tanto en las ratas alimentadas con el vehículo como en las alimentadas con el Extracto A, debido en parte a la adaptación fisiológica de sus organismos a una dieta enriquecida en colesterol (exógeno), de modo que ya no eran capaces de sintetizar el colesterol endógeno a nivel hepático y, en consecuencia, demuestra una disminución fisiológica del colesterol total. Sin embargo, tras 71 días de tratamiento, se observó una marcada disminución del nivel de colesterol total (-29,6 %) de las ratas alimentadas con el Extracto A, en comparación con las alimentadas con el vehículo (-12,8 %). Por lo tanto, la comparación de la disminución del nivel de colesterol total de las ratas tratadas con el Extracto A con las tratadas con el vehículo permite concluir que la disminución observada en las ratas tratadas con el Extracto A es estadísticamente significativa (16,8 %).

En los niveles de colesterol LDL y HDL, se observa una tendencia de disminución y una tendencia de aumento respectivamente en las ratas tratadas con el vehículo y las tratadas con el Extracto A, pero las diferencias no son estadísticamente significativas.

Ejemplo 4

Análisis de ácidos biliares en heces en HPLC-MS

Para confirmar y explicar el mecanismo implicado en la acción hipocolesterolemiante del extracto de lenteja utilizado en el experimento in vivo con ratas, se desarrolló un método de HPLC-MS para cuantificar en las heces de las ratas los ácidos biliares implicados en el proceso de digestión. Los ácidos biliares seleccionados fueron: ácido cólico (CA), ácido quenodesoxicólico (CDCA), ácido desoxicólico (DCA), ácido litocólico (LCA), ácido ursodesoxicólico (UDCA).

Material y métodos

Las muestras de heces liofilizadas se pesaron (100 mg) en un vial y se añadieron 5 ml de metanol. Las muestras se agitaron en vórtex durante 2 minutos, se les aplicó ultrasonido durante 30 minutos y, a continuación, se filtraron a través de un filtro de PTFE de 0,22 pm antes del análisis por HPLC. Los estudios de HPLC-ESI-MS se llevaron a cabo utilizando un Agilent 1290 Infinity Series y un triple cuadrupolo 6420 de Agilent Technology (Santa Clara, CA, EE.UU.) equipados con una fuente ESI que opera en los modos de ionización negativa y positiva. La separación cromatográfica se realizó en una columna analítica Symmetry C18 (4,6 mm *250 mm, 5 pm). La fase móvil para los análisis de HPLC-MS fue ácido fórmico acuoso (99,95-0,05 %) (A) y metanol-ácido fórmico (99,95-0,05 %) (B) trabajando en el modo de gradiente. El caudal se fijó en 1 ml/min, y la temperatura de la columna se controló a 30 °C. La interfaz ESI y los parámetros del espectrómetro de masas se optimizaron para obtener la máxima sensibilidad. Los espectros de masas se adquirieron en polaridad negativa y la adquisición se realizó utilizando el modo de vigilancia de un solo ion (SIM), seleccionando el ion m/z 407 [M-H]' para el C^a , el ion m/z 391,2 [M-H]' para el CDCA DCA y UDCA, el ion m/z 375,3 [M-H]- para el LCA.

El método desarrollado y validado se aplicó al análisis de los ácidos biliares en las heces de las ratas utilizadas en el estudio in vivo anterior.

Resultados

Como se muestra en la Figura 2, la excreción de ácidos biliares tanto en el grupo control como en el grupo vehículo, no cambió estadísticamente desde el inicio (T 0) hasta el final del estudio (T Final), como se esperaba.

Por otro lado, hubo efectos significativos del tratamiento con extracto de lenteja sobre la excreción de ácidos biliares en las heces de las ratas. El valor medio del ácido biliar fecal total fue significativamente mayor en las ratas alimentadas con extracto de lenteja (p<0,01) en comparación con el grupo respectivo antes del tratamiento con el extracto. De hecho, la cantidad total de ácidos biliares en las heces cambió de 3.463,6 mg kg-1 (T 0) a 4.474,2 mg kg-1 (T Final) en las ratas tratadas con extracto de lenteja diluido, con un aumento conspicuo de 1.010,6 mg kg-1.

Por lo tanto, el efecto reductor del colesterol del extracto de lenteja rico en saponinas de soja fue mediado por el aumento de la salida fecal de ácidos biliares, lo que indica la inhibición de su reabsorción intestinal. Estos datos, de acuerdo con un estudio anterior realizado utilizando diferentes modelos animales y diferentes extractos de saponinas (Lee, S.O.; Simons, A.L.; Murphy, P.A.; Hendrich, S. Soyasaponins lowered plasma cholesterol and increased fecal bile acids in female golden Syrian hamsters. Exp. Bio. Med. 2005, 230, 472-478), confirman el supuesto mecanismo para explicar el efecto hipocolesterolemiante del extracto de lentejas rico en saponinas de soja que implica una mayor excreción de ácidos biliares. De hecho, de esta forma, la falta de ácidos biliares a nivel intestinal produce la utilización del colesterol endógeno para sintetizar nuevos ácidos biliares, con la consiguiente disminución del nivel total de colesterol plasmático.

Ejemplo 5

Actividad prebiótica del extracto

Para verificar la actividad prebiótica del extracto, se desarrolló una fermentación piloto con un fermentador de 2 litros en un sistema semicontinuo en condiciones de anaerobiosis. La unidad de fermentación estaba equipada con sistemas de control para el control de la temperatura (37 ± 0,1 °C) y del pH (6,1± 0,2) mediante la adición de NaOH 2M o H2SO4 0,5M y la agitación (100 rpm). Al recipiente y el medio se insufló continuamente una mezcla de gas anaeróbico (80 % N2, 10 % CO2, 10 % H2) a 100 y 50 ml/min para mantener el estado de anaerobiosis. El sistema de fermentación se empleó con el fin de simular el intestino humano utilizando el sistema de cultivo semicontinuo inoculado con un conjunto de heces humanas. Los principales grupos de microorganismos de la microbiota humana fueron vigilados durante los procesos de fermentación para evaluar sus efectos. Para la fermentación semicontinua, se utilizó un medio de cultivo complejo similar al reportado en el estudio de Zampa et al. (Zampa, A.; Silvi, S.; Fabiani, R.; Morozzi, G.; Orpianesi, C.; Cresci, A. Effects of different digestible carbohydrates on bile acid metabolism and SCFA production by human gut micro-flora grown in an in vitro semi-continuous culture, Anaerobe, 2004, 10, 19-26) enriquecido con fluido fecal que contenía componentes desconocidos que no estaban presentes en el medio de cultivo. Los ácidos biliares primarios, el ácido cólico y el ácido quenodesoxicólico (Sigma-Aldrich, Milán, Italia) se añadieron al medio de cultivo preparado en una concentración de 0,6 g/l.

Se realizaron tres procesos de fermentación semicontinua: 1) con la adición de glucosa al medio como única fuente de carbohidratos (grupo de control); 2) con la adición de inulina al medio como única fuente de carbohidratos (control positivo); 3) con la adición de extracto de lenteja(Extracto A) al medio como única fuente de carbohidratos. Cada proceso de fermentación duró 5 días y se repitió tres veces. El medio fue Caldo de levadura Peptona (PY) compuesto por: agua destilada (1.000 ml), peptona 10g/I, extracto de levadura 10g/I, con la adición de una solución salina (40 ml/l) y cisteína (0,5 g/l). El pH se llevó a 7,2 con NaOH y luego se esterilizó a 121 °C durante 15 minutos (100 kPa). Tras la esterilización, en el medio enfriado a temperatura ambiente se añadió glucosa al 1 % al grupo de control, inulina al 1 % al grupo de control positivo y una cantidad de extracto de lenteja correspondiente a una concentración de carbohidratos del 1 % al grupo de prueba de fermentación. Además, se añadió hemina (10 ml/l) y vitamina K (0,2 ml/l) al medio de fermentación.

Inoculación

El fermentador se inoculó con un conjunto de heces humanas obtenidas de voluntarios en buen estado de salud, sin problemas gastrointestinales o que hubieran utilizado antibióticos durante al menos un mes antes de la toma de muestras de sus heces. Se pesaron dos gramos de heces de cada donante y se colocaron en una bolsa estéril por Stomacher y se homogeneizaron con la adición de una solución salina reductora (dilución 1:5). Tras la homogeneización, la muestra de heces se dividió en 9 bolsas de 5 ml de capacidad cada una, 1 por fermentación, y se conservó a -80 °C.

Proceso de fermentación

Cada proceso de fermentación se inoculó con un pool de heces conservado a -80°C. El fermentador se llenó con 1,2 I de medio de cultivo que había sido adecuadamente esterilizado e inoculado el día anterior con 5 ml de inóculo formulado como se ha descrito anteriormente. El proceso de fermentación se realizó con los siguientes parámetros: DO2 (entrega de oxígeno), oxígeno disuelto igual a 0 %, pH a 6,6, temperatura a 37 °C, agitación a 100 rpm. El fermentador se dejó durante 24 horas con el sistema de crecimiento puesto en "batch". La fermentación semicontinua se inició el segundo día inoculando con el uso de una bomba peristáltica, 6 alimentaciones por día de 240 ml de cantidad cada una, y el muestreo se realizó tomando las 6 muestras correspondientes cada día del mismo volumen, siempre antes de la alimentación. Cada día, la primera muestra se sometió a un análisis microbiológico. Después de 5 días, el proceso de fermentación se terminó.

Análisis microbiológicos realizados

Los recuentos de microbios se llevaron a cabo siguiendo el método de dilución en serie doble, procedimiento de siembra en placa en el tiempo transcurrido (0h), y después de 24, 48, 72 y 96 horas desde el inicio del proceso de fermentación, en medios de cultivo selectivos en condiciones de aerobiosis y anaerobiosis a 37 °C durante 24-72 h.

Para el análisis microbiológico se utilizaron los siguientes medios de cultivo: agar de Man, Rogosa, Sharpe (MRS) (Liofilchem®, Roseto degli Abruzzi, Italia) para el recuento de géneros de Lactobacillus spp., agar manitol sal (MSA) (Liofilchem®) para el recuento de géneros Staphylococcus spp., agar Columbia hemina (1 %) (bioMérieux, Marcy l'Etoile, Francia) para el recuento de anaerobios totales, agar MacConkey (Liofilchem®) para el recuento de Enterobacteriaceae, agar Beerens (Silvi et a l ., 1996; Silvi et al., 2003) para el recuento de géneros de Bifidobacterias, y agar reforzado para Clostridium (OXOID) para el recuento de géneros de Clostridium spp.

Resultados

Los resultados relativos a los recuentos de los principales grupos de microorganismos de la microbiota intestinal humana en los tres procesos de fermentación se proporcionan en la siguiente tabla (Tabla 2).

Tabla 2. Recuento de bacterias (promedio de tres pruebas independientes /- desviación estándar) expresado como Log UFC/ml en el grupo de control (C), el grupo de inulina (I), y el grupo de lenteja (E) después de 24, 48, 72 y 96 horas de fermentación.

C: Control de la fermentación

I: Control positivo de la fermentación con inulina

E: Fermentación con extracto de lenteja

En conjunto, los resultados demuestran que la inulina y el extracto de lenteja tienen el mismo efecto sobre los principales grupos de bacterias estudiados en los procesos de fermentación. Las enterobacteriaceas se comportan de la misma manera en presencia de inulina y en presencia de extracto de lenteja, y también se observó un comportamiento similar en el grupo de control. Los Staphylococcus aumentaron tanto en la fermentación con extracto de lenteja como con inulina en comparación con el grupo de control, mientras que las bacterias Clostridium disminuyeron de 109 a 108 (UFC/ml) durante la fermentación tanto en el grupo de extracto de lenteja como en el de inulina, aunque en un grado estadísticamente insignificante. También cabe destacar el comportamiento del Lactobacillus, que tendió a disminuir en el grupo de control pero no durante la fermentación ni en el grupo de la inulina ni, sobre todo, en el grupo del extracto de lenteja, donde el recuento se mantuvo elevado en torno a 108 (UFC/ml) tras 96 h de fermentación. Otro resultado interesante obtenido se refiere al recuento total de anaerobios, que fue significativamente menor (prueba t de Student, donde p< 0,05) a lo largo del proceso de fermentación tanto con inulina como con extracto de lenteja. Por último, en lo que respecta al grupo de las Bifidobacterias, el análisis estadístico aplicado a los resultados del recuento de microbios demostró un aumento significativo del número durante la fermentación tanto en el grupo de las lentejas como en el de la inulina, lo que confirma la capacidad del extracto de lentejas de ejercer una acción generadora de Bifidobacterias (véase la Figura 1 y la Tabla 2).

Más específicamente, en lo que respecta al recuento de grupos bacterianos considerados beneficiosos, el Lactobacillus mostró un rendimiento estable en la fermentación con inulina y extracto de lenteja. El recuento observado para las Bifidobacterias en el grupo de control fue bajo y estable a 104 UFC/ml, pero aumentó en los grupos de fermentación de inulina y extracto de lenteja, este último hasta en 3 logaritmos más que los del grupo de control, demostrando así propiedades (incluyendo la estimulación del crecimiento de las Bifidobacterias) que fueron reconocidas previamente para la inulina, pero sin duda recién demostradas para el extracto de lenteja.

Considerando los resultados obtenidos y la actividad de la inulina en la fermentación in v itro , en el modelo semicontinuo, el efecto del extracto de lenteja sobre la modulación de los principales grupos de microorganismos de la microbiota intestinal humana es comparable al de la inulina, lo que permite concluir que el extracto de lenteja analizado posee una acción prebiótica y generadora de Bifidobacterias significativa.

Por último, el extracto de lenteja posee una acción hipocolesterolemiante y una actividad prebiótica; en particular, el efecto hipocolesterolemiante demostrado en los experimentos in vivo y en el análisis de los ácidos biliares está potenciado por la actividad prebiótica del extracto que, actuando como inulina, funciona no sólo como prebiótico sino que contribuye también al efecto de reducción del colesterol. Este efecto sinérgico (hipocolesterolemiante y prebiótico) resulta totalmente novedoso para un extracto de lenteja.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Un extracto de lenteja (Lens culinaris L.) caracterizado por la presencia de saponina I de soja en el intervalo comprendido entre 50 y 300 mg kg-1 y saponina pg de soja en el intervalo comprendido entre 0,5 y 5 mg kg-1 obtenible por un procedimiento caracterizado por las etapas siguientes:

a) adición de una mezcla de agua y etanol de 70:30 a una muestra de lenteja (Lens culinaris L.) molida, con la condición de que dicha mezcla no contenga ácido etilendiaminotetraacético (EDTA);

b) agitación de la mezcla obtenida;

c) filtración de la mezcla obtenida;

d) concentración de la mezcla obtenida hasta la completa evaporación del etanol.

2. El extracto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha muestra de lenteja (Lens culinaris L.) es de la variedad Colfiorito.

3. El extracto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en donde la etapa d) se lleva a cabo a una temperatura menor que 30 °C.

4. Un extracto liofilizado obtenido por un proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que comprende una etapa adicional de concentración y posterior liofilización de la mezcla obtenida.

5. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en: enfermedades cardiovasculares, como el infarto de miocardio, la diabetes tipo 2, la obesidad y la hipertensión arterial.

6. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el mantenimiento del nivel de colesterol en un sujeto predispuesto a desarrollar hipercolesterolemia.

7. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso como prebiótico para la preservación y/o restauración de la flora bacteriana intestinal.

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde se promueve el crecimiento y/o la actividad de Bifidobacterias y Lactobacilos.

9. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en la prevención y/o en el tratamiento de enfermedades y trastornos gastrointestinales en donde exista una alteración de la flora bacteriana intestinal, en donde dicha enfermedad o trastorno se selecciona entre el síndrome del intestino irritable, las enfermedades inflamatorias crónicas del intestino, la diarrea, las formas dispépticas, el meteorismo, la diverticulosis, el síndrome de sobrecrecimiento bacteriano en el intestino delgado, la alteración del sistema inmunitario y las alergias alimentarias.

10. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento y/o prevención de la disbiosis intestinal.

11. El extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento de enfermedades y afecciones en donde la estimulación del crecimiento y/o la actividad de las especies microbianas presentes en la microbiota intestinal es beneficiosa para la salud, por ejemplo la diabetes, el síndrome metabólico, la obesidad y la alergia.

12. Un nutracéutico, un alimento funcional o un suplemento dietario que comprende el extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, opcionalmente en combinación con suplementos dietarios, compuestos o extractos con actividad reductora del colesterol, compuestos o extractos con actividad prebiótica, como inulina, fructo-oligosacáridos (FOS) y pectinas, y/o compuestos o extractos con actividad probiótica.

13. El nutracéutico, alimento funcional o suplemento dietario de acuerdo con la reivindicación 12, en donde dicho compuesto o extracto con actividad reductora del colesterol se selecciona del grupo formado por: fitoestanoles, fitoesteroles, arroz rojo fermentado, berberina y silimarina.

14. Una composición farmacéutica que comprende el extracto de cualquiera de las reivindicaciones 1-4.