ES2927979T3

ES2927979T3 - Composición que comprende un yoduro y un derivado del ácido hialurónico con efecto oxidante, método de preparación y uso de la misma

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Publication number: ES2927979T3
Application number: ES19778421T
Authority: ES
Inventors: Radovan Buffa; Vit Svozil; Katerina Knotkova; Veronika Stepankova; Jaromir Kulhanek; Josef Chmelar; Lucie Marholdova; Ivana Basarabova; Michaela Moravkova; Helena Krejci; Kristyna Lipenska; Jaroslav Novotny; Stanislav Pepeliaev; Lubos Sobotka; Vladimir Velebny
Original assignee: Contipro AS
Current assignee: Contipro AS
Priority date: 2018-01-29
Filing date: 2019-08-17
Publication date: 2022-11-14
Anticipated expiration: 2039-08-17
Also published as: CZ307983B6; CZ201842A3; PL3840839T3

Abstract

La invención se refiere a la preparación y uso de varias formas que comprenden yoduros y un derivado del ácido hialurónico, una cloramida hialuronana. Estas composiciones, después de ser mezcladas en un medio acuoso, liberan compuestos de yodo en el grado de oxidación superior a -1, exhibiendo así una actividad antimicrobiana de amplio espectro. Gracias a la biocompatibilidad y estabilidad, estas composiciones son adecuadas para aplicaciones en el campo de las cubiertas de heridas o para la preparación de una amplia gama de dispositivos médicos implantables. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composición que comprende un yoduro y un derivado del ácido hialurónico con efecto oxidante, método de preparación y uso de la misma

Campo de la invención

La invención se refiere a composiciones que comprenden un yoduro y un derivado del ácido hialurónico, también denominado cloramida de hialuronano, en el que la mayoría de los átomos de hidrógeno contenidos en el grupo amídico -NH-CO- está sustituido por átomos de cloro según la fórmula estructural -NCI-CO-. En presencia de agua, dicha mezcla genera yodo que tiene un grado de oxidación superior a -1 y proporciona efectos antimicrobianos de amplio espectro. Las composiciones finales incluyen numerosas formas, tales como una película fina, un liofilizado, una capa de fibras discontinuas, una fibra continua, una tela tejida, una tela de punto, una tela trenzada o una capa nanofibrosa, mediante las cuales se puede transferir yoduro y cloramida de hialuronano tanto a dispositivos médicos como a medicamentos.

Además, la invención se relaciona con el uso de las composiciones finales que contienen un yoduro y cloramida de hialuronano en los campos donde se requieren las siguientes propiedades o cualquier combinación de las siguientes propiedades:

• Actividad oxidante o antimicrobiana o antifúngica o antivírica

• Biocompatibilidad y biodegradabilidad

• Posibilidad de preparar varias formas con un grado conveniente de estabilidad

• Una contribución significativa al proceso de curación

Antecedentes de la invención

El ácido hialurónico

El ácido hialurónico o la sal sódica del mismo es un glicosaminoglicano no sulfatado constituido por dos unidades repetitivas de ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina.

R1 representa hidrógeno o sodio.

El peso molecular del ácido hialurónico natural varía entre 5.104 y 5106 g.mol-1. Este polisacárido hidrófilo desempeña un papel importante en numerosos procesos biológicos, tales como la hidratación, la organización de proteoglicanos o la diferenciación de células, y se sabe que es un constituyente esencial de la piel, el líquido articular sinovial y los tejidos conectivos. El polímero mencionado anteriormente se encuentra de forma natural en los sistemas biológicos y, por lo tanto, puede caracterizarse como biodegradable y biocompatible. Por lo tanto, constituye un sustrato adecuado en el campo de los vehículos de sustancias biológicamente activas para una amplia gama de aplicaciones biomédicas.

K. F. Cutting: "Wound healing through synergy of hyaluronan and a iodine complex ", Journal of Wound Care, vol. 20, núm. 9, 1 de septiembre de 2011, páginas 424-430, se refiere a la curación de heridas a través de la sinergia del hialuronano no sustituido y un complejo de yodo.

El documento WO 2012/092908 A1 describe una preparación para la curación de heridas intracorpóreas y/o superficiales que contiene ácido hialurónico no sustituido y al menos un yodo.

Almabrok Akeel et al: "Chlorination and oxidation of heparin and hyaluronan by hypochlorous acid and hypochlorite anions: effect of sulfate groups on reaction pathways and kinetics ", Free Radical Biology and Medicine, vol. 56, 7 de diciembre de 2012 (2012-12-07), páginas 72-88, describen un método para obtener cloramidas de ácido hialurónico.

El documento US 2005/181025 A1 informa sobre composiciones para la cicatrización de heridas que comprenden ácido hialurónico no sustituido, yodo y yoduro potásico que tienen propiedades antimicrobianas.

Modificaciones químicas y formas del ácido hialurónico

Son numerosos los métodos conocidos de modificaciones químicas del ácido hialurónico con el fin de ajustar las propiedades físicas y biológicas del mismo (Burdick J. A. y Prestwich G. D., Adv. Mater. 23, 41 -56, 2011). En caso de que se requiera un cambio esencial en la solubilidad en relación con una aplicación particular, el procedimiento más frecuente consiste en unir covalentemente una cadena hidrófoba a la estructura polimérica por medio de un enlace éster biodegradable (Kettou S. et al., PV 2009-399, Buffa R. et al., documento WO2010105582). Cuando se modifican de la manera anterior, dichos materiales se pueden usar para la preparación de diversas formas, tales como fibras ^{(Scudlova J. et. al., documento EP2925916 a}1), ^{tejidos de punto y trenzados (Pitucha T. et al., documento CZ 306354),}películas autoportantes (Foglarova M. et al. PV2015-166; Foglarova M. et al., Carbohydrates Polymers, 144, 68-75, 2016) o capas nanofibrosas (Ruzickova J. et al. PV2013-913). Las telas no tejidas se forman mediante la combinación de microfibras discontinuas, siendo estas últimas preparadas mediante el proceso de hilatura en húmedo en un baño de coagulación no estacionario (Zapotocky V. et al., International Journal of Biological Macromolecules, 95, 903-909, 2017) .

Oxidación con ácido tricloroisocianúrico o con tricloroisocianurato de sodio

El ácido tricloroisocianúrico (TCC) se usa a menudo para realizar la N-cloración de amidas estructuralmente más simples a N-cloramidas (Hiegel G. A. et al., Synthetic Communications, 35, 2099-2105, 2005), principalmente en disolventes no acuosos. Además, el TCC se menciona a menudo en combinación con radicales estables, tales como los piperidiniloxi (TEMPO), para oxidar selectivamente grupos hidroxilo primarios en presencia de agua. En relación con el ácido hialurónico, el uso de TCC junto con TEMPO en agua se describió, por ejemplo, en una patente (Buffa R. et al., documento WO2011069475A3), donde no se observó formación de cloramidas sino sólo la oxidación de los grupos hidroxilo primarios a un aldehído y un ácido carboxílico. Por lo tanto, en el caso de sustratos que contengan grandes cantidades de alcoholes secundarios y primarios (polisacáridos), se pueden esperar reacciones sobre los grupos hidroxilo cuando se usan TCC y sus análogos. La sal monosódica de TCC, que también se conoce como dicloroisocianurato de sodio (DCC-Na), es un análogo de TCC menos reactivo pero más soluble en agua. Se describió el uso de DCC-Na para oxidar varias aminas y amidas que, sin embargo, no contienen grupos hidroxilo (Sun X. et al., Ind. Eng. Chem. Res., 49, 22, 2010). Las cloraminas resultantes se polimerizaron y, posteriormente, los sustratos finales se ensayaron con éxito como sustancias antibacterianas, antifúngicas y antivíricas en forma de emulsión de látex (Cao Z. et al., App. Mat. Enter. 1,2, 494-504, 2009).

Sobre la base de los resultados anteriores, se puede concluir que no se puede esperar el uso de TCC o de ciertos análogos del mismo para la preparación selectiva de hialuronano amida N-clorada en agua debido a la supuesta reacción con los grupos hidroxi del hialuronano.

Oxidación de polisacáridos con ácido hipocloroso o con un hipoclorito

El ácido hipocloroso y sus sales se utilizan a menudo para la oxidación de grupos hidroxilo de polisacáridos, principalmente en combinación con radicales piperidiniloxi (TEMPO) (Bragd P. et al., documento WO2002/48197, Buffa R. et al., documento WO2011/069475A3). En general, se puede afirmar que, en la gran mayoría de los casos, no se observó formación de las respectivas cloramidas en relación con los polisacáridos que contienen un grupo amida. Las primeras fuentes no mencionan la presencia de cloramida de hialuronano en absoluto (Green S. P. et al., J. Rheumatology. 17, 1670-5. 1990, Lindvall S. et al., Chem.-Biol. Interac. 90, 1-12, 1994, Baker M. S. et al., 461-7 Arthritis and Rheumatism. 32, 4, 1989). Los artículos mencionados describen el examen del proceso de degradación del hialuronano causado por el ácido hipocloroso o por sus sales, formándose este último en una reacción de la mieloperoxidasa (MPO) con peróxido de hidrógeno y cloruros. Hay varias publicaciones adicionales que describen la degradación de los glicosaminoglicanos, principalmente los contenidos en la matriz extracelular, con el fin de simular procesos inflamatorios. El resultado principal debería haber estado constituido por la información relativa tanto al proceso inflamatorio en sí mismo como a la esperada presencia in vivo de ciertas estructuras químicas. Fuentes más recientes ya mencionan cloramidas de hialuronano. Por ejemplo, la publicación (Hawkins C. L. et al., Free Radical Biology & Medicine, 24, 9, 1396-1410, 1998) se ocupa del estudio del mecanismo de degradación del ácido hialurónico, el sulfato de condroitina y otros sustratos, incluidos los de bajo peso molecular, que contienen un grupo amida. El agente oxidante utilizado fue HOCl/CIO-. Los autores no suponen la existencia de otras formas de cloramida de hialuronano que no sea un intermedio inestable, que, sin embargo, nunca se ha detectado de manera directa. La razón de ello radica en su rápida escisión homolítica o reductora, ambos casos dando como resultado la formación de radicales que luego reaccionan de una manera que conduce a la degradación del polímero. Otro artículo (Parsons B. J. et al., Biochem. J., 381, 175-184, 2004) describe la formación de cloramidas de hialuronano, sulfato de condroitina y otros sustratos por medio de MPO (enzima mieloperoxidasa), peróxido de hidrógeno y cloruros. Los autores suponen que las respectivas cloramidas tienen un cierto tiempo de vida y proporcionan una descripción detallada de la degradación de tales cloramidas por medio de agentes adicionales. Otro artículo muy interesante (Rees M. D. et al., 125, 13719-13733 J. Am. Chem. Soc. 2003) describe las reacciones con NaClO de mono, oligo y polisacáridos que contienen un grupo amida. Dicho artículo contiene un análisis exhaustivo de la estabilidad de las cloramidas de hialuronano y de sulfato de condroitina con grados de modificación de 35% y 16%, respectivamente, tanto en presencia como en ausencia de otros reactivos y sustancias, tales como Cu2+, también en combinación con oxígeno. Se encontró que la degradación se acelera sustancialmente por la presencia de ciertos metales. Se observó una rápida degradación de las cloramidas poliméricas de hialuronano y de sulfato de condroitina a la temperatura de 50 °C incluso en ausencia de metales. La degradación fue significativamente más lenta a temperaturas más bajas. Los resultados de las observaciones directas también muestran que la reacción de MPO con glicosaminoglicanos, que tiene lugar en presencia de peróxido de hidrógeno y en presencia de una cantidad fisiológica de cloruros, genera una pequeña cantidad de cloramidas de glicosaminoglicanos. En consecuencia, los autores llegaron a la conclusión de que dichas cloramidas también se generan in vivo.

Sobre la base de los resultados anteriores, se puede concluir que, a pesar de ser conocidas, no se puede esperar que las cloramidas de hialuronano que tienen un bajo grado de modificación tengan una estabilidad suficiente para hacerlas adecuadas para preparar cualquier composición para aplicaciones biomédicas.

Ácido hialurónico y triyoduro

Las formas de yodo que tienen un grado de oxidación superior a -1 (I-) son compuestos biocompatibles bien conocidos que proporcionan efectos antisépticos y desinfectantes. Una de las formas más extendidas es el triyoduro (grado de oxidación -1/3) que está sujeto a descomposición reversible en yodo molecular (I²) y yoduro (I-). El yodo molecular está sujeto a la transformación al estado gaseoso, lo que significa que los materiales sólidos que contienen triyoduro pierden gradualmente sus propiedades oxidantes debido a la sublimación del I². Por esta razón, el triyoduro se usa principalmente en forma de varias soluciones. Un ejemplo es la llamada solución yodada de Lugol (solución acuosa de triyoduro de potasio) que, por su biocompatibilidad y eficacia, es apta para una amplia variedad de aplicaciones que requieren efectos antisépticos o desinfectantes. Una ligera desventaja de la solución mencionada anteriormente consiste en que puede provocar la formación de cicatrices y decoloraciones temporales de la piel. Estos últimos inconvenientes se han superado mediante la adición de ácido hialurónico que suprime notablemente la cicatrización y, en general, contribuye significativamente a los procesos de curación. El documento CZ 12015 describe una composición para prevenir adherencias de vendajes, comprendiendo dicha composición una sal fisiológicamente aceptable de ácido hialurónico que tiene un peso molecular que varía entre 200.000 y 2.500.000 g.mol-1, yodo y yoduro de potasio. La composición, que está disponible en forma de solución acuosa estéril o de gel, es capaz de acelerar el proceso de curación de las heridas. El uso de dicha solución de ácido hialurónico y triyoduro de potasio (bajo el nombre comercial Hyiodine®) en aplicaciones tópicas de curación de heridas también se describió en varias publicaciones (Bezdekova B. et al., Veterinarstvi 54, 516-519, 2004; Frankova J. et al., Journal of Materials Science: Materials in Medicine 17, 891-898, 2006; Slavkovski R. et al. Clinical and Experimental Dermatology 35, 4, 373-379, 2010). Los autores obtuvieron excelentes resultados en el campo de la curación de las heridas crónicas debido principalmente a la combinación única que comprende un triyoduro antimicrobiano biocompatible y ácido hialurónico biocompatible, contribuyendo la presencia del último al proceso de curación.

Sin embargo, tiene que tenerse en cuenta una limitación significativa de la aplicabilidad de una solución que comprende triyoduro y un polisacárido cuando se almacena, transporta y otras posibles aplicaciones in situ están implicadas. Por un lado, el volumen del material (solución) es significativamente mayor que el de una forma sólida análoga y, además, las posibilidades de la aplicación in situ están considerablemente limitadas debido a la inestabilidad espacial de la solución (su difluencia). Por otro lado, el alcance de la usabilidad de la forma líquida está limitado por el tipo de material de envasado utilizado, ya que la actividad oxidante del triyoduro hace que sea muy difícil usar otros tipos de materiales de envasado que el estándar, vidrio-silicato quebradizo para almacenamiento a largo plazo. El esfuerzo por proporcionar un material sólido que contuviera un polisacárido junto con un triyoduro no tuvo éxito debido a la inestabilidad inherente del triyoduro en ausencia de un disolvente. La presencia de un disolvente inhibe el proceso de sublimación del I²molecular y permite que el último se vuelva a unir al I- y para volver a asumir la forma de triyoduro I³-, Por lo tanto, la solución yodada de Lugol por sí sola pierde rápidamente su constituyente activo (I²) durante la evaporación del disolvente, sublimándose dicho constituyente del estado sólido. Esto constituye un problema absolutamente fundamental con respecto a la posibilidad de almacenamiento a largo plazo de cualquier forma final que contenga triyoduro.

El documento CZ 22394 divulga una mezcla antimicrobiana para facilitar el proceso de curado así como un apósito antimicrobiano para facilitar el curado de las heridas. La mezcla mencionada anteriormente comprende una sal fisiológicamente activa de ácido hialurónico y, según sea el caso, otros polisacáridos y sustancias antimicrobianas activas. Además de eso, comprende un electrolito, tal como el yoduro de potasio. La composición puede adoptar la forma de una mezcla química o física, la forma química siendo ventajosamente una solución acuosa y la física ventajosamente una capa de fibras de polisacáridos, conteniendo la estructura de dicha capa una sustancia antimicrobiana. El vendaje para heridas es adecuado para curar heridas superficiales. Una desventaja particular de la divulgación anterior consiste en la presencia indispensable de una sustancia antimicrobiana distinta del triyoduro, lo que conlleva un riesgo de irritación local de la piel, toxicidad indeseable o reacción alérgica.

El documento CZ 303548 divulga una posibilidad inteligente de evitar el problema asociado con la estabilidad de las composiciones antimicrobianas que comprenden yodo activo con un grado de oxidación superior a -1. La solución del problema anterior consiste en que el yodo activo se genera no antes que in situ cuando los yoduros reaccionan con los yodatos. Sin embargo, otro problema consiste en que el agente oxidante utilizado (un yodato de un metal alcalino) presenta efectos oxidantes muy fuertes y provoca un daño en el tejido si, en el curso de la formación del yodo activo, entra en contacto con el tejido antes de llegar a ser capaz de reaccionar con los yoduros. En otras palabras, la parte de la composición que asegura la oxidación de los yoduros a yodo que tiene un grado de oxidación superior a -1 no es biocompatible.

Los inconvenientes antes mencionados se eliminan mediante la solución técnica según la presente invención, en la que se describe la preparación de formas totalmente biocompatibles, comprendiendo estas últimas dos partes: 1. Un yoduro

2. Un agente oxidante biocompatible

Los constituyentes 1 y 2 pueden formarse como sólidos contenidos en una única composición final o como líquidos contenidos en dos composiciones separadas. En este último caso, cuando se mezclan ambos constituyentes en presencia de un disolvente se genera y libera yodo con un grado de oxidación superior a -1. La estabilidad de la composición final durante el almacenamiento y el transporte se garantiza porque el yodo activo (volátil) que tiene un grado de oxidación superior a -1 se forma no antes que in situ cuando hay un ambiente acuoso. El agente oxidante biocompatible en forma de cloramida del ácido hialurónico que tiene un mayor grado de modificación (superior al 50%) sirve como generador del yodo activo, produciéndose la generación de este último en reacción rápida con los yoduros, y simultáneamente como una fuente de cloro activo. Incluso aunque ya se han descrito cloramidas de ácido hialurónico que tienen un grado de modificación menor (hasta el 35%), las respectivas descripciones no proponen ninguna aplicación práctica de las mismas por razones asociadas con una estabilidad insatisfactoria. La composición final que comprende los constituyentes 1 y 2 es única porque cumple todos los requisitos siguientes al mismo tiempo:

- Total biocompatibilidad y biodegradabilidad durante todas las diversas fases de la aplicación

- Inhibición del crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, hongos o virus (debido al contenido tanto de yodo activo como de cloro)

- Efectos favorables en los procesos de curación (debido a la presencia de ácido hialurónico)

- Posibilidad de preparar una amplia variedad de formas con un conveniente grado de estabilidad.

En general, la combinación mencionada anteriormente es deseable en conexión con aplicaciones tanto externas como internas que requieren apósitos para heridas, rellenos, barreras antiadhesivas, membranas, bolsas o envolturas antibacterianos y, simultáneamente, biocompatibles.

La presente invención resuelve la preparación y uso de composiciones estables, biocompatibles y biodegradables que contienen cloramida de hialuronano y un yoduro, las cuales, tras la aplicación, proporcionan un amplio espectro de efectos antimicrobianos y antivíricos acompañados de efectos curativos, debido a la presencia de cloro y yodo que tienen grados de oxidación superiores a -1. Además, se describe una amplia variedad de formas, formas que tienen áreas superficiales y tiempos de degradación muy variables.

Sumario de la invención

Son objeto de la presente invención composiciones que contienen un yoduro y un derivado del ácido hialurónico, en el que la mayoría de los átomos de hidrógeno contenidos en el grupo amídico -NH-CO- están sustituidos por átomos de cloro -NCI-CO-; el término "mayoría" se refiere al rango de 50 a 100%. Después de haber sido modificado de la manera anterior, el polímero, a saber, la cloramida de hialuronano, que está presente en forma de solución, reacciona rápidamente con los yoduros (la otra parte de la composición) lo que da como resultado la formación de compuestos de yodo con grados de oxidación superiores. que -1, tales como I³- o I², y el ácido hialurónico natural. La reacción se puede describir mediante el siguiente esquema.

Las composiciones finales también pueden comprender ácido hialurónico modificado, implicando la modificación química los grupos carboxilo y/o hidroxilo del último.

El derivado de ácido hialurónico también puede estar representado por una cloramida de ácido hialurónico modificado, en donde los hidrógenos del grupo amídico -NH-CO- están sustituidos por átomos de cloro según la fórmula estructural -NCl-CO-, y simultáneamente algunos de los grupos -OH de la cloramida se reemplazan por un grupo -O-CO-R2 y/o algunos de los grupos -CH²-OH se reemplazan por un grupo -CH=O y/o algunos de los grupos CO-OH se reemplazan por un grupo -CO-OR2, en el que R2 es una cadena lineal o aromática que contiene átomos C¹- C¹⁷. Los ejemplos de cloramidas de ácido hialurónico modificado incluyen éster etílico, éster bencílico, lauroil, formil, palmitoil o hexanoil hialuronano. El yoduro se selecciona preferiblemente del grupo que comprende yoduro de sodio, yoduro de potasio, yoduro de calcio, yoduro de magnesio y una mezcla de los mismos. Preferiblemente, el polisacárido, es decir, la cloramida, tiene un peso molecular que varía de 5 a 500 kg.mol.-1. Preferiblemente, la relación molar de la cloramida al yoduro en la composición está dentro del rango de 1:1 a 1:5.

La composición antimicrobiana también puede comprender un aditivo en una concentración de hasta el 90 % p/p, seleccionándose dicho aditivo del grupo que comprende poli(óxido de etileno), agua, glicerol, ácido hialurónico, sulfato de condroitina, formas de éster de ácido hialurónico modificado, formas de aldehído de ácido hialurónico modificado, alginato de sodio, oxicelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, ésteres de ácidos grasos, cloruro de sodio, cloruro de potasio o cloruro de calcio. En consecuencia, el ácido hialurónico modificado mencionado anteriormente es ácido hialurónico en el que algunos de los grupos -OH están reemplazados por un grupo -OCOR2 y/o algunos de los grupos -CH²-OH están reemplazados por un grupo -CH=O y/o algunos de los grupos CO-OH están reemplazados por un grupo -CO-OR2, en los que R2 es una cadena lineal o aromática que contiene átomos C¹- C¹⁷.

La preparación de cloramida de hialuronano se realiza por medio de agentes que contienen cloro unido a nitrógeno, preferiblemente por medio de ácido tricloroisocianúrico o por medio de sales de ácido dicloroisocianúrico. La preparación (modificación) se lleva a cabo en agua, estando el valor de pH de la solución dentro del rango de 2,5 a 7,5, preferiblemente dentro del rango de 4,0 a 6,0. El valor de pH más bajo se obtiene añadiendo ácido acético en una cantidad entre 0,2 y 7 eq., preferiblemente entre 2 y 4 eq. El sustrato inicial puede estar constituido por ácido hialurónico o por un derivado del mismo modificado químicamente, variando el peso molecular de dicho sustrato de 40 a 2200 kg.mol-1. Además, la preparación de las composiciones finales comprende la formación de:

• Formas sólidas que contienen yoduros y cloramida de hialuronano, tales formas incluyen, por ejemplo, películas autoportantes, liofilizados, capas de fibras discontinuas (telas no tejidas), fibras continuas, telas tejidas, telas de punto, telas trenzadas o capas de nanofibras, todas ellas opcionalmente con un contenido de otros aditivos, estando la proporción de cloramida en la composición final, calculada en términos de materia seca, dentro del rango de 10 a 90% y la proporción de yoduro, calculada en términos de materia seca, estando dentro del rango de 10 a 90%, estando la forma sólida posiblemente compuesta de dos o más capas diferentes presionadas juntas;

• Formas líquidas y de gel, que contienen opcionalmente otros aditivos, en las que el componente que contiene yoduros se separa del que contiene cloramida de hialuronano, mezclándose juntos dichos componentes inmediatamente antes de la aplicación final, estando la proporción de cloramida en la composición final, calculada en términos de la materia seca, dentro del rango de 10 a 90% y estando la proporción del yoduro en la composición final, calculada en términos de materia seca, dentro del rango de 10 a 90%.

Además, la invención se relaciona con el uso de la composición final, particularmente en los campos donde se requieren las siguientes propiedades o cualquier combinación de las siguientes propiedades:

- Actividad oxidante o antimicrobiana o antifúngica o antivírica

- Biocompatibilidad y biodegradabilidad

- Posibilidad de preparar varias formas con un grado conveniente de estabilidad

- Una contribución significativa al proceso de curación

- Tasa de biodegradación controlada.

La composición final es utilizable en aplicaciones biomédicas, particularmente para la preparación de apósitos para heridas, dispositivos médicos implantables, preparaciones contra el acné, rellenos antibacterianos, barreras antiadherentes, membranas, bolsas, envolturas, productos para la prevención de adherencias después de anastomosis, productos para la prevención de dehiscencias de heridas, o, en combinación con otras sustancias, productos para apoyar las correcciones quirúrgicas de los defectos de la pared abdominal.

Se puede lograr una tasa de biodegradación controlada de la composición final combinando la cloramida de hialuronano con aditivos que presentan una degradabilidad más lenta, tales como el alginato de sodio o la carboximetilcelulosa, y/o reticulando la propia cloramida de hialuronano mediante, por ejemplo, cationes polivalentes de Ca2+,

La presente invención se refiere a la preparación y uso de composiciones estables, biocompatibles y biodegradables que contienen yoduros, tales como yoduro de potasio, yoduro de sodio, yoduro de calcio o yoduro de magnesio, o una mezcla de los mismos, junto con una cloramida de hialuronano, composiciones que exhiben efectos antimicrobianas y antivíricas acompañados de efectos curativos. Además, se describe una amplia gama de formas, formas que tienen áreas superficiales, propiedades mecánicas o reológicas y períodos de degradación en gran medida variables.

La implantación práctica de la solución técnica según la presente invención no es complicada desde el punto de vista tecnológico y no requiere el uso de cualquiera de productos químicos, disolventes o procedimientos de aislamiento menos disponibles.

Descripción detallada de los dibujos

Fig. 1A, Fig. 1B - Actividad antimicrobiana de la composición que tiene la forma de un liofilizado, a base de cloramida de hialuronano y yoduro de potasio, preparado según el Ejemplo 20.

Las figuras muestran la inhibición del crecimiento de los microorganismos Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomona aeruginosa, Candida albicans (todos ellos en la Fig. 1A) y Staphylolococus epidermidis (Fig. 1B) en presencia de una composición que contiene una combinación de liofilizados solubles a base de cloramida de hialuronano y liofilizados solubles a base de la mezcla de hialuronano y yoduro potásico en la proporción 5/1, preparados según el Ejemplo 20 (dos repeticiones: los esquemas de la izquierda y del medio), en comparación con el material testigo (el esquema de la derecha), es decir, con el ácido hialurónico natural liofilizado suplementado con yoduro de potasio en la proporción de 5/1 según el Ejemplo 19. La Fig. 1B muestra la comparación entre una repetición (el esquema de la izquierda) y el material testigo (el esquema de la derecha).

El procedimiento de determinación de la actividad antimicrobiana se describe en el Ejemplo 43.

Ejemplos de realizaciones preferidas de la invención

DS = grado de sustitución = (Cantidad molar de unidades poliméricas modificadas)*100%/Cantidad total de todas las unidades poliméricas)

A menos que se especifique lo contrario, la expresión "equivalente" (eq) como se usa en este documento se refiere a una unidad repetitiva del polisacárido respectivo, tal como un dímero de ácido hialurónico.

A menos que se especifique lo contrario, los porcentajes son porcentajes en peso.

Como se usa en este documento, el peso molecular de los polímeros se refiere a un valor promedio en peso determinado por medio del método SEC-MALLS.

Ejemplo 1

Preparación de un éster etílico de hialuronano

Se añadió NaOH a la solución acuosa de hialuronano (1 g, 300 kg.mol-1, en 40 mL de agua) hasta alcanzar el valor de pH 9. Posteriormente, se añadieron 20 mL de dimetilsulfóxido y 0,08 mL de yoduro de etilo y la mezcla resultante se agitó a la temperatura de 45 °C durante 3 días. Posteriormente, la mezcla resultante se precipitó con 140 mL de isopropanol al 100% y la materia sólida separada por filtración se lavó con isopropanol y se secó al vacío. El producto (897 mg) se analizó mediante RMN.

El valor DS del éster fue 6% (determinado mediante RMN, bibliografía: Kettou S. et al., PV 2009-399).

Ejemplo 2

Preparación de un éster bencílico de hialuronano

Se añadió NaOH a la solución acuosa de hialuronano (1 g, 300 kg.mol-1, en 40 mL de agua) hasta alcanzar el valor de pH 9. Posteriormente se añadieron 20 mL de dimetilsulfóxido y 0,08 mL de bromuro de bencilo y la mezcla resultante se agitó a la temperatura de 20 °C durante 4 días. Posteriormente, la mezcla resultante se precipitó con 140 mL de isopropanol al 100% y la materia sólida separada por filtración se lavó con isopropanol y se secó al vacío. El producto final (obtenido en la cantidad de 920 mg) se analizó mediante RMN.

El valor DS del éster fue 3% (determinado mediante RMN, bibliografía: Kettou et al., PV 2009-399).

Ejemplo 3

Preparación de un lauroil hialuronano

Se añadieron 70 mL de tetrahidrofurano, 4 equivalentes de trietilamina y 0,1 equivalentes de 4-dimetilaminopiridina a la solución de hialuronano (5 g, 250 kg.mol-1) en 100 mL de agua destilada. Simultáneamente, se disolvió ácido láurico (4 equivalentes) en la mezcla consistente en 30 mL de tetrahidrofurano y 7 mL de trietilamina y la solución obtenida se complementó con 4,8 mL de cloroformiato de etilo durante 15 minutos a de 0 a 5 °C. La suspensión resultante se filtró en la solución de hialuronano y la mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 5 horas. La solución resultante se precipitó añadiendo 400 mL de isopropanol al 100% y se lavó con isopropanol al 80% y luego con isopropanol al 100%. Posteriormente, el precipitado se secó a 40 °C durante 2 días. El grado de sustitución se determinó como 37% mediante RMN

Ejemplo 4

Preparación de un formil hialuronano

Una solución acuosa al uno por ciento de AH (1 g, 200 kg.mol-1) que contenía NaCl al 1%, KBr al 1%, N-acetilamino-TEMPO (0,01 eq.) y NaHCO3 (20 eq.) se complementó gradualmente con una solución acuosa de NaClO (0,5 eq.) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a 10 °C durante 12 horas, después de lo cual se añadieron 0,1 g de etanol. Posteriormente, la mezcla final se agitó durante 1 hora más. La solución resultante se diluyó con agua destilada hasta la concentración de 0,2% y se dializó frente a la mezcla (NaCl al 0,1%, NaHCO3 al 0,1%) 3 veces 5 litros (1x al día) y luego contra agua destilada 7 veces 5 litros (2x al día). La solución final se evaporó y analizó.

DS 9% (determinado por RMN).

Ejemplo 5

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 82% (determinado por RMN).

Ejemplo 6

Preparación de una cloramida hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 40 kg.mol-1) en 100 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 83% (determinado por RMN).

Ejemplo 7

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 1000 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 72% (determinado por RMN).

Ejemplo 8

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 0,14 mL de ácido acético (0,2 eq.) y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 53% (determinado por RMN).

Ejemplo 9

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 180 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 3 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 83% (determinado por RMN).

Ejemplo 10

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 5 mL de ácido acético (7 eq.) y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió una sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 95% (determinado por RMN).

Ejemplo 11

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 1,07 g (0,33 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 51% (determinado por RMN).

Ejemplo 12

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20°C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 4,8 g (1,5 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 96% (determinado por RMN).

Ejemplo 13

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió ácido tricloroisocianúrico en la cantidad de 2,91 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 97% (determinado por RMN).

Ejemplo 14

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió ácido tricloroisocianúrico en una cantidad de 0,87 g (0,3 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 71% (determinado por RMN).

Ejemplo 15

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 5 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 52% (determinado por RMN).

Ejemplo 16

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 48 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 85% (determinado por RMN). La solución de RMN (7 mg del producto en 0,7 mL de D²O) se midió después de otros 5 días de reposo a 20 °C. El valor de DS se determinó como 84%. La porción sólida en forma de polvo se dejó reposar a 20 °C durante 100 días y luego la muestra se disolvió en D²O. El valor de DS se determinó como 84%.

Ejemplo 17

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 5 °C durante 72 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol y se secó al vacío durante 20 horas. DS 64% (determinado por RMN).

Ejemplo 18

Preparación de una cloramida de hialuronano

Se disolvieron 5 g de hialuronano (Mw 2200 kg.mol-1) en 250 mL de agua destilada. Posteriormente, se agregaron 2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 3,2 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 40 °C durante 5 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 2,5 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 75% (determinado por RMN).

Ejemplo 19

Preparación de un liofilizado que comprende hialuronano y yoduro de potasio

Se mezcló una solución de hialuronano (1 g, Mw 2.200 kg.mol-1) en 50 mL de agua destilada con una solución de 0,2 g de yoduro de potasio en 5 mL de agua destilada y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Acto seguido, la solución final se ultracongeló a la temperatura de -50 °C y se liofilizó.

Ejemplo 20

Preparación de un liofilizado (cloramida de hialuronano hialuronano yoduro de potasio) generador de yodo El liofilizado preparado según el ejemplo 19 en la cantidad de 15 mg y el liofilizado preparado según el ejemplo 25 en la cantidad de 15 mg se colocaron uno sobre otro de manera apilada (siendo la capa inferior el liofilizado según el ejemplo 19) y se prensaron juntos mecánicamente por medio de un rodillo de vidrio liso a 20 °C, aplicándose la presión correspondiente durante 1 minuto. El material resultante se almacenó en condiciones secas.

Ejemplo 20a

Preparación de un liofilizado (cloramida de hialuronano hialuronano yoduro de potasio) generador de yodo El liofilizado preparado según el ejemplo 19 en la cantidad de 30 mg y el liofilizado preparado según el ejemplo 25 en la cantidad de 3 mg se colocaron uno encima del otro de manera apilada (siendo la capa inferior el liofilizado según el ejemplo 19) y se prensaron mecánicamente juntos por medio de un rodillo de vidrio liso a 20 °C, siendo aplicada la presión requerida durante 1 minuto. El material resultante se almacenó en condiciones secas.

Ejemplo 20b

Preparación de un liofilizado (cloramida de hialuronano hialuronano yoduro de potasio) generador de yodo El liofilizado preparado según el ejemplo 19 en la cantidad de 3 mg y el liofilizado preparado según el ejemplo 25 en la cantidad de 30 mg se colocaron uno encima del otro de manera apilada (siendo la capa inferior el liofilizado según el ejemplo 19) y se prensaron mecánicamente juntos por medio de un rodillo de vidrio liso a 20 °C, siendo aplicada la presión requerida durante 1 minuto. El material resultante se almacenó en condiciones secas.

Ejemplo 21

Preparación de una película autoportante (cloramida de hialuronano lauroil hialuronano yoduro de potasio) generadora de yodo

Las películas autoportantes preparadas de acuerdo con los Ejemplos 31 y 32 se colocaron una sobre otra de manera apilada (siendo la capa inferior lauroil hialuronano yoduro de potasio) y se prensaron mecánicamente juntas por medio de un rodillo de vidrio liso a 20 °C, la presión requerida se aplicó durante 1 minuto. El material resultante se almacenó en condiciones secas.

Ejemplo 22

Preparación de una cloramida de un éster etílico de hialuronano

Se disolvieron 0,5 g del éster etílico de hialuronano preparado según el Ejemplo 1 en 25 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 0,2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 0,32 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 250 mL de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 0,2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 80% (determinado por RMN).

Ejemplo 23

Preparación de una cloramida de un éster bencílico de hialuronano

Se disolvieron 0,5 g de éster bencílico de hialuronano preparado según el Ejemplo 2 en 25 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 0,2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 0,32 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 0,25 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 0,2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 78% (determinado por RMN).

Ejemplo 24

Preparación de una cloramida de formil hialuronano

Se disolvieron 0,5 g de formil hialuronano preparado según el Ejemplo 4 en 25 mL de agua destilada. Posteriormente, se añadieron 0,2 mL de ácido acético y la solución se agitó a la temperatura de 20 °C durante 15 minutos. Luego, se añadió la sal sódica de ácido dicloroisocianúrico en la cantidad de 0,32 g (1 eq.). Luego, la mezcla se agitó a una temperatura de 20 °C durante 24 horas. Posteriormente, la mezcla se precipitó con 0,25 litros de isopropanol y se filtró. La porción sólida se lavó con 0,2 litros de isopropanol, después de lo cual se secó al vacío durante 20 horas. DS 75% (determinado por RMN).

Ejemplo 25

Preparación de una cloramida liofilizada de hialuronano

Una solución de 1 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 16, en 50 mL de agua destilada se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización y se liofilizó. El valor de DS se determinó como 83% por medio de RMN.

Ejemplo 26

Preparación de una cloramida liofilizada de un éster etílico de hialuronano

Una solución de 0,2 g de cloramida de éster etílico de hialuronano, preparada según el ejemplo 22, en 10 mL de agua destilada se ultracongeló a la temperatura de -50 °C inmediatamente después de la homogeneización y se liofilizó. El valor de DS se determinó como 68% por medio de RMN.

Ejemplo 27

Preparación de una cloramida liofilizada de un éster bencílico de hialuronano

Una solución de 0,2 g de cloramida de un éster bencílico de hialuronano, preparada según el Ejemplo 23, en 10 mL de agua destilada se ultracongeló a la temperatura de -50 °C inmediatamente después de la homogeneización y se liofilizó. El valor de DS se determinó como 67% por medio de RMN.

Ejemplo 28

Preparación de una tela no tejida a partir de fibras discontinuas de cloramida de hialuronano

La preparación de una solución al 2% se basó en el uso de una cloramida de hialuronano (Ejemplo 14) con un grado de sustitución de 71% según RMN. El constituyente anterior se pesó y se complementó con agua destilada para obtener la cantidad requerida. Toda la mezcla se agitó en un agitador a temperatura ambiente, siendo la velocidad establecida de este último 500 rpm y el tiempo de agitación 24 horas. La solución final fue clara y ligeramente viscosa. El método de preparación de fibras discontinuas se basa en la precipitación de una solución de polímero en una corriente de un baño de coagulación móvil que contiene 100% de isopropanol. La solución se dosificó a temperatura ambiente a través de boquillas de extrusión en una corriente de un baño de coagulación alimentada a través de tubos giratorios (1 tubo/8 mm de diámetro), controlándose la velocidad del flujo del baño a 1,15 m/s. La formación de fibras discontinuas se obtuvo mediante precipitación. Las fibras formadas se arrastraron en la corriente del baño, se capturaron con peines de separación y se transfirieron al baño de maduración que contenía isopropanol al 100%. Inmediatamente después de entrar al baño de maduración, las fibras crudas se trituraron mediante paletas giratorias de una mezcladora, siendo la relación entre la cantidad de fibras y la del baño de 0,5 g/350 mL. La dispersión final de fibras se filtró a través de un sustrato permeable por medio de un marco de filtro. Para el experimento dado, se usó un marco de filtro que tenía un área de superficie de 64 cm2. Después de haber sido filtradas, las fibras fueron conducidas a un dispositivo de secado por medio de un tejido de punto PAD, estando dicho dispositivo equipado con medios para la fijación de telas no tejidas. Antes de colocarlas en el dispositivo de secado, las fibras se liberaron de los residuos de precipitación por medio de un rodillo. La tela no tejida se secó a una temperatura de 40 °C durante 30 minutos. La capa resultante se separó del sustrato como capa autoportante y se pesó mediante una balanza analítica. El peso superficial de la tela fue de 50,2 g/m2. El grado de sustitución de la tela no tejida formada se determinó en 64% por medio de RMN.

Ejemplo 29

Preparación de una capa nanofibrosa que comprende cloramida de hialuronano

Con el fin de preparar una capa nanofibrosa que contenga ácido hialurónico, se preparó una solución acuosa con la siguiente composición. La concentración de cloramida de hialuronano, que se había preparado según el Ejemplo 5, en la materia seca fue del 37,5%, la concentración de hialuronano natural que tenía un peso molecular de 80 kg.mol-1 fue 37,5%, y la cantidad de poli(óxido de etileno) con un peso molecular de 600 kg.mol-1 fue 25%. La concentración global de la materia seca fue 5%. La solución se transfirió a una jeringa y se hiló electrostáticamente en un colector tipo placa utilizando una boquilla lineal sin aguja, siendo el voltaje y la separación entre el emisor y el colector 50 kV y 16 cm, respectivamente. La dimensión de las fibras fue de 110 ± 27 nm. El valor de DS se determinó como 30% por medio de RMN.

Ejemplo 29a

Preparación de una capa nanofibrosa que comprende hialuronano y yoduro potásico

Con el fin de preparar una capa nanofibrosa que contenga ácido hialurónico, se preparó una solución acuosa con la siguiente composición. La concentración del hialuronano natural que tenía un peso molecular de 80 kg.mol-1 fue 62,5%, la cantidad de poli(óxido de etileno) que tenía un peso molecular de 600 kg.mol-1 fue 25%, y la cantidad de KI fue 12,5%. La concentración global de la materia seca fue 5%. La solución se transfirió a una jeringa y se hiló electrostáticamente en un colector tipo placa utilizando una boquilla lineal sin aguja, siendo el voltaje y la separación entre el emisor y el colector 56 kV y 18 cm, respectivamente. La dimensión de las fibras fue de 140 ± 35 nm.

Ejemplo 30

Preparación de una película autoportante que comprende cloramida de hialuronano

La preparación de la película tuvo lugar en un dispositivo de secado especial donde la película se secó en una cámara cerrada. El aparato está equipado con las placas inferior y superior, siendo controlables las temperaturas de las mismas. La descripción detallada del aparato se proporciona en la publicación Foglarova et al., PV2015-166; Foglarova M. et al., Carbohydrates Polymers 2016, 144, 68-75. La cantidad pesada de 200 mg de la cloramida de hialuronano descrita en el Ejemplo 5 se disolvió en 20 mL de agua desmineralizada, después de lo cual la solución resultante se agitó durante 2 horas. Luego, la solución final se dosificó al dispositivo de secado sobre una almohadilla (vidrio transformado en hidrófobo) y se secó en una cámara cerrada durante 18 horas. Las placas inferior y superior del secador tenían temperaturas de 50 °C y 20 °C, respectivamente. Después de haberse secado, la película se desprendió de la almohadilla y se guardó para uso futuro. El valor de DS se determinó como 60% por medio de RMN.

Ejemplo 31

Preparación de una película autoportante a partir de hialuronano y yoduro potásico (10/1)

La preparación de la película tuvo lugar en el dispositivo descrito en el Ejemplo 30. Las cantidades pesadas de 160 mg de hialuronato de sodio y 16 mg de yoduro de potasio se disolvieron en 16 mL de agua desmineralizada, después de lo cual la solución resultante se agitó durante 15 minutos. Luego, la solución mixta final se dosificó al dispositivo de secado sobre una almohadilla (vidrio transformado en hidrófobo) y se secó en una cámara cerrada durante 7 horas. Las placas inferior y superior del secador tenían temperaturas de 50 °C y 20 °C, respectivamente. Después de haberse secado, la película se desprendió de la almohadilla y se guardó para uso futuro.

Ejemplo 32

Preparación de una película autoportante a partir de lauroil hialuronano y cloramida de hialuronano (3/1)

La preparación de la película tuvo lugar en el dispositivo descrito en el Ejemplo 30. La cantidad pesada de 150 mg del lauroil derivado de hialuronato de sodio (que se describe en el Ejemplo 3) se disolvió en 15 mL de una solución acuosa de 2-propanol (50% p/p) después de lo cual la solución resultante se agitó durante 18 horas. La cantidad pesada de 50 mg de cloramida de hialuronano descrita en el Ejemplo 5 se disolvió en 5 mL de agua desmineralizada, después de lo cual la solución resultante se agitó durante 2 horas. Posteriormente, ambas soluciones se mezclaron durante 30 minutos. Luego, la solución mixta final se dosificó al dispositivo de secado sobre una almohadilla (vidrio transformado en hidrófobo) y se secó en una cámara cerrada durante 7 horas. Las placas inferior y superior del secador tenían temperaturas de 50 °C y 20 °C, respectivamente. Después de haberse secado, la película se desprendió de la almohadilla y se guardó para uso futuro. El valor DS de la cloramida de hialuronano en el material final se determinó como 25% por medio de RMN.

Ejemplo 33

Preparación de una capa nanofibrosa (cloramida de hialuronano hialuronano yoduro de potasio) generadora de yodo

Las capas de nanofibras preparadas según los Ejemplos 29 y 29a se colocaron una sobre otra de manera apilada (siendo la capa inferior hialuronano yoduro de potasio). El material se almacenó en condiciones secas.

Ejemplo 34

Preparación de una mezcla de dos componentes en forma de solución (cloramida de hialuronano yoduro de sodio 1/1) generadora de yodo

Inmediatamente antes de la aplicación, se mezcló por medio de un mezclador estático una solución de 100 mg de cloramida de hialuronano, preparada según el Ejemplo 5, en 3 mL de agua destilada con una solución que contenía 29 mg de yoduro de sodio en 1 mL de agua destilada. Inmediatamente después, en la mezcla resultante se formaron triyoduro y yodo de color naranja.

Ejemplo 35

Preparación de una mezcla de dos componentes en forma de gel (cloramida de hialuronano yoduro de calcio 1/5) generadora de yodo

Inmediatamente antes de la aplicación, se mezcló mediante un mezclador estático una solución de 100 mg de cloramida de hialuronano, preparada según el Ejemplo 5, en 6 mL de agua destilada con una solución que comprendía 758 mg del hialuronano natural con un peso molecular de 1.900 kg. mol-1 y 142 mg de yoduro de calcio en 35 mL de agua destilada. Inmediatamente después, en la mezcla viscosa resultante se formaron triyoduro y yodo de color naranja.

Ejemplo 36

Preparación de un liofilizado de oxicelulosa /cloramida de hialuronano

Una solución de 0,3 g de oxicelulosa (Mw 50 kg.mol-1) y 0,1 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 5, en 100 mL de agua destilada se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 24% por medio de RMN.

Ejemplo 37

Preparación de un liofilizado de alginato/cloramida de hialuronano

Se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización una solución de 0,3 g de alginato (Mw 40 kg.mol-1) y 0,1 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 5, en 100 mL de agua destilada, y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 26% por medio de RMN. Ejemplo 38

Preparación de un liofilizado de carboximetilcelulosa/cloramida de hialuronano

Se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización una solución de 0,3 g de carboximetilcelulosa (Mw 30 kg.mol-1) y 0,03 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 5, en 100 mL de agua destilada, y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 3% por medio de RMN.

Ejemplo 39

Preparación de un liofilizado de sulfato de condroitina/cloramida de hialuronano

Se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización una solución de 0,3 g de sulfato de condroitina (Mw 45 kg.mol-1) y 0,1 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 5, en 100 mL de agua destilada, y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 25% por medio de RMN.

Ejemplo 40

Preparación de un liofilizado de hidroxietilcelulosa/cloramida de hialuronano

Se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización una solución de 0,3 g de hidroxietilcelulosa (Mw 35 kg.mol-1) y 0,1 g de cloramida de hialuronano, preparada según el ejemplo 5, en 100 mL de agua destilada, y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 25% por medio de RMN.

Ejemplo 41

Preparación de un liofilizado de formil hialuronano/cloramida de hialuronano

Se ultracongeló a la temperatura de -50°C inmediatamente después de la homogeneización una solución de 0,3 g de formil hialuronano (Mw 50 kg.mol-1), preparado según el ejemplo 4, y 0,1 g de la cloramida de hialuronano preparada según el ejemplo 5 en 100 mL de agua destilada, y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó como 25% por medio de RMN.

Ejemplo 42

Preparación de un liofilizado de cloramida de hialuronano reticulada con CaCl²

Una solución de cloramida de hialuronano (0,1 g) preparada según el Ejemplo 5 en 100 mL de agua destilada se complementó con 0,01 g de CaCl2.2H2O y la mezcla se agitó a 20 °C durante 1 hora. Después de la homogeneización, la solución viscosa final se ultracongeló a la temperatura de -50 °C y se liofilizó. El valor DS de la cloramida de hialuronano se determinó en 64% por medio de RMN.

Ejemplo 43

Ensayos in vitro de actividad antimicrobiana (Figuras 1A y 1B)

Para los microorganismos individuales sujetos a ensayo, se prepararon suspensiones que tenían una concentración de aproximadamente 105 UFC/mL. La suspensión en cantidad de 100 pL se inoculó sobre la superficie de agar de triptona de soja en placas de Petri (un recuento aproximado de microorganismos aplicados en cada placa fue de 104 UFC). La suspensión se extendió uniformemente sobre toda la superficie de la placa por medio de un asa estéril. Después de remojar la suspensión en el agar, la superficie del agar se cubrió con muestras cuadradas estériles seleccionadas para el ensayo. Las placas con las cepas de bacterias ensayadas se cultivaron a 37 °C durante 24 horas. Los ensayos involucraron los liofilizados de cloramida de hialuronano y yoduro de potasio preparados de acuerdo con el Ejemplo 20, en forma de piezas cuadradas que tenían un peso que variaba entre 25 y 35 mg y unas dimensiones aproximadas de 15 mm x 15 mm, siendo los materiales testigo respectivos liofilizados análogos sin contenido de cloramida de hialuronano, preparados según el Ejemplo 19. Para el ensayo de eficacia, se seleccionó el método de placa de difusión (diseño 2D). Para el cultivo se seleccionó un sustrato no selectivo (agar de triptona-soja). Las muestras de forma cuadrada se ensayaron en los siguientes microorganismos: Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida Albicans, Pseudomona aeruginosa, Staphylolococus epidermidis. La Figura 1 muestra claramente que las composiciones que contienen cloramida de hialuronano junto con un yoduro según la invención proporcionan una eficacia significativamente mayor en comparación con el material testigo que no contiene cloramida de hialuronano.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición antimicrobiana que comprende una cloramida de ácido hialurónico o de ácido hialurónico modificado, donde los hidrógenos del grupo amídico -NH-CO- están sustituidos por átomos de cloro según la fórmula estructural -NCl-CO-, caracterizada porque comprende además un yoduro y el grado de sustitución del ácido hialurónico o del ácido hialurónico modificado por cloro es del 50% al 100% y en el que el ácido hialurónico modificado incluye éster etílico de, éster bencílico de, lauroil, formil, palmitoil o hexanoil hialuronano.

2. Una composición antimicrobiana que comprende una cloramida de ácido hialurónico o de ácido hialurónico modificado, donde los hidrógenos del grupo amídico -NH-CO- están sustituidos por átomos de cloro según la fórmula estructural -NCl-CO-, caracterizada porque los hidrógenos del grupo amídico -NH-CO- están sustituidos por átomos de cloro según la fórmula estructural -NCl-CO-, y al mismo tiempo algunos de los grupos -OH de la cloramida están reemplazados por un grupo -O-CO-R2 y/o algunos de los grupos -CH²-OH están reemplazados por un grupo -CH=O y/o algunos de los grupos -CO-OH están reemplazados por un grupo -CO-OR2, en los que R2 es una cadena lineal o aromática que contiene átomos C¹- C¹⁷

3. La composición antimicrobiana según la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el yoduro se selecciona del grupo que comprende yoduro de sodio, yoduro de potasio, yoduro de calcio, yoduro de magnesio y una mezcla de los mismos.

4. La composición antimicrobiana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el peso molecular de la cloramida está dentro del rango de 5 a 500 kg.mol-1.

5. La composición antimicrobiana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la relación molar de cloramida al yoduro en la composición está dentro del intervalo de 1:1 a 1:5.

6. La composición antimicrobiana según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque comprende además un aditivo en una concentración de hasta 90% en peso.

7. La composición antimicrobiana según la reivindicación 6, caracterizada porque el aditivo se selecciona del grupo que comprende agua, cloruro de sodio, cloruro de calcio, glicerol, ácido hialurónico, sulfato de condroitina, alginato de sodio, oxicelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa o un ácido hialurónico modificado, en los que algunos de los grupos -OH están reemplazados por un grupo -O-CO-R2 y/o algunos de los grupos -CH²-OH están reemplazados por un grupo -CH=O y/o algunos de los grupos -CO-OH están reemplazados por un grupo -CO-OR2, en los que R2 es una cadena lineal o aromática que contiene átomos C¹-C¹⁷

8. La composición antimicrobiana según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque está en forma de sustrato sólido seleccionado del grupo que comprende una película autoportante, un liofilizado, una capa de fibras discontinuas (una tela no tejida), una fibra continua, una tela tejida, una tela de punto, una tela trenzada o una capa de nanofibras, en donde el contenido de cloramida en la composición final, calculado en términos de materia seca, está dentro del rango de 10 a 90%.

9. La composición antimicrobiana según la reivindicación 8, caracterizada porque está en forma de un sustrato sólido compuesto por dos o más capas.

10. La composición antimicrobiana según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque está en forma de dos soluciones o geles separados designados para ser mezclados inmediatamente antes de la aplicación de la composición final, en donde la cloramida del ácido hialurónico o la cloramida del ácido hialurónico modificado está comprendida en la primera solución o gel, y el yoduro está comprendido en la segunda solución o gel, en donde el contenido de cloramida en la composición final, calculado en términos de materia seca, está dentro del rango de 10 a 90% y el contenido de yoduro en la composición final, calculado en términos de materia seca, está dentro del rango de 10 a 90%.

11. Uso de la composición antimicrobiana definida en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la preparación de cubiertas para heridas o para la preparación de dispositivos médicos implantables, preparaciones contra el acné, rellenos antibacterianos, barreras antiadhesivas, membranas, bolsas o envolturas.