ES2918385T3 - Proceso de preparacion de compuestos supramoleculares a base de platino - Google Patents

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Abstract

La presente invención está en relación con los campos de la nanotecnología y la terapéutica del cáncer. En particular, la presente divulgación se relaciona con métodos mejorados para preparar compuestos de platino conjugados con lípidos con alta pureza y buenos rendimientos. La presente divulgación también se relaciona con las nanopartículas que comprenden compuestos de platino conjugados con lípidos con alta eficiencia de carga de fármacos para su uso en quimioterapia, y con métodos para producir nanopartículas dichas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Proceso de preparación de compuestos supramoleculares a base de platino
CAMPO TÉCNICO
[0001] La presente invención está relacionada con los campos de la nanotecnología y la terapéutica del cáncer. En particular, la presente divulgación se refiere a la síntesis de compuestos de platino conjugados con lípidos y además se relaciona con métodos para preparar compuestos de platino conjugados con lípidos con alta pureza y buenos rendimientos. La presente divulgación también se relaciona con nanopartículas que comprenden compuestos de platino conjugados con lípidos con alta eficiencia de carga de fármacos para uso en quimioterapia, y con métodos para producir dichas nanopartículas.
ANTECEDENTES
[0002] Los agentes quimioterapéuticos basados en platino se usan como primera línea de terapia en más del 70% de todos los cánceres. El cisplatino sufre una rápida formación de cis-[Pt(NH3)2Cl(OH2)]+ y cis-[Pt(NH3)2(OH2)]2+, lo que produce nefrotoxicidad. Además, la aquación tanto del carboplatino como del oxaliplatino es significativamente más lenta, lo que resulta en una disminución de la potencia. En el pasado reciente, se ha logrado un progreso considerable en el que Dhar et al. (PNAS, 2008, 105, 17356) generó un complejo de platino (IV) (c,t,c-[Pt(NH3)2(O2CCH2CH2CH2CH2CH3)2Ch] que es suficientemente hidrofóbico para la encapsulación en nanopartículas de PLGA-b-PEG. Sin embargo, el profármaco en este caso tiene que ser procesado intracelularmente en cisplatino. Además, resultaron estrategias alternativas basadas en la conjugación de platino a polímeros (por ejemplo, un complejo de poliamidoamina dendrímero-platino). en una reducción de 200-550 veces en la citotoxicidad que el cisplatino libre. Esto fue el resultado de los fuertes enlaces formados entre el polímero y el platino (J. Pharm. Sci., 2009, 98, 2299). Otro ejemplo es AP5280, un platino unido al copolímero de N-(2-hidroxipropil) metacrilamida que es menos potente que el carboplatino. Aquí, el platino está retenido por un agente quelante de ácido aminomalónico acoplado a la glicina COOH terminal de un espaciador tetrapeptídico (Clin. Can. Res., 2004, 10, 3386; Eur. J. Can., 2004, 40, 291). Además, el documento WO 2010/091192 A2 (Sengupta et al.) describe poli conjugado biocompatible nanopartículas de mer que incluyen un esqueleto de copolímero, una pluralidad de cadenas laterales unidas covalentemente a dicho esqueleto, y una pluralidad de compuestos de platino unidos de manera disociable a dicho esqueleto.
[0003] Las estructuras moleculares de oxaliplatino, cisplatino y carboplatino basadas en lípidos han sido un área atractiva de investigación para el desarrollo de fármacos contra el cáncer debido a su capacidad para formar nanopartículas y proporcionar un efecto mejorado de permeación y retención (EPR). Sin embargo, los informes sobre fármacos de platino conjugados con lípidos son extremadamente raros. Esto se debe a los problemas asociados con los métodos sintéticos de bajo rendimiento y la dificultad de purificar estos compuestos. Lograr buenos rendimientos en las reacciones de acoplamiento (complejación) de lípido a platino sigue siendo un desafío debido a la gran diferencia de solubilidad entre los ligandos basados en lípidos y los precursores de platino. Los ligandos que contienen lípidos son más solubles en disolventes orgánicos, mientras que los precursores de platino son más solubles en agua. Para mejorar la solubilidad de los reactivos, se han usado mezclas de solventes orgánicos y acuosos en la mayoría de las reacciones de complejación reportadas, particularmente si el lípido es insoluble en agua (por ejemplo, colesterol, ver Tabla 1, Ref. 1). Aun así, este problema de solubilidad da como resultado reacciones incompletas. Por lo tanto, la purificación del complejo de platino deseado a partir de materiales de partida sin reaccionar se vuelve difícil. Estas reacciones también tienen inconvenientes, como procedimientos complicados de varios pasos (consulte la Tabla 1, Ref. 3), temperaturas de reacción más altas (consulte la Tabla 1, Ref. 2, 3) y procedimientos de elaboración complicados (consulte la Tabla 1, Ref. 2), etc.
Tabla 1: Estudios comparativos de los procedimientos informados en la literatura para la síntesis de lípidos conjugados complejos de platino
Figure imgf000002_0001
[0004] Se sabe que la purificación adicional de compuestos basados en Pt para obtener un producto que cumpla con los requisitos de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) es un proceso complejo y desafiante. La purificación de los ingredientes farmacéuticos activos (API) de platino conjugados con lípidos finales ha sido problemática porque son difíciles de cristalizar debido a su gran tamaño y naturaleza anfifílica. Los conjugados de Pt(IV)péptido se han purificado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) de fase inversa; sin embargo, no se ha informado sobre la pureza final por métodos analíticos de HPLC (Mukhopadhyay, S. et al., Bioconjug. Chem., 19, 39­ 49 (2008)). Para algunos otros casos, se ha informado que los complejos de Pt(IV) se descomponen en la columna y no se pudieron purificar (Saouma, C. T., Synthetic strategies to improve the cytotoxicity of platinum-based cancer therapeutics. 1-78 (2005) en <http://dspace.mit.edu/handle/1721.1/36279#files-area>). De manera similar, otro método informado para la purificación de complejos de Pt (II) no demuestra la pureza final por HPLC (Tromp, R. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14, 4273-6 (2004)). Se han informado problemas con la purificación de compuestos de Pt(II), especialmente aquellos que contienen ligandos que contienen nitrógeno (Roberts, JD, Inorg. Chim. Acta, 153, 123-127 (1988)). En este caso, el producto de post-purificación era biológicamente menos activo.
[0005] El documento WO 2014/201376 A1 describe compuestos basados en platino que comprenden un resto de platino, un resto enlazador y un resto lipídico y las correspondientes nanopartículas de los mismos.
[0006] La presente invención pretende superar los inconvenientes de la técnica anterior y proporcionar un procedimiento sintético mejorado para obtener una pureza razonablemente buena de los compuestos de platino conjugados con lípidos (API) crudos con altos rendimientos. Ciertos aspectos de la presente invención también proporcionan un método HPLC preparativo sólido para la purificación de compuestos de platino conjugados con lípidos. Ciertos aspectos de la presente invención proporcionan nanoplatinatos estables, potentes y más seguros en la quimioterapia contra el cáncer.
RESUMEN
[0007] La presente descripción proporciona estrategias sintéticas para la preparación de compuestos de platino conjugados con lípidos. La presente invención proporciona un método para preparar un compuesto de platino conjugado con lípidos según la reivindicación 1, en el que el método comprende: hacer reaccionar una sal soluble en agua de un lípido con un compuesto de platino soluble en agua en una solución sustancialmente acuosa para obtener el compuesto de platino conjugado por lípido-compuesto como un precipitado. Otro aspecto proporciona un método para purificar adicionalmente el compuesto de platino conjugado con lípido usando HPLC. Otro aspecto proporciona un método para preparar nanopartículas que comprenden los compuestos de platino conjugados con lípidos descritos en la reivindicación 16.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0008] Con el fin de que la invención pueda entenderse fácilmente y llevarse a la práctica, ahora se hará referencia a formas de realización ejemplares como se ilustra con referencia a las figuras adjuntas. Las figuras, junto con una descripción detallada a continuación, se incorporan y forman parte de la especificación, y sirven para ilustrar más las formas de realización y explicar varios principios y ventajas, de acuerdo con la presente divulgación.
FIG. 1 muestra un perfil de HPLC del compuesto 26 (RT: 10,93 min) en una columna C18 antes del lavado con agua/acetona. La pureza del compuesto es del 82%. Fase móvil: 100% metanol. Detección: 210nm, UV.
FIG. 2 muestra un perfil de HPLC del compuesto 26 (RT: 11,2 min) en una columna C18 después del lavado con agua/acetona. La pureza del compuesto es del 90%. Fase móvil: 100% metanol. Detección: 210nm, UV.
FIG. 3 muestra un ejemplo de perfil analítico del compuesto 25 después de la purificación por HPLC. La pureza es >99,5%. La pureza se calcula después de superponer los espectros en blanco (no se muestra).
FIG. 4 muestra un ejemplo de perfil analítico del compuesto 27 después de la purificación por HPLC. La pureza es del 99,5%. La pureza se calcula después de superponer los espectros en blanco (no se muestra).
FIG. 5 muestra un ejemplo de perfil analítico del compuesto 28 después de la purificación por HPLC. La pureza es del 99%. La pureza se calcula después de superponer los espectros en blanco (no se muestra).
FIGS. 6A y 6B muestran un ejemplo de perfil analítico del compuesto 25 después de la purificación por HPLC. La pureza es del 98,5 % en la columna C18 (FIG. 6A) pero ~100 % en la columna amino (FIG. 6B), lo que demuestra la degradación del compuesto en la columna C18. Este resultado destaca la elección del método de análisis para la pureza.
FIGS. 7A y 7B muestran un ejemplo de perfil analítico del compuesto 27 después de la purificación por HPLC. La pureza es del 59 % en la columna C18 (FIG. 7A) pero del 98 % en la columna amino (FIG. 7B), lo que demuestra la degradación del compuesto en la columna C18. Este resultado destaca la elección del método de análisis para la pureza.
FIG. 8 muestra un histograma DLS de la formulación supramolecular del compuesto 25.
FIG. 9 muestra imágenes de microscopio electrónico de transmisión (TEM) de nanopartículas que comprenden compuestos de platino conjugados con lípidos según la presente invención. Las nanopartículas se muestran con varios aumentos, como se puede ver en las barras de escala de cada imagen.
FIG. 10: Muestra una imagen de microscopio electrónico de criotransmisión (Crio-TEM) de nanopartículas que comprenden compuestos de platino conjugados con lípidos según una forma de realización de la presente invención.
Fig. 11 muestra un histograma DLS de la formulación supramolecular del compuesto 25 con dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE).
Fig. 12 muestra que la formulación del Compuesto 25 (IO-125) que contiene DOPE tiene una mejor eficacia que sin formulaciones de DOPE en líneas celulares A549 y DU145.
Fig. 13 muestra el perfil de HPLC del intermedio Im-06 antes de la formación de la sal de HCl. Como puede verse, la pureza del Im-06 antes de la formación de la sal de HCl fue del 91 %.
Fig. 14 muestra el perfil de HPLC del intermedio Im-06 después de la formación y desalinización de la sal HCl. Como puede verse, la pureza del Im-06 después de la formación de la sal HCl y la desalinización mejoró hasta el 96,7 %.
Fig. 15 muestra el perfil de HPLC del Compuesto 25 después de la cristalización y después de dos suspensiones. Fig. 16 muestra los difractogramas de XRPD 20 de sólidos recuperados de la criba de cristalización exitosa de COMP 25 crudo.
Fig. 17 muestra los difractogramas de XRPD 20 en sólidos después del ciclo de temperatura.
Fig. 18 muestra micrografías PLM de material cristalino obtenido a partir de metanol sembrado: diclorometano (10:90 %v/v).
Fig. 19 muestra difractogramas XRPD 20 de sólidos después de ciclos de temperatura a una concentración aprox. 150 mg/ml.
Figs. 20 y 21 muestran difractogramas XRPD 20 de sólidos después de ciclos de temperatura, heptanos utilizados como antidisolvente.
Fig. 22 muestra difractogramas XRPD 20 de sólidos de cristalización en enfriamiento.
Fig. 23 muestra micrografías PLM de sólidos secos.
Fig. 24 es un cromatograma de HPLC de cristalización por enfriamiento 2.
Fig. 25 muestra difractogramas XRPD 20 de sólidos secos.
Fig. 26 muestra micrografías PLM de sólidos secos.
Fig. 27 es un cromatograma de HPLC de sólidos aislados usando metanol:diclorometano (20:80 %v/v).
Fig. 28 muestra difractogramas XRPD 20 de sólidos secos.
Fig. 29 muestra micrografías PLM de sólidos secos.
Fig. 30 es un cromatograma de HPLC de sólidos aislados usando metanol:diclorometano (20:80 %v/v) con heptanos como antidisolvente.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0009] La invención está definida por las reivindicaciones. Cualquier tema que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines informativos. La presente invención proporciona un procedimiento simple y rentable para la funcionalización de lípidos de compuestos de platino, que forma un compuesto de platino conjugado con lípidos razonablemente puro con un buen rendimiento a partir de la propia mezcla de reacción. Una vez formado, la precipitación inmediata del compuesto de platino conjugado con lípidos impulsa termodinámicamente la reacción hacia la dirección de formación de complejos, lo que conduce a mayores rendimientos. Otras ventajas de ciertas formas de realización ejemplares del proceso descrito incluyen condiciones de reacción suaves, de modo que la reacción se puede completar a temperatura ambiente y una atmósfera de presión en unas pocas horas. En ciertas formas de realización ejemplares, se usa agua como el único solvente. El compuesto de platino conjugado con lípidos se precipita de la mezcla de reacción para dar un producto crudo con un rendimiento de > 50 %, > 60 %, > 70 %, > 80 % o >90 %, o en el intervalo de 70 % a 90 % de rendimiento. El compuesto de platino conjugado con lípidos tiene una pureza bruta de > 70 %, > 80 % o >90 %. En ciertas formas de realización ejemplares, los productos crudos se purifican posteriormente usando cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) semipreparativa o preparativa a una pureza >99,5 %, cumpliendo los requisitos de la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA).
[0010] La presente invención proporciona un método para preparar un compuesto de platino conjugado con lípidos, en el que el método comprende: hacer reaccionar una sal soluble en agua de un lípido de acuerdo con la Fórmula II como se define a continuación con un compuesto de platino soluble en agua en una solución sustancialmente acuosa para obtener el compuesto de platino conjugado con lípidos como un precipitado. Ciertas formas de realización ejemplares comprenden además el paso de filtrar o centrifugar la mezcla de reacción para separar el precipitado de la solución sustancialmente acuosa y, opcionalmente, lavar el precipitado con agua. Sin estar ligado a la teoría, los métodos descritos proporcionan un producto que precipita porque es insoluble en solución acuosa mientras los reactivos permanecen en solución, lo que permite una fácil purificación del producto simplemente filtrando o centrifugando la mezcla de reacción.
[0011] Ciertas formas de realización ejemplares comprenden además el paso de purificar el compuesto de platino conjugado con lípido usando HPLC. La HPLC se utiliza para mejorar aún más la pureza del compuesto de platino conjugado con lípidos a >99,5 % de acuerdo con las pautas de la f Da . Primero se optimizaron los métodos de HPLC en una columna analítica y luego se transfirieron a una escala mayor en una columna preparativa para obtener cantidades en gramos de compuesto de platino conjugado con lípidos puro > 99,5 %. Los métodos de HPLC descritos en el presente documento (véanse los Ejemplos a continuación) son muy robustos e indiferentes a la pureza inicial del compuesto de platino conjugado con lípidos. Los compuestos con una pureza inicial del 20 al 90 % se han purificado satisfactoriamente utilizando los métodos descritos. El proceso de purificación por HPLC también es de alto rendimiento (por ejemplo, > 50 %, > 60 %, > 70 %, > 80 % o >90 % de rendimiento para diferentes compuestos de platino funcionalizados con lípidos). Los compuestos de platino conjugados con lípidos son difíciles de purificar mediante recristalización, pero los métodos de purificación por HPLC descritos en este documento superan ventajosamente esa dificultad.
[0012] En determinadas formas de realización ejemplares, el método de purificación por HPLC usa una columna de fase inversa preparativa. En ciertas formas de realización ejemplares, la columna comprende una fase estacionaria de NH2, una fase estacionaria de fenilo o una fase estacionaria C18. En determinadas formas de realización ejemplares, la columna comprende NH2 o fenilo como fase estacionaria, y el compuesto de platino conjugado con lípidos se eluye usando un método de gradiente. En ciertas formas de realización ejemplares, el método de gradiente comprende eluir con una fase móvil que comprende una mezcla de agua y metanol, donde la elución comienza con la mezcla que tiene un mayor porcentaje de agua y progresa linealmente con el tiempo hasta la mezcla que tiene un mayor porcentaje de metanol. En ciertas formas de realización ejemplares, la columna comprende C18 como fase estacionaria, y el compuesto de platino conjugado con lípidos se eluye usando un método isocrático. En ciertas formas de realización ejemplares, el método isocrático comprende eluir con una fase móvil que comprende 98 % de metanol y 2 % de agua.
[0013] El término "solución sustancialmente acuosa" se define como una solución que comprende principalmente agua, por ejemplo, al menos 90 % de agua, al menos 95 % de agua, al menos 98 % de agua, al menos 99 % de agua y 100 % de agua. Al menos el 99 % de agua puede incluir cualquier cantidad de agua del 99 % o más y hasta el 100 %, por ejemplo, 99,3 % de agua, 99,5 % de agua, 99,8 % de agua, 99,9 % de agua y 100 % de agua.
[0014] En ciertas formas de realización ejemplares, la sal soluble en agua de un lípido y el compuesto de platino soluble en agua se hacen reaccionar a temperatura ambiente. El término "temperatura ambiente" se usa en el sentido convencional, en el sentido de que no se aplica ningún elemento externo de calentamiento o enfriamiento a la reacción. La temperatura ambiente puede incluir temperaturas en el intervalo de, por ejemplo, 10°C a 40°C, 20°C a 30°C, 22°C a 28°C y aproximadamente 25°C. En ciertas formas de realización ejemplares, la sal soluble en agua de un lípido y el compuesto de platino soluble en agua se hacen reaccionar a una atmósfera de presión. Una atmósfera de presión puede incluir un valor dentro de un rango de presiones, por ejemplo, 790-650 mmHg, 780-690 mmHg, 770-730 mmHg y aproximadamente 760 mmHg.
[0015] En ciertas formas de realización ejemplares, la sal soluble en agua de un lípido se selecciona del grupo que consiste en: una sal de litio, una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de rubidio, una sal de cesio, una sal de magnesio, una sal de calcio una sal, una sal de estroncio, una sal de bario y cualquier combinación de las mismas. En algunas formas de realización, la sal soluble en agua de un lípido puede proporcionarse haciendo reaccionar un lípido con una base seleccionada del grupo que consiste en: LiOH, NaOH, KOH, RbOH, CsOH, Mg(OH)2, Ca(OH)2, Sr(OH)2, Ba(OH)2 y cualquier combinación de los mismos.
[0016] En algunas formas de realización, la sal soluble en agua de un lípido puede ser una sal ácida. El ácido para producir la sal de ácido puede ser un ácido Inorgánico u orgánico. Ejemplos de ácidos orgánicos para producir la sal soluble en agua del lípido incluyen, pero no se limitan a ácido trifluoroacético (TFA), ácido acético, ácido antranílico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido canforsulfónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido 1,2-etanodisulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]oct-2-eno-l-carboxílico, ácido 4,4'-metilenbis(3-hidroxi-2-eno-l-carboxílico), ácido glucoheptónico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido glicólico, ácido heptanoico, ácido hidroxinaftoico, ácido láctico, ácido laurilsulfúrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido mucónico, ácido naftalenosulfónico, ácido o-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido oxálico, ácido p-clorobencenosulfónico, ácido propiónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfanílico, ácido tartárico ácido, ácido butilacético terciario, ácido trifluoroacético, ácido trimetilacético y similares. Ejemplos de ácidos orgánicos para producir la sal soluble en agua del lípido incluyen, pero no se limitan a ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido perclórico, ácido nítrico, ácido tiociánico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y similares.
[0017] En algunas formas de realización de los diversos aspectos descritos en el presente documento, el resto de platino es un compuesto de platino (II) o platino (IV). En algunas formas de realización, el compuesto de platino (II) se selecciona del grupo que comprende DACHplatino, cisplatino, oxaliplatino, carboplatino, paraplatino, sartraplatino y varias combinaciones de los mismos. En algunas formas de realización, el compuesto que contiene platino es un compuesto de Pt(II), un compuesto de Pt(IV) o un compuesto de platino que contiene un haluro. En una forma de realización preferida, los compuestos de platino son oxaliplatino.
[0018] El término "lípido" se utiliza en el sentido convencional e incluye compuestos de longitud de cadena variable, desde tan solo unos 2 átomos de carbono hasta unos 28 átomos de carbono. Además, los compuestos pueden estar saturados o insaturados y en forma de cadenas lineales o ramificadas o en forma de estructuras anulares fusionadas o no fusionadas. Los lípidos ejemplares incluyen, pero no se limitan a grasas, ceras, esteroles, esteroides, ácidos biliares, vitaminas liposolubles (tales como A, D, E y K), monoglicéridos, diglicéridos, fosfolípidos, glicolípidos, sulfolípidos, aminolípidos, cromolípidos (lipocromos), glicerofosfolípidos, esfingolípidos, prenolípidos, sacarolípidos, policétidos y ácidos grasos.
[0019] Sin limitaciones, el lípido se puede seleccionar del grupo que consiste en lípidos de esterol, ácidos grasos, alcoholes grasos, glicerolípidos (p. ej., monoglicéridos, diglicéridos y triglicéridos), fosfolípidos, glicerofosfolípidos, esfingolípidos, lípidos de prenol, sacarolípidos, policétidos y cualquier combinación de los mismos. El lípido puede ser un ácido graso poliinsaturado o un alcohol. El término "ácido graso poliinsaturado" o "alcohol graso poliinsaturado", como se usa en el presente documento, significa un ácido graso o alcohol con dos o más dobles enlaces carbono-carbono en su cadena hidrocarbonada. El lípido también puede ser un ácido graso altamente insaturado o un alcohol. El término "ácido graso altamente poliinsaturado" o "alcohol graso altamente poliinsaturado", como se usa en el presente documento, significa un ácido graso o alcohol que tiene al menos 18 átomos de carbono y al menos 3 dobles enlaces. El lípido puede ser un ácido graso omega-3. El término "ácido graso omega-3", tal como se utiliza aquí, significa un ácido graso poliinsaturado cuyo primer doble enlace se produce en el tercer enlace carbono-carbono desde el extremo opuesto al grupo ácido.
[0020] En algunas formas de realización, el lípido se puede seleccionar del grupo que consiste en dicaprilato/dicaprato de 1,3-propanodiol; ácido 10-undecenoico; 1-dotriacontanol; 1-heptacosanol; 1-nonacosanol; 2-etilhexanol; androstanos; araquídico; ácido araquidónico; alcohol araquidílico; ácido behénico; alcohol behenílico; Capmul MCM C10; ácido cáprico; alcohol cáprico; alcohol caprílico; ácido caprílico; éster de ácido caprílico/cáprico de alcohol graso saturado C12-C18; triglicérido caprílico/cáprico; triglicérido caprílico/cáprico; ceramida fosforilcolina (esfingomielina, SPH); ceramida fosforiletanolamina (esfingomielina, Cer-PE); ceramida fosforilglicerol; ácido ceroplástico; ácido cerótico; ácido cerótico; alcohol cerílico; alcohol cetearílico; Ceteth-10; alcohol cetílico; colanos; colestanos; colesterol; ácido cis-11-eicosenoico; ácido cis-11-octadecenoico; ácido cis-13-docosenoico; alcohol cluitílico; coenzima Q10 (CoQ10); dihomo-Y-linolénico; ácido docosahexaenoico; lecitina de huevo; ácido eicosapentaenoico; ácido eicosenoico; ácido elaídico; alcohol elaidolinolenílico; alcohol elaidolinoleílico; alcohol elaidílico; ácido erúcico; alcohol erucílico; estranos; diestearato de etilenglicol (EGDS); ácido gédico; alcohol geddílico; diestearato de glicerol (tipo I) EP (Precirol ATO 5); Tricaprilato/Caprato de Glicerol; Tricaprilato/Caprato de Glicerol (CAPTEX® 355 EP/NF); monocaprilato de glicerilo (Capmul MCM C8 EP); triacetato de glicerilo; Tricaprilato de glicerilo; Tricaprilato/Caprato/Laurato de Gliceril; Tricaprilato de glicerilo/Tricaprato; tripalmitato de glicerilo (tripalmitina); ácido henatriacontílico; alcohol heneicosílico; ácido heneicosílico; ácido heptacosílico; ácido heptadecanoico; alcohol heptadecílico; ácido hexatriacontílico; ácido isoesteárico; alcohol isoestearílico; ácido laceroico; ácido laurico; alcohol laurílico; ácido lignocérico; alcohol lignocerílico; ácido linoelaídico; ácido linoleico; alcohol linolenílico; alcohol de linoleilo; ácido margárico; Aguamiel; ácido melissico; alcohol melissílico; ácido montánico; alcohol montanílico; alcohol miricílico; ácido mirístico; ácido miristoleico; alcohol miristílico; ácido neodecanoico; ácido neoheptanoico; ácido neononanoico; nervónico; ácido nonacosílico; alcohol nonadecílico; ácido no adecílico; ácido no adecílico; ácido oleico; alcohol oleílico; ácido palmítico; ácido palmitoleico; alcohol palmitoleílico; ácido pelargónico; alcohol pelargónico; ácido pentacosílico; alcohol pentadecilico; ácido pentadecílico; ácido fosfatídico (fosfatidato, PA); Fosfatidilcolina (lecitina, PC); Fosfatidiletanolamina (cefalina, PE); Fosfatidilinositol (PI); bisfosfato de fosfatidilinositol (PIP2); Fosfatidilinositol fosfato (PIP); trifosfato de fosfatidilinositol (PIP3); Fosfatidilserina (PS); poligliceril-6-diestearato; embarazadas; dicaprato de propilenglicol; dicaprilocaprato de propilenglicol; dicaprilocaprato de propilenglicol; ácido psílico; ácido recinoleico; alcohol recinoleílico; ácido sapienico; lecitina de soya; Ácido esteárico; estearidónico; alcohol esterilizado; ácido tricosílico; alcohol tridecílico; ácido tridecílico; trioleína; alcohol undecilico; ácido undecilénico; ácido undecílico; ácido vaccénico; ácido a-linolénico; ácido Y-linolénico; una sal de ácido graso de ácido 10-undecenoico, adapaleno, ácido araquídico, ácido araquidónico, ácido behénico, ácido butírico, ácido cáprico, ácido caprílico, ácido cerótico, ácido cis-11-eicosenoico, ácido cis-11-octadecenoico, ácido cis-13-docosenoico, ácido docosahexaenoico, ácido eicosapentaenoico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido heneicosílico, ácido heptacosílico, ácido heptadecanoico, ácido isoesteárico, ácido láurico, ácido lignocérico, ácido linoelaídico, ácido linoleico, ácido montánico, ácido mirístico, ácido miristoleico, neodecanoico ácido, ácido neoheptanoico, ácido neononanoico, ácido nonadecílico, ácido oleico, ácido palmítico, ácido palmitoleico, ácido pelargónico, ácido pentacosílico, ácido pentadecílico, ácido recinoleaico (p. ej., recinoleato de zinc), ácido sapienico, ácido esteárico, ácido tricosílico, ácido tridecílico, ácido undecilénico, ácido undecílico, ácido vaccénico, ácido valérico, ácido a-linolénico, ácido Y-linolénico; y cualquier combinación de los mismos.
[0021] En ciertas formas de realización ejemplares, el lípido es colesterol o derivados del mismo. En algunas formas de realización, el lípido es a-tocoferol.
[0022] La sal soluble en agua de un lípido comprende además un enlazador unido covalentemente al lípido. Como se usa en el presente documento, el término "enlazador" significa un resto orgánico que puede conectar dos partes de un compuesto. Los enlazadores normalmente comprenden un enlace directo a un átomo como el oxígeno o el azufre, una unidad como NR1, C(O), C(O)NH, C(O)O, NHC(O)O, OC(O)O, SO, SO2, SO2NH o una cadena de átomos, como alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, arilalquilo, arilalquenilo, arilalquinilo, heteroarilalquilo, heteroarilalquenilo, heteroarilalquinilo, heterociclilalquilo, heterociclilalquenilo, heterociclilalquinilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, alquilarilalquilo, alquilarilalquenilo, alquilarilalquinilo, alqueniloarilalquilo, alqueniloarilalquenilo, alqueniloarilalquinilo, alquinilarilalquilo, alquinilarilalquenilo, alquinilarilalquinilo, alquilheteroarilalquilo, alquilheteroarilalquenilo, alquilheteroarilalquinilo, alqueniloheteroarilalquilo, alqueniloheteroarilalquenilo, alqueniloheteroarilalquinilo, alquinilheteroarilalquilo, alquinilheteroarilalquenilo, alquinilheteroarilalquinilo, alquilheterociclilalquilo, alquilheterociclilalquenilo, alquilhererociclilalquinilo, alquenilheterociclilalquilo, alquenilheterociclilalquenilo, alquenilheterociclilalquinilo, alquinilheterociclilalquilo, alquinilheterociclilalquenilo, alquinilheterociclilalquinilo, alquilarilo, alquenilarilo, alquinilarilo, alquilheteroarilo, alquenilheteroarilo, alquinilhereroarilo, donde uno o más metilenos pueden estar interrumpidos o terminados por O, S, S(O), SO1, NR(O), C(O)NH, C(O)O, NHC(O)O, OC(O)O, SO2NH, grupo de unión escindible, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, heterocíclico sustituido o no sustituido; donde R1 es hidrógeno, acilo, alifático o alifático sustituido.
[0023] El enlazador unido covalentemente al lípido está representado por la Fórmula II:
en la que,
Figure imgf000007_0001
X1 se selecciona del grupo que consta de -(CH2)nO-, -(CH2)nNHCOO-, -(CH2)nCONH(CH2)nO-, (CH2)nO(CH2)nO-, (CH2)nC=O, -(CH2)nNHCO(CH2)nO- y (CH2VCOO-; donde n=0-2.
[0024] En algunas formas de realización, el enlazador es un enlazador ramificado. El punto de ramificación del conector ramificado puede ser al menos trivalente, pero puede ser un átomo tetravalente, pentavalente o hexavalente, o un grupo que presente tales valencias múltiples. En algunas formas de realización, el punto de bifurcación es -N, -N(Q)-C, -OC, -SC, -SS-C, -C(O)N(Q)-C, -OC(O)N(Q)-C, -N(Q)C(O)-C, o -N(Q)C(O)OC; donde Q es independientemente para cada aparición H o alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, el punto de ramificación es glicerol o un derivado del mismo.
[0025] Un grupo de enlace escindible es uno que es suficientemente estable fuera de la célula, pero que al entrar en una célula diana se escinde para liberar las dos partes que el enlazador mantiene unidas. En una forma de realización preferida, el grupo de enlace escindible se escinde al menos 10 veces o más, preferiblemente al menos 100 veces más rápido en la célula objetivo o bajo una primera condición de referencia (que puede, por ejemplo, seleccionarse para imitar o representar condiciones intracelulares) que en la sangre o suero de un sujeto, o bajo una segunda condición de referencia (que puede, por ejemplo, seleccionarse para imitar o representar condiciones encontradas en la sangre o suero).
[0026] Los grupos de enlace escindibles son susceptibles a agentes de escisión, por ejemplo, pH, potencial redox o la presencia de moléculas degradantes. Generalmente, los agentes de escisión son más frecuentes o se encuentran en niveles o actividades más altos dentro de las células que en el suero o la sangre. Los ejemplos de dichos agentes degradantes incluyen: agentes redox que se seleccionan para sustratos particulares o que no tienen especificidad de sustrato, incluidas, por ejemplo, enzimas oxidativas o reductoras o agentes reductores como los mercaptanos, presentes en las células, que pueden degradar un grupo de enlace escindible redox por reducción; esterasas; amidasas; endosomas o agentes que pueden crear un entorno ácido, por ejemplo, aquellos que dan como resultado un pH de cinco o inferior; enzimas que pueden hidrolizar o degradar un grupo de enlace escindible con ácido actuando como un ácido general, peptidasas (que pueden ser específicas del sustrato) y proteasas y fosfatasas.
[0027] Un enlazador puede incluir un grupo de enlace escindible que es escindible por una enzima particular. El tipo de grupo enlazante escindible incorporado en un enlazador puede depender de la célula a la que se dirige. Por ejemplo, los ligandos dirigidos al hígado pueden unirse a los lípidos catiónicos a través de un conector que incluye un grupo éster. Las células hepáticas son ricas en esterasas y, por lo tanto, el enlazador se escindirá de manera más eficiente en las células hepáticas que en los tipos de células que no son ricas en esterasas. Otros tipos de células ricas en esterasas incluyen células de pulmón, corteza renal y testículos. Los enlazadores que contienen enlaces peptídicos se pueden usar cuando se dirigen a tipos de células ricas en peptidasas, como células hepáticas y sinoviocitos.
[0028] En algunas formas de realización, el grupo de enlace escindible se escinde al menos 1,25, 1,5, 1,75, 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50 o 100 veces más rápido en la célula (o en condiciones in vitro seleccionadas para imitar condiciones intracelulares) en comparación con la sangre o el suero (o en condiciones in vitro seleccionadas para imitar las condiciones extracelulares). En algunas formas de realización, el grupo de unión escindible se escinde en menos del 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 10 %, 5 % o 1 % en la sangre (o condiciones in vitro seleccionadas para imitar las condiciones extracelulares) en comparación con en la célula (o en condiciones in vitro seleccionadas para imitar las condiciones intracelulares).
[0029] Los grupos enlazantes escindibles ejemplares incluyen, pero no se limitan a grupos enlazantes escindibles redox (p. ej., -S-S y -C(R)2-S-S-, en los que R es H o alquilo C1-C6 y al menos un R es alquilo C1-C6 tal como CH3 o CH2CH3); grupos de enlace escindibles a base de fosfato (p. ej., -OP(O)(OR)-O-, -OP(S)(OR)-O-, -OP(S)(SR)-O-, -SP(O)(OR))-O-, -OP(O)(O)-S-, -SP(O)(O)-S-, -OP(S)(ORk)-S-, -SP(S)(O)-O-, -OP(O)(R)-O-, -OP(S)(R)-O-, -SP(O)(R)-O-, -SP(S)(R)-O-, -SP(O)(R)-S-, -OP(S)(R)-S-,. -OP(O)(OH)-O-, -OP(S)(OH)-O-, -OP(S)(SH)-O-, -SP(O)(OH)-O-, -OP(O)(OH)-S-, -SP(O)(OH)-S-, -OP(S)(OH)-S-, -SP(S)(OH)-O-, -OP(O)(H)-O-, -OP(S)(H)-O-, -SP(O)(H)-O-, -SP(S)(H)-O-, -SP(O)(H)-S-y -OP(S)(H)-S-, en los que R está opcionalmente sustituido alquilo C1-C10 lineal o ramificado); grupos enlazantes separables de ácidos (p. ej., hidrazonas, ésteres y ésteres de aminoácidos, -C=NN-y -OC(O)-); grupos de unión escindibles basados en éster (p. ej., -C(O)O-); grupos de enlace escindibles basados en péptidos (por ejemplo, grupos de enlace que son escindidos por enzimas como peptidasas y proteasas en las células, por ejemplo, -NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-, donde RA y RB son los grupos R de los dos aminoácidos adyacentes). Un grupo de enlace escindible basado en un péptido comprende dos o más aminoácidos. En algunas formas de realización, el enlace de escisión basado en péptidos comprende la secuencia de aminoácidos que es el sustrato para una peptidasa o una proteasa que se encuentra en las células.
[0030] En algunas formas de realización, un grupo de enlace escindible con ácido es escindible en un entorno ácido con un pH de aproximadamente 6,5 o inferior (p. ej., aproximadamente 6,5, 6,0, 5,5, 5,0 o inferior), o mediante agentes tales como enzimas que pueden actuar como un ácido general.
[0031] Los conectores según la presente invención incluyen restos que comprenden dos o más moléculas de carbono tales como, por ejemplo, etilendiamina, etilenglicol, glicina, beta-alanina y polietilenglicol (PEG) de peso molecular de aproximadamente 44 a aproximadamente 200 kD. Además, debe entenderse a partir de la presente divulgación que el resto de platino y/o el lípido pueden modificarse para comprender grupos funcionales para unirse a la molécula conectora.
[0032] En ciertas formas de realización ejemplares, la sal soluble en agua de un lípido puede proporcionarse haciendo reaccionar un lípido o un enlazador unido covalentemente a un lípido con una base seleccionada del grupo que consiste en: LiOH, NaOH, KOH, RbOH, CsOH, Mg(OH)2 , Ca(OH)2, Sr(OH)2 , Ba(OH)2, y cualquier combinación de los mismos. En algunas formas de realización, un lípido o un enlazador unido covalentemente a un lípido se hace reaccionar con LiOH para proporcionar la sal soluble en agua del lípido.
[0033] En ciertas formas de realización ejemplares, el compuesto de platino soluble en agua está representado por la Fórmula V:
Figure imgf000008_0001
En la que,
X1, X2, X3 y X4 se seleccionan independientemente de el grupo que consiste en haluro, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxilo, H2O, alcoxi, tiol, tioalquilo, O-acilo y cualquier combinación de los mismos.
[0034] X1 y X2 pueden ser ligandos monodentados o bidentados. En algunas formas de realización, X1 y X2 son amino, por ejemplo, NH3 o diaminociclohexilo (DACH). En algunas formas de realización, X3 y X4 son cada uno H2O. En ciertas formas de realización ejemplares, el compuesto de platino soluble en agua se obtiene haciendo reaccionar un compuesto de platino de Fórmula V, en la que X1 y X2 comprenden un ligando amino bidentado y X3 y X4 comprenden cada uno un haluro, con AgNO3 y H2O. En algunas formas de realización de este paso, X1 y X2 son DACH y X3 y X4 son cada uno Cl.
[0035] Los métodos descritos de la presente invención se pueden usar para sintetizar diversos compuestos de platino conjugados con lípidos. En ciertas formas de realización ejemplares, el compuesto de platino conjugado con lípidos está representado por la Fórmula V:
Figure imgf000008_0002
en la que,
X1 X2, X3 y X4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en haluro, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxilo, alcoxi, tiol, tioalquilo, O-acilo y cualquier combinación de los mismos.
[0036] Los compuestos de platino conjugados con lípidos descritos en el presente documento están representados por la Fórmula (VII):
Figure imgf000008_0003
en la que
X es NH o N-CH2COO-;
X I se selecciona de un grupo que comprende -(CH2)nO-, -(CH2)nNHCOO-, -(CH2)nCONH(CH2)nO-, (CH2)nO(CH2)nO-, (CH2)nC=O, -(CH2)nNHCO(CH2)nO- y (CH2)n-COO-;
Z es un compuesto de platino según la Fórmula V, en la que el platino forma parte del anillo de Fórmula VII; y n es 0, 1o 2.
[0037] Los ejemplos de compuestos de Fórmula (VII) incluyen, pero no se limitan a los siguientes compuestos:
Figure imgf000009_0001
Compuesto 27
Figure imgf000010_0001
Compuesto 38
Figure imgf000010_0002
Figure imgf000011_0001
[0038] Los ejemplos de compuestos de Fórmula (IX) incluyen, pero no se limitan a los siguientes compuestos:
Figure imgf000012_0001
[0039] La divulgación también proporciona los siguientes compuestos:
Figure imgf000012_0002
[0040] En algunas formas de realización de los diversos aspectos descritos en el presente documento, el compuesto de platino de Fórmula (V) se selecciona de un grupo que comprende los compuestos 43-65 y 73-85 y el Compuesto 95. En una forma de realización preferida, el compuesto de Pt es DACH-Pt.
Figure imgf000012_0003
Figure imgf000013_0001
Compuesto 63 Compuesto 64
Figure imgf000013_0002
o
Compuesto 65 Compuesto 73
Figure imgf000013_0003
= r o, qu o, p o Compuesto 74 Compuesto7'
Figure imgf000014_0001
[0041] En los compuestos anteriores, Ri es un lípido enlazador y n es 1 a menos que se defina de otro modo.
[0042] Algunas formas de realización ejemplares de la presente invención proporcionan nanopartículas que comprenden los compuestos de platino conjugados con lípidos descritos y métodos para producir dichas nanopartículas. Los métodos descritos proporcionan ventajosamente una alta eficiencia de encapsulación, una alta carga de fármaco, un tamaño uniforme y una buena estabilidad. En ciertas formas de realización ejemplares, se describen métodos para producir un autoensamblaje supramolecular anfifílico pegilado liofilizado estable de una formulación del Compuesto 25 con alta eficiencia de carga de fármaco para uso en quimioterapia. Para aclarar las características de la presente invención, se describen a continuación en los Ejemplos algunos ejemplos de su implementación con diferentes % en moles de ingredientes farmacéuticos activos e inactivos. Debe entenderse que aunque los Ejemplos describen formulaciones que comprenden el Compuesto 25, cualquier compuesto de platino conjugado con lípidos descrito en la presente descripción puede sustituirse para producir nanopartículas de la presente invención.
[0043] Se describe un método para preparar una nanopartícula, en el que el método comprende: mezclar un compuesto de platino que comprende un resto de platino y un lípido conectado a dicho resto de platino con un colípido en presencia de un disolvente para obtener la nanopartícula. El compuesto de platino se prepara de acuerdo con los métodos descritos en este documento. En determinadas formas de realización ejemplares, el disolvente se selecciona del grupo que comprende cloroformo, metanol, diclorometano, etanol y cualquier combinación de los mismos. En determinadas formas de realización ejemplares, el colípido se selecciona del grupo que consiste en fosfatidilcolina de soja (totalmente hidrogenada), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetalonamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000], dioleoil fosfatidilcolina (DOPC), DSPE-PEG-OMe, dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE), dipalmipoil fosfatidilcolina (DPPC) y cualquier combinación de los mismos. En ciertas formas de realización ejemplares, el método para preparar una nanopartícula comprende además los pasos de secado, incubación y adición opcional de un estabilizador. En ciertas formas de realización ejemplares, el estabilizador se selecciona del grupo que consiste en DSPE-PEG-OMe, DSPE-PEGNH2, PEG, sal Inorgánica, carbohidrato y cualquier combinación de los mismos. En ciertas formas de realización ejemplares, la sal inorgánica se selecciona del grupo que consiste en cloruro amónico, cloruro potásico, cloruro sódico, hidrógeno fosfato disódico, dihidrógeno fosfato sódico y cualquier combinación de los mismos. En ciertas formas de realización ejemplares, el carbohidrato se selecciona del grupo que consiste en glucosa, dextrosa, sacarosa, trehalosa, manitol, lactosa y cualquier combinación de los mismos. En determinadas formas de realización ejemplares, los co-lípidos comprenden fosfatidilcolina de soja (hidrogenada) (HSPC) y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetalonamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000] (DSPEPEG2000). En determinadas formas de realización ejemplares, la proporción de % en moles del compuesto de platino (Pt) y los colilípidos (Pt:HSPC:DSPE-PEG2000) es de aproximadamente 30-32:55-60:4-5, o de aproximadamente 30: 55:4 a aproximadamente 32:60:5. En determinadas formas de realización ejemplares, la proporción de % en moles del compuesto de platino (Pt) y los colilípidos (Pt:HSPC:DSPE-PEG2000) es de aproximadamente 4-5:30-32:55-60, o de aproximadamente 4: 30:55 a aproximadamente 5:32:60. En determinadas formas de realización ejemplares, los co-lípidos comprenden fosfatidilcolina de soja (hidrogenada) (HSPC), colesterol (CHOL) y 1,2-Distearoil-sn-Glicero-3-Fosfoetalonamina-N-[Metoxi(Polietilenglicol)-2000] (DSPE-PEG2000). En determinadas formas de realización ejemplares, la proporción de % en moles del compuesto de platino (Pt) y los colilípidos (Pt:HSPC:CHOL:DSPE-PEG2ooo) es de aproximadamente 20-35:60-70:3-15:1-5, o desde aproximadamente 20:60:3:1 hasta aproximadamente 35:70:15:5. En determinadas formas de realización ejemplares, la proporción de % en moles del compuesto de platino (Pt) y los colilípidos (Pt:HSPC:CHOL:DSPE-PEG2000) es de aproximadamente 1-5:20-35:60-70:3-15., o desde aproximadamente 1:20:60:3:1 hasta aproximadamente 5:35:70:15. En algunas formas de realización, la proporción de % en moles HSPC:CHOL:Pt:DSPE-PEG2000 es 55:3:38:4 % en moles.
[0044] En determinadas formas de realización ejemplares, el colilípido es DOPE. El % en moles del compuesto de platino (Pt) y el lípido DOPE puede oscilar entre 20 y 35:30 y 50. En determinadas formas de realización, el % en moles del compuesto de platino (Pt) y el lípido DOPE puede oscilar entre 22,5 y 27,5:35-50. En realizaciones, el % en moles del compuesto de platino (Pt) y el lípido DOPE es de aproximadamente 40:25. En determinadas formas de realización ejemplares, los co-lípidos comprenden DOPE, soja-fosfatidilcolina (hidrogenada) (HSPC), colesterol (CHOL) y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetalonamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000] (DSPE-PEG2000). En algunas formas de realización, los co-lípidos son DOPE y HSPC y la proporción de % en moles de DOPE y HSPC es de aproximadamente 30-50:25-35 o de aproximadamente 30:25 a aproximadamente 50:35. En algunas formas de realización, los co-lípidos son DOPE y colesterol y la proporción de % en moles de DOPE a colesterol es de aproximadamente 30-50:1-5 o de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 50:5. En algunas formas de realización, los co-lípidos son DOPE y DSPE-PEG2000 y la relación de % en moles de DOPE a DSPE-PEG2000 es de aproximadamente 30-50:1-10 de aproximadamente 30:1 a 50:4. En determinadas formas de realización ejemplares, la proporción de % en moles del compuesto de platino (Pt) y los colilípidos (Pt:DOPE:HSPC:CHOL:DSPE-PEG2000) es de aproximadamente 20-40:30-50:25-35:3-15:1-5. En una forma de realización, la relación de % en moles de Pt:DOPE:HSPC:CHOL:DSPE-PEG2000 es de aproximadamente 25:40:28:3:4.
[0045] Ciertas formas de realización ejemplares se relacionan con la síntesis de una serie de nanopartículas a base de platino en las que el diaminociclohexil-Pt (DACH-Pt) tiene un enlace covalente monocarboxilado a través de un ácido carboxílico y un enlace de coordinación con oxígeno de amida. Se utilizan moléculas de dicarbonilo (ácidos dicarboxílicos) tales como ácido succínico, ácido malónico y ácido oxálico que eventualmente forman anillos de siete, seis y cinco miembros con platino (II) respectivamente. El conector entre el anillo de platino y el colesterol ayuda a formar enlaces seleccionados de un grupo que comprende enlace carbamato (compuestos 1, 2, 3), enlace éter (compuestos 6, 4, 5) o similares o cualquier combinación de los mismos. Por lo tanto, algunas de las formas de realización de la presente divulgación se relacionan con compuestos representados por el esqueleto general: lípido-enlazador-dicarbonilo. Estas moléculas se utilizan para complejar compuestos de platino tales como DACH-Pt, oxaliplatino, cisplatino, carbenos que contienen platino u otros platinados y compuestos de platino, a través de enlaces covalentes y/o de coordinación.
[0046] En una forma de realización de la presente descripción, también se proporcionan varias variantes de compuestos basados en platino tales como racematos, diastereoisómeros y similares (por ejemplo, Compuestos 1-6).
[0047] En una forma de realización de la presente descripción, puede usarse cualquier molécula que tenga dos grupos carbonilo. En una forma de realización, la molécula de dicarbonilo es un ácido dicarboxílico, como, por ejemplo, ácido succínico, ácido malónico o ácido oxálico.
[0048] La divulgación también proporciona partículas que comprenden uno o más de los compuestos basados en platino descritos en el presente documento. Generalmente, la partícula descrita en este documento puede tener cualquier forma, por ejemplo, esférica, de varilla, elíptica, cilíndrica, de cápsula o de disco; y estas partículas pueden ser parte de una red o un agregado.
[0049] En algunas formas de realización, la partícula es una micropartícula o una nanopartícula. Como se usa aquí, el término "micropartícula" se refiere a una partícula que tiene un tamaño de partícula de alrededor de 1 pm a alrededor de 1000 pm. Como se usa en el presente documento, el término "nanopartícula" se refiere a partículas que tienen un tamaño de partícula de aproximadamente 0,1 nm a aproximadamente 1000 nm. Generalmente, las partículas tienen cualquier tamaño desde nm hasta milímetros. En algunas formas de realización, las partículas pueden tener un diámetro promedio que oscila entre aproximadamente 5 nm y aproximadamente 5000 nm. En algunas formas de realización, las partículas tienen un diámetro promedio de aproximadamente 50 nm a aproximadamente 2500 nm, de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 2000 nm, de aproximadamente 150 nm a aproximadamente 1700 nm, de aproximadamente 200 nm a aproximadamente 1500 nm, o aproximadamente 260 nm.. En algunas formas de realización, las partículas tienen un diámetro promedio de alrededor de 30 nm a alrededor de 150 nm o alrededor de 50 nm a alrededor de 250 nm. En algunas formas de realización, las partículas tienen un diámetro promedio de alrededor de 100 nm a alrededor de 1000 nm, de alrededor de 200 nm a alrededor de 800 nm, de alrededor de 200 nm a alrededor de 700 nm, o de alrededor de 300 nm a alrededor de 700 nm.
[0050] En algunas formas de realización, la partícula tiene un tamaño promedio de alrededor de 50 a alrededor de 1000 nm. En una forma de realización adicional, las nanopartículas de la presente invención están en el rango de alrededor de 50 a alrededor de 500 nm. En otra forma de realización, las nanopartículas de la presente invención están en el rango de alrededor de 50 a alrededor de 200 nm. En una forma de realización, la partícula tiene un tamaño de alrededor de 50 a alrededor de 100 nm.
[0051] Un experto en la materia entenderá que las partículas suelen exhibir una distribución de tamaños de partículas alrededor del "tamaño" indicado. A menos que se indique lo contrario, el término "tamaño de partícula", como se usa en este documento, se refiere al modo de una distribución de tamaño de partículas, es decir, el valor que se presenta con mayor frecuencia en la distribución de tamaño. Los métodos para medir el tamaño de partícula son conocidos por un experto en la materia, por ejemplo, mediante dispersión de luz dinámica (como espectroscopia de fotocorrelación, difracción láser, dispersión de luz láser de ángulo bajo (LALLS) y dispersión de luz láser de ángulo medio (MALLS)), métodos de oscurecimiento de la luz (como el método de análisis de Coulter) u otras técnicas (como la reología y la microscopía de luz o electrónica).
[0052] En algunas formas de realización, las partículas pueden ser sustancialmente esféricas. Lo que se entiende por "sustancialmente esférico" es que la relación de las longitudes de los ejes perpendiculares más largos a los más cortos de la sección transversal de la partícula es menor o igual a aproximadamente 1,5. Sustancialmente esférico no requiere una línea de simetría. Además, las partículas pueden tener texturas superficiales, tales como líneas, muescas o protuberancias que son de pequeña escala en comparación con el tamaño total de la partícula y aún ser sustancialmente esféricas. En algunas formas de realización, la relación de longitudes entre los ejes más largo y más corto de la partícula es menor o igual a aproximadamente 1,5, menor o igual a aproximadamente 1,45, menor o igual a aproximadamente 1,4, menor o igual a aproximadamente 1,35, menor o igual a aproximadamente 1,30, menor o igual a aproximadamente 1,25, menor o igual a aproximadamente 1,20, menor o igual a aproximadamente 1,15 menor o igual a aproximadamente 1,1. Sin pretender limitarse a una teoría, el contacto superficial se minimiza en partículas que son sustancialmente esféricas, lo que minimiza la aglomeración indeseable de las partículas durante el almacenamiento. Muchos cristales o escamas tienen superficies planas que pueden permitir grandes áreas de contacto superficial donde puede ocurrir aglomeración por interacciones iónicas o no iónicas. Una esfera permite el contacto en un área mucho más pequeña.
[0053] En algunas formas de realización, las partículas tienen sustancialmente el mismo tamaño de partícula. Las partículas que tienen una amplia distribución de tamaños donde hay partículas relativamente grandes y pequeñas permiten que las partículas más pequeñas llenen los espacios entre las partículas más grandes, creando así nuevas superficies de contacto. Una distribución de tamaño amplia puede dar como resultado esferas más grandes al crear muchas oportunidades de contacto para la aglomeración de unión. Las partículas descritas en este documento se encuentran dentro de una distribución de tamaño estrecha, lo que minimiza las oportunidades de aglomeración por contacto. Lo que se entiende por "distribución de tamaño estrecha" es una distribución de tamaño de partícula que tiene una relación del diámetro de volumen del percentil 90 de las partículas esféricas pequeñas al diámetro de volumen del percentil 10 menor o igual a 5. En algunas formas de realización, el diámetro volumétrico del percentil 90 de las partículas esféricas pequeñas al diámetro volumétrico del percentil 10 es inferior o igual a 4,5, inferior o igual a 4, inferior o igual a 3,5, inferior o igual a 3, menor o igual a 2,5, menor o igual a 2, menor o igual a 1,5, menor o igual a 1,45, menor o igual a 1,40, menor o igual a 1,35, menor o igual a 1,3, menor menor o igual a 1,25, menor o igual a 1,20, menor o igual a 1,15, o menor o igual a 1,1.
[0054] La Desviación Estándar Geométrica (DEG) también se puede usar para indicar la distribución estrecha de tamaños. Los cálculos de DEG implicaron la determinación del diámetro de corte efectivo (DCE) en los porcentajes acumulados inferiores al 15,9 % y al 84,1 %. DEG es igual a la raíz cuadrada de la relación de DCE inferior al 84,17 % a DCE inferior al 15,9 %. El DEG tiene una distribución de tamaño estrecha cuando DEG<2.5. En algunas formas de realización, DEG es inferior a 2, inferior a 1,75 o inferior a 1,5. En una forma de realización, DEG es inferior a 1,8.
[0055] Además de los compuestos de platino descritos en el presente documento, la partícula puede comprender colípidos y/estabilizadores. Se pueden incluir lípidos adicionales en las partículas para una variedad de propósitos, como prevenir la oxidación de lípidos, estabilizar la bicapa, reducir la agregación durante la formación o unir ligandos a la superficie de la partícula. Puede estar presente cualquiera de varios lípidos adicionales y/u otros componentes, incluidos lípidos anfipáticos, neutros, catiónicos, aniónicos y lípidos de fusión programables. Dichos lípidos y/o componentes se pueden usar solos o en combinación. Uno o más componentes de la partícula pueden comprender un ligando, por ejemplo, un ligando dirigido.
[0056] En algunas formas de realización, la partícula comprende además un fosfolípido. Sin limitaciones, los fosfolípidos pueden ser de origen natural, como fosfolípidos de yema de huevo o de soja, o de origen sintético o semisintético. Los fosfolípidos se pueden purificar o fraccionar parcialmente para comprender fracciones puras o mezclas de fosfatidilcolinas, fosfatidilcolinas con grupos acilo definidos que tienen de 6 a 22 átomos de carbono, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilinositoles, ácidos fosfatídicos, fosfatidilserinas, esfingomielina o fosfatidilgliceroles. Los fosfolípidos adecuados incluyen, entre otros, fosfatidilcolina, fosfatidilglicerol, lecitina, p,Y-dipalmitoil-a-lecitina, esfingomielina, fosfatidilserina, ácido fosfatídico, cloruro de N-(2,3-di(9-(Z)-octadeceniloxi))-prop-1-il-N,N,N-trimetilamonio, fosfatidiletanolamina, lisolecitina, lisofosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, cefalina, cardiolipina, cerebrósidos, dicetilfosfato, dioleoilfosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilglicerol, dioleoilfosfatidilglicerol, palmitoil-tearoiloleoilfosfatidil-oleoil-fosfatidilcolina, estearoil-palmitoilfosfatidilcolina, dipalmitoil-fosfatidiletanolamina, di-estearoilfosfatidiletanolamina, di-mirstoil-fosfatidilserina, dioleil-fosfatidilcolina, dimiristoil fosfatidilcolina (DMPC), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), fosfatidilcolina de huevo (POPC)), diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfato atidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), -fosfatidiletanolamina (POPE), dioleoil­ fosfatidiletanolamina 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato (DOPE-mal), 1-estearoil-2-oleoil fosfatidilcolina (SOPC), 1,2-diestearoil-sn-glicem-3-fosfoetanolamina (DSPE) y cualquier combinación de los mismos. También se pueden usar lípidos que no contienen fósforo. Estos incluyen, por ejemplo, estearilamina, docecilamina, palmitato de acetilo, amidas de ácidos grasos y similares. Otros compuestos que carecen de fósforo, como esfingolípidos, familias de glucoesfingolípidos, diacilgliceroles, y p-aciloxiácidos, también se pueden usar.
[0057] En algunas formas de realización, el fosfolípido en la partícula se selecciona del grupo que consiste en 1,2-Didecanoil sn-glicero-3-fosfocolina; 1,2-dierucoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2-dierucoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1.2- dierucoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-dierucoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-dilinoleoil-snglicero-3-fosfocolina; 1,2-dilauroil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2 -dilauroil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1,2-dilauroil-snglicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-dilauroil-sn-glicero- 3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-dilauroil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1 -glicerol) (sal de amonio); 1,2 -dilauroil-sn-glicero-3-fosfoserina (sal sódica); 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-dimiristoil-sn-g//cero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-dimiristoil-sn - glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal de amonio); 1,2-dimiristoil-snglicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal de sodio/amonio); 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfoserina (sal sódica); 1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-dioleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoserina (sal sódica); 1,2-dipalmitoil-snglicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal de amonio); 1.2- dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoserina (sal sódica); 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sodio); 1,2-diestearoil-snglicero-3-fosfocolina; 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1,2-diestearoil-sn-glicero-3 [fosfo-rac-(1-glicerol) (sal sódica); 1,2-diestearoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol) (sal de amonio); 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoserina (sal sódica); huevo-PC; huevo hidrogenado PC; PC de soja hidrogenada; IMiristoil -sn-glicero-3-fosfocolina; 1-palmitoil-snglicero-3-fosfocolina; 1-estearoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-miristoil-2-palmitoil-sn-glicero 3-fosfocolina; 1 -miristoil-2-estearoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-palmitoil-2-miristoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina; 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3[fosfo-rac-(1-glicerol)] (sal sódica); 1-palmitoil-2-estearoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-estearoil-2-miristoil-sn-glicero-3-fosfocolina; 1-estearoil-2-oleoilsn-glicero-3-fosfocolina; y 1-estearoil-2-palmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina. En algunas formas de realización, el fosfolípido es SPOC, PC de huevo o PC de soja hidrogenada (HSPC). En uno, el fosfolípido de la composición es HSPC. En algunas formas de realización, el lípido es DOPE.
[0058] En algunas formas de realización, la partícula comprende además un polietilenglicol (PEG). El PEG puede estar incluido en la partícula por sí mismo o conjugado con un componente presente en la partícula. Por ejemplo, el PEG se puede conjugar con el compuesto basado en platino o un componente estabilizador/colípido de la partícula. En algunas formas de realización, el PEG se conjuga con un componente colipídico de la partícula. Sin limitaciones, el PEG se puede conjugar con cualquier colípido. Por ejemplo, el colípido conjugado con PEG se puede seleccionar del grupo que consiste en diacilgliceroles y dialquilgliceroles conjugados con PEG, fosfatidiletanolamina conjugada con PEG, conjugado con PEG con ácido fosfatídico, ceramidas conjugadas con PEG (véase la patente de EE. dialquilaminas, 1,2-diaciloxipropan-3-aminas conjugadas con PEG y 1,2-diestearoil-sn-glicem-3-fosfoetanolamina (DSPE) conjugadas con PEG, y cualquier combinación de las mismas. En algunas formas de realización, el lípido conjugado con PEG es 1,2-diestearoil-sn-glicem-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)-2000] (DSPE-PEG2000)-. En algunas formas de realización, la partícula además comprende un tensioactivo. Los tensioactivos encuentran una amplia aplicación en formulaciones tales como emulsiones (incluyendo microemulsiones) y liposomas. La forma más común de clasificar y clasificar las propiedades de los diferentes tipos de tensioactivos, tanto naturales como sintéticos, es mediante el uso del equilibrio hidrófilo/lipófilo (HLB). La naturaleza del grupo hidrófilo (también conocido como "cabeza") proporciona los medios más útiles para categorizar los diferentes tensioactivos utilizados en las formulaciones (Rieger, en Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, NY, 1988, pág.. 285).
[0059] Si la molécula de tensioactivo no está ionizada, se clasifica como tensioactivo no iónico. Los tensioactivos no iónicos encuentran una amplia aplicación en productos farmacéuticos y cosméticos y se pueden utilizar en una amplia gama de valores de pH. En general, sus valores de HLB oscilan entre 2 y aproximadamente 18, según su estructura. Los tensioactivos no iónicos incluyen ésteres no iónicos tales como ésteres de etilenglicol, ésteres de propilenglicol, ésteres de glicerilo, ésteres de poliglicerilo, ésteres de sorbitán, ésteres de sacarosa y ésteres etoxilados. Las alcanolamidas y éteres no iónicos tales como etoxilatos de alcoholes grasos, alcoholes propoxilados y polímeros de bloque etoxilados/propoxilados también se incluyen en esta clase. Los tensioactivos de polioxietileno son los miembros más populares de la clase de tensioactivos no iónicos.
[0061] Si la molécula de tensioactivo lleva una carga negativa cuando se disuelve o dispersa en agua, el tensioactivo se clasifica como aniónico. Los tensioactivos aniónicos incluyen carboxilatos como jabones, lactilatos de acilo, amidas de acil de aminoácidos, ésteres de ácido sulfúrico como sulfatos de alquilo y sulfatos de alquilo etoxilados, sulfonatos como sulfonatos de benceno de alquilo, isetionatos de acilo, tauratos y sulfosuccinatos de acilo y fosfatos. Los miembros más importantes de la clase de tensioactivos aniónicos son los sulfatos de alquilo y los jabones.
[0062] Si la molécula de tensioactivo lleva una carga positiva cuando se disuelve o dispersa en agua, el tensioactivo se clasifica como catiónico. Los tensioactivos catiónicos incluyen sales de amonio cuaternario y aminas etoxiladas. sales de amonio cuaternarias son los miembros más utilizados de esta clase.
[0063] Si la molécula de tensioactivo tiene la capacidad de llevar una carga positiva o negativa, el tensioactivo se clasifica como anfótero. Los tensioactivos anfóteros incluyen derivados del ácido acrílico, alquilamidas sustituidas, N-alquilbetaínas y fosfátidos.
[0064] Se ha revisado el uso de tensioactivos en productos farmacéuticos, formulaciones y emulsiones (Rieger, en Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, NY, 1988, p. 285).
[0065] En algunas formas de realización, la partícula puede comprender además un lípido catiónico. Los lípidos catiónicos ejemplares incluyen, entre otros, cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODAC), bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio (DdAB), cloruro de N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio (DOTAP), cloruro de N-(1-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio (Do TmA), N,N-dimetil-2,3-dioleiloxi)propilamina (DODMA), 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLinDMA), 1,2-dilinoleniloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLenDMA), 1,2-dilinoleilcarbamoiloxi-3-dimetilaminopropano (DLin-C-DAP), 1,2-dilinoleyoxi-3-(dimetilamino)acetoxipropano (DLinDAC), 1,2-dilinoleyoxi-3-morfolinopropano (DLin-MA), 1,2-dilinoleoil-3-dimetilaminopropano (DLinDAP), 1,2-dilinoleiltio-3-dimetilaminopropano (DLin-S-DMA), 1-linoleoil-2-linoleiloxi-3-dimetilaminopropano (DLin-2-DMAP), 1,2-dilinoleiloxi-3-trimetilaminopropano sal de cloruro (DLin-TMA.C1), sal de cloruro de 1,2-dilinoleoil-3-trimetilaminopropano (DLin-TAP.C1), 1,2-dilinoleiloxi-3-(N-metilpiperazino)propano (DLin-MPZ), o 3-(N,N-Dilinoleilamino)-1,2-propanodiol (DLinAP), 3-(N,N-Dioleilamino)-1,2-propanodio (Do AP), 1,2-Dilinoleiloxo-3-(2-N,N-dimetilamino)etoxipropano (DLin-EG-DMA), 1,2-dilinoleniloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLinDMA), 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano (DLin-K-DMA) o sus análogos, (3aR,5s,6aS)-N,N-dimetil-2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetrahidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-5-amina (ALN100), (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-il 4-(dimetilamino)butanoato (MC3), 1,1'-(2-(4-(2-((2-(bis(2-hidroxidodecil)amino)etil)(2-hidroxidodecil)amino)etil)piperazin-1-il)etilazanodiil)didodecan-2-ol (Tech Gi), o una mezcla de los mismos.
[0066] En algunas formas de realización, la partícula comprende además un lípido no catiónico. El lípido no catiónico puede ser un lípido aniónico o un lípido neutro que incluye, entre otros, diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina (POPE), dioleoilfosfatidiletanolamina 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), diestearoilfosfatidiloetanolamina (DSPE), 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-estearoil-2-oleoil-fosfatidietanolamina (SOPE), colesterol o una mezcla de los mismos.
[0067] Los lípidos conjugados que inhiben la agregación de partículas también se pueden incluir en las partículas descritas en el presente documento. Dichos lípidos incluyen, entre otros, un lípido de polietilenglicol (PEG) que incluye, entre otros, un PEG-diacilglicerol (DAG), un PEG-dialquiloxipropilo (DAA), un PEG-fosfolípido, una PEG-ceramida (Cer), o una mezcla de los mismos. El conjugado PEG-DAA puede ser, por ejemplo, un PEG-dilauriloxipropilo (C12), un PEG-dimiristiloxipropilo (C14), un PEG-dipalmitiloxipropilo (C16) o un PEG-diesteariloxipropilo (C18). El lípido conjugado que evita la agregación de partículas puede ser del 0,01 % en moles a aproximadamente el 20 % en moles o aproximadamente el 2 % en moles del lípido total presente en la partícula.
[0068] En algunas formas de realización, la partícula está en forma de liposoma, vesícula o emulsión. Como se usa en el presente documento, el término "liposoma" abarca cualquier compartimento encerrado por una capa lipídica. Los liposomas pueden tener una o más membranas lipídicas. Los liposomas se pueden caracterizar por tipo de membrana y por tamaño. Las vesículas unilaminares pequeñas (SUV) tienen una sola membrana y típicamente varían entre 0,02 y 0,05 |jm de diámetro; Las vesículas unilaminares grandes (LUVS) suelen ser mayores de 0,05 jm . Las vesículas oligolamelares grandes y las vesículas multilamelares tienen múltiples capas de membrana, generalmente concéntricas, y suelen ser mayores de 0,1 jm . Los liposomas con varias membranas no concéntricas, es decir, varias vesículas más pequeñas contenidas dentro de una vesícula más grande, se denominan vesículas multivesiculares.
[0069] Para formar un liposoma, las moléculas lipídicas comprenden porciones alargadas no polares (hidrofóbicas) y porciones polares (hidrofílicas). Las porciones hidrófoba e hidrófila de la molécula se colocan preferiblemente en dos extremos de una estructura molecular alargada. Cuando dichos lípidos se dispersan en agua, forman espontáneamente membranas bicapa denominadas laminillas. Las láminas están compuestas por dos láminas monocapa de moléculas lipídicas con sus superficies no polares (hidrofóbicas) una frente a la otra y sus superficies polares (hidrofílicas) frente al medio acuoso. Las membranas formadas por los lípidos encierran una porción de la fase acuosa de una manera similar a la de una membrana celular que encierra el contenido de una célula. Por tanto, la bicapa de un liposoma tiene similitudes con una membrana celular sin los componentes proteicos presentes en una membrana celular.
[0070] Se puede preparar una composición de liposomas mediante una variedad de métodos que se conocen en la técnica. Véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. n° 4.235.871, n° 4.897.355 y n° 5.171.678; solicitudes PCT publicadas WO 96/14057 y WO 96/37194; Felgner, PL et al., Proc. nacional Academia Sci., EE. UU. (1987) 8:7413-7417, Bangham, et al. M. Mol. Biol. (1965) 23:238, Olson et al. Biochim. Biophys. Acta (1979) 557:9, Szoka, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (1978) 75: 4194, Mayhewet al. Biochim. Biophys. Acta (1984) 775:169, Kim et al. Biochim. Biophys. Acta (1983) 728:339, y Fukunaga, et al. Endocrinol. (1984) 115:757.
[0071] Los liposomas se pueden preparar para que tengan tamaños sustancialmente homogéneos en un intervalo de tamaños seleccionado. Un método de clasificación por tamaño efectivo implica extruir una suspensión acuosa de los liposomas a través de una serie de membranas de policarbonato que tienen un tamaño de poro uniforme seleccionado; el tamaño de poro de la membrana se corresponderá aproximadamente con los tamaños más grandes de liposomas producidos por extrusión a través de esa membrana. Véase, por ejemplo, la Patente de EE. UU. N° 4.737.323.
[0072] Sin desear limitarse a una teoría, las nanopartículas descritas en el presente documento tienen una mayor captación de platino en las células cancerosas en relación con el cisplatino y el oxaliplatino. En algunas formas de realización, las nanopartículas descritas en el presente documento tienen aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 75 %, aproximadamente 1 vez, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 10 veces, aproximadamente 15 veces, aproximadamente 20 veces, aproximadamente 25 veces o mayor absorción de platino en las células cancerosas en relación con el cisplatino o el oxaliplatino en dosis equivalentes. Además, las nanopartículas descritas en el presente documento también tienen una mayor acumulación de platino en el tejido, tal como, entre otros, un tumor, en relación con el cisplatino y el oxaliplatino cuando se dosifican en una cantidad equivalente. Por ejemplo, las nanopartículas descritas en este documento tienen aproximadamente 25 %, aproximadamente 50 %, aproximadamente 75 %, aproximadamente 1 vez, aproximadamente 5 veces, aproximadamente 10 veces, aproximadamente 15 veces, aproximadamente 20 veces, aproximadamente 25 veces o mayor acumulación tisular de platino en relación con el cisplatino o el oxaliplatino cuando se dosifican en cantidades equivalentes.
Definiciones
[0074] Por conveniencia, ciertos términos empleados en el presente documento, en la memoria descriptiva, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas se recopilan en el presente documento. A menos que se indique lo contrario, o esté implícito en el contexto, los siguientes términos y frases incluyen los significados proporcionados a continuación. A menos que se indique explícitamente lo contrario, o que resulte evidente por el contexto, los términos y frases a continuación no excluyen el significado que el término o frase ha adquirido en el arte al que pertenece. Las definiciones se proporcionan para ayudar a describir realizaciones particulares y no pretenden limitar la invención reivindicada, porque el alcance de la invención está limitado únicamente por las reivindicaciones. Además, a menos que el contexto requiera lo contrario, los términos singulares incluirán pluralidades y los términos plurales incluirán el singular.
[0075] A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que los entendidos comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque cualquier método, dispositivo y material conocido puede usarse en la práctica o prueba de la invención, los métodos, dispositivos y materiales a este respecto se describen en este documento.
[0076] Como se usa aquí, el término "que comprende" o "comprende" se usa en referencia a composiciones, métodos y componentes respectivos de los mismos, que son esenciales para la invención, pero abiertos a la inclusión de elementos no especificados, ya sean esenciales o no.
[0077] Tal como se usa en el presente documento, el término "que consiste esencialmente en" se refiere a los elementos necesarios para una forma de realización dada. El término permite la presencia de elementos que no afectan materialmente las características básicas y novedosas o funcionales de esa realización de la invención.
[0078] Los términos singulares "un", "una", "el" y "ella" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De manera similar, la palabra "o" pretende incluir "y" a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
[0079] Aparte de los ejemplos operativos, o donde se indique lo contrario, todos los números que expresan cantidades de ingredientes o condiciones de reacción utilizadas en este documento deben entenderse modificados en todos los casos por el término "aproximadamente". El término "alrededor de" cuando se usa en relación con porcentajes puede significar ± 1% del valor al que se hace referencia. Por ejemplo, alrededor de 100 significa de 99 a 101.
[0080] Aunque se pueden usar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento en la práctica o prueba de esta descripción, a continuación se describen métodos y materiales adecuados. El término "comprende" significa "incluye". La abreviatura "p. ej." se deriva del latín exempli gratia, y se usa aquí para indicar un ejemplo no limitativo. Por lo tanto, la abreviatura " p. ej." es sinónimo del término "por ejemplo".
[0081] El término "sustituido", ya sea precedido por el término "opcionalmente" o no, se refiere al reemplazo de radicales de hidrógeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente específico. Cuando se puede sustituir más de una posición en cualquier estructura dada con más de un sustituyente seleccionado de un grupo específico, el sustituyente puede ser el mismo o diferente en cada posición. Como se usa en el presente documento, se contempla que el término "sustituido" incluya todos los sustituyentes permisibles de los compuestos orgánicos. En un aspecto amplio, los sustituyentes permisibles incluyen sustituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos de compuestos orgánicos. Los heteroátomos como el nitrógeno pueden tener sustituyentes de hidrógeno y/o cualquier sustituyente permisible de los compuestos orgánicos descritos en el presente documento que satisfagan las valencias de los heteroátomos.
[0082] La descripción de las formas de realización de la divulgación no pretende ser exhaustiva ni limitar la divulgación a la forma precisa divulgada. Aunque las formas de realización específicas y los ejemplos de la descripción se describen en el presente documento con fines ilustrativos, son posibles varias modificaciones equivalentes dentro del alcance de la descripción, como reconocerán los expertos en la técnica pertinente. Por ejemplo, mientras que los pasos del método o las funciones se presentan en un orden dado, las formas de realización alternativas pueden realizar funciones en un orden diferente, o las funciones pueden realizarse sustancialmente de forma simultánea. Las enseñanzas de la descripción proporcionada en este documento se pueden aplicar a otros procedimientos o métodos, según corresponda. Las diversas realizaciones descritas en el presente documento pueden combinarse para proporcionar formas de realización adicionales. Los aspectos de la divulgación pueden modificarse, si es necesario, para emplear las composiciones, funciones y conceptos de las referencias anteriores y la aplicación para proporcionar aún otras formas de realización de la divulgación. Estos y otros cambios pueden hacerse a la divulgación a la luz de la descripción detallada. Todas estas modificaciones están destinadas a ser incluidas dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
[0083] Los elementos específicos de cualquiera de las formas de realización descritas pueden combinarse o sustituirse por elementos en otras formas de realización. Además, mientras que las ventajas asociadas con ciertas formas de realización de la divulgación se han descrito en el contexto de estas realizaciones, otras formas de realización también pueden exhibir tales ventajas, y no todas las formas de realización necesariamente deben exhibir tales ventajas para caer dentro del alcance de la divulgación.
EJEMPLOS
[0084] Los siguientes ejemplos ilustran algunas formas de realización y aspectos de la invención. Será evidente para los expertos en la técnica pertinente que se pueden realizar diversas modificaciones, adiciones, sustituciones y similares dentro del alcance de la invención como se define en las reivindicaciones que siguen. Los siguientes ejemplos no limitan en modo alguno la invención.
Ejemplo 1: Representación esquemática de un procedimiento sintético ejemplar
[0085]
E m 1
Figure imgf000020_0001
Sal Li soluble en agua soluble en agua
Figure imgf000020_0002
insoluble en agua
Platino conjugado por lípido
obtenido como precipitado
[0086] Se usaron procedimientos similares para la síntesis de los compuestos 25-28 y otros compuestos de platino conjugados con lípidos. Estos procedimientos ejemplares funcionaron bien para todos los compuestos. La introducción de pasos de lavado adicionales ayudó a aumentar la pureza del compuesto 26 hasta un 93 % (Tabla 2).
Tabla 2: Rendimiento y pureza de compuestos preparados usando formas de realización de la invención
Figure imgf000021_0002
[0087] FIG. 1 muestra el perfil de HPLC del compuesto 26 antes del lavado con agua y acetona y la FIG. 2 muestra el perfil de HPLC del compuesto 26 después del lavado con agua y acetona. Esta es la máxima pureza alcanzada por el lavado.
[0088] Los métodos detallados para sintetizar los ejemplos de compuestos anteriores se describen en la solicitud de patente internacional PCT/US2014/042339, publicada como WO/2014/201376.
Ejemplo 2: Rutas sintéticas mejoradas al Intermedio 6 del Compuesto 25
[0089] Se puede encontrar una síntesis de varios pasos del Compuesto 25 en el documento WO/2014/201376. La reducción del número de pasos para la síntesis de ligandos ayudaría a aumentar el rendimiento del Compuesto 25 (API). El procedimiento al que se hace referencia implica seis pasos para alcanzar el Intermedio 6, mientras que los procedimientos descritos en este documento requerirán dos pasos para alcanzar el mismo intermedio. El rendimiento global del intermedio 6 es del 13 % en el procedimiento de referencia (Esquema 1). Se observó un aumento significativo en el rendimiento del intermedio 6 (50%) en la nueva ruta (Esquema 5).
Esquema 2: Pasos sintétics previos para el compuesto 25
Figure imgf000021_0001
Esquema 3A. Ruta 1 para la síntesis de intermedio 6 en menor número de pasos
Figure imgf000022_0001
Esquema 3B. Ruta 1B para la síntesis de intermedio 6
Figure imgf000022_0002
[0090] Detalle experimental para la Ruta 1B (Esquema 3B): Se añadió sal de bromhidrato de 2-bromoetilamina (5,0 g, 25 mmol) en porciones a la mezcla de acetato de bromoetilo (8,6 ml, 75 mmol), DIPEA (17,5 ml, 100 mmol) y 30 ml de acetonitrilo seco a 0°C. La mezcla se agitó a TA durante 20 h y luego se filtró y se concentró en rotavapor. Se realizó una cromatografía en columna (eluyendo con acetato de etilo: hexano = 1:3) para producir 5,6 g (77%) de amina bromodiéster terciaria.
[0091] Se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de N2 durante 10 min una solución de colesterol (1,0 g, 2,59 mmol) en CH2Cl2 anhidro (recién destilado) (15 ml) a 25°C. A continuación, se añadió AgOTf (1,0 g, 3,88 mmol) y se continuó agitando durante 10 min. Luego se dejó gotear sobre la mezcla de reacción una solución de bromodiéster amina terciaria (1,14 g, 3,88 mmol) en 5 ml de DCM. Después de agitar durante 20 ha ta, la mezcla se neutralizó con Et3N, se diluyó con cloroformo y se filtró. Se concentró y purificó por cromatografía en columna (acetato de etilo/hexanos). Rendimiento = 1,0 g (64%).
Esquema 4. Ruta alternativa 2 para la síntesis de intermedio 6
Figure imgf000023_0001
Detalle experimental para la Ruta 3 (Esquema 5):
[0092]
Figure imgf000023_0002
[0093] Procedimiento experimental: Se disolvió colesterol (10 g, 25,86 mmol) en 100 ml de DMF/THF seco (1:1) e hidruro de sodio al 60 %. (p/p) en aceite mineral (6,2 g, 155,17 mmol), seguido de agitación durante 10 min. Se añadió gota a gota 2-bromo-1,1-dimetoxietano (9,2 ml, 78 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 70°C a reflujo durante 18 h. La mezcla de reacción se enfrió y se inactivó mediante la adición de agua. La capa orgánica se extrajo con acetato de etilo, se lavó varias veces con agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró y el producto de reacción se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice en EtOAc al 3 %/Hexano. Rendimiento = 8,8 g (72 %).
Figure imgf000024_0001
[0094] Procedimiento experimental: se añadió TFA (2 ml) a una solución del compuesto 1 (0,350 g, 0,737 mmol) en 2 ml de DCM y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se neutralizó con 1 N NaOH, se extrajo dos veces con DCM y se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró, que se usó directamente en el siguiente paso.
Figure imgf000024_0002
[0095] Procedimiento experimental: El compuesto 2 se disolvió en 3,2 ml de MeOH: DCM (1:1) que contenía iminodiacetato de dietilo (0,161 ml, 0,9 mmol), AcOH (0,214 ml, 3,74 mmol) y NaBHaCN (0,093 g, 1,48 mmol) se añadieron en sucesión. La mezcla se agitó durante 18 h a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc, se lavó dos veces con NaHCO3 y agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna flash sobre gel de sílice utilizando el sistema EtOAc/hexanos. Rendimiento = 72%.
Esquema 6. Ruta alternativa 4 para la síntesis de intermedio 6
Figure imgf000024_0003
Esquema 7. Ruta alternativa 5 para la síntesis de intermedio 6
Figure imgf000024_0004
Ejemplo 3: Purificación y análisis por HPLC
[0096] Los compuestos de platino conjugados con lípidos de la presente descripción pueden purificarse posteriormente mediante HPLC preparatoria de fase inversa. Los compuestos se pueden purificar en una columna que tenga una fase estacionaria de C18, una fase estacionaria de NH2 o una fase estacionaria de fenilo. Se ha encontrado que algunos de los compuestos son inestables en las fases estacionarias C18, C8, Cyano y PFP, lo que da como resultado una estimación incorrecta de la pureza. Por lo tanto, la estimación de la pureza se realiza en una columna de NH2 o en una columna de fenilo donde se ha encontrado que el compuesto es estable.
[0097] La purificación en una columna C18 implica un método isocrático con la fase móvil que comprende 98 % de metanol y 2 % de agua. Se controla la absorbancia UV a 210 nm. El pico del compuesto se recoge, se combina y el disolvente se elimina por evaporación y liofilización para obtener un compuesto puro >99,5 % en forma de polvo.
[0098] La purificación en una columna de NH2 o fenilo implica un método de gradiente que comienza con un mayor porcentaje de agua que progresa linealmente con el tiempo hasta un mayor porcentaje de metanol. Se controla la absorbancia UV a 210 nm. El pico del compuesto se recoge, se combina y el disolvente se elimina por evaporación y liofilización para obtener un compuesto puro >99,5 % en forma de polvo.
[0099] El método analítico para la estimación de la pureza se realiza utilizando una fase estacionaria de NH2 o fenilo. El compuesto se disuelve en metanol (>1 mg/mL). El análisis se realiza con un gradiente de agua/metanol y un detector UV/PDA a 210 nm. La pureza se mide calculando el porcentaje del área del pico compuesto del área del pico total. Para tener en cuenta los picos fantasma, el análisis se realiza después de superponer el cromatograma de una inyección de metanol puro.
[0100] FIG. 3 muestra el perfil analítico del compuesto 25 después de la purificación por HPLC. Las FIGS. 6A y 6B muestran los perfiles de HPLC de comparación del compuesto 25 en columnas C18 y NH2. FIG. 4 muestra el perfil analítico del compuesto 27 después de la purificación por HPLC. FIGS. 7A y 7B muestran los perfiles de HPLC de comparación del compuesto 27 en columnas C18 y NH2. FIG. 5 muestra el perfil analítico del compuesto 28 después de la purificación por HPLC.
Ejemplo 4: Método para producir nanopartículas que comprenden el Compuesto 25
[0101] Fosfatidilcolina de soja (totalmente hidrogenada, HSPC), colesterol (CHOL), Compuesto 25 y 1,2-diestearoilsnglicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)-2000] (DSPE-PEG2000), tomado en proporciones de % en moles de 55:3:38:4, se disolvieron en DCM/MeOH (1:1, v/v) mezcla. Todas las soluciones de lípidos se mezclaron homogéneamente en un matraz de fondo redondo, el disolvente orgánico se evaporó mediante un evaporador rotatorio y la película de lípidos se mantuvo a alto vacío durante 4-5 horas. A continuación, la película fina se hidrató añadiéndole 40 ml de solución de lactosa al 5 % y se dejó rotar en un baño de agua rotatorio durante 1,0 ha 65°C. A continuación, las supramoléculas hidratadas se extruyeron secuencialmente a través de membranas de tamaño de poro de 400 nm, 200 nm y 100 nm (filtros Whatman®) sostenidas por soporte de filtro durante 10 veces usando una extrusora LIPEX™ (100 ml) conectada a un baño de agua circulante a 65°C.°C La medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS) de Pt revela que el Ptequivalente final de esta formulación es de 2,33 mg/ml y el % de eficiencia de encapsulación es del 32,7 % en moles del Compuesto 25.
[0102] La formulación supramolecular mencionada anteriormente se liofilizó (se usó una solución de lactosa al 5% como crioprotector) durante 16 a 20 horas. El polvo sólido blanco formado a continuación se reconstituyó añadiendo el volumen necesario de agua estéril para inyección. El estudio DLS de esta formulación supramolecular reconstituida revela un tamaño, PDI y potencial de superficie de supramoléculas similares a los que tenían antes de la liofilización.
Ejemplo 5: Método para producir nanopartículas fluorescentes que comprenden el Compuesto 25
[0103] Se disolvieron HSPC, CHOL, Compuesto 25, DSPE-PEG2000 y Liss Rhod PE (tinte fluorescente) tomados en una proporción de 61,02:3,55:31,32:3,55:0,56% en moles. en una mezcla de DCM/MeOH (1:1, v/v). Todas las soluciones de lípidos se mezclaron homogéneamente en un matraz de fondo redondo (envuelto con papel de aluminio) y el disolvente orgánico se evaporó mediante un evaporador rotatorio. A continuación, la película fina se hidrató añadiéndole 2,5 ml de solución de lactosa al 5 % y se dejó rotar en un baño de agua rotatorio durante 1,0 ha 65°C. A continuación, las supramoléculas hidratadas se extruyeron secuencialmente a través de membranas de tamaño de poro de 400 nm, 200 nm y 100 nm (filtros Whatman®) sostenidas por soporte de filtro durante 10 veces usando una extrusora LIPEX™ (10 ml) conectada a un baño de agua circulante a 65°C.°C La medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS) de Pt revela que el equivalente de Pt final de esta formulación es de 1,2 mg/ml y el % de eficiencia de encapsulación es del 25 % en moles del compuesto 25.
[0104] La formulación supramolecular mencionada anteriormente se liofilizó (5 % de solución de lactosa se usó como crioprotector) durante 16-20 horas. El polvo sólido blanco formado a continuación se reconstituyó añadiendo el volumen necesario de agua estéril para inyección. El estudio DLS de esta formulación supramolecular reconstituida revela un tamaño, PDI y potencial de superficie de supramoléculas similares a los que tenían antes de la liofilización.
Ejemplo 6 : Método para producir nanopartículas que comprenden el Compuesto 25
[0105] HSPC, CHOL, Compuesto 25 y DSPE-PEG2000, tomados en proporciones de 65,57:10,93:21,86:1,64% en moles, se disolvieron en mezcla de DCM/MeOH (1:1, v/v). Todas las soluciones de lípidos se mezclaron homogéneamente en un matraz de fondo redondo y el disolvente orgánico se evaporó mediante un evaporador rotatorio. A continuación, la película fina se hidrató añadiéndole 4 ml de una solución de sacarosa al 5 % y se dejó rotar en un baño de agua rotatorio durante 1 hora a 65°C. A continuación, las supramoléculas hidratadas se extruyeron secuencialmente a través de membranas de tamaño de poro de 400 nm, 200 nm y 80 nm (filtros Whatman®) a 65°C con el soporte del filtro 11 veces usando un extrusor Avanti (1 ml) colocado sobre una placa caliente. La formulación supramolecular, seguida de extrusión, se pasó a través de una columna de desalinización Sephadex G-25 (PD-10) equilibrada con una solución de sacarosa al 5 % y se recogieron diferentes fracciones. Las fracciones que contenían supramoléculas se juntaron y concentraron hasta un volumen final de 3 ml usando una unidad de filtro centrífugo (Amicon Ultra, 30 kD) a 3000 g durante 15 min. La medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS) de Pt revela que el equivalente de Pt final de esta formulación es de 0,43 mg/ml y el % de eficiencia de encapsulación es del 12,8 % en moles del compuesto 25.
[0106] La formulación supramolecular mencionada anteriormente se liofilizó (5 % de solución de sacarosa se usó como crioprotector) durante 16-20 horas. El polvo sólido blanco formado a continuación se reconstituyó añadiendo el volumen necesario de agua estéril para inyección. El estudio DLS de esta formulación supramolecular reconstituida revela un tamaño, PDI y potencial de superficie de supramoléculas similares a los que tenían antes de la liofilización.
Ejemplo 7: Método para producir nanopartículas que comprenden el Compuesto 25
[0107] HSPC, CHOL, Compuesto 25, DSPE-PEG2000, tomados en una proporción de 62,54:3,24:32,45:1,77% en moles en un vial de vidrio, se disolvieron en DCM/MeOH (1 :1, v/v) mezcla. Se tomaron 4 mL de solución de lactosa al 5% en un matraz de fondo redondo con forma de pera y se le añadió lentamente la fase orgánica. La mezcla se agitó suavemente durante 1 min. El solvente orgánico se eliminó con flujo de N2 a través de un evaporador rotatorio a 65°C durante 1 hora dando como resultado una suspensión viscosa. Se sonicó durante 5 ciclos utilizando un sonicador de sonda. A continuación, las supramoléculas hidratadas se extruyeron secuencialmente a través de una membrana de tamaño de poro de 400 nm, 200 nm y 80 nm (filtros Whatman®) a 65°C con el soporte del filtro 9 veces usando un extrusor Avanti (1 ml) colocado sobre una placa caliente. La medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS) de Pt revela el Pt final equivalente de esta formulación a 1,56 mg/mL y % de eficiencia de encapsulación a 19% en moles del Compuesto 25.
[0108] La formulación supramolecular antes mencionada fue liofilizada (se usó una solución de lactosa al 5 % como crioprotector) durante 16 a 20 horas. El polvo sólido blanco formado a continuación se reconstituyó añadiendo el volumen necesario de agua estéril para inyección. El estudio DLS de esta formulación supramolecular reconstituida revela un tamaño, PDI y potencial de superficie de supramoléculas similares a los que tenían antes de la liofilización.
Ejemplo 8 : Caracterización de la formulación supramolecular del Compuesto 25
[0109] Caracterización de la formulación supramolecular por dispersión de luz dinámica (DLS): El tamaño de partícula acumulado de la formulación producida en el Ejemplo 7 se midió mediante el método de dispersión de luz dinámica usando Zetasizer Nano ZS90 (Malvern, Reino Unido). Se diluyeron 50 pl de formulación a 1 ml usando agua desionizada y la medición se realizó en un ángulo de dispersión de 90 grados a 25°C para obtener la distribución de tamaño de partícula promedio. El histograma DLS de la formulación ejemplar se muestra en la FIG. 8. Como se ve en la FIG. 8, el tamaño de partícula promedio estaba en el rango de alrededor de 40 nm a alrededor de 300 nm. En la FIG. 9 se muestran imágenes de microscopio electrónico de transmisión (TEM) de nanopartículas que comprenden compuestos de platino conjugados con lípidos de acuerdo con una forma de realización de la invención. Las nanopartículas se muestran con varios aumentos, como se puede ver en las barras de escala de cada imagen. El potencial zeta también se midió con el mismo instrumento, el Zetasizer ZS90. Los resultados de las mediciones del potencial zeta se resumen en la Tabla 3.
Tabla 3: Datos de DLS (de prep-29 a 37)
Figure imgf000026_0001
[0110] Espectroscopía de absorción atómica (AAS) : El equivalente de Pt en la formulación se cuantificó usando la medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS). Los resultados de AAS se resumen en la Tabla 4.
Tabla 4: Datos AAS (de prep-29 a 37)
Figure imgf000027_0002
[0111] Se determinó la estabilidad de la formulación supramolecular ejemplar y se informa en la Tabla 5.
[0112] Análisis de estabilidad del Compuesto 25 (10-125, prep-47):
Estabilidad condición: ICH Q1 A (R2) Pruebas de estabilidad de nuevos fármacos y productos
Estudio acelerado: (6 meses)
Tabla 5: Datos de estabilidad del compuesto 25 (IO-125, prep-47)
Figure imgf000027_0001
Ejemplo 9: Método para producir nanopartículas sensibles al pH que comprenden el Compuesto 25 y DOPE como componente lipídico
[0113] Se sabe que DOPE forma una formulación supramolecular sensible al pH (Farmacia y Farmacología 2007, 59, 469). Sin querer limitarse a una teoría, los siguientes factores son responsables de la sensibilidad al pH de DOPE: 1) grupo ácido protonable; 2) Baja temperatura de transición; y 3) presencia de doble enlace en las cadenas alquílicas.
[0114] Procedimiento: 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE), PC de hidrosoja (HSPC), colesterol, compuesto 25 y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)-2000] (DSPEPEG2000), tomado en proporciones de 40:28:3:25:4% mol (la concentración total de fosfolípidos era igual a 19,7 mM) se disolvieron en CHCh/MeOH (1 :1, v/v) mezcla. La Tabla 6 resume las composiciones de lípidos de las diversas formulaciones producidas en este ejemplo.
Tabla 6 : Diferencia en la composición lipídica de las formulaciones del compuesto 25 en presencia y ausencia de DOPE
Figure imgf000027_0003
[0115] Todas las soluciones de lípidos se mezclaron homogéneamente en un matraz de fondo redondo, el solvente orgánico se evaporó mediante un evaporador rotatorio y la película de lípidos se mantuvo bajo alto vacío durante 4-5 horas (Experimental Biology and Medicine 2012; 237: 973-984, International Journal of Nanomedicine 2012:75259-5269 y Journal of Liposome Research, 2011,21(1): 60-69). A continuación, la película fina se hidrató añadiéndole solución de lactosa al 5% y se dejó rotar en un baño de agua rotatorio durante 1,0 ha 65°C. A continuación, la formulación supramolecular hidratada se extruyó secuencialmente a través de membranas de tamaño de poro de 400 nm, 200 nm y 100 nm (filtros Whatman®) con soporte de filtro durante 10 veces usando una extrusora LIPEX™ (10 ml) conectada a un baño de agua circulante a 65°C. La medición del espectrómetro de absorción atómica (AAS) de Pt revela que el equivalente de Pt final de esta formulación es de 1,13 mg/ml.
[0116] La formulación supramolecular mencionada anteriormente se liofilizó (se usó solución de lactosa al 5 % como crioprotector) durante 12-15 horas. El polvo sólido blanco formado a continuación se reconstituyó añadiendo el volumen necesario de agua milliQ y se midió la DLS. El histograma DLS se puede ver en la FIG. 11 y los datos se resumen en la Tabla 7.
TABLA 7: Resumen de los datos de DLS para una formulación ejemplar que contiene DOPE
Figure imgf000028_0003
[0117] Se determinó la eficacia de la formulación que contiene DOPE. Como se muestra en la FIG. 12 y resumida en la TABLA 8, la formulación que contenía DOPE mostró una eficacia relativamente mejor en las líneas celulares A549 y DU145 que una formulación similar que carecía de DOPE.
TABLA 8: Eficacia de la formulación que contiene DOPE en líneas celulares A549 y DU145
Figure imgf000028_0002
Ejemplo 10: Síntesis mejorada del intermedio 6 (Im-06)
[0118] Pureza del intermedio 6 (Im-06) sintetizado usando el esquema sintético 3 mostrado en el Ejemplo 2 varió de 88 a 92%. Se deseaba mejorar la pureza hasta la especificación requerida del 95%. Esto se logró mediante la formación de una sal ácida del intermedio Im-06 seguido de la desalinización como se muestra en el Esquema 8.
ESQUEMA 8
Figure imgf000028_0001
[0119] Paso 1: Formación de sal de HCl o HNO3 a 10 g Escala: Hasta Im-06 (10,0 g, 91 % pureza observada en la FIG.
13) en EtOAc (90 ml) a temperatura ambiente, se añadió 5 N HCl o HNO3 /EtOAc (30 ml). La mezcla se calentó y se agitó durante 30 min. El precipitado blanco se filtró. La torta se lavó con EtOAc frío, se secó para proporcionar la sal Im-06-HCl o HNO3 (8 g, 80 % de rendimiento, HPLC 96,0 %) como un sólido blanco.
[0120] Recristalización: una mezcla de sal de Im-06-HCl o HNO3 (8 g) en EtOAc/EtOH (50 ml/8 ml) se calentó a 80°C con agitación (hasta que se solubilizara). La solución se enfrió a temperatura ambiente durante 2 h sin agitación. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con EtOAc para proporcionar Im-06-HCl o HNO3 (cristalino) (5-6 g, HPLC 97 %) como un sólido blanco.
[0121] Paso 2: Formación de sal libre de Im-06.HCl o lm.O6-HNO3 : A una mezcla de Im-06.HCl o Im-06.HNO3 (100 mg) en EtOAc (10 mL) se añadió NaHCO3 (2 ml, acuoso saturado). La mezcla se agitó durante 10 min y luego se separó. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para proporcionar Im-06 (70-80 mg, 80-90 % de rendimiento, la pureza por HPLC a 210 nm para Im-06 recuperado de la sal HCl es 96,7 %, FIG. 14) como un aceite incoloro.
[0122] Aunque las formas de realización preferidas se han representado y descrito en detalle en este documento, será evidente para los expertos en la técnica pertinente que se pueden realizar diversas modificaciones, adiciones, sustituciones y similares dentro del alcance de la invención como se define en el afirmaciones que siguen. Además, en la medida en que no se haya indicado ya, los expertos en la técnica entenderán que cualquiera de las diversas realizaciones aquí descritas e ilustradas puede modificarse adicionalmente para incorporar las características mostradas en cualquiera de las otras formas de realización descritas en este documento.
Ejemplo 11: Síntesis mejorada de Im-07
[0123] La síntesis de Im-07 se implementó con algunas modificaciones menores relacionadas con el procesamiento del procedimiento descrito anteriormente. Como se muestra en el Esquema 9, se agrega LiOH hasta que se logra la conversión completa (se necesitan alrededor de 2,1 eq). El tratamiento se realizó sin extracción con diclorometano y se obtuvo un producto claro.
Esquema 9
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Ejemplo 12: Síntesis del Compuesto 25
[0124] El objetivo de este estudio fue producir el Compuesto 25 (COMP 25) adecuado para estudios toxicológicos, con una pureza cercana a 97% pero sin cromatografía en columna. Por ello, además de la cristalización, se realizaron algunas actividades encaminadas a facilitar el aislamiento. En los ensayos iniciales, las dos soluciones Im-07 e Im-08 se mezclaron según el procedimiento y se formó inmediatamente un precipitado. (Esquema 10).
Esquema 10
Figure imgf000029_0002
[0125] Sin embargo, la filtración no fue eficaz porque no quedó ningún sólido en el filtro. Por ello, en los ensayos finales se eliminó el agua para obtener el residuo. A continuación, el producto aislado se cristalizó en DCM/metanol y se suspendió en una mezcla de agua/acetona. El crudo contenía altas cantidades de NO3 (alrededor del 11%) antes de la cristalización. Esto se explica fácilmente por el hecho de que el producto se aisló sin lavar y la cantidad de agua en la reacción no fue suficiente para eliminarlos. Se hicieron dos lechadas y se redujeron los nitratos. La pureza del API final fue de alrededor del 97 %. La Tabla 9 muestra las etapas de purificación gradual del Compuesto 25 crudo.
Tabla 9: Resultados analíticos de la purificación por etapas del Compuesto 25
Figure imgf000030_0002
[0126] Las reacciones realizadas con un máximo de 20 g de Im-06 y 97 % de Compuesto 25 se obtuvieron con un rendimiento del 57 %. El procedimiento de reacción se puede implementar cómodamente en escala KG. El cromatograma de HPLC del Compuesto 25 después de la cristalización y después de dos suspensiones se muestra en la Fig. 15 y los resultados de los picos de la Fig. 15 se muestran en la Tabla 10.
Tabla 10: Resultados pico de Fig. 15
Resultados pico
Figure imgf000030_0001
Ejemplo 13. Cristalización del Compuesto 25
[0127] Para mejorar la pureza del Compuesto 25, se identificaron una serie de condiciones que dieron como resultado la cristalización del Compuesto 25 (COMP 25) y ofrecieron un claro aumento de la pureza. Durante este programa de trabajo, se observaron varios sólidos amorfos de una variedad de sistemas de solventes. El análisis PXRD y PLM muestra que el sólido obtenido durante algunos de los estudios de cristalización era de naturaleza cristalina.
[0128] Los pasos secuenciales para el análisis de la muestra cruda (p. ej., Ejemplo 12, pureza del 94 %) son los siguientes:
1) Cribado de cristalización en Comp 25 crudo con solventes seleccionados (ensayo de 20 mg)
2) Cristalización con enfriamiento sembrado de COMP 25 crudo (ensayo de 20 mg)
3) Cristalización por enfriamiento de COMP 25 crudo (ensayo de 20 mg)
4) Cristalización por enfriamiento/antisolvente de COMP 25 crudo (ensayos de 20 mg y 50 mg)
5) Cristalización por enfriamiento de COMP 25 crudo (200-(escala de 250 mg)
6) Cristalización sembrada por enfriamiento de COMP 25 crudo (ensayo de 250 mg)
7) Cristalización sembrada, antidisolvente y por enfriamiento de COMP 25 crudo (ensayo de 140-150 mg)
[0129] Inicialmente, una serie de solventes y una mezcla de los disolventes se cribaron para seleccionar los disolventes adecuados para el procedimiento de cristalización. Como se muestra en la Tabla 11, las mezclas de alcoholes tales como metanol/etanol y cloroformo/diclorometano son mezclas de disolventes adecuadas para el procedimiento de cristalización.
[0130]
Figure imgf000031_0001
[0131] Cribado de cristalización del compuesto bruto 25 en disolventes seleccionados: El cribado de cristalización del compuesto bruto 25 (COMP 25) se llevó a cabo usando metanol:diclorometano y etanol: Mezclas de disolventes de diclorometano. El material aislado de cada experimento después de los ciclos de temperatura se analizó mediante XRPD y los resultados se resumen en la Tabla 12. El COMP 25 cristalino se obtuvo utilizando metanol:diclorometano (20:80 % v/v) y (10:90 % v/v) sistemas solventes. Todas las demás mezclas de disolventes de metanol:Diclorometano y etanol:Diclorometano produjeron material amorfo. En la Fig. 16 se muestran los difractogramas de XRPD 20 de sólidos recuperados de una criba de cristalización exitosa de COMP 25 crudo.
Tabla 12: Cribado de cristalización en COMP 25 crudo
Figure imgf000031_0002
(Continuación)
Figure imgf000032_0002
Cristalización de enfriamiento sembrada de COMP 25 crudo
[0132] Procedimiento general: Aproximadamente 20 mg de COMP 25 crudo se pesaron en un vial de vidrio de 2 ml y 100 NL del solvente respectivo El sistema se añadió a los experimentos en aprox. 25°C. Todos los disolventes se secaron sobre tamices moleculares 3a presecados (donde fuera apropiado) antes de su uso. Se añadió una pequeña cantidad de COMP 25 cristalino como semilla a los experimentos. Los experimentos se calentaron a 40°C. Los experimentos se enfriaron a 5°C a aprox. 0,11°C/minuto. Los experimentos se agitaron a 5°C durante 3 horas y se sometieron a ciclos de temperatura entre 5°C y 40°C a 0,2°C/minuto durante la noche (aprox. 18 horas). Los experimentos en los que se observó material sólido, los sólidos se aislaron usando una centrífuga a temperatura ambiente (aprox. 22°C) y se analizaron por XRPD. La Tabla 13 resume los sistemas de disolventes utilizados para la cristalización por refrigeración sembrada de COMP 25 crudo.
Tabla 13: Sistemas de solventes utilizados para la cristalización por enfriamiento sembrada de COMP 25 crudo
Figure imgf000032_0001
[0133] Las únicas condiciones experimentales que devolvieron la forma cristalina recurrente fueron metanol:diclorometano (10:90 % v/v). Metanol:diclorometano (20:90% v/v) devolvió material débilmente cristalino. Todas las mezclas de etanol: Diclorometano y metanol:diclorometano (30:70% v/v) devolvieron material amorfo. La Fig. 17 muestra difractogramas de XRPD 20 sobre sólidos después de ciclos de temperatura y la Fig. 18 muestra micrografías PLM de material cristalino obtenido a partir de metanol sembrado: Diclorometano (10:90 %v/v).
Cristalización por enfriamiento de COMP 25 en bruto (ensayo de 20 mg)
[0134] Procedimiento general: Se pesó COMP 25 en bruto en un vial de muestra de 2 ml y se añadió una alícuota conocida de disolvente a aprox. 25°C. Se agita a 25°C. Enfriado de 25°C a 5°C a aprox. 0,11°C/minuto. Se agita a 5°C durante 3 horas. Temperatura ciclada entre 5°C y 40°C a aprox. 0,2°C/ minutos. Los experimentos en los que se observó material sólido, los sólidos se aislaron a 25°C usando una centrífuga y se analizaron por XRPD. La Tabla 14 resume las condiciones utilizadas para la cristalización por enfriamiento y la Tabla 15 resume las condiciones para la cristalización por enfriamiento a doble escala. Las Tablas 16 y 17 resumen los resultados y las observaciones de los estudios de cristalización por enfriamiento. Difractogramas de XRPD 20 de ejemplos de sólidos después de ciclos de temperatura a una concentración aprox. 150 mg/ml se muestran en la Fig. 19.
Tabla 14: Condiciones para cristalización de enfriamiento
Figure imgf000033_0001
Tabla 15: Condiciones para cristalización de enfriamiento en doble escala
Figure imgf000033_0002
Tabla 16: Resumen de resultados y observaciones para cristalización de enfriamiento
Figure imgf000033_0003
Tabla 17: Resumen de resultados y observaciones para cristalización de enfriamiento
Figure imgf000033_0004
Cristalización antidisolvente/refrigerante de COMP 25 crudo
[0135] Procedimiento general: Aproximadamente 50 mg de COMP 25 crudo se pesaron en un vial de muestra de 2 ml y el volumen apropiado del disolvente respectivo se añadió a aprox. 25°C. Se añadió el antidisolvente respectivo al vial apropiado en alícuotas de 25 NL a aprox. 25°C. Los experimentos se enfriaron de 25°C a 5°C a aprox. 0,11°C/minuto. Se agita a 5°C durante 3 horas. Los experimentos se sometieron a ciclos de temperatura entre 5°C y 40°C a aprox.
0,2°C/minuto durante la noche (aprox. 18 horas). Los experimentos en los que se observó una suspensión fina o una solución clara se añadió más antidisolvente a los experimentos a aprox. 25°C. Los experimentos se enfriaron de 25°C a 5°C a aprox. 0,11°C/minuto. Se agita a 5°C durante 3 horas. Los experimentos se sometieron a ciclos de temperatura durante la noche entre 5°C y 40°C a aprox. 0,2°C/minuto durante la noche (aprox. 18 horas). Los experimentos en los que se observó material sólido, los sólidos se aislaron a temperatura ambiente (aprox. 22°C) usando una centrífuga y se analizaron por XRPD. Las muestras que se aislaron luego se secaron al vacío a temperatura ambiente durante la noche. Usando 2-metil THF como antidisolvente, las cristalizaciones dieron como resultado la formación de un material similar a un gel usando metanol: mezclas de disolventes de diclorometano y sistema solvente de etanol: diclorometano (30: 70% v/v). Se observó el uso de heptano como material cristalino antidisolvente en la mayoría de los sistemas disolventes. Como se muestra en las Tablas 18 y 19, se observó el uso de acetonitrilo como material parcialmente cristalino antidisolvente utilizando la mayoría de los sistemas disolventes. Los difractogramas XRPD 20 de sólidos después del ciclo de temperatura, los heptanos usados como antidisolvente se muestran en las Figs. 20 y 21 En las Figs. 20 y 21.
Tabla 18: Observaciones y resultados para cristalizaciones de adición/enfriamiento de anti-solventes
Figure imgf000034_0005
Tabla 19: Observaciones y resultados para cristalizaciones de adición/enfriamiento de anti-solventes
Sistema solventes Anti­ Concentraci Observaciones Observaciones Observaciones Resultados (%v/v) solventes (mg/mL) después de después de de análisis ciclado de ciclado de XRPD temp. durante temp. adicional
la noche
Etanol:Diclorometano 190,9 Solución clara Suspensión Suspensión Cristalina (30:70) blanca Etanol:Diclorometano 200,8 Solución clara Suspensión Suspensión Cristalina
(20:80 blanca espesa
Figure imgf000034_0001
Etanol:Diclorometano 211,9 Solución clara Gel claro Gel N/A (10:90
Etanol:Diclorometano 141,33 recipitación espes Poca Suspensión Parcialmente (30:70 precipitación cristalina Etanol:Diclorometano 139,33 recipitación espes Suspensión Suspensión Parcialmente (20:80 blanca cristalina Etanol:Diclorometano 106 recipitación espes Goma blanca Suspensión Parcialmente (10:90 cristalina Etanol:Diclorometano 198 Solución clara Similar a gel Similar a gel N/A (30:70
Figure imgf000034_0004
Figure imgf000034_0002
Figure imgf000034_0003
Cristalización de enfriamiento de COMP 25 crudo (escala de 200-250 mg)
[0136] Procedimiento general: La masa respectiva de COMP 25 crudo se pesó en un vial de muestra de 20 ml y se añadió el volumen apropiado del sistema disolvente respectivo a aprox. 25°C para disolver la muestra. Los experimentos se enfriaron a 5°C a aprox. 0,1°C/min. Se agita a 5°C durante 2 horas. Ciclo de temperatura entre 5°C y 40°C. Calentado a 40°C durante 2 horas (aprox. 0,3°C/minuto). Se agita a 40°C durante 2 horas. Enfriado a 5°C durante 2 horas (aprox.
0,3°C/minuto). Se agita a 5°C durante 2 horas. Las muestras se aislaron a temperatura ambiente (aprox. 22°C) filtrando sobre un embudo Buchner al vacío usando papel de filtro Whatmann No. 1, luego se secaron al vacío a temperatura ambiente durante la noche (aprox. 18 horas). A continuación, el material sólido se analizó mediante XRPD y PLM. Los resultados se resumen en la Tabla 20 y se muestran en las Figs. 22 y 23. En la Fig. 24 se muestra el cromatograma de HPLC de una cristalización por enfriamiento ejemplar 2.
Tabla 20: Observaciones y resultados para cristalización de enfriamiento
Figure imgf000035_0001
Cristalización por enfriamiento sembrada de COMP 25 crudo (escala de 250 mg)
[0137] Se añadió el vial y el volumen apropiado del sistema disolvente respectivo a aprox. 25°C para disolver la muestra. Se añadió COMP 25 cristalino a los experimentos como semilla. Los experimentos se enfriaron a 5°C a aprox. 0,1°C/min. Se agitaron a 5°C durante 2 horas. La temperatura se cicló entre 5°C y 40°C. Se calentó a 40°C durante 2 horas (aprox.
0,3°C/minuto). Se agitó a 40°C durante 2 horas. Se enfrió a 5°C durante 2 horas (aprox. 0,3°C/minuto). Se agitó a 5°C durante 2 horas. Las muestras se aislaron a temperatura ambiente (aprox. 22°C) filtrando sobre un embudo Buchner al vacío usando papel de filtro Whatmann No. 1, luego se secaron al vacío a temperatura ambiente durante la noche (aprox.
18 horas). A continuación, el material sólido se analizó mediante XRPD y PLM. Los resultados se resumen en la Tabla 21 y se muestran en las Figs. 25 y 26.
[0138] Mezcla de disolventes metanol:ficlorometano (10:90 %v/v). Concentración 160 mg/ml. El material devuelto era cristalino y tenía una pureza del 96,65% por HPLC. El rendimiento calculado para este experimento fue del 36%. Mezcla de disolventes metanol:diclorometano (20:80 %v/v). Concentración 190 mg/ml. El material devuelto era cristalino y tenía una pureza del 96,21% por HPLC (Fig. 27). El rendimiento calculado para este experimento fue del 41%.
Tabla 21: Condiciones para cristalización por enfriamiento sembrada
Figure imgf000035_0002
Cristalización sembrada, antidisolvente y de enfriamiento
[0139] Procedimiento general: se pesaron aproximadamente 250 mg de COMP 25 crudo en un vial de muestra de 20 ml y el volumen apropiado de los respectivos se añadió el sistema disolvente a aprox. 25° para disolver el IO-125. Se añadió heptano como antidisolvente en alícuotas de 250 NL. Se añadió un total de 1 ml de heptano a cada experimento. Los experimentos se sembraron utilizando COMP 25 cristalino. Los experimentos se agitaron a 25°C durante aprox. 1 hora y luego se enfriaron a 5°C a aprox. 0,1°C/minuto. Se agitaron a 5°C durante 2 horas. La temperatura se cicló entre 5°C y 40°C. Se calentó a 40°C durante 2 horas (aprox. 0,3°C/minuto). Se agitó a 40°C durante 2 horas. Se enfrió a 5°C durante 2 horas (aprox. 0,3°C/minuto). Se agitó a 5°C durante 2 horas. Los experimentos se aislaron a temperatura ambiente (aprox. 22°C) filtrando sobre un embudo Buchner al vacío utilizando papel de filtro Whatmann n° 1 y luego se secaron al vacío a temperatura ambiente durante la noche (aprox. 18 horas). Luego, el material sólido se analizó por XRPD (Fig. 28) y PLM (Fig. 29). Se usó la combinación de las tres técnicas para ver si había alguna diferencia en el material producido a partir de sistemas solventes y también para ver si se habían encontrado las mejores condiciones de cristalización. Los cálculos de rendimiento se llevaron a cabo y se resumen en la Tabla 22. En la Fig. 30 se muestra el cromatograma de HPLC de un sólido aislado utilizando metanol:diclorometano (20:80 %v/v) con hepatos como antidisolvente.
Tabla 22: Observación experimental de cristalización sembrada, antidisolvente y de enfriamiento
Figure imgf000035_0003

Claims (21)

REIVINDICACIONES
1. Un método para preparar un compuesto de platino conjugado con lípidos que comprende:
hacer reaccionar una sal soluble en agua de un lípido con un compuesto de platino soluble en agua en una solución sustancialmente acuosa para obtener el compuesto de platino conjugado con lípidos como un precipitado;
donde la sal soluble en agua de un lípido es un compuesto de Fórmula II
Figure imgf000036_0001
Fórmula II
donde,
X es NH o N-CH2COO-,
X I se selecciona del grupo que consiste en -(CH2)nO-, -(CH2)nNHCOO-, -(CH2)nCONH(CH2)nO-, -(CH2)nO(CH2)nO-, -(CH2)nC=O-, -(CH2)nNHCO(CH2)nO- y -(CH2)nCOO-,
donde n= 0-2,
caracterizado porque la preparación de la sal hidrosoluble de un lípido de Fórmula II consiste en
a. obtener un enlazador unido covalentemente a un lípido basado en la Fórmula II en dos pasos; y b. hacer reaccionar el conector obtenido unido covalentemente a un lípido con una base seleccionada del grupo que consiste en LiOH, NaOH, KOH, RbOH, CsOH, Mg(OH)2, Ca(OH)2, Sr(OH)2, Ba(OH)2, o un ácido tal como TFA, y cualquier combinación de los mismos para obtener la sal soluble en agua de un lípido de Fórmula II; en el que el método proporciona un rendimiento de >50% para el compuesto de platino conjugado con lípidos; y en el que el método proporciona una pureza >70% para el compuesto de platino conjugado con lípidos.
2. El método de la reivindicación 1, que comprende además el paso de:
filtrar o centrifugar la mezcla de reacción para separar el precipitado de la solución sustancialmente acuosa y, opcionalmente, lavar el precipitado con agua; y/o
que comprende además el paso de:
purificar el compuesto de platino conjugado con lípido usando HPLC.
3. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que la pureza del compuesto de platino conjugado con lípidos se determina usando HPLC analítica en una columna NH2, C18 o Fenilo.
4. El método de la reivindicación 2, en el que la purificación por HPLC utiliza una columna de fase inversa preparativa, opcionalmente en el que la columna comprende una fase estacionaria de NH2, una fase estacionaria de fenilo o una fase estacionaria de C18.
5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 3-4, donde la columna comprende NH2o fase estacionaria de fenilo, y el compuesto de platino conjugado con lípidos se eluye usando un método de gradiente, opcionalmente donde el método de gradiente comprende eluir con una fase móvil que comprende una mezcla de agua y metanol, donde la elución comienza con la mezcla que tiene un mayor porcentaje de agua y progresa linealmente en el tiempo a la mezcla que tiene un mayor porcentaje de metanol; o
donde la columna comprende C18, y el compuesto de platino conjugado con lípidos se eluye usando un método isocrático, opcionalmente donde el método isocrático comprende eluir con una fase móvil que comprende 98% de metanol y 2% de agua.
6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el paso de purificación por HPLC proporciona una pureza de >99,5% para el compuesto de platino conjugado con lípidos.
7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el método proporciona un rendimiento de >70% para el compuesto de platino conjugado con lípidos.
8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde la solución sustancialmente acuosa comprende al menos 90% de agua, opcionalmente donde la solución sustancialmente acuosa comprende al menos 95% de agua, opcionalmente donde la solución sustancialmente acuosa comprende al menos 98% de agua, opcionalmente en donde la solución sustancialmente acuosa comprende al menos 99% de agua, opcionalmente en donde la solución sustancialmente acuosa comprende 100% de agua.
9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que la reacción se realiza a temperatura ambiente y a una presión de 790-650 mmHg (105-87 kPa).
10. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que la sal soluble en agua de un lípido se selecciona del grupo que consiste en una sal de litio, una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de rubidio, una sal de cesio, una sal de magnesio, una sal de calcio, una sal de estroncio, una sal de bario, una sal de ácido trifluoroacético (TFA) y cualquier combinación de los mismos.
11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde la sal hidrosoluble de un lípido comprende un lípido seleccionado del grupo que consiste en: grasas, ceras, esteroles, esteroides, ácidos biliares, vitaminas liposolubles, monoglicéridos, diglicéridos, fosfolípidos, glicolípidos, sulfolípidos, aminolípidos, cromolípidos, glicerofosfolípidos, esfingolípidos, lípidos de prenol, sacarolípidos, policétidos, ácidos grasos y cualquier combinación de los mismos; opcionalmente donde el lípido es a) colesterol o derivados del mismo o b) a-tocoferol.
12. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que la sal soluble en agua de un lípido comprende un enlazador unido covalentemente al lípido.
13. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde el compuesto de platino soluble en agua está representado por la Fórmula V:
Figure imgf000037_0001
Donde,
X1, X2, X3 y X4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en haluro, alquilo, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxilo, H2O, alcoxi, tiol, tioalquilo, O-acilo y cualquier combinación de los mismos;
opcionalmente donde X1 y X2 son ligandos monodentados o bidentados, y/o donde X1 y X2 son amino; opcionalmente donde X1 y X2 son diaminociclohexilo (DACH).
14. El método de la reivindicación 13, en el que X3 y X4 son cada uno H2O.
15. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 13-14, en el que el compuesto de platino soluble en agua se proporciona mediante la reacción de un compuesto de platino de Fórmula V, en el que X1 y X2 comprenden un ligando amino bidentado y X3 y X4 comprenden cada uno un haluro., con AgNO3 y H2O, donde opcionalmente X1 y X2 son DACH y X3 y X4 son cada uno Cl.
16. Un método para preparar una nanopartícula, en el que el método comprende:
un método según la reivindicación 1-15, en el que el compuesto de platino conjugado con lípidos preparado mediante el proceso de cualquiera de las reivindicaciones 1-15 se procesa adicionalmente mezclándolo con un co-lípido en presencia de disolvente para obtener la nanopartícula;
opcionalmente en donde el solvente se selecciona del grupo que consiste en cloroformo, metanol, diclorometano, etanol y cualquier combinación de los mismos.
17. El método de la reivindicación 16, donde el co-lípido se selecciona del grupo que consiste en Soja-fosfatidilcolina (totalmente hidrogenada), 1,2-Distearoil-sn-Glicero-3-Fosfoetalonamina-N-[Metoxi(Polietilenglicol)-2000], dioleoil fosfatidilcolina (DOPC), DSPE-PEG-OMe, dioleoil fosfatidiletanolamina (DOPE), dipalmipoil fosfatidilcolina (DPPC) y cualquier combinación de los mismos.
18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 16-17, en el que el método comprende además los pasos de secado, incubación y adición opcional de un estabilizador;
opcionalmente en el que el estabilizador se selecciona del grupo que consiste en DSPE-PEG-OMe, DSPE-PEG-NH2, PEG, sal Inorgánica, carbohidrato y cualquier combinación de los mismos;
opcionalmente en donde la sal Inorgánica se selecciona del grupo que consiste en cloruro de amonio, cloruro de potasio, cloruro de sodio, fosfato ácido de disodio, fosfato de diácido de sodio y cualquier combinación de los mismos, o en donde el carbohidrato se selecciona del grupo que consiste en glucosa, dextrosa, sacarosa, trehalosa, manitol, lactosa y cualquier combinación de los mismos.
19. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 16-18, en el que los co-lípidos comprenden soja-fosfatidilcolina (hidrogenada) y 1,2-Distearoil-sn-Glicero-3-Fosfoetalonamina-N-[Metoxi(Polietilenglicol)-2000], opcionalmente en el que la proporción de % en moles del compuesto de platino conjugado con lípidos y los colilípidos es de 30:55:4 a 38:57:5; o en el que los co-lípidos comprenden fosfatidilcolina de soja (hidrogenada), colesterol y 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetalonamina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000], opcionalmente en el que la proporción de % en moles del compuesto de platino y los co-lípidos es de 20:60:3:1 a aproximadamente 35:70:15:5.
20. Una composición que comprende el compuesto de platino conjugado con lípidos preparado por el proceso de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, y DOPE, opcionalmente en donde la proporción de % en moles del compuesto de platino conjugado con lípidos y DOPE es de aproximadamente 20:30 a aproximadamente 30:50.
21. El método de la reivindicación 1, en el que el compuesto de platino conjugado con lípidos es un compuesto de platino conjugado con colesterol, y el compuesto de platino conjugado con colesterol se prepara:
al hacer reaccionar una sal soluble en agua de un colesterol con un compuesto de platino soluble en agua en una solución sustancialmente acuosa para obtener el compuesto de platino conjugado con colesterol como un precipitado;
en el que la sal soluble en agua de un colesterol se prepara:
a. al hacer reaccionar el colesterol o derivado de colesterol con un compuesto seleccionado del grupo que consiste en
Figure imgf000038_0001
Y
b. hacer reaccionar el producto obtenido en el paso a) con una base seleccionada del grupo que consiste en LiOH, NaOH, KOH, RbOH, CsOH, Mg(OH)2, Ca(OH)2, Sr(OH)2, Ba(OH)2, o un ácido tal como TFA, y cualquier combinación de los mismos para obtener la sal hidrosoluble de un colesterol.
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