ES2918329T3 - Nuevo agonista de grelina centralmente activo y usos médicos del mismo - Google Patents

Abstract

El nuevo compuesto 3- (1- (2,3-dicloro-4-metoxifenil) etil) -1-metil-1-(1,3, 3-trimetilpiperidina -4-il) urea monohidrocloruro tiene una alta capacidad para permear a través de la barrera hematoencefálica y para mostrar, a nivel central del sistema nervioso, una actividad agonista de grelina consistente; El compuesto es efectivo en el tratamiento y/o prevención de una condición médica mediada por el receptor de grelina en el sistema nervioso central. En particular, en las pruebas experimentales, el compuesto ha mostrado una alta eficacia en el tratamiento del daño neurotóxico, con un patrón combinado útil de efectos neuroprotectores tanto a nivel central como periférico. El compuesto es aún más útil en el tratamiento de afecciones que requieren una reducción de la frecuencia cardíaca. El compuesto es farmacológicamente activo a dosis bajas a moderadas, lo que muestra un índice terapéutico favorable. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Nuevo agonista de grelina centralmente activo y usos médicos del mismo

ESTADO DE LA TÉCNICA

La grelina es una hormona peptídica natural producida por células grelinérgicas en el tracto gastrointestinal que funciona como un neuropéptido en el sistema nervioso central. El objetivo biológico de la grelina es el receptor del secretagogo de la hormona del crecimiento acoplado a la proteína G (GHSR), clonado por primera vez en 1996 (1). Se han descrito dos subtipos de receptores, el 1a y el 1b, pero solo el primero es capaz de activar la transducción de señales (2). El GHSR se expresa principalmente en el sistema nervioso así como en múltiples órganos no nerviosos donde está implicado en diversos procesos fisiológicos (2-4). El péptido grelina está implicado principalmente en la regulación del apetito, desempeñando también un papel importante en la regulación de la distribución y la tasa de uso de la energía. El péptido grelina actúa sobre las células cerebrales hipotalámicas tanto para aumentar el hambre, como para aumentar la secreción de ácido gástrico y la motilidad gastrointestinal para preparar el cuerpo para la ingesta de alimentos. El péptido grelina también desempeña un papel importante en la regulación de la percepción de la recompensa en las neuronas de dopamina que conectan el área tegmental ventral con el núcleo accumbens (un sitio que desempeña un papel en el procesamiento del deseo sexual, la recompensa y el refuerzo, y en el desarrollo de adicciones) a través de sus coreceptores localizados e interacción con la dopamina y la acetilcolina. Los ensayos clínicos han evaluado el potencial terapéutico del péptido grelina en múltiples estados patológicos, como la anorexia nerviosa (5), la caquexia por cáncer (6,7), la regulación del sueño-vigilia (8), la insuficiencia cardíaca crónica (9) y los trastornos de la movilidad gastrointestinal (10). En animales, la grelina promueve la proliferación celular y la neurogénesis en las neuronas (11). También se ha demostrado que el péptido grelina posee propiedades neuroprotectoras y previene la apoptosis (12). Los receptores de grelina (GHSR) se han localizado en varias regiones distintas del sistema nervioso central (SNC). La administración exógena del péptido grelina mejora la encefalomielitis experimental (15), la enfermedad de Parkinson (16) y la enfermedad de Alzheimer (17) en modelos preclínicos. Además, se ha propuesto que el péptido grelina posee propiedades de reparación neural directa después de una lesión del sistema nervioso central o periférico (18). El dolor neuropático tiene un importante componente inflamatorio, con una activación sostenida de las células neurogliales y una producción aumentada de citoquinas proinflamatorias. Además, hay informes de efectos terapéuticos del péptido grelina en modelos de roedores de diabetes (20), lesión constrictiva crónica (21) y neurotoxicidad inducida por quimioterapia (CIPN) (22), así como en modelos de dolor agudo (23) y artritis crónica (24). Sin embargo, la penetración cerebral limitada del péptido grelina (25), su falta de biodisponibilidad oral y su vida media corta de solo 8-24 minutos en roedores (26) y 37 minutos en el hombre (27) limitan su utilidad clínica como fármaco. De hecho, la demostración de la eficacia preclínica a menudo requiere múltiples inyecciones sistémicas o la administración intratecal/intraventricular central, lo que enfatiza la necesidad de una infusión continua de grelina o el uso de agonistas con vidas medias más prolongadas y una penetración en el sistema nervioso potenciada.

La identificación del receptor de la grelina ha impulsado investigaciones dirigidas a identificar nuevos compuestos con afinidad de unión a dicho receptor, con actividad tipo grelina, buscando posibles ventajas terapéuticas sobre el péptido original. Moléculas pequeñas no peptídicas serían aquí de particular interés ya que es probable que pasen por alto las vías de inactivación metabólica de los péptidos; al mismo tiempo, sin embargo, la mayor diferencia estructural con el péptido original posiblemente puede dar como resultado variaciones en el espectro original de actividades de la grelina y las moléculas similares a la grelina.

La solicitud de patente WO2012/116176 describe ureas asimétricas de fórmula general (I)

que tienen propiedades de modulación del receptor de grelina; la solicitud contiene datos experimentales referentes a la afinidad del receptor GHSRIa del compuesto y la actividad in vivo sobre la ingesta de alimentos en ratones; los compuestos se proponen para su uso en el tratamiento de una serie de enfermedades que incluyen obesidad, sobrepeso, trastornos alimentarios, síndrome metabólico, debilitamiento debido al envejecimiento o al SIDA, enfermedades gastrointestinales, trastornos gástricos, etc.

La solicitud de patente WO2015/134839 describe moduladores de grelina adicionales de fórmula:

La solicitud contiene datos experimentales sobre la afinidad del receptor GHSR1a del compuesto y la actividad in vivo sobre la ingesta de alimentos y en modelos de ratones de abuso de alcohol.

A pesar de los grandes esfuerzos, ninguno de los agonistas de molécula pequeña descubiertos recientemente ha sido aprobado para uso terapéutico. Su utilidad clínica a menudo está limitada por un perfil de seguridad insatisfactorio y/o una captación deficiente en el sistema nervioso central. En particular, la impermeabilidad del SNC de los agonistas de la grelina representa una limitación importante, en vista del hecho de que gran parte de los receptores de la grelina se expresan en el sistema nervioso central y muchas enfermedades dependientes de la grelina están, por lo menos en parte, mediadas centralmente. Por otro lado, hacer que las moléculas disponibles sean capaces de pasar eficientemente a través de la barrera hematoencefálica es una tarea compleja: un paso con éxito requiere superar varios pasos críticos, en particular: la captación de la molécula del fármaco de la circulación sistémica por las células endoteliales del cerebro; la internalización eficiente del fármaco en dichas células; la capacidad de estas células para liberar el fármaco, en forma no metabolizada, al compartimento del SNC, en cantidades suficientemente altas para provocar la respuesta farmacológica. Solo un ajuste fino/sinergia de los mecanismos anteriores puede dar como resultado un flujo de fármaco en forma activa a través de la barrera hacia el objetivo del SNC: en realidad, solo una pequeña fracción de las moléculas conocidas del fármaco se encuentran en cantidades sensibles en el SNC después de la administración sistémica: esto no sorprende porque la barrera hematoencefálica está estructurada funcionalmente para aislar el compartimento del SNC de los xenobióticos posiblemente peligrosos presentes en la sangre.

Además, para aquellas condiciones médicas que requieren una acción tanto a nivel central como periférico, el descubrimiento de moléculas capaces de atravesar la barrera hematoencefálica no es una solución ideal como tal: de hecho, se enfrentan al desafío adicional de lograr/mantener un equilibrio adecuado de fármaco en forma activa y concentración activa en ambos compartimentos a través de la barrera, de tal manera que cualquier acumulación farmacocinética favorecida a nivel central no comprometa los efectos útiles a nivel periférico; este problema se considera particularmente en el área de las enfermedades neurológicas, que a menudo implican daños tanto a nivel central como periférico. Además, la capacidad de atravesar la barrera hematoencefálica, a la vez que abre el camino a la acción deseada a nivel central, plantea nuevos problemas relacionados con una acumulación potencialmente excesiva de fármaco en el cerebro; por lo tanto un fármaco que pase al cerebro debería ser eficaz a dosis muy bajas, asegurando por tanto un equilibrio entre los procesos de acumulación/eliminación, evitando el riesgo de acumulación en el cerebro en cantidades sensibles.

Por lo tanto, aún no se satisface la necesidad de agonistas de grelina sintéticos de molécula pequeña, que tengan una fuerte afinidad por el receptor de grelina en el cerebro, que sean capaces de atravesar la barrera hematoencefálica en cantidades significativas en forma no metabolizada y establecer concentraciones farmacológicamente activas en el cerebro. Se considera además la necesidad de agonistas de grelina, que sean particularmente eficaces en el área neurológica, que muestren efectos terapéuticos tanto a nivel periférico como central; se considera una necesidad aún mayor de que los agonistas de grelina tengan un riesgo reducido de acumulación cerebral no deseada.

SUMARIO

El presente solicitante ha descubierto ahora que el compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea es un agonista de la grelina con una alta capacidad para penetrar la barrera hematoencefálica y mostrar, a nivel del sistema nervioso central, una notable actividad agonista de la grelina; por lo tanto, el compuesto es eficaz en el tratamiento y/o prevención de una afección médica mediada por el receptor de grelina en el sistema nervioso central. En particular, las pruebas experimentales han obtenido una alta eficacia en el tratamiento del daño neurotóxico, con un patrón combinado útil de efectos neuroprotectores tanto a nivel central como periférico. El compuesto también produce un efecto bradicárdico mediado centralmente, hasta ahora desconocido para las moléculas similares a la grelina. haciéndolo particularmente útil en el tratamiento de afecciones cardiovasculares que requieren una reducción del ritmo cardíaco. El compuesto muestra además una relación dosis/eficacia no lineal, maximizándose a niveles de dosis intermedios, en lugar de los más altos: esto permite alcanzar los efectos máximos deseados mientras se administran dosis moderadas, limitando por tanto los riesgos de acumulación cerebral no deseada en el cerebro u otros compartimentos corporales, así como cualquier otro problema general de toxicidad.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1: Efecto del tratamiento con Compuesto A sobre el peso corporal, la ingesta de alimentos y la hiperalgesia mecánica inducida por la inyección de cisplatino en ratas. El cisplatino (0,5 mg/kg), administrado IP una vez al día durante 3 días (del día 0 al día 2), provocó una disminución del peso corporal y de la ingesta diaria de alimentos y el desarrollo de hiperalgesia mecánica. A) El ANOVA unidireccional seguido de la prueba de comparación múltiple post hoc de Tukey encontró un efecto global significativo del cisplatino sobre el peso corporal (p<0,05) que mejoró con el tratamiento con el Compuesto A a 3, 10 (ambos p<0,01) y 30 mg/ kg (p<0,05). B) La ingesta de alimentos se redujo significativamente con cisplatino (p<0,05) y mejoró con 10 y 30 mg/kg de Compuesto A (ambos p<0,05). C) La hiperalgesia mecánica fue inducida por cisplatino y mejoró significativamente con 10 y 30 mg/kg de Compuesto A (p<0,05), pero no con 3 mg/kg de Compuesto A.

Figura 2: Efecto del Compuesto A sobre la velocidad de conducción nerviosa (NCV) y la amplitud potencial en ratones tratados con oxaliplatino. Todos los parámetros se midieron antes y 24 h después de completar el régimen de dosificación que consistía de vehículo o Compuesto A (10 o 30 mg/kg) PO diariamente, seguido de oxaliplatino (6 mg/kg) o vehículo (cada 4 días para un total de 8 administraciones) IP. La última dosis de Compuesto A se administró 1 h antes del registro. (* indica p=<0,05 frente a veh/oxaliplatino; #=p<0,05 frente a veh/veh). A) y C) La administración del Compuesto A a 10 y 30 mg/kg impidió significativamente la disminución de NCV digital y caudal observada en ratones tratados con oxaliplatino. B) La amplitud del potencial digital disminuyó con la administración de oxaliplatino y el tratamiento con el Compuesto A tendió a normalizar la amplitud del potencial, pero solo la administración del Compuesto A 30 mg/kg pudo normalizar estos datos. D) La amplitud del potencial nervioso caudal no se vio afectada significativamente por el tratamiento con oxiplatino.

Figura 3: El compuesto A revirtió la reducción de la densidad de fibras nerviosas intraepidérmicas (IENFD). La IENFD se midió 24 h después de la última dosis del Compuesto A. El oxaliplatino produjo una disminución significativa en el número de fibras que se normalizó completamente mediante el tratamiento con el COMPUESTO A a 10 o 30 mg/kg al día (p<0,01). A) La administración del Compuesto A tanto a 10 como a 30 mg/kg fue capaz de normalizar la IENFD en ratones tratados con vehículo. B) y C) El tratamiento crónico con bortezomib indujo una reducción estadísticamente significativa en la IENFD; en el entorno preventivo, pero no en el entorno terapéutico, todas las dosis del Compuesto A previnieron significativamente esta reducción.

Figura 4: Concentraciones en plasma, DRG y nervio ciático del Compuesto A. A) y B) Después de una única dosis oral del Compuesto A de 10 y 30 mg/kg, el compuesto se absorbió y distribuyó fácilmente en plasma y tejidos nerviosos con concentraciones máximas en el plazo de 0,25-0,5 h. La vida media terminal fue corta en plasma, pero significativamente más larga en nervio ciático y DRG; el compuesto mostró una excelente penetración tisular tanto en los nervios ciáticos como en DRG. C) Después de 30 días de dosificación diaria, la concentración del Compuesto A era muy baja en plasma pero elevada en el nervio ciático y GRD, lo que sugiere una marcada acumulación del Compuesto A en estos tejidos.

Figura 5: La administración del Compuesto A revirtió la alodinia inducida por bortezomib. Entorno preventivo. A) Al final del tratamiento, los grupos tratados con bortezomib en combinación con todas las dosis del Compuesto A no mostraron alodinia, mientras que esto se observó en las ratas tratadas con bortezomib solo. Entorno terapéutico. B) Antes del comienzo de la coadministración con el Compuesto A (4 semanas), todos los animales tratados con bortezomib desarrollaron alodinia. Después de una semana desde el comienzo del cotratamiento y al final del tratamiento, solo los grupos tratados con bortezomib solo tenían alodinia, mientras que todos los grupos tratados conjuntamente con el Compuesto A estaban protegidos.

Figura 6: Efecto del Compuesto A sobre la velocidad de conducción nerviosa (NCV) y la amplitud potencial en ratas tratadas con bortezomib. Entorno preventivo. A) El tratamiento con bortezomib solo o en combinación con el Compuesto A a las dosis de 3 y 10 mg/kg mostró una reducción estadísticamente significativa en la NCV digital, mientras que el grupo tratado conjuntamente con la dosis más alta de Compuesto A no tuvo alteración si se compara a CTRL. B) No se observaron cambios en la amplitud del potencial digital en todos los grupos. C) y D) Todos los grupos tratados con bortezomib solo o en combinación con todas las dosis del Compuesto A mostraron una reducción significativa en la NCV caudal y la amplitud potencial. Entorno terapéutico. E) y F) Solo los animales tratados con bortezomib solo mostraron una reducción significativa en la NCV digital, mientras que se observó una reducción en la amplitud potencial solo en el grupo tratado conjuntamente con la dosis más alta del Compuesto A. G) y H) Como se muestra en un entorno preventivo, todos los grupos tratados con bortezomib solo o en combinación con todas las dosis del Compuesto A tuvieron una reducción significativa en la NCV caudal y la amplitud potencial.

Figura 7: frecuencia cardiaca media - valores absolutos (media del promedio de lecturas por triplicado) de pacientes humanos tratados con dosis de 0,1, 0,3, 1 o 10 mg del Compuesto A, en comparación con el placebo.

Figura 8: frecuencia cardiaca media - cambios desde el valor de referencia (media del promedio de lecturas por triplicado) de pacientes humanos tratados con dosis de 0,1, 1, 0,3 o 10 mg del Compuesto A, en comparación con el placebo.

Figura 9: Datos de XRPD del compuesto A.

Figura 10: 1H-NMR del Compuesto A.

Figura 11: 13C-NMR del Compuesto A.

Figura 12: Concentraciones medias del Compuesto A en plasma (ng/ml) y cerebro (ng/g) después de una única dosis IV de 10 mg/kg en ratas Sprague Dawley macho.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

Al compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1 -(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1 -metil-1 -(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea objeto de la presente invención se hace referencia brevemente como "Compuesto A". Tiene la siguiente fórmula química estructural:

El término "afección médica" usado en la presente se refiere a enfermedades o trastornos; el término "enfermedad" significa un síndrome médico establecido; el término "alterar" significa cualquier daño o mal funcionamiento de una parte del cuerpo, órgano o tejido en particular que puede producirse con o sin dar lugar a un síndrome patológico completo.

El término "afección médica mediada por el receptor de grelina en el sistema nervioso central" significa aquellas enfermedades/trastornos que son típicos o por lo menos parcialmente típicos del sistema nervioso central, que responden al tratamiento con grelinas; entre ellos pueden mencionarse la encefalomielitis, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y los trastornos cognitivos; en particular, el Compuesto A es altamente eficaz en la neuropatía, el dolor neuropático y/o la neurodegeneración; además, el compuesto A también muestra una actividad bradicárdica inesperada útil en el contexto de enfermedades que requieren una reducción de la tasa cardíaca (taquicardia), por ejemplo, que se produce en el caso de toxicidad cardiovascular inducida por quimioterapia; la taquicardia es parte de la clase de enfermedades del sistema nervioso central, ya que responde al control del nervio vagal. Cuando se usa para tratar la neuropatía, esta es preferiblemente una neuropatía inducida por quimioterapia, estando presente a nivel central y/o periférico. Los agentes quimioterapéuticos son bien conocidos en la técnica: típicamente, pero sin limitarse a ellos, son agentes alquilantes o inhibidores del proteasoma (32). Entre los agentes alquilantes pueden mencionarse complejos de platino como, por ejemplo, cisplatino, carboplatino, etc. Entre los inhibidores del proteasoma pueden mencionarse bortezomib, carfizomib, ixazomib, oprozomib, delanzomib, marizomib, MG-132, OnX-0914, VR-23, celastrol, epoxomicina, etc.

El término "receptor de grelina" es bien conocido en la técnica, también con su nombre alternativo "receptor de secretagogo de la hormona del crecimiento" o "receptor de GHS"; se pretende que todos estos sinónimos sean equivalentes y pueden usarse en la presente indistintamente; el término receptor de grelina y sus sinónimos se extienden a todas sus formas posibles (por ejemplo, la forma GHS1) así como a todas sus isoformas (por ejemplo, las isoformas GHS1a, GHS1b, etc.).

Los términos "tratar" y "tratamiento", cuando se usan en la presente, se refieren a la gestión médica de un paciente con la intención de curar, mejorar, estabilizar o prevenir una enfermedad, afección patológica o trastorno. Este término incluye el tratamiento activo, es decir, el tratamiento dirigido específicamente hacia la mejora de una enfermedad, afección patológica o trastorno, y también incluye el tratamiento causal, es decir, el tratamiento dirigido a la eliminación de la causa de la enfermedad, afección patológica o trastorno asociado. Además, este término incluye tratamiento paliativo, es decir, tratamiento diseñado para el alivio de los síntomas en lugar de la curación de la enfermedad, afección patológica o trastorno; tratamiento preventivo, es decir, tratamiento dirigido a minimizar o inhibir parcial o completamente el desarrollo de la enfermedad, afección patológica o trastorno asociado; y tratamiento de apoyo, es decir, tratamiento empleado para suplementar otra terapia específica dirigida hacia la mejora de la enfermedad, afección patológica o trastorno asociado.

Un objeto adicional de la invención es el Compuesto A para su uso en el tratamiento o prevención de una o más condiciones médicas (enfermedades o trastornos) mediadas por el receptor de grelina en el sistema nervioso central como se define en la reivindicación 1.

Un objeto adicional de la invención es el uso del Compuesto A en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una o más condiciones médicas (enfermedades o trastornos) mediadas por el receptor de grelina en el sistema nervioso central como se define en la reivindicación 1.

En la presente se describe un método para favorecer la absorción en el sistema nervioso central de un agonista de la grelina en un paciente con necesidad de ello, caracterizado por administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto A como agonista de la grelina.

También se describe en la presente un método para favorecer el establecimiento de concentraciones terapéuticamente activas de un agonista de grelina en el sistema nervioso central de un paciente con necesidad de ello, caracterizado por administrar a dicho paciente, una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto A como agonista de grelina.

Como se usa en la presente, el término "farmacéuticamente aceptable" significa lo que es útil para preparar una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica y no indeseable biológicamente ni de otra manera e incluye lo que es aceptable para uso veterinario así como para uso farmacéutico humano.

El Compuesto A, es decir, la sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetil-piperidin-4-il)urea es un compuesto nuevo; la base libre correspondiente se describió en la solicitud de patente WO2012/116176. Por consiguiente, la invención incluye el Compuesto A per se, su uso en medicina y las composiciones farmacéuticas que lo comprenden; la invención incluye además un proceso para producir el Compuesto A, caracterizado por hacer reaccionar su base libre con ácido clorhídrico, como se muestra en la parte experimental.

Como se muestra más adelante en la parte experimental, el Compuesto A tiene un perfil interesante de pureza, estabilidad y solubilidad, lo que lo hace particularmente adecuado para la formulación en una variedad de formas farmacéuticas en diferentes condiciones de fabricación, sin una disminución apreciable de la pureza y la potencia. Por tanto, la invención se extiende al Compuesto A en forma cristalina, en particular en la forma cristalina específica que tiene el patrón de picos de XRDP mostrado en la figura 9. También gracias a estas propiedades, el Compuesto A puede formularse libremente en cualquier forma farmacéutica según lo requiera el tratamiento médico elegido. Se prefieren las formas adaptadas para la administración sistémica. Por ejemplo, puede formularse como un comprimido, píldora, cápsula, microcápsula, gránulo, microgránulo, sedimento, microsedimento, polvo, polvo liofilizado, solución, suspensión o emulsión, gel, crema, sistema de administración percutáneo o transdérmico, etc.

El Compuesto A se administra preferiblemente en una cantidad de dosis que varía de aproximadamente 0,03 mg a aproximadamente 10 mg, preferiblemente de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 2 mg, en base al peso de la base libre. Se pretende que estas dosificaciones sean dosis diarias, para un paciente adulto medio. Pueden variarse y/o adaptarse en función del grado de gravedad de las enfermedades, las condiciones específicas del paciente, la vía de administración específica elegida, etc.

La vía de administración del Compuesto A es sistémica: gracias a su capacidad de penetración en la barrera hematoencefálica, para dirigirse al sistema nervioso central no es necesario inyectarlo directamente en el sistema nervioso central o en el cerebro; de hecho, es suficiente que el fármaco llegue a la circulación general a través de una vía de administración sistémica convencional, por ejemplo, oral, peroral, bucal, inhalatoria, rectal, etc.: una vez que circula en el torrente sanguíneo, el Compuesto A es absorbido por las células endoteliales del sistema nervioso central y desde allí se libera en forma activa al sistema nervioso central. Por tanto es posible tratar enfermedades mediadas por el receptor de grelina en el sistema nervioso central, sin recurrir a vías de administración invasivas que proporcionan acceso directo al sistema nervioso central (por ejemplo, intratecal, intraespinal, etc.). Ventajosamente, de acuerdo con la invención, pueden evitarse las vías de administración invasivas directamente en el sistema nervioso central; por lo tanto, los métodos de administración contemplados por la presente invención también pueden caracterizarse como: "periféricamente al sistema nervioso central" o "externamente al sistema nervioso central".

Pueden desarrollarse varias composiciones farmacéuticas que hagan uso del presente Compuesto A. La composición puede ser adecuada para la administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo, por vía oral, parenteral o intravenosa, en forma líquida o sólida. Las vías preferidas de administración son inyectables y/u orales. Estas composiciones incluirán generalmente un diluyente inerte o un portador comestible. Pueden estar encerrados en cápsulas de gelatina (para uso oral) o comprimidos en comprimidos (para uso oral o bucal) o formularse en trociscos (para uso bucal). Para estos fines, el compuesto activo puede incorporarse con excipientes y usarse en forma de comprimidos, trociscos o cápsulas. Pueden incluirse agentes aglutinantes farmacéuticamente compatibles y/o materiales adyuvantes como parte de la composición.

Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente como almidón o lactosa, un agente disgregante como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz; un lubricante como estearato de magnesio; un deslizante como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante como menta, salicilato de metilo o aroma de naranja. Cuando la forma de unidad de dosificación es una cápsula, puede contener, además del material del tipo anterior, un portador líquido como un aceite graso. Además, las formas de las unidades de dosificación pueden contener varios otros materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar, goma laca u otros agentes entéricos.

Los compuestos pueden administrarse como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, oblea, película que se disgrega por vía oral, comprimido que se disgrega por vía oral, goma de mascar. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y sabores.

Las soluciones o suspensiones usadas para inyección pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos como alcohol bencílico o metilparabenos; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes como ácido etilendiaminotetraacético; tampones como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad como cloruro de sodio, manitol y dextrosa. Una preparación inyectable puede estar contenida en ampollas, jeringuillas desechables o viales de dosis múltiples hechos de vidrio o plástico.

La invención se describe a continuación con referencia a los siguientes ejemplos no limitativos.

EXPERIMENTALES

Ejemplo 1

Síntesis y caracterización de monoclorhidrato de (3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea (Compuesto A).

Se disolvieron 1,63 Kg de producto seco (3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea, previamente obtenido por el procedimiento sintético descrito en la WO2012/116176, en 11,2 Kg de acetona a 22° C ± 3° C. La solución se filtró sobre una bolsa de filtro de 1 micra como filtración de pulido y el filtro se lavó con acetona (1,6 kg). Se añadió ácido clorhídrico 4M (1,2 Kg) en agua sobre la solución filtrada manteniendo la temperatura interna de 22° C ± 3° C. La suspensión obtenida se agitó a 22° C ± 3° C durante por lo menos 2 horas. Luego, el producto se aisló por centrifugación y se lavó con acetona (1,6 kg). Se obtuvieron 1,5 kg de producto húmedo. Se secó al vacío a 60° C ± 5° C durante por lo menos 18 horas dando 1,4 kg de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea (Compuesto A) como un polvo cristalino de color blanco a blanquecino. Pureza (HPLC) min. 98%.

La caracterización por XRPD, 1H-NMR, 13C-NMR del Compuesto A se muestra en las Figuras 9-11.

Ejemplo 2 Prueba de solubilidad en agua

El Compuesto A mostró una solubilidad en agua a temperatura ambiente de aproximadamente 33 mg/ml. Como referencia, la sal de fumarato correspondiente tiene una solubilidad de solo 10 mg/ml; la base libre correspondiente mostró una solubilidad muy por debajo de 2 mg/ml.

Ejemplo 3 Prueba de estabilidad

La estabilidad del Compuesto A se siguió mediante análisis HPLC. En las tablas siguientes se muestran los datos recopilados durante el almacenamiento del húmedo, así como durante el secado a escala de laboratorio.

Adicionalmente se realizó un estudio de estabilidad durante 3 años sobre un lote industrial de material seco.

Estabilidad del material bruto húmedo de Compuesto A a 2-8° C y a temperatura ambiente bajo aire:

De acuerdo con los resultados, no observamos ninguna degradación del Compuesto A durante más de 4 semanas de almacenamiento del polvo húmedo a 2-8° C. De igual manera, la muestra conservada a temperatura ambiente durante 24 días, tras permanecer en refrigeración durante 36 días, no presentó degradación alguna en HPLC.

Estabilidad del material bruto seco de Compuesto A a 25° C/60%HR (humedad relativa):

De acuerdo con los resultados, no observamos ninguna degradación del Compuesto A durante 3 años de almacenamiento del producto seco a 25° C/60% de HR

Estabilidad del material bruto seco de Compuesto A durante el secado a 60° C

De acuerdo con los resultados, observamos que el material se mantuvo estable durante el secado a 60° C durante 74 horas.

Ejemplo 4 Evaluación de la actividad agonista de grelina del Compuesto A

Se usaron células HEK293 que expresan de manera estable el receptor de GHSRIa humano en el ensayo FLIPR. Las células se mantuvieron bajo procedimientos estándar. Un día antes de la prueba, las células se sembraron a una densidad de 1,5 x 10⁴ /pocillo en una placa Matrigel® de 384 pocillos revestida con 30 pl de medio DMEM completo e incubada a 37° C en CO² al 5% durante 22-26 horas. El día de la prueba, se añadió colorante de carga 4X en cada pocillo (10 pl por pocillo para placas de 384 pocillos). Las placas de ensayo se incubaron a 37° C en la oscuridad durante 30 minutos. Luego, el contenido de colorante se eliminó por centrifugación a 300 rpm durante 30s. Se añadieron 40 pl de HBSS/Hepes con probenicida 1 mM con Platemate Matrix (ajuste de baja velocidad, Thermo). Luego, la placa se colocó en FLlpR Tetra (Molecular Device) y se añadieron por FLIPR concentraciones de trabajo 5X de agonistas. La señal de fluorescencia se detectó con FLIPR a temperatura ambiente de acuerdo con la configuración estándar.

El Compuesto A mostró una fuerte actividad agonista en los ensayos FLIPR, con una EC⁵⁰ de 1,25 ± 0,42 nM En un estudio de unión adicional, el compuesto A se disolvió en DMSO y se diluyó con agua en diferentes intervalos de concentraciones. Para el ensayo de unión se usó proteína de membrana preparada a partir de células BHK que expresan de manera estable el receptor GHSR1 humano. La membrana se diluyó en tampón de ensayo para proporcionar 20 pg/pocillo en 120 pl. El ensayo de unión se configuró en una placa de 96 pocillos de la siguiente manera: 120 pl [^{1 25} I]grelina (concentración final 1 nM) y 15 pl del compuesto A (10x) diluido en el tampón de ensayo. La mezcla de reacción se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de terminar mediante una filtración rápida sobre una placa de filtración GF/B empapada previamente en PEI al 0,3% usando un recolector de células (Perkin Elmer). El filtro se lavó tres veces y se secó a 37° durante la noche. La radiactividad unida a la membrana del filtro se midió con MicroBeta Trilux (Perkin Elmer). El compuesto A mostró una fuerte afinidad por el receptor GHSR1 A en el ensayo de unión de [^{1 25} I]grelina, con un valor Ki de 1,42 ± 0,35 nM)

Ejemplo 5

Estudios farmacocinéticos y evaluación de la penetración cerebral del compuesto A

Después de una única administración IV de 10 mg/kg del Compuesto A a ratas Sprague Dawley, el compuesto se depuró rápidamente de la circulación sistémica y se distribuyó en tejidos y órganos. El bioanálisis del Compuesto A en plasma y cerebro se realizó mediante métodos LC-MS-MS y el análisis farmacocinético se realizó mediante un enfoque estándar no compartimental. En esta prueba, las concentraciones del Compuesto A medidas en el cerebro a 10 mg/kg a las 1, 2 y 8 h después de la dosificación resultaron ser de 1,5 a 1,9 veces más altas que las del plasma y ambas curvas decayeron en paralelo con la curva de plasma correspondiente. Las concentraciones medias del Compuesto A en plasma (ng/ml) y cerebro (ng/g) después de una sola dosis IV de 10 mg/kg en ratas macho Sprague Dawley se informan en la figura 12. Curiosamente, la concentración más alta del compuesto A en el cerebro decayó en paralelo con la concentración en plasma: esto muestra que este compuesto, aunque tiene una afinidad cerebral más alta útil, no se acumula en él, evitando por tanto riesgos de toxicidad cerebral local.

En detalle, después de la administración oral única a las dosis de 3, 10 y 30 mg/kg, la biodisponibilidad del Compuesto A fue alta y superó el 80%. Después de las administraciones únicas tanto IV como orales, la exposición al Compuesto A aumentó con la dosis en el intervalo de dosis probado. El resumen de los datos farmacocinéticos obtenidos de ratas a las que se administró por vía oral o intravenosa el Compuesto A se informa de la siguiente manera:

En estudios adicionales, se comparó la farmacocinética del Compuesto A con la de dos compuestos de referencia, descritos previamente en la solicitud de patente WO2012/116176. Los datos obtenidos son los siguientes:

Los datos anteriores muestran que los compuestos de referencia probados, 2 horas después de la administración intravenosa, no lograron alcanzar concentraciones terapéuticamente significativas en el cerebro; por el contrario, el Compuesto A alcanzó una concentración 2 o 3 veces mayor (172 ng/g). Particularmente interesante es la relación cerebro/sangre, que da una indicación de como de selectivamente la dosis administrada se dirige a través de la barrera hematoencefálica y se acumula en el cerebro, en comparación con la fracción que permanece en el torrente sanguíneo: los dos compuestos de referencia mostraron solo una relación cerebro/sangre de 0,1/0,3, que muestra una permeabilidad cerebral deficiente, la dosis administrada permaneciendo sustancialmente en el torrente sanguíneo. Por el contrario, el Compuesto A mostró una relación cerebro/sangre de 1,4: esto muestra una afinidad mucho más fuerte del Compuesto A con el compartimiento del cerebro de tal manera que, después de solo 2 horas después de la administración sistémica, una fracción significativa de la dosis administrada se encuentra en el cerebro; la captación cerebral aún no es total, lo que permite que el fármaco muestre en parte actividades útiles a nivel periférico. Esto es de particular utilidad en el caso de enfermedades neurológicas que, además de un daño a nivel del SNC, también implican una degeneración de los nervios periféricos y requieren una acción reparadora a dicho nivel. Sin querer limitarnos a la teoría, parece que la alta penetración en el cerebro del Compuesto A puede deberse a su capacidad de no ser sustrato de P-gp, que es el sistema de bomba de eflujo que evita que las moléculas atraviesen la barrera sanguínea.

En la siguiente tabla se presentan datos farmacocinéticos adicionales:

Compuesto A-Farmacocinética después de la dosificación aguda y crónica

Ejemplo 6

Efectos del Compuesto A en modelos de neurotoxicidad animal in vivo

Fármacos y formulaciones

El Compuesto A se elaboró como una suspensión en solución de carboximetilcelulosa al 0,5% en volúmenes de dosificación de 1 y 10 ml/kg para ratas y ratones respectivamente y se dosificó por vía oral a 3, 10 o 30 mg/kg. El cisplatino se dosificó en solución salina a 0,5 mg/kg por vía intraperitoneal (ip, 1 ml/kg). El oxaliplatino se formuló en solución de dextrosa al 5% y se inyectó i.p. (10 ml/kg) a una concentración de 0,6 mg/ml. Se preparó bortezomib en Tween 80 al 10%, EtOH al 10%, solución salina al 100% y al 80% y se inyectó i.v. (1 ml/kg) a 0,2 mg/kg. Todas las soluciones de dosificación se prepararon frescas en cada día de administración.

Estudio de cisplatino

Se dividieron aleatoriamente cincuenta ratas Wistar macho que pesaban entre 250 y 300 g al comienzo del experimento en 5 grupos de 10 ratas cada uno. El grupo 1 recibió diariamente el vehículo del Compuesto A (p.o.) durante 6 días y el vehículo de cisplatino (i.p.) durante 3 días. El grupo 2 recibió el vehículo del Compuesto A (p.o.) y 0,5 mg/kg de cisplatino (i.p.) durante 3 días, seguido del vehículo del Compuesto A durante 3 días adicionales. El grupo 3 recibió diariamente 3 mg/kg de Compuesto A (p.o.) y 0,5 mg/kg de cisplatino (i.p.) durante 3 días seguido de 3 mg/kg de Compuesto A durante 3 días adicionales. El grupo 4 recibió 10 mg/kg de Compuesto A (p.o.) y 0,5 mg/kg de cisplatino (i.p.) durante 3 días seguidos de 10 mg/kg de Compuesto A durante 3 días adicionales. El grupo 5 recibió diariamente 30 mg/kg de Compuesto A (p.o.) y 0,5 mg/kg de cisplatino (i.p.) durante 3 días seguido de 30 mg/kg de Compuesto A durante 3 días adicionales. En cada caso, el cisplatino o el vehículo de cisplatino se dosificó 30 minutos después del Compuesto A o el vehículo del Compuesto A, que se dosificó 1 hora antes de la prueba del filamento de von Frey. Los pesos corporales individuales y la ingesta de alimentos durante 24 h se midieron diariamente desde justo antes del inicio de la dosificación.

Estudio de oxaliplatino

Se usaron sesenta ratones Balb/C hembra que pesaban 20-25 g al comienzo del experimento y se dividieron en 4 grupos de 15 ratones cada uno. El grupo 1 recibió el vehículo del Compuesto A (p.o.) diariamente, 60-90 min antes de la dosificación del vehículo de oxaliplatino (i.p.) dos veces a la semana durante 4 semanas. El Grupo 2 recibió el vehículo del Compuesto A (p.o.) diariamente, 60-90 min antes de 6 mg/kg de oxaliplatino (i.p.) dos veces a la semana durante 4 semanas. El Grupo 3 recibió 10 mg/kg de Compuesto A (p.o.) diariamente 60-90 min antes de 6 mg/kg de oxaliplatino (i.p.) dos veces a la semana durante 4 semanas. El Grupo 4 recibió 30 mg/kg de Compuesto A (p.o.) diariamente 60-90 min antes de 6 mg/kg de oxaliplatino (i.p.) dos veces a la semana durante 4 semanas. Los pesos corporales se midieron diariamente, inmediatamente antes del inicio de la dosificación. Las mediciones de la velocidad de conducción nerviosa (NCV) y la amplitud potencial se realizaron 24 h después de la última dosis de oxaliplatino (o vehículo) y 1 h después de la última dosis del Compuesto A (o vehículo), después de lo cual se tomaron muestras de sangre, tejido (DRG, nervio ciático [SN] y almohadillas de los pies) para evaluaciones farmacocinéticas e IENFD.

Estudios de bortezomib

Paradigma de prevención: Se aleatorizaron cincuenta y seis ratas Wistar hembra que pesaban entre 200 y 225 g al comienzo del experimento en 5 grupos experimentales. El grupo 1 se dejó sin tratamiento (CTRL, n=10), el grupo 2 se trató con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces a la semana durante 8 semanas (BTZ, n=10), el Grupo 3 se trató conjuntamente con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces/semana durante 8 semanas y Compuesto A p.o. 3 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib (BTZ+Compuesto A 3, n=12), el Grupo 4 se trató conjuntamente con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces/semana durante 8 semanas y Compuesto A p.o. 10 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib (BTZ+Compuesto A 10, n=12), el Grupo 5 se trató conjuntamente con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces/semana durante 8 semanas y Compuesto A p.o. 30 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib (BTZ+Compuesto A 30, n=12). Al inicio y después de 8 semanas de tratamiento, se realizaron estudios de conducción nerviosa caudal y digital y amplitud potencial, pruebas de comportamiento (Dynamic) y recogida de sangre para estudiar la inhibición del proteasoma. Después de 8 semanas de tratamiento, se recogieron y analizaron muestras de tejido (nervios ciático y caudal, DRG y almohadillas de los pies) para estudiar parámetros morfológicos y densidad de fibras nerviosas intraepidérmicas (IENFD).

Paradigma terapéutico: Se aleatorizaron cincuenta y seis ratas Wistar hembra que pesaban entre 200 y 225 g al comienzo del experimento en 5 grupos experimentales. El grupo 1 no recibió tratamiento (CTRL, n=10), el Grupo 2 recibió tratamiento con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces/semana durante 8 semanas (BTZ, n=10), el Grupo 3 recibió tratamiento con bortezomib i.v. 0,2 mg/ kg, 3 veces/semana durante 4 semanas y se trató conjuntamente con bortezomib 0,2 mg/kg, 3 veces/semana y Compuesto A p.o. 3 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib durante 4 semanas (BTZ+Compuesto A 3, n=12), el Grupo 4 se trató con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces a la semana durante 4 semanas y se trató conjuntamente con bortezomib 0,2 mg/kg, 3 veces a la semana y Compuesto A p.o. 10 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib durante 4 semanas (BTZ+Compuesto A 10, n=12), el Grupo 5 se trató con bortezomib i.v. 0,2 mg/kg, 3 veces/semana durante 4 semanas y se trató conjuntamente con bortezomib 0,2 mg/kg, 3 veces/semana y Compuesto A p.o. 30 mg/kg diariamente 90 min antes de la coadministración i.v. de bortezomib durante 4 semanas (BTZ+Compuesto A 30, n=12). Al inicio del estudio y después de 8 semanas de tratamiento, se realizaron estudios de conducción nerviosa caudal y digital y de amplitud potencial y recogida de sangre para estudiar la inhibición del proteasoma. Se realizaron pruebas de comportamiento (Dynamic) después de 4 y 5 semanas de tratamiento con bortezomib. Después de 8 semanas de tratamiento, se recogieron nervios ciáticos, nervios caudales, DRG y almohadillas de los pies de todos los animales y se analizaron para estudiar parámetros morfológicos y las IENFD.

Evaluaciones

Prueba de Von Frey

En el estudio de cisplatino, las ratas se alojaron individualmente y se aclimataron al manejo y al aparato de prueba de Von Frey durante varios días antes del comienzo del experimento. Las mediciones de referencia se obtuvieron antes de la dosificación. Las pruebas de comportamiento se realizaron siguiendo los procedimientos descritos anteriormente (28). Cada filamento se probó 5 veces y la prueba continuó hasta que se registraron 3 respuestas de retirada a un filamento en particular.

Prueba de estesiómetro dinámico

En los estudios de bortezomib, el umbral nociceptivo mecánico se evaluó usando una prueba de estesiómetro dinámico (modelo 37450, Ugo Basile Biological Instruments, Comerio, Italia). El umbral mecánico se evaluó alternativamente en cada lado cada 2 minutos en 3 ocasiones para obtener un valor medio. Los resultados representaron la presión máxima tolerada por los animales.

Estudios de conducción nerviosa (NCS)

Las mediciones de NCV y amplitud potencial en los nervios caudal y digital se determinaron como se ha descrito anteriormente en ratones (29) y ratas (30). Las mediciones de NCS de referencia se realizaron antes de la dosificación del fármaco. Luego, los animales se asignaron aleatoriamente a uno de los grupos de tratamiento del estudio con valores medios de NCS similares. Las mediciones de NCS se realizaron de nuevo 24 horas después de completar la dosificación de los fármacos antineoplásicos y 1 hora después de la última dosis del Compuesto A. Durante todas las sesiones de registro, los animales se anestesiaron con isoflurano al 2% y se colocaron en una posición prona sobre una almohadilla térmica caliente con temperatura rectal controlada y mantenida entre 37,0 y 41,0° C. La estimulación de cada segmento nervioso se realizó por lo menos 3 veces, hasta un máximo de 6 veces, con voltaje creciente, hasta que se logró la respuesta máxima. Las latencias se calificaron desde el inicio del estímulo, y las amplitudes potenciales desde el valor de referencia.

DRG y morfología del nervio ciático

Al final de los experimentos con oxaliplatino y bortezomib, los animales se sacrificaron bajo anestesia profunda. Los segmentos SN y L5 y L6 DRG se diseccionaron de 5 animales/grupo y se incluyeron para su análisis como se ha descrito anteriormente (31).

Análisis IENFD

El análisis IENFD se realizó en especímenes recolectados y procesados como se ha descrito anteriormente (31). Se procesaron cuatro secciones para cada biopsia. Se contaron a ciegas los axones no mielinizados intraepidérmicos y se determinó la densidad de fibra por mm de fibras de piel que cruzan la unión dermoepidérmica como se ha descrito anteriormente.

Análisis estadístico

Para todos los análisis estadísticos, los datos se analizaron comparando las respuestas medias de los grupos mediante ANOVA unidireccional o bidireccional, seguido de comparaciones post-hoc de Tukey o Dunnet, realizadas con el software Prism Graphpad, versión 4.03 (GraphPad Inc, La Jolla, CA), con la significancia definida en p<0,05.

RESULTADOS

Estudio de cisplatino

Ingesta de alimentos y cambios en el peso corporal

El tratamiento con cisplatino indujo una disminución significativa de la ingesta diaria de alimentos y del peso corporal (p<0,05, Figuras 1A, 1B) en comparación con las ratas tratadas con vehículo. El tratamiento con el Compuesto A a 3, 10 y 30 mg/kg aumentó la ingesta total de alimentos y el peso corporal (p<0,05) en comparación con solo el cisplatino.

Alodinia

El tratamiento con cisplatino disminuyó el umbral de retirada de la pata en ratas en comparación con las ratas tratadas con vehículo (p<0,01), lo que indica el desarrollo de hipersensibilidad mecánica. El pretratamiento con el Compuesto A a 10 y 30 mg/kg redujo significativamente esta hiperalgesia. El tratamiento con el Compuesto A a 30 mg/kg dio como resultado en realidad un aumento general significativo de los umbrales de retirada de la pata en comparación con las ratas tratadas con vehículo (p<0,05) en los días 3 a 5 (Figura 1C). El Compuesto A a 3 mg/kg no tuvo un efecto significativo sobre la hiperalgesia inducida por cisplatino.

Estudio de oxaliplatino

Cambios en el peso corporal

Los ratones tratados con oxaliplatino mostraron una pérdida significativa de peso corporal desde el día 10 hasta el final del estudio frente a los ratones tratados con vehículo (p<0,01). Los animales tratados conjuntamente con oxaliplatino y 10 o 30 mg/kg de Compuesto A mostraron una menor pérdida de peso que los ratones tratados con oxaliplatino (p<0,01). Este efecto alcanzó significancia estadística (p<0,05) en múltiples días de prueba, teniendo 10 mg/kg de Compuesto A el efecto más sólido (datos no mostrados).

Estudios de conducción nerviosa

La administración de oxaliplatino provocó una disminución significativa en la NCV digital y caudal (reducido en 10,6 1,6% y 8 ± 1,1% respectivamente, p<0,01) frente a los ratones tratados con vehículo. El tratamiento simultáneo con el Compuesto A en dosis de tanto 10 como 30 mg/kg previno significativamente estas dos deficiencias (Figuras 2A, 2C). El oxaliplatino también disminuyó la amplitud del potencial digital (13,5 /- 6,4%), aunque dada la variabilidad el efecto no alcanzó significancia estadística. El tratamiento con compuesto A tendió a normalizar la disminución de la amplitud potencial, de tal manera que a 30 mg/kg la amplitud potencial digital mejoró significativamente frente a la de los ratones tratados con oxaliplatino (en un 33+/-9%; p<0,01;Figura 2B). La amplitud del potencial del nervio caudal no se vio afectada significativamente por el tratamiento con oxaliplatino (Figura 2D). Examen patológico

No se observaron cambios degenerativos en los cuerpos de las células neuronales DRG o células satélite o en el nervio ciático de los ratones tratados con oxaliplatino, y el tratamiento con el Compuesto A por sí mismo no provocó ningún cambio degenerativo (datos no mostrados).

En las almohadillas de las patas, el tratamiento con oxaliplatino produjo una reducción significativa en IENFD (-31,7 ± 3,5%, p<0,01 frente a ratones tratados con vehículo). El tratamiento concurrente con el Compuesto A normalizó por completo la IENFD a los valores de los ratones tratados con vehículo tanto a 10 como a 30 mg/kg (p<0,01; Figura 3A).

Farmacocinética del compuesto A después de la administración aguda y crónica

El compuesto A demostró una exposición al nervio ciático y a DRG muy alta y dependiente de la dosis. Después de una única dosis oral de 10 y 30 mg/kg, el Compuesto A se absorbió fácilmente y se distribuyó en el plasma y los tejidos nerviosos con concentraciones máximas en el plazo de las 0,25-0,5 h posteriores a la dosis. La vida media terminal del Compuesto A en plasma fue corta (aproximadamente 1 h), pero significativamente más larga en el nervio ciático (aproximadamente 4,7 h). El área bajo la curva de concentración-tiempo extrapolada al infinito (AUC0-~) fue más baja en plasma y casi 3-4 veces mayor en el nervio ciático y DRG, y se correlacionó con las dosis administradas, lo que sugiere una mayor penetración del Compuesto A en el sistema nervioso periférico. (Tabla 1, Figuras 4A-B). Después de 30 días de dosificación diaria, el índice de penetración tisular (proporción de tejido/plasma) del Compuesto A aumentó aún más hasta aproximadamente 9-12 veces en SN y 18-19 veces en DRG, lo que sugiere una marcada acumulación de Compuesto A en estos tejidos (Tabla 1 y Figura 4C).

Estudios de bortezomib

Cambios en el peso corporal

En el estudio preventivo, durante las primeras semanas y hasta el día 21, los animales tratados conjuntamente con bortezomib y el Compuesto A a diferentes dosis mostraron un aumento significativo en el peso corporal frente a los grupos de CTRL y bortezomib en varios momentos. Esta diferencia, sin embargo, no fue significativa al final del tratamiento (los datos no se muestran).

En el entorno terapéutico, después de 10 días de tratamiento conjunto de bortezomib con el Compuesto A, los animales mostraron un aumento significativo del peso corporal frente a los grupos de CTRL y bortezomib. Al final del tratamiento, sólo los animales tratados con BTZ+Compuesto A 30 mostraron un aumento significativo en el peso corporal frente a los grupos de CTRL y bortezomib (p<0,01, datos no mostrados).

Umbral mecánico

En ambos estudios de bortezomib, el umbral mecánico se redujo con la administración de fármacos antineoplásicos. Al final del tratamiento en el entorno preventivo, los grupos tratados con bortezomib en combinación con el Compuesto A no mostraron alodinia frente a CTRL, mientras que sí se observó en el grupo de bortezomib (p<0,001, Figura 5A).

En el entorno terapéutico (Figura 5B), después de 4 semanas todos los grupos tratados con bortezomib mostraron el desarrollo de alodinia con una reducción de la latencia hasta la retirada frente a CTRL (p<0,001 frente a CTRL). Después de 5 semanas (es decir, 1 semana de cotratamiento de BTZ+Compuesto A) y al final del tratamiento, solo los grupos tratados con bortezomib solo tenían alodinia frente a CTRL, mientras que todos los grupos tratados conjuntamente con Compuesto A estaban protegidos (p< 0,001).

Estudios de conducción nerviosa

En la NCV digital los grupos tratados con bortezomib solo o en combinación con Compuesto A 3 y 10 mg/kg en el entorno preventivo mostraron una reducción estadísticamente significativa (p<0,01 frente a CTRL), mientras que el grupo tratado conjuntamente con BTZ+Compuesto A 30 mg/kg no tuvo alteración frente a CTRL (Figura 6A). No se observaron cambios en la amplitud del potencial digital en todos los grupos frente a CTRL al final del tratamiento (Figura 6B).

Todos los grupos tratados con bortezomib solo o en combinación con todas las dosis del Compuesto A en el entorno preventivo mostraron una reducción estadísticamente significativa en la NCV caudal (p<0,05) así como en la amplitud potencial caudal (p<0,01 frente a CTRL, Figuras 6C, 6D).

En el entorno terapéutico, la NCV del nervio digital mostró una reducción estadísticamente significativa solo en los animales tratados con bortezomib solo (p<0,05 frente a CTRL, Figura 6E), mientras que se observó una reducción en la amplitud potencial en el grupo tratado conjuntamente con la dosis más alta de Compuesto A (p<0.05 frente a CRTL, Figura 6F). Todos los grupos tratados con bortezomib solo o en combinación con todas las dosis del Compuesto A mostraron una reducción estadísticamente significativa en la NCV caudal y la amplitud de potencial (p<0,001 frente a CTRL, Figuras 6G, 6H).

Examen patológico

Los ratones tratados con bortezomib mostraron degeneración ocasional de las neuronas sensoriales DRG y vacuolización del citoplasma de las células satélite. La coadministración del Compuesto A en el entorno preventivo produjo una protección incompleta de estas alteraciones. En el nervio ciático, los cambios axonales leves fueron evidentes en todos los grupos tratados con bortezomib, y la coadministración del Compuesto A en diferentes dosis no alteró estos cambios.

En el nervio caudal, los animales tratados con bortezomib solo tenían una densidad de fibra reducida, degeneración axonal y de células de Schwann y los animales tratados conjuntamente con bortezomib y el Compuesto A a diferentes dosis mostraron una reducción leve, no dependiente de la dosis, en estos cambios patológicos.

Estos efectos protectores no estaban presentes cuando el Compuesto A se administraba en el entorno terapéutico.

El tratamiento crónico con bortezomib indujo una reducción estadísticamente significativa de la IENFD en comparación con CTRL (p<0,001). Todas las dosis del Compuesto A impidieron significativamente la reducción de IENFD inducida por bortezomib en el tratamiento preventivo (Figura 3B), pero no en el entorno terapéutico (Figura 3C), aunque se observó una tendencia inhibidora.

Estudio de inhibición del proteasoma

El tratamiento crónico con bortezomib indujo una inhibición estadísticamente significativa de la actividad del proteasoma; la coadministración del Compuesto A en diferentes dosis no afectó a la inhibición del proteasoma inducida por bortezomib ni en entornos preventivos ni terapéuticos (datos no mostrados).

En la siguiente tabla se presenta un resumen de los resultados de la evaluación en múltiples modelos de neurotoxicidad:

Análisis

Usando modelos CIPN preclínicos agudos y crónicos bien aceptados, probamos el efecto de la administración del Compuesto A. Además, en los modelos de bortezomib también verificamos que no se producía interferencia con el mecanismo de acción antineoplásico del fármaco. Estos modelos animales se han usado ampliamente para probar la eficacia de tratamientos neuroprotectores putativos, proporcionando por tanto la justificación para su uso en nuestro estudio.

En todas las condiciones probadas, observamos consistentemente una reducción en la alodinia mecánica. Estos resultados son particularmente importantes en los modelos de bortezomib, ya que este es el fármaco antineoplásico que induce la CIPN más dolorosa y limitante de la dosis. Los efectos antinociceptivos observados en nuestro estudio son muy rápidos, como lo demuestran los resultados del estudio de cisplatino, y podrían ser mediados centralmente ya que el Compuesto A es altamente penetrable en el cerebro.

Sin embargo, los resultados obtenidos usando la administración a largo plazo sugieren que el Compuesto A también tiene algún efecto periférico trófico, ya que proporciona una protección significativa frente a la reducción inducida por fármacos en IENFD en ambos modelos de oxaliplatino y bortezomib. Sorprendentemente, en el entorno terapéutico, la reducción de la alodinia seguía siendo significativa, pero no se asoció con ningún efecto sobre IENFD, lo que respalda aún más la hipótesis de un efecto analgésico central que está disociado de la neuroprotección periférica y que esta último puede producirse solo si el tratamiento con el Compuesto A se inicia antes del agotamiento de las fibras pequeñas.

Además de este efecto, la actividad adicional del Compuesto A sobre las fibras mielínicas de la rama periférica de la neurona sensorial del sistema nervioso está respaldada por la demostración de que el Compuesto A atenúa algunos de los déficits neurofisiológicos inducidos por la dosificación múltiple crónica de oxaliplatino y, en menor medida, de bortezomib. De hecho, este efecto neurofisiológicamente evidente medido directamente en los nervios periféricos y que refleja principalmente la actividad de las fibras mielínicas grandes no puede atribuirse a un evento central, sino que es probable que se deba a la preservación en la respuesta del número de axones periféricos.

La presencia de una dosis-respuesta con forma de campana para el Compuesto A, donde también se observó 10 mg/kg.

La marcada capacidad del Compuesto A para penetrar en el SNC, junto con su actividad neurotrófica periférica, su actividad no específica de fármaco y su posible uso para tratar la caquexia del cáncer hace que el Compuesto A sea un agente neuroprotector putativo único en pacientes con cáncer que se someten a quimioterapia inductora de neurotoxicidad.

Ejemplo 7

Efectos cardiovasculares del Compuesto A en voluntarios humanos (estudio de fase 1)

El estudio se realizó como un estudio de Fase 1, controlado con placebo, doble ciego, aleatorizado, de un solo centro con sujetos masculinos sanos que recibieron dosis orales individuales ascendentes del Compuesto A. Se consideró apropiado un diseño de aumento de dosis para investigar la seguridad y tolerabilidad de este nuevo compuesto en el primer estudio de dosis individual en humanos. Dentro de cada cohorte, seis sujetos debían recibir una dosis oral individual del Compuesto A y dos sujetos debían recibir placebo el Día 1.

Cada sujeto recibió una dosis oral individual del Compuesto A o del placebo de forma aleatoria. Las administraciones del fármaco del estudio se realizaron en la mañana del día 1. El investigador o delegado supervisó la administración adecuada del medicamento del estudio. Esto incluyó comprobar la cavidad oral y bucal. El medicamento del estudio o el placebo se suministró en forma de cápsulas de gelatina que contenían polvo; se administraron por vía oral junto con 240 ml de agua. Los sujetos recibieron la dosis en ayunas (no ingirieron alimentos durante por lo menos 8 horas antes de la dosis). Se restringió el acceso a los alimentos hasta 4 horas después de la dosificación.

Se registraron ECG de 12 derivaciones el Día -1 y desde antes de la dosis el Día 1 hasta 72 horas después de la administración del fármaco. Además, se registró un ECG Holter desde por lo menos 12 horas antes de la dosificación planificada hasta 24 horas después de la dosis. Se tomaron extractos por triplicado (intervalo de 1 min) en los mismos puntos temporales que se tomaron los ECG en papel. Los signos vitales (presión arterial, frecuencia del pulso, temperatura corporal [medición auricular]) se midieron el día -1 y luego desde antes de la predosis el día 1 hasta 72 horas después de la dosis. Los ECG de 12 derivaciones se registraron según lo programado en el diagrama de flujo del estudio usando el sistema de ECG (Cardiosoft®, Marquette Hellige). Se registraron ECG por triplicado a las 36, 48 y 72 horas después de la dosis. Los ECG se registraron en posición supina después de por lo menos 5 minutos de descanso o después de por lo menos 15 minutos de descanso en puntos temporales cuando se realizaron extractos de ECG del Holter-ECG (para permitir un período de tiempo suficiente). Los ECG se trazaron con una velocidad de papel de 50 mm/s y una amplitud de 10 mm/mV, con una duración de registro de 10 segundos para todas las derivaciones y por lo menos 3 complejos, pero preferiblemente 5 complejos en cada derivación. Se evaluaron los siguientes parámetros de ECG: frecuencia cardíaca, intervalo PR, intervalo QRS, intervalo QT, QTcB (usando la fórmula de corrección de Bazett) y QTcF (usando la fórmula de corrección de Fridericia).

La presión arterial sistólica y diastólica media y la temperatura corporal no mostraron cambios clínicamente relevantes después de la dosificación ni diferencias entre los grupos de tratamiento. Se observó una disminución en la frecuencia del pulso para los grupos tratados con el Compuesto A.

Las Figuras 7 y 8 muestran los resultados obtenidos. Muestran una clara disminución de la frecuencia cardíaca relacionada con la dosis, que alcanzó un máximo de 1 a 3 horas después de la dosificación. La frecuencia cardíaca media (datos Holter-ECG, media del promedio de lecturas por triplicado) disminuyó como máximo 5,1 bpm, 6,8 bpm, 15,9 bpm y 18,3 bpm entre 1 y 3 horas después de la administración de 0,1, 0,3, 1,0 y 10 mg del Compuesto A, respectivamente, en comparación con una disminución máxima de 6,9 bpm después de la dosificación de placebo. Los niveles predosis se alcanzaron de nuevo 6 horas después de la dosificación. Los valores de frecuencia cardíaca más bajos se observaron en los grupos de dosis de 1,0 y 10 mg.

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Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. El compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1 -(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea, para su uso en el tratamiento y/o o prevención de una condición médica mediada por el receptor de ghrelina en el sistema nervioso central,en donde dicha condición médica se selecciona de neurodegeneración, neuropatía, dolor neuropático, encefalomielitis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, trastornos cognitivos, hiperestimulación vagal, taquicardia.

2. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en donde dicha neuropatía es una neuropatía inducida por quimioterapia.

3. El compuesto para el uso de la reivindicación 2, en donde dicha neuropatía inducida por quimioterapia es inducida por un inhibidor de proteasoma o un agente alquilante.

4. El compuesto para el uso de la reivindicación 3, en donde dicho inhibidor del proteasoma se elige de bortezomib, carfizomib, ixazomib, oprozomib, delanzomib, marizomib, MG-132, ONX-0914, ^v R-23, celastrol, epoxomicina.

5. El compuesto para el uso de la reivindicación 3, en donde dicho agente alquilante se elige de cisplatino o carboplatino.

6. El compuesto para el uso de la reivindicación 1, en donde dicha taquicardia es una taquicardia inducida por quimioterapia.

7. El compuesto para el uso de las reivindicaciones 1-6, en donde dicho compuesto se administra en una cantidad de dosis comprendida entre 0,03 y 10 mg, expresada como base libre.

8. El compuesto para el uso de las reivindicaciones 1-7, en donde dicho compuesto se administra externamente al sistema nervioso central.

9. El compuesto para el uso de la reivindicación 8, en donde dicho compuesto se administra por una vía elegida de: oral, peroral, bucal, sublingual, ocular, percutánea, transcutánea, intravenosa, intramuscular, inhalatoria o rectal.

10. El compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea.

11. El compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1-metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea, para su uso en terapia.

12. La composición farmacéutica que comprende el compuesto sal de monoclorhidrato de 3-(1-(2,3-dicloro-4-metoxifenil)etil)-1 -metil-1-(1,3,3-trimetilpiperidin-4-il)urea en presencia de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

13. La composición de la reivindicación 12, en donde dicho compuesto se incluye en una forma administrable elegida de: comprimido, píldora, trocisco, chicle, cápsula, microcápsula, polvo, liofilizado, sedimentos, microsedimentos, gránulos, microgránulos, gel, crema, pomada, película, parche, supositorio, solución, suspensión, jarabe, elixir u oblea.