ES2906632T3

ES2906632T3 - Inhibidor del complemento ornithodoros moubata para uso en el tratamiento de enfermedad aguda de injerto versus huésped

Info

Publication number: ES2906632T3
Application number: ES15807907T
Authority: ES
Inventors: Wynne H Weston-Davies
Original assignee: Volution Immuno Pharmaceuticals SA
Current assignee: Volution Immuno Pharmaceuticals SA
Priority date: 2014-06-06
Filing date: 2015-12-09
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2035-12-09
Also published as: PL3151851T3; AU2015270396B2; PL3302519T3; BR112016028446A2; RU2016151179A; US20170196936A1; US11052129B2; RU2016151179A3; CN106659767A; NZ727053A; DK3151851T3; EP3151851B1; JP6767396B2; AU2015270396A1; WO2015185760A1; JP2018516944A; GB201410116D0; ES2906630T3; RU2700932C2; IL249237B

Abstract

Un agente para usar en el tratamiento o la prevención de la EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, en el que el agente se administra sistémicamente y en el que el agente es: (i) una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 2 o un equivalente funcional de esta proteína; o (ii) una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína como se menciona en (i), donde el equivalente funcional es: (a) un homólogo de una proteína como se define en (i) que comprende o consiste en una secuencia con una identidad de más del 80% a la secuencia de aminoácidos 19 a 168 o aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2; o (b) un fragmento de una proteína, donde la proteína tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, o un fragmento de un homólogo, donde el homólogo tiene más del 80% de identidad con la secuencia de aminoácidos 19 a 168 o los aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2, donde dicho equivalente funcional retiene la capacidad de unirse al complemento C5 y evitar la escisión del complemento C5 por convertasa C5 en complemento C5a y complemento C5b-9.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidor del complemento ornithodoros moubata para uso en el tratamiento de enfermedad aguda de injerto versus huésped

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La presente invención se refiere al tratamiento y la prevención de la enfermedad aguda de injerto contra huésped (EICH).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] Se cree que la enfermedad de injerto contra huésped (EICH) surge de una interacción compleja entre la inmunidad adaptativa del donante y del receptor. La EICH a menudo ocurre en humanos después de un alotrasplante de células madre, pero también puede surgir después del trasplante de órganos sólidos que contienen tejido linfoide y la transfusión de productos sanguíneos no irradiados. La EICH aguda describe un síndrome distintivo de dermatitis, hepatitis y enteritis que se desarrolla dentro de los 100 días posteriores al tratamiento, por ejemplo, trasplante alogénico de células hematopoyéticas (HCT). La EICH crónica describe un síndrome más diverso que se desarrolla después del día 100.

[0003] Para que ocurra la EICH deben cumplirse los siguientes criterios, discutidos en [1]:

1. El injerto debe contener células inmunológicamente competentes.

2. El huésped debe poseer aloantígenos de trasplante que faltan en el injerto del donante para que el huésped parezca extraño al injerto y, por lo tanto, pueda estimularlo antigénicamente.

3. El huésped en sí mismo debe ser incapaz de montar una reacción inmunológica efectiva contra el injerto, o al menos debe permitir el tiempo suficiente para que el injerto manifieste sus capacidades inmunológicas

[0004] Los grupos de pacientes en riesgo de EICH incluyen pacientes con HCT alogénico, como como aquellos que no están recibiendo profilaxis de EICH, pacientes mayores, receptores de células madre HLA no idénticas y receptores de injertos. Los pacientes de trasplante de órganos sólidos en riesgo de EICH incluyen receptores de trasplantes de intestino delgado (órganos que contienen tejido linfoide). Los pacientes sujetos a transfusiones de hemoderivados no irradiados con un riesgo particular incluyen aquellos que tienen síndromes de inmunodeficiencia congénita, recién nacidos y fetos, aquellos que reciben quimiorradioterapia inmunosupresora y aquellos que reciben donaciones de sangre dirigidas de donantes parcialmente HLA idénticos y homólogos a HLA.

[0005] También puede ocurrir EICH autóloga. Esto ocurre después de un TCH autólogo o singénico y se cree que surge del daño tisular causado por el tratamiento o por la producción secundaria de citocinas, lo que expone autoantígenos crípticos, que el sistema inmunitario puede reconocer nuevamente solo después del TCH. La EICH asociada a la transfusión ocurre de 4 a 30 días después de la transfusión y se parece a la EICH hiperaguda después de un HCT alogénico.

[0006] La EICH aguda puede aparecer inicialmente dentro de los 100 días del trasplante. La EICH hiperaguda es la EICH que surge de 7 a 14 días después del trasplante. La EICH aguda puede tener afectación de la piel (una erupción pruriginosa o dolorosa), el hígado (p. ej., elevación asintomática de la bilirrubina, la alanina aminotransferasa (ALT), la aspartato aminotransferasa (AST) y los niveles de fosfatasa alcalina similares a los observados con la ictericia colestásica, y la subsiguiente prurito con hiperbilirrubinemia), o el intestino (p. ej., la parte distal del intestino delgado y el colon, p. ej., que produce diarrea, hemorragia intestinal, dolor abdominal tipo cólico e íleo, o el GI superior, que se manifiesta como anorexia y dispepsia sin diarrea). La EICH aguda también se ha asociado con un mayor riesgo de neumonía infecciosa y no infecciosa y derrames estériles, cistitis hemorrágica con agentes infecciosos, trombocitopenia y anemia. Se ha observado síndrome urémico hemolítico (microangiopatía trombótica) en pacientes que recibieron ciclosporina A (CSP A) y desarrollaron EICH grave.

[0007] La EICH crónica se considera una extensión de la EICH aguda. Sin embargo, también puede ocurrir por primera vez en pacientes que nunca han tenido evidencia clínica de EICH aguda, o puede surgir después de un intervalo de reposo después de que se resuelve la EICH aguda.

[0008] Existen varios sistemas para estadificar y clasificar la EICH (ver [2]):

Tabla 1. Estadificación clínica de la EICH aguda

(Continuación)

Tabla 2. Clasificación clínica de la EICH aguda

[0009] Los tratamientos existentes para la EICH aguda incluyen profilaxis y tratamiento como se establece en la Tabla 3 a continuación:

Tabla 3

[0010] La solicitud PCT PCT/EP2015/062742 (WO 2015/185760 A1) describe y reivindica métodos para tratar trastornos mediados por el complemento en pacientes que son resistentes a eculizumab, y [3] también presenta un trabajo experimental preliminar que muestra que cuando el suero de un paciente resistente a eculizumab se enriqueció con Coversin y eculizumab, la curva de respuesta a la dosis fue normal para Coversin pero no para eculizumab.

[0011] Sonata et al. (2014) "Eculizumab Therapy in Children with Severe Hematopoyetic Stem Cell TransplantationAssociated Thrombotic Microangiopathy", Biol Blood Marrow Transplant, 518-525, describe el tratamiento de la EICH aguda que es concurrente con la microangiopatía trombótica asociada al trasplante de células madre hematopoyéticas (HSCT-TMA), el HSCT-TMA en tratamiento con eculizumab.

[0012] Existe la necesidad de tratamientos que mejoren, o al menos sean alternativas a los tratamientos conocidos para EICH.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

[0013] Los presentes inventores han encontrado que en un paciente que sufre de EICH, que previamente no había respondido al tratamiento con eculizumab, un anticuerpo monoclonal c 5, la administración sistémica de la proteína de garrapata Coversin (también conocida como EV576 y OmCI en la técnica y aquí [19]) condujo a la estabilización de los signos vitales y redujo el sangrado rectal. Por lo tanto, la cobertura administrada sistémicamente se puede usar para tratar y prevenir la EICH aguda.

[0014] La invención proporciona un agente para usar en el tratamiento o la prevención de la EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, en el que el agente se administra sistémicamente y en el que el agente es:

(i) una proteína que comprende aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 2 o un equivalente funcional de esta proteína; o

(ii) una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína como se menciona en (i),

donde el equivalente funcional es:

(a) un homólogo de una proteína como se define en (i) que comprende o consiste en una secuencia con más del 80% de identidad a la secuencia de aminoácidos 19 a 168 o aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2; o

(b) un fragmento de una proteína, donde la proteína tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, o un fragmento de un homólogo, donde el homólogo tiene más del 80% de identidad con la secuencia de aminoácidos 19 a 168 o los aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2,

donde dicho equivalente funcional retiene la capacidad de unirse al complemento C5 y evitar la escisión del complemento C5 por convertasa C5 en complemento C5a y complemento C5b-9.

[0015] La descripción (no según la invención) proporciona un método para tratar o prevenir la EICH aguda que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína.

[0016] La divulgación (no según la invención) también proporciona un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína para tratar o prevenir la EICH aguda en un sujeto, en el que el agente se administra sistémicamente.

[0017] La divulgación (no según la invención) también proporciona un método para tratar o prevenir la EICH aguda que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína.

[0018] La divulgación (no según la invención) también proporciona un agente que es una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína para tratar o prevenir la EICH en un sujeto, en el que el agente se administra sistémicamente.

Complemento

[0019] El sistema del complemento es una parte esencial del mecanismo de defensa natural del cuerpo contra la invasión extraña y también está implicado en el proceso inflamatorio. Más de 30 proteínas en el suero y en la superficie celular están involucradas en la función y regulación del sistema del complemento. Recientemente se ha hecho evidente que, además de los -35 componentes conocidos del sistema del complemento que pueden estar asociados con procesos tanto beneficiosos como patológicos, el propio sistema del complemento interactúa con al menos 85 vías biológicas con funciones tan diversas como la angiogénesis, la activación plaquetaria, metabolismo de la glucosa y espermatogénesis

[0020] El sistema del complemento se activa por la presencia de antígenos extraños. Existen tres vías de activación: (1) la vía clásica que es activada por complejos IgM e IgG o por reconocimiento de carbohidratos; (2) la vía alternativa que es activada por superficies ajenas (que carecen de moléculas reguladoras específicas) y por endotoxinas bacterianas; y (3) la ruta de la lectina que se activa mediante la unión de la lectina de unión a manano (MBL) a los residuos de manosa en la superficie de un patógeno. Las tres vías comprenden cascadas paralelas de eventos que dan como resultado la producción de la activación del complemento a través de la formación de convertasas C3 y C5 similares en las superficies celulares, lo que da como resultado la liberación de mediadores agudos de la inflamación (C3a y C5a) y la formación del complejo de ataque a la membrana (MAC). Las cascadas paralelas implicadas en las vías clásica y alternativa se muestran en la Figura 1.

[0021] La vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina se denominan colectivamente en el presente documento vías del complemento.

Polimorfismos del C5 del complemento

[0022] Se han informado varios polimorfismos del C5 humano [4-8]. Las mutaciones en el gen que codifica C5 se han asociado con varias patologías, incluida la deficiencia del componente 5 del complemento, una enfermedad en la que los pacientes muestran una propensión a sufrir infecciones recurrentes graves. Los defectos en este gen también se han relacionado con la susceptibilidad a la fibrosis hepática ya la artritis reumatoide. Los polimorfismos en C5 humano incluyen inserciones, deleciones, sustituciones de un solo aminoácido, cambios de marco, truncamientos y combinaciones de estos cambios.

[0023] Ciertos polimorfismos de C5 humano alteran la actividad de C5 con importancia clínica, por ejemplo, los polimorfismos que afectan a Arg885 de C5 de tipo salvaje incluyen Arg885Cys (codificado por c.2653C>T) y p.Arg885His (codificado por c.2654G>A), ambos de los cuales disminuyen la eficacia terapéutica del mAb eculizumab [7].

[0024] El término "polimorfismo C5" se usa aquí para referirse a cualquier variante de C5 que no sea el C5 de tipo salvaje. En un sujeto humano, el C5 de tipo salvaje es la proteína C5 con número de registro NP_001726.2; versión GI:38016947. El término "polimorfismo C5" incluye inserciones, deleciones, sustituciones de aminoácidos simples o múltiples, cambios de marco, truncamientos y combinaciones de estos cambios en la proteína C5.

[0025] Estos polimorfismos pueden estar presentes como polimorfismos heterocigotos u homocigotos, tales como C5 heterocigotos para un polimorfismo dado, homocigotos para un polimorfismo o heterocigotos para diferentes polimorfismos.

[0026] Los polimorfismos incluyen cambios en la secuencia de aminoácidos de C5 de tipo salvaje que están cerca o dentro del epítopo de eculizumab (es decir, 879KSSKC883, incluidos K879, S880, S881, K882 y/o C883). Por ejemplo, cualesquiera cambios pueden estar en el epítopo de eculizumab o hasta 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 aminoácidos en el extremo N o C del epítopo de eculizumab.

[0027] Preferiblemente, el cambio de aminoácido no está dentro o cerca del sitio de unión de Coversin de C5. Se cree que esta es una región conservada encima de C5a en el extremo distal del superdominio CUB-C5d-MG8 altamente conservado de C5.

[0028] Los polimorfismos de C5 pueden disminuir la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina en un sujeto con C5 de tipo salvaje. Por "disminuir la eficacia" se entiende que el agente tiene un CI50 para la proteína C5 polimórfica que es al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 1O0O o más veces mayor que el CI50 del mismo agente para la proteína C5 de tipo salvaje.

[0029] El polimorfismo C5 puede disminuir la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina, pero no disminuye la eficacia de Coversin o sus equivalentes funcionales. El polimorfismo C5 puede disminuir la eficacia de uno o más anticuerpos monoclonales anti C5 que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina en un sujeto con C5 de tipo salvaje, pero no disminuye la eficacia de otros agentes. que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al unirse a C5 sin bloquear el sitio de unión de la convertasa de C5.

[0030] Por "no disminuye la eficacia" se entiende que la CI50 de Coversin u otros agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al unirse a C5 sin bloquear el sitio de unión de la convertasa de C5, para la proteína C5 de tipo salvaje es al menos el 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % del CI50 de Coversin u otros agentes que inhiben la la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al unirse a C5 sin bloquear el sitio de unión de la convertasa de C5 para la proteína C5 polimórfica. El término "no disminuye" también abarca un aumento en la eficacia.

[0031] En una forma de realización alternativa, la eficacia se puede medir midiendo la capacidad del agente para inhibir la activación del complemento en el suero tomado del sujeto. Por ejemplo, la actividad del complemento en el suero de dichos sujetos puede medirse por cualquier medio conocido en la técnica o descrito en el presente documento, por ejemplo, los ensayos hemolíticos descritos en la referencia [9]. Se consideraría que un agente inhibe la actividad del complemento en dicho sujeto si se reduce la actividad del complemento en presencia del agente en comparación con un control. Por "reducido" en este contexto se entiende que la actividad del complemento en la muestra tratada es al menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100%, reducida en comparación con un control.

[0032] El polimorfismo C5 puede disminuir la eficacia de los agentes de anticuerpos monoclonales en la inhibición de la activación de una o más de las vías del complemento. El polimorfismo C5 puede disminuir la eficacia del anticuerpo monoclonal eculizumab para inhibir la activación de una o más vías del complemento. El polimorfismo C5 puede disminuir la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al bloquear el sitio de unión de la convertasa C5. El polimorfismo C5 puede estar en la posición Arg885. Los polimorfismos específicos en esta posición incluyen Arg885Cys o Arg885His.

[0033] Los polimorfismos que alteran la unión de la afinidad de C5 a anticuerpos monoclonales anti C5 conocidos como eculizumab, Pexelizumab y/o N19-8, o la eficacia de los inhibidores del complemento peptídico como ARC 1905 también son de interés.

[0034] La descripción (no según la invención) proporciona un método para tratar o prevenir la EICH aguda que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína, y en donde el sujeto

i) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento, por ejemplo, un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de los agentes de anticuerpos monoclonales para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, como un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia del anticuerpo monoclonal eculizumab para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, y/o

ii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la efectividad de uno o más agentes que inhiben la vía de complemento clásica, la ruta alternativa del complemento y la ruta del complemento de lectina, pero no disminuye la eficacia de Coversin o sus equivalentes funcionales, y/o

iii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina bloqueando el sitio de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

iv) no tiene o no ha sido probado para determinar la resistencia al tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el tratamiento está destinado a inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en el que el anticuerpo monoclonal es eculizumab, y/o

v) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que aumenta la afinidad de otro agente, como eculizumab, por la proteína C5, y/o

vi) no tiene o no ha sido probado para resistencia al tratamiento con un agente que inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina mediante el bloqueo del sitio de unión de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

vii) no ha sido tratado con un tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que se pretende que el anticuerpo monoclonal inhiba la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en donde el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo anti C5, más preferiblemente eculizumab, y/o

viii) no ha sido seleccionado para el tratamiento con el agente de la invención sobre la base de la disminución de la eficacia en el sujeto de un agente diferente (por ejemplo, un anticuerpo anti C5).

[0035] Los ejemplos específicos de tales polimorfismos y anticuerpos anti C5 se analizan anteriormente.

[0036] La invención también proporciona un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones para su uso en el tratamiento o prevenir la EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, en el que el agente se administra sistémicamente y en el que el sujeto:

i) no tiene o no ha sido analizado para un polimorfismo C5 del complemento, por ejemplo, un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de los agentes de anticuerpos monoclonales para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, como un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia del anticuerpo monoclonal eculizumab para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento,

ii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de la lectina, pero no disminuye la eficacia de Coversin o sus equivalentes funcionales, y/o

iii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al bloquear el sitio de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

iv) no tiene o no ha sido probado la resistencia al tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el tratamiento está destinado a inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en donde el anticuerpo monoclonal es eculizumab, y/o

v) no tiene o no ha sido probado para polimorfismos C5 del complemento que aumenta la afinidad de otro agente, como eculizumab, por la proteína C5, y/o

vi) no tiene o no se ha probado su resistencia al tratamiento con un agente que inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

vii) no ha sido tratado con un tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el anticuerpo monoclonal está destinado a inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en el que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo anti C5, y/o

[0037] Los ejemplos específicos de dichos polimorfismos y anticuerpos anti C5 se analizan anteriormente.

[0038] La descripción (no según la invención) también proporciona un método para tratar o prevenir la EICH aguda que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína, y en el que el sujeto

i) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento, p. ej., polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de los agentes de anticuerpos monoclonales para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, como un polimorfismo C5 del complemento que reduce la eficacia del anticuerpo monoclonal eculizumab para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento,

ii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina, pero no disminuye la eficacia de Coversin o sus equivalentes funcionales, y/o

iii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina bloqueando el sitio de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de la lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

iv) no tiene o no se ha probado la resistencia al tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el tratamiento está destinado a inhibir la activación de una o más de las rutas del complemento, preferiblemente en donde el anticuerpo monoclonal es eculizumab, y/o

v) no tiene o tiene no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que aumenta la afinidad de otro agente, como eculizumab, por la proteína C5, y/o

vi) no tiene o no ha sido probado para resistencia al tratamiento con un agente que inhibe la vía del complemento clásico, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina al bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

vii) no ha sido tratado con un tratamiento con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el anticuerpo monoclonal pretende inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en el que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo anti C5, más preferiblemente en el que el anticuerpo monoclonal es eculizumab, y/o

viii) no ha sido seleccionado para el tratamiento con el agente de la invención en base a la disminución de la eficacia en el sujeto de un agente diferente (p. ej., un anticuerpo anti C5).

[0039] Los ejemplos específicos de dichos polimorfismos y anticuerpos anti C5 se analizan anteriormente.

[0040] La invención también proporciona un agente que es una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína como se define en la reivindicaciones para tratar o prevenir la EICH en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, en el que el agente se administra sistémicamente y en el que el sujeto

i) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento, por ejemplo, un complemento polimorfismo C5 que disminuye la eficacia de los agentes de anticuerpos monoclonales para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, como un polimorfismo C5 del complemento que reduce la eficacia del anticuerpo monoclonal eculizumab para inhibir la activación de una o más de las vías del complemento,

ii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la efectividad de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina, pero no disminuye la eficacia de Coversin o sus equivalentes funcionales, y/o

iii) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que disminuye la eficacia de uno o más agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina mediante el bloqueo del sitio de unión de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

iv) no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento que aumenta la afinidad de otro agente, como eculizumab, por la proteína C5, y/o

v) no tiene o no ha sido probado para resistencia al tratamiento con un agente de anticuerpos monoclonales en el que el tratamiento está destinado a inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente en el que el anticuerpo monoclonal es eculizumab, y/o

vi) no tiene o no se ha probado su resistencia al tratamiento con un agente que inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina mediante el bloqueo del sitio de unión de la convertasa C5, pero no disminuye la eficacia de los agentes que inhiben la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina sin bloquear el sitio de unión de la convertasa C5, y/o

vii) no ha sido tratado con un agente de anticuerpo monoclonal en el que el el anticuerpo monoclonal está destinado a inhibir la activación de una o más de las vías del complemento, preferiblemente cuando el anticuerpo monoclonal un anticuerpo anti C5, y/o

[0041] Los ejemplos específicos de tales polimorfismos y anticuerpos anti C5 se analizan anteriormente.

Polimorfismos C5

[0042] Como se discutió anteriormente, los sujetos con dos polimorfismos C5 en la posición Arg885 (c.2653C>T (p.Arg885Cys) y c.2654G>A (p.Arg885His)) no responden a eculizumab, y tales sujetos son ejemplos de sujetos que son resistentes a eculizumab. Se ha demostrado que la Coversin es capaz de inhibir la escisión de C5 y la activación de las vías del complemento, independientemente de la presencia o ausencia de polimorfismos, porque interactúa con la proteína C5 del complemento de manera diferente a eculizumab. Coversin y eculizumab se unen a C5 en diferentes lugares de la molécula C5. Coversin se une a C5, lo que da como resultado la estabilización de la conformación global de C5 pero no bloquea el sitio de escisión de C5a [10].

[0043] El polimorfismo Arg885His es particularmente prevalente en sujetos de origen japonés y chino Han. Coversin se puede utilizar en una subpoblación con estos orígenes étnicos. Coversin también se puede utilizar en poblaciones de otros orígenes étnicos, por ejemplo, aquellas que no son de origen japonés o chino Han y/o aquellas que no son caucásicas. Los grupos étnicos adecuados incluyen los grupos afrocaribeños, caucásicos eslavos, caucásicos no eslavos, asiáticos orientales y asiáticos no orientales.

[0044] Los sujetos con polimorfismos C5 pueden identificarse mediante técnicas rutinarias que incluyen análisis genético molecular del gen que codifica la proteína C5, incluida la secuenciación del gen [7]; probar la capacidad de varios agentes para inhibir la activación del complemento en el sujeto como se describe en el presente documento o mediante otros métodos conocidos en la técnica; y/o análisis bioquímico de la proteína C5 del sujeto, incluido el enfoque isoeléctrico y la detección funcional [11]. En un entorno clínico, un sujeto con un polimorfismo C5 puede ser identificado por una respuesta inesperadamente pobre a un agente que inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina.

[0045] La actividad del complemento en el suero de dichos sujetos puede medirse por cualquier medio conocido en la técnica o descrito en el presente documento, por ejemplo, los ensayos hemolíticos descritos en la referencia [12] y/o mediante el uso del método Quidel CH50 mencionado en el ejemplo. Se consideraría que un agente inhibe la actividad del complemento en dicho sujeto si se reduce la actividad del complemento en presencia del agente en comparación con un control. Por "reducida" en este contexto se entiende que la actividad del complemento en la muestra tratada es al menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, reducida en comparación con un control.

Enfermedades y trastornos mediados por el complemento

[0046] La activación del complemento debe controlarse estrictamente para evitar el daño a los propios tejidos del cuerpo. Se ha demostrado que la falta de control de la activación del complemento desempeña un papel en una variedad de enfermedades que incluyen, entre otras, la pancreatitis aguda, la degeneración macular relacionada con la edad (AMD), el síndrome uremeico hemolítico atípico (aHUS), la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntingdon, la enfermedad de Parkinson, encefalomielitis alérgica, alotrasplante, asma, síndrome de dificultad respiratoria del adulto, gripe, lesiones por quemaduras, enfermedad de Crohn, glomerulonefritis, anemia hemolítica, hemodiálisis, angioedema hereditario, lesiones por isquemia-reperfusión, insuficiencia multiorgánica, esclerosis múltiple, miastenia grave, infarto de miocardio, paroxística nocturna hemoglobinuria (PNH), psoriasis, artritis reumatoide, shock séptico, lupus eritematoso sistémico, accidente cerebrovascular, púrpura trombocitopénica trombótica (PTT), lesión cerebral traumática, síndrome de fuga vascular y rechazo de trasplantes y enfermedad de injerto contra huésped (EICH), así como varios otros trastornos de los nervios periféricos y trastornos respiratorios [13-18].

[0047] La invención se refiere a un agente para uso en el tratamiento de la EICH aguda en un sujeto, como se define en las reivindicaciones.

[0048] El sujeto puede sufrir EICH aguda, puede tener EICH con uno o más síntomas que se encuentran en la etapa , +, ++ o +++ y/o el sujeto puede tener una clasificación clínica de I, II, III o IV [2]. El resultado del tratamiento de la invención puede ser una mejora en el estadio y/o grado de la EICH.

[0049] El sujeto que padece EICH aguda puede tener daño tisular, por ejemplo, daño tisular interno (tal como intestinal) que surge de la EICH. Como tal, el resultado del tratamiento de la invención puede ser una reducción de este daño tisular.

[0050] Los síntomas de EICH pueden medirse mediante LDH en suero. Como tal, el resultado del tratamiento de la invención puede ser una reducción de la LDH en suero, por ejemplo, medida mediante métodos estándar conocidos en la técnica.

[0051] El sujeto puede tener un recuento reducido de plaquetas. Como tal, el resultado del tratamiento de la invención puede ser un aumento en el recuento de plaquetas, por ejemplo, medido por métodos estándar conocidos en la técnica.

[0052] Por lo tanto, en una forma de realización adicional de la descripción (no según la invención), se proporciona un método para reducir el daño tisular en un sujeto con EICH aguda, que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma. En la invención, también se proporciona un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma como se define en las reivindicaciones, para reducir el daño tisular en un sujeto con EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, y en el que el agente se administra sistémicamente.

[0053] Por lo tanto, en una forma de realización adicional de la divulgación (no según la invención), se proporciona un método para reducir la LDH en suero en un sujeto con EICH aguda, que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma. En la invención, también se proporciona un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma como se define en las reivindicaciones, para reducir la LDH sérica en un sujeto con EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, y en el que el agente se administra sistémicamente.

[0054] Por lo tanto, en una forma de realización adicional de la descripción (no según la invención), se proporciona un método para aumentar el recuento de plaquetas en un sujeto con EICH aguda, que comprende administrar sistémicamente a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma. En la invención, también se proporciona un agente que es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones, o que es una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína o el equivalente funcional de la misma como se define en las reivindicaciones, para aumentar el recuento de plaquetas en un sujeto con EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, y en el que el agente se administra sistémicamente.

[0055] Los sujetos, agentes, dosis y similares preferidos son como se describen en el presente documento. Cualquier referencia a cualquier reducción o aumento es una reducción o aumento en comparación con dicho sujeto en ausencia del tratamiento. Preferiblemente, el parámetro puede cuantificarse y, cuando este sea el caso, el aumento o la disminución será preferiblemente estadísticamente significativo. Por ejemplo, el aumento o disminución puede ser de al menos 3, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 % en comparación con el parámetro en ausencia de tratamiento.

[0056] El sujeto al que se administra el agente de la invención es preferentemente un mamífero, preferentemente un ser humano. El sujeto puede ser un adulto, un niño o un bebé. El sujeto al que se administra el agente sufre EICH agudo.

[0057] El sujeto puede tener, por ejemplo, al menos 5 años, o al menos 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70 años. El sujeto puede tener menos de 4 años, menos de 3, 2 o 1 año.

[0058] Los sujetos de interés son aquellos con EICH aguda, como se describe en el presente documento. Los sujetos preferidos pueden, por ejemplo, tener uno o más de los siguientes atributos:

el sujeto tiene una EICH aguda después de un trasplante alogénico de células hematopoyéticas (HCT),

el sujeto no ha recibido profilaxis de la EICH,

el sujeto ha recibido células madre HLA no idénticas,

el sujeto tiene EICH aguda después de un trasplante de órganos sólidos, por ejemplo, un trasplante de intestino delgado, o después de una transfusión de productos sanguíneos no irradiados,

el sujeto tiene EICH aguda después de un TCH autólogo o singénico,

el sujeto tiene EICH hiperaguda.

Agente a utilizar en la invención

[0059] De acuerdo con una forma de realización de la invención, el agente es una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o es un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones. El agente puede ser una proteína que consta de los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 o ser un equivalente funcional de esta proteína como se define en las reivindicaciones.

[0060] Según una forma de realización alternativa, la proteína utilizada según esta realización de la invención puede comprender o consistir en los aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 2), o ser un equivalente funcional del mismo como se define en las reivindicaciones. Los primeros 18 aminoácidos de la secuencia de proteína proporcionada en la Figura 2 forman una secuencia señal que no se requiere para la unión de C5 o para la actividad de unión de LTB4 y, por lo tanto, puede prescindirse opcionalmente, por ejemplo, para la eficiencia de la producción de proteína recombinante.

[0061] La proteína que tiene la secuencia de aminoácidos proporcionada en la Figura 2, también denominada en el presente documento proteína Coversin, se aisló de las glándulas salivales de la garrapata Ornithodoros moubata. Coversin es un miembro periférico de la familia de lipocalina y es el primer miembro de la familia de lipocalina que inhibe la activación del complemento. La proteína Coversin inhibe las vías alternativa, clásica y del complemento de la lectina al unirse a C5 y evitar su escisión por la convertasa C5 en Complemento C5a y Complemento C5b - 9, inhibiendo así la acción del péptido C5a y la MAC. La proteína Coversin también se une a LTB4. El término "proteína Coversin", tal como se usa en el presente documento, se refiere a la secuencia proporcionada en la Figura 2 con o sin la secuencia señal.

[0062] La proteína Coversin y la capacidad de esta proteína para inhibir la activación del complemento se han descrito en [19], donde la proteína Coversin se denominó "proteína OmCI". La proteína Coversin también ha demostrado ser eficaz en el tratamiento de la miastenia grave [15], los trastornos respiratorios [16] y los trastornos de los nervios periféricos [17]. La capacidad de la proteína Coversin para unirse a eicosanoides, incluido LTB4, y su uso en el tratamiento de enfermedades mediadas por un leucotrieno o hidroxieicosanoide se ha sugerido en [20].

[0063] Ahora se ha encontrado que la proteína Coversin es eficaz en el tratamiento y la prevención de la EICH aguda en sujetos. Los datos presentados en este documento demuestran que, en un sujeto con EICh , la actividad del complemento in vitro fue completamente sensible a Coversin, con una inhibición del 100 % en todas las concentraciones probadas, y además el sujeto mostró una respuesta clínica alentadora, con estabilización de los signos vitales y reducción del recto sangrado.

[0064] De acuerdo con una forma de realización adicional de la invención, el agente puede ser una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína Coversin o un equivalente funcional de la misma como se define en las reivindicaciones. Por ejemplo, la terapia génica se puede emplear para efectuar la producción endógena de la proteína Coversin por las células relevantes en el sujeto, ya sea in vivo o ex vivo. Otro enfoque es la administración de "ADN desnudo" en el que el gen terapéutico se inyecta directamente en el torrente sanguíneo o en el tejido muscular.

[0065] Preferiblemente, dicha molécula de ácido nucleico comprende o consta de las bases 55 a 507 de la secuencia de nucleótidos de la Figura 2 (SEQ ID NO: 1). Esta secuencia de nucleótidos codifica la proteína Coversin de la Figura 2 sin la secuencia señal. Las primeras 54 bases de la secuencia de nucleótidos de la Figura 2 codifican la secuencia señal que no se requiere para la actividad inhibidora del complemento o la actividad de unión de LTB4. Alternativamente, la molécula de ácido nucleico puede comprender o consistir en las bases 1 a 507 de la secuencia de ácido nucleico de la Figura 2, que codifica la proteína con la secuencia señal.

[0066] Se ha demostrado que la proteína Coversin se une a C5 y evita su escisión por la convertasa de C5 en suero de rata, ratón y ser humano con una CI50 de aproximadamente 0,02 mg/ml. Los equivalentes funcionales de la proteína Coversin conservan preferentemente la capacidad de unirse a C5 con una CI50 inferior a 0,2 mg/ml, preferentemente inferior a 0,1 mg/ml, preferentemente inferior a 0,05 mg/ml, preferentemente inferior a 0,02 mg/ml, preferentemente inferior a 1 mg/ml, preferentemente inferior a 100 ng/ml, preferentemente inferior a 10 ng/ml, aún más preferentemente inferior a 1 ng/ml.

[0067] También se ha demostrado que la proteína Coversin se une a LTB4. Los equivalentes funcionales de la proteína Coversin también pueden conservar la capacidad de unirse a LTB4 con una afinidad similar a la de la proteína Coversin.

[0068] En un aspecto de la invención, el agente se une al complemento C5, opcionalmente al complemento C5 de sujetos con polimorfismos del complemento C5. El agente actúa para prevenir la escisión del complemento C5, opcionalmente del complemento C5 de sujetos con polimorfismos del complemento C5, por convertasa C5 en complemento C5a y complemento C5b-9. El agente puede actuar para reducir los niveles de C5a en un sujeto en comparación con un sujeto no tratado. Los equivalentes funcionales del agente también comparten preferiblemente estas propiedades.

[0069] En un aspecto de la invención, el agente inhibe la vía clásica del complemento, la vía alternativa del complemento y la vía del complemento de lectina. En un aspecto, el agente se une a C5 de tal manera que estabiliza la conformación global de C5 pero no bloquea el sitio de corte de la convertasa de C5. La unión de Coversin a C5 da como resultado la estabilización de la conformación global de C5 pero no bloquea el sitio de escisión de la convertasa. Los equivalentes funcionales del agente también comparten preferiblemente estas propiedades.

[0070] La proteína C5 del complemento, también denominada en el presente documento C5, es escindida por la enzima convertasa C5 (Figura 1). Los productos de esta escisión incluyen una anafilatoxina C5a y un complejo lítico C5b - 9 también conocido como complejo de ataque a la membrana (MAC). C5a es un péptido altamente reactivo implicado en muchos procesos inflamatorios patológicos, incluida la quimiotaxis de neutrófilos y eosinófilos, la activación de neutrófilos, el aumento de la permeabilidad capilar y la inhibición de la apoptosis de neutrófilos [21].

[0071] MAC está asociado con otros procesos patológicos importantes que incluyen artritis reumatoide [22; 23], glomerulonefritis proliferativa [24], nefropatía membranosa idiopática [25], proteinurea [26], desmielinización después de una lesión axonal aguda [27] y también es responsable para el rechazo agudo del injerto después de un xenotrasplante [28].

[0072] Se han desarrollado anticuerpos monoclonales y moléculas pequeñas que se unen e inhiben C5 para tratar diversas enfermedades [14], en particular PNH, psoriasis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico y rechazo de trasplantes. Sin embargo, estos anticuerpos monoclonales no se unen a ciertas proteínas C5 de sujetos con polimorfismos C5 y, por lo tanto, son ineficaces en estos sujetos [7]. Por el contrario, los agentes Coversin y los equivalentes funcionales de los mismos inhiben la escisión de C5 del complemento tanto en sujetos con C5 de tipo salvaje como en sujetos con polimorfismos de C5.

[0073] La capacidad de un agente para unirse a C5, incluido C5 de sujetos con polimorfismos de C5, puede determinarse mediante ensayos in vitro estándar conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante transferencia Western después de la incubación de la proteína en el gel con C5 marcado. Preferiblemente, el agente según la invención se une a C5, ya sea de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con polimorfismos C5, con una CI50 de menos de 0,2 mg/ml, preferiblemente menos de 0,1 mg/ml, preferiblemente menos de 0,05 mg/ ml, preferiblemente menos de 0,04 mg/ml, preferiblemente menos de 0,03 mg/ml, preferiblemente 0,02 mg/ml, preferiblemente menos de pg/ml, preferiblemente menos de 100 ng/ml, preferiblemente menos de 10 ng/ml, más preferiblemente aún, menos de 1 ng/ml. No es necesario que el agente tenga la misma afinidad por C5 de tipo salvaje y C5 de sujetos con polimorfismos de C5. Puede mostrar una afinidad mayor, menor o igual por C5 y C5 de tipo salvaje de sujetos con polimorfismos C5.

[0074] La capacidad de un agente para inhibir la activación del complemento puede determinarse midiendo la capacidad del agente para inhibir la activación del complemento en suero. Por ejemplo, la actividad del complemento en el suero se puede medir por cualquier medio conocido en la técnica o descrito en el presente documento.

[0075] El agente también puede definirse como que tiene la función de inhibir la actividad de los eicosanoides.

[0076] El agente según este aspecto de la invención puede inhibir la actividad de la leucotrina B4 (LTB4). En particular, el agente según este aspecto de la invención puede unirse a LTB4. La capacidad de un agente para unirse a LTB4 puede determinarse mediante ensayos in vitro estándar conocidos en la técnica, por ejemplo mediante un ELISA competitivo entre la cobertura y el anticuerpo anti-LTB4 que compiten por la unión al LTB4 marcado. El agente según la invención puede unirse a LTB4 con una CI50 inferior a 0,2 mg/ml, preferentemente inferior a 0,1 mg/ml, preferentemente inferior a 0,05 mg/ml, preferentemente inferior a 0,04 mg/ml, preferentemente inferior a 0,03 mg/ml, preferiblemente 0,02 mg/ml, preferiblemente menos de 1 |jg/ml, preferiblemente menos de 100 ng/ml, preferiblemente menos de 10 ng/ml, aún más preferiblemente menos de 1 ng/ml. Los equivalentes funcionales del agente también comparten preferiblemente estas propiedades.

[0077] Según una forma de realización de la invención, el agente puede unirse a todos los C5, C5 de sujetos con polimorfismos C5 y LTB4. El agente según esta realización puede actuar así para evitar la escisión del complemento C5 por convertasa C5 en complemento C5a y complemento C5b-9 (MAC), y también para inhibir la actividad de LTB4. El uso de un agente que se une tanto a C5 como a LTB4 es particularmente ventajoso. Se cree que C5 y la ruta de los eicosanoides contribuyen a la patología observada en muchas enfermedades y trastornos mediados por el complemento. Por lo tanto, al usar un solo agente que inhibe múltiples vías involucradas en los efectos inflamatorios de las enfermedades y trastornos mediados por el complemento, se puede lograr un efecto mejorado, en comparación con el uso de un agente que inhibe solo una sola vía involucrada en los efectos inflamatorios de las enfermedades y trastornos mediados por el complemento. Hay además ventajas prácticas asociadas con la administración de una sola molécula.

[0078] Preferiblemente, el agente de la invención se deriva de un artrópodo hematófago. El término "artrópodo hematófago" incluye todos los artrópodos que se alimentan de sangre de un huésped adecuado, como insectos, garrapatas, piojos, pulgas y ácaros. Preferiblemente, el agente se deriva de una garrapata, preferiblemente de la garrapata Omithodoros moubata.

[0079] En un sentido, el término "equivalente funcional" se usa aquí para describir homólogos y fragmentos de la proteína Coversin que: a) conservan su capacidad para unirse a C5, ya sea C5 de tipo salvaje o C5 de un sujeto con un polimorfismo C5, y para evitar la escisión del complemento C5 por convertasa C5 en complemento C5a y complemento C5b-9; y/o b) conservar su capacidad para unirse a LTB4.

[0080] El término "equivalente funcional" también se refiere a moléculas que son estructuralmente similares a la proteína Coversin o que contienen una estructura terciaria similar o idéntica, particularmente en el entorno del sitio activo o sitios activos de la proteína Coversin que se une a C5, ya sea C5 de tipo salvaje o C5 de un sujeto con un polimorfismo C5 y/o LTB4, como moléculas sintéticas. Los aminoácidos en Coversin que probablemente se requieran para la unión de LTB4 se describen en [20].

[0081] El término "homólogo" pretende incluir referencias a parálogos y ortólogos de la secuencia de Coversin que se identifica explícitamente en la Figura 2, incluida, por ejemplo, la secuencia de la proteína Coversin de otras especies de garrapatas, incluidas Rhipicephalus appendiculatus, R. sanguineus, R. bursa, A. americanum, A. cajennense, A. hebraeum, Boophilus microplus, B. annulatus, B. decoloratus, Dermacentor reticulatus, D. andersoni, D. marginatus, D. variabilis, Haemaphysalis inermis, Ha. leachii, Ha. punctata, Hyalomma anatolicum anatolicum, Hy. dromedarii, Hy. marginatum marginatum, Ixodes ricinus, I. persulcatus, I. scapularis, I. hexagonus, Argas persicus, A. reflexus, Ornithodoros erraticus, O. moubata moubata, O. m. porcinus y O. savignyi. El término homólogo también pretende incluir la secuencia equivalente de la proteína Coversin de especies de mosquitos, incluidas las de los géneros Culex, Anopheles y Aedes, particularmente Culex quinquefasciatus, Aedes aegypti y Anopheles gambiae; especies de pulgas, tales como Ctenocephalides felis (la pulga del gato); tábanos; flebótomos; moscas negras; moscas tsetsé; piojos; ácaros; sanguijuelas; y platelmintos. Se cree que la proteína Coversin nativa existe en O. moubata en otras tres formas de alrededor de 18 kDa y el término "homólogo" pretende incluir estas formas alternativas de Coversin.

[0082] Los métodos para la identificación de homólogos de la secuencia de Coversin dada en la Figura 2 serán claros para los expertos en la técnica. Por ejemplo, los homólogos pueden identificarse mediante la búsqueda de homología en bases de datos de secuencias, tanto públicas como privadas. Convenientemente, se pueden usar bases de datos disponibles públicamente, aunque las bases de datos privadas o comercialmente disponibles serán igualmente útiles, particularmente si contienen datos que no están representados en las bases de datos públicas. Las bases de datos primarias son los sitios de depósito de datos de secuencias de aminoácidos o nucleótidos primarios y pueden estar disponibles pública o comercialmente. Ejemplos de bases de datos primarias disponibles públicamente incluyen la base de datos GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), la base de datos EMBL (http://www.ebi.ac.uk/), la base de datos DDBJ (http://www.ddbj.nig.ac.jp/), la base de datos de proteínas SWISS-PROT (http://expasy.hcuge.ch/), PIR (http://pir.georgetown.edu/), TrEMBL (http://www.ebi.ac.uk/), las bases de datos TIGR (ver http://www.tigr.org/tdb/index.html), la base de datos NRL-3D (http://www.nbrfa.georgetown.edu), la base de datos de proteínas (http://www.rcsb.org/pdb), la base de datos NRDB (ftp://ncbi.nlm.nih.gov/pub/nrdb/README), la base de datos OWL (http://www.biochem.ucl.ac.uk/bsm/dbbrowser/OWL/) y las bases de datos secundarias PROSITE (http://expasy.hcuge.ch/sprot/prosite.html), PRINTS (http://iupab.leeds.ac.uk/bmb5dp/prints.html), Profiles tp://ulrec3.unil.ch/software/PFSCAN_form.html).

[0083] Bases de datos Pfam (http://www.sanger.ac.uk/software/pfam), Identify (http://dna.stanford.edu/identify/) y Blocks (http://www.blocks.fhcrc.org). Ejemplos de bases de datos disponibles comercialmente o bases de datos privadas incluyen PathoGenome (Genome Therapeutics Inc.) y PathoSeq (anteriormente de Incyte Pharmaceuticals Inc.).

[0084] Normalmente, más del 30 % de identidad entre dos polipéptidos (preferiblemente, sobre una región específica como el sitio activo) se considera una indicación de equivalencia funcional y, por lo tanto, una indicación de que dos proteínas son homólogas. Preferiblemente, las proteínas que son homólogas tienen un grado de identidad de secuencia con la secuencia de la proteína Coversin identificada en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) superior al 60%. Los homólogos más preferidos tienen grados de identidad superiores al 80 %, 90 %, 95 %, 98 % o 99 %, respectivamente, con la secuencia de la proteína Coversin proporcionada en la Figura 2 (SEQ ID NO:2). El porcentaje de identidad, como se menciona en este documento, se determina usando BLAST versión 2.1.3 usando los parámetros predeterminados especificados por el NCBI (el Centro Nacional de Información Biotecnológica; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [matriz Blosum 62; penalización por apertura de espacio = 11 y penalización por extensión de espacio = 1].

[0085] Los equivalentes funcionales de la secuencia de la proteína Coversin proporcionada en la Figura 2 incluyen mutantes que contienen sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos de la secuencia de tipo salvaje, por ejemplo, de 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10 o más aminoácidos ácidos, o hasta 1, 2, 3, 4, 5, 7 o 10 aminoácidos, siempre que dichos mutantes conserven la capacidad de unirse a C5 de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con un polimorfismo C5. Por tanto, los mutantes incluyen proteínas que contienen sustituciones conservativas de aminoácidos que no afectan a la función o actividad de la proteína de manera adversa. Este término también pretende incluir variantes biológicas naturales (por ejemplo, variantes alélicas o variaciones geográficas dentro de las especies de las que se derivan las proteínas Coversin). Los mutantes con capacidad mejorada para unirse a C5 de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con un polimorfismo C5 y/o LTB4 también pueden diseñarse mediante la mutación sistemática o dirigida de residuos específicos en la secuencia de la proteína.

[0086] Los fragmentos de la proteína Coversin y de los homólogos de la proteína Coversin también están incluidos en el término "equivalentes funcionales" siempre que dichos fragmentos conserven la capacidad de unirse a C5 de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con un polimorfismo C5 y/o o LTB4. Los fragmentos pueden incluir, por ejemplo, polipéptidos derivados de la secuencia de la proteína Coversin que tienen menos de 150 aminoácidos, menos de 125 aminoácidos, menos de 100 aminoácidos, menos de 75 aminoácidos, menos de 50 aminoácidos o incluso 25 aminoácidos. ácidos o menos, siempre que estos fragmentos conserven la capacidad para unirse al complemento C5 de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con un polimorfismo C5 y/o LTB4. Los fragmentos pueden incluir, por ejemplo, polipéptidos derivados de la secuencia de la proteína Coversin que tienen al menos 150 aminoácidos, al menos 125 aminoácidos, al menos 100 aminoácidos, al menos 75 aminoácidos, al menos 50 aminoácidos o al menos 25 aminoácidos, siempre que estos fragmentos conserven la capacidad de unirse para complementar C5 de tipo salvaje y/o C5 de sujetos con un polimorfismo C5 y/o LTB4.

[0087] Cualquier equivalente funcional o fragmento del mismo preferiblemente retiene el patrón de residuos de cisteína que se encuentra en Coversin. Por ejemplo, dicho equivalente funcional comprende seis residuos de cisteína que están separados entre sí a una distancia de 32 aminoácidos, 62 aminoácidos, 28 aminoácidos, 1 aminoácido y 21 aminoácidos según la disposición del terminal de amino al carboxilo de la secuencia de acuerdo con los aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2). Los ejemplos de fragmentos de la proteína Coversin se describen en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14. El ADN que codifica los fragmentos correspondientes se describen en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13.

[0088] Incluidos como tales fragmentos no son solo fragmentos de la proteína de O. moubata Coversin que se identifica explícitamente aquí en la Figura 2, pero también fragmentos de homólogos de esta proteína, como se describe anteriormente. Dichos fragmentos de homólogos normalmente tendrán más del 60 % de identidad con los fragmentos de la secuencia de la proteína Coversin de la Figura 2, aunque los fragmentos de homólogos más preferidos mostrarán grados de identidad superiores al 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 % o 99%, respectivamente con fragmentos de la secuencia de la proteína Coversin en la Figura 2. Los fragmentos mejorados pueden, por supuesto, diseñarse racionalmente mediante la mutación o fragmentación sistemática de la secuencia de tipo salvaje seguida de ensayos de actividad apropiados. Los fragmentos pueden exhibir una afinidad similar o mayor por C5, ya sea la variante de tipo salvaje o polimórfica de C5 o ambas, y/o LTB4 como Coversin. Estos fragmentos pueden tener un tamaño descrito anteriormente para los fragmentos de la proteína Coversin.

[0089] Un equivalente funcional utilizado según la invención puede ser una proteína de fusión obtenida, por ejemplo, mediante la clonación de un polinucleótido que codifica la proteína Coversin en el marco de las secuencias codificantes de una secuencia de proteína heteróloga. El término "heterólogo", cuando se usa aquí, pretende designar cualquier polipéptido que no sea la proteína Coversin o su equivalente funcional. Ejemplos de secuencias heterólogas, que pueden estar comprendidas en las proteínas de fusión solubles en el extremo N o C, son los siguientes: dominios extracelulares de proteínas unidas a membrana, regiones constantes de inmunoglobulina (región Fc), dominios de multimerización, dominios de proteínas extracelulares proteínas, secuencias señal, secuencias de exportación o secuencias que permiten la purificación por cromatografía de afinidad. Muchas de estas secuencias heterólogas están disponibles comercialmente en plásmidos de expresión, ya que estas secuencias se incluyen comúnmente en las proteínas de fusión para proporcionar propiedades adicionales sin afectar significativamente la actividad biológica específica de la proteína fusionada con ellas [29]. Ejemplos de tales propiedades adicionales son una vida media más duradera en los fluidos corporales, la localización extracelular o un procedimiento de purificación más fácil como lo permite una etiqueta como histidina, GST, FLAG, avidina o HA.

[0090] La proteína Coversin y los equivalentes funcionales de la misma pueden prepararse en forma recombinante mediante expresión en una célula huésped. Dichos métodos de expresión son bien conocidos por los expertos en la técnica y se describen en detalle en [30] y [31]. Las formas recombinantes de la proteína Coversin y los equivalentes funcionales de la misma están preferiblemente sin glicosilar.

[0091] Las proteínas y los fragmentos de la presente invención también se pueden preparar usando técnicas convencionales de química de proteínas. Por ejemplo, los fragmentos de proteínas pueden prepararse mediante síntesis química. Los métodos para la generación de proteínas de fusión son estándar en la técnica y serán conocidos por el lector experto. Por ejemplo, la biología molecular más general, la tecnología del ADN recombinante en microbiología y las técnicas inmunológicas se pueden encontrar en [30] o [32].

Modos de administración

[0092] La Coversin y sus equivalentes funcionales no requieren de un profesional médico para su administración, y estas moléculas se absorben rápidamente. Muchos anticuerpos recombinantes se absorben muy lentamente y, como resultado, deben infundirse durante períodos prolongados (p. ej., por vía intravenosa). Por lo tanto, la administración de tales moléculas también requiere un profesional médico. Así, además de tener la ventaja de ser más eficaz para inhibir la activación de las vías del complemento en sujetos con polimorfismo C5, Coversin también posee la ventaja de ser más fácil de administrar que otros agentes como anticuerpos como el eculizumab.

[0093] El agente se administra en una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de agente necesaria para tratar la enfermedad o trastorno mediado por el complemento, como se define en otra parte del presente documento. El término "cantidad profilácticamente eficaz" que se usa en el presente documento se refiere a la cantidad de agente necesaria para prevenir la enfermedad o el trastorno mediado por el complemento como se define en otro lugar del presente documento. Preferiblemente, la dosis del agente es suficiente para unir tanto C5 disponible como sea posible en el sujeto, más preferiblemente, todo el C5 disponible. Como alternativa, la dosis del agente puede ser suficiente para unir tanto LTB4 disponible como sea posible en el sujeto, más preferiblemente, todo el LTB4 disponible. En algunos aspectos, la dosis del agente es suficiente para unir la mayor cantidad posible de C5 y LTB4 disponibles, por ejemplo, todos los C5 y LTB4 disponibles. La dosis del agente suministrado puede ser al menos 1x o 1,5 veces o el doble de la dosis molar necesaria para unir todo el C5 y/o LTB4 disponible en el sujeto. La dosis del agente suministrado puede ser, por ejemplo, 1, 1,5, 2, 2,5 veces, 3 veces o 4 veces la dosis molar necesaria para unir todo el C5 y/o LTB4 disponible en el sujeto. Preferiblemente, la dosis es de 0,0001 mg/kg (masa del fármaco en comparación con la masa del paciente) a 20 mg/kg, preferiblemente de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, preferiblemente de 0,01 mg/kg a 2 mg/kg, preferiblemente 0,1 mg /kg a 1 mg/kg; alternativamente de 0,2 mg/kg a 0,8 mg/kg; alternativamente de 0,3 mg/kg a 0,7 mg/kg; alternativamente de 0,4 mg/kg a 0,6 mg/kg; por ejemplo 0,14 mg/kg o 0,57 mg/kg. La cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva puede definirse adicionalmente en términos de la inhibición del complemento terminal, por ejemplo, una cantidad que significa que la actividad del complemento terminal (TCA) se reduce en al menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 %, en comparación con la actividad terminal del complemento en ausencia de tratamiento. La dosis y la frecuencia se pueden ajustar para mantener la actividad del complemento terminal en el nivel deseado, que puede ser, por ejemplo, del 10 % o menos, por ejemplo del 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 % o menos en comparación con la actividad del complemento terminal en ausencia de tratamiento.

[0094] Cuando se administra una dosis, se refiere a una dosis del agente que es una proteína o un equivalente funcional de la misma. Pueden usarse dosis apropiadas para un agente que es una molécula de ácido nucleico para dar lugar a estos niveles.

[0095] La actividad del complemento terminal puede medirse mediante ensayos estándar conocidos en la técnica, por ejemplo, usando el ensayo de hemólisis Quidel CH50 y el ensayo lítico de glóbulos rojos de oveja.

[0096] La frecuencia con la que se necesita administrar la dosis dependerá de la vida media del agente involucrado. La proteína Coversin o un equivalente funcional de la misma, puede administrarse como infusión continua, en bolos o diariamente, dos veces al día, o cada dos, tres, cuatro días, cinco, seis, siete, 10, 15 o 20 días o más. Como se indicó en otra parte, una ventaja particular de la proteína Coversin y sus equivalentes funcionales es la relativa facilidad y rapidez con la que se puede administrar, y el hecho de que no se requieren profesionales médicos para la administración. Se pueden administrar dosis únicas o múltiples. Por ejemplo, se pueden administrar al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 dosis. Las dosis únicas son una realización. La dosificación exacta y la frecuencia de las dosis también pueden depender del estado del paciente en el momento de la administración. Los factores que pueden tenerse en cuenta al determinar la dosis incluyen la necesidad de tratamiento o profilaxis, la gravedad del estado de la enfermedad del paciente, el estado de salud general del paciente, la edad, el peso, el sexo, la dieta, el momento y la frecuencia de administración, combinaciones de fármacos, sensibilidades de reacción y la tolerancia o respuesta del paciente a la terapia. La cantidad precisa se puede determinar mediante experimentación de rutina, pero en última instancia puede depender del juicio del médico.

[0097] El régimen de dosificación también puede adoptar la forma de una "dosis de carga" inicial seguida de una o más "dosis de mantenimiento" subsiguientes. En general, la dosis de carga será mayor que la dosis de mantenimiento. La dosis de carga puede ser 2, 5, 10 o más veces mayor que la dosis de mantenimiento. La dosis de carga se puede administrar como una dosis única o como una o más dosis en un marco de tiempo particular. Por lo general, la dosis de carga será de 1, 2, 3, 4 o 5 dosis administradas en un solo período de 24 horas. La dosis de mantenimiento puede ser una dosis más baja que se repite a intervalos regulares. La dosis de mantenimiento se puede repetir a intervalos, como cada 3, 4, 6, 8, 12, 24 o 48 horas. El régimen preciso se puede determinar mediante experimentación de rutina, pero en última instancia puede depender del juicio del médico. La dosis de mantenimiento puede ser al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100% de la dosis de carga inicial, o hasta 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100% de la dosis de carga inicial.

[0099] En una forma de realización adicional, se usa la misma dosis a lo largo del curso del tratamiento (por ejemplo, diariamente).

[0100] La dosis de carga puede ser de 0,0001 mg/kg (masa del fármaco en comparación con la masa del paciente) a 20 mg/kg, y la dosis de mantenimiento puede estar entre 0,0001 mg/kg y 20 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga es de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, alternativamente la dosis de carga es de 0,01 mg/kg a 2 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,01 mg /kg a 2 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga es de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga es de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,05 mg/kg a 0,5 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga es de 0,2 mg/kg a 0,8 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,1 mg/kg a 0,4 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga es de 0,3 mg/kg a 0,7 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,1 mg/kg a 0,3 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga es de 0,4 mg/kg a 0,6 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,1 mg/kg a 0,2 mg/kg, por ejemplo, donde la dosis de carga es de 0,57 mg/kg y la dosis de mantenimiento es de 0,14 mg/kg.

[0101] La dosis de carga puede ser de 0,0001 mg/kg (masa del fármaco en comparación con la masa del paciente) a 20 mg/kg, y la dosis de mantenimiento puede estar entre 0,0001 mg/kg y 20 mg/kg; como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,01 mg/kg a 2 mg/kg; como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg; como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,1 mg/kg a 0,8 mg/kg; como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,1 mg/kg a 0,6 mg/kg; como alternativa, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,1 mg/kg a 0,4 mg/kg; alternativamente, la dosis de mantenimiento puede ser de 0,1 mg/kg a 0,2 mg/kg.

[0102] La dosis de carga puede ser de 0,0001 mg/kg (masa del fármaco en comparación con la masa del paciente) a 20 mg/kg, y la dosis de mantenimiento puede estar entre 0,0001 mg/kg y 20 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,001 mg/kg a 10 mg/kg, como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,01 mg/kg a 2 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,1 mg/kg a 1 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,2 mg/kg a 0,8 mg/kg; como alternativa, la dosis de carga puede ser de 0,3 mg/kg a 0,6 mg/kg; alternativamente, la dosis de carga puede ser de 0,4 mg/kg a 0,6 mg/kg. El agente generalmente se administrará junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. El término "vehículo farmacéuticamente aceptable", como se usa en este documento, incluye genes, polipéptidos, anticuerpos, liposomas, polisacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos y partículas virales inactivas o, de hecho, cualquier otro agente siempre que el portador no induce por sí mismo efectos de toxicidad ni provoca la producción de anticuerpos que sean perjudiciales para el individuo que recibe la composición farmacéutica. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden contener adicionalmente líquidos como agua, solución salina, glicerol, etanol o sustancias auxiliares como agentes humectantes o emulsionantes, sustancias reguladoras del pH y similares. El vehículo farmacéutico empleado variará por tanto dependiendo de la vía de administración. Los vehículos pueden permitir que las composiciones farmacéuticas se formulen en tabletas, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, lodos, suspensiones para ayudar a la ingesta por parte del paciente. Un análisis exhaustivo de los vehículos farmacéuticamente aceptables está disponible [33].

[0103] El agente se administra sistémicamente. El agente puede administrarse por vía parenteral (por ejemplo, mediante inyección, ya sea por vía subcutánea, intraperitoneal, intravenosa o intramuscular o administrado en el espacio intersticial de un tejido). Otros modos de administración incluyen administración oral y pulmonar, supositorios.

[0104] Preferiblemente, el agente se administra mediante inyección subcutánea. En algunas realizaciones, esto se realiza a través de una inyección subcutánea una vez al día, por ejemplo, a una dosis de carga inicial de entre 0,0001 mg/kg (masa del fármaco en comparación con la masa del paciente) a 20 mg/kg, seguida de dosis de mantenimiento una vez al día de entre 0,0001 mg/kg. kg a 20 mg/kg, u otras dosis descritas en otra parte del presente documento. Alternativamente, el agente puede administrarse mediante inyección subcutánea cada dos días.

[0105] En una forma de realización preferida, el agente se administra a través de una inyección subcutánea una vez al día a una dosis de carga inicial de 0,4 mg/kg-0,6 mg/kg (por ejemplo, 0,57 mg/kg) seguida de dosis de mantenimiento una vez al día de 0,1 mg/kg-0,2 mg/kg (por ejemplo, 0,14 mg/kg).

[0106] Preferiblemente, el curso del tratamiento continúa durante al menos 6 semanas, por ejemplo, al menos 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 semanas o al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 meses, o al menos 1, 2, 3 años. Preferiblemente, el curso del tratamiento continúa hasta que ya no se considera que el sujeto sufre EICH agudo, o hasta que el sujeto ya no requiere tratamiento. Por lo tanto, el curso del tratamiento puede ser la administración del agente (por ejemplo, diariamente) durante al menos 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 semanas o al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 meses, o al menos 1, 2, 3 años. La administración diaria puede continuarse durante al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 semanas. La frecuencia de administración puede modificarse después de al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 semanas, por ejemplo, a una vez cada dos días.

[0107] La dosis de mantenimiento (por ejemplo, una dosis de mantenimiento diaria única) puede permanecer constante durante el curso del tratamiento) o la dosis de mantenimiento (por ejemplo, una dosis de mantenimiento diaria) puede modificarse (por ejemplo, aumentar o disminuir) durante el curso del tratamiento. La dosis de mantenimiento se puede modificar para mantener la actividad del complemento terminal en un nivel deseado, por ejemplo, 10% o menos en comparación con el suero de dicho paciente en ausencia de tratamiento o en comparación con el suero de control normal. La o cada dosis de mantenimiento puede continuarse durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 semanas, por ejemplo, diariamente durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 semanas. La dosis de mantenimiento puede disminuirse a medida que mejoran los síntomas del sujeto. La cantidad de agente o la frecuencia con la que se administra el agente pueden disminuir a medida que mejoran los síntomas del sujeto.

[0108] Por lo tanto, puede haber una dosis de carga inicial, seguida de una dosis de mantenimiento inicial (por ejemplo, una dosis de mantenimiento inicial diaria) que puede ser una dosis de mantenimiento como se define anteriormente, y una o más dosis de mantenimiento adicionales (por ejemplo, una dosis de mantenimiento adicional diaria), por ejemplo, al menos 2, 3, 4, 5 dosis de mantenimiento adicionales.

[0109] La divulgación (no según la invención) comprende además un método para tratar la EICH aguda en un sujeto que comprende la administración sistémica de una dosis de carga inicial del agente como se define anteriormente, y luego la administración sistémica de dosis de mantenimiento (por ejemplo, dosis de mantenimiento diarias) del agente como se define anteriormente, en el que hay una dosis de mantenimiento inicial y una o más dosis de mantenimiento adicionales.

[0110] Por lo tanto, la invención comprende además un agente para usar en un método para tratar la EICH aguda en un sujeto como se define en las reivindicaciones, comprendiendo el método administrar sistémicamente una dosis de carga inicial del agente como se definió anteriormente, y luego administrar sistemáticamente dosis de mantenimiento (por ejemplo, dosis de mantenimiento diarias) del agente como se define anteriormente, en el que hay una dosis de mantenimiento inicial y una o más dosis de mantenimiento adicionales.

[0111] La una o más dosis de mantenimiento adicionales pueden determinarse analizando la actividad del complemento terminal en el sujeto (p. ej., en una muestra biológica del sujeto), y determinando la dosis de mantenimiento adicional para dicho sujeto en función del nivel de actividad terminal del complemento y/o probar los síntomas del sujeto y determinar la dosis de mantenimiento adicional para dicho sujeto sobre la base de los síntomas del sujeto. El método puede comprender opcionalmente además la administración de dicha dosis de mantenimiento adicional. Dicha dosis adicional puede calcularse para estar en un nivel que mantenga la actividad del complemento terminal en el nivel deseado.

[0112] Cuando se toma una muestra biológica, esta puede ser sangre, por ejemplo, una muestra de sangre entera o de suero. El método opcionalmente comprende además el paso de tomar la muestra, y opcionalmente comprende además el paso de determinar el TCA de la muestra.

[0113] La una o más dosis de mantenimiento adicionales pueden determinarse analizando la actividad del complemento terminal en el sujeto (p. ej., en una muestra biológica del sujeto), y determinando la dosis de mantenimiento adicional para dicho sujeto sobre la base del nivel de terminal actividad del complemento y/o probar los síntomas del sujeto y determinar la dosis de mantenimiento adicional para dicho sujeto sobre la base de los síntomas del sujeto. El método puede comprender opcionalmente además la administración de dicha dosis de mantenimiento adicional. Dicha dosis adicional puede calcularse para estar en un nivel que mantenga la actividad del complemento terminal en el nivel deseado.

[0114] En ciertos aspectos, el nivel de actividad del complemento deseado es del 10% o menos en comparación con el suero de dicho sujeto en ausencia de tratamiento o en comparación con el suero de control normal.

[0115] En ciertos aspectos, si el TCA es mayor que el nivel deseado, la dosis de mantenimiento se aumenta y, opcionalmente, si el TCA es inferior al 5, 4, 3, 2, 1%, la dosis se mantiene o se reduce.

[0116] En ciertos aspectos, si los síntomas empeoran, la dosis de mantenimiento se aumenta y, opcionalmente, si los síntomas mejoran, la dosis se mantiene o se reduce.

[0117] En algunas realizaciones, el sujeto se somete a prueba en el plazo de un mes desde el inicio del tratamiento, en el plazo de dos semanas desde el inicio del tratamiento, en el plazo de una semana desde el inicio del tratamiento. En otras formas de realización, el sujeto se prueba una vez al día o al menos una vez al día, una vez a la semana o al menos una vez a la semana, una vez cada dos semanas o al menos una vez cada dos semanas, una vez al mes o una vez cada dos meses.

[0118] Preferiblemente, la dosis de carga es de 0,57 mg/kg de proteína o equivalente funcional y la dosis de mantenimiento es de al menos 0,15 mg/kg (por ejemplo, al menos 0,2 mg/kg, 0,15-0,6, 0,2-0,5 o 0,25-0,45 mg/kg) o es de hasta 0,13 mg/kg (por ejemplo, hasta 0,1 mg/kg, 0,05-0,13, 0,075-0,1 mg/kg) y opcionalmente (i) esa dosis de mantenimiento se continúa durante al menos 2, 3, 4, 5, 6 semanas y/o (ii) el tratamiento se continúa durante al menos 6 semanas y/o (iii) el tratamiento se continúa diariamente durante al menos 3, 4, 5, 6 semanas.

[0119] Preferiblemente, la dosis de carga es de 0,4-0,6 mg/kg de proteína o equivalente funcional y la dosis de mantenimiento es de 0,1-0,2 mg/kg, por ejemplo, 0,14 mg/kg, y (i) esa dosis de mantenimiento se continúa durante al menos 2, 3, 4, 5, 6 semanas y/o (ii) el tratamiento se continúa durante al menos 6 semanas y/o (iii) el tratamiento se continúa diariamente durante al menos 3, 4, 5, 6 semanas.

[0120] La presente invención se refiere a agentes para administración sistémica. Esto significa que el agente está presente en el sistema circulatorio, por lo que todo el cuerpo se ve afectado. Esto contrasta con la administración tópica donde el efecto es generalmente local. La presencia sistémica del agente puede determinarse funcionalmente, por ejemplo, en base a TCA en el suero del sujeto, o directamente (por ejemplo, mediante ELISA o espectrometría de masas).

[0121] El agente puede administrarse solo o como parte de un régimen de tratamiento que también implica la administración de otros fármacos utilizados actualmente en el tratamiento o profilaxis de pacientes con EICH aguda, como ciclosporina A, metotrexato, tacrolimus y glucocorticoides como prednisona. El agente, solo o con uno o más fármacos utilizados actualmente en el tratamiento o la profilaxis de la EICH aguda, puede administrarse al menos una vez antes del trasplante que da lugar a la EICH aguda (p. ej., al menos un día, una semana o dos semanas antes el trasplante), con el trasplante o después del trasplante (por ejemplo, la administración inicial del agente es hasta un día o una semana o 2 semanas, o un mes o 2 meses después del trasplante, o hasta un día o una semana o 2 semanas, o un mes o 2 meses después del diagnóstico de EICH aguda)

[0122] El agente puede administrarse simultáneamente, secuencialmente o por separado con los otros fármacos. Por ejemplo, el agente puede administrarse antes o después de la administración de los otros fármacos.

[0123] A continuación se describirán con más detalle a modo de ejemplo diversos aspectos y formas de realización de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS:

[0124]

Figura 1: Diagrama esquemático de las vías clásica y alternativa de activación del complemento. Componentes enzimáticos, gris oscuro. Anafilatoxinas encerradas en destellos de luz.

Figura 2: Secuencia primaria de Coversin. Secuencia de señal subrayada. Residuos de cisteína en negrita. Número de nucleótidos y aminoácidos indicado a la derecha.

Figura 3: Efecto de añadir suero del paciente BJ y control normal (NC) con Coversin y eculizumab en varias concentraciones

Figura 4: Actividad del complemento terminal en suero mostrada del 13 de junio al 12 de julio.

Figura 5: LDH en el paciente a lo largo de varios tratamientos.

EJEMPLOS

Ejemplo 1 - Informe de caso

[0125] El paciente era un niño de 4 años que presentó por primera vez en 2013 dolor abdominal intermitente y sangrado rectal y posteriormente se le diagnosticó una enfermedad granulomatosa crónica. Se sometió a reemplazo de médula ósea con células madre hematopoyéticas de un donante compatible en octubre de 2013 y recibió ciclosporina y tacrolimus posoperativamente. Su curso se complicó con hemorragia gastrointestinal (GI) baja y se hizo un diagnóstico inicial de enfermedad de injerto contra huésped (EICH). Posteriormente se desarrolló una trombocitopenia grave, aunque la actividad de ADAMTS 13 se mantuvo normal y no se detectaron anticuerpos. La función renal se mantuvo normal.

[0126] El paciente fue tratado inicialmente con rituximab e infliximab con poca mejoría. Eculizumab se inició en abril de 2014, pero no hubo mejoría en los niveles de plaquetas y siguió necesitando una infusión diaria de 2 unidades adultas de plaquetas frescas. La hemorragia digestiva baja continuó de forma intermitente y la endoscopia digestiva alta el 14 de mayo reveló gastritis y duodenitis en curso con adelgazamiento y necrosis en parches de la mucosa. La endoscopia gastrointestinal inferior hasta el ángulo esplénico mostró heces parecidas al alquitrán, pero no fue posible identificar un sitio de sangrado definitivo. Se consideró que era demasiado peligroso seguir adelante y se dio por terminado el procedimiento. La histología de las biopsias gastrointestinales superiores confirmó los resultados clínicos y se consideró compatible con la enfermedad de injerto contra huésped.

Evolución clínica

[0127] A finales de mayo de 2014, después de 2 meses de infusiones semanales de una dosis completa de eculizumab para adultos sin mejoría clínica, las pruebas genéticas revelaron que el paciente tenía el polimorfismo sArg885His. El 29 de mayo de 2014, se analizó una muestra de suero en el laboratorio de complemento Volution en la Unidad de Investigación de Hemostasia (HRU) en el University College de Londres (UCL) utilizando el ensayo de hemólisis del complemento Quidel CH50 y añadiendo dosis ascendentes de Coversin y eculizumab. Se usó suero combinado de sujetos normales como control. Los resultados de esto se muestran en la Figura 3.

[0128] Esto demostró que Coversin en c. 15 pg/ml, la concentración terapéutica conocida, eliminó por completo la actividad del complemento terminal (TCA) tanto en el suero de BJ como en el suero de control normal. Eculizumab 50 pg/mL eliminó el TCA en el suero de control normal, pero no pudo inhibir el TCA más allá de c. 80% en cualquier concentración probada. Durante el tratamiento con eculizumab hubo un cuadro clínico continuo que incluía trombocitopenia, sangrado rectal y deshidrogenasa láctica sérica (LDH) que fluctuó entre c.900 y 2000 UI/L.

[0129] El médico responsable de Coversin hizo una solicitud para tratar al paciente y tras conversaciones con los padres del paciente, se proporcionó un suministro limitado de Coversin para inyección subcutánea y se interrumpió el eculizumab.

[0130] La cantidad de Coversin de grado clínico disponible en ese momento era extremadamente limitada y consistía en el residuo del ensayo clínico Pía para Coversin. Después de la discusión, a pesar de la disponibilidad limitada de Coversin, se decidió comenzar el tratamiento por motivos empíricos con una dosis de ablación de 0,57 mg/kg y, posteriormente, una dosis diaria de mantenimiento del 25 % de esa cantidad. El tratamiento comenzó el 1 de junio de 20 l4 y la respuesta clínica inicial pareció ser alentadora con la estabilización de los signos vitales y la reducción del sangrado rectal. Después de 7 dosis diarias de mantenimiento de Coversin, se decidió espaciar las dosis diarias de mantenimiento a días alternos para conservar el suministro de Coversin el mayor tiempo posible, aunque, al inicio del tratamiento mientras el ensayo estaba en desarrollo, CH50 exacto los ensayos no estaban disponibles. El 4 de julio, 34 días después del inicio del tratamiento con Coversin, estaba claro que, aunque había una mejoría clínica en comparación con el período anterior a Coversin, el control de TCA no estaba completo y esto se confirmó posteriormente mediante análisis retrospectivos de CH50. Se tomó la decisión de aumentar la dosis de Coversin. Se administró una dosis de ablación adicional de 0,57 mg/kg el 5 de julio y luego se reanudaron dosis diarias de mantenimiento del 25 % hasta que Coversin se agotó 6 días después.

[0131] La Figura 4 muestra el efecto de Coversin sobre la actividad de CH50 desde el momento en que se dispuso de datos fiables y la Figura 5 muestra el efecto tanto de Coversin como de eculizumab sobre la LDH desde el 1 de abril hasta el 11 de julio. Tras la última dosis de Coversin el 11 de julio, el estado clínico del paciente se deterioró rápidamente y falleció el 4 de agosto, 24 días después.

[0132] Los resultados de LDH (Figura 5) entre el 1 de abril y el 21 de julio indican que durante gran parte del período en que el paciente recibió eculizumab, la actividad terminal del complemento estuvo descontrolada y que se estaba produciendo la lisis de glóbulos rojos y plaquetas. Tras la introducción de Coversin el 1 de junio, la LDH cayó de c.1800 a 789 UI/L. Después de la reducción de la dosis repetida de una dosis diaria a días alternos, la LDH permaneció alrededor de 1000 UI/L pero con menos variabilidad que durante los dos meses anteriores de tratamiento con eculizumab. Una vez que se restableció el tratamiento diario con Coversin el 5 de julio, la LDH volvió a caer a 688 UI/L, pero volvió a aumentar tras la suspensión de Coversin 6 días después.

[0133] Los datos de CH50 indican que la dosificación diaria con Coversin al 25 % de la dosis de ablación controlaba el TCA.

[0134] Durante los 58 días que el paciente recibió Coversin no se informaron eventos adversos atribuibles al fármaco ni reacciones en el lugar de la inyección. Se detectaron títulos bajos de anticuerpos anti-Coversin (IgG) después de 14 días de tratamiento, pero no fueron neutralizantes.

Discusión

[0135] Este caso muestra que las personas de origen no japonés/chino también pueden verse afectadas por los polimorfismos descritos previamente solo en estos grupos étnicos por Nishimura, J et al., New Engl J. Med., 30;7: 632 639 (2014).

[0136] La LDH sérica elevada es un indicador temprano de TMA y malignidad oculta y es un buen indicador de respuesta a la terapia [34]. En este caso, aunque nunca volvió por completo a los niveles normales, hubo un claro indicio de que durante dos períodos en los que se administró una dosis adecuada de Coversin disminuyó, lo que sugiere que la destrucción de glóbulos rojos y plaquetas y el daño de la mucosa estaban disminuyendo. Por el contrario, durante los dos meses de tratamiento con eculizumab, la LDH se mantuvo generalmente por encima de 1.000 IH/L y extremadamente variable.

[0137] Coversin completó un ensayo clínico de fase I de dosis única en 2014 en voluntarios normales mediante inyección subcutánea. A una dosis de 0,57 mg/kg, el fármaco provocó un bloqueo total de la actividad hemolítica del complemento en todos los sujetos 12 horas después de la dosis, volviendo a una actividad de ~ 50 % a las 48 horas.

Métodos: Inhibición in vitro de la actividad de C5

[0138] El inmunoensayo enzimático Quidel Microvue CH50 Eq (cat #A018) es para la medición in vitro de la actividad total de la vía clásica en suero humano. http://www.quidel.com/sites/quidel.com/files/product/documents/a018_microvue_ch50_eq_english_1.pdf

[0139] El kit proporciona una medida directa de la formación del complejo del complemento terminal (TCC) en condiciones estándar. La medición de CH50 con el kit consta de 3 pasos:

1. Activación de la vía clásica del complemento en suero sin diluir que da como resultado la formación de TCC.

2. Dilución del suero y adición a pocillos de microensayo recubiertos con un anticuerpo que captura TCC. 3. Cuantificación del TCC capturado con un anticuerpo conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) anti-TCC.

[0140] La intensidad del color al agregar el sustrato es proporcional a la concentración de TCC presente en cada reacción. Utilizando la curva estándar del kit (determinada durante cada ensayo), los resultados del ensayo se expresan en unidades equivalentes de CH50 por mililitro (CH50 U Eq/ml).

[0141] El rango lineal para el kit es 30-310 CH50 U Eq/ml.

[0142] Según los fabricantes, el límite para la normalidad determinado a partir de 234 muestras humanas individuales es de 70 CH50 U Eq/ml.

Reactivos y muestras

[0143] Preparación de la muestra: el suero se preparó recogiendo sangre en tubos de vidrio simple o SST Vacutainer (o equivalente) y permitiéndole coagular durante 1 hora, antes de la centrifugación a 1500 g durante 10 minutos. El suero se separó inmediatamente (evitando la contaminación con células sanguíneas) y se almacenó en criotubos con tapón de rosca (alícuotas de aproximadamente 0,5 ml) a -70°C.

[0144] Coversin: solución congelada de 10,9 mg/ml a -70 °C. Diluya 10uL en 90uL de control normal o suero del paciente para obtener una concentración final de 1,09 mg/ml. Diluir 10uL en 90uL de suero autólogo para dar una concentración final de 109ug/ml. Diluya dos veces en suero autólogo para lograr un rango de concentración final de: 0,4 - 54,5 ug/ml.

[0145] Eculizumab: solución congelada de 10 mg/ml. Diluir 10uL en 90uL de control normal o suero del paciente para obtener una concentración final de 1mg/ml. Diluir 10uL en 90uL de suero autólogo para dar una concentración final de 100ug/ml. Diluya dos veces en suero autólogo para lograr un rango de concentración final de: 0,4 - 50 ug/ml.

[0146] Tampón: solución salina tamponada con fosfato (tampón de fosfato 0,01 M, cloruro de potasio 0,0027 M, cloruro de sodio 0,137 M, pH 7,4).

[0147] Se añaden Coversin, eculizumab o tampón (control) al suero de acuerdo con el procedimiento anterior para lograr un rango de concentraciones finales. A continuación, se analiza la actividad equivalente de CH50 utilizando el kit Quidel CH50, utilizando pocillos duplicados.

[0148] Los valores de CH50 se calculan a partir de la curva de calibración proporcionada con el kit y se representan gráficamente como valores de CH50 brutos frente a la concentración de inhibidor de C5. Los resultados de CH50 se calculan en cada concentración de inhibidor de C5 como un porcentaje de la concentración de CH50 del control de tampón relevante y se representan frente a la concentración de inhibidor.

[0149] Repetir el experimento en días separados para obtener 3 mediciones en cada paciente y en un solo control normal. Esto proporciona una estimación de la variabilidad entre experimentos.

[0150] Repetir el experimento en días separados en experimentos individuales en 6 controles normales diferentes. Esto proporciona una estimación de la capacidad de respuesta entre sujetos (y evita el riesgo de utilizar un solo sujeto que puede tener una mutación o polimorfismo C5 desconocido).

[0151] Se añadió la dosis más alta de cada fármaco al suero completo y luego se realizaron diluciones en serie de dos veces en el suero completo. Se usó una réplica para cada dosis de fármaco.

[0152] Después de la dilución en serie, el suero se activó y analizó de acuerdo con las instrucciones del kit Quidel CH50.

[0153] CH50 U Eq/ml se calcularon en comparación con los estándares del kit y se representaron frente a la concentración de fármaco para cada una de las tres muestras de suero y dos tratamientos farmacológicos. También se representaron gráficamente como un porcentaje del valor de CH50 del control relevante solo de tampón.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un agente para usar en el tratamiento o la prevención de la EICH aguda en un sujeto, en el que el sujeto no ha sido tratado con eculizumab, en el que el agente se administra sistémicamente y en el que el agente es:

(i) una proteína que comprende los aminoácidos 19 a 168 de la secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO: 2 o un equivalente funcional de esta proteína; o

donde el equivalente funcional es:

(a) un homólogo de una proteína como se define en (i) que comprende o consiste en una secuencia con una identidad de más del 80% a la secuencia de aminoácidos 19 a 168 o aminoácidos 1 a 168 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2; o

2. El agente para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el sujeto no tiene o no ha sido probado para un polimorfismo C5 del complemento, en el que el polimorfismo C5 es Arg885Cys o Arg885His.

3. El agente para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el sujeto no tiene o no ha sido probado para resistencia a eculizumab.

4. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el sujeto no ha sido seleccionado para el tratamiento con el agente sobre la base de la disminución de la eficacia en el sujeto de un agente diferente, como el anticuerpo anti C5.

5. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el sujeto tiene un síntoma de EICH en la etapa , +, ++ o +++ y/o el sujeto tiene una clasificación clínica de I, II, III o IV.

6. El agente para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el sujeto tiene daño tisular, por ejemplo, daño tisular interno (tal como intestinal) que surge de la EICH.

7. El agente para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 , en el que el sujeto tiene EICH agudo después de un trasplante de células hematopoyéticas (HCT) alogénico y/o no ha recibido profilaxis de EICH.

8. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el sujeto tiene al menos 5 años, opcionalmente en el que el sujeto es un adulto.

9. El agente para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el sujeto ha recibido células madre HLA no idénticas.

10. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el sujeto tiene EICH aguda después de un trasplante de órganos sólidos o después de una transfusión de productos sanguíneos no irradiados.

11. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el sujeto tiene EICH aguda después de un HCT autólogo o singénico.

12. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el sujeto tiene EICH hiperaguda.

13. El agente para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el tratamiento continúa

i. durante al menos 6 semanas, y/o

ii. hasta que ya no se considere que el sujeto sufre de EICH aguda, y/o

iii. hasta que el sujeto ya no requiera tratamiento.