ES2896360T3

ES2896360T3 - Extracción de biopolímeros

Info

Publication number: ES2896360T3
Application number: ES15734267T
Authority: ES
Inventors: Yuemei Lin; Salah Al-Zuhairy; Mario Pronk; Loosdrecht Marinus Cornelis Van
Original assignee: HaskoningDHV Nederland BV
Current assignee: HaskoningDHV Nederland BV
Priority date: 2014-06-12
Filing date: 2015-06-11
Publication date: 2022-02-24
Anticipated expiration: 2035-06-11
Also published as: PT3154912T; NL2012987B1; BR112016029066A2; US11155648B2; DK3154912T3; WO2015190927A1; US20170088637A1; PL3154912T3; BR112016029066B1; EP3154912B1; EP3154912A1; BR112016029066A8

Abstract

Procedimiento de extracción de biopolímeros a partir de agregados densos formados por organismos microbianos, que comprende las etapas de (i) proporcionar un biopolímero aniónico en el lodo, (iic) aumentar el pH hasta 8,0-14,0 mediante la adición de al menos 1-20 % v/v de al menos uno de los Cl2, OCl- y H2O2, a una temperatura y durante un tiempo adecuados, y (iii) la extracción del biopolímero.

Description

DESCRIPCIÓN

Extracción de biopolímeros

Campo de la invención

La presente invención se sitúa en el campo de la extracción de un biopolímero a partir de un lodo granular, de un biopolímero obtenido por dicho procedimiento y del uso de dicho procedimiento.

Antecedentes de la invención

En un reactor del estado de la técnica se puede alimentar un cultivo de bacterias (nori-axénicas) con fuentes de carbono adecuadas, en un entorno acuoso. En ella se forman densos agregados de microorganismos, normalmente dentro o incrustados en una matriz extracelular. Puede tratarse de gránulos, de entidades esféricas con una viscosidad superior a la del agua, de glóbulos, de una biopelícula, etc.

En la actualidad, los lodos producidos, por ejemplo, en los procesos de tratamiento de aguas residuales, incluidos los lodos granulares, se consideran un producto de desecho que no tiene ningún otro uso. Además, los costes de eliminación de residuos son elevados.

Sorprendentemente, se ha encontrado que las sustancias poliméricas extracelulares, en particular los polisacáridos lineales, que se obtienen a partir de los lodos granulares pueden producirse en grandes cantidades.

Los gránulos que componen los lodos granulares son agregados (densos) de células microbianas autoinmovilizadas a través de sustancias poliméricas extracelulares en una forma esférica sin ninguna participación de material portador. Un rasgo característico de los gránulos de los lodos granulares es que no se coagulan significativamente durante la sedimentación (es decir, en un reactor con cizallamiento hidrodinámico reducido). Las sustancias poliméricas extracelulares constituyen una proporción importante de la masa total de los gránulos.

Las sustancias poliméricas extracelulares comprenden compuestos de alto peso molecular (típicamente >5 kDa) secretados por los microorganismos en su entorno. Las sustancias poliméricas extracelulares están compuestas principalmente por polisacáridos y proteínas, y pueden incluir otras macromoléculas como el ADN, los lípidos y las sustancias húmicas.

Ventajosamente, los gránulos de lodo granular pueden ser fácilmente retirados de un reactor por, por ejemplo, separación física, sedimentación, centrifugación, separación ciclónica, decantación, filtración o tamizado para proporcionar sustancias poliméricas extracelulares en un pequeño volumen. En comparación con la separación del material de una fase líquida del reactor, esto significa que no se requieren enormes volúmenes de disolventes orgánicos o de otro tipo (para la extracción), ni grandes cantidades de energía (para evaporar el líquido) para el aislamiento de las sustancias poliméricas extracelulares.

Las sustancias poliméricas extracelulares obtenidas a partir de lodos granulares (preferentemente obtenidas a partir de lodos granulares) no requieren una purificación o tratamiento adicional para ser utilizadas en algunas aplicaciones, por lo que pueden aplicarse directamente. Cuando las sustancias poliméricas extracelulares se obtienen a partir de lodos granulares, las sustancias poliméricas extracelulares se aíslan preferentemente de las bacterias (células) y/o de otras sustancias poliméricas no extracelulares.

Sin embargo, para diversas aplicaciones, las sustancias poliméricas extracelulares, en este documento también denominadas "biopolímeros", no pueden utilizarse directamente, por ejemplo, debido a una pureza insuficiente, a una coloración típica (marrón) de las sustancias poliméricas extracelulares, etc.

Con el término "procedimiento microbiano" se entiende en la presente memoria una conversión microbiológica. Algunos documentos describen el aislamiento de alginato a partir de lodo granular aeróbico.

Li et al., en "Characterization of alginate-like exopolysaccharides isolated from aerobic granular sludge in pilot plant", Water Research, Elsevier, Amsterdam, NL, Vol. 44, No. 11 (Junio 1 2010), pp. 3355-3364) describe alginatos específicos en forma relativamente cruda. Estos alginatos no suelen ser adecuados para su uso posterior, ya que están al menos parcialmente coloreados. En el proceso se puede utilizar carbón activo, pero es principalmente para eliminar las impurezas de la solución. También el contenido en lípidos de los alginatos es bastante bajo (< 1 % en peso).

El documento US 3,856,625 A describe un polisacárido de tipo alginato que se obtiene por el cultivo aeróbico de una bacteria de la especie Azotobacter vinelandii en un medio nutritivo acuoso que contiene fuentes de carbono, molibdeno, hierro, magnesio, potasio, sodio, sulfato, calcio y fosfato. La fuente de carbono comprende al menos un monosacárido o disacárido. Contrariamente a las condiciones normales de cultivo de esta bacteria, para una buena producción de polisacáridos, la concentración de fosfato en el medio nutritivo es de 0,1-0,8 milimolar, y el pH del medio se mantiene dentro del rango de 7,0 a 8,2.

La presente invención se refiere a un procedimiento de extracción de un biopolímero a partir de un lodo granular, a un biopolímero obtenido por dicho procedimiento, y al uso de dicho procedimiento, que supera uno o más de los inconvenientes anteriores, sin poner en peligro su funcionalidad y sus ventajas.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere en un primer aspecto a un procedimiento según la reivindicación 1. Se presenta un procedimiento sencillo y eficaz para la extracción de biopolímeros de agregados densos formados por organismos microbianos. El procedimiento se refiere específicamente a la extracción de un biopolímero aniónico. En una etapa del procedimiento se aumenta el pH mediante la adición de al menos 1-20 % v/v de al menos uno de los Ch, OCl- y H2O2. La adición de Ch, OCl- o H2O2 se ha encontrado que provoca la decoloración del biopolímero. Esta etapa puede realizarse a una temperatura elevada, o a una temperatura (cercana) al medio ambiente. El presente procedimiento se lleva a cabo normalmente en un reactor. La extracción se lleva a cabo preferentemente bajo mezcla, por ejemplo, mediante agitación. Después de aumentar el pH, el biopolímero puede extraerse mediante una o más etapas posteriores.

Los biopolímeros obtenidos se asemejan a los del estado de la técnica, pero son diferentes en ciertos aspectos, como los caracterizados en las reivindicaciones; es decir, las características químicas y físicas son diferentes, como que el contenido de lípidos es mucho mayor (2-5 % en peso). Las diferentes características dan lugar a que las aplicaciones de los presentes biopolímeros sean ahora posibles, o igualmente imposibles, en comparación con las de la técnica anterior. Por lo tanto, aparte de la decoloración obtenida, que es mucho mejor que la decoloración sólo parcial (por lo tanto, no efectiva) de, por ejemplo, la propuesta por Lin et al., los presentes biopolímeros son diferentes en varios aspectos técnicos.

En la presente solicitud, las cantidades se calculan sobre un volumen total, o peso total, de los agregados densos, a menos que se indique en contra.

Se hace notar que la numeración de las diversas etapas se enumera para una mejor comprensión de una secuencia opcional de las etapas. Algunas de las etapas pueden realizarse en un orden diferente, y/o en una etapa posterior o anterior.

De este modo, la presente invención proporciona una solución a uno o más de los problemas mencionados anteriormente.

Las ventajas de la presente invención se detallan en la descripción presente.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere en un primer aspecto a un procedimiento según la reivindicación 1.

El presente procedimiento puede optimizarse aún más eliminando en una etapa inicial las partículas más grandes, por ejemplo, mediante el tamizado. Preferentemente, se eliminan las partículas con un diámetro superior a 500|jm, más preferentemente las partículas superiores a 300pm, como por ejemplo superiores a 200pm. Se ha comprobado que el presente procedimiento es más eficaz, consume menos energía y se obtiene un mayor rendimiento del biopolímero.

El presente procedimiento puede optimizarse aún más eliminando parte del agua presente, aumentando así una cantidad de agregados. En un ejemplo, después de proporcionar el lodo, se elimina el agua hasta un contenido de 1-40% p/v del lodo húmedo, más preferentemente 5-38% p/v, aún más preferentemente 10-35% p/v, aún más preferentemente 20-32% p/v, tal como 25-30% p/v. Para una mejor comprensión también se puede utilizar una fracción de contenido sólido. En este último caso, los contenidos sólidos suelen estar en el intervalo de 0,1-30 % en peso, preferentemente 1-10 % en peso, más preferentemente 4-10 % en peso, como 5-8 % en peso. El presente procedimiento resulta más eficaz si se elimina parte del agua en una fase inicial.

En un ejemplo, el presente procedimiento comprende la etapa de (iiia) reducir el pH, preferentemente hasta la formación de gel, como por ejemplo a un pH de 2-4, mediante la adición de un ácido, como HCl. El presente biopolímero se obtiene ahora en forma ácida. Así, el biopolímero puede recogerse con facilidad.

En un ejemplo del presente procedimiento, la etapa consiste en, después de reducir el pH (iiib), eliminar el lodo mediante una o más de las siguientes técnicas: separación física, sedimentación, centrifugación, separación ciclónica, decantación, filtración, tamizado y flotación, en condiciones adecuadas. Se han obtenido resultados especialmente buenos centrifugando los lodos.

En un ejemplo del presente procedimiento, el biopolímero es lodo granular aeróbico bacteriano o lodo granular anammox (oxidación anaerobia del ión amonio), y se selecciona de la forma de exopolisacárido, que comprende preferentemente residuos de ácido mannurónico y de ácido gulurónico, polímeros en bloque que comprenden residuos de ácido urónico, alginato, lípidos y combinaciones de los mismos, o cuando el biopolímero es un biopolímero de algas. Se ha comprobado que los lodos granulares bacterianos o los lodos granulares anarnrnox producen grandes cantidades de biopolímeros, de buena calidad. Por naturaleza, los biopolímeros producidos como tales varían en sus características, por ejemplo, composición, peso molecular, etc.

En un ejemplo del presente procedimiento, el lodo granular ha sido producido sustancialmente por bacterias pertenecientes al orden Pseudomonadaceae, tales como pseudomonas y/o bacterias Aceto-bacter (lodo granular aeróbico); o, por bacterias pertenecientes al orden Plancto-mycetales (lodo granular anarnrnox), tales como Brocadia anammoxidans, Kuenenia stuttgartiensis o Brocadia fulgida; o, combinaciones de las mismas.

En un ejemplo del presente procedimiento, la etapa (iic) comprende además la adición de una o más de una sal que comprende una base, tal como bicarbonato, hidróxido, y blanqueador grueso, preferentemente una sal monovalente del mismo, tal como una sal de Na y una sal de K, un oxidante, tal como ozono, y peróxido. De este modo, se puede optimizar aún más la calidad, la homogeneidad y el rendimiento del biopolímero.

En un ejemplo del presente procedimiento, después de la etapa (iic)

(a) se aumenta la temperatura hasta 50-100 °C, por ejemplo hasta 80-85 °C, durante un período de 10-60 min, por ejemplo 20-30 min, preferentemente con agitación, o

(b) la temperatura se mantiene entre 10 y 30 °C, por ejemplo entre 15 y 20 °C, durante un período de 60 a 2880 min, por ejemplo entre 120 y 1440 min, preferentemente con agitación. Por lo tanto, existen al menos dos variantes, una con una temperatura relativamente más alta y un tiempo de procesamiento relativamente más corto, y otra con una temperatura relativamente más baja y un tiempo de procesamiento relativamente más largo. Teniendo en cuenta el consumo de energía, se considera preferente esta última variante.

En un ejemplo del presente procedimiento, después de la etapa (iic) se centrifuga una suspensión del lodo, por ejemplo a 2000-6000 rpm, durante 10-45 minutos, y se recoge un sobrenadante para su posterior procesamiento. En un ejemplo del presente procedimiento, después de la etapa (iiia) (iiib) el gel ácido se centrifuga, por ejemplo a 2000-6000 rpm, durante 10-45 minutos, y se recoge un sobrenadante para su posterior procesamiento.

En un ejemplo del presente procedimiento, el biopolímero extraído se trata adicionalmente, por ejemplo, por precipitación, por ejemplo, por adición de un alcohol, por desalinización, por ósmosis, por ósmosis inversa, por formación de sal, por ejemplo, sal de Na, por neutralización, por adición de una base, por secado, por almacenamiento y por congelación. Con ello se obtiene un producto que puede utilizarse en una aplicación posterior, que puede comercializarse y que puede almacenarse.

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso del presente procedimiento para decolorar biopolímeros obtenidos a partir de lodos granulares aerobios o de algas. Se ha comprobado que, en particular, el presente procedimiento es muy adecuado en este sentido.

La invención se detalla adicionalmente mediante las figuras y los ejemplos que se acompañan, que son de carácter ejemplar y explicativo y no limitan el ámbito de la invención. Para el experto en la materia puede resultar evidente que pueden concebirse muchas variantes, obvias o no, que entren en el alcance de protección, definido por las presentes reivindicaciones.

Sumario de las figuras

Las figuras (la-c) muestran el efecto de la velocidad de cizallamiento sobre la viscosidad del ALE y del alginato comercial.

Descripción detallada de las figuras

Las figuras se detallan más adelante en la descripción de los experimentos.

Ejemplos/experimentos

La invención, aunque se describe en un contexto explicativo detallado, podrá entenderse mejor en conjunción con los ejemplos y figuras que se acompañan.

A continuación se dan ejemplos de un procedimiento de extracción de un biopolímero específico (alginato microbiano; ALE). Téngase en cuenta que varias etapas son opcionales.

Extracción en caliente de ALE de lodos granulares

1) Tamizar los lodos granulares para recoger los gránulos de más de 200pm de diámetro, y luego lavarlos con agua corriente.

2) Retirar el exceso de agua con papel de seda colocado debajo del colador.

3) Antes de iniciar la extracción, tomar ± 1 gramo de lodo para la determinación del peso en seco. Medir el vaso vacío, el vaso lleno y poner en el horno (105° C) para secar. Pesar de nuevo si ya está seco.

4) Preparar una suspensión de gránulos en agua corriente con un contenido de sólidos totales SST de aproximadamente el 3%. Esto corresponde a 30-35 gramos de peso húmedo de lodo en un volumen total de 100 mL.

Antes de añadir el agua, precaliéntelo para ahorrar tiempo en la etapa 5.

5) Añadir una solución blanqueadora espesa hasta alcanzar el 10% (v/v).

6) Mezclar bien y colocar la suspensión en un baño de agua en un agitador de placa caliente ajustado a 80°C y 400 rpm, durante 30 minutos. Añadir papel de aluminio en la parte superior para evitar la evaporación.

7) Recoger la suspensión en tubos de 50 mL y centrifugar el licor a 4500 rpm durante 20 min. Recoger el sobrenadante en un vaso de cristal y desechar el pellet.

8) Ajustar el pH del sobrenadante a 2,5 añadiendo HCl 4 M en un agitador magnético. Recoger el gel ácido en tubos de 50 mL.

9) Centrifugar el gel ácido a 4500 rpm durante 10 minutos y recoger el pellet.

10) El gel ácido puede almacenarse a 4°C o congelarse.

El gel puede prepararse aún más según el propósito/cliente, por ejemplo, de las siguientes maneras:

(a) Preparar el Na-ALE.

(b) Para precipitar el Na-ALE, y

(c) Preparar Na-ALE sin sal/con poca sal por desalinización.

(a) Preparar el Na-ALE:

Añadir NaOH 0,5 M al gel ácido para alcanzar la concentración requerida.

(b) Para precipitar el Na-ALE:

Añadir etanol a un volumen de 1:1. Desechar el sobrenadante y dejar secar el Na-ALE en el horno a 85°C.

(c) Para desalinizar:

Colocar el Na-ALE en tubos de diálisis SnakeSkin® (3.500 MWCO*) con una capacidad de volumen de (3,7 ml/cm); cerrar los extremos de los tubos anudándolos o con pinzas para tubos después de doblar los bordes dos veces y dejarlos toda la noche en un vaso de precipitados de vidrio con agua milliQ mientras se agita.

Extracción en frío de ALE de lodos granulares

1) Tamizar los lodos granulares para recoger los gránulos de más de 200pm de diámetro, y luego lavarlos con agua del grifo.

2) Retirar el exceso de agua con papel de seda colocado debajo del colador.

3) Antes de iniciar la extracción, tomar ± 1 gramo de lodo para la determinación del peso en seco. Medir el vaso vacío, el vaso lleno y poner en el horno (105°C) para que se seque. Pesar de nuevo si está seco.

4) Preparar una suspensión de gránulos en agua del grifo con un TSS de aproximadamente el 3%. Esto corresponde a 30-35 gramos de peso húmedo de lodo en un volumen total de 100 mL.

5) Añadir una solución blanqueadora espesa hasta alcanzar el 10% (v/v).

6) Mezclar bien y colocar la suspensión a temperatura ambiente o a 4° C durante 24 horas. Añadir papel de aluminio en la parte superior para evitar la evaporación.

8) Ajustar el pH del sobrenadante a 2,5 añadiendo HCl 4 M en un agitador magnético. La formación de gel se puede notar con la espuma. Si no hay espuma, seguir añadiendo HCl.

9) Recoger el gel ácido en tubos de 50 mL y desechar la espuma de la parte superior (que contiene algunas impurezas sólidas insolubles).

10) Centrifugar el gel ácido a 4500 rpm durante 10 minutos y recoger el pellet.

11) El gel ácido puede ser almacenado a 4° C o congelado.

El gel puede seguir preparándose según el propósito/cliente, como se ha indicado anteriormente en la sección de extracción en caliente.

Análisis del peso molecular de ALE

La cromatografía de exclusión por tamaño se realizó con una columna Superdex 75 10/300 GL (AKTA Purifier System, GE Healthcare). La elución se llevó a cabo a temperatura ambiente utilizando solución salina amortiguadora de fosfatos (PBS) que contenía 10 mM (HPO/-, H2PO4-) con un pH de 7,4, y además tenía 2,7 mM de KCl y 137 mM de NaCl, a un caudal constante de 0,4 mL/min. La detección se controló siguiendo la absorbancia de las moléculas eluidas a una longitud de onda de 210 nm.

La columna Superdex 75 10/300 GL fue capaz de separar moléculas de 1.000 a 70.000 Daltons (Da). La medición del volumen de elución de los estándares de dextrano (es decir, 1000 Da, 5000 Da, 12000 Da, 25000 Da y 50000 Da) condujo a la ecuación de calibración:

Log (pm) = 6,212 0,1816 Ve

En la que, pm: Peso molecular de la molécula en Dalton (Da), y Ve: volumen de elución en mL (ensayado en la parte superior del pico). Los perfiles de los cromatogramas se registraron con el software UNICORN 5.1 (GE Healthcare). Los tiempos de retención de los picos y las áreas de los picos fueron calculados directamente y suministrados por el programa.

Resultados

Tabla 1: Peso molecular de las diferentes fracciones en los exopolisacáridos tipo alginato y su porcentaje.

Volumen de elución del pico Peso molecular Porcentaje de la fracción

(ml) (kDa) (% área máxima)

7,83 >70 29,74

13,48 14,4 18,82

15,57 5,79 45,15

17,58 2,15 4,42

20,13 0,656 1,87

Experimentos reológicos

La viscosidad se considera un parámetro importante para los biopolímeros, como el alginato. La reología estudia los fenómenos que aparecen durante la deformación y el flujo de los fluidos, los sólidos y los sistemas sólidos bajo la influencia de fuerzas externas. Se considera que la ley de Newton se aplica a los fluidos como a los materiales elásticos y viscosos ideales.

Se realizaron experimentos reológicos para determinar la viscosidad frente a la velocidad de cizallamiento, la concentración crítica de solapamiento, la estabilidad térmica y la estabilidad de salinidad. La viscosidad se midió en función de la velocidad de cizallamiento utilizando un reómetro AR-G2.

Materiales y procedimiento

Los experimentos de reología se realizan en un reómetro AR-G2 utilizando la geometría de Couette. El reómetro se llenó con muestras de 20 ml de la solución de polímero Na-ALE en las concentraciones y salinidades deseadas. El ácido algínico se convirtió en la solución polimérica deseada (alginato de sodio (Na-ALE)) añadiendo NaOH y agua desionizada.

Para preparar las muestras de solución de polímero para los experimentos de reología, se preparó primero una solución madre de la mayor concentración. A continuación, la solución madre de mayor concentración se diluyó hasta las concentraciones deseadas (más bajas). La solución madre se preparó como sigue:

La cantidad de ácido algínico necesaria se ponderó con un balance de masas.

Posteriormente se añadió lentamente NaOH (0,1 N) a la solución para evitar la aglomeración de partículas.

La solución se agitó y el pH se midió continuamente.

Se añadió NaOH (0,1 N) hasta un pH final de aproximadamente 8,3 y se complementó la solución hasta el volumen requerido con agua desionizada.

El vaso de precipitados se agitó durante 30 minutos a alta velocidad y se cubrió con papel de aluminio para evitar el contacto con el aire.

Posteriormente, el agitador se redujo a velocidad media y la solución se agitó y desgasificó durante al menos un día para crear una solución polimérica homogénea en equilibrio y garantizar la hidratación.

Finalmente, la solución madre se diluyó con agua desionizada hasta 20 ml de solución de polímero a las concentraciones deseadas.

Resultados

En la figura (la-c) se muestra la viscosidad de las soluciones de ALE y de alginato a distintas velocidades de cizallamiento. La viscosidad (eje vertical, Pa*s) del ALE disminuye al aumentar la velocidad de cizallamiento (eje horizontal, 1/s). Esto se muestra para cuatro soluciones diferentes, de arriba a abajo, con 5%, 3%, 2% y 1% de alginato, respectivamente. Aparentemente las soluciones actuales, que comprenden el presente ALE, muestran un comportamiento no newtoniano en este sentido.

En comparación, en la figura lb la viscosidad del alginato de algas se ve menos afectada por el cambio de la velocidad de cizallamiento. Esto se muestra para cinco soluciones diferentes, de arriba a abajo, con 10%, 5%, 3%, 2% y 1% de alginato de algas, respectivamente.

Esto se considera una indicación de que la solución de ALE es más pseudoplástica que la de los alginatos comparables. Esta propiedad puede proporcionar ventajas en el procesamiento, como el bombeo y el llenado.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento de extracción de biopolímeros a partir de agregados densos formados por organismos microbianos, que comprende las etapas de

(i) proporcionar un biopolímero aniónico en el lodo,

(iic) aumentar el pH hasta 8,0-14,0 mediante la adición de al menos 1-20 % v/v de al menos uno de los Ch, OCl- y H2O2, a una temperatura y durante un tiempo adecuados, y

(iii) la extracción del biopolímero.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, que comprende además la etapa de (iia) después de proporcionar el lodo eliminar las partículas con un diámetro superior a 500|jm.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de (iib) después de proporcionar el lodo eliminar el agua hasta un contenido de 1-40% p/v del lodo húmedo.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de (iiia) reducir el pH, mediante la adición de un ácido.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además la etapa de, después de reducir el pH (iiib), eliminar el lodo mediante una o varias de las técnicas de separación física, sedimentación, centrifugación, separación ciclónica, decantación, filtración, tamizado y flotación, en condiciones adecuadas.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el biopolímero es lodo granular aeróbico bacteriano o lodo granular anammox, y se selecciona entre exopolisacáridos, polímeros en bloque que comprenden residuos de ácido urónico, alginato, lípidos y combinaciones de los mismos, o en el que el biopolímero es un biopolímero de algas.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el lodo granular ha sido producido sustancialmente por bacterias pertenecientes al orden Pseudomonadaceae; o, por bacterias pertenecientes al orden Plancto-mycetales; o combinaciones de las mismas.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (iic) comprende además la adición de uno o más de

una sal que comprende una base, y

un oxidante.

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, (iic)

(a) en el que la temperatura se aumenta hasta 50-100 °C, durante un período de 10-60 minutos, o (b) en el que la temperatura se mantiene entre 10 y 30 °C, durante un período de 60 a 2880 min.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que después de la etapa (iic) se centrifuga una suspensión de lodos, durante 10-45 minutos, y se recoge un sobrenadante para su posterior procesamiento.

11. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 4-10, en el que después de laetapa (iiia) (iiib), el gel ácido se centrifuga, durante 10-45 minutos, y se recoge un sobrenadante para su posterior procesamiento.

12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el biopolímero extraído recibe un tratamiento adicional.