ES2893933T3 - Derivados de deferoxamina como medicamentos - Google Patents

Abstract

Compuesto de fórmula general I o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, **(Ver fórmula)** en la que R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que comprende H; alquilo C1-C6; arilo C6- C10; aril(C6-C10)alquilo(C1-C6); -C(=O)-R'; -C(=O)OR'; -C(=O)NR'R"; -C(=S)R'; -C(=S)NR'R"; en los que R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que comprende H, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(C6-C10); mientras que alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(C6-C10) pueden no estar sustituidos o estar sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, OH, SH, F, Cl, Br, I, alcoxilo C1-C4, aciloxilo C1- C4, mercapto C1-C4; y sustituyente de fórmula general II **(Ver fórmula)** en la que Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 6 a 16 átomos de carbono, más preferiblemente de 6 a 14 átomos de carbono, incluso más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono, lo más preferiblemente 10 átomos de carbono, o preferiblemente de 8 a 16 o de 10 a 15 carbonos, mientras que opcionalmente uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más anillos heteroaromáticos o anillos aromáticos de 5 miembros o de 6 miembros que contienen los heteroátomos O, S y/o N, preferiblemente fenilenos, triazolilos o piridilenos, y/o uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más heteroátomos o restos que contienen heteroátomos seleccionados de O, S, NH, N-OH, y mientras que la cadena de hidrocarbilo puede no estar sustituida o estar sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, OH, =O, =N-OH, SH, =S, F, Cl, Br, I, alcoxilo C1-C4, aciloxilo C1-C4, mercapto C1-C4, y cada uno de R3, R4, R5 se selecciona independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C10, arilo C6-C12, aril C6-C12-alquilo C1-C2, heteroarilo C5-C12, cicloalquilo C3-C8, en la que cada uno de R1, R2, R3 puede estar opcionalmente sustituido (e independientemente de los demás) con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4; alcoxilo C1-C4; N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes; OH; =O; SH; =S; =N-OH; F; Cl; Br; I; mercapto C1-C4, mientras que al menos uno de R1 y R2 es un sustituyente de fórmula general II, y X- es un anión farmacéuticamente aceptable.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de deferoxamina como medicamentos

Campo de la técnica

La presente invención se refiere a novedosos derivados de deferoxamina y a su uso como medicamentos, en particular para el tratamiento de cánceres.

Técnica anterior

Todas las células requieren hierro para la síntesis de ADN, el metabolismo, el crecimiento y la proliferación. El hierro representa un micronutriente indispensable requerido para muchas reacciones enzimáticas tales como la actividad catalítica de ribonucleótido reductasa para la síntesis de desoxirribonucleótidos. También es indispensable para la respiración mitocondrial, debido a su capacidad para aceptar y donar electrones y participar en la cadena de transporte de electrones, conduciendo de ese modo a la generación del gradiente electroquímico a través de la membrana mitocondrial interna. El hierro existe en los sistemas biológicos principalmente o bien como forma ferrosa o bien como férrica oxidada. La cantidad de hierro en la célula y el organismo está estrechamente equilibrada, ya que el exceso de hierro es tóxico debido a la generación de especies de oxígeno altamente reactivas, tales como el radical hidroxilo (mediante la reacciones de Fenton y Haber-Weiss), conduciendo de ese modo a daño al ADN, a los lípidos y a las proteínas tal como se observa en la enfermedad por sobrecarga de hierro, la hemocromatosis. Por otro lado, una cantidad de hierro insuficiente conduce a una respiración celular comprometida y a anemia sistémica. En los sistemas biológicos, el hierro está presente habitualmente como cofactor en forma de hierro de hemo o en forma de agrupaciones de Fe-S. Ambos se sintetizan en las mitocondrias, un orgánulo responsable de la fosforilación oxidativa y de la respiración celular, y las proteínas que contienen hierro son componentes críticos de la cadena de transporte de electrones. Por tanto, las mitocondrias se consideran el componente central en la homeostasis y el metabolismo del hierro celulares.

Dado que las células cancerosas muestran una mayor demanda de hierro debido a su naturaleza proliferativa y necesidades metabólicas alteradas, se espera un papel importante del hierro en el crecimiento y la progresión tumorales. Además, el hierro tisular elevado se ha relacionado con una incidencia aumentada de cáncer de hígado y colorrectal. Recientemente, se ha observado una firma génica específica de cáncer de mama que sugiere un aumento en la captación de hierro y una disminución en la exportación de hierro y se correlaciona con un mal desenlace clínico (Miller, L.D., Coffman, L.G., Chou, J.W., Black, M.A., Bergh, J., D'Agostino, R., Jr., Torti, S.V., & Torti, F.M. (2011) An iron regulatory gene signature predicts outcome in breast cancer. Cancer Research, 71, 6728­ 6737). Además, se ha documentado una alta expresión del receptor 1 de transferrina en células resistentes a tamoxifeno (Habashy, H.O., Powe, D.G., Staka, C.M., Rakha, E.A., Ball, G., Green, A.R., Aleskandarany, M., Paish, E.C., Douglas, M.R., Nicholson, R.I., Ellis, I.O., & Gee, J.M. (2009) Transferrin receptor (CD71) is a marker of poor prognosis in breast cancer and can predict response to tamoxifen. Breast Cancer Res.Treat., 119, 283-293), y recientemente se han notificado alteraciones notables en el metabolismo del hierro y una firma génica relacionada con el metabolsimo de hierro específica en células iniciadoras de tumores, documentando un papel importante del hierro en diversos tipos de cáncer (Rychtarcikova, Z., Lettlova, S., Tomkova, V., Korenkova, V., Langerova, L., Simonova, E., Zjablovskaja, P., Alberich-Jorda, M., Neuzil, J., & Truksa, J. (2017) Tumor-initiating cells of breast and prostate origin show alterations in the expression of genes related to iron metabolism. Oncotarget., 8, 6376-6398). De manera importante, el hierro participa en la regulación de factores inducibles de hipoxia (HIF), factores a menudo relacionados con la neovascularización y la progresión del cáncer, mediante su papel crítico como cofactor de prolil hidroxilasas que regulan la estabilidad de los HIF (Koh, M.Y., Lemos, R., Jr., Liu, X., & Powis, G. (2011) The hypoxia-associated factor switches cells from HIF-1alpha- to HIF-2alpha-dependent signaling promoting stem cells characteristics, aggressive tumor growth and invasion. Cancer Research, 71, 4015-4027; Peyssonnaux, C., Zinkernagel, A.S., Schuepbach, R.A., Rankin, E., Vaulont, S., Haase, V.H., Nizet, V., & Johnson, R.S. (2007) Regulation ofi ron homeostasis by the hypoxia-inducible transcription factors (HIF). Journal of Clinical Investigation, 117, 1926-1932). De manera similar, se ha propuesto un vínculo entre el hierro y la actividad de la ruta de señalización de Wnt/p-catenina (Song, S., Christova, T., Perusini, S., Alizadeh, S., Bao, R.Y., Miller, B.W., Hurren, R., Jitkova, Y., Gronda, M., Isaac, M., Joseph, B., Subramaniam, R., Aman, A., Chau, A., Hogge, D.E., Weir, S.J., Kasper, J., Schimmer, A.D., Al-awar, R., Wrana, J.L., & Attisano, L. (2011) Wnt inhibitor screen reveals iron dependence of beta-catenin signaling in cancers. Cancer Research, 71, 7628-7639). En conjunto, las evidencias actuales apoyan fuertemente la idea de que el hierro desempeña un papel importante en la carcinogénesis a múltiples niveles.

Los quelantes de hierro se han usado ampliamente para el tratamiento de enfermedades por sobrecarga de hierro, siendo la deferoxamina (DFO) el primer compuesto prototípico (Graziano, J.H. (1978) Iron metabolism and chelation therapy in hemosiderosis. Curr. Top. Hematol., 1, 127-150). Más recientemente, los quelantes de hierro, especialmente DFO, han demostrado inducir apoptosis en células cancerosas, particularmente las de origen hematopoyético, y algunos estudios documentan un efecto curativo en células cancerosas incluso in vivo (Fukuchi, K., Tomoyasu, S., Tsuruoka, N., & Gomi, K. (1994) Iron deprivation-induced apoptosis in HL-60 cells. FEBS Letters, 350, 139-142; Seligman, P.A., Kovar, J., & Gelfand, E.W. (1992) Lymphocyte proliferation is controlled by both iron availability and regulation of iron uptake pathways. Pathobiology, 60, 19-26; Seligman, P.A., Schleicher, R.B., Siriwardana, G., Domenico, J., & Gelfand, E.W. (1993) Effects of agents that inhibit cellular iron incorporation on bladder cancer cell proliferation. Blood, 82, 1608-1617; White, S., Taetle, R., Seligman, P.A., Rutherford, M., & Trowbridge, I.S. (1990) Combinations of anti-transferrin receptor monoclonal antibodies inhibit human tumor cell growth in vitro and in vivo: evidence for synergistic antiproliferative effects. Cancer Research, 50, 6295-6301). Aun así, el principal inconveniente es un cambio importante en el metabolismo del hierro del organismo sistémico y la posterior muerte de los animales de experimentación.

El documento WO 2017/079535 da a conocer análogos de alquilfosfocolina que incorporan un resto quelante quelado con gadolinio. Los restos quelantes tienen estructuras variadas, incluyendo una estructura de tipo deferoxamina. Los compuestos del documento WO 2017/079535 que comprenden el átomo de gadolinio son útiles en la obtención de imágenes por resonancia magnética y en el tratamiento de cáncer mediante terapia por captura de neutrones.

El objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos que afecten selectivamente al metabolismo del hierro en células cancerosas y que tengan efectos curativos, sin mostrar los efectos sistémicos indeseables.

Divulgación de la invención

La presente invención proporciona novedosas sustancias de fórmula general I y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas,

en la que R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que comprende H; alquilo C1-C6; arilo C6-C10; alquil(C1-C6)arilo(C6-C10); -C(=O)-R’; -C(=O)OR’; -C(=O)NR’R”; -C(=S)R’; -C(=S)NR’R”; en los que R’ y R” se seleccionan independientemente del grupo que comprende H, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(c6-C10); mientras que alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(C6-C10) pueden no estar sustituidos o estar sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)² , en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, OH, SH, F, Cl, Br, I, alcoxilo C1-C4, aciloxilo C1-C4, mercapto C1-C4; y sustituyente de fórmula general II

en la que Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 6 a 16 átomos de carbono, más preferiblemente de 6 a 14 átomos de carbono, incluso más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono, lo más preferiblemente 10 átomos de carbono, o preferiblemente de 8 a 16 o de 10 a 15 carbonos, mientras que opcionalmente uno o más átomos de carbono (normalmente grupos -CH²-) en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más anillos heteroaromáticos o anillos aromáticos de 5 miembros o de 6 miembros que contienen los heteroátomos O, S y/o N, preferiblemente fenilenos, triazolilenos o piridilenos, y/o uno o más átomos de carbono (normalmente grupos -CH²-) en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más heteroátomos o restos que contienen heteroátomos seleccionados de O, S, NH, N-^o H, y mientras que la cadena de hidrocarbilo puede no estar sustituida o estar sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)² , en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, OH, =O, SH, =S, =N-OH, F, Cl, Br, I, alcoxilo C1-C4, aciloxilo C1-C4, mercapto C1-C4, y

cada uno de R3, R4, R5 se selecciona independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C10, arilo C6-12, aril C6-C12-alquilo C1-C2, heteroarilo C5-C12, cicloalquilo C3-C8, en la que cada uno de R1, R2, R3 puede estar opcionalmente sustituido (e independientemente de los demás) con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4; alcoxilo C1-C4; N(H o alquilo C1-C4)² , en el que los alquilos son iguales o diferentes; OH; =O; SH; =S; =N-OH; F; Cl; Br; I; mercapto C1-C4,

mientras que al menos uno de R1 y R2 es un sustituyente de fórmula general II.

X- es un anión farmacéuticamente aceptable, en particular un anión de ácido inorgánico u orgánico, particularmente adecuados son Cl- , Br- , I- , sulfato, fosfato, mesilato, acetato, formiato, succinato, citrato, lactato, tartrato, oxalato, ascorbato, tosilato, pero pueden usarse uniones de cualquier ácido farmacéuticamente aceptable.

Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, en particular, sales con ácidos farmacéuticamente aceptables, tales como ácido 1-hidroxi-2-naftoico, ácido 2,2-didoroacético, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido 2-oxoglutárico, ácido 4-acetamidobenzoico, ácido 4-aminosalicílico, ácido acético, ácido adípico, ácido ascórbico (L), ácido aspártico (L), ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido canfórico (+), ácido canfor-10-sulfónico (+), ácido cáprico (ácido decanoico), ácido caproico (ácido hexanoico), ácido caprílico (ácido octanoico), ácido carbónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico (D), ácido glucónico (D), ácido glucurónico (D), ácido glutámico, ácido glutárico, ácido glicerofosfórico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido isobutírico, ácido láctico (DL), ácido lactobiónico, ácido láurico, ácido maleico, ácido málico (-L), ácido malónico, ácido mandélico (DL), ácido metanosulfónico, ácido naftalen-1,5-disulfónico, ácido naftalen-2-sulfónico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido propiónico, ácido piroglutámico (-L), ácido salicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico (+L), ácido tiociánico, ácido toluenosulfónico (p), ácido undecilénico.

Los ésteres farmacéuticamente aceptables representan compuestos en los que los grupos OH en la molécula (en particular en los grupos -N(OH)-) se esterifican mediante el grupo R9-C(=O)-. R9 puede seleccionarse de alquilos C1-C20, alquenilos C2-C20.

Preferiblemente, R1 y R2 se seleccionan independientemente de H, alquilo C1-C6 y sustituyente de fórmula general II.

Preferiblemente, R3, R4, R5 se seleccionan independientemente de fenilo, bencilo, ciclohexilo, alquilo C1-C10 lineal; opcionalmente uno o más de R3, R4, R5 pueden estar adicionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4; alcoxilo C1-C4; OH; SH; F; Cl; Br; I; mercapto C1-C4.

Preferiblemente, Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno (preferiblemente alquileno), que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono, más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono o 10 átomos de carbono.

Preferiblemente, Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno (preferiblemente alquileno), que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono, más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono o 10 átomos de carbono, en la que uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se reemplazan por uno o más heteroátomos seleccionados de O, S, NH.

Preferiblemente, Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno (preferiblemente alquileno), que contiene de 8 a 16 átomos de carbono o de 10 a 15 átomos de carbono, en la que uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se reemplazan por uno o más restos que contienen heteroátomos N-OH y uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se sustituyen con =O o =S.

Preferiblemente, Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno (preferiblemente alquileno), que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono, más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono o 10 átomos de carbono, en la que uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se reemplazan por uno o más anillos heteroaromáticos o anillos aromáticos de 5 miembros o de 6 miembros, preferiblemente fenilenos y/o piridilenos y/o triazoles.

Preferiblemente, Z se sustituye con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo C1-C4; N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes; OH; =O; SH; =S; F; Cl; Br; I; alcoxilo C1-C4; mercapto C1-C4; más preferiblemente, Z se sustituye con uno o más sustituyentes seleccionados de OH; =O; SH; =S; F; Cl; Br; I.

La presente invención proporciona además un método para la preparación de los compuestos de fórmula general I. En un método proferido, un compuesto de fórmula general III

T-Z-T (III),

en la que T es halógeno, mesilo, tosilo u otro grupo saliente y Z tiene el significado tal como se definió anteriormente, se somete a una reacción con fosfina trisustituida (PR3R4R5), preferiblemente en dimetilformamida (DMF), produciendo un derivado de hidrocarbilo de fosfonio trisustituido de fórmula general IV

R3 R.4

T— pv X-

R5 (IV)

que luego se condensa con deferoxamina (compuesto que tiene la estructura correspondiente al compuesto I, en la que R1 = R2 = H), preferiblemente en DMF en presencia de base, preferiblemente bicarbonato de sodio, produciendo el derivado de deferoxamina de hidrocarbilo de fosfonio trisustituido de fórmula general I.

Los compuestos de la presente invención se sometieron a prueba para determinar sus efectos biológicos y se compararon con el compuesto conocido, deferoxamina. Los compuestos más activos de la presente invención destruyeron las células cancerosas con efectos de 1-2 órdenes de magnitud mayores que los de deferoxamina. Esto no tiene precedentes y es muy inesperado.

Un hallazgo importante es que los compuestos de la presente invención no muestran efectos tóxicos sobre células no malignas, por tanto, son selectivos en la destrucción de las células cancerosas. Los compuestos de la presente invención tienen un mejor índice de selectividad y, por tanto, efectos secundarios reducidos en el tratamiento.

Además, los compuestos de la presente invención actúan mediante varios mecanismos independientes que los hace adecuados para el tratamiento de diversos tipos de cánceres resistentes. Los mecanismos de acción incluyen actividad antiproliferativa, actividad inductora de apoptosis (o inductora de muerte celular) y actividad antimigratoria. Estas actividades son selectivas de células malignas. Los cánceres resistentes son normalmente resistentes a medicamentos que actúan a través de un determinado mecanismo de acción. Los compuestos de la presente invención que tienen múltiples modos de acción pueden superar entonces la resistencia usando un modo de acción diferente al de las células cancerosas que son sensibles.

La capacidad de los compuestos de la presente invención para actuar a través de múltiples mecanismos (modos) de acción también da como resultado su utilizabilidad para el tratamiento de diversos tipos de enfermedades proliferativas, en particular cánceres, tales como cánceres de mama, próstata, GIT, hepático, colorrectal, pancreático, mesotelioma, pulmón y leucemias.

Además, un objeto de la presente invención es un método de tratamiento de mamíferos, incluyendo seres humanos, en el que uno o más compuestos de fórmula general I se administran a un sujeto que padece enfermedades proliferativas, tales como cáncer.

Un objeto de la presente invención también es una preparación farmacéutica que contiene al menos un compuesto de fórmula general I y al menos una sustancia auxiliar farmacéutica, tal como un portador, un disolvente, una carga, un colorante, un aglutinante, etc.

Además, la presente invención incluye una preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y un metal. El metal se selecciona preferiblemente de metales de transición (grupos B de la tabla periódica, lantánidos, actínidos) y metales de los grupos IIIA y IVA de la tabla periódica. El metal puede ser un radionúclido o un metal adecuado para su uso como agente de diagnóstico o terapéutico, por ejemplo, para radioterapia, biodetección, obtención de imágenes de muestras biológicas, administración de fármacos, inserción de genes, terapia fotodinámica (en particular metales tales como lantano, cerio, praseodimio, neodimio, prometio, samario, europio, gadolinio, terbio, disprosio, holmio, erbio, tulio, iterbio, lutecio, hierro, galio, cobre). Al menos parte de la cantidad total del metal y al menos parte de la cantidad total de compuestos de fórmula I presentes en la preparación pueden formar un complejo de quelato.

En una realización, el metal es galio. El galio puede estar en forma de una sal, tal como cloruro de galio o nitrato de galio. Al menos parte del galio y de los compuestos de fórmula I presentes en la preparación pueden formar un complejo de quelato. Tal preparación farmacéutica tiene una actividad inductora de muerte celular incluso más alta que los compuestos de fórmula I solos.

Por tanto, un objeto de la presente invención son compuestos de fórmula general I o la preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y un metal, preferiblemente galio, para su uso como medicamentos, en particular para su uso en un método de tratamiento de enfermedades proliferativas, tales como cáncer.

Un objeto de la presente invención es el uso de compuestos de fórmula general I o la preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y un metal, preferiblemente galio, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades proliferativas, tales como cáncer.

Por tanto, un objeto de la presente invención es una preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y un metal, preferiblemente galio, para su uso como medio de contraste, usado para diagnóstico, en particular para su uso en un método de visualización in vivo del cáncer. Tal preparación puede visualizarse mediante, por ejemplo, PET.

Un objeto de la presente invención es al menos un compuesto de fórmula I y un metal, preferiblemente galio, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, tal como cáncer, o para su uso como medio de contraste en diagnóstico, tal como visualización in vivo del cáncer, en el que el compuesto de fórmula I y el metal se administran simultánea o secuencialmente.

Además, dentro del marco de trabajo de la presente invención, se encontró que los compuestos de fórmula I muestran efectos sinérgicos cuando se combinan con otros principios activos antineoplásicos. En particular, los principios activos antineoplásicos para los que se observó este efecto sinérgico incluyen doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino, fluorouracilo.

Un “principio activo antineoplásico” es una sustancia o un compuesto que tiene un efecto citotóxico sobre células de líneas celulares de cáncer.

Por tanto, un objeto de la presente invención es una preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y al menos un principio activo antineoplásico adicional, preferiblemente seleccionado de doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino, fluorouracilo.

Por tanto, un objeto de la presente invención es una preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I y al menos un principio activo antineoplásico adicional, preferiblemente seleccionado de doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino y fluorouracilo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, tal como cáncer.

Un objeto de la presente invención es al menos un compuesto de fórmula I y al menos un principio activo antineoplásico adicional, preferiblemente seleccionado de doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino y fluorouracilo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, tal como cáncer, en el que el al menos un compuesto de fórmula I y el al menos un principio activo antineoplásico adicional se administran simultánea o secuencialmente. Ejemplos para llevara cabo la invención

Ejemplo 1

Cloruro de trifenil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-3,9,14,20,25,3,31-hexaazahentetracontan-41-il)fosfonio Se añadió DMF (1 ml) a un matraz cargado con mesilato de deferoxamina (50 mg, 0,076 mmol), bromuro de (10-bromodecil)trifenilfosfonio (100 mg, 0,178 mmol) y bicarbonato de sodio (64 mg, 0,762 mmol). Se agitó la mezcla de reacción y se calentó hasta 60°C, después de 4 horas se apagó el calentador y la agitación continuó 18 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con diclorometano (10 ml), se filtró y se concentró a vacío. Se trituró el aceite resultante con dietil éter (10 ml) y se recogió el precipitado. Entonces se disolvió el precipitado en metanol (3 ml), se filtró a través de una resina de intercambio iónico (3,6 g, Dowex 2 x 10-Cl-) y se concentró a vacío. Se sometió el producto en bruto a cromatografía (10 ml de sílice, cloroformo/metanol/amoniaco 100:5:2^-100:10:2^-100:15:2) para dar 15 mg de producto de color ligeramente amarillo de la fórmula 1.

Rf 0,07 (CHCl^s/CH^sOH/NH^s 100:10:2);

¹ H-RMN (500 MHz, CD³OD) 87,93 - 7,87 (m, 3H), 7,85 - 7,72 (m, 12H), 3,64 - 3,56 (m, 6H), 3,45 - 3,36 (m, 2H), 3,17 (t, J = 6,6 Hz, 4H), 2,77 (t, J = 7,0 Hz, 4H), 2,60 (dd, J = 15,4, 9,2 Hz, 2H), 2,51 - 2,38 (m, 6H), 2,10 (s, 3H), 1,74 -1,59 (m, 8H), 1,59 - 1,40 (m, 10H), 1,40 - 1,19 (m, 16H).

¹³C-RMN (126 MHz, CD³OD) ⁸ 174,90, 174,89, 174,07, 173,99, 172,98, 136,27 (d, J = 3,0 Hz), 134,79 (d, J = 10,0 Hz), 131,51 (d, J = 12,5 Hz), 120,00 (d, J = 86,3 Hz), 55,12, 54,70, 50,52, 50,31, 49,84, 40,27 (2C), área de señales solapantes, algunas de ellas tienen acoplamiento J con fósforo - 31,60, 31,55, 31,53, 30,62, 30,54, 30,52, 30,43, 30,37, 30,32, 30,05, 29,98, 29,94, 29,89, 29,85, 29,62, 28,95, 28,91, 28,71,28,33, 27,43, 27,37, 25,28, 24,95, 24,91,23,54 (d, J = 4,4 Hz), 22,88, 22,47, 20,21.

IR - 3400, 3303, 3093, 3054, 2927, 2854, 1642, 1622, 1588, 1566, 1481, 1461, 1438, 1373, 1252, 1162, 1113, 996, 746, 723,691.

EMAR: m/z = 1, encontrado: 961,59155, calculado para C⁵³H⁸²N⁶O⁸P⁺ : 961,59263

EMAR: m/z = 2, encontrado: 481,29965, calculado para C⁵³ H⁸³N⁶O⁸P²⁺ : 481,29632

Ejemplo 2

Cloruro de trifenil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(10-(trifenilfosfonio)decil)-3,9,14,20,25,31-hexaazahentetracontan-41-il)fosfonio

Se añadió DMF (2 ml) a un matraz cargado con mesilato de deferoxamina (100 mg, 0,152 mmol), bromuro de (10-bromodecil)trifenilfosfonio (200 mg, 0,356 mmol) y bicarbonato de sodio (600 mg, 7,143 mmol). Se agitó la mezcla de reacción y se calentó hasta 70°C, después de 4 horas se apagó el calentador y la agitación continuó 18 horas a temperatura ambiente. Se diluyó la mezcla con diclorometano (20 ml), se filtró y se concentró a vacío. Se trituró el aceite resultante con dietil éter (12 ml) y se trituró de nuevo el precipitado resultante con éter de petróleo (12 ml). Entonces se disolvió el residuo en metanol (3 ml), se filtró a través de resina de intercambio iónico (7 g, Dowex 2 x 10-Cl-) y se concentró a vacío. Se sometió el producto en bruto a cromatografía (10 ml de sílice, cloroformo/metanol/amoniaco 100:10:1 (200 ml) ^ 100:15:1,5 (200 ml)) para dar 48 mg de producto de color ligeramente amarillo de la fórmula 2.

Rf 0,05 (CHCls/CHsOH/NHs 100:10:2);

1H-RMN (500 MHz, CD3OD) ⁸ 7,93 - 7,86 (m, 6H), 7,86 - 7,71 (m, 24H), 3,63 - 3,54 (m, 6H), 3,47 - 3,37 (m, 4H), 3,20 - 3,12 (m, 4H), 2,77 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 2,55 (dd, J = 15,9, 8,9 Hz, 4H), 2,46 (t, J = 6,8 Hz, 4H), 2,09 (s, 3H), 1,74 -1,60 (m, 12H), 1,60 - 1,44 (m, 14H), 1,42 - 1,19 (m, 26H).

13C-RMN (126 MHz, CD3OD) ⁸ 174,8, 174,4, 174,3, 173,3, 136,24 (d, J = 3,0 Hz), 134,78 (d, J = 10,0 Hz), 131,50 (d, J = 12,6 Hz), 119,98 (d, J = 86,3 Hz), 55,0, 54,6, 40,2, 31,7-29,8 área de señales solapantes, 31,07 - 29,51 (m), 28,9, 28,5, 27,3, 26,9, 25,5, 24,9 (2C), 23,5 (2C), 22,9, 22,4, 20,2.

IR - 3264, 3059, 1636, 1588, 1547, 1485, 1457, 1439, 1362, 1259, 1114, 996, 750, 729, 691

EMAR: m/z = 2, encontrado: 681,41589, calculado para Cs1H116N6OsP2+: 681,415945

EMAR: m/z = 3, encontrado: 454,61316, calculado para C81Hn7N6O8P3+: 454,613056

Ejemplo 3

Cloruro de trifenil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(6-(trifenilfosfonio)hexil)-3,9,14,20,25,31-hexaazaheptatriacontan-37-il)fosfonio

Se disolvieron sal de mesilato de deferoxamina (62 mg; 0,094 mmol; 1 eq.), bromuro de (bromohexil)trifenilfosfonio (400 mg; 0,94 mmol; 10 eq.) y NaHCO3 (372 mg; 4,4 mmol; 47 eq.) en D^m F seca (2 ml) y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban 4 horas. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y se agitó 18 horas adicionales. Se comprobó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción con 60 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se precipitó el producto en Et2O (10 ml) y PE (10 ml) helados y se eliminaron los disolventes por decantación. Se disolvió el precipitado en metanol (3 ml), se filtró a través de DOWEX (2 x 10 Cl-; 15 g) y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH/NH3100/10/1) que proporcionó una espuma de color naranja puro (52 mg, 40%).

¹ H-RMN (600 MHz, CD³OD) ⁸ 8,05 - 7,68 (m, 30H), 3,76 - 3,55 (m, 6H), 3,48 (ddt, J = 14,3, 8,1, 3,2 Hz, 4H), 3,25 -3,08 (m, 8H), 2,83 - 2,74 (m, 4H), 2,48 (q, J = 6,8 Hz, 4H), 2,12 (d, J = 3,9 Hz, 3H), 1,87 - 1,59 (m, 20H), 1,59 - 1,24 (m, 10H).

¹³C-RMN (151 MHz, CD³OD) ⁸ 174,78, 174,61, 174,46, 136,30 (d, J = 2,8 Hz), 134,85 (d, J = 10,0 Hz), 131,55 (d, J = 12,6 Hz), 119,94 (d, J = 86,4 Hz), 54,20, 53,83, 40,28, 31,45 (d, J = 11,5 Hz), 31,03 (d, J = 16,7 Hz), 29,98, 28,90 (d, J = 14,2 Hz), 27,34, 26,89, 24,92, 24,70, 23,43 (d, J = 4,2 Hz), 22,85, 22,51,20,26.

IR: 3431(s), 3263 (m), 3056 (m), 2932 (m), 2863 (m), 1636 (s), 1584 (m), 1545 (m), 1438 (s), 1113 (s), 996 (m), 723 (m), 692 (m), 532 (m), 509 (m)

EM: m/z = 2, encontrado: 625,4, calculado para C⁷³H¹⁰⁰N⁶O^s P² : 625,35

Ejemplo 4

Se disolvieron bromuro de bromodeciltriciclohexilfosfonio (1,66 g mg; 2,9 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (190 mg; 0,286 mmol; 1 eq.) y NaHCO³ (1,13 g; 0,013 mol; 47 eq.) en DMF seca y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban durante 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl³/MeOH/NH³ ; 80/20/2). Cuando se terminó, se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO³ por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en bruto en diclorometano (5 ml) y se precipitó mediante la adición en Et²O (40 ml) y PE (40 ml) helados. Después de 1-2 horas de agitación vigorosa, se eliminó el disolvente por decantación y se disolvió el precipitado resultante en metanol/H²O (5 ml) y se filtró a través de DOWEX (45 ml). Se evaporaron los disolventes y se purificó el producto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl³/MeOH/NH³100/10/1). La reacción dio un aceite de color amarillo de deferoxamina de bisfosfonio de la fórmula 4 (148 mg, 35%) y deferoxamina de monofosfonio de la fórmula 5 (59 mg, 48%).

Tricloruro de triciclohexil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(10-(triciclohexilfosfonio)decil)-3,9,14,20,25,31-hexaazahentetracontan-31-io-41-il)fosfonio

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 4,59 (s, 2H), 3,68 - 3,58 (m, 6H), 3,23 - 3,12 (m, 4H), 2,78 (t, J = 7,2 Hz, 6H), 2,61 - 2,44 (m, 8H), 2,31 - 2,20 (m, 4H), 2,11 (s, 3H), 2,07 - 1,88 (m, 22H), 1,87 - 1,76 (m, 6H), 1,72 - 1,33 (m, 44H). EMAR: calculado: 699,55680; encontrado: 699,55727 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3423, 3250, 2931,2854, 1448, 1122, 1008, 722

Dicloruro de triciclohexil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-3,9,14,20,25,31-hexaazahentetracontan-31-io-41-il)fosfonio

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 4,60 (s, 5H)*, 3,63 (dt, J = 17,7, 6,9 Hz, 6H), 3,23 - 3,13 (m, 6H), 3,05 - 2,90 (m, 4H), 2,78 (t, J = 7,1 Hz, 4H), 2,61 -2,43 (m, 8H), 2,25 (dd, J = 16,9, 12,3 Hz, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,04 - 1,27 (m, 67H). EMAR: calculado 979,73348; encontrado 979,73383; calculado 490,37038; encontrado 490,37051 (m/z = 2) IR (gránulo de KBr): v = 3059, 2931,2854, 1641, 1547, 1448, 722

Ejemplo 5

T ricloruro de 42,42-dibutil-3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(10-(tributilfosfonio)decil)-3,9,14,20,25,31 -hexaaza-42-fosfahexatetracontan-31,42-diio

Se disolvieron bromuro de tri(n-butil)bromodecilfosfonio (1,45 g mg; 2,9 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (190 mg; 0,286 mmol; 1 eq.) y NaHCO3(1,15 g; 0,014 mol; 47 eq.) en DMF seca (20 ml) y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban durante 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCh/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción con 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en bruto en diclorometano (5 ml) y se precipitó mediante la adición en Et2O (40 ml) y PE (40 ml) helados. Después de dos horas de agitación vigorosa, se eliminó el disolvente por decantación y se disolvió el precipitado en metanol/H2O (5 ml) y se filtró a través de DOWEX (45 ml). Se evaporaron los disolventes. Se purificó el producto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH/NH3100/10/1). La reacción dio un aceite de color amarillo de la fórmula 6 (22 mg, 22%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 84,59 (s, 2H), 3,70 - 3,56 (m, 6H), 3,24 - 3,13 (m, 6H), 2,83 (s, 6H), 2,78 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 2,47 (q, J = 7,0 Hz, 4H), 2,31 - 2,14 (m, 16H), 2,11 (s, 3H), 1,84 - 1,17 (m, 74H), 1,02 (t, J = 7,0 Hz, 18H).

EMAR: calculado: 621,50985; encontrado: 621,51044 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3066, 2930, 2857, 1640, 1550, 1101,720

Ejemplo 6

Tricloruro de trifenil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(12-(trifenilfosfonio)dodecil)-3,9,14,20,25,31-hexaazatritetracontan-31-io-43-il)fosfonio

Se disolvieron bromuro de trifenilfosfoniododecilo (1,5 g mg; 2,5 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (170 mg; 0,25 mmol; 1 eq.) y NaHCO3 (1 g; 0,012 mol; 47 eq.) en DMF seca (20 ml) y se calentaron hasta 60°C y se agitaron a esta temperatura durante 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en diclorometano (5 ml) y se precipitó mediante la adición en Et2O (40 ml) y PE (40 ml) helados y se decantó. Se disolvió el precipitado en metanol/H2O (5 ml) y se filtró a través de DOWEX (45 ml) y se evaporaron los disolventes. Se purificó el producto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH/NH3100/15/1,5). La reacción dio un aceite de color amarillo de la fórmula 8 (47 mg, 63%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 88,02 - 7,66 (m, 30H), 3,61 (t, J = 6,9 Hz, 6H), 3,47 - 3,37 (m, 4H), 3,18 (dt, J = 6,5, 2,2 Hz, 6H), 2,78 (s, 4H), 2,55 (s, 4H), 2,51 - 2,40 (m, 4H), 2,11 (s, 3H), 1,75 - 1,60 (m, 10H), 1,54 (dd, J = 13,2, 5,9 Hz, 10H), 1,40 -1,18 (m, 34H).

EMAR: calculado:1418,8945; encontrado: 709,44728 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 2927, 2854, 1636, 1588, 1485, 1439, 1114, 996, 724, 691

Ejemplo 7

Tricloruro de 2,2-dibencil-19,30,41-trihidroxi-20,23,31,34,42-pentaoxo-1-fenil-13-(10-(tribencilfosfonio)decil)-13,19,24,30,35,41-hexaaza-2-fosfatritetracontan-2,13-diio

Se disolvieron bromuro de tribencilfosfoniodecilo (1,57 g mg; 2,6 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (170 mg; 0,26 mmol; 1 eq.) y NaHCO3 (1,03 g; 0,012 mol; 47 eq.) en DMF seca (20 ml) y se calentaron hasta 60°C y se agitaron a esta temperatura durante 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en bruto. Los disolventes estaban en diclorometano (5 ml) y se precipitó mediante la adición en Et2O (40 ml) y PE (40 ml) helados y se eliminaron por decantación y se disolvió el precipitado en metanol/H2O (5 ml) y se filtró lentamente a través de DOWEX (25 ml). Se evaporaron los disolventes y se purificó el producto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH/NH3100/15/1,5). La reacción dio una espuma de color amarillo de la fórmula 9 (52 mg, 71%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 7,52 - 7,21 (m, 30H), 3,80 (dd, J = 14,4, 6,7 Hz, 12H), 3,70 - 3,57 (m, 6H), 3,26 -3,11 (m, 4H), 2,78 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 2,64 (s, 6H), 2,48 (dd, J = 7,1, 3,4 Hz, 4H), 2,11 (s, 3H), 2,04 (d, J = 4,0 Hz, 4H), 1,74 - 1,60 (m, 6H), 1,55 (d, J = 8,2 Hz, 8H), 1,49 -1,16 (m, 26H).

EMAR: calculado: 1446,9258; encontrado: 723,46320 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3063, 1636, 1551, 1496, 1455, 1257, 1075, 702.

Ejemplo 8

Se disolvieron bromuro de trioctilbromodecilfosfonio (1,73 g mg; 2,6 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (170 mg; 0,26 mmol; 1 eq.) y NaHCO3 (1,03 g; 0,012 mol; 47 eq.) en DMF seca (20 ml) y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban durante 2,5 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en bruto en metanol/H2O (5 ml) y se filtró a través de DOWEX (25 ml) y se evaporaron los disolventes. Se purificó el producto como cloruro mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3 - CHCl3/MeOH/NH3100/15/1,5). La reacción dio una espuma de color amarillo de bisfosfonio de la fórmula 10 (34 mg, 51%) y 7 mg (5%) de monofosfonio de la fórmula 11.

T ricloruro de 3,14,25-trihidroxi-42,42-dioctil-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(10-(trioctilfosfonio)decil)-3,9,14,20,25,31-hexaaza-42-fosfapentacontan-31,42-diio

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 83,67 - 3,58 (m, 6H), 3,56 (dt, J = 7,8, 6,5 Hz, 4H), 3,21 - 3,15 (m, 6H), 2,78 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 2,48 (dd, J = 7,5, 4,9 Hz, 4H), 2,22 (ddd, J = 16,7, 10,4, 6,7 Hz, 16H), 2,11 (s, 3H), 1,83 - 1,70 (m, 10H), 1,63 - 1,32 (m, 120H), 0,92 (t, J = 6,6 Hz, 18H).

EMAR: calculado: 790,20129; encontrado: 790,20123 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3069, 2927, 1641, 1544, 1461,723.

Dicloruro de 3,14,25-trihidroxi-42,42-dioctil-2,10,13,21,24-pentaoxo-3,9,14,20,25,31-hexaaza-42-fosfapentacontan-31,42-diio

¹H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 3,69 - 3,60 (m, 6H), 3,23 - 3,13 (m, 4H), 3,01 (t, J = 7,9 Hz, 4H), 2,79 (t, J = 7,1 Hz, 4H), 2,48 (q, J = 7,1 Hz, 4H), 2,33 -2,16 (m, 8H), 2,12 (s, 3H), 1,72 - 1,26 (m, 70H), 0,93 (t, J = 6,5 Hz, 9H). EMAR: calculado: 535,44080; encontrado: 535,44135 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3116 (s), 2928 (s), 2856 (m), 2331 (m), 1641 (m), 1558 (m), 724 (m).

Ejemplo 9

Tricloruro de 13-(10-(dimetil(fenil)fosfonio)decil)-19,30,41-trihidroxi-2-metil-20,23,31,34,42-pentaoxo-2-fenil-13,19,24,30,35,41-hexaaza-2-fosfatritetracontan-2-io

Se disolvieron bromuro de dimetilfenilbromodecilfosfonio (1,3 g mg; 2,9 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (190 mg; 0,30 mmol; 1 eq.) y NaHCO³ (1,17 g; 0,014 mol; 47 eq.) en DMF seca (20 ml) y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl³/MeOH/NH³ ; 80/20/2).

Se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO³ por filtración y se evaporaron los disolventes. Se disolvió el producto en bruto en metanol/H²O (5 ml) y se filtró a través de DOWEX (25 ml). Se evaporaron todos los disolventes y se purificó el producto como cloruro mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3 -CHCl3/MeoH/NH3100/15/1,5). La reacción dio una espuma de color amarillo de la estructura 12 (54 mg, 57%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 88,04 - 7,67 (m, 10H), 3,62 (qd, J = 8,1, 6,9, 4,7 Hz, 6H), 3,23 - 3,15 (m, 4H), 3,04 (s, 6H), 2,78 (s, 4H), 2,57 -2,44 (m, 12H), 2,24 (dd, J = 12,7, 3,1 Hz, 12H), 2,11 (s, 3H), 1,75 - 1,27 (m, 40H).

EMAR: calculado: 557,38465; encontrado: 557,38488 (m/z = 3)

IR (gránulo de KBr): v = 3434 (m), 3260 (m), 3063 (w), 2928 (s), 2856 (m), 1638 (s), 1548 (m), 1457 (m), 1438 (m), 1122 (m), 998 (m), 749 (m), 692 (m).

Ejemplo 10

Bromuro de (10-(4-hidroxibutoxi)decil)trifenilfosfonio

Se disolvieron butan-1,4-diol (1 g; 0,011 mol) y NaH (480 mg; 0,012 mol) en DMF (10 ml) y se agitaron a ta 15 minutos. Después de eso, se añadió gota a gota bromuro de trifenilfosfoniobromodecilo (7,7 g; 0,014 mol) en DMF (20 ml) y se agitó la mezcla de reacción a ta 1 hora. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH 10:1). Se lavó la reacción entre 5 ml de agua y DCM (3 x 10 ml). La cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH 0-10%) dio el producto como un aceite de color amarillo de la estructura 13 (1,5 g; 24%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 7,99 -7,69 (m, 15H), 3,58 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,45 (dt, J = 13,2, 6,2 Hz, 4H), 1,82 -1,43 (m, 12H), 1,31 (d, J = 9,1 Hz, 10H).

EMAR: calculado: 491,30734; encontrado: 491,30750 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3078 (w), 3054 (w), 3008 (w), 2928 (s), 2855 (s), 1587 (m), 1576 (m), 1485 (m), 1465 (m), 1438 (s), 1373 (m), 1114 (s), 1058 (m), 996 (m), 750 (m), 723 (m), 691 (m).

Ejemplo 11

Bromuro de (10-(4-bromobutoxi)decil)trifenilfosfonio

Se disolvieron bromuro de (10-(4-hidroxibutoxi)decil)trifenilfosfonio (0,5 g; 0,87 mmol), tetrabromometano (0,75 g; 2,2 mmol) y trifenilfosfina (0,68 g; 2,6 mmol) en DCM (10 ml) y se agitaron a ta durante la noche. Se monitorizó la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH 10:1). Se extinguió la reacción mediante la adición de NaHCO3 acuoso saturado y se extrajo con DCM (30 ml). La cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH 25:1) dio un aceite de color amarillo de la estructura 14 (280 mg; 50%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 88,08 - 7,57 (m, 15H), 3,47 (dt, J = 7,7, 6,5 Hz, 4H), 3,43 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 1,93 (p, J = 6,9 Hz, 2H), 1,77 - 1,64 (m, 4H), 1,62 -1,51 (m, 4H), 1,42 -1,21 (m, 12H).

EMAR: calculado: 553,22294; encontrado: 553,22316

IR (gránulo de KBr): v = 3053 (m), 3006 (w), 1927 (s), 1854 (s), 1587 (m), 1485 (m), 1465 (m), 1438 (s), 1114 (s), 996 (m), 750 (m), 723 (m), 691 (m).

Ejemplo 12

Tricloruro de 3-(difenil(3,14,25-trihidroxi-2,10,13,21,24-pentaoxo-31-(4-((10-(trifenilfosfonio)decil)oxi)butil)-36-oxa-3,9,14,20,25,31-hexaazahexatetracontan-31-io-46-il)fosfonio)bencen-1-ida

Se disolvieron bromuro de (10-(4-bromobutoxi)decil)trifenilfosfonio (1,14 g mg; 1,8 mmol; 10 eq.), sal de mesilato de deferoxamina (118 mg; 0,18 mmol; 1 eq.) y NaHCO3(711 mg; 8,46 mmol; 47 eq.) en DMF seca y se calentaron hasta 60°C mientras se agitaban durante 4 h. Después de eso, se enfrió la reacción hasta ta y agitó durante la noche. Se monitorizó el avance de la reacción mediante CCF (CHCl3/MeOH/NH3; 80/20/2). Se diluyó la reacción en 20 ml de DCM, se eliminó el NaHCO3 por filtración y se evaporaron los disolventes. Se filtró el producto a través de DOWEX (45 ml) y se evaporaron los disolventes. Se purificó el producto mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (CHCl3/MeOH/NH3100/10/1). La reacción dio una espuma de color amarillo claro de la fórmula 15 (155 mg, 55%).

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 7,99 - 7,65 (m, 30H), 3,73 - 3,55 (m, 8H), 3,57 - 3,37 (m, 14H), 3,18 (tt, J = 6,9, 2,9 Hz, 4H), 2,78 (q, J = 4,8, 2,9 Hz, 4H), 2,60 (s, 6H), 2,47 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 2,11 (d, J = 1,9 Hz, 3H), 1,74 - 1,20 (m, 58H).

EMAR: calculado: 753,47346; encontrado: 753,47410 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3411 (m), 3257 (m), 3058 (m), 2929 (s), 2855 (s), 1640 (s), 1588 (m), 1485 (m), 1460 (m), 1439 (s), 1370 (m), 1114 (s), 1045 (m), 996 (m), 748 (m), 724 (m), 691 (m).

Ejemplo 13

Tricloruro de (15,26-diacetoxi-4-acetil-2,11,14,22,25-pentaoxo-32-(10-(trifenilfosfonio)decil)-3-oxa-4,10,15,21,26,32-hexaazadotetracontan-32-io-42-il)trifenilfosfonio

Se disolvió el compuesto 2 (20 mg; 0,0139 mmol) en DCM (1 ml) y se enfrió hasta 4°C, se añadieron Ac2O (0,024 ml; 0,250 mmol) y piridina (0,01 ml; 0,125 mmol). Se agitó la reacción 1 hora a 4°C y luego se dejó hasta ta. El análisis de CCF (cHCl3/MeOH 5:1) indicó la conversión completa del material de partida. Se enfrió la mezcla de reacción hasta 4°C y se añadieron 5 ml de Et2O. Se eliminó el producto lentamente por precipitación como un aceite y se eliminó el disolvente por decantación. Se disolvió el precipitado en DCM (3 ml) y se evaporaron los disolventes residuales a vacío. La reacción dio 20 mg (90%) de producto esencialmente puro de la fórmula 16.

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 87,97 - 7,69 (m, 30H), 3,70 (td, J = 20,1, 17,8, 9,8 Hz, 6H), 3,48 - 3,38 (m, 4H), 3,23 - 3,11 (m, 4H), 3,12 - 3,00 (m, 4H), 2,59 (s, 4H), 2,48 (t, J = 7,1 Hz, 4H), 2,24 (s, 9H), 1,95 (s, 3H), 1,79 - 1,45 (m, 26H), 1,47 - 1,25 (m, 24H).

EMAR: calculado 744,43179; encontrado 744,43214 (m/z = 2)

IR (gránulo de KBr): v = 3058 (m), 2928 (s), 2854 (s), 1791 (m), 1653 (s), 1558 (m), 1457 (m), 1440 (m), 1111 (m), 990 (m), 724 (m), 691 (m).

Ejemplo 14

Tricloruro de (39-acetil-18,21,29,32,41-pentaoxo-17,28-bis(palmitoiloxi)-11-(10-(trifenilfosfonio)decil)-40-oxa-11,17,22,28,33,39-hexaazahexapentacontil)trifenilfosfonio

Se disolvió el compuesto 2 (20 mg; 0,0139 mmol) en DCM (1 ml) y se enfrió hasta 4°C, se añadieron cloruro de palmitoílo (0,08 ml; 0,25 mmol) y piridina (0,01 ml; 0,125 mmol). Se agitó la reacción 1 hora a 4°C y luego se dejó hasta ta. El análisis de CCF (CHCl3/MeoH 5:1) indicó la conversión completa del material de partida. Se enfrió la mezcla de reacción hasta 4°C y se añadieron 5 ml de Et2O. Se eliminó el producto lentamente por precipitación como un aceite y se eliminó el disolvente por decantación. Se repitió la precipitación del producto (1 ml de diclorometano 5 ml de Et2O a 4°C) seis veces. Se disolvió el precipitado final en DCM (3 ml) y se evaporaron los disolventes residuales a vacío. La reacción dio 20 mg (67%) de producto esencialmente puro de la fórmula 17.

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 88,04 - 7,65 (m, 30H), 3,70 (t, J = 21,5 Hz, 4H), 3,43 (dtd, J = 16,3, 8,5, 4,9 Hz, 4H), 3,24 -3,08 (m, 10H), 2,51 (d, J = 32,4 Hz, 10H), 1,99 (s, 3H), 1,81 - 1,19 (m, 128H), 0,92 (t, J = 6,8 Hz, 9H).

EMAR: calculado: 1038,76044; encontrado: 1038,76068

IR (gránulo de KBr): v = 3081 (m), 3057 (m), 2925 (s), 2854 (s), 1786 (m), 16663 (s), 1588 (m), 1560 (m), 1484 (m), 1465 (m), 1457 (m), 1439 (m), 1114 (m), 1081 (m), 996 (m), 750 (m), 724 (m), 692 (m).

Ejemplo 15

Bromuro de (10-azidodecil)trifenilfosfonio

Se disolvió bromuro de (10-bromodecil)trifenilfosfonio (500 mg, 0,889 mmol) en DMF (15 ml) y se añadió azida de sodio (575 mg, 8,845 mmol) en una porción con agitación. Se calentó la mezcla a 80°C durante la noche. Se monitorizó la reacción con CCF (tinción con PMA, cloroformo/metanol/amonio 80/20/2, el Rf del material de partida es igual que el del producto 0-0,2, pero se produce un color ligeramente diferente durante el calentamiento de la placa). Se eliminó la azida de sodio por filtración después de enfriar hasta la temperatura de laboratorio, se evaporó la DMF y se purificó el material en bruto con una columna corta de gel de sílice (eluyente: cloroformo/metanol 10/1). Se obtuvo el producto en forma de 450 mg (96%) de aceite de color amarillento de la fórmula 18.

¹H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 7,98 - 7,76 (m, 15H), 3,46 (ddd, J = 16,4, 8,2, 5,4 Hz, 2H), 3,30 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,71 (m, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,46 - 1,22 (m, 10H).

EMAR: calculado para C²⁸H³⁵ N³ P 444,25631; encontrado: 444,25643.

IR (gránulo de KBr): v = 3395, 3052, 2926, 2854, 2094, 2003, 1587, 1485, 1438, 1345, 1256, 1190, 1162, 1113, 996, 790, 751, 723, 691,616, 533, 509.

Ejemplo 16

N1-(5-(di(prop-2-in-1-il)amino)pentil)-N1-hidroxi-N4-(5-(N-hidroxi-4-((5-(N-hidroxiacetamido)pentil)amino)-4-oxobutanamido)pentil)succinamida

Se disolvió mesilato de deferoxamina (100 mg, 0,1523 mmol) en DMF (2 ml) y se añadió NaHCO³ (384 mg, 4,571 mmol) en una porción seguido de bromuro de propargilo (33 |^a l, 0,306 mmol) como disolución al 80% en tolueno. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 4 horas y se monitorizó con CCF (tinción con PMA, cloroformo/metanol/amonio 80/20/2, Rf0,45). Cuando se completó la reacción, se permitió que la mezcla de reacción se enfriara hasta la temperatura de laboratorio, se añadió diclorometano (5 ml) se filtró la mezcla de reacción, se evaporó y se secó. Se purificó el producto en bruto con una columna de gel de sílice (eluyente: cloroformo/metanol/amonio 80/20/2) para obtener 69 mg (71%) del producto en forma de sólido de color blanco/amarillo de la fórmula 19.

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) ⁸ 4,58 (s, 2H), 3,60 (t, J = 7,0 Hz, 6H), 3,44 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 3,17 (t, J = 7,0 Hz, 4H), 2,77 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 2,63 (t, J = 2,4 Hz, 2H), 2,58 - 2,52 (m, 2H), 2,49 - 2,42 (m, 4H), 2,09 (s, 3H), 1,71 - 1,59 (m, 6H), 1,58 - 1,47 (m, 7H), 1,40 - 1,27 (m, 8H).

EMAR calculado para C31H53O8N6637,39194; encontrado: 637,39240, calculado para C3iH53O8N6Na 659,37388; encontrado: 659,37393.

IR (gránulo de KBr): v = 3323, 3290, 3143, 2929, 2857, 2113, 1654, 1623, 1565, 1457, 1268, 1253, 1192, 1159, 960, 726, 676.

Ejemplo 17

Trifenil(10-(5-(8,19,30-trihidroxi-9,12,20,23,31-pentaoxo-2-((1-(10-(trifenilfosfonio)decil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)metil)-2,8,13,19,24,30-hexaazadotriacontil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)decil)fosfonio

Se colocó bispropargildeferoxamina 19 (60 mg, 0,094 mmol) junto con ascorbato de sodio (4 mg, 0,020 mmol) y CuSO4.5H2O (10 mg, 0,040 mmol) en un matraz y se añadió bromuro de (10-azidodecil)trifenilfosfonio (100 mg, 0,190 mmol) disuelto en DMF (1 ml) y agua (1 ml). Se agitó la mezcla de reacción a 60°C durante 1 hora. Se monitorizó la reacción con CCF (tinción con PMA, cloroformo/metanol/amonio 80/20/2, Rf 0,1). Cuando se completó la reacción, se evaporaron los disolventes, se secó el material en bruto y se purificó con una columna de gel de sílice (eluyente: cloroformo/metanol/amonio 80/20/2) para obtener 138 mg (87%) del producto en forma de aceite de color marrón claro de la fórmula 20.

1H-RMN (500 MHz, metanol-d4) 88,05 (s, 2H), 7,94 - 7,75 (m, 30H), 4,43 (t, J = 6,9 Hz, 4H), 3,87 (s, 4H), 3,66 - 3,54 (m, 6H), 3,49 - 3,40 (m, 4H), 3,24 - 3,13 (m, 4H), 2,83 - 2,74 (m, 4H), 2,52 (m, 2H), 2,50 - 2,44 (m, 4H), 2,12 (s, 3H), 1,92 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 1,73 - 1,60 (m, 10H), 1,60 - 1,48 (m, 10H), 1,41 - 1,21 (m, 20H).

EMAR calculado para C87H122O8N12P2 (m/z = 2) 762,44864; encontrado: 762,44881

IR (gránulo de KBr): v = 3421,3259, 2927, 2855, 2212, 1636, 1586, 1546, 1483, 1458, 1438, 1416, 1319, 1257,1213, 1193, 1160, 1113, 1052, 1025, 996, 792, 750, 723, 690, 531,509, 414.

Ejemplo 18

Se sometieron a prueba el compuesto 1 y el compuesto 2 para determinar su eficacia para destruir células cancerosas MCF7 malignas. En resumen, se sembraron 10.000 células por pocillo en una placa de 96 pocillos en un día y al día siguiente se añadieron compuestos seleccionados y se incubaron con las células durante 48 h. Entonces se fijaron las células con paraformaldehído al 4%, se tiñeron con cristal violeta al 0,05%, se lavaron con PBS y se solubilizaron en SDS al 1%. Entonces se midió la absorbancia de la placa a 595 nm, cuantificando el número de células viables. Los datos muestran que el compuesto 2 era más eficaz y se sometió a prueba adicionalmente. Ambos compuestos mostraron una eficacia notablemente aumentada en comparación con la deferoxamina (DFO) parental. La comparación se muestra en la tabla 1.

Tabla 1: el efecto de DFO, compuesto 1 y compuesto 2 sobre la viabilidad celular en células MCF7 malignas después de 48 h de incubación tal como se mide con el ensayo de cristal violeta que combina el efecto citostático así como el citotóxico. Los datos representan porcentajes medios de células viables en comparación con controles no tratados mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Ejemplo 19

El compuesto 2 muestra capacidad para destruir células cancerosas (MCF7 y T47D) mientras que evita células no malignas (BJ), tal como se documenta en la tabla 1 que representa la tinción con cristal violeta realizada como en el ejemplo 18 (que mide el efecto inductor de muerte celular y antiproliferativo combinado) de células tratadas tanto con DFO como con compuesto 2. De manera importante, los valores de CI⁵⁰ in vitro del compuesto 2 recién sintetizado son de casi dos órdenes de magnitud menores en comparación con la DFO parental, lo que sugiere que es un compuesto altamente activo (tabla 1, 2). Además, el compuesto muestra valores de CI⁵⁰ significativamente menores en las células malignas (MCF7, T47D, MDA-MB-231, BT474) en comparación con fibroblastos BJ no malignos (tabla 2a, 2b, 3).

Se sometieron a prueba varios compuestos de la presente invención para determinar la citotoxicidad hacia al menos algunas de las líneas celulares de cáncer de mama humano (MCF7, MDA-MB-231), fibroblastos humanos (BJ) y línea celular de cáncer de mama triple negativo murino 4T1 (tabla 2).

Tabla 2a: el efecto de DFO y los compuestos de la presente invención sobre la viabilidad celular en células malignas (MCF7, T47D, MDA-MB-231, BT474, 4T1) y no malignas (BJ) después de 48 horas de incubación, tal como se mide con ensayo de cristal violeta. Los datos representan valores medios de CI⁵⁰ mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Tabla 2b: el efecto del compuesto 2 sobre la viabilidad celular en células de ovario y pancreáticas malignas (NIH:OVCAR-3, SK-OV-3, AsPC-1, BxPC-3, CFPAC-1, PaTu 8902) y células no malignas (BJ) después de 48 horas de incubación, tal como se mide con ensayo de cristal violeta. Los datos representan valores medios de CI⁵⁰ mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Tabla 3: índice de selectividad para el compuesto 2 (CI⁵⁰ no maligna/CI⁵⁰ maligna) en células MCF7, T47D, MDA-MB-231 y BT474 después de 48 horas de incubación, tal como se mide con ensayo de cristal violeta realizado como en el ejemplo 18.

Ejemplo 20

Para someter a prueba si el compuesto 2 es activo contra células cancerosas resistentes, se usaron las líneas celulares MCF7, T47D y BT474 resistentes a tamoxifeno. Los valores de CI⁵⁰ se midieron de nuevo con el ensayo de cristal violeta realizado como en el ejemplo 18. Se ha documentado que no existe diferencia estadísticamente significativa en la capacidad del compuesto 2 para inducir efectos citostáticos y citotóxicos entre las células parentales sensibles a tamoxifeno y las resistentes que crecen incluso en presencia de tamoxifeno (tabla 4). Esta observación, junto con los datos que sugieren que es eficaz también en las líneas celulares de cáncer de mama triple negativo tales como MBA-MB-231 y BT549, muestran que el compuesto 2 es activo incluso en los subtipos de cáncer difíciles de tratar.

Tabla 4: el efecto del compuesto 2 sobre la inducción de muerte celular en células (parentales) malignas (MCF7, T47D, BT474) y sus homólogos resistentes a tamoxifeno (Tam5R) que se hicieron crecer en presencia de tamoxifeno 5 |iM. Los datos representan valores medios de CI⁵⁰ obtenidos mediante el ensayo de cristal violeta mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar

Ejemplo 21

El compuesto 2 muestra eficacia y selectividad tal como se observa en las tablas anteriores. Para confirmar tales hallazgos mediante un método independiente, la potencia de inducción de muerte celular (eficacia citotóxica) de DFO y el compuesto 2 se han sometido a prueba mediante tinción con anexina V/PI habitualmente usada como medición de la muerte celular apoptótica/necrótica. En resumen, se sembraron células en una placa de 12 pocillos a 100.000 por pocillo, se incubaron con los compuestos seleccionados durante 48 horas, luego se centrifugaron las células en flotación, se sometieron a tripsinización las células adherentes y se centrifugaron también seguido de tinción con sondas de anexina V-FITC y PI. Entonces se lavaron las células con PBS y se midieron mediante un clasificador activado por fluorescencia. Las células que exhiben positividad para anexina V y/o PI se consideran células muertas. Tal como se muestra en la tabla 5, el compuesto 2 exhibe una capacidad notablemente potenciada para inducir muerte celular en comparación con DFO en todas las células de cáncer de mama malignas. De manera importante, las células BJ no malignas fueron significativamente menos sensibles al efecto del compuesto 2, y el efecto tóxico pudo detectarse sólo en concentraciones mayores de 20 |iM donde todas las células cancerosas sometidas a prueba exhibieron una gran proporción de células muertas (tabla 5). Esto también muestra que el efecto sobre la viabilidad celular en la tinción con cristal violeta para células BJ es más bien inhibición de la proliferación (efecto citostático) mientras que en otras células malignas es un efecto combinado de inhibición de la proliferación e inducción de muerte celular, a menos que se usen altas dosis por encima de 20 |iM donde comienza a ser no selectivo.

Tabla 5: el efecto del compuesto 2 y DFO sobre la inducción de muerte celular en células malignas (MCF7, T47D, MDA-MB-231, BT549, BT474) y no malignas (BJ) tal como se mide con ensayo de anexina V/PI después de 48 h. Los datos representan el porcentaje medio de células muertas mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Ejemplo 22

La aplicación del compuesto 2 conduce a una inhibición marcada de respiración celular tal como resulta evidente por dos método independientes: el instrumento Oxygraph (Rohlenova, K., Sachaphibulkij, K., Stursa, J., Bezawork-Geleta, A., Blecha, J., Endaya, B., Werner, L., Cerny, J., Zobalova, R., Goodwin, J., Spacek, T., Alizadeh, P.E., Yan, B., Nguyen, M.N., Vondrusova, M., Sobol, M., Jezek, P., Hozak, P., Truksa, J., Rohlena, J., Dong, L.F., & Neuzil, J. (2017) Selective Disruption of Respiratory Supercomplexes as a New Strategy to Suppress Her2high Breast Cancer. Antioxid.Redox.Signal., 26, 84-103) (tabla 6) e instrumento Seahorse (tabla 7). Para el análisis con Seahorse, se sembraron 20.000 ó 30.000 células en placas de 96 pocillos y se incubaron con el compuesto 2 durante 1 hora. Después de eso, se midieron la tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de acidificación extracelular (ECAR) en tres ciclos de 3 minutos precedidos de 3 minutos de mezclado, usando un analizador Seahorse XFe96 (Agilent). Los resultados expresan los valores medios de los tres ciclos.

Tabla 6: el efecto del compuesto 2 sobre la respiración celular en células MCF7 tal como se mide con el instrumento OXYGRAPH. Los números representan el flujo de O2 medio por células (pmol*s-1*ml-1) mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Tabla 7: el efecto del compuesto 2 sobre la tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de acidificación extracelular (ECAR) en células MCF7 tal como se mide con el instrumento Seahorse. Los números representan la tasa de consumo de oxígeno media (OCR; pmol*min-110,000 células-1) o la tasa de acidificación extracelular media (ECAR; mpH*min-110,000 células-1) mientras que los números entre paréntesis en ambos casos representan desviaciones estándar.

Ejemplo 23

Dado que el compuesto 2 es un quelante de hierro, se ha evaluado el efecto de tratar previamente el compuesto 2 con hierro a una razón 1:1 usando la tinción con anexina V/PI como en el ejemplo 7. Tal tratamiento previo redujo significativamente el grado de muerte celular inducido por este quelante, lo que confirma que las propiedades quelantes del hierro son importantes para su acción en la inducción de muerte celular (tabla 8).

Tabla 8: el efecto de cargar previamente hierro sobre la eficacia del compuesto 2 para destruir células cancerosas (MCF7, T47D) tal como se mide mediante la tinción con anexina V/PI, realizada de manera idéntica al ejemplo 7, después de 48 h de incubación. Los números representan el porcentaje medio de células muertas mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Ejemplo 24

La capacidad del compuesto 2 para afectar a la proliferación e inducción de muerte celular en tiempo real se monitorizó mediante la tecnología Xcelligence que detecta cambios en la impedancia eléctrica relacionados con el número de células. En resumen, se llenaron con medio placas electrónicas de 16 pocillos especiales que contenían electrodos de oro, se registraron los valores del blanco y entonces se sembraron 5.000 células por pocillo en la placa y se dejaron unirse durante 2 horas, seguido de la adición de compuestos. Se monitorizó entonces la impedancia eléctrica a lo largo del tiempo en tiempo real cada 15 minutos. En este caso, se dibuja una línea que refleja el número de células a lo largo del tiempo. Entonces, la lectura es la pendiente de la línea, donde valores positivos reflejan que las células proliferan a lo largo del tiempo, el valor 0 representaría un estado estacionario donde las células no proliferan pero no mueren y valores negativos representan entonces que las células mueren a lo largo del tiempo. Se ha observado una clara inhibición de la proliferación con el compuesto 2 a 1 |iM, un bloqueo completo de la proliferación a una concentración de 2 |iM, mientras que el efecto citotóxico se observa a 5 |iM (tabla 9). Sólo se observó una leve inhibición de la proliferación en puntos de tiempo más largos con DFO, aun así, el bloqueo de la proliferación y el efecto citotóxico no estaban presentes con la DFO en concentraciones similares. Los datos también confirman que el compuesto 2 muestra un efecto muy leve y estadísticamente no significativo sobre la proliferación celular de células BJ no malignas incluso a 5 |iM, mientras que a la misma concentración las células MCF7 malignas ya estaban muriendo; esto respalda la selectividad de los compuestos propuestos.

Tabla 9: el efecto del compuesto 2 y DFO sobre la proliferación celular en células malignas (MCF7) y no malignas (BJ) tal como se mide con la tecnología Xcelligence. Los datos representan valores medios de la pendiente de la línea que mide el número relativo de células en relación con el tiempo mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Ejemplo 25

También se sometió a prueba la capacidad del compuesto 2 para suprimir la proliferación de células cancerosas mediante un enfoque alternativo mediante la monitorización en tiempo real con una analizador celular Juli FL. En resumen, se sembraron células MCF7 o MDA-MB-231 en una placa de 6 pocillos el día antes de alcanzar aproximadamente el 20% de confluencia el día siguiente. Al día siguiente, la cámara del instrumento se centró en un campo particular con aproximadamente el 20% de confluencia y las células se monitorizaron continuamente, registrando la confluencia y el aspecto visual cada 30 minutos durante 48 h. Entonces se expresaron los valores o bien como confluencia simple al final del experimento o bien como pendiente de la línea que representa la confluencia durante un periodo de tiempo dado (tabla 10). Resulta evidente a partir de los datos recogidos que, en consonancia con datos de Xcelligence, se observa inhibición de la proliferación a 1 |iM, un bloqueo completo de la proliferación a 2 |iM y un efecto citotóxico a 5 |iM. El efecto es menos pronunciado en este caso ya que permanecen células muertas en el campo monitorizado y algunas todavía se cuentan como células vivas por el software.

Tabla 10: el efecto del compuesto 2 y DFO sobre la proliferación celular en células MCF7 y MDA-MB-231 malignas tal como se mide con monitorización continua de confluencia celular mediante Juli FL. Los datos representan valores medios de confluencia celular o valores medios de la pendiente de la línea que mide el número relativo de células en relación con el tiempo mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar en ambos casos.

Ejemplo 26

Con el fin de someter a prueba el efecto del compuesto 2 sobre la migración celular, se sembraron células MCF7 o MDA-MB-231 en placas de 12 pocillos, se les dejó alcanzar la confluencia y luego se introdujo un rayado en la monocapa con una punta de pipeta de 10 pl. Al mismo tiempo, el medio de cultivo se intercambió por uno que contenía FBS al 0,05%, que no respalda la proliferación, y la migración de las células en el rayado “transparente” se monitorizó continuamente mediante el sistema JULI FL y se expresó como porcentaje de región no invadida en relación con el área inicial. Los datos demuestran que el compuesto 2 reduce significativamente la migración de células incluso a 1 pM (tabla 11).

Tabla 11: el efecto del compuesto 2 y DFO sobre la migración celular en células MCF7 y MDA-MB-231 tal como se mide mediante monitorización continua de confluencia celular con JULI FL. Los datos representan los valores medios en porcentaje de la porción no invadida del rayado mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar. Las células MDA-MB-231 comenzaron a morir en presencia del compuesto 2 a las 48 h, por tanto los valores son mayores que en la medición de 24 h.

Ejemplo 27

Además, las células sembradas idénticamente al ejemplo 26 se trataron con concentraciones de 1 a 5 pM del compuesto 2 y se registró el movimiento mediante el sistema Juli FL, permitiendo monitorizar el movimiento individual de las células. Se analizó entonces el movimiento mediante el programa Image J para obtener la distancia promedio recorrida dentro de un tiempo especificado. Se detectó una reducción significativa de la longitud total de la trayectoria recorrida cuando las células se expusieron al compuesto 2 (tabla 12).

Tabla 12: el efecto del compuesto 2 y DFO sobre la migración celular en células MCF7 tal como se mide mediante monitorización continua de confluencia celular con Juli FL. Los datos representan valores medios de la distancia recorrida de una célula individual entre marcos (en pm) y la velocidad del movimiento (en pm*min'1) mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar.

Ejemplo 28

Se sometió a prueba adicionalmente el efecto de la longitud del ligador de policarbono de unión sobre la eficacia antineoplásica y se encontró que el acortamiento del poli-ligador de carbono reduce drásticamente la eficacia del compuesto 2. Se sintetizó un compuesto 3 de prueba que contiene el ligador de carbono de cadena de 6C y se sometió a prueba para determinar la eficacia en la destrucción del cáncer mediante el ensayo de cristal violeta, exactamente tal como se describió en el ejemplo 18 (tabla 13).

Tabla 13: el efecto del compuesto 3 sobre la viabilidad celular en líneas celulares malignas (MCF7, MDA-MB-231 y BT474) tal como se mide con ensayo de cristal violeta. Los datos representan los valores medios en porcentaje de células supervivientes en comparación con controles no tratados mientras que los números entre paréntesis representan desviaciones estándar

Ejemplo 29

Para someter a prueba la capacidad del compuesto 2 para llevar compuestos tóxicos selectivamente a las células cancerosas, se sembraron células a 100.000 por pocillo en una placa de 12 pocillos y al día siguiente se añadió compuesto 210 |iM solo (razón 0:1) o se cargó con nitrato de galio o cloruro de galio complejado con el compuesto 2 en diversas razones (razón Ga:compuesto 2 1:5, 1:2, 1:1) o en presencia de nitrato de galio o cloruro solo 5 |iM (razón 1:0). Se ha analizado entonces el porcentaje de células muertas mediante tinción con anexina V/PI tal como se describe en el ejemplo 7. Se ha observado un potenciación significativa en la inducción de muerte celular cuando se combinó galio con el compuesto 2 (tabla 14).

Tabla 14

Ejemplo 30

Con el fin de definir el efecto del compuesto 2 sobre el crecimiento y la progresión tumorales in vivo, se sometió a prueba su efecto sobre el modelo de línea celular de cáncer de mama triple negativo murino singénico 4T1, siendo los ratones Balb/c gamma el huésped inmunodeficiente. A los ratones se les inyectó 1 millón de células por vía s.c. en el flanco derecho. Después de la aparición de tumores (15-60 mm3), los ratones se aleatorizaron en dos grupos independientes, uno que recibía aceite de maíz (control) y otro que recibía el compuesto 2 a 8 mg/kg. Se monitorizó entonces la progresión tumoral mediante obtención de imágenes por ecografía con Vevo770 y los ratones recibieron el tratamiento dos veces a la semana por vía i.p. en aproximadamente 100 ul de aceite de maíz. Los resultados (tabla 15) muestran que las células de cáncer de mama triple negativo están notablemente inhibidas por la dosis de 8 mg/kg que reduce significativamente el crecimiento tumoral relativo. Cada grupo contenía al menos seis ratones y los datos muestran la media y el error estándar de la media entre paréntesis.

Tabla 15: tamaños tumorales relativos en ratones de grupo de control y tratados con el compuesto 2

Ejemplo 31

Con el fin de definir el efecto del compuesto 2 sobre el crecimiento y la progresión tumorales in vivo, se sometió a prueba su efecto sobre el modelo de línea celular de cáncer de mama triple negativo humano MDA-MB-231, siendo los ratones NOD-SCID el huésped inmunodeficiente. A los ratones se les inyectó 1 millón de células por vía s.c. en el flanco derecho. Después de la aparición de tumores (15-60 mm3), los ratones se aleatorizaron en tres grupos independientes, uno que recibía aceite de maíz (control) y dos el compuesto 2 a una dosis de 1 mg/kg u 8 mg/kg. Se monitorizó entonces la progresión tumoral mediante obtención de imágenes por ecografía con Vevo770 y los ratones recibieron el tratamiento dos veces a la semana por vía i.p. en aproximadamente 100 ul de aceite de maíz. Los resultados (tabla 16) muestran que las células de cáncer de mama triple negativo están inhibidas por la dosis de 8 mg/kg que reduce significativamente el crecimiento tumoral relativo. Cada grupo contenía al menos seis ratones y los datos muestran la media y el error estándar de la media entre paréntesis.

Tabla 16: tamaños tumorales relativos en ratones de grupo de control y tratados con el compuesto 2

Ejemplo 32

Se evaluó la potenciación del efecto citotóxico del compuesto 2 en combinación con varios agentes citostáticos. La relación dosis-efecto de fármacos individuales y mezclas del compuesto 2 con paclitaxel, cis Pt (cisplatino), doxorrubicina y fluorouracilo se determinó en la línea de células de cáncer de glándula mamaria humano MDA-MB-231 y la línea de células pancreáticas BxPC3 mediante el ensayo de cristal violeta. El gráfico linealizado de la mediana-efecto de la línea de respuesta a la dosis proporcionó ambos parámetros (CI⁵⁰; línea de tendencia, valor de m (pendiente)) de la ecuación de la mediana-efecto para el tratamiento individual y de combinación [ref: Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies; Ting-Chao Chou: Pharmacol Rev. 58(3),2006, 621-81; Erratum in Pharmacol Rev. 2007;59(1),124]:

Ecuación de la mediana-efecto Gráfico linealizado de la mediana-efecto

La potenciación del efecto de combinación del compuesto 2 se expresó para concentraciones CI⁵⁰, CI⁷⁵, CI⁹⁰, CI⁹⁵ mediante el cálculo del índice de combinación (IC) aplicando el teorema del índice de combinación para fármacos mutuamente excluyentes. En general, el IC se expresó mediante el promedio ponderado de CI⁵⁰, CI⁷⁵, CI⁹⁰, CI⁹⁵ [ref: Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors; Ting-Chao Chou, Paul Talalay: Advances in Enzyme Regulation, volumen 22, 1984, páginas 27-55]:

IC<1 (sinergia); IC = 1 (efecto aditivo); IC >1 (antagonismo)

en la que:

Di = (Dx) u x [% /(% n2)]

D2 = (Dx) ii2 x [n2/(n! n2)]

D1 - dosis del primer fármaco en la mezcla; D2 - dosis del segundo fármaco en la mezcla

Los datos mostrados en la tabla indican una sinergia pronunciada de mezclas del compuesto 2 a razones correspondientes a razones de valores de CI50 de fármacos individuales. Compuesto 2/paclitaxel (2293:1), compuesto 2/cis Pt (1:1,56), compuesto 2/doxorrubicina (26,4:1). En el caso de la línea celular MDA-MB-231, la concentración de paclitaxel a CI75 (paclitaxel) y la concentración de paclitaxel a CI75 (compuesto 2/paclitaxel 2293:1) fue de 0,1420 m-M y 0,0048 |mM, respectivamente. Esto permite una reducción de la dosis del 97% de paclitaxel tóxico sin reducir el efecto citotóxico de CI⁷⁵. La reducción de la dosis de CI⁷⁵ (MDA-MB-231) calculada para la combinación del compuesto 2 y los agentes citostáticos restantes es del 83% para cis Pt (42,2751 |^mM frente a 7,3877 |iM), del 90% para doxorrubicina (3,5789 |iM frente a 0,3407 |iM). La reducción de la dosis de CI⁵⁰ (BxPC3) calculada para la combinación del compuesto 2 y los agentes citostáticos examinados es del 66% para cis Pt (4,184 |iM frente a 1,411 |iM), del 93% para fluorouracilo (48,322 |iM frente a 3,328 |iM). La combinación del compuesto 2 con principios activos antineoplásicos establecidos (fármacos antineoplásicos) conduce a una potenciación significativa del desenlace citotóxico/terapéutico que supera enormemente el efecto aditivo simple definido mediante el valor IC = 1.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   Compuesto de fórmula general I o sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

   

   en la que R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que comprende H; alquilo C1-C6; arilo C6-C10; aril(C6-C10)alquilo(C1-C6); -C(=O)-R’; -C(=O)OR’; -C(=O)NR’R”; -C(=S)R’; -C(=S)NR’R”; en los que R’ y R” se seleccionan independientemente del grupo que comprende H, alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(C6-C10); mientras que alcoxilo C1-C6, alquilo C1-C6, arilo C6-C10, alquil(C1-C6)arilo(C6-C10) pueden no estar sustituidos o estar sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, OH, SH, F, Cl, Br, I, alcoxilo Cl-C4, aciloxilo C1-C4, mercapto C1-C4; y sustituyente de fórmula general II

   

   en la que Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 6 a 16 átomos de carbono, más preferiblemente de 6 a 14 átomos de carbono, incluso más preferiblemente de 8 a 12 átomos de carbono, lo más preferiblemente 10 átomos de carbono, o preferiblemente d e 8 a 16 o d e 10 a 15 carbonos, mientras que opcionalmente uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más anillos heteroaromáticos o anillos aromáticos de 5 miembros o de 6 miembros que contienen los heteroátomos O, S y/o N, preferiblemente fenilenos, triazolilos o piridilenos, y/o uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo pueden reemplazarse por uno o más heteroátomos o restos que contienen heteroátomos seleccionados de O, S, NH, N-OH, y mientras que la cadena de hidrocarbilo puede no estar sustituida o estar sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4, N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes, fenilo, bencilo, O^h , =O, =N-OH, SH, =S, F, Cl, Br, I, alcoxilo C1-C4, aciloxilo C1-C4, mercapto C1-C4, y cada uno de R3, R4, R5 se selecciona independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C10, arilo C6-C12, aril C6-C12-alquilo C1-C2, heteroarilo C5-C12, cicloalquilo C3-C8, en la que cada uno de R1, R2, R3 puede estar opcionalmente sustituido (e independientemente de los demás) con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4; alcoxilo C1-C4; N(H o alquilo C1-C4)2, en el que los alquilos son iguales o diferentes; OH; =O; SH; =S; =N-OH; F; Cl; Br; I; mercapto C1-C4,

   mientras que al menos uno de R1 y R2 es un sustituyente de fórmula general II,

   y

   X- es un anión farmacéuticamente aceptable.

   Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 y R2 se seleccionan independientemente de H, alquilo C1-C6 y sustituyente de fórmula general II.

   Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R3, R4, R5 se seleccionan independientemente de fenilo, bencilo, ciclohexilo, alquilo C1-C10 lineal; opcionalmente uno o más de R3, R4, R5 pueden estar adicionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo que comprende alquilo C1-C4; alcoxilo C1-C4; OH; s H; F; Cl; Br; I; mercapto C1-C4.

   Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que

   - Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono o de 8 a 12 átomos de carbono; o

   - Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono o de 8 a 12 átomos de carbono, en la que uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se reemplazan por uno o más heteroátomos seleccionados de O, S, NH; o

   - Z es una cadena de hidrocarbilo lineal seleccionada de alquileno, alquenileno o alquinileno, que contiene de 6 a 16 átomos de carbono o de 6 a 14 átomos de carbono o de 8 a 12 átomos de carbono, en la que uno o más átomos de carbono en la cadena de hidrocarbilo se reemplazan por uno o más anillos heteroaromáticos o anillos aromáticos de 5 miembros o de 6 miembros, preferiblemente fenileno y/o piridileno y/o triazol.

   5. Método para la preparación de los compuestos de fórmula general I según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que

   un compuesto de fórmula general III

   T - Z - T (III),

   en la que T es halógeno, mesilo, tosilo u otro grupo escindible y Z tiene el significado según la reivindicación 1,

   se somete a una reacción con fosfina trisustituida PR3R4R5, preferiblemente en dimetilformamida, produciendo un derivado de hidrocarbilo de fosfonio trisustituido de fórmula general IV

   

   que luego se condensa con deferoxamina, preferiblemente en DMF en presencia de base, preferiblemente bicarbonato de sodio, produciendo el compuesto de fórmula general I.

   6. Compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso como medicamento, preferiblemente en un método de tratamiento de enfermedades proliferativas.

   7. Compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en un método de tratamiento de cánceres de mama, próstata, GIT, hepático, colorrectal, pancreático, mesotelioma, pulmón o leucemias.

   8. Preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y al menos un metal, preferiblemente galio.

   9. Al menos un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y al menos un metal, preferiblemente galio, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, preferiblemente cáncer, o para su uso como medio de contraste en diagnóstico, tal como visualización in vivo del cáncer, en el que el al menos un compuesto de fórmula I y el al menos un metal se administran simultánea o secuencialmente.

   10. Preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y al menos un principio activo antineoplásico adicional, preferiblemente seleccionado de doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino, fluorouracilo.

   11. Al menos un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y al menos un principio activo antineoplásico adicional, preferiblemente seleccionado de doxorrubicina, paclitaxel, cisplatino, fluorouracilo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, tal como cáncer, en el que el al menos un compuesto de fórmula I y el al menos un principio activo antineoplásico adicional se administran simultánea o secuencialmente.