ES2887850T3

ES2887850T3 - Composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn

Info

Publication number: ES2887850T3
Application number: ES17157844T
Authority: ES
Inventors: Nobuyuki Yasuda; Kiyoshi Oketani; Hiroko Baba; Tomohisa Nakano; Masahiko Mori
Original assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 2016-02-29
Filing date: 2017-02-24
Publication date: 2021-12-28
Anticipated expiration: 2037-02-24
Also published as: EP3211007A1; EP3211007B1; JP2017154975A

Abstract

Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 13 **(Ver fórmula)** una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 14 **(Ver fórmula)** una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, y la concentración mínima media del anticuerpo anti-fractalquina es 80 μg/ml o más.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn

Campo de la invención

La presente solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud de Patente Japonesa No. 2016-036604, presentada el 29 de febrero de 2016.

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina.

Descripción de la técnica relacionada

La fractalquina (que también se denomina “FKN”) es una quimiocina unida a la membrana que se expresa en la superficie de una célula endotelial vascular por estimulación inflamatoria de LPS, TNF-a, IL-1, o similares. Las células que expresan un receptor de FKN, CX3CR1, se unen a la FKN unida a la membrana sin la mediación de selectina o integrina, y provocan una fuerte adhesión celular. Además, la FKN secretora que se desprende de la FKN unida a la membrana exhibe una actividad de migración celular en células NK, células T y monocitos que tienen CX3CR1. La expresión de FKN es inducida por citocinas proinflamatorias en la superficie de una célula endotelial vascular. Se ha dado a conocer que se observa un aumento en la expresión de FKN y acumulación de linfocitos efectores citotóxicos CX3CR1+ y macrófagos en pacientes que tienen enfermedad de Crohn (que también se denomina “EC”).

Hasta la fecha, FKN se ha considerado una diana terapéutica prometedora para la colitis ulcerosa (que también se conoce como “CU”) y la enfermedad inflamatoria intestinal (que también se conoce como “EN”) tal como la EC (Ann. NY Acad. Sci. 2009; 1173: 350-356). Además, se ha sugerido que un anticuerpo anti-fractalquina que inhibe la interacción de FKN con CX3CR1 es capaz de tratar la EII, incluyendo la enfermedad de Crohn (documento WO2006/046739). De este modo, se ha sugerido que un anticuerpo capaz de unirse a FKN e inhibir la acción de la FKN es eficaz para el tratamiento de la enfermedad de Crohn.

Hasta la fecha, el presente solicitante ha dado a conocer una pluralidad de anticuerpos monoclonales de ratón antifractalquina humana (hFKN) (clones 1F3-1, 3A5-2, 1F3, 1G1,2B2, 3D5, 3H7, 6D1, 7F6, y 5H7-6). En particular, dado que el clon 3A5-2 tiene una alta actividad neutralizante, afinidad de unión y reactividad cruzada entre especies con hFKN, se ha humanizado y se ha denominado “H3-2L4” en el documento WO2011/052799.

Es un objeto de la presente descripción proporcionar una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-fractalquina (que también se conoce como un “anticuerpo anti-FKN” en la presente descripción) que proporciona una mejora terapéuticamente eficaz para la enfermedad de Crohn, después de que se ha administrado a un sujeto humano.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-FKN, que se usa para proporcionar mejoras terapéuticamente eficaces para la enfermedad de Crohn.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable como se describe a continuación con más detalle.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 muestra la concentración sérica media de H3-2L4 a lo largo del tiempo, después de la administración intravenosa de una sola dosis del anticuerpo H3-2L4 (grupos de administración de 0,04 mg/kg, 0,2 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, y 10 mg/kg);

la FIG. 2 muestra la concentración sérica media de H3-2L4 a lo largo del tiempo, después de la administración intravenosa de múltiples dosis del anticuerpo H3-2L4 (grupos de administración de 2 mg/kg, 5 mg/kg y 10 mg/kg); la FIG. 3 muestra la concentración sérica media de FKN total a lo largo del tiempo, después de la administración intravenosa de múltiples dosis del anticuerpo H3-2L4 (grupos de administración de 2 mg/kg, 5 mg/kg y 10 mg/kg); y

la FIG. 4 muestra la PCR de siete sujetos en la Cohorte 3 (grupo de 10 mg/kg) a lo largo del tiempo, hasta 12 semanas después de la administración.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS

1. La presente invención se refiere a:

[1] Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 13

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTAD

KSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS); una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 14 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTIS SLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK); y una región constante de isotipo IgG2 humano, en el que la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, y la concentración mínima media del anticuerpo anti-fractalquina es 80 mg/ml o más.

[2] En una segunda realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica para uso según la realización [1], en la que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano.

[3] En una realización adicional, la invención se refiere a una composición farmacéutica para uso según la realización [1], en la que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano.

[4] En aún otra realización, la invención se refiere a una composición farmacéutica para uso según la realización [¹], en la que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano.

[5] Y en aún otro aspecto, la invención se refiere a la composición farmacéutica para uso según una cualquiera de las realizaciones [1] a [4], que se administra mediante administración intravenosa de múltiples dosis a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas.

2. Esquema y definición de la invención

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, proporcionando así una mejora terapéuticamente eficaz de la enfermedad de Crohn.

Una “mejora terapéuticamente eficaz de la enfermedad de Crohn” puede significar que se muestra una mejora terapéuticamente eficaz en uno o más criterios de evaluación de la enfermedad de Crohn, que se han establecido en el campo técnico actual. Los ejemplos de dichos criterios de evaluación que se pueden usar aquí incluyen, pero no se limitan a, el índice de actividad de la enfermedad de Crohn (también denominado “CDAI”), la puntuación de The International Organization for the study of Inflammatory Bowel Disease (también denominada “puntuación IOIBD”), y el índice de actividad holandés (también denominado “Dutch-AI”), en el que los síntomas de la enfermedad inflamatoria intestinal, tales como diarrea, dolor intestinal, estado común, complicación parenteral, absceso perianal, fístula, fiebre, y reducción de peso se muestran como índices de actividad. Además, otro ejemplo de tales criterios de evaluación es la detección del nivel sérico de proteína C reactiva (también denominada “PCR”) en pacientes.

Con respecto a la clasificación de gravedad según CDAI, un valor de menos de 150 indica remisión, un valor de 150 a 219 indica un caso leve de actividad de la enfermedad, un valor de 220 a 450 indica un caso medio de actividad de la enfermedad, y un valor de más de 450 indica un caso grave de actividad de la enfermedad.

Según el sistema de clasificación anterior, cuando la puntuación CDAI antes del tratamiento es 220 o más, y la puntuación CDAI después del tratamiento se reduce en 70 o más, y más preferiblemente en 100 o más, usando la puntuación CDAI antes del tratamiento como línea de base, o cuando la puntuación CDAI después del tratamiento es preferiblemente menor que 150 (remisión), significa que “se proporciona una mejora terapéuticamente eficaz de la enfermedad de Crohn”.

En una realización de la presente invención, la “concentración sérica terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-FKN” es la concentración mínima media de un anticuerpo anti-FKN que es 80 mg/ml o más.

La composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-FKN, que se usa para proporcionar la concentración sérica del anticuerpo anti-FKN que es terapéuticamente eficaz para un sujeto humano, después de la administración de múltiples dosis de la composición farmacéutica al sujeto humano. La forma de la composición farmacéutica de la presente invención no está particularmente limitada, y normalmente puede ser la forma de una formulación inyectable preparada para administración intravenosa. En una realización, se usa la composición farmacéutica para uso según la presente invención, de manera que la concentración mínima media del anticuerpo anti-FKN es 80 mg/ml o más.

En la presente invención, las propiedades farmacocinéticas de una curva de concentración-tiempo, tal como la concentración sérica máxima observada (Cmax), el tiempo para alcanzar C max (Tmax), y un área bajo la curva de concentración sérica-tiempo (AUC), se examinan mediante métodos estadísticos suficientemente establecidos en el campo de la farmacocinética. Cuando la relación entre la media poblacional de los parámetros de evaluación descritos anteriormente en una preparación de estudio y la media poblacional de los parámetros de evaluación descritos anteriormente en una preparación estándar es 0,80 a 1,25, las dos preparaciones generalmente se consideran biológicamente equivalentes entre sí.

En la presente invención, los valores medios de los parámetros farmacocinéticos, tales como Cmax o AUC, se pueden calcular mediante cualquier método de la media geométrica, la media aritmética, y la mediana. En la presente descripción, la Cmax media, la AUC media, la concentración mínima media, y la concentración media de tFNK se indican con el valor medio aritmético, a menos que se especifique lo contrario. Incluso si el valor medio como diana se calcula mediante un método que es diferente del método descrito en la presente descripción, si el valor medio calculado mediante el método descrito en la presente descripción está dentro del intervalo numérico descrito en las reivindicaciones, se pretende que el valor medio calculado pertenezca a las reivindicaciones según la presente invención.

En la presente invención, con respecto a la dosis del anticuerpo anti-FKN, “una dosis” o “a una dosis” significa la cantidad absoluta del anticuerpo anti-FKN para una sola administración. En consecuencia, cuando se usa la expresión “a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano”, por ejemplo, significa que el anticuerpo anti-FKN se administra en una cantidad calculada multiplicando 10 mg por el peso corporal humano (kg), mediante la administración de un conjunto de, o se usan simultáneamente dos o más conjuntos de, la composición farmacéutica de la presente invención.

En la presente invención, con respecto a los intervalos de dosificación del anticuerpo anti-FKN, por ejemplo, la expresión “intervalos de dosificación de una vez a la semana a una vez cada dos semanas” significa un intervalo de dosificación de un número de administración n° (en el que n es un número entero) a un número de administración n+1 ° que es de una semana a dos semanas. El intervalo de dosificación desde el número de administración n° al número de administración n+1 ° puede ser diferente de un intervalo de dosificación desde un número de administración n+1 ° a un número de administración n+2°. Por ejemplo, un caso en el que el intervalo de dosificación desde la primera administración hasta la segunda administración es 1 semana, y el intervalo de dosificación desde la segunda administración hasta la tercera administración es 2 semanas, está incluido naturalmente en los “intervalos de dosificación de una vez por semana a una vez cada dos semanas”.

En la presente descripción, la expresión “ser humano” o “sujeto humano” se usa para referirse a un varón adulto sano, y típicamente a cualquier ser humano que presente la enfermedad de Crohn, o los signos y síntomas clínicos de cualquier enfermedad o trastorno dado, que pueden desarrollar la enfermedad de Crohn. En la presente invención, el “ser humano” o el “sujeto humano” es preferiblemente un paciente con enfermedad de Crohn que no ha obtenido suficientes efectos terapéuticos en al menos un momento del tratamiento estándar (corticosteroide, un inmunomodulador y/o un anticuerpo anti-TNF), o que no ha tenido efectos terapéuticos continuos a partir del mismo, o que ha sido intolerante al mismo.

2. Anticuerpo anti-FKN

El anticuerpo anti-FKN usado según la invención se describe con más detalle en la sección de ejemplos.

En la presente invención, cuando se hace referencia a un anticuerpo anti-FKN, el anticuerpo anti-FKN significa el anticuerpo anti-fractalquina humana humanizado H3-2L4, o un anticuerpo funcionalmente equivalente al mismo. En la presente invención, el “anticuerpo funcionalmente equivalente” significa un anticuerpo equivalente al anticuerpo H3-2L4, en términos de al menos uno cualquiera, o preferiblemente dos o más de afinidad de unión a FKN humana, actividad neutralizante, reactividad cruzada, y farmacocinética sanguínea.

En la presente invención, cuando se hace referencia a un anticuerpo anti-FKN, el anticuerpo anti-FKN puede incluir un fragmento de unión a antígeno del mismo. Tal fragmento de unión a antígeno no está particularmente limitado, siempre que sea un fragmento funcional y estructural del anticuerpo anti-FKN, que retiene la capacidad de unión a FKN y no es significativamente diferente de un anticuerpo completo del mismo en términos de farmacocinética sanguínea. Los ejemplos de tal fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo incluyen, pero no se limitan a, Fab, Fab’, F(ab’)², Fv, Fv monocatenario (scFv), sus variantes, y otras estructuras de modificación, tales como una proteína de fusión que comprende una porción de anticuerpo y una molécula de inmunoglobulina que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno.

En una realización, el anticuerpo anti-FKN de la presente invención puede ser cualquier anticuerpo dado que comprenda las siguientes secuencias de CDR:

(a) CDR-H1 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 15 (NYYIH);

(b) CDR-H2 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 16 (WIYPGDGSPKFNERFKG);

(c) CDR-H3 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 17 (GPTDGDYFDY);

(d) CDR-L1 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 18 (RASGNIHNFLA);

(e) CDR-L2 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 19 (NEKTLAD); y

(f) CDR-L3 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 20 (QQFWSTPYT).

En otra realización, el anticuerpo anti-FKN puede ser un anticuerpo que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la región variable de cadena pesada del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEC ID NO: 21 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSDDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), SEQ ID NO: 13 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTADKST NTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), SEQ ID NO: 22 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTRDKST NTAYMELSSLRSDDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), SEQ ID NO: 23 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTMTADTS TSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), o SEQ ID NO: 24 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTADKST STAYMELSSLRSEDTAVYFCARGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), y la región variable de cadena ligera del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 25 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKFLVYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTQYTLTISSL QPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK), SEQ ID NO: 14 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSL QPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK), o SEQ ID NO: 26

(DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLAD

GVPSRFSGSGSGTQYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK).

En una realización preferida, el anticuerpo anti-FKN puede ser un anticuerpo que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en el que la región variable de cadena pesada del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 13 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTADKST NTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS), y la región variable de cadena ligera del anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 14

(DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLAD

GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK).

El anticuerpo anti-FKN es un anticuerpo que comprende una región constante de isotipo IgG2 humano.

El anticuerpo anti-FKN es un anticuerpo en el que la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A.

En una realización particularmente preferida de la presente invención, el anticuerpo anti-FKN es el anticuerpo H3-2L4, que consiste en una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos se muestra en SEQ ID NO: 11 (QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTADKST NTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP APPAAAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTV VHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK) y una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 12

(DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLAD

GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIKRTVAAP

SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD

STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC).

Un anticuerpo, que se obtiene modificando apropiadamente el anticuerpo anti-FKN ejemplificado anteriormente (por ejemplo, modificación del anticuerpo, o sustitución parcial, adición o supresión de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo), al tiempo que retiene la función del anticuerpo, o para añadir o mejorar la función del anticuerpo, también se incluye en el anticuerpo de la presente invención. Más específicamente, un anticuerpo cuya lisina (Lys) ubicada en el extremo carboxi (extremo C) de una cadena pesada se ha eliminado mediante un método artificial tal como la modificación genética para reducir la heterogeneidad de un anticuerpo generado a partir de células productoras de anticuerpos también está incluido en el alcance de la presente invención. Además, el anticuerpo anti-FKN comprendido en la composición farmacéutica de la presente invención no tiene necesariamente una homogeneidad completa, y así, el presente anticuerpo anti-FKN incluye, por ejemplo, un anticuerpo que elimina la lisina (Lys) ubicada en el extremo carboxi terminal (C-terminal) de una cadena pesada del mismo, y un anticuerpo que no elimina dicha lisina, siempre que mantenga las funciones previstas por la composición farmacéutica de la presente invención.

El anticuerpo anti-FKN se puede modificar, según se desee. El anticuerpo anti-FKN puede modificarse para cambiar (a) la estructura tridimensional de una secuencia de aminoácidos en una región modificada, por ejemplo tal como una conformación de hoja o hélice; (b) el estado cargado o hidrófobo de una molécula en un sitio diana; o (c) el efecto de la modificación sobre el mantenimiento del volumen de una cadena lateral. De lo contrario, también puede ser una modificación en la que dichos cambios no se observen claramente.

La modificación del anticuerpo anti-FKN se puede lograr, por ejemplo, mediante sustitución, supresión, adición, o similar, de restos de aminoácidos constitucionales.

En la presente descripción, el término “aminoácido” se usa para tener la definición más amplia, y de este modo, los ejemplos del aminoácido incluyen no solo aminoácidos naturales, tales como serina (Ser), asparagina (Asn), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (Ile), alanina (Ala), tirosina (Tyr), glicina (Gly), lisina (Lys), arginina (Arg), histidina (His), ácido aspártico (Asp), ácido glutámico (Glu), glutamina (Gln), treonina (Thr), cisteína (Cys), metionina (Met), fenilalanina (Phe), triptófano (Trp), y prolina (Pro), sino también aminoácidos no naturales, tales como variantes de aminoácidos y derivados. Teniendo en cuenta una definición tan amplia del aminoácido, un experto en la técnica podría comprender naturalmente que los ejemplos del aminoácido mencionado en la presente descripción incluyen: L-aminoácido; D-aminoácido; aminoácidos químicamente modificados, tales como variantes de aminoácidos y derivados de aminoácidos; aminoácidos que no pueden ser materiales para constituir proteínas in vivo, tales como norleucina, b-alanina y ornitina; y compuestos sintetizados químicamente que tienen las propiedades de los aminoácidos conocidos por una persona experta. Ejemplos del aminoácido no natural incluyen a-metil aminoácidos (a-metil alanina, etc.), D-aminoácidos (ácido D-aspártico, ácido D-glutámico, etc.), aminoácidos similares a la histidina (2-aminohistidina, b-hidroxi-histidina, homohistidina, a-fluorometilhistidina, a-metilhistidina, etc.), aminoácidos que tienen metileno redundante en una cadena lateral del mismo (“homo” aminoácido), y aminoácidos cuyo grupo funcional ácido carboxílico está sustituido por un grupo ácido sulfónico (ácido cisteico, etc.).

Los restos de aminoácidos existentes de forma natural se pueden clasificar en los siguientes grupos, por ejemplo, basándose en las propiedades generales de la cadena lateral:

(1) hidrofobia: Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) hidrofilia neutra: Cys, Ser, Thr;

(3) acidez: Asp, Glu;

(4) basicidad: Asn, Gln, His, Lys, Arg;

(5) restos que influyen en la orientación de la cadena: Gly, Pro; y

(6) aromaticidad: Trp, Tyr, Phe.

La sustitución no conservativa de las secuencias de aminoácidos que constituyen el anticuerpo anti-FKN se puede llevar a cabo intercambiando un aminoácido que pertenece a uno de estos grupos por otro aminoácido que pertenece a otro grupo. Puede llevarse a cabo una sustitución más conservativa intercambiando un aminoácido perteneciente a uno de estos grupos por otro aminoácido perteneciente al mismo grupo. Asimismo, se puede llevar a cabo la supresión o sustitución de una secuencia de aminoácidos, según sea apropiado.

3. Composición y formulación farmacéuticas

La forma de dosificación de la composición farmacéutica de la presente invención no está particularmente limitada, y típicamente es una formulación preparada para uso en administración intravenosa (por ejemplo, una formulación para inyección).

En el caso de la composición farmacéutica de la presente invención, el anticuerpo anti-FKN, junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable, se añade, por ejemplo, a agua para inyección, una disolución salina normal, o una disolución salina amortiguada con fosfato, de manera que se puede preparar en forma de formulación inyectable. Los ejemplos del excipiente farmacéuticamente aceptable usado en la presente invención incluyen un estabilizador, un tensioactivo y un conservante. Los excipientes representativos usados para la producción de una formulación para inyección y el procedimiento de producción de la misma son conocidos en el presente campo técnico, y se puede hacer referencia a, por ejemplo, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 1985, Ansel, H. C., Lea y Febiger, Philadelphia, Pa.; Remington’s Pharmaceutical Sciences 1995, Mack Publ. Co., Easton, Pa. Estas publicaciones se incorporan aquí como referencia en su totalidad.

4. Dosis, intervalos de dosificación, y número de dosis

La composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se administra a un sujeto humano en una dosis que proporciona al sujeto la concentración sérica de un anticuerpo anti-FKN que es terapéuticamente eficaz para la enfermedad de Crohn. Por ejemplo, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se administra de manera que la concentración mínima media del anticuerpo anti-FKN sea 80 mg/ml o más.

En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano a 15 mg/kg de peso corporal humano. En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano o 15 mg/kg de peso corporal humano.

El número de dosis y los intervalos de dosificación de la composición farmacéutica o del anticuerpo anti-FKN de la presente invención se pueden cambiar dependiendo de la cantidad del anticuerpo anti-FKN en una sola administración y la vía de administración.

En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos meses. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez a la semana a una vez al mes. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas. En una realización específica de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa, en una dosis única de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez a la semana dos veces, y después a intervalos de dosificación de una vez cada dos semanas.

En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos meses. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez a la semana a una vez al mes. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas. En una realización específica de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un sujeto humano que lo necesita, en una dosis única de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez por semana dos veces, y después a intervalos de dosificación de una vez cada dos semanas.

En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos meses. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez al mes. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas. En una realización específica de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un sujeto humano que lo necesita, a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez por semana dos veces, y después a intervalos de dosificación de una vez cada dos semanas.

En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos meses. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez a la semana a una vez al mes. En otra realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra a un sujeto humano que lo necesita mediante administración intravenosa de múltiples dosis, en una sola dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas. En una realización específica de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención se usa de manera que el anticuerpo anti-FKN se administra por vía intravenosa a un sujeto humano que lo necesita, a una dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano, a intervalos de dosificación de una vez por semana dos veces, y después a intervalos de dosificación de una vez cada dos semanas.

El número de dosis de la composición farmacéutica o del anticuerpo anti-FKN de la presente invención no está particularmente limitado, siempre que proporcione una mejora terapéuticamente eficaz de la enfermedad de Crohn, y puede cambiarse dependiendo de la cantidad del anticuerpo anti-FKN administrado como una sola dosis, la vía de administración, y los intervalos de dosificación.

En una realización de la presente invención, la composición farmacéutica o el anticuerpo anti-FKN de la presente invención puede administrarse por vía intravenosa a un sujeto a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas, al menos 2 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 6 veces, al menos 7 veces, al menos 8 veces, al menos 9 veces, al menos 10 veces, al menos 11 veces, al menos 12 veces, al menos 13 veces, al menos 14 veces, al menos 15 veces, al menos 16 veces, al menos 17 veces, al menos 18 veces, al menos 19 veces, al menos 20 veces, al menos 21 veces, al menos 22 veces, al menos 23 veces, al menos 24 veces, al menos 25 veces, al menos 26 veces, al menos 27 veces, o más veces, de modo que la concentración mínima media del anticuerpo anti-FKN es 80 mg/ml o más.

En un aspecto, la presente invención es una composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que la composición farmacéutica se caracteriza por que el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 13

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG

SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGT

TVTVSS) ;

una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 14 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTIS SLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK); y

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y

la composición farmacéutica se usa de manera que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano.

En otro aspecto, la presente invención es una composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que la composición farmacéutica se caracteriza por que

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG

SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGT

TVTVSS) ;

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y la composición farmacéutica se usa de manera que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano.

En un aspecto adicional, la presente invención es una composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que la composición farmacéutica se caracteriza por que

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG

SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGT

TV TV SS);

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y la composición farmacéutica se usa de manera que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano.

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG

SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGT

TV TV SS);

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y la composición farmacéutica se usa de manera que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano.

En un aspecto preferido, la presente invención es una composición farmacéutica para tratar la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que la composición farmacéutica se caracteriza por que

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que consiste en:

una cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTAD

KSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCC

VECPPCPAPPAAAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS

TFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY

PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

K); y

una cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 12 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTIS SLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC), en la que la composición farmacéutica se usa de manera que el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano.

En una realización preferida, la composición farmacéutica descrita anteriormente es una composición farmacéutica que se administra a un ser humano mediante administración intravenosa de múltiples dosis a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas.

Según la presente invención, la composición farmacéutica descrita anteriormente es una composición farmacéutica que se administra por vía intravenosa, de manera que la concentración mínima media del anticuerpo anti-fractalquina descrito anteriormente es 80 mg/ml o más.

En una realización preferida, la composición farmacéutica descrita anteriormente es una composición farmacéutica en la que el anticuerpo anti-fractalquina descrito anteriormente se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano a intervalos de dosificación de una vez por semana tres veces, y después a intervalos de dosificación de una vez cada dos semanas al menos 7 veces.

En otro aspecto, la presente invención es una composición farmacéutica para uso en un método terapéutico de la enfermedad de Crohn, en la que

la composición farmacéutica comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que

el método terapéutico comprende administrar el anticuerpo anti-fractalquina a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, en la que

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDG

SPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGT

TVTVSS) ;

una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 14 (DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLAD GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK); y

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A.

En una realización de la presente invención, el “ser humano” es un paciente con enfermedad de Crohn que no ha obtenido suficientes efectos de los corticosteroides o un inmunomodulador, o que no ha tenido efectos continuos de los mismos, o que ha sido intolerante a los mismos, o no ha obtenido suficientes efectos del anticuerpo anti-TNF. Las publicaciones citadas en la presente descripción se proporcionan únicamente con el fin de describir la técnica relacionada antes de la fecha de presentación de la presente solicitud.

Los términos usados en la presente descripción se usan para describir realizaciones específicas.

Los términos “comprender” e “incluir” se usan en la presente descripción para indicar que la materia descrita (un miembro, una etapa, un elemento, un número, etc.) está presente, excepto en un caso en el que se debería entender aparentemente por el contexto de manera diferente, y no excluye la presencia de otras materias (miembros, etapas, elementos, números, etc.). La expresión “consiste en” incluye los aspectos indicados con la expresión “consiste en” y/o “consiste esencialmente en”.

A menos que se especifique lo contrario, todos los términos usados aquí (incluyendo los términos técnicos y los términos científicos) tienen los mismos significados que los entendidos ampliamente por una persona experta en la técnica a la que pertenece la presente invención. A menos que se especifique claramente lo contrario, los términos usados aquí deben interpretarse con significados que son consistentes con los significados de la presente descripción y el campo técnico relacionado, y los términos no deben interpretarse como significados ideales o excesivamente formales.

Los términos, tales como un “primer”, un “segundo”, y similares, se usan para expresar diversos elementos. Se entiende que estos elementos no deben estar limitados por estos términos. Estos términos solo se usan para distinguir un elemento de otro elemento, y así, por ejemplo, es posible describir un primer elemento como un segundo elemento, e igualmente, describir un segundo elemento como un primer elemento, sin desviarse del alcance de la presente invención.

En la presente descripción, debe entenderse que los valores numéricos usados para expresar el contenido de componentes o intervalos numéricos y similares se modifican con el término “aproximadamente”, a menos que se especifique claramente lo contrario. Por ejemplo, se entiende que el término “10 mg” significa “aproximadamente 10 mg”, a menos que se especifique claramente lo contrario. En consecuencia, es natural que una persona experta en la técnica pueda comprender teóricamente el grado de un valor numérico según el conocimiento técnico habitual y el contexto de la presente descripción.

Excepto en un caso en el que un aspecto contextualmente de forma aparente tiene otro significado, cuando un aspecto que se da en forma singular se usa en la presente descripción y reivindicaciones, se entiende que dicho aspecto también puede tener una forma plural, y viceversa, a menos que incluya una contradicción técnica.

A continuación, la presente invención se describirá con más detalle con referencia a los siguientes ejemplos.

Las abreviaturas usadas en los siguientes ejemplos son abreviaturas habitualmente usadas que son bien conocidas por un experto en la técnica. A continuación, se describirán varias abreviaturas.

AUC: área bajo la curva de concentración sérica-tiempo

AUC(⁰-inf): área bajo la curva de concentración sérica-tiempo desde el tiempo cero extrapolado a tiempo infinito AUC(⁰-t): área bajo la curva de concentración-tiempo desde tiempo cero hasta el momento de la última concentración cuantificable

AUC(0-336h): área bajo la curva de concentración-tiempo desde cero (antes de la dosis) hasta el punto de tiempo fijo 336 h (2 semanas) después del final de la infusión

CDAI: índice de actividad de la enfermedad de Crohn

CL: aclaramiento total

PCR: proteína C reactiva

Cmax: concentración sérica máxima

ELISA: ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas

FKN: fractalquina

IgG: inmunoglobulina G

NONMEN: modelo de efectos mixtos no lineal

SAS: sistema de análisis estadístico

t ^1/2: semivida de eliminación sérica

tmax: tiempo para alcanzar la concentración sérica máxima

Vd: volumen de distribución

Ejemplos

Ejemplo 1: Preparación de anticuerpo humanizado anti-fractalquina humana

En el siguiente estudio de administración en un ser humano, se usó un anticuerpo humanizado anti-fractalquina humana H3-2L4. La preparación de H3-2L4, que incluyó la humanización, se llevó a cabo de la misma manera que se describe en el documento WO2011/052799. El H3-2L4 usado en el Ejemplo 2 y los ejemplos posteriores se preparó mediante el método descrito en el siguiente 1-1 y 1-2.

1 -1. Vector de expresión

Se produjo un vector de expresión para el anticuerpo humanizado anti-fractalquina humana (H3-2L4) como sigue. Primero, se añadió una secuencia señal (SEQ ID NO: 3) al extremo N-terminal de la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 1) de una región variable de cadena pesada (H3-2) del anticuerpo humanizado anti-fractalquina humana (H3-2L4), y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 4) de la región constante de IgG2 humana, en la que se habían insertado dos mutaciones (V234A y G237A), se añadió al extremo C de la misma (SEQ ID NO: 5). Posteriormente, se añadió una secuencia señal (SEQ ID NO: 6) al extremo N-terminal de la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 2) de una región variable de cadena ligera (L4) del anticuerpo humanizado anti-fractalquina humana (H3-2L4), y la secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 7) de la región constante de IgK humana se añadió al extremo C-terminal del la misma (SEQ ID NO: 8). Para permitir que estas secuencias de aminoácidos (SEQ ID NOS: 5 y 8) se expresen en células CHO, se convirtieron en secuencias de genes óptimas. Al extremo 5’ de cada secuencia génica, se añadieron una secuencia de reconocimiento de la enzima de restricción HindIII y una secuencia de Kozak, y al extremo 3’ de la misma, se añadieron un codón de parada y una secuencia de reconocimiento de la enzima de restricción EcoRI, de modo que las secuencias se sintetizaron totalmente (SEQ ID NOS: 9 y 10).

Cabe señalar que las secuencias especificadas con SEQ ID NOS: 1 a 10 son las siguientes.

Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 1) de una región variable de cadena pesada (H3-2)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGS

PKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTT

VTVSS

Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 2) de una región variable de cadena ligera (L4)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADG

VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK

Secuencia señal (SEQ ID NO: 3)

MEWSWVFLFFLSVTTGVHS

Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 4) de la región constante de IgG2 humana, en la que se han insertado dos mutaciones (V234A y G237A)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL

QSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPA

AAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR

EEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVY

TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL

YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

(SEQ ID NO: 5)

MEWSWVFLFFLSVTTGVHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVK

QAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYF

CATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYF

PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPS

NTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSH

EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSN

KGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE

SNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQK

SLSLSPGK

Secuencia señal (SEQ ID NO: 6)

MSVPTQVLGLLLLWLTDARC

Secuencia de aminoácidos (SEQ ID NO: 7) de la región constante de IgK humana

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT

EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

(SEQ ID NO: 8)

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQ

QKPGKAPKLLIYNEKTLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWST

PYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD

NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKS

FNRGEC

(SEQ ID NO: 9)

AAGCTTGCCGCCACCATGGAATGGTCCTGGGTGTTCCTGTTCTTCCTGTCCGTGACC ACCGGCGTGCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCT GGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCACCAACTACTAC ATCCACTGGGTGAAACAGGCCCCAGGACAGGGCCTGGAATGGATCGGCTGGATCTAC CCCGGCGACGGCTCCCCCAAGTTCAACGAGCGGTTCAAGGGCCGGACCACCCTGACC GCCGACAAGTCCACCAACACCGCCTACATGCTGCTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGAT ACCGCCGTGTACTTCTGCGCCACCGGCCCTACCGACGGCGACTACTTCGACTACTGG GGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGTCCTCTGCCTCCACCAAGGGCCCCTCCGTGTTC CCTCTGGCCCCTTGCTCCCGGTCCACCTCTGAGTCTACCGCCGCTCTGGGCTGCCTG GTCAAAGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACAGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACC TCTGGAGTGCATACCTTCCCTGCCGTGCTGCAGTCATCCGGCCTGTACTCCCTGTCC TCCGTGGTGACAGTGCCCTCCTCCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGTAACGTG GACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAACGGAAGTGCTGCGTG GAATGCCCCCCCTGTCCTGCCCCTCCTGCCGCCGCTCCTTCCGTGTTTCTGTTCCCC CCAAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTG GTGGACGTGTCCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTG GAAG T G CACAAC G C CAAGAC CAAG C C CAGAGAG GAACAG T T CAAC T C CAC C T T C C G G GTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAAAAGACCATCAGCAAGACC AAGGGCCAGCCCCGCGAGCCCCAGGTGTACACACTGCCCCCCAGCCGGGAAGAGATG ACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCTCCGATATC GCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCC ATGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACAGTGGACAAGTCC CGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAAC CACTACACCCAGAAGTCCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGTGATGAATTC

(SEQ ID NO: 10)

AAGCTTGCCGCCACCATGTCCGTGCCCACCCAGGTGCTGGGCCTGCTGCTGCTGTGG

CTGACCGACGCCAGATGCGACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCCAGCCTGTCCGCC

TCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTCGGGCCTCCGGCAACATCCACAACTTT

CTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACAACGAA

AAGACCCTGGCCGACGGCGTGCCCTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCCGGCACCGAC

TACACCCTGACCATCTCCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTTTTGCCAG

CAGTTCTGGTCCACCCCCTACACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAAATCAAGCGG

ACCGTGGCCGCTCCCTCCGTGTTCATCTTCCCACCCTCCGACGAGCAGCTGAAGTCC

GGCACCGCCTCCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGCGAGGCCAAGGTG

CAGTGGAAGGTGGACAACGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAGGAATCCGTCACCGAG

CAGGACTCCAAGGACAGCACCTACTCCCTGTCCTCCACCCTGACCCTGTCCAAGGCC

GACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGC

CCCGTGACCAAGTCCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGATGAATTC

La secuencia génica totalmente sintetizada que codifica una cadena pesada se escindió con las enzimas de restricción HindIII y EcoRI, y después se insertó en el sitio HindIII-EcoRI de un vector pEE6.4 (Lonza). La secuencia génica totalmente sintetizada que codifica una cadena ligera se escindió con las enzimas de restricción HindIII y EcoRI, y después se insertó en el sitio HindIII-EcoRI de un vector pEE12.4 (Lonza). Cada uno de los dos vectores se escindió con las enzimas de restricción NotI y PvuI, y los fragmentos de vector que contenían cada uno una cadena pesada o una cadena ligera se ligaron entre sí para construir un vector de expresión.

1-2. Construcción de una línea celular que expresa el anticuerpo H3-2L4, y obtención del anticuerpo H3-2L4 El vector de expresión construido se introdujo mediante electroporación en células CHOK1SV (Lonza) acondicionadas en un medio de CD-CHO/L-glutamina 6 mM. Una vez completada la introducción del gen, la selección se llevó a cabo en un medio de CD-CHO/MSX 50 uM en un ambiente de 37°C/10% de CO², para obtener células que expresan un anticuerpo de interés. Posteriormente, las células se clonaron para producir un banco de células. El banco de células producido se revivió y cultivó, y después se purificó un sobrenadante de cultivo mediante cromatografía para obtener el anticuerpo H3-2L4 de interés.

El anticuerpo H3-2L4 obtenido según las operaciones descritas anteriormente tenía una cadena pesada y una cadena ligera con las secuencias de aminoácidos mostradas en SEQ ID NOS: 11 y 12, respectivamente.

Cadena pesada de longitud completa de H3-2L4 (SEQ ID NO: 11)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGS

PKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTT

VTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT

FPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPC

PAPPAAAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNA

KTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPR

EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD

GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Cadena ligera de longitud completa de H3-2L4 (SEQ ID NO: 12)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADG

VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIKRTVAAPS

VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDS

TYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Además, las secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y de la región variable de cadena ligera del anticuerpo H3-2L4 son las siguientes:

Región variable de cadena pesada de H3-2L4 (SEQ ID NO: 13)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGS

PKFNERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTT

VTVSS

Región variable de cadena ligera de H3-2L4 (SEQ ID NO: 14)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPGKAPKLLIYNEKTLADG

VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK

Además, las secuencias de aminoácidos de CDR-H1 a CDR-H3 y CDR-L1 a CDR-L3 del anticuerpo H3-2L4 son las siguientes:

CDR-H1 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 15)

NYYIH CDR-H2 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 16)

WIYPGDGSPKFNERFKG CDR-H3 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 17)

GPTDGDYFDY CDR-L1 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 18)

RASGNIHNFLA CDR-L2 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 19)

NEKTLAD CDR-L3 de H3-2L4 (SEQ ID NO: 20)

QQFWSTPYT

Ejemplo 2: Estudio de administración de una sola dosis

Se usaron sujetos varones adultos sanos, y se llevó a cabo un ensayo de fase I para evaluar la seguridad, la tolerabilidad, y la farmacocinética, cuando se administró H3-2L4 a los sujetos mediante administración intravenosa de una sola dosis.

2-1. [Diseño del ensayo]

El presente ensayo fue un estudio de escalamiento de una sola dosis que incluyó una sola institución, aleatorización, bienmascarado, y control de placebo, que se llevó a cabo con el objetivo principal de evaluar la seguridad y la tolerabilidad cuando se administró H3-2L4 a sujetos varones japoneses adultos sanos mediante administración intravenosa de una sola dosis. En el presente ensayo, 64 sujetos se dividieron en 8 cohortes (grupos de 0,0006, 0,006, 0,04, 0,2, 1,3, 6 y 10 mg/kg), y posteriormente, mediante administración intravenosa de una sola dosis, se administró H3-2L4 a 6 sujetos en cada uno de las 8 cohortes, y a 2 sujetos en ellas se les administró placebo.

El presente ensayo se constituyó con un período de cribado, un período de hospitalización de observación, un período de hospitalización de administración (ensayo bienmascarado), un período de seguimiento de fase 1 (ensayo bienmascarado), y un período de seguimiento de fase 2 (establecido solo para las Cohortes 5 a 8: ensayo no enmascarado).

Dentro de un período de 27 días a 2 días antes de la administración de un fármaco de ensayo, se realizó una prueba de cribado, y un día antes de la administración del fármaco, se llevó a cabo una prueba realizada en un período de hospitalización de observación, para confirmar la elegibilidad. Los sujetos cuya elegibilidad había sido confirmada fueron asignados aleatoriamente a un grupo de H3-2L4 o a un grupo de placebo, según una lista de asignación preparada por un oficial de asignación. Con respecto a dos sujetos en cada cohorte el día 1, a un sujeto se le asignó la administración de H3-2L4, y al otro sujeto se le asignó la administración de placebo, seguido de la administración. Los seis sujetos restantes se asignaron a cinco sujetos de administración de H3-2L4 y un sujeto de administración de placebo, y la administración se llevó a cabo del día 2 al día 4. El número de sujetos a los que se administró el fármaco el mismo día se fijó en 2, y dos o más horas después del inicio de la administración a un sujeto, se llevó a cabo la administración al otro sujeto. El fármaco de ensayo se administró a los sujetos disolviendo H3-2L4 o el placebo en una disolución salina normal, y después administrando la disolución obtenida a los sujetos durante aproximadamente 30 minutos mediante infusión intravenosa por goteo. El presente ensayo se llevó a cabo mediante una administración de una sola dosis, y la administración a los sujetos se realizó una sola vez, independientemente de la hora de las comidas.

Durante una semana después de la finalización de la administración, los sujetos se observaron e inspeccionaron en el hospital, y posteriormente, en el servicio ambulatorio, se observaron e inspeccionaron las Cohortes 1 a 4 (grupos de 0,0006, 0,006 y 0,04 mg/kg) hasta las 8 semanas después de la finalización de la administración, y se observaron e inspeccionaron las Cohortes 5 a 8 (grupos de 0,2, 1,3, 6 y 10 mg/kg) hasta 24 semanas después de la finalización de la administración.

La migración de cohortes se llevó a cabo en base a los resultados de seguridad obtenidos de cada cohorte, cuando tanto un investigador del ensayo como un cliente del ensayo (un representante de un experto médico, una persona a cargo del departamento de seguridad para los clientes del ensayo, y un cliente del ensayo) juzgaron que no habría problemas con la migración de cohortes. En principio, dicha migración de cohortes se llevó a cabo en un intervalo de 3 semanas después de completar la administración al primer sujeto en la cohorte anterior.

Los tipos de los fármacos de ensayo usados en el presente estudio fueron los siguientes.

[Tabla 1]

Tabla 1. Tipos de fármacos de ensayo

2-2. [Administración de fármacos de ensayo]

H3-2L4 o placebo se diluyó con una disolución salina normal, dependiendo del peso corporal de cada sujeto, para ajustar las cantidades de líquidos administrados como se muestra en la Tabla 2. Tras la administración, empleando una bomba de jeringa o una bomba de infusión, cada disolución se administró a los sujetos mediante infusión intravenosa por goteo usando un filtro en línea (diámetro de poro: 0,2 pm) durante aproximadamente 30 minutos (incluyendo el lavado con disolución salina normal).

[Tabla 2]

Tabla 2. Cantidades de líquidos administrados y tipos de bombas

Grup Fármaco de ensayo líquid Bomba

1 L40,0006 mg/kg o placeb 10 ba de jeringa

2 2L40,006 mg/kg o placebo

3 -2L40,04 mg/kg o placebo

4 -2L40,2 mg/kg o placebo

5 3-2L4 1 mg/kg o placebo 100 ba de infusión

6 3-2L43 mg/kg o placebo

7 3-2L46 mg/kg o placebo

8

-2L4 10 mg/kg o placebo

2-3. [Análisis de la concentración sérica de H3-2L4]

La concentración sérica de H3-2L4 se midió mediante un método de medida validado. Específicamente, se dejó que H3-2L4 en suero se uniera a fractalquina humana que estaba en fase sólida en una microplaca, y después se dejó reaccionar con ella un anticuerpo policlonal de conejo anti-H3-2L4 marcado con rutenio. Posteriormente, se midió la cantidad de luminiscencia electroquímica usando Sector Imager 6000 (Meso Scale Discovery) para cuantificar la concentración sérica de H3-2L4. La sangre que se utilizará para medir la concentración sérica de H3-2L4 se recogió en el momento de recogida de sangre que se muestra en la siguiente Tabla 3.

[Tabla 3]

2-4. [Análisis de farmacocinética]

La farmacocinética se analizó basándose en los datos relacionados con la concentración sérica de H3-2L4, usando una población de sujetos que tienen datos a partir de los cuales se pueden calcular uno o más parámetros farmacocinéticos (en lo sucesivo denominada “población diana de análisis farmacocinético”). En el presente ensayo, con respecto a 16 sujetos a los que se les había administrado placebo, 6 sujetos a los que se les había administrado 0,0006 mg/kg de H3-2L4, y 6 sujetos a los que se les había administrado 0,006 mg/kg de H3-2L4, la concentración sérica de H3-2L4 de cada sujeto fue menor que el valor límite de cuantificación más bajo (0,100 mg/ml). Por consiguiente, se determinó que 36 sujetos excluyendo a los sujetos antes mencionados eran una población diana de análisis farmacocinético. Se calcularon las estadísticas resumidas de la concentración sérica de H3-2L4 para dosis individuales en períodos predeterminados. Se preparó un diagrama de transición de la concentración sérica de H3-2L4, y después, los parámetros farmacocinéticos que incluían Cmax, W , AUC(⁰-t), AUC(⁰-inf), t ^1/2, CL y Vd se calcularon mediante un análisis no compartimental, usando la concentración sérica de H3-2L4. Además, usando la Cmax, la AUC(⁰-t) y la AUC(ü-inf) obtenidas se analizó la proporcionalidad de la dosis. El análisis se realizó usando SAS, WinNonlin, Pharsight Knowledgebase Server, Microsoft Excel, y S-PLUS.

Los resultados así calculados se muestran en la siguiente Tabla 4 y la FIG. 1. Cabe señalar que los valores medios de los parámetros farmacocinéticos que se muestran en la Tabla 4, excepto para el tmax, se muestran en forma de valores medios aritméticos.

[Tabla 4]

Tabla 4. Sumario de parámetros farmacocinéticos tras

la administración intravenosa de una sola dosis de H3-2L4 a adultos sanos

Como resultado del análisis, se consideró que la farmacocinética obtenida por la administración intravenosa de una sola dosis de H3-2L4 mostraría un perfil trifásico compuesto por fase a, fase b y fase g en 0,04 a 10 mg/kg. Después de completar la infusión intravenosa por goteo, estaba presente una fase de distribución inicial que se redujo rápidamente de la Cmax (fase a), y a partir de entonces, se observó una fase de desaparición lenta (fase b) en una concentración alta, y se observó una fase de desaparición final rápida (fase g) en una concentración baja. El punto límite entre la fase gy la fase b se supuso que era alrededor de 10 mg/ml. En los grupos de 0,04 y 0,2 mg/kg, se encontró un perfil de dos fases, y se consideró que la fase g aparecería después de la fase a. En los grupos de 1 a 10 mg/kg, dado que el número de muestras de sangre recogidas necesarias para la evaluación precisa de la fase g como fase de desaparición final era insuficiente, no se pudieron calcular los parámetros farmacocinéticos dependientes de la fase g. Después de completar la infusión intravenosa por goteo durante 30 minutos, casi todos los sujetos alcanzaron la tmax después de 0,5 horas, pero algunos sujetos alcanzaron la tmax después de 6,5 horas. La t¹/²,p fue mayor que la t¹/²,g, y se prolongó con un aumento en la dosis, pero la t^1/2,p en los grupos de 6 y 10 mg/kg se volvió casi igual, por lo que se consideró que llegaría a una meseta. La Cmax se incrementó en proporción a la dosis en grupos de 0,04 a 10 mg/kg. Sin embargo, las AUC(⁰-t) y AUC(⁰-inf) no fueron proporcionales a la dosis, y H3-2L4 mostró una farmacocinética no lineal.

Ejemplo 3: Estudio de administración de múltiples dosis

Se llevó a cabo un estudio clínico de fase I/II mediante la administración intravenosa repetida de H3-2L4 a pacientes con enfermedad de Crohn usados como sujetos, con el fin de evaluar la seguridad, tolerabilidad, farmacocinética, y eficacia en la enfermedad de Crohn.

3-1. [Diseño del ensayo]

El presente ensayo fue un estudio de múltiples dosis ascendentes (DAM) que incluyó juntas multiinstitucionales, no enmascarado, y sin control, que se llevó a cabo con el objetivo principal de evaluar la seguridad y la tolerabilidad cuando se administró H3-2L4 a pacientes japoneses con enfermedad de Crohn usados como sujetos mediante administración intravenosa repetida. En el presente ensayo, no se llevó a cabo la aleatorización. En el presente ensayo, 21 sujetos se dividieron en 6 sujetos, 8 sujetos, y 7 sujetos en Cohortes 1 a 3 (grupos de 2, 5 y 10 mg/kg), respectivamente. Posteriormente, se administró H3-2L4 a los sujetos mediante administración intravenosa repetida. Además, con respecto a la Cohorte 4 (grupo de 15 mg/kg), se administró H3-2L4 a al menos 6 sujetos mediante administración intravenosa repetida.

El presente ensayo se constituyó con un período de cribado, un período de observación, un período de administración, un período de administración continua, y un período de seguimiento.

Se llevó a cabo una prueba de cribado entre 42 y 2 días antes del inicio de la administración del fármaco de ensayo, y se llevó a cabo una prueba de período de observación un día antes de la administración inicial del fármaco de ensayo o antes de la administración el día de la administración. A los sujetos que se confirmó que eran elegibles, se les administró H3-2L4.

Los criterios de selección para la elegibilidad fueron los siguientes:

(1) Pacientes de 20 años o más y menores de 65 años;

(2) Pacientes a los que se les diagnostica la enfermedad de Crohn según los criterios de diagnóstico de la enfermedad de Crohn (2012) por el equipo de “Research Study regarding Refractory Inflammatory Bowel Disease”, Health Labour Sciences Research Grant Study for Refractory Diseases;

(3) Pacientes cuya gravedad en el período de observación es de grado leve a medio (CDAI es 150 o más y menos de 450, según los criterios de diagnóstico de la enfermedad de Crohn); y

(4) Pacientes a los que se les administró una formulación de ácido 5-aminosalicílico (5-ASA), salazosulfapiridina, adrenocorticosteroide, un inmunomodulador, infliximab (incluyendo biosimilares, etc.) o adalimumab en el pasado, y no se encontró que tuvieran efectos, o pacientes que se encontró que tenían efectos, pero después de eso, los efectos se atenuaron o desaparecieron, o pacientes a los que no se pudo continuar la administración debido a efectos secundarios (a excepción de infliximab y adalimumab).

Se disolvió H3-2L4 en aproximadamente 100 ml de disolución salina normal, y después se administró a los pacientes durante aproximadamente 30 minutos mediante infusión intravenosa por goteo. En el período de administración, con respecto a la Cohorte 1 (2 mg/kg) y la Cohorte 2 (5 mg/kg), se administró H3-2L4 a los pacientes cada dos semanas hasta las 10 semanas en un total de 6 veces (dos veces la cantidad en la semana 0), y con respecto a la Cohorte 3 (10 mg/kg) y la Cohorte 4 (15 mg/kg), se administró H3-2L4 a los pacientes en la semana 0, la primera semana, la segunda semana, y después cada dos semanas hasta la décima semana en total de 7 veces. En la evaluación realizada en la semana 12, a los sujetos que no habían tenido problemas con respecto a la seguridad, que tuvieron un índice de actividad de la enfermedad de Crohn (CDAI) de menos de 150 o una reducción en el CDAI del período de observación que es 70 o más, y que desearon la administración continua, se les administró adicionalmente H3-2L4 a la misma dosis como se describe anteriormente, cada dos semanas, 20 veces (40 semanas) (período de administración continua). Con respecto al período de administración continua, la administración podría cambiarse (reducirse) a la administración a la misma dosis descrita anteriormente cada cuatro semanas según el juicio de un investigador del ensayo o un médico a cargo del ensayo (en el que también es posible volver a la administración de una administración cada dos semanas).

La migración de cohortes se llevó a cabo sobre la base de los resultados de seguridad obtenidos de cada cohorte, cuando tanto un investigador del ensayo como un cliente del ensayo juzgaron que no habría problemas con la migración de cohortes.

El tipo del fármaco de ensayo usado en el presente estudio fue el siguiente.

[Tabla 5]

Tabla 5. Fármaco de ensayo

Tipo Forma de dosificación y contenido Fabricante

H3-2L4

osa que contiene 100 mg de H3-2L4 e

Eisai Co., Ltd.

3-2. [Administración del fármaco de ensayo]

Se diluyó H3-2L4 con una disolución salina normal, dependiendo del peso corporal de cada sujeto, para ajustar la cantidad administrada de un líquido que contenía cada dosis de H3-2L4 (aproximadamente 100 ml). Las dosis individuales (2, 5, 10 y 15 mg/kg) y el método de administración son como se muestran en la Tabla 6. El peso corporal usado para calcular la dosis (cantidad total) con respecto al peso corporal se midió en el período de observación, la semana 12, la semana 24 y la semana 36, e incluso si el peso corporal aumentó o disminuyó durante otros períodos, la dosis relativa (cantidad total) no se modificó. Tras la administración, empleando una bomba de infusión, cada disolución se administró a los sujetos mediante infusión intravenosa por goteo usando un filtro en línea (diámetro de poro: 0,2 mm) durante aproximadamente 30 minutos (incluyendo el lavado con disolución salina normal). Cabe señalar que el fármaco de ensayo podría administrarse independientemente de la hora de las comidas.

[Tabla 6]

Tabla 6. Dosis de H3-2L4 y método de administración

Gr

3-3. [Farmacocinética y farmacodinámica]

La concentración sérica de H3-2L4 y la concentración sérica de FKN total se midieron mediante métodos de medida validados. La concentración sérica de H3-2L4 se midió mediante el método descrito en 2-4 del Ejemplo 2. La concentración sérica de FKN total se midió mediante el método de ELISA de sándwich descrito en el documento WO2011/052799, que implica la intercalación con dos tipos de anticuerpos monoclonales anti-fractalquina humana 1F3 y 3A5-2. Específicamente, la FKN total en el suero se capturó mediante 1F3 que estaba en fase sólida en una placa, después se intercaló con 3A5-2 marcado con peroxidasa de rábano picante (HRP), después se hizo reaccionar con 3,3’,5,5’-tetrametilbencidina (TMB) como sustrato de HRP, y después se midió el valor de coloración usando un lector automático (lector de microplacas Envision, Perkin Elmer, Japón), de modo que se cuantificó la concentración sérica de FKN total.

La farmacocinética se analizó en base a los datos de la concentración sérica de H3-2L4, usando una población de sujetos a los que se les administró el fármaco de ensayo, y como resultado, tenían uno o más datos de concentración sérica de H3-2L4 a evaluar (en adelante denominada “población diana de análisis farmacocinético”). Se calcularon las estadísticas resumidas de la concentración sérica de H3-2L4 para dosis individuales en períodos predeterminados, y se preparó un diagrama de transición de la concentración sérica de H3-2L4.

La farmacodinámica se analizó usando una población de sujetos a los que se les administró el fármaco de ensayo, y como resultado, tenían uno o más datos de biomarcadores farmacodinámicos a evaluar (en lo sucesivo denominada “población diana de análisis farmacodinámico”). Con respecto a los valores de medida de la concentración sérica de FKN total, se calcularon las estadísticas de resumen para dosis individuales en períodos de evaluación predeterminados.

3-3-1. [Concentración sérica de H3-2L4 y concentración sérica de FKN total]

Desde el momento de la administración del fármaco de ensayo hasta la semana 12, se recogió sangre para medir la concentración sérica de H3-2L4 y la concentración sérica de FKN total, dentro de los 10 minutos antes y después de la administración (0 horas), en los períodos indicados con las letras X, que se muestran en la línea de tiempo de la Tabla 7 para las Cohortes 1 y 2, y de la Tabla 8 para las Cohortes 3 y 4. Con respecto a los sujetos que fueron migrados en el período de administración continua, se recogió además sangre cada cuatro semanas hasta la semana 52. Además, los sujetos, que fueron retirados del ensayo durante el período de administración o el período de administración continua, fueron sometidos a extracción de sangre en el momento de la retirada.

[Tabla 7]

Tabla 7. Línea de tiempo para las Cohortes 1 y 2

[Tabla 8]

Tabla 8. Línea de tiempo para las Cohortes 3 y 4

Los valores medios de la concentración sérica de H3-2L4 y la concentración sérica de FKN total en un grupo de administración de 2 mg/kg, un grupo de administración de 5 mg/kg, y un grupo de administración de 10 mg/kg durante el período de administración (12 semanas) (en el que el valor medio se indicó como un valor medio aritmético) se muestran en la Tabla 9 y la Tabla 10, respectivamente. Además, las transiciones en los valores medios de la concentración sérica de H3-2L4 y la concentración sérica de FKN total se muestran en la FIG. 2 y FIG. 3, respectivamente.

[Tabla 9]

Tabla 9. Concentración sérica media de H3-2L4 (mg/ml) durante el periodo de administración (12 semanas)

[Tabla 10]

Tabla 10. Concentración sérica media de FKN total (ng/ml) durante el periodo de administración (12 semanas)

3-4. [Eficacia]

La eficacia se analizó usando una población de sujetos a los que se les administró el fármaco de ensayo, y como resultado, tenían uno o más datos de eficacia después de completar la administración del fármaco de ensayo a evaluar (FAS: Conjunto de Análisis Completo).

Las estadísticas resumidas de CDAI y PCR se calcularon para dosis individuales en períodos de evaluación predeterminados.

El análisis se realizó usando WinNonlin, NONMEM, SAS, etc.

[CDAI]

El CDAI se calculó a partir del diario del sujeto, los resultados de las pruebas correspondientes, etc., en los períodos indicados con las letras X que se muestran en las líneas de tiempo (Tabla 7 y Tabla 8). Además, con respecto a los sujetos que migraron en el período de administración continua, el CDAI se calculó adicionalmente cada cuatro semanas hasta la semana 52 de la misma manera que se describió anteriormente. Al calcular el CDAI, en cuanto a hematocrito y peso corporal, se usaron los valores obtenidos el día de la evaluación, mientras que en cuanto a la altura corporal se utilizó el valor más reciente, que se midió según la línea de tiempo.

Cuando la puntuación del CDAI se redujo en 70 o más, respecto al período de observación, se definió como “mejoría”, y cuando la puntuación del CDAI fue menor que 150, se definió como “remisión”.

El número de sujetos en las Cohortes 1 a 3 en el momento del inicio del presente ensayo fue 6 sujetos, 8 sujetos y 7 sujetos, respectivamente. Hasta la semana 12 después de la primera administración, se terminó el ensayo realizado en 3 sujetos, 2 sujetos y 2 sujetos, respectivamente, en las Cohortes 1 a 3. Cabe señalar que los sujetos en las Cohortes 1 a 3 habían usado previamente el anticuerpo anti-TNF, excepto un sujeto en la Cohorte 2. Los sujetos que habían usado un agente fueron 2 sujetos, 5 sujetos y 3 sujetos, respectivamente, en las Cohortes 1 a 3, mientras que los sujetos que habían usado dos agentes fueron 4 sujetos, 2 sujetos y 4 sujetos, respectivamente. En todos estos sujetos, los efectos obtenidos por el uso del anticuerpo anti-TNF fueron insuficientes.

Entre los sujetos que tenían una puntuación CDAI de 220 o más antes de la administración del fármaco de ensayo, los sujetos que se confirmó que redujeron la puntuación CDAI en 70 o más (CR-70) en la evaluación en el momento de la semana 12, usando la puntuación CDAI antes de la administración del fármaco de ensayo como línea de base, fueron 1 sujeto, 2 sujetos y 4 sujetos, respectivamente, en las Cohortes 1 a 3. Además, se observó una reducción en la puntuación CDAI de 100 o más (CR-100) en 1 sujeto, 1 sujeto y 4 sujetos, respectivamente, en las Cohortes 1 a 3. Además, 3 sujetos en la Cohorte 3 lograron la remisión.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, que comprende un anticuerpo anti-fractalquina y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que

el anticuerpo anti-fractalquina es un anticuerpo que comprende:

(QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVKQAPGQGLEWIGWIYPGDGSPKF

NERFKGRTTLTADKSTNTAYMLLSSLRSEDTAVYFCATGPTDGDYFDYWGQGTTVTVSS);

una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 14

(DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNFLAWYQQKPG KAPKLUYNEKTLADGVPSRFS

GSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQFWSTPYTFGGGTKVEIK); and

una región constante de isotipo IgG2 humano, en la que

la región Fc de la región constante de isotipo IgG2 humano comprende las mutaciones V234A y G237A, y el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de al menos 10 mg/kg de peso corporal humano, y la concentración mínima media del anticuerpo anti-fractalquina es 80 mg/ml o más.

2. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que

el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 a 15 mg/kg de peso corporal humano.

3. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que

el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 10 mg/kg de peso corporal humano.

4. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 1, en la que

el anticuerpo anti-fractalquina se administra por vía intravenosa a un ser humano a una dosis de 15 mg/kg de peso corporal humano.

5. Composición farmacéutica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que se administra mediante administración intravenosa de múltiples dosis a intervalos de dosificación desde una vez por semana hasta una vez cada dos semanas.