ES2881048T3 - Bisaminoquinolinas asimétricas y bisaminoquinolinas con enlazadores variados como inhibidores de la autofagia para el cáncer y otras terapias - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de acuerdo con las estructuras químicas: **(Ver fórmula)** Lys 74: N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N6-(6-((7-cloroquinolin-4-il)amino)hexil)-N6-metilhexano-1,6-diamina **(Ver fórmula)** N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N4-(3-((7-cloroquinolin-4-il)amino)propil)-N4-metilbutano-1,4-diamina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Bisaminoquinolinas asimétricas y bisaminoquinolinas con enlazadores variados como inhibidores de la autofagia para el cáncer y otras terapias
Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad del número de serie de la solicitud provisional de los Estados Unidos US62/034,897, presentada el 8 de agosto de 2014, de título idéntico.
Campo de la invención
La invención proporciona bisaminoquinolinas asimétricas y simétricas novedosas y compuestos relacionados, métodos de tratamiento y síntesis. Los nuevos compuestos exhiben una actividad anticancerosa inesperada y son útiles en el tratamiento de una variedad de trastornos relacionados con la autofagia.
Antecedentes y descripción de la invención
La autofagia consiste en el secuestro de orgánulos y proteínas en vesículas autofágicas (VA) y la degradación de esta carga mediante fusión lisosomal (1). La autofagia permite que las células tumorales sobrevivan al estrés metabólico y terapéutico (2-5). Varias publicaciones indican que la autofagia inducida por la terapia es un mecanismo de resistencia clave a muchos agentes anticancerosos. Los derivados de la cloroquina (CQ) bloquean la autofagia por inhibir el lisosoma (3,6,7). Basado en estos hallazgos, se lanzaron ensayos clínicos que combinan terapias contra el cáncer con hidroxicloroquina (HCQ) (que es más segura que la CQ para aumentar la dosis). Los resultados preliminares indican que estas combinaciones tienen actividad (8-13), pero aún no está claro si esta actividad se debe constantemente a la adición de HCQ. Se requieren altas concentraciones micromolares de HCQ para inhibir la autofagia. Si bien existe alguna evidencia farmacodinámica de inhibición de la autofagia con HCQ en pacientes con cáncer, es inconsistente porque no se alcanzan concentraciones adecuadas en todos los pacientes. Existe una necesidad insatisfecha de desarrollar inhibidores de la autofagia más potentes. El diseño y síntesis de análogos diméricos de CQ, que aprovechan las ventajas termodinámicas impartidas por la polivalencia (14, 15), ha sido un tema de estudio intensivo durante más de 10 años (16-18). Un informe inicial de Vennerstrom (17) describió la síntesis de bisquinolinas con puentes de heteroalcanos como posibles antipalúdicos, pero ninguno de los compuestos tenía suficiente actividad antipalúdica como para justificar una mayor investigación. Posteriormente, Sergheraert (16) informó que las tetraquinolinas, es decir, los dímeros de bisquinolinas, proporcionaron potentes antipalúdicos, lo que confirma la posibilidad de que la solicitud de la estrategia de polivalencia podría aumentar la potencia, al menos con respecto a la actividad antipalúdica.
Más recientemente, Lee (19) ha descrito la potenciación de los inhibidores de AKT por análogos de quinolina fluorada. Solomon (20) ha informado de la preparación de dímeros de cloroquina "reposicionados", basados en el uso de un conector de piperazina. Estos resultados sugieren que estos análogos de cloroquina podrían servir como bases para el desarrollo de un nuevo grupo de quimioterapéuticos efectivos contra el cáncer. Hemos examinado la solicitud de la estrategia de polivalencia (14, 15) a la síntesis de nuevos inhibidores de la autofagia por la preparación de una cloroquina dimérica (LysOl, Figura 11 o 12), a partir de materiales disponibles comercialmente. Recientemente, hemos informado de una serie de los BAI que inhiben de forma potente la autofagia y perjudican el crecimiento tumoral in vivo (21). Los motivos estructurales que son necesarios para mejorar la inhibición de la autofagia en comparación con CQ incluyen la presencia de dos anillos de aminoquinolina y un enlazador de triamina, como se muestra en el compuesto principal, 1 (Lys 01), que es un inhibidor de la autofagia 10 veces más potente que la HCQ. En comparación con HCQ, Lys 05, una sal soluble en agua de Lys01, se acumula más potente dentro del lisosoma y lo desacidifica, lo que da como resultado una autofagia y un crecimiento tumoral deficientes. A la dosis más alta administrada, algunos ratones desarrollaron una disfunción de las células de Paneth que se asemeja al fenotipo intestinal de ratones y humanos con defectos genéticos en el gen de la autofagia ATG16L1(22), lo que proporciona evidencia in vivo de que Lys05 se dirige a la autofagia. A diferencia de la HCQ, se observa una actividad antitumoral significativa como agente único sin toxicidad en ratones portadores de tumores de xenoinjerto tratados con dosis más bajas de Lys05, lo que establece el potencial terapéutico de este compuesto en el cáncer. Sin embargo, si bien Lys05 es 10 veces más potente que la HCQ en los ensayos de autofagia in vitro, es citotóxico solo a concentraciones micromolares en la mayoría de las células cancerosas.
El documento WO2012149186 describe en su esquema 4 los siguientes compuestos, que no inhiben el flujo autofágico:
Figure imgf000003_0002
En la presente invención, demostramos la preparación y la actividad biológica inesperada de las bisaminoquinolinas asimétricas y compuestos relacionados al cambiar la longitud del enlazador y/o interrumpiendo la simetría de los enlazadores empleados previamente. Describimos un aumento inesperado en las propiedades anticancerosas y la capacidad para la inhibición de la autofagia de las aminoquinolinas bivalentes cuando la longitud del enlazador cambia sustancialmente y/o asimétricamente de LysOl.
Antecedentes de la invención
En la presente descripción demostramos la preparación y la actividad biológica inesperada de las bis-4-aminoquinolinas asimétricas y compuestos relacionados al cambiar el enlazador. Describimos el aumento inesperado de las propiedades anticancerosas de las 4-aminoquinolinas bivalentes cuando la longitud del enlazador se cambia sustancial y asimétricamente con respecto al andamio LysOl original.
La invención proporciona compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, específicamente:
Figure imgf000003_0001
Lys-26: X = C1
y
Figure imgf000004_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otras modalidades, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que usan cantidades terapéuticamente efectivas de los compuestos reivindicados para tratar el cáncer y otros trastornos relacionados con la autofagia.
Como se describe adicionalmente más adelante, los compuestos de la invención exhiben un nivel inesperadamente alto de citotoxicidad en una variedad de células cancerosas y evidencian una inhibición efectiva de la autofagia a dosis sorprendentemente bajas, lo que indica su efectividad en el tratamiento de un amplio espectro de trastornos relacionados con la autofagia.
Estos y otros aspectos de la invención se ilustran con más detalle en la Descripción detallada de la invención.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 muestra la citotoxicidad de las CQ diméricas con enlazadores más largos. (A) IC50 de derivados de LysOl seleccionados (conjunto de datos completo en la tabla 1) con enlazadores más largos en un ensayo de viabilidad de azul alamar de 72 horas. Las células A375 P sembradas en un formato de 384 pocillos se trataron con una dilución de 10 puntos de concentraciones (0,01 nM-10 uM) (B) Ensayo de formación de colonias en agar blando. Las células de las líneas celulares de melanoma indicadas (A375, WM983B, SKMEL5) y cáncer de páncreas (PANC1, CAPAN1) se sembraron en placas de agar blando. El medio con compuesto se cambió cada 48 horas. Se usó tinción con violeta cristal para visualizar las colonias formadas después de 2 semanas.
La Figura 2 muestra los efectos de la asimetría y una mayor longitud del enlazador sobre la citotoxicidad de las cloroquinas diméricas. Se sembraron células de melanoma A375P en un formato de 384 pocillos y se trataron con concentraciones crecientes de derivados de Lys01. Después de 72 horas, las células se analizaron por azul alamar. Los datos completos se encuentran en la Tabla 1, Figura 10. (A) IC50 de acuerdo con la simetría del enlazador (B) IC50 por la longitud del enlazador.
La Figura 3 muestra la localización subcelular de las cloroquinas diméricas con enlazadores variados. (A) Lys21 se marcó con un colorante fluorescente Cy3 (B) células de melanoma A375P teñidas con lysotracker (gris claro) y se trataron conjuntamente con Lys21-Cy3. Un color más claro en el tercer fotograma indica colocalización. La Figura 4 muestra la modulación de autofagia de cloroquinas diméricas con enlazadores más largos en líneas celulares de melanoma. La inmunotransferencia de LC3B y actina en 3 líneas celulares de melanoma diferentes. Cada compuesto se administró a concentraciones de 1 pM durante 24 horas. La cuantificación de LC3II/actina indica que todas las CQ diméricas con enlazador más largo produjeron niveles más altos de LC3II/actina en comparación con Lys05 (línea de puntos).
La Figura 5 muestra un cribado fenotípico de alto rendimiento de la inhibición de la autofagia para derivados de LysOl. Se sembraron células A375PmCherry-eGFP-LC3 en placas de 384 pocillos. Se administraron doxorrubicina, HCQ, CQ y Lys01-Lys27 (en DmSo al 0,1%) por transferencia con herramienta de clavija asistida por robot a concentraciones de 0-10 pM. Las imágenes se obtuvieron por microscopía de fluorescencia de alto contenido Operetta. El análisis de imágenes mediante el uso del software Harmony informa la fracción de células nucleadas con una proporción de > 3,5 en las células tratadas con compuesto 10 pM.
La Figura 6 muestra imágenes de microscopía de fluorescencia de alto rendimiento de células de melanoma A375P mCherry-eGFP-LC3 tratadas con derivados de cloroquina indicados.
La Figura 7 muestra histogramas de la relación verde/rojo en células A375PmCherry-GFP-LC3 tratadas con derivado de Lys01.
La Figura 8 muestra la cuantificación por citometría de flujo de especies reactivas de oxígeno (ROS), inhibición de la autofagia y apoptosis asociada con CQ diméricas con enlazadores más largos. (A) ROS reflejado por fluorescencia DHR_123 en células A375 después de 24 horas de tratamiento con compuesto 1 uM (B) Inhibición de la autofagia reflejada por la proporción verde / rojo de células A375 mCherry-egfpLC3 tratadas con compuesto indicado 1 uM durante 24 horas. (C) Apoptosis reflejada por detección de anexina V en células A375 tratadas con compuesto 1 uM a las 24 horas. (D) Apoptosis reflejada por detección de anexina V en células A375 tratadas con compuestos indicados a 3 uM durante 24 o 48 horas. PLX: PLX4720; TRA: trametinib.
La Figura 9 muestra los efectos de las CQ diméricas con enlazador más largo sobre el crecimiento y la invasión en un modelo de cultivo de tejido en 3D. Células A375P mCherry eGFP-LC3 cultivadas en esferoides tridimensionales e implantadas en colágeno. Después de 72 horas de tratamiento con 3 uM del compuesto indicado, las células se tiñeron por contraste con dAp I. (A) se usó microscopía de fluorescencia para visualizar la inhibición de la autofagia (áreas brillantes), la inhibición de la invasión en el colágeno y (B) la cuantificación de la fluorescencia del DAPI indicativa de muerte celular. * p<0,05
La Figura 10, Tabla 1 muestra los resultados de los experimentos de citotoxicidad mediante el uso de los compuestos de acuerdo con la presente invención y otros compuestos, que no forman parte de la invención. Las células de glioma LN229 y las células de melanoma A375P se sembraron en un formato de 384 pocillos y los compuestos CQ, HCQ y Lys01-Lys41 y 72-75 (nombres IUPAC y estructuras químicas proporcionadas en las Figuras 11 y 12) se administraron en concentraciones entre 0,01-10 micromolar mediante el uso del dispensador asistido por robot. Después de 72 horas de incubación a 37 grados, se aplicó azul Alamar y se determinó la viabilidad mediante el uso de absorbancia. La absorbancia se normalizó al control de DMSO y se estimó un log IC50 umediante el uso del software Graphpad Prism.
La Figura 11, Tabla 2 proporciona los nombres IUPAC para los compuestos que se establecen en la Figura 12 adjunta.
La Figura 12 muestra las estructuras químicas de los compuestos de bisaminoquinolinas.
La Figura 13 muestra las estructuras químicas de varias bisaminoquinolinas con varios sustituyentes halo (F, Cl, Br) en la posición 7 del resto de quinolina.
Descripción detallada de la invención
Los siguientes términos se usarán a lo largo de la especificación para describir la presente invención. Cuando un término no se define específicamente en la presente descripción, se entenderá que ese término se usa de una manera coherente con su uso por los expertos en la técnica.
Cuando se proporciona un rango de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima parte de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto indique claramente lo contrario, entre el límite superior e inferior de ese rango y cualquier otro valor establecido o intermedio en ese rango indicado está incluido dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos rangos más pequeños que pueden incluirse independientemente en los rangos más pequeños también están incluidos dentro de la invención, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el rango indicado. Cuando el rango indicado incluye uno o ambos límites, los rangos que excluyen ambos límites incluidos también se incluyen en la invención. En los casos en los que existe la posibilidad de un sustituyente en uno o más grupos Markush, se entiende que sólo se usarán aquellos sustituyentes que formen enlaces estables.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente descripción tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en la presente descripción también puede usarse en la práctica o ensayo de la presente invención, los métodos y materiales se describen ahora.
Debe observarse que, como se usa en la presente descripción y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "y" y "el" incluyen referencias en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Además, los siguientes términos tendrán las definiciones que se establecen a continuación.
El término "paciente" o "sujeto" se usa a lo largo de la especificación dentro del contexto para describir un animal, generalmente un mamífero, que incluye especialmente un animal domesticado y preferentemente un ser humano, a quien se le da tratamiento, incluido el tratamiento profiláctico (profilaxis), con los compuestos o se proporcionan composiciones de acuerdo con la presente invención. Para el tratamiento de aquellas infecciones, afecciones o estados de enfermedad que son específicos de un animal específico, tal como un paciente humano, el término paciente se refiere a ese animal específico. En la mayoría de los casos, el paciente o sujeto de la presente invención es un paciente humano de uno o ambos sexos.
El término "efectivo" se usa en la presente descripción, a menos que se indique lo contrario, para describir una cantidad de un compuesto o componente que, cuando se usa dentro del contexto de su uso, produce o efectúa un resultado deseado, ya sea que ese resultado se relacione con la profilaxis y/o terapia de una infección y/o estado de enfermedad o como se describe de otro modo en la presente descripción. El término efectivo incluye todos los demás términos de cantidad efectiva o concentración efectiva (incluido el término "terapéuticamente efectiva") que se describen o usan de otro modo en la presente solicitud.
El término "compuesto" se usa en la presente descripción para describir cualquier compuesto o agente bioactivo específico descrito en la presente descripción, incluidos todos y cada uno de los estereoisómeros (incluidos los diasterómeros), isómeros ópticos individuales (enantiómeros) o mezclas racémicas, sales farmacéuticamente aceptables y formas de profármacos. El término compuesto en la presente descripción se refiere a compuestos estables. Dentro de su uso en contexto, el término compuesto puede referirse a un solo compuesto o una mezcla de compuestos como se describe de otra manera en la presente descripción. Se entiende que la elección de sustituyentes o enlaces dentro de un Markush u otro grupo de sustituyentes o enlaces se proporciona para formar un compuesto estable a partir de esas elecciones dentro de ese Markush u otro grupo.
El término "agente bioactivo" se refiere a cualquier compuesto o fármaco biológicamente activo que pueda formularse para su uso en la presente invención. Los agentes bioactivos ejemplares incluyen los compuestos de acuerdo con la presente invención que se usan para inhibir la autofagia y para tratar el cáncer, así como otros compuestos o agentes que se describen de otro modo en la presente descripción.
Los términos "tratar', "tratamiento" y "tratamiento" se usan como sinónimos para referirse a cualquier acción que proporcione un beneficio a un paciente en riesgo o afligido por una enfermedad, incluida la mejora de la afección por la disminución o supresión de al menos un síntoma, retraso en la progresión de la enfermedad, prevención o retraso en el inicio de la enfermedad, etc.
El tratamiento, como se usa en la presente descripción, abarca tanto el tratamiento profiláctico como el terapéutico, principalmente del cáncer. Los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden, por ejemplo, administrarse profilácticamente a un mamífero antes de la aparición de la enfermedad para reducir la probabilidad de esa enfermedad. La administración profiláctica es efectiva para reducir o disminuir la probabilidad de aparición posterior de una enfermedad en el mamífero, o disminuir la gravedad de la enfermedad que ocurre posteriormente, especialmente que incluye la metástasis de cáncer. Alternativamente, los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden, por ejemplo, administrarse terapéuticamente a un mamífero que ya padece una enfermedad. En una modalidad de la administración terapéutica, la administración de los presentes compuestos es efectiva para eliminar la enfermedad y producir una remisión o eliminar sustancialmente la probabilidad de metástasis de un cáncer. La administración de los compuestos de acuerdo con la presente invención es efectiva para disminuir la gravedad de la enfermedad o alargar la vida útil del mamífero así afectado, en el caso del cáncer.
El término "farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente descripción significa que el compuesto o composición es adecuado para la administración a un sujeto para lograr los tratamientos descritos en la presente descripción, sin efectos secundarios indebidamente perjudiciales a la luz de la gravedad de la enfermedad y la necesidad del tratamiento.
El término "inhibir" como se usa en la presente descripción se refiere a la eliminación parcial o completa de un efecto potencial, si bien los inhibidores son compuestos que tienen la capacidad de inhibir.
El término "prevención" cuando se usa en contexto significará "reducir la probabilidad" o prevenir que ocurra una enfermedad, condición o estado de enfermedad como consecuencia de la administración o administración concurrente de uno o más compuestos o composiciones de acuerdo con la presente invención, solos o en combinación con otro agente. Se observa que la profilaxis rara vez será 100 % efectiva; en consecuencia, los términos prevención y reducción de la probabilidad se usan para indicar el hecho de que dentro de una población determinada de pacientes o sujetos, la administración con compuestos de acuerdo con la presente invención reducirá la probabilidad o inhibirá una afección o estado patológico particular (en particular, el empeoramiento de un estado de enfermedad tal como el crecimiento o metástasis de cáncer) u otros indicadores aceptados de la progresión de la enfermedad.
El término "autofagia" o "autofagocitosis" se usa para describir un proceso catabólico en las células que implica la degradación de los propios componentes de una célula por los lisosomas. La autofagia es un proceso altamente regulado de sistemas biológicos que desempeña un papel normal en el desarrollo del crecimiento celular y la homeostasis, lo que ayuda a mantener un equilibrio entre la síntesis, degradación y posterior reciclaje de los productos celulares. Es un mecanismo importante por el que una célula asigna nutrientes de procesos innecesarios a procesos más esenciales.
En la naturaleza ocurren varios procesos autofágicos, todos los que tienen como característica común la degradación de los componentes intracelulares mediante el lisosoma. Un mecanismo bien conocido de autofagia implica la formación de una membrana alrededor de una región específica de una célula, que separa el contenido del resto del citoplasma. La vesícula resultante luego se fusiona con un lisosoma que posteriormente degrada el contenido.
La autofagia consiste en el secuestro de orgánulos y proteínas en vesículas autofágicas (VA) y la degradación de esta carga mediante fusión lisosomal (1). La autofagia permite que las células tumorales sobrevivan al estrés metabólico y terapéutico (2-5). Varias publicaciones indican que la autofagia inducida por la terapia es un mecanismo de resistencia clave a muchos agentes anticancerosos.
Un "trastorno relacionado con la autofagia" incluye enfermedades, estados de enfermedad y/o afecciones que se benefician de la inhibición de la autofagia, que incluyen, entre otros, cáncer (incluida la metástasis del cáncer), artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus., urticaria crónica y enfermedad de Sjogren.
El término "cáncer" se referirá a una proliferación de células tumorales que tienen el rasgo único de pérdida de controles normales, lo que da como resultado un crecimiento no regulado, falta de diferenciación, invasión tisular local y/o metástasis. Como se usa en la presente descripción, las neoplasias incluyen, sin limitación, irregularidades morfológicas en células en tejido de un sujeto o huésped, así como proliferación patológica de células en tejido de un sujeto, en comparación con la proliferación normal en el mismo tipo de tejido. Adicionalmente, las neoplasias incluyen tumores benignos y tumores malignos (por ejemplo, tumores de colon) que son invasivos o no invasivos. Las neoplasias malignas se distinguen de las neoplasias benignas en que las primeras muestran un mayor grado de displasia, o pérdida de diferenciación y orientación de las células, y tienen propiedades de invasión y metástasis. El término cáncer también dentro del contexto, incluye cánceres resistentes a fármacos, incluidos cánceres resistentes a múltiples fármacos, cánceres metastásicos y/o cánceres recurrentes. Ejemplos de neoplasias o neoplasias de las que se puede derivar la célula diana de la presente invención incluyen, sin limitación, carcinomas (por ejemplo, carcinomas de células escamosas, adenocarcinomas, carcinomas hepatocelulares y carcinomas de células renales), particularmente los de vejiga, hueso, intestino, mama, cuello uterino, colon (colorrectal), esófago, cabeza, riñón, hígado, pulmón, nasofaríngeo, cuello, tiroides, ovario, páncreas, próstata y estómago; leucemias, tales como leucemia mielógena aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfoblástica aguda de células T, leucemia de células T adultas, leucemia basofílica, leucemia eosinofílica, leucemia granulocítica, leucemia de células pilosas, leucemia leucocítica, leucemia linfoblástica, leucemia linfocítica, leucemia megacariocítica, leucemia micromieloblástica, leucemia monocítica, leucemia neutrofílica y leucemia de células madre; linfomas benignos y malignos, particularmente linfoma de Burkitt, linfoma no Hodgkin y linfoma de células B; melanomas benignos y malignos; enfermedades mieloproliferativas; sarcomas, particularmente sarcoma de Ewing, hemangiosarcoma, sarcoma de Kaposi, liposarcoma, miosarcomas, neuroepitelioma periférico y sarcoma sinovial; tumores del sistema nervioso central (por ejemplo, gliomas, astrocitomas, oligodendrogliomas, ependimomas, gliobastomas, neuroblastomas, ganglioneuromas, gangliogliomas, meduloblastomas, tumores de células pineales, meningiomas, sarcomas meníngeos, neurofibromas y schwannomas); tumores de la línea germinal (por ejemplo, cáncer de intestino, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de útero, cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer mixto de células pequeñas y no pequeñas, mesotelioma pleural, incluido el mesotelioma pleural metastásico pequeño cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer de pulmón de células no pequeñas), cáncer de ovario, cáncer de testículo, cáncer de tiroides, astrocitoma, cáncer de esófago, cáncer de páncreas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de colon y melanoma; tipos mixtos de neoplasias, particularmente carcinosarcoma y enfermedad de Hodgkin enfermedad y tumores de origen mixto, como el tumor de Wilms y los teratocarcinomas, entre otros. Se observa que ciertos tumores epiteliales que incluyen ovario, mama, colon, cabeza y cuello, meduloblastoma y linfoma de células B, entre otros, muestran una mayor autofagia y son cánceres diana principales para los compuestos de acuerdo con la presente invención.
El término "agente anticanceroso adicional" se usa para describir un compuesto adicional que puede coadministrarse con uno o más compuestos de la presente invención en el tratamiento del cáncer. Tales agentes incluyen, por ejemplo, everolimus, trabectedina, abraxano, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanib, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI- 258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanib, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, un inhibidor de FLT-3, un inhibidor de VEGFR, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de aurora cinasa, un modulador de PIK-1, un inhibidor de Bcl-2, un inhibidor de HDAC, un inhibidor de c-MET, un inhibidor de PARP, un inhibidor de Cdk, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de IGFR-TK, un anticuerpo anti-HGF, un inhibidor de la cinasa PI3, un inhibidor de la AKT, un inhibidor de JAK/STAT, un inhibidor del punto de control 1 o 2, un inhibidor de la cinasa de adhesión focal, un inhibidor de la cinasa Map cinasa (mek), un anticuerpo de trampa de VEGF, pemetrexed, erlotinib, dasatanib, nilotinib, decatanib, panitumumab, amrubicina, oregovomab, Lep-etu, nolatrexed, azd2171, batabulina, ofatumumab, zanolimumab, edotecarina, tetrandrina, rubitecan, tesmilifeno, oblimersen, ticilimumab, ipilimolumab, gosipol, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitide, gimatecan, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR 1 KRX-0402, lucantona, LY 317615, neuradiab, vitespan, Rta 744, Sdx 102, talampanel, atrasentan, Xr 311, romidepsin, ADS- 100380, sunitinib, 5-fluorouracilo, vorinostat, etopósido, gemcitabina, doxorrubicina, irinotecan, doxorrubicina liposomal, 5'-desoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolomida, ZK-304709, seliciclib; PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L-glutámico, N -[4-[2-(2-amino-4,7-dihidro-4-oxo-1H - pirrolo[2,3-d] pirimidin-5-il) etil]benzoil]-, sal disódica, heptahidrato, camptotecina, irinotecan marcado con PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES (dietilestilbestrol), estradiol, estrógeno, estrógeno conjugado, bevacizumab, IMC-IC11, CHIR-258,); 3-[5-(metilsulfonilpiperadinemetil)- indolilj-quinolona, vatalanib, AG-013736, AVE-0005, la sal acetato de [D-Ser (Bu t) 6, Azgly 10] (piro-Glu-His-Trp-Ser -Tyr-D-Ser(Bu t) -Leu-Arg-Pro- Azgly-NH 2 acetato [C59H84N18Oi4- (C2H4O2)x donde x = 1 a 2,4], acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, CP-724714; TAK-165, HKI-272, erlotibinib, lapatanib, canertinib, anticuerpo de ABX-EGF, erbitux, EKB-569, PKI-166, GW-572016, Ionafarnib, BMS-214662, tipifarnib; amifostina, NVP-LAQ824, ácido suberoil analida hidroxámico, ácido valproico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenib, KR951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L-asparaginasa, vacuna contra el Bacillus Calmette-Guerin (BCG), bleomicina, buserelina, busulfán, carboplatino, carmustina, clorambucilo, cisplatino, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorrubicina, dietilestilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximesterona, flutamida, gemcitabina, gleevac, hidroxiurea, idarrubicina, ifosfamida, imatinib, leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, mefalán, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatino, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfímero, procarbazina, raltitrexed, rituximab, estreptozocina, tenipósido, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoina, vindesina, -ácido-13-cis retinoico, mostaza de fenilalanina, mostaza de uracilo, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deooxiuridina, arabinósido de citosina, 6-mecaptopurina, desoxicoformicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecán, razoxina, marimastat, COL-3, neovastato, BMS-275291, escualamina, endostatina, SU5416, SU6668, EMD121974, interleucina-12, IM862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumab, denileucina diftitox, gefitinib, bortezimib, paclitaxel, irinotecan, topotecan, doxorrubicina, docetaxel, vinorelbina, bevacizumab (anticuerpo monoclonal) y erbitux, paclitaxel sin cremóforo, epitilona B, BMS-247550, BMS-310705, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, pipendoxifeno, ERA- 923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR- 3339, ZK186619, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmannina, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, eritropoyetina, factor estimulante de colonias de granulocitos, zolendronato, prednisona, cetuximab, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, histrelina, interferón alfa-2a pegilado, interferón alfa-2a, interferón alfa-2b pegilado, interferón alfa-2b, azacitidina, PEG-L-asparaginasa, lenalidomida, gemtuzumab, hidrocortisona, interleucina-11, dexrazoxano, alemtuzumab, ácido transretinoico total, ketoconazol, interleucina-2, megestrol, inmunoglobulina, mostaza nitrogenada, metilprednisolona, ibritgumomab tiuxetan, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomab, trióxido de arsénico, cortisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorrubicina liposomal, Edwina-asparaginasa, estroncio 89, casopitant, netupitant, antagonistas del receptor NK-1, palonosetrón, aprepitant, difenhidramina, hidroxicina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrón, ondansetrón, dolasetrón tropisetrón, sspegfilgrastim, eritropoyetina, epoetina alfa y darbepoetina alfa, ipilumumab, vemurafenib entre otros.
El término "alquilo" se usa en la presente descripción para referirse a un radical monovalente completamente saturado que contiene carbono e hidrógeno (hasta 10 átomos de carbono o como se indique de otra manera), y que puede ser de cadena lineal, ramificada o cíclica. Ejemplos de grupos alquilo son metilo, etilo, n-butilo, n-heptilo, isopropilo, 2-metilpropilo, terc-butilo, neopentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, etc.
El término "coadministración" o "terapia adjunta" significará que al menos dos compuestos o composiciones se administran al paciente al mismo tiempo, tal que se pueden encontrar cantidades o concentraciones efectivas de cada uno de los dos o más compuestos en el paciente en un momento dado. Aunque los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden coadministrarse a un paciente al mismo tiempo, el término abarca la administración de dos o más agentes al mismo tiempo o en momentos diferentes, incluida la administración secuencial. Preferentemente, las concentraciones efectivas de todos los compuestos o composiciones coadministrados se encuentran en el sujeto en un momento dado. El término coadministración o terapia adjunta también contempla otros agentes bioactivos que se coadministran con composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención, especialmente cuando un cáncer ha hecho metástasis o está en riesgo de metástasis.
El término "grupo protector de amina" se refiere a un resto o grupo que puede eliminarse fácilmente de un grupo funcional al que está unido el grupo protector para permitir una reacción adicional. Los ejemplos de grupos protectores de amina incluyen carbobenciloxi (grupo Cbz, eliminado por hidrogenólisis), carbono p-metoxilbencilo (grupo Moz o MeOZ, eliminado por hidrogenólisis), terc-butiloxicarbonilo (grupo BOC, eliminado por ácido fuerte concentrado o por calentamiento a temperaturas elevadas), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (grupo FMOC, eliminado por una base débil, tal como piperidina o piridina), grupo acilo (acetilo, benzoílo, pivaloílo, por tratamiento con base), bencilo (grupos Bn, eliminado por hidrogenólisis), carbamato, eliminado por ácido y calentamiento suave, pmetoxibencilo (PMB, eliminado por hidrogenólisis), 3,4-dimetoxibencilo (DMPM, eliminado por hidrogenólisis), pmetoxifenilo (grupo PMP, eliminado por nitrato de amonio cerio IV o CAN); tosilo (grupo Ts eliminado por ácido concentrado y agentes reductores, otras sulfonamidas, grupos Mesyl, Nosyl y Nps, eliminado por yoduro de samario, hidruro de tributil estaño.
El término "radioterapia" o "terapia de radiación" se usa para describir la terapia para el cáncer que se puede usar junto con los presentes compuestos. La terapia de radiación usa altas dosis de radiación, tales como rayos X, u otras fuentes de energía, como radioisótopos (emisores gamma, beta o alfa), para destruir las células cancerosas.
La radiación daña el material genético de las células para que no puedan crecer. Aunque la radiación daña tanto las células normales como las cancerosas, las células normales pueden repararse y funcionar, mientras que las células cancerosas no.
La terapia de radiación se puede usar en combinación con los compuestos actualmente reivindicados, solos o en combinación con compuestos anticancerosos adicionales como se describe de otro modo en la presente descripción, lo que depende del cáncer a tratar. La terapia de radioterapia es más efectiva para tratar cánceres que no se han diseminado fuera del área del cáncer original, pero también se puede usar si el cáncer se ha diseminado al tejido cercano. A veces, la radioterapia se usa después de la cirugía para destruir cualquier célula cancerosa remanente y para aliviar el dolor del cáncer metastásico.
Composiciones farmacéuticas
Los compuestos de acuerdo con la presente invención se pueden formular fácilmente en composiciones farmacéuticas, útiles en la inhibición de la autofagia en un sistema biológico y/o la inhibición, tratamiento o prevención de estados patológicos y/o condiciones que se benefician de la inhibición de la autofagia, incluido el cáncer (y su metástasis), artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus (lupus eritematoso sistémico), urticaria crónica y enfermedad de Sjogren. Las composiciones farmacéuticas comprenden una cantidad efectiva de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención en combinación con un portador, aditivo o excipiente farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en combinación con al menos un agente adicional, en el caso del cáncer, preferentemente un agente anticanceroso como de otro modo. descrito en la presente descripción.
Como se indicó anteriormente, los compuestos de la invención se pueden usar para inhibir la autofagia como se describe de otro modo en el presente documento, y son útiles para la inhibición (incluida la profilaxis) y/o el tratamiento del cáncer y su metástasis, artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus. (lupus eritematoso sistémico), urticaria crónica y enfermedad de Sjogren. El uso de los compuestos reivindicados para el tratamiento del cáncer o la malaria son aspectos importantes de la presente invención.
En los métodos descritos en la presente descripción, los sujetos o pacientes que lo necesitan se tratan con los presentes compuestos, composiciones farmacéuticas para inhibir, reducir la probabilidad o tratar un estado de enfermedad, afección y/o infección como se describe de otro modo en la presente descripción. Los estados de enfermedades, afecciones e infecciones tratadas por los presentes compuestos y composiciones son fácilmente reconocidas y diagnosticadas por los expertos en la técnica y tratadas al administrar al paciente una cantidad efectiva de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención.
Generalmente, las dosis y vías de administración del compuesto se determinan de acuerdo con el tamaño y la condición del sujeto, de acuerdo con las prácticas farmacéuticas estándar. Los niveles de dosis empleados pueden variar ampliamente y pueden ser determinados fácilmente por los expertos en la técnica. Típicamente, se emplean cantidades en miligramos hasta cantidades en gramos. La composición puede administrarse a un sujeto por diversas vías, por ejemplo, por vía oral, transdérmica, perineural o parenteral, que es, por inyección intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, itratica o intramuscular, entre otras, que incluye la administración bucal, rectal y transdérmica. Las composiciones también se pueden administrar por inhalación a los pulmones. Los sujetos contemplados para el tratamiento de acuerdo con el método incluyen seres humanos, animales de compañía, animales de laboratorio y similares.
Las formulaciones que contienen los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden tomar la forma de polvo sólido, semisólido, liofilizado o formas de dosificación líquidas, tales como, por ejemplo, tabletas, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida, soluciones, suspensiones, emulsiones., supositorios, cremas, ungüentos, lociones, aerosoles, parches o similares, preferentemente en formas de dosificación unitarias adecuadas para la administración simple de dosis precisas.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención incluyen típicamente un portador o excipiente farmacéutico convencional y pueden incluir adicionalmente otros agentes medicinales, vehículos, adyuvantes, aditivos y similares. Preferentemente, la composición es de aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 85 %, de aproximadamente 0,5 % a aproximadamente 75 % en peso de un compuesto o compuestos de la invención, y el resto consiste esencialmente en excipientes farmacéuticos adecuados. Para la administración oral, tales excipientes incluyen grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, gelatina, sacarosa, carbonato de magnesio y similares. Si se desea, la composición también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes o tampones.
Las composiciones líquidas se pueden preparar al disolver o dispersar los compuestos (aproximadamente 0,5 % a aproximadamente 20 % en peso o más) y adyuvantes farmacéuticos opcionales, en un portador, como, por ejemplo, solución salina acuosa, dextrosa acuosa, glicerol o etanol, para formar una solución o suspensión. Para su uso en la preparación líquida oral, la composición se puede preparar como una solución, suspensión, emulsión o jarabe, que se suministra en forma líquida o seca adecuada para hidratación en agua o solución salina normal.
Cuando la composición se emplea en forma de preparaciones sólidas para administración oral, las preparaciones pueden ser comprimidos, gránulos, polvos, cápsulas o similares. En una formulación de tableta, la composición se formula típicamente con aditivos, por ejemplo, un excipiente como una preparación de sacárido o celulosa, un aglutinante como pasta de almidón o metilcelulosa, un relleno, un desintegrador y otros aditivos típicamente usados en la fabricación de preparados médicos.
Una composición inyectable para administración parenteral contendrá típicamente el compuesto en una solución iv adecuada, tal como una solución salina fisiológica estéril. La composición también se puede formular como una suspensión en un lípido o fosfolípido, en una suspensión liposomal o en una emulsión acuosa.
Los métodos para preparar tales formas de dosificación son conocidos o resultan evidentes para los expertos en la técnica; por ejemplo, ver Remington's Pharmaceutical Sciences (17th Ed., Mack Pub. Co., 1985). La composición a administrar contendrá una cantidad del compuesto seleccionado en una cantidad farmacéuticamente efectiva para inhibir la autofagia en un sistema biológico, incluido un paciente o sujeto.
Método de tratamiento
Se proporciona un método para tratar a un paciente o sujeto mamífero para inhibir la autofagia en ese paciente o sujeto que se describe en la presente descripción. Los compuestos de acuerdo con la presente invención descritos en la presente descripción pueden usarse para inhibir la autofagia de una manera consistente con la inhibición, el tratamiento y/o la prevención de estados de enfermedad y/o afecciones que incluyen cáncer (incluida la metástasis del cáncer), artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus, urticaria crónica y enfermedad de Sjogren.
Los pacientes o sujetos que lo necesitan se tratan al administrar al paciente o sujeto una cantidad efectiva de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención, opcionalmente en combinación con al menos un agente bioactivo adicional útil para tratar la misma enfermedad o afección. Los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden usarse para inhibir, reducir la probabilidad o tratar el cáncer, incluida la metástasis del cáncer en un paciente o sujeto que necesite dicho tratamiento. El tratamiento es útil para cualquier cáncer para el que la inhibición de la autofagia represente un resultado favorable o para el que la metástasis sea un elemento de riesgo. La terapia con al menos un agente anticanceroso adicional como se describe de otro modo en la presente descripción también se contempla en los presentes métodos. Los numerosos cánceres que pueden tratarse de acuerdo con el presente método se describen anteriormente.
En la presente descripción se describe un método para tratar una enfermedad y/o afección que se beneficia de la inhibición de la autofagia, que incluye artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus, urticaria crónica y enfermedad de Sjorgen. En este método, a un paciente o sujeto que necesita tratamiento se le administra una cantidad efectiva de un compuesto como se describe de otro modo en la presente descripción u opcionalmente en combinación con un portador, aditivo o excipiente farmacéuticamente aceptable para inhibir, tratar y/o prevenir los estados de enfermedad por encima de las condiciones. Como alternativa, se coadministra al menos un agente bioactivo adicional con un compuesto de acuerdo con la presente invención.
Otros métodos se refieren al uso/administración de los compuestos de acuerdo con la presente invención.
En los métodos que tratan o inhiben el cáncer o la metástasis del cáncer, los compuestos descritos anteriormente pueden coadministrarse con al menos un agente anticanceroso adicional que incluye, por ejemplo, everolimus, trabectedina, abraxano, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanib., GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanib, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, un inhibidor de FLT-3, un inhibidor de VEGFR, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de aurora cinasa, un modulador de PIK-1, un inhibidor de Bcl-2, un inhibidor de HDAC, un inhibidor de c-MET, un inhibidor de PARP, un inhibidor de Cdk, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de IGFR-TK, un anticuerpo anti-HGF, un inhibidor de la cinasa PI3, un inhibidor de AKT, un inhibidor de JAK/STAT, un inhibidor del punto de control 1 o 2, un inhibidor de la cinasa de adhesión focal, un inhibidor de la cinasa Map cinasa (mek), un anticuerpo trampa VEGF, pemetrexed, erlotinib, dasatanib, nilotinib, decatanib, panitumumab, amrubicina, oregovomab, Lepetu, nolatrexed, azd2171, batabulina, ofatumumab, zanolimumab, edotecarina, tetrandrina, rubitecan, tesmilifeno, oblimersen, ticilimumab, ipilimumab, gosipol, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitida, gimantecan, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR 1 KRX-0402, lucantona, LY 317615, neuradiab, vitespan, Rta 744, Sdx 102, talampanel, atrasentan, Xr 311, romidepsin, ADS- 100380, sunitinib, 5-fluorouracil, vorinostat, etopósido, gemcitabina, doxorrubicina, irinotecan, doxorrubicina liposomal, 5'-desoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolomida, ZK-304709, seliciclib; PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L-glutámico, N -[4-[2-(2-amino-4,7-dihidro-4-oxo-1H - pirrolo[2,3- d]pirimidin-5-il)etil]benzoil]-, sal disódica, heptahidrato, camptotecina, irinotecan marcado con PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES(dietilestilbestrol), estradiol, estrógeno, estrógeno conjugado, bevacizumab, IMC-1C11, CHIR-258,); 3-[5-(metilsulfonilpiperadinemetil)-indolilj-quinolona, vatalanib, AG-013736, AVE-0005, la sal acetato de [D-Ser (Bu t) 6, Azgly 10] (piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu t)-Leu-Arg-Pro- Azgly-NH 2 acetato [C59H84N18Oi4 -(C2H4O2)x donde x = 1 a 2,4], acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, CP-724714; TAK-165, HKI-272, erlotibinib, lapatanib, canertinib, anticuerpo ABX-EGF, erbitux, EKB-569, PKI-166, GW-572016, Ionafarnib, BMS-214662, tipifarnib; amifostina, NVP-LAQ824, ácido suberoil analida hidroxámico, ácido valproico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenib, KR951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L-asparaginasa, vacuna contra el Bacillus Calmette-Guerin (BCG), bleomicina, buserelina, busulfán, carboplatino, carmustina, clorambucilo, cisplatino, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorrubicina, dietilestilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximesterona, flutamida, gemcitabina, gleevac, hidroxiurea, idarrubicina, ifosfamida, imatinib, leuprolida, levamisol, lomustine, mechloretamina, melfalán,, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatino, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfímero, procarbazina, raltitrexed, rituximab, estreptozocina, tenipósido, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoina, vindesina, ácido 13-cis-retinoico, mostaza fenilalanina, mostaza uracilo, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deooxiuridina, citosina arabinósido, 6-mecaptopurina, desoxicoformicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecán, razoxina, marimastat, COL-3, neovastato SU5416, SU6668, EMD121974, interleucina-12, IM862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumab, denileucina diftitox, gefitinib, bortezimib, paclitaxel, irinotecan, topotecan, doxorrubicina, docetaxel, vinorelbina, bevacizumab (anticuerpo monoclonal) y erbitux, paclitaxel sin cremóforo, epitilona B, BMS-247550, BMS-310705, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, pipendoxifeno, ERA- 923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR- 3339, ZK186619, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2- hidroxietil)-rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmannina, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, eritropoyetina, factor estimulante de colonias de granulocitos, zolendronato, prednisona, cetuximab, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, histrelina, interferón alfa-2a pegilado, interferón alfa-2a, interferón alfa-2b pegilado, interferón alfa-2b, azacitidina, PEG-L-asparaginasa, lenalidomida, gemtuzumab, hidrocortisona, interleucina-11, dexrazoxano, alemtuzumab, ácido transretinoico total, ketoconazol, interleucina-2, megestrol, inmunoglobulina, mostaza nitrogenada, metilprednisolona, ibritgumomab tiuxetan, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomab, trióxido de arsénico, cortisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorrubicina liposomal, Edwina-asparaginasa, estroncio 89, casopitant, netupitant, antagonistas del receptor NK-1, palonosetrón, aprepitant, difenhidramina, hidroxicina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrón, ondansetrón, dolasetrón, tropisetrón, pegfilgrastim, eritropoyetina, epoetina alfa y darbepoetina alfa, entre otros, y mezclas de los mismos.
En los métodos descritos que implican infecciones, estados de enfermedad y/o estados provocados por artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus, urticaria crónica y enfermedad de Sjogren, los compuestos de acuerdo con la presente invención pueden coadministrarse con agentes adicionales que se usan tradicionalmente en terapia para estos estados de enfermedad y/o condiciones.
EJEMPLOS
Los siguientes ejemplos ilustran y describen la presente invención pero no pretenden limitar la invención de ninguna manera.
Métodos químicos
Estrategia para la síntesis de inhibidores de la autofagia de aminoquinolina bivalentes con diferentes longitudes de enlazador
Los compuestos se preparan como se describió previamente (PNAS) por acoplamiento de Buchwald-Hartwig de la molécula espaciadora apropiada diamina con la quinolina 4-sustituida requerida, que están disponibles comercialmente o podrían prepararse fácilmente por métodos estándar. Para establecer el papel de la longitud del enlazador y de la naturaleza asimétrica de la longitud del enlazador de la espermidina (3,4) en relación con LysOl (2,2), hemos preparado una serie de nuevos compuestos que varían sistemáticamente el número de metilenos, es decir, Grupos CH2, entre los átomos de nitrógeno del enlazador, donde x y y = 1-4 en la fórmula -HN(CH2)xNR(CH2)yNH-. Estos compuestos se enumeran en la Figura 10, Tabla 1, Figura 11, Tabla 2 y Figura 12 como Lys 34-41 y Lys 72-75.
Además, los compuestos de acuerdo con la presente invención se pueden preparar fácilmente de acuerdo con los métodos sintéticos proporcionados, entre otros, en las páginas 21-28 de la solicitud internacional PCT/US2012/035251 (w O 2012/149186. Pueden prepararse compuestos adicionales por analogía a partir de los métodos descritos, así como análogamente a partir de procedimientos sintéticos que son bien conocidos en la técnica.
Protocolo Experimental de Química (Síntesis Ejemplar):
4-Bromo-7-cloroquinolina: J. Org. Chem. 2007 (72) 2232
Figure imgf000012_0001
A 0 °C bajo una atmósfera de argón, se añadió lentamente tribromuro de fósforo (5,8 ml, 0,079 moles, 1,10 equiv.) a una solución de 7-cloro-4-hidroxiquinolina (13,02 g, 0,073 moles, 1,00 equiv.) en DMF anhidro (150 ml, solución 0,5 M). Se dejó que la reacción se calentara a ta y se siguió por TLC. Se observó el consumo completo de material de partida después de 90 minutos de agitación. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo y el pH se alcalinizó mediante el uso de bicarbonato de sodio sólido. Esto resultó en un precipitado blanco. Luego, la mezcla se filtró y el sólido resultante se secó al vacío lo que proporcionó un sólido blanquecino (17,30 g, 99 %). El material se recristalizó en acetato de etilo para dar agujas blancas (12,20 g, 70 %). Rf = 0,70 (hex:EtOAc; 1:1); Mp = 99 - 101 °C, EtoAc (lit., Eur. J. Org. Chem. 20024181. 103 - 104 °C, hex).
Lyso-01: McAfee et. al. PNAS
Figure imgf000012_0002
Bajo argón, se añadió una mezcla de dioxano desgasificado y agua (10:1; 22 ml, solución 0,4 M) a 4-bromo-7-cloroquinolina (4,78 g, 19,840 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,81 g, 1,302 mmol, 0,15 equiv.), Pd (OAc )2 (0,16 g, 0,716 mmol, 0,08 equiv.), fosfato de potasio tribásico (6,911 g, 32,560 mmol, 3,69 equiv.) y N -metiletano-1,2-diamina (0,94 ml, 8,814 mmol, 1,00 equiv.). La reacción se calentó a 120 °C en un tubo sellado y se mantuvo el calentamiento durante 16 horas. Luego, la reacción se enfrió a ta y se filtró sobre un lecho corto de celite que lavaron con cloroformo (3 x 50 ml). La reacción se volvió ácida mediante la adición de HCl acuoso (1 M, 18 ml, 17,628 mmol, 2 equiv.) lo que dio como resultado la precipitación de la sal de HCl. Este precipitado se aisló mediante filtración y la capa orgánica restante se extrajo con agua desionizada (2 x 50 ml). La sal de HCl aislada se añadió a los lavados acuosos que luego se basificó mediante la adición de hidróxido de amonio (hasta pH > 9). Esta mezcla ahora alcalina se extrajo con CHCh (3 x 40 ml). Las fracciones de cloroformo combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. La concentración a presión reducida dio como resultado el aislamiento del compuesto puro como un sólido naranja (2,74 g, 71 %). El material se recristalizó en EtOAc, lo que dio como resultado el aislamiento de agujas (rendimiento recristalizado del 43 %). Rf = 0,70.
Lys0-05: McAfee y otros. PNAS
Figure imgf000012_0003
Se trató una solución de Lyso-01 (2,68 g, 6,098 mmol, 1,00 equiv.) en MeOH (20 ml) con HCl acuoso 1 M (20 ml). La reacción resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 4 horas. El producto era insoluble en el medio de reacción y se recogió mediante filtración. El residuo se recogió y se disolvió en exceso de agua. La sonicación y el calentamiento fueron necesarios para solubilizar el producto. La solución acuosa se liofilizó para dar un sólido cristalino blanco (1,77 g, 53 %). El material de partida (0,726 g, 27 %) se recuperó de la reacción. Mp= 270 °C (descomposición) (Literatura, PNAS 270 °C); el análisis por Hp Lc de Lyso-05 mostró una pureza > 99 %.
Lyso-10:
Se colocó Lyso-1 (0,26 g, 0,60 mmol, 1,00 equiv.) Bajo una capa de argón. Se añadió piridina (0,5 ml, 5,95 mmol, 10,00 equiv.) seguido de anhídrido acético (1,1 ml, 11,90 mmol, 20,00 equiv.) y la reacción resultante se calentó a 150 °C durante 2 horas. Seguido de esto la mezcla de reacción se vertió en una mezcla de solventes de CHCh (40 ml) y agua (40 ml) y se agita vigorosamente. Las capas resultantes se dejaron sedimentar y se separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con CHCh (3 * 40 ml). Los extractos de CHCh combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó un aceite marrón (0,12 g, rendimiento del 38 %) que resultó ser muy puro.
Lyso-20:
A un vial de microondas se añadió espermina (0,57 g, 2,83 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (1,32 g, 6,38 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,11 g, 0,17 mmol, 0,06 equiv.), Pd(OAc)2 (0,02 g, 0,09 mmol, 0,03 equiv.) y K3PO4 (1,80 g, 8,50 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1, 9 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 16 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (100 ml). La solución resultante se concentró para dar un sólido. Este sólido se lavó con CHCl3 (3 x 30 ml) para eliminar las impurezas, lo que proporcionó el producto en forma de un sólido amarillento (1,09 g, rendimiento del 73 %) que resultó ser muy puro.
Lyso-21:
Figure imgf000013_0001
A un tubo sellable se le añadió espermidina (0,98 g, 6,76 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (3,69 g, 15,21 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,17 g, 0,27 mmol, 0,04 equiv.), Pd (OAc) 2 (0,03 g, 0,14 mmol, 0,02 equiv.) Y K 3 PO 4 (4,30 g, 20,28 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10: 1, 22,5 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 16 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (100 ml). La solución resultante se concentró para dar un sólido. Este sólido se solubilizó en CHCl3 (60 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (60 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 60 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-propanol (4:1; 3 x 40 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida por la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido blanco (2,05 g, rendimiento del 65 %). Rf = 0,10 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-25:
Figure imgf000013_0002
Se disolvió Lyso-20 (0,13 g, 0,25 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (2,5 ml, 0,1 M). Se añadió formaldehído al 37 % en peso (0,08 g, 0,98 mmol, 4,00 equiv.), luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,21 g, 0,98 mmol, 4,00 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. En este punto, el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-20. Se añadió una solución acuosa de NaOH 2 M (15 ml) para disolver las sales de borano en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora antes de agregar CHCh (20 ml). La mezcla bifásica resultante se dejó sedimentar y se separó. La capa acuosa se descartó en este punto.
Para la solución de cloroformo se añadió solución acuosa de HCl 1 M (20 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 20 minutos, lo que dio como resultado la formación de una sal soluble en agua del producto deseado. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron ambas capas. La capa acuosa se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 40 ml) y los lavados con cloroformo combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-propanol (4:1; 3 x 40 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido blanco (16,0 mg, rendimiento del 12 %).
Rf = 0,10 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-26:
Figure imgf000014_0001
Se disolvió Lyso-21 (0,11 g, 0,23 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (2,5 ml, 0,1 M). Se añadió formaldehído al 37 % en peso (0,04 g, 0,46 mmol, 2,00 equiv.), luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,19 g, 0,90 mmol, 4,00 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. En este punto, el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-21. Se añadió una solución acuosa de NaOH 2 M (15 ml) para disolver las sales de borano en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora antes de agregar CHCh (20 ml). La mezcla bifásica resultante se dejó sedimentar y se separó. La capa acuosa se descartó en este punto.
Para la solución de cloroformo se añadió solución acuosa de HCl 1 M (15 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 20 minutos, lo que dio como resultado la formación de una sal soluble en agua del producto deseado. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron ambas capas. La capa acuosa se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 15 ml) y los lavados con cloroformo combinados se descartaron en este punto. Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-propanol (4:1; 3 x 15 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (60 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido blanco (86,0 mg, rendimiento del 79 %). Rf = 0,30 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
(E)-3-((4-metoxifenil)amino)but-2-enoato de etilo:
Figure imgf000014_0002
Preparado de conformidad con Tetrahedron, 2012, 5522.
6-metoxi-2-metilquinolin-4-ol:
Figure imgf000014_0003
Preparado de conformidad con Euro. J. Med. Chem. 2010, 3803.
4-Cloro-6-metoxi-2-metilquinolina: Euro. J. Med. Chem. 2010, 3803
Figure imgf000014_0004
Preparado de conformidad con Euro. J. Med. Chem. 2010, 3803.
Lyso-27:
Figure imgf000015_0001
A un vial de microondas de 20 ml se añadió 1,9-diamino nonano (0,34 g, 2,18 mmol, 1,00 equiv.), 4-cloro-6-metoxi-2-metilquinolina (1,02 g, 4,90 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,07 g, 0,12 mmol, 0,05 equiv.), Pd(OAc)2 (0,02 g, 0,07 mmol, 0,03 equiv.) y K3 PO4 (1,39 g, 6,53 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Desgasifica completamente el solvente dioxano: se añadió agua (10:1, 7 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 100 °C durante 16 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró sobre celite, al lavar con MeOH (100 ml). El filtrado se concentró para dar 0,87 g (rendimiento bruto del 80 %) de un sólido marrón impuro. Este material se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: EtOAc:MeOH:TEA; 90:9:1) para dar el producto como un sólido blanquecino (0,43 g, rendimiento del 40 %). Rf = 0,25 (EtOAc:MeOH:TEA; 90:9:1).
Lyso-28:
Figure imgf000015_0002
Se suspendió Lyso-20 (0,32 g, 0,62 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (6 ml, 0,1 M). Se añadió benzaldehído recién destilado (0,4 ml, 3,69 mmol, 6,00 equiv.), luego triacetoxiborohidruro de sodio (1,30 g, 6,15 mmol, 10,00 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, hasta que el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso- 20. Luego se añadió una solución acuosa de NaOH 2 M (30 ml) para disolver las sales de borano en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora antes de agregar DCM (30 ml). La mezcla bifásica resultante se dejó sedimentar y se separó. La capa acuosa se descartó en este punto.
A la solución de DCM se le añadió una solución acuosa de HCl 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 20 minutos, lo que dio como resultado la formación de una sal soluble en agua del producto deseado. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron ambas capas. La capa acuosa se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 30 ml) y los lavados combinados de DCM se desecharon en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de DCM (3 x 30 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó un aceite amarillo (0,35 g, rendimiento bruto del 80 %) que contenía impurezas. Este aceite se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [gradiente: EtOAc al 100 % (150 ml); luego EtoAc:MeOH:TEA; 90:9:1] para dar el producto como un sólido amarillo (0,21 g, rendimiento del 49 %). Rf = 0,30 (EtOAc:MeOH:TEA; 90:9:1).
M-(2-cianoetil)-M-(3-cianopropil)-bencilamina:
Figure imgf000015_0003
Elaborado conforme al procedimiento de J. Org. Chem. 1980, 1589.
W-(3-aminobutil)-W-(3-aminopropil)(fenilmetil) amina: J. Org. 1980, 1589
Figure imgf000015_0004
Elaborado conforme al procedimiento de J. Org. Chem. 1980, 1589.
Lyso-29:
Figure imgf000016_0001
A un tubo de microondas se añadió N-(3-aminobutil)-N-(3-aminopropil)(fenilmetil)amina (96,00 mg, 0,41 mmol, 1,00 equiv), 4-Bromo-7-cloroquinolina (222,00 mg, 0,92 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (10,00 mg, 0,02 mmol, 0,04 equiv.), Pd(OAc)2 (2,00 mg, 0,01 mmol, 0,02 equiv.) y K3 PO4 (260,00 mg, 1,22 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1, 1,5 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 100 °C durante 13 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (20 ml). La solución resultante se concentró para dar un aceite amarillo. Este aceite se solubilizó en CHCb (20 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (20 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb (2 x 20 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en CHCb (3 x 20 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (60 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido amarillo (112,00 mg, rendimiento del 49 %). Rf = 0,60 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-30:
Figure imgf000016_0002
Bajo argón, se disolvió Lyso-20 (0,25 g, 0,47 mmol, 1,00 equiv.) en piridina anhidra (4,7 ml, 0,1 M) y se añadió cloruro de benzoílo recién destilado (0,3 ml, 2,37 mmol, 5,00 equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, hasta que el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-20. Luego, se añadieron agua (20 ml) y CHCl3 (20 ml) a la mezcla de reacción y se mantuvo la agitación durante más de 30 minutos. Luego, se separaron las capas de esta mezcla bifásica. Seguido de esto, la capa acuosa se extrajo adicionalmente con CHCb (2 x 10 ml). En este punto, se descartó la capa acuosa y se combinaron los extractos de CHCb.
A la solución de CHCb (que contiene el producto) se le añadió HCl acuoso 1 M (40 ml). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que dio como resultado la formación de la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb ( 2 x 20 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en CHCb (3 x 15 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (60 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de una espuma blanca (0,13 g, rendimiento del 37 %). Rf = 0,40 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-31:
Figure imgf000017_0001
Bajo argón, se disolvió Lyso-21 (0,21 g, 0,45 mmol, 1,00 equiv.) en piridina anhidra (4,5 ml, 0,1 M) y se añadió cloruro de benzoílo recién destilado (0,3 ml, 2,27 mmol, 5,00 equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, hasta que el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-21. Luego, se añadieron agua (10 ml) y CHCl3 (10 ml) a la mezcla de reacción y se mantuvo la agitación durante 30 minutos más. Luego, se separaron las capas de esta mezcla bifásica. Seguido de esto, la capa acuosa se extrajo adicionalmente con CHCl3 (2 x 10 ml). En este punto, se descartó la capa acuosa y se combinaron los extractos de CHCl3.
A la solución de CHCb (que contiene el producto) se le añadió HCl acuoso 1 M (30 ml). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que dio como resultado la formación de la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb (2 x 10 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en CHCb (3 x 15 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (60 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó 0,20 g (rendimiento bruto del 77 %) de un aceite rojo, que contenía impurezas. El material obtenido se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: EtOAc:MeOH:TEA; 84:15:1) para dar el producto como un sólido naranja (0,14 g, rendimiento del 55 %). Rf = 0,45 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
M-(ferc-butilcarbonil)-3-hidroxipropilamina:
Figure imgf000017_0002
Elaborado conforme al procedimiento de J. Med. Chem. 2009, 7029.
M-(ferc-butilcarbonil)-3-amino-propionaldehído:
Figure imgf000017_0003
Elaborado conforme al procedimiento de J. Med. Chem. 2009, 7029.
Figure imgf000017_0004
Se disolvió Lyso-21 (0,30 g, 0,64 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (13 ml, 0,05 M). Se añadió N-(ferc-butilcarbonil)-3-amino-propionaldehído (0,33 g, 1,92 mmol, 3,00 equiv.), luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,73 g, 3,84 mmol, 6,00 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. En este punto, el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-21. Se añadió una solución acuosa de NaOH 2 M (30 ml) para disolver las sales de borano en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora antes de agregar DCM (20 ml). La mezcla bifásica resultante se dejó sedimentar y se separó. La capa acuosa se descartó en este punto. A la solución de DCM se le añadió una solución acuosa de HCl 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 20 minutos, lo que dio como resultado la formación de una sal soluble en agua del producto deseado. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron ambas capas. La capa acuosa se lavó adicionalmente con DCM (2 x 30 ml) y luego se descartaron los lavados de DCM combinados.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en DCM (3 x 30 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente produjo una espuma blanca que contenía algunas impurezas. Esta espuma se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: gradiente, EtOAc al 100 % ^ EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5) para dar el producto como un sólido blanco (0,23 g, rendimiento del 57 %). Rf = 0,50 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Figure imgf000018_0001
Una solución del compuesto anterior (Compuesto XXI) (0,21 g, 0,34 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (3,5 ml, 0,1 M) se trató con TFA (2 ml, 26,118 mmol, 77,00 equiv.). La reacción resultante se agitó a temperatura ambiente y se siguió por TLC. Después de 4 horas, se encontró que la reacción se había completado y se inactivó mediante la adición de una solución saturada de NaHCO3. Una vez que la mezcla de reacción se neutralizó, se basificó adicionalmente hasta pH 11 mediante el uso de la solución acuosa de NaOH 2 M. La mezcla ahora alcalina se extrajo con una mezcla de solventes de CHCb e /-PrOH (4:1; 3 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido amarillo (0,13 g, rendimiento del 75 %). Rf = 0,00 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-32:
Figure imgf000018_0002
A un tubo de microondas se añadió el compuesto XX2 (133,00 mg, 0,25 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (86,00 mg, 0,35 mmol, 1,40 equiv.), BINAP (8,00 mg, 0,01 mmol, 0,05 equiv.), Pd(OAc)2 (2,00 g, 0,008 mmol, 0,03 equiv.) y K3PO4 (107,00 g, 0,51 mmol, 2,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1, 1,0 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 13 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (50 ml). La solución resultante se concentró para dar 223,00 mg de un sólido marrón. Este sólido se solubilizó en CHCb (30 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb (2 x 30 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla solvente de CHCb y /-PrOH (4:1; 3 x 50 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (150 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó 155,00 mg (rendimiento bruto del 89 %) de una espuma blanca que contenía algo de material de partida. Esta espuma se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: gradiente EtOAc:MEOH:TEA; 90:9:1 ^ EtOAc:MeOH:TEA; 85:15:5) para dar el producto como un sólido naranja (77,00 mg, rendimiento del 44 %). Rf = 0,60 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Figure imgf000019_0001
Se disolvió Lyso-20 (0,23 g, 0,43 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (9 ml, 0,05 M). Se añadió W-(terc-butilcarbonil)-3-amino-propionaldehído (0,50 g, 2,86 mmol, 6,00 equiv.), luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,91 g, 4,31 mmol, 10,00 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. En este punto, el análisis de TLC mostró un consumo completo de Lyso-20. Se añadió una solución acuosa de NaOH 2 M (30 ml) para disolver las sales de borano en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a ta durante 1 hora antes de agregar DCM (20 ml). La mezcla bifásica resultante se dejó sedimentar y se separó. La capa acuosa se descartó en este punto. A la solución de DCM se le añadió una solución acuosa de HCl 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 20 minutos, lo que dio como resultado la formación de una sal soluble en agua del producto deseado. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron ambas capas. La capa acuosa se lavó adicionalmente con DCM (2 x 30 ml) y luego se descartaron los lavados de DCM combinados.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en DCM (3 x 30 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de una espuma blanca (0,29 g, rendimiento del 81%). Rr = 0,50 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Figure imgf000019_0002
Una solución del Compuesto XX3 (0,28 g, 0,33 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (3,3 ml, 0,1 M) se trató con TFA (2 ml, 26,118 mmol, 79,00 equiv.). La reacción resultante se agitó a temperatura ambiente y se siguió por TLC. Después de 4 horas, se encontró que la reacción se había completado y se inactivó mediante la adición de una solución saturada de NaHCO3. Una vez que la mezcla de reacción se neutralizó, se basificó adicionalmente hasta pH 11 mediante el uso de la solución acuosa de NaOH 2 M. La mezcla ahora alcalina se extrajo con una mezcla de solventes de CHCb e /-PrOH (4:1; 3 x 40 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido amarillo (0,09 g, rendimiento del 42 %). Rr = 0,00 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-33:
Figure imgf000020_0001
A un tubo de microondas se añadió el compuesto XX3 (90,00 mg, 0,14 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (48,00 mg, 0,20 mmol, 1,40 equiv.), BINAP (4,00 mg, 0,007 mmol, 0,05 equiv.), Pd(OAc ) 2 (1,00 mg, 0,004 mmol, 0,03 equiv.) y K 3 PO 4 (60,00 mg, 0,28 mmol, 2,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1,0,5 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 13 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (50 ml). La solución resultante se concentró para dar 139,00 mg de un sólido marrón. Este sólido se solubilizó en CHCl3 (30 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHQ 3 (2 x 30 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH 4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-PrOH (4:1; 3 x 50 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (150 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida por la evaporación del solvente proporcionó 85,00 mg (rendimiento bruto del 63 %) de una espuma marrón que contenía algo de material de partida. Esta espuma se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: CHCb:MeOH:TEA; 85:15:5) para dar el producto como un sólido blanco (49,00 mg, rendimiento del 36 %). Rf = 0,55 (CHCls:MeOH:TEA; 80:15:5).
N,N-Bis(3-cianopropil)-bencilamina
Figure imgf000020_0002
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
N,N-Bis(4-aminobutil)-bencilamina:
Figure imgf000020_0003
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
Bis-(4-aminobutil)-amina
Figure imgf000020_0004
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
Lyso-38:
Figure imgf000021_0001
A un tubo de microondas se le añadió bis-(4-aminobutil)-amina (0,31 g, 1,96 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (1,06 g, 4,41 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,09 g, 0,15 mmol, 0,08 equiv.), Pd(OAc)2 (0,02 g, 0,10 mmol, 0,05 equiv.) y K3PO4 (1,90 g, 7,84 mmol, 4,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1,6,5 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 12 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (50 ml). La solución resultante se concentró a presión reducida. Este sólido se solubilizó en DCM (40 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (40 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb (2 x 40 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCb e /-PrOH (4:1; 3 x 40 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido blanco (0,44 g, rendimiento del 46 %). Rf = 0,10 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
Lyso-39:
Figure imgf000021_0002
Se trató una solución de Lyso-38 (0,13 g, 0,27 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (3 ml, 0,1 M) con formaldehído al 37 % en peso (0,04 g, 0,55 mmol, 2,00 equiv.) y luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,23 g, 1,09 mmol, 4,00 equiv.). La reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Seguido de esto, se añadió NaOH acuoso 2 M (15 ml) a la mezcla de reacción para romper las sales de borano. Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de que el producto se extrajera en CHCl3 (3 x 15 ml). En este momento se descartó la capa acuosa básica.
A la solución de cloroformo se le añadió HCl acuoso 1 M (40 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCb (2 x 15 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCb e /-PrOH (4:1; 3 x 15 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido blanco (0,08 g, rendimiento del 60 %). Rf = 0,30 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5).
N,N-Bis(4-cianobutil)-bencilamina
Figure imgf000021_0003
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
N,N- Bis(5-aminopentil)-bencilamina
Figure imgf000022_0001
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
Bis-(4-aminopentil)-amina: Bioorg. Med. Lett. 2003. 3267
Figure imgf000022_0002
Preparado por el método descrito en Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. 3267.
Lyso-40:
Figure imgf000022_0003
A un tubo de microondas se le añadió bis-(4-aminopentil)-amina (0,40 g, 1,43 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (0,78 g, 3,23 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,07 g, 0,11 mmol, 0,08 equiv.), Pd(OAc)2 (0,02 g, 0,07 mmol, 0,05 equiv.) y K3PO4 (1,22 g, 5,74 mmol, 4,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1, 5 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 12 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeOH (50 ml). La solución resultante se concentró a presión reducida. Este sólido se solubilizó en CHCl3 (20 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (20 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 20 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e i-PrOH (4:1; 3 x 30 ml). Estos extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido amarillo (0,51 g, rendimiento del 69 %). Rf = 0,05 (EtOAc:MeOH:TEA; 84:15:1).
Lyso-41:
Figure imgf000022_0004
Una solución de Lyso-40 (0,45 g, 0,88 mmol, 1,00 equiv.) en DCM (9 ml, 0,1 M) se trató con formaldehído al 37 % en peso (0,14 g, 1,76 mmol, 2,00 equiv.) y luego triacetoxiborohidruro de sodio (0,74 g, 3,51 mmol, 4,00 equiv.). La reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Seguido de esto, se añadió NaOH acuoso 2 M (30 ml) a la mezcla de reacción para romper las sales de borano. Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de extraer el producto en CHCh (3 x 30 ml). En este momento se descartó la capa acuosa básica.
A la solución de cloroformo se le añadió HCl acuoso 1 M (40 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 30 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e i-PrOH (4:1; 3 x 30 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido blanco (0,39 g, rendimiento del 85 %). Rf = 0,10 (EtOAc:MeOH:TEA; 84:15:1).
Lys 42:
Figure imgf000023_0001
A un vial se le añadió 4-cloro-6-metoxi-2-metilquinolina (508,00 mg, 2,45 mmol, 2,40 equiv.), BINAP (95,00 mg, 0,15 mmol, 0,15 equiv.), Pd(OAc)2 (17,00 mg, 0,08 mmol, 0,075 equiv), finamente molido K3PO4 (867,00 mg, 4,09 mmol, 4,00 equiv) y N-(2-aminoetil)-N- metil-1,2-etanodiamina (130,0 ml, 1,02 mmol, 1,00 equiv.). Los reactivos se colocaron bajo una capa de argón; luego se añadió una mezcla de dioxano desgasificado y agua (4 ml, 10: 1). El vial de reacción se selló y se calentó a 120 °C durante 12 horas. Luego, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró sobre un lecho de celite; lavado con cloroformo (3 x 10 mL). Las capas orgánicas combinadas se acidificaron a pH 1 mediante el uso de una solución acuosa de HCl 1M (4 ml, 4,09 mmol, 4,00 equiv.) y se diluyeron con agua (20 ml). La mezcla bifásica resultante se separó y la capa de agua se lavó con cloroformo (2 x 15 ml). El pH de la capa acuosa se ajustó a 11 mediante el uso de hidróxido de amonio. La mezcla ahora alcalina se lavó con cloroformo (3 x 20 ml). Estos 3 extractos de cloroformo se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar el producto como un sólido blanquecino (415,00 mg, rendimiento del 88 %, > 95 % de pureza). La recristalización en EtOAc proporcionó cristales blanquecinos (0,225 g, rendimiento recristalizado del 48 %). Rf = 0,45 (CHCh: MeOH:TEA; 85:10:5); Mp = 205 - 206 °C con descomposición. (EtOAc).
Lys 43:
Figure imgf000023_0002
Se trató una solución de Lyso-42 (1 equiv.) en DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis por HPLC de Lyso-43 mostró una pureza > 99 %.
Lys 44:
Figure imgf000023_0003
A un vial se le añadió 4-cloro-6-metoxi-2-metilquinolina (559,00 mg, 2,70 mmol, 2,40 equiv.), BINAP (105,00 mg, 0,17 mmol, 0,15 equiv.), Pd(OAc)2 (19,00 mg, 0,08 mmol, 0,075 equiv.), finamente molido K3PO4 (1061,00 mg, 5,00 mmol, 4,00 equiv.) y espermidina (180,0 ml, 1,13 mmol, 1,00 equiv.). Los reactivos se colocaron bajo una capa de argón; luego se añadió una mezcla de dioxano desgasificado y agua (4 ml, 10: 1). El vial de reacción se selló y se calentó a 120 °C durante 12 horas. Luego, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró sobre un lecho de celite; lavado con cloroformo (3 x 10 mL). Las capas orgánicas combinadas se acidificaron a pH 1 mediante el uso de una solución acuosa de HCl 1 M (5 ml, 4,5 mmol, 4,00 equiv.) y se diluyeron con agua (20 ml). La mezcla bifásica resultante se separó y la capa de agua se lavó con cloroformo (2 x 15 ml). El pH de la capa acuosa se ajustó a 11 mediante el uso de hidróxido de amonio. La mezcla ahora alcalina se lavó con cloroformo (3 x 20 ml). Estos 3 extractos de cloroformo se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar el producto como un sólido blanquecino (549,00 mg, rendimiento del 99 %, pureza > 90 %). La recristalización en EtOAc proporcionó cristales blanquecinos (123 mg, rendimiento recristalizado del 22 %). Rf = 0,05 (CHCh: MeOH:TEA; 85:10:5); Mp = 198199 °C con descomposición (EtOAc).
Lys 45:
Figure imgf000024_0001
Se trató una solución de Lyso-44 (1 equiv.) en DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis de HPLC de Lyso-45 mostró > 97 % de pureza.
Lys 46:
Figure imgf000024_0002
A una mezcla agitada de Lys 44 (272,00 mg, 0,56 mmol, 1,00 equiv.) en ácido fórmico (2,2 ml, 0,25 M) se le añadió formaldehído acuoso al 37 % (99,8 mg, 1,23 mmol, 2,20 equiv.). La reacción se calentó a 100 °C y se mantuvo el calentamiento durante 2 horas. El análisis de TLC reveló que se había consumido todo el material de partida. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo y se basificó mediante la adición de hidróxido de amonio (hasta pH > 9). La mezcla ahora alcalina se extrajo con cloroformo (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na2SÜ4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto como un sólido blanquecino (261,00 mg, rendimiento del 93 %, pureza > 85 %). El material se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (gradiente: EtOAc al 100 % ^ 84:15:1; EtOAc:MeOH: TEA) para dar un sólido blanquecino puro (102,00 mg, rendimiento del 36 %). Rf = 0,15 (CHCb:MeOH:TEA; 85:10:5); Mp= 140 - 141 °C. Lys 47:
Figure imgf000024_0003
Se trató una solución de Lyso-46 (1 equiv.) en DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis por HPLC de Lyso-47 mostró una pureza > 99 %.
Lyso-72:
Figure imgf000024_0004
A un tubo de microondas se le añadió bis-(hexametil)-triamina (0,73 g, 3,40 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (1,86 g, 7,66 mmol, 2,25 equiv.), BINAP (0,11 g, 0,17 mmol, 0,05 equiv.), Pd(OAc)2 (0,02 g, 0,10 mmol, 0,03 equiv.) y K3PO4 (2,17 g, 10,21 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Se añadió una mezcla de solvente de dioxano y agua (10:1, 11 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 14 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR y una vez completada se enfrió a temperatura ambiente. Seguido de esto, la reacción se filtró sobre celite y se lavó con MeÜH (50 ml). La solución resultante se concentró a presión reducida.
Este sólido se solubilizó en CHCI3 (50 ml) y se añadió HCl acuoso 1 M (50 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. La capa acuosa, que contenía el producto, se lavó adicionalmente con CHCh (2 x 50 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-PrOH (4:1; 3 x 40 ml). Estos extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido amarillo (1,66 g, rendimiento del 90 %). Rf = 0,10 (EtOAc:MeOH:TEA; 80:15:5); Mp = 100 - 102 °C.
Lyso-73:
Figure imgf000025_0001
Se trató una solución de Lyso-72 (1 equiv.) en DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis por HPLC de Lyso-73 mostró una pureza > 99 %.
Lyso-74:
Figure imgf000025_0002
Una solución de Lyso-72 (0,93 g, 1,73 mmol, 1,00 equiv.) en THF (17 ml, 0,1 M) se trató con formaldehído al 37 % en peso (0,28 g, 3,45 mmol, 2,00 equiv.) y luego triacetoxiborohidruro de sodio (1,46 g, 6,91 mmol, 4,00 equiv.). La reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Seguido de esto, se añadió NaOH acuoso 2 M (30 ml) a la mezcla de reacción para romper las sales de borano. Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes de que el producto se extrajera en CHCb (30 ml). En este momento se descartó la capa acuosa básica.
A la solución de cloroformo se le añadió HCl acuoso 1 M (30 ml). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 minutos, lo que proporcionó la correspondiente sal de HCl soluble en agua del producto. Se dejó sedimentar la mezcla y se separaron las capas resultantes. Luego, la capa acuosa que contenía el producto se lavó adicionalmente con CHCl3 (2 x 30 ml). Estos lavados orgánicos combinados se descartaron en este punto.
Mediante el uso de NH4 OH, el pH de la capa acuosa se ajustó a 11, lo que dio como resultado la liberación de la base libre del producto. El producto se extrajo en una mezcla de solventes de CHCh e /-PrOH (4:1; 3 x 30 ml). Estos extractos combinados se lavaron con salmuera (120 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La filtración seguida de la evaporación del solvente proporcionó el producto en forma de un sólido amarillo (0,34 g, rendimiento del 36 %). R f = 0,35 (EtOAc: MeOH: TEA; 80: 15: 5); Pf = 58 - 60 °C.
Lyso-75:
Figure imgf000025_0003
Se trató una solución de Lyso-74 (1 equiv.) En DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis por HPLC de Lyso-75 mostró una pureza> 99%.
Lyso-82:
Figure imgf000026_0001
A un vial de microondas de 20 ml se añadió 1,9-diamino nonano (0,27 g, 1,72 mmol, 1,00 equiv.), 4-bromo-7-cloroquinolina (1,00 g, 4,12 mmol, 2,40 equiv.), BINAP (0,05 g, 0,09 mmol, 0,05 equiv.), Pd(OAc ) 2 (0,01 g, 0,05 mmol, 0,03 equiv.) y K 3 PO 4 (1,09 g, 5,15 mmol, 3,00 equiv.). El vial se selló y se colocó bajo argón. Desgasifica completamente el solvente dioxano: se añadió agua (10:1,6 ml, 0,3 M) y la reacción se calentó a 120 °C durante 12 horas. La reacción fue seguida por TLC y NMR. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró sobre celite, al lavar con MeOH (100 ml). El filtrado se concentró para dar 1,09 g (rendimiento bruto 131 %) de un sólido impuro. Este material se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (eluyente: gradiente; EtOAc al 100 % ^ EtOAc:MeOH:TEA; 90:9:1) para dar el producto como un sólido blanco (0,40 g, rendimiento del 37 %). Rf = 0,40
(EtOAc:MeOH:TEA; 90:9:1); Mp = 158 - 160 °C.
Lyso-83:
Figure imgf000026_0002
Se trató una solución de Lyso-82 (1 equiv.) en DCM con una solución 1 M de HCl en éter dietílico (10 equiv.). El análisis por HPLC de Lyso-83 mostró una pureza > 90 %.
Resultados
Los presentes análogos se han diseñado para probar un factor importante: el papel del enlazador entre los dos restos de cloroquinolina. Con ese fin, hemos observado que el reemplazo del enlazador de Lys01 con enlazadores más largos, como la espermina (Lys 20 y 25) y la espermidina (Lys21 y 26) conducen a aumentos significativos en la potencia. Mientras que el enlazador de espermina introduce una funcionalidad adicional de nitrógeno (y una carga positiva adicional en condiciones fisiológicas), el enlazador de espermidina es más similar al enlazador LysOl. Sin embargo, a diferencia del enlazador LysO1, el enlazador de espermidina no es simétrico. El enlazador de espermidina contiene tres y cuatro metilenos, respectivamente, entre los tres átomos de nitrógeno del enlazador de triamina, mientras que el conector LysOl contiene dos metilenos entre cada uno de los tres átomos de nitrógeno.
Actividad citotóxica de compuestos enlazadores asimétricos y más largos en células cancerosas.
Las células de glioma LN229 y las células de melanoma A375P se sembraron en un formato de 384 pocillos y los compuestos CQ, HCQ y Lys01-Lys41 y 72-75 (estructuras proporcionadas en el Apéndice A, Estructuras químicas) se administraron en concentraciones entre 0,01-10 micromolar mediante el uso de un dispensador asistido por robot. Después de 72 horas de incubación a 37 grados, se aplicó azul Alamar y se determinó la viabilidad mediante el uso de absorbancia. La absorbancia se normalizó al control de DMSO y se estimó un log IC50 mediante el uso del software Graphpad Prism (Figura 11, Tabla 1). Las células LN229 produjeron datos similares (datos no mostrados). Las CI50 seleccionadas de los compuestos más prometedores se presentan en la Figura 1A. La citotoxicidad aumentada del enlazador más largo y los compuestos asimétricos se confirmó en un ensayo de formación de colonias de 2 semanas mediante el uso de 5 líneas celulares diferentes (Figura 1B). El análisis de los hallazgos de citotoxicidad por sí solos esclareció algunas características clave de las posibles relaciones estructura-actividad. Primero, la sustitución de la sustitución de nitrógeno central más allá del metilo reduce la actividad. En segundo lugar, no hubo una clara ventaja de los enlazadores asimétricos versus simétricos (Figura 2A) con respecto a la citotoxicidad sola. En tercer lugar, el aumento de la longitud del enlazador de Lys05 se asoció con un aumento de la actividad, pero más allá de un cierto umbral de carbonos del enlazador, no hay una potencia aumentada para estos compuestos en el ensayo de viabilidad del azul alamar (Figura 2B).
Los compuestos enlazadores más largos se localizan en el lisosoma.
Para confirmar que las CQ diméricas con enlazadores más largos conservan su supuesta localización subcelular lisosomal, se funcionalizó Lys21/26 en una sonda fluorescente uniendo el colorante Cy3 al nitrógeno central. Este compuesto denominado Lys21-Cy3 (Figura 3A) se usó para tratar el melanoma A375 (Figura 3B). Co tinción con verde lysotracker y subsecuente microscopía fluorescente permitió la visualización de la localización lisosomal para el derivado de Lys21. Después de 48 horas de tratamiento, la masa lisosómica había disminuido y la fluorescencia roja era más citoplásmica indicativa de ruptura lisosómica y difusión del compuesto intacto.
Los compuestos enlazadores más largos están asociados con una modulación de autofagia más profunda, especies reactivas de oxígeno (ROS) y apoptosis
Como método inicial para determinar los efectos de los compuestos enlazadores más largos sobre la acumulación de vesículas autofágicas, se usó una serie de CQ diméricas más citotóxicas para tratar 3 líneas celulares diferentes (1 uM, 24 horas). Se recogieron los lisados celulares y se inmunotransfirieron contra LC3 y actina como se realizó (Figura 4). Para determinar si el aumento de la citotoxicidad asociado con los derivados de LysOl se correlacionaba con una inhibición más potente de la autofagia, se realizó una inmunotransferencia de LC3. LC3 es una proteína similar a la ubiquitina que existe como una forma no conjugada (LC3I) o conjugada a membranas AV (LC3II)(23). La cuantificación de las bandas de LC3II/actina demostró que todos los compuestos enlazadores más largos eran superiores a Lys05 en la modulación de los niveles de LC3II. Aunque hubo cierta variabilidad entre las líneas celulares de melanoma, en todos los casos el compuesto enlazador más largo Lys75 produjo el aumento más consistente y sustancial en la ración de LC3II/actina. Para confirmar que la modulación LC3II observada se debió de hecho a la inhibición del flujo autofágico, se usaron células A375P mCherry-GFP-LC3 en un cribado fenotípico de alto rendimiento. En las células que expresan este constructo informador fluorescente en tándem, la inducción de autofagia da como resultado la acumulación de puntos rojos, porque la fluorescencia verde de GFP se apaga parcialmente cuando las vesículas autofágicas se fusionan con los lisosomas. En las células donde el flujo autofágico se inhibe distalmente debido a un deterioro lisosómico, la señal verde persiste, convirtiendo los puntos en un color amarillo. Lys01-Lys27, HCQ, CQ y doxorrubicina, que sirve como control, se administraron a las células en concentraciones que iban de 0 a 10 uM mediante el uso de transferencia de molinete, la imagen confocal de Operetta permitió la captura de imágenes para análisis de alto contenido (Figura 5, Figura 6). El análisis simple de la base por célula (basado en la tinción de Hoescht nuclear) demostró que a concentraciones de 10 pM, los compuestos que se habían identificado previamente por tener una CI50 más baja en experimentos de viabilidad también producían relaciones fluorescentes verde / rojo> 3,5. Los histogramas de% de células con una relación verde: rojo> 3,5 demuestran que, en algunos casos, dosis más bajas de los compuestos también produjeron este fenotipo indicativo de una inhibición efectiva de la autofagia (Figura 7). Estudios anteriores han demostrado que los derivados de CQ producen ROS en las células cancerosas. Cada uno de los derivados de LysO1 enlazador más largo fue superior a Lys05 en la inducción de ROS (Figura 8A). Lys26 (estrechamente relacionado con Lys21) y Lys75 produjeron los niveles más altos de ROS. Se usó citometría de flujo para cuantificar la proporción verde/rojo indicativa de inhibición del flujo autofágico en células A375P mCHerry-eGFP-LC3 tratadas con CQ diméricas de enlazador más largo (Figura 8b ). De nuevo, Lys21 y Lys75 fueron más efectivas para inhibir el flujo autofágico. Finalmente, para determinar si esta inhibición del flujo autofágico tenía una consecuencia funcional de la muerte celular, se midió la anexina V que refleja la apoptosis en células A375 tratadas con compuestos. Similar a los resultados observados con el flujo autofágico, Lys21 y Lys75 produjeron la mayor apoptosis en el punto de tiempo de 24 horas (Figura 8C). Para situar este grado de apoptosis en el contexto clínico, las células de melanoma mutantes BRAF se trataron con CQ diméricos enlazadores más largos o BRAF estándar de atención o BRAF (PLX4720) e inhibidor de MEK (trametinib). Los derivados de LysOl enlazador más largo produjeron significativamente más apoptosis que los inhibidores de cinasa clínicamente aprobados a pesar de la dosificación equimolar (Figura 8D).
Los CQ diméricos con enlazadores más largos perjudican el crecimiento y la invasión del melanoma en un sistema de cultivo de tejido de 3 dimensiones.
El modelo de esferoide 3D se ha usado ampliamente para imitar el microambiente tumoral (Ma y otros Clin Can Research 2011). Los niveles de autofagia reflejan más la dinámica de la autofagia in vivo en los modelos 3D en comparación con el cultivo celular bidimensional tradicional. En este formato, las células cancerosas se cultivan como esferoides y luego se implantan en una matriz de colágeno. Los esferoides comienzan a invadir y crecer dentro de este microambiente tisular. El tratamiento con varias cloroquinas diméricas enlazadoras más largas demostró una vez más que Lys75 era el compuesto más potente para inhibir el crecimiento y la invasión de los esferoides 3D (Figura 9A, B).
Compuestos enlazadores más largos
Para investigar más a fondo el papel de la longitud del enlazador con respecto a la potencia, preparamos una serie de compuestos con enlazadores aún más largos (Figura 13 Compuestos Lys86-Lys97). También revisamos los efectos de la sustitución del anillo de quinolona en el contexto de estos compuestos de enlace más largo (Figura 13).
Resumen y Conclusión
El aumento de la longitud del enlazador entre los anillos de quinolona en las cloroquinas diméricas mejoró significativamente la citotoxicidad anticancerosa, la producción de ROS y la inhibición de la autofagia. Las cloroquinas diméricas asimétricas mostraron una citotoxicidad anticancerosa similar en ensayos de viabilidad de 72 horas a sus homólogos simétricos comparables. Sin embargo, en el caso de Lys21, se observó una inhibición de la autofagia superior y una capacidad para inducir la apoptosis en comparación con compuestos comparables que eran simétricos.
La toxicidad gastrointestinal asociada con la disfunción de las células de Paneth observada en dosis LD30 de Lys05, respalda el mecanismo de acción de la presente invención y también sugiere que los cánceres de colon, que a menudo comparten características con las células de Paneth, pueden ser un tipo de tumor, entre otros, que puede ser particularmente sensible a Lys05 y sus derivados optimizados. Los cánceres adicionales que representan objetivos particularmente importantes incluyen el melanoma y el cáncer de pulmón de células no pequeñas, ya que las líneas celulares de melanoma demostraron la mayor diferencia en sensibilidad a LysOl en comparación con HCQ, y una línea celular de cáncer de pulmón mutado EGFR demostró sensibilidad tanto a HCQ como a Lys05. Se planean más estudios mecanicistas que potencialmente identificarán ensayos farmacodinámicos que guían el desarrollo de fármacos. Se planean estudios farmacocinéticos en ratones para establecer el perfil inicial in vivo.
Ventajas sobre otras tecnologías similares: La presente invención representa los derivados de bisaminoquinolina más potentes descritos hasta ahora en líneas celulares. Otros compuestos de autofagia no se centran en el lisosoma como diana y, en consecuencia, no evidencian el nivel de actividad de los compuestos de acuerdo con la presente invención.
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Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de acuerdo con las estructuras químicas:
Figure imgf000030_0001
Lys 74: N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N6-(6-((7-cloroquinolin-4-il)amino)hexil)-N6-metilhexano-1,6-diamina
Figure imgf000030_0002
N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N4-(3-((7-cloroquinolin-4-il)amino)propil)-N4-metilbutano-1,4-diamina
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de la reivindicación 1 de acuerdo con la estructura química:
Figure imgf000030_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 de acuerdo con la estructura química:
Figure imgf000030_0004
Triclorhidrato de N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N6-(6-((7-cloroquinolin-4-il)amino)hexil)-N6-metilhexano-1,6-diamina.
4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que es:
Figure imgf000031_0001
N1-(7-cloroquinolin-4-il)-N4-(3-((7-cloroquinolin-4-il)amino)propil)-N4-metilbutano-1,4-diamina.
5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4 en combinación con un portador, aditivo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
6. Composición de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2-3.
7. Composición de acuerdo con la reivindicación 5 que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4.
8. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5-7 que comprende además una cantidad efectiva de al menos un agente anticanceroso adicional.
9. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho agente anticanceroso adicional es un inhibidor de FLT-3, un inhibidor de VEGFR, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de aurora cinasa, un modulador de PIK-1, un inhibidor de Bcl-2, un inhibidor de HDAC, un inhibidor de c-MET, un inhibidor de PARP, un inhibidor de Cdk, un inhibidor de EGFR TK, un inhibidor de IGFR-TK, un anticuerpo anti-HGF, un inhibidor de la cinasa PI3, un inhibidor de AKT, un inhibidor de JAK/STAT, un inhibidor del punto de control-1 o 2, un inhibidor de la cinasa de adhesión focal, un inhibidor de la cinasa Map cinasa (mek), un anticuerpo trampa de VEGF o una mezcla de los mismos.
10. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho agente anticanceroso se selecciona del grupo que consiste en everolimus, trabectedina, abraxano, TLK 286, AV-299, DN-101, pazopanib, GSK690693, rTa 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, enzastaurina, vandetanib, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, p Ha -739358, R-763, AT-9263, pemetrexed, erlotinib, dasatanib, nilotinib, decatanib, panitumumab, amrubicina, oregovomab, Lep-etu, nolatrexed, azd2171, batabulina, ofatumumab, zanolimumab, edotecarina, tetrandrina, rubitecan, tesmilifeno, oblimersen, ticypilimumab, ipilimolumab, gosipol, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, cilengitide, gimatecan, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR 1 KRX-0402, lucantona, LY 317615, neuradiab, vitespan, Rta 744, Sdx 102, talampanel, atrasentan, Xr 311, romidepsin, ADS- 100380, sunitinib, 5-fluorouracilo, vorinostat, etopósido, gemcitabina, doxorrubicina, irinotecan, doxorrubicina liposomal, 5'-desoxi-5-fluorouridina, vincristina, temozolomida, ZK-304709, seliciclib; PD0325901, AZD-6244, capecitabina, ácido L-glutámico, N - [4-[2-(2-amino-4,7-dihidro-4-oxo-1H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-5-il)etil]benzoil]-, sal disódica, heptahidrato, camptotecina, irinotecan marcado con PEG, tamoxifeno, citrato de toremifeno, anastrazol, exemestano, letrozol, DES(dietilestilbestrol), estradiol, estrógeno, estrógeno conjugado, bevacizumab, IMC-1C11, CHIR-258,); 3-[5-(metilsulfonilpiperadinemetil)-indolilj-quinolona, vatalanib, AG-013736, AVE-0005, la sal acetato de [D-Ser(Bu t) 6, Azgly 10] (piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu t)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH 2 acetato [C 59 Hs 4 N 1 sOÍ 4 -(C 2 H 4 O 2 )x donde x = 1 a 2,4], acetato de goserelina, acetato de leuprolida, pamoato de triptorelina, acetato de medroxiprogesterona, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de megestrol, raloxifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, acetato de megestrol, CP-724714; TAK-165, HKI-272, erlotibinib, lapatanib, canertinib anticuerpo a Bx -EGF, erbitux, EKB-569, PKI-166, GW-572016, lonafarnib, BMS-214662, tipifarnib; amifostina, NVP-LAQ824, ácido suberoil analida hidroxámico, ácido valproico, tricostatina A, FK-228, SU11248, sorafenib, KR951, aminoglutetimida, arnsacrina, anagrelida, L-asparaginasa, vacuna contra el bacilo de Calmette-Guerin (BCG), bleomicina, buserelina, busulfán, carboplatino, carmustina, clorambucilo, cisplatino, cladribina, clodronato, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorrubicina, dietilestilbestrol, epirrubicina, fludarabina, fludrocortisona, fluoximesterona, flutamida, gemcitabina, gleevac, hidroxiurea, idarrubicina, ifosfamida, imatinib, leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, melfalán, 6-mercaptopurina, mesna, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, octreotida, oxaliplatino, pamidronato, pentostatina, plicamicina, porfímero, procarbazina, raltitrexed, rituximab, estreptozocina, tenipósido, testosterona, talidomida, tioguanina, tiotepa, tretinoina, vindesina, ácido 13-cisretinoico, mostaza fenilalanina, mostaza uracilo, estramustina, altretamina, floxuridina, 5-deooxiuridina, citosina arabinósido, 6-mecaptopurina, desoxicoformicina, calcitriol, valrubicina, mitramicina, vinblastina, vinorelbina, topotecán, razoxina, marimastat, COL-3, neovastato, BMS-275291, escualamina, endostatina, SU5416, SU6668, EMD121974, interleucina-12, IM862, angiostatina, vitaxina, droloxifeno, idoxifeno, espironolactona, finasterida, cimitidina, trastuzumab, denileucina diftitox, gefitinib, bortezimib, paclitaxel, irinotecan, topotecan, doxorrubicina, docetaxel, vinorelbina, bevacizumab (anticuerpo monoclonal) y erbitux, paclitaxel sin cremóforo, epitilona B, BMS-247550, BMS-3107050, droloxifeno, 4 hidroxitamoxifeno, pipendoxifeno, ERA- 923, arzoxifeno, fulvestrant, acolbifeno, lasofoxifeno, idoxifeno, TSE-424, HMR- 3339, ZK186619, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, rapamicina, 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, temsirolimus, AP-23573, RAD001, ABT-578, BC-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, wortmanina, ZM336372, L-779,450, PEG-filgrastim, darbepoetina, factor estimulante de colonia, zolendronato, prednisona, cetuximab, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, histrelina, interferón alfa-2a pegilado, interferón alfa-2a, interferón alfa-2b pegilado, interferón alfa-2b, azacitidina, PEG-L-asparaginasa, lenalidomida, gemtuzumabida, hidrocortisona, interleucina-11, dexrazoxano, alemtuzumab, ácido transretinoico total, ketoconazol, interleucina-2, megestrol, inmunoglobulina, mostaza nitrogenada, metilprednisolona, ibritgumomab tiuxetan, andrógenos, decitabina, hexametilmelamina, bexaroteno, tositumomab, trióxido de arsénico, cortisona, editronato, mitotano, ciclosporina, daunorrubicina liposomal, edwina-asparaginasa, estroncio 89, casopitant, netupitant, antagonistas del receptor NK-1, palonosetrón, aprepitant, difenhidramina, hidroxicina, metoclopramida, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, dexametasona, metilprednisolona, proclorperazina, granisetrón, ondansetrón, dolasetrón, tropisetrón, sspegfilgrastim, eritropoyetina, epoetina alfa y darbepoetina alfa, ipilumumab, vemurafenib y mezclas de los mismos.
11. Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 o 4 para su uso en la inhibición de la autofagia en un sistema biológico en el que se desea la inhibición de la autofagia.
12. Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un paciente que lo necesite en donde dicha enfermedad o afección responde favorablemente a la inhibición de la autofagia.
13. Compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde dicho estado o afección es artritis reumatoide, malaria, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus, urticaria crónica, enfermedad de Sjogren o cáncer.
14. Composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 13 para su uso en el tratamiento del cáncer en un paciente que lo necesite.
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