ES2864415T9

ES2864415T9 - Nuevos profármacos poliméricos de la HCh

Info

Publication number: ES2864415T9
Application number: ES19214864T
Authority: ES
Inventors: Thomas Kurpiers; Harald Rau; Evelyn Exner; Steen Jensen; Grethe Nørskov Rasmussen; Torben Lessmann; Thomas Wegge; Alina Hermann; Nina Schubert
Original assignee: Ascendis Pharma Endocrinology Division AS
Current assignee: Ascendis Pharma Endocrinology Division AS
Priority date: 2014-11-18
Filing date: 2015-11-17
Publication date: 2023-05-23
Also published as: RU2718664C2; IL251906B1; NO2022014I1; IL251906A0; JP7431355B2; FIC20220017I1; JP7210683B2; SI3653227T1; JP2021020932A; ES2947818T3; IL251906B2; HRP20210400T1; AU2015348633B2; BR112017009798A2; EP4218823A2; LT3653227T; EP3653227B9; EP3653227B3; AU2020270494B2; NL301172I1

Description

DESCRIPCIÓN

Nuevos profármacos poliméricos de la HCh

La presente invención se refiere a compuestos poliméricos de hormona del crecimiento humana y formulaciones farmacéuticas secas, líquidas y reconstituidas que comprenden dicho compuesto. Además, se refiere a su uso como medicamentos para el tratamiento de enfermedades que se pueden tratar con hormona del crecimiento.

La hormona del crecimiento humano (HCh) es una hormona que estimula el crecimiento y la reproducción celular en humanos y otros animales. Es una hormona polipeptídica monocatenaria de 191 aminoácidos que es sintetizada, almacenada y secretada por las células somatotrofas dentro de las alas laterales de la hipófisis anterior.

La hormona del crecimiento tiene una variedad de funciones en el cuerpo, la más notoria es el aumento de estatura a lo largo de la infancia, y existen varias enfermedades que se pueden tratar mediante el uso terapéutico de la HCh, tales como, por ejemplo, la deficiencia de hormona del crecimiento (DHC) pediátrica y adulta, la estatura baja idiopática (EBI), mutaciones del gen homeobox de baja estatura (SHOX), síndrome de Turner (ST), síndrome de Noonan (SN), síndrome de Prader-Willi (SPW), niños nacidos pequeños para la edad gestacional (SGA), insuficiencia renal crónica (IRC), deterioro progresivo debido al VIH o SIDA u otras neoplasias, síndrome del intestino corto (SIC), sarcopenia y debilidad.

El tratamiento estándar de las enfermedades relacionadas con la HCh es mediante inyecciones subcutáneas frecuentes, generalmente diarias. Esto es especialmente inconveniente para la población de pacientes predominantemente pediátrica. Por lo tanto, se están desarrollando varios enfoques para proporcionar depósitos de liberación sostenida que requieren administraciones de HCh menos frecuentes, tales como los descritos en los documentos WO2009/133137 A2 y EP 2133256 A1. Los conjugados poliméricos solubles de HCh, en particular conjugados de PEG, también se desvelan, por ejemplo, en los documentos WO 2006/102659 A2 y WO 2005/099768 A2 y las solicitudes relacionadas EP 1579873 A1 y Ep 1625855 A1.

También es deseable mantener bajo el volumen de inyección para asegurar la administración del fármaco de una manera conveniente para el paciente. El dolor en el lugar de la inyección aumenta significativamente cuando el volumen de inyección se incrementa de 0,5 a 1,0 ml y se deben evitar volúmenes de inyección superiores a 1,0 ml. Como la mayoría de los pacientes que requieren tratamiento con HCh son niños, los volúmenes de inyección se deben mantener al mínimo para garantizar un cumplimiento adecuado y facilitar el resultado del tratamiento deseado. La cantidad de HCh por volumen dado, sin embargo, está restringida y se reduce si se usan ciertos excipientes, vehículos unidos covalentemente y no covalentemente, tales como polímeros. En tales casos, el volumen administrado por inyección debe aumentar o se necesita más de una inyección. Si esta no es una opción, ciertas enfermedades que requieren dosis más altas de HCh, tales como EBI, síndrome de Turner, síndrome de Noonan, enfermedad renal crónica, síndrome de Prader-Willi y pacientes con DHC puberal, no se puede tratar con una formulación farmacéutica determinada. Además, los pacientes pediátricos que requieren terapia con hormona del crecimiento crecen y aumentan de peso y, en consecuencia, requieren cantidades crecientes de HCh para asegurar la exposición a concentraciones relativas constantes de HCh.

Por tanto, es deseable proporcionar formulaciones de liberación sostenida de HCh que se puedan administrar con una concentración alta y volúmenes de inyección por debajo de 1,0 ml en diferentes indicaciones que requieran terapia con HCh.

La viscosidad de una formulación farmacéutica determina además la capacidad de inyectar la formulación farmacéutica a través de agujas de calibre fino. Con el aumento de la viscosidad, se requieren agujas de mayor diámetro para asegurar que la formulación farmacéutica se pueda inyectar dentro de un período de tiempo aceptable.

Dado que el tamaño de la aguja necesaria para la inyección de dicha formulación de HCh influye en la aceptación del paciente, es deseable proporcionar formulaciones de liberación sostenida de HCh con una viscosidad que facilite la administración con un diámetro de aguja pequeño y un tiempo de inyección aceptable.

Si una formulación farmacéutica que comprende HCh se almacena en su forma seca, es deseable que la reconstitución se realice rápidamente y con la menor formación de espuma/burbujas posible para minimizar los esfuerzos antes de la administración y asegurar la dosificación adecuada del fármaco.

Por lo tanto, un objeto de la presente invención es superar al menos parcialmente las deficiencias descritas anteriormente.

Este objeto se logra con un compuesto de fórmula (IV)

en donde

-D es un polipéptido de HCh de la SEQ ID NO: 1 conectado al resto de la molécula a través de un grupo funcional amina proporcionado por una cadena lateral de lisina; y

cada uno de p1, p2, p3, p4 es independientemente un número entero comprendido entre 210 y 240.

Sorprendentemente, ahora se ha descubierto que el compuesto de la presente invención presenta varias propiedades inesperadas.

Se espera que la reducción de la cantidad de PEG por resto de HCh aumente la cantidad de equivalentes de HCh que se pueden resolver en una formulación farmacéutica con una viscosidad determinada. Sin embargo, en comparación con, por ejemplo, el compuesto 36 del documento WO2009/133137 A2, los compuestos de la presente invención permiten un aumento en la concentración relativa de la HCh que es más que proporcional a la reducción del tamaño de PEG. En otras palabras, una formulación farmacéutica que comprende un profármaco de HCh polimérico con una viscosidad dada puede comprender relativamente más HCh si el profármaco de HCh polimérico es del compuesto de la presente invención en comparación con, por ejemplo, el compuesto 36 del documento WO2009/133137 A2.

Esto es ventajoso, porque con el fin de restringir el dolor asociado con los fármacos inyectables se pueden administrar volúmenes limitados a un paciente. Por lo tanto, poder administrar más HCh por volumen de inyección dado abre nuevas poblaciones de pacientes, a saber, aquellos pacientes que padecen enfermedades que requieren dosis más altas de HCh por inyección y aquellos pacientes que padecen enfermedades que pueden requerir solo dosis moderadas por unidad de peso, pero en donde los pacientes son pesados y por lo tanto requieren más equivalentes de HCh.

También se descubrió sorprendentemente que el compuesto del presente también tiene ventajas sorprendentes con respecto a su proceso de fabricación. La purificación del compuesto de la presente invención se puede realizar con una carga que sea al menos tres veces mayor que para el compuesto 36 del documento WO2009/133137 A2, por ejemplo, sin alterar la eficacia de la separación y la calidad del producto. Esto reduce significativamente el número de purificaciones necesarias.

Además, si el compuesto de la presente invención está comprendido en una formulación farmacéutica seca, dicha formulación farmacéutica seca se puede reconstituir más rápido y con la formación de menos espuma en comparación con, por ejemplo, el compuesto 36 del documento WO2009/133137 A2. Por lo tanto, reconstituir una formulación farmacéutica seca de la presente invención ahorra tiempo y asegura la administración de la dosis adecuada.

Dentro de la presente invención, los términos se utilizan con el significado siguiente:

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "hormona del crecimiento humana (HCh)" se refiere al polipéptido de la SEQ ID NO: 1

La SEQ ID NO: 1 tiene la siguiente secuencia:

El polipéptido de HCh puede ser un monómero o multímero. Los multímeros pueden ser dímeros, trímeros, tetrámeros o multímeros que comprenden al menos cinco unidades polipeptídicas monoméricas. Los multímeros también pueden ser homodímeros o heterodímeros. Los multímeros de la invención pueden ser el resultado de una asociación hidrófoba, hidrófila, iónica y/o covalente y/o se pueden unir indirectamente, por ejemplo, mediante la formación de liposomas. Preferentemente, el polipéptido de HCh es un monómero.

El término "fármaco", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una sustancia usada en el tratamiento, la cura, la prevención o el diagnóstico de una enfermedad o utilizada para mejorar el bienestar físico o mental. Si un fármaco se conjuga con otro resto, la parte del producto resultante que se originó a partir del fármaco se denomina "resto biológicamente activo".

Tal como se usa en el presente documento, el término "profármaco" se refiere a un resto biológicamente activo conectado reversiblemente y covalentemente a un grupo protector especializado a través de un resto enlazador de profármaco reversible que comprende un enlace reversible con el resto biológicamente activo para alterar o eliminar propiedades indeseables en la molécula original. Esto también incluye la mejora de propiedades deseables en el fármaco y la supresión de propiedades indeseables. El grupo protector especializado no tóxico se denomina "vehículo". Un profármaco libera el resto biológicamente activo unido de forma reversible y covalente en forma de su fármaco correspondiente.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "forma libre" de un medicamento significa el medicamento en su forma no modificada, farmacológicamente activa.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "formulación líquida" significa una formulación que comprende el compuesto de la presente invención y al menos un disolvente. Un disolvente preferido es el agua.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "formulación seca" significa que la formulación que comprende el compuesto de la presente invención se proporciona en forma seca. Los métodos adecuados para el secado son el secado por pulverización y la liofilización, que también se denomina secado por congelación. Dicha formulación seca que comprende el compuesto tiene un contenido de agua residual de un máximo del 10 %, preferentemente menos del 5 % y más preferentemente menos del 2 % cuyo contenido de agua residual se determina según Karl Fischer. El método preferido de secado es la liofilización. "Formulación liofilizada" significa que una formulación que comprende el compuesto de la presente invención se congeló primero y posteriormente se sometió a reducción de agua por medio de presión reducida. Esta terminología no excluye las etapas de secado adicionales que pueden tener lugar en el proceso de fabricación antes de llenar la formulación en el recipiente final.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "formulación reconstituida" significa el resultado de añadir un disolvente que también se denomina "solución de reconstitución" a una formulación seca. Preferentemente, la cantidad de disolvente es tal que la formulación seca se disuelve completamente en la formulación reconstituida resultante.

T al como se usa en el presente documento, el término "excipiente" se refiere a un diluyente, adyuvante o vehículo con el que se administra el agente terapéutico.

La expresión "soluble en agua" como en un "resto soluble en agua" es un resto que es soluble en agua a temperatura ambiente. Normalmente, una solución de un resto soluble en agua transmitirá al menos aproximadamente el 75 %, más preferentemente al menos aproximadamente el 95 % de la luz, transmitida por la misma solución después de la filtración. Sobre una base en peso, un resto soluble en agua o partes del mismo será preferentemente al menos aproximadamente un 35 % (en peso) soluble en agua, más preferentemente al menos aproximadamente el 50 % (en peso) soluble en agua, aún más preferentemente alrededor del 70 % (en peso) soluble en agua, y aún más preferentemente alrededor del 85 % (en peso) soluble en agua. Es lo más preferido, sin embargo, que el resto soluble en agua o partes del mismo sea de aproximadamente el 95 % (en peso) soluble en agua o completamente soluble en agua.

Tal como se usa en el presente documento, el término "hidrogel" significa una red polimérica hidrófila o anfifílica compuesta de homopolímeros o copolímeros, que es insoluble debido a la presencia de reticulaciones químicas covalentes. Las reticulaciones proporcionan la estructura de red y la integridad física. Los hidrogeles presentan una compatibilidad termodinámica con el agua que les permite hincharse en medios acuosos.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "grupo funcional" significa un grupo de átomos que puede reaccionar con otros grupos funcionales. Los grupos funcionales incluyen los siguientes grupos: ácido carboxílico (-(C=O)OH), amina primaria o secundaria (-NH², -NH-), maleimida, tiol (-SH), ácido sulfónico (-(O=S=O)OH), carbonato, carbamato (-O(C=O)N<), hidroxi (-OH), aldehído (-(C=O)H), cetona (-(C=O)-), hidrazina (>N-N<), isocianato, isotiocianato, ácido fosfórico (-O(P=O)OHOH), ácido fosfónico (-O(P=O)OHH), haloacetilo, haluro de alquilo, acrilαlo, fluoruro de arilo, hidroxilamina, disulfuro, vinil sulfona, vinil cetona, diazoalcano, oxirano y aziridina.

Tal como se usa en el presente documento, el término "resto" significa una parte de una molécula, que carece de al menos un átomo en comparación con el reactivo correspondiente. Si, por ejemplo, un reactivo de fórmula "H-X-H" reacciona con otro reactivo y pasa a formar parte del producto de reacción, el resto correspondiente del producto de reacción tiene la estructura "H-X-" o "-X-", mientras que cada "-" indica unión a otro resto. Por consiguiente, un resto biológicamente activo se libera de un profármaco como un fármaco.

Se entiende que si se proporciona la secuencia o estructura química de un grupo de átomos cuyo grupo de átomos está unido a dos restos o está interrumpiendo un resto, dicha secuencia o estructura química se puede unir a los dos restos en cualquier orientación, a menos que se indique específicamente lo contrario. Por ejemplo, un resto " C(O)N(R)-" se puede unir a dos restos o interrumpir un resto como "-C(O)N(R)-" o como "-N(R)C(O)-". De forma similar, un resto

puede estar unido a dos restos o puede interrumpir un resto tal como

En caso de que los compuestos de fórmula (IV) comprendan uno o más grupos ácidos o básicos, la invención también comprende sus sales farmacéuticamente o toxicológicamente aceptables correspondientes, en particular sus sales farmacéuticamente utilizables. Por tanto, los compuestos de fórmula (IV) que comprenden grupos ácidos se pueden usar de acuerdo con la invención, por ejemplo, como sales de metal alcalino, sales de metal alcalinotérreo o sales de amonio. Algunos ejemplos más precisos de dichas sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoniaco o aminas orgánicas, tales como, por ejemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina o aminoácidos. Los compuestos de fórmula (IV) que comprenden uno o más grupos básicos, es decir, los grupos que pueden estar protonados, pueden estar presentes y se pueden usar de acuerdo con la invención en forma de sus sales de adición con ácidos inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos de ácidos adecuados incluyen cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico, ácido ptoluenosulfónico, ácidos naftalenodisulfónicos, ácido oxálico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido fenilpropiónico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico y otros ácidos conocidos para la persona experta en la materia. Para el experto en la técnica, se conocen métodos adicionales para convertir el grupo básico en un catión como la alquilación de un grupo amina que da como resultado un grupo amonio con carga positiva y un contraión apropiado de la sal. Si los compuestos de la fórmula (IV) comprenden simultáneamente grupos ácidos y básicos en la molécula, la invención también incluye, además de las formas de sal mencionadas, sales internas o betaínas (zwitteriones). Las sales respectivas de acuerdo con la fórmula (IV) se pueden obtener mediante métodos habituales que son conocidos por el experto en la técnica como, por ejemplo poniendo en contacto estos con un ácido o base orgánica o inorgánica en un disolvente o dispersante, o mediante intercambio aniónico o intercambio catiónico con otras sales. La presente invención también incluye todas las sales de los compuestos de la fórmula (IV) que, debido a su baja compatibilidad fisiológica, no son directamente adecuadas para su uso en productos farmacéuticos, pero que pueden usarse, por ejemplo, como intermedios para reacciones químicas o para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora tal como la EMA (Europa) y/o la FDA (EE.UU.) y/o cualquier otra agencia reguladora nacional para el uso en animales, preferentemente, en seres humanos.

Tal como se usa en el presente documento, el término "polímero" significa una molécula que comprende unidades estructurales repetidas, es decir, los monómeros, conectadas por enlaces químicos de forma lineal, circular, ramificada, reticulada o dendrimérica o una combinación de las mismas, que puede ser de origen sintético o biológico o una combinación de ambas. Se entiende que un polímero también puede comprender uno o más de otros grupos químicos y/o resto/restos, tales como, por ejemplo, uno o más grupos funcionales. Preferentemente, un polímero soluble tiene un peso molecular de al menos 0,5 kDa, por ejemplo, un peso molecular de al menos 1 kDa, un peso molecular de al menos 2 kDa, un peso molecular de al menos 3 kDa o un peso molecular de al menos 5 kDa. Si el polímero es soluble, es preferible que tenga un peso molecular de como máximo 1000 kDa, tal como, como máximo 750 kDa, tal como, como máximo 500 kDa, tal como, como máximo 300 kDa, tal como, como máximo 200 kDa, tal como, como máximo 100 kDa. Se entiende que para polímeros insolubles, tales como hidrogeles reticulados, no se pueden proporcionar intervalos de peso molecular significativos.

Tal como se usa en el presente documento, el término "polimérico" significa un reactivo o un resto que comprende uno o más polímeros.

El experto en la materia entiende que los productos de polimerización obtenidos de una reacción de polimerización no tienen todos el mismo peso molecular, sino que muestran una distribución de peso molecular. En consecuencia, los intervalos de peso molecular, los pesos moleculares, los intervalos de números de monómeros en un polímero y los números de monómeros en un polímero tal como se usa en el presente documento, se refieren al peso molecular promedio en número y al promedio en número de monómeros. Tal como se usa en el presente documento, la expresión "peso molecular promedio en número" significa las medias aritméticos ordinarios de los pesos moleculares de los polímeros individuales.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "basado en PEG que comprende al menos el X % de PEG" en relación con un resto o reactivo significa que dicho resto o reactivo comprende al menos el X % (p/p) de unidades de etilenglicol (-CH²CH²O-), en donde las unidades de etilenglicol se pueden disponer en bloques, alternando o pueden estar distribuidas aleatoriamente dentro del resto o reactivo y preferentemente todas las unidades de etilenglicol de dicho resto o reactivo están presentes en un bloque; el porcentaje en peso restante del resto o reactivo basado en PEG son otros restos seleccionados preferentemente de los siguientes restos y enlaces:

• alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50, alquinilo C^2-50, cicloalquilo C^3-10, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heterobiciclilo de 8 a 11 miembros, fenilo, naftilo, indenilo, indanilo y tetralinilo; y

• enlaces seleccionados del grupo que comprende

en donde

las líneas punteadas indican la unión al resto del resto o reactivo, y

R y Ra se seleccionan, independientemente el uno del otro, entre el grupo que consiste en H, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo y hexilo.

El término "sustituido" tal como se usa en el presente documento significa que uno o más átomos de -H de una molécula o resto se sustituyen por un átomo diferente o un grupo de átomos, que se denominan "sustituyentes".

Preferentemente, los uno o más sustituyentes opcionales adicionales se seleccionan independientemente entre sí del grupo que consiste en halógeno, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)₂N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)²Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)²N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO², -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)²Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T0, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente sustituidos con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)₂N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)₂N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, y -OC(O)N(Rx3)-;

Rx1, Rx1a, Rx1b son independientemente cada uno del otro, seleccionados entre el grupo que consiste en -H, -T0, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T0, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente sustituidos con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-50, alquenilo C²-⁵⁰y alquinilo C^2-50están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)²N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-; -S(O)²-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)²N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, y -OC(O)N(Rx3)-;

cada T0 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en fenilo, naftilo, indenilo, indanilo, tetralinilo, cicloalquilo C^3-10, heterociclilo de 3 a 10 miembros y heterobiciclilo de 8 a 11 miembros; en donde cada T0 está opcionalmente sustituido de forma independiente con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes;

cada Rx2 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, -CN, oxo (=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)₂N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)₂Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)₂N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO², -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)²Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a), y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes;

cada Rx3, Rx3a, Rx4, Rx4a, Rx4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes.

Más preferentemente, los uno o más sustituyentes opcionales adicionales se seleccionan independientemente entre sí del grupo que consiste en halógeno, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)²N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)²Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)²N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO², -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)²Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, alquilo C^1-10, alquenilo C^2-10y alquinilo C^2-10; en donde -T0, alquilo C^1-10, alquenilo C^2-10y alquinilo C^2-10están opcionalmente sustituidos con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-10, alquenilo C^2-10y alquinilo C^2-10están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T0-, -C(O)O-, -O , -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)₂N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)₂N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, y -OC(O)N(Rx3)-;

cada Rx1, Rx1a, Rx1b, Rx3, Rx3a se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6;

cada Rx4, Rx4a, Rx4b se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6;

Incluso más preferentemente, los uno o más sustituyentes opcionales adicionales se seleccionan independientemente entre sí del grupo que consiste en halógeno, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)₂N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)²Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)²N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO², -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)²Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6; en donde -T0, alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6están opcionalmente sustituidos con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)₂N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)₂N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)-, y -OC(O)N(Rx3)-;

cada Rx1, Rx1a, Rx1b, Rx2, Rx3, Rx3a se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en -H, halógeno, alquilo C^1-6, alquenilo C^2-6y alquinilo C^2-6;

cada T0 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en fenilo, naftilo, indenilo, indanilo, tetralinilo, cicloalquilo C^3-10, heterociclilo de 3 a 10 miembros y heterobiciclilo de 8 a 11 miembros; en donde cada T0 está opcionalmente sustituido de forma independiente con uno o más Rx2, que son iguales o diferentes.

Preferentemente, un máximo de 6 átomos de -H de una molécula o resto opcionalmente sustituido se reemplazan independientemente por un sustituyente, por ejemplo, los átomos de 5 -H se reemplazan independientemente por un sustituyente, los átomos de 4 -H se reemplazan independientemente por un sustituyente, los átomos de 3 -H se reemplazan independientemente por un sustituyente, los átomos de 2 -H se reemplazan independientemente por un sustituyente, o el átomo de 1 -H se reemplaza por un sustituyente.

El término "espaciador" tal como se usa en el presente documento se refiere preferentemente a un resto seleccionado del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz1)-, -S(O)²N(Rz1)-, -S(O)N(Rz1)-, -S(O)²-, -S(O)-, -N(Rz1)S(O)²N(Rz1a)-, -S-, -N(Rz1)-, -OC(ORz1)(Rz1a)-, -N(Rz1)C(O)N(Rz1a)-, -OC(O)N(Rz1)-, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T-, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente sustituidos con uno o más Rz2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz3)-, -S(O)₂N(Rz3)-, -S(O)N(Rz3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rz3)S(O)₂N(Rz3a)-, -S-, -N(Rz3)-, -OC(ORz3)(Rz3a)-, -N(Rz3)C(O)N(Rz3a)-, y -OC(O)N(Rz3)-;

Rz1 y Rz1a se seleccionan, independientemente el uno del otro, entre el grupo que consiste en -H, -T, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente sustituidos con uno o más Rz2, que son iguales o diferentes, y en donde alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C²-⁵⁰están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz4)-, -S(O)₂N(Rz4)-, -S(O)N(Rz4)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rz4)S(O)₂N(Rz4a)-, -S-, -N(Rz4)-, -OC(ORz4)(Rz4a)-, -N(Rz4)C(O)N(Rz4a)-, y -OC(O)N(Rz4)-;

cada T se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en fenilo, naftilo, indenilo, indanilo, tetralinilo, cicloalquilo C^3-10, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heterobiciclilo de 8 a 11 miembros, carbopoliciclilo de 8 a 30 miembros y heteropoliciclilo de 8 a 30 miembros; en donde cada T está opcionalmente sustituido de forma independiente con uno o más Rz2, que son iguales o diferentes;

cada Rz2 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, -CN, oxo (=O), -COORz5, -ORz5, -C(O)Rz5, -C(O)N(Rz5Rz5a), -S(O)₂N(Rz5Rz5a), -S(O)N(Rz5Rz5a), -S(O)₂Rz5, -S(O)Rz5, -N(Rz5)S(O)₂N(Rz5aRz5b), -SRz5, -N(Rz5Rz5a), -NO², -OC(O)Rz5, -N(Rz5)C(O)Rz5a, -N(Rz5)S(O)²Rz5a, -N(Rz5)S(O)Rz5a, -N(Rz5)C(O)ORz5a, -N(Rz5)C(O)N(Rz5aRz5b), -OC(O)N(Rz5Rz5a), y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes;

cada Rz3, Rz3a, Rz4, Rz4a, Rz5, Rz5a y Rz5b se selecciona independientemente del grupo que consiste en -H y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes.

Más preferentemente, el término "espaciador" se refiere a un resto seleccionado del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz1)-, -S(O)₂N(Rz1)-, -S(O)N(Rz1)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rz1)S(O)₂N(Rz1a)-, -S-, -N(Rz1)-, -OC(ORz1)(Rz1a)-, -N(Rz1)C(O)N(Rz1a)-, -OC(O)N(Rz1)-, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T-, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente sustituidos con uno o más Rz2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz3)-, -S(O)²N(Rz3)-, -S(O)N(Rz3)-, -S(O)²-, -S(O)-, -N(Rz3)S(O)²N(Rz3a)-, -S-, -N(Rz3)-, -OC(ORz3)(Rz3a)-, -N(Rz3)C(O)N(Rz3a)-, y -OC(O)N(Rz3)-;

cada Rz2 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en halógeno, -CN, oxo (=O), -COORz5, -ORz5, -C(O)Rz5, -C(O)N(Rz5Rz5a), -S(O)₂N(Rz5Rz5a), -S(O)N(Rz5Rz5a), -S(O)₂Rz5, -S(O)Rz5, -N(Rz5)S(O)₂N(Rz5aRz5b), -SRz5, -N(Rz5Rz5a), -NO², -OC(O)Rz5, -N(Rz5)C(O)Rz5a, -N(Rz5)S(O)²Rz5a, -N(Rz5)S(O)Rz5a, -N(Rz5)C(O)ORz5a, -N(Rz5)C(O)N(Rz5aRz5b), -OC(O)N(Rz5Rz5a), y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes; y

cada Rz3, Rz3a, Rz4, Rz4a, Rz5, Rz5a y Rz5b se selecciona independientemente del grupo que consiste en -H y alquilo C^1-6, en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes.

Incluso más preferentemente, el término "espaciador" se refiere a un resto seleccionado del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz1)-, -S(O)₂N(Rz1)-, -S(O)N(Rz1)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(Rz1)S(O)₂N(Rz1a)-, -S-, -N(Rz1)-, -OC(ORz1)(Rz1a)-, -N(Rz1)C(O)N(Rz1a)-, -OC(O)N(Rz1)-, alquilo C^1-50, alquenilo C^2-50y alquinilo C^2-50; en donde -T-, alquilo C^1-20, alquenilo C^2-20y alquinilo C^2-20están opcionalmente sustituidos con uno o más Rz2, que son iguales o diferentes y en donde alquilo C^1-20, alquenilo C^2-20y alquinilo C^2-20están opcionalmente interrumpidos por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rz3)-, -S(O)²N(Rz3)-, -S(O)N(Rz3)-, -S(O)²-, -S(O)-, -N(Rz3)S(O)²N(Rz3a)-, -S-, -N(Rz3)-, -OC(ORz3)(Rz3a)-, -N(Rz3)C(O)N(Rz3a)-, y -OC(O)N(Rz3)-;

Rz1 y Rz1a se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en -H, -T, alquilo C^1-10, alquenilo C^2-10y alquinilo C^2-10;

cada T se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en fenilo, naftilo, indenilo, indanilo, tetralinilo, cicloalquilo C^3-10, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heterobiciclilo de 8 a 11 miembros, carbopoliciclilo de 8 a 30 miembros y heteropoliciclilo de 8 a 30 miembros;

cada Rz2 se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en halógeno y alquilo C^1-6; y

cada Rz3, Rz3a, Rz4, Rz4a, Rz5, Rz5a y Rz5b se selecciona, independientemente del otro, del grupo que consiste en -H y alquilo C^1-6; en donde el alquilo C^1-6está opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, que son iguales o diferentes.

El término "interrumpido" significa que un grupo de átomos se inserta en un resto entre dos átomos de carbono o, si la inserción está en uno de los extremos del resto, entre un átomo de carbono y un átomo de hidrógeno. Se entiende que si un resto es interrumpido por un grupo de átomos en uno de sus extremos y si el resto que está interrumpido está conectado a un segundo resto, el grupo de átomos de interrupción también se puede situar de modo que esté situado entre el último átomo de dicho resto y el primer átomo del segundo resto.

Tal como se usa en el presente documento, el término "alquilo C^1-4" solo o en combinación significa un resto alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. Si está presente al final de una molécula, los ejemplos de alquilo C^1-4de cadena lineal o ramificada son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ferc-butilo. Cuando dos restos de una molécula están unidos por el alquilo C^1-4, entonces los ejemplos para el alquilo C^1-4son -CH²-, -CH²-CH²-, -CH(CH₃)-, -CH²-CH²-CH²-, -CH(C₂H5)-, -C(CH₃)₂-. Cada hidrógeno de un carbono de alquilo C^1-4se puede reemplazar opcionalmente por un sustituyente tal como se define anteriormente. Opcionalmente, un alquilo C^1-4puede estar interrumpido por uno o más restos tal como se define a continuación.

Tal como se usa en el presente documento, el término "alquilo C^1-6" solo o en combinación significa un resto alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Si está presente al final de una molécula, los ejemplos de grupos alquilo C^1-6de cadena lineal y ramificada son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo, n-pentilo, 2-metilbutilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo y 3,3-dimetilpropilo. Cuando dos restos de una molécula están unidos por el grupo alquilo C^1-6, entonces los ejemplos para el alquilo C^1-6son -CH²-, -CH²-CH²-, -CH(CH₃)-, -CH²-CH²-CH²-, -CH(C₂H5)- y -C(CH₃)₂-. Cada átomo de hidrógeno de un carbono C^1-6opcionalmente puede reemplazarse por un sustituyente tal como se definió anteriormente. Opcionalmente, un alquilo C^1-6puede estar interrumpido por uno o más restos tal como se define a continuación.

Por consiguiente, "alquilo C^1-10", "alquilo C^1-20" o "alquilo C^1-50" significa una cadena de alquilo que tiene de 1 a 10, de 1 a 20 o de 1 a 50 átomos de carbono, respectivamente, en donde cada átomo de hidrógeno del carbono C^1-10, C^1-20o C^1-50opcionalmente puede reemplazarse por un sustituyente tal como se definió anteriormente. Opcionalmente, un alquilo C^1-10o C^1-50puede estar interrumpido por uno o más restos tal como se define a continuación.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "alquenilo C^2-6" solo o en combinación significa una fracción de hidrocarburo de cadena recta o ramificada que comprende al menos un doble enlace carbono-carbono con 2 a 6 átomos de carbono. Si está presente en el extremo de una molécula, los ejemplos son -CH=CH², -CH=CH-CH₃, -CH²-CH=CH², -CH=CHCH₂-CH₃y -CH=CH-CH=CH². Cuando dos fracciones de una molécula están unidas por el grupo alquenilo C^2-6, un ejemplo de dicho alquenilo C^2-6es -CH=CH-. Cada átomo de hidrógeno de una fracción de alquenilo C^2-6se puede sustituir opcionalmente por un sustituyente como se definió anteriormente. Opcionalmente, un alquenilo C^2-6puede estar interrumpido por una o más fracciones como se define a continuación.

Por consiguiente, el término "alquenilo C^2-10", "alquenilo C^2-20" o "alquenilo C^2-50" solo o en combinación significa un resto hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que comprende al menos un doble enlace carbono-carbono que tiene de 2 a 10, de 2 a 20 o de 2 a 50 átomos de carbono. Cada átomo de hidrógeno de un grupo alquenilo C^2-10, alquenilo C^2-20o alquenilo C^2-50se puede sustituir opcionalmente por un sustituyente tal como se definió anteriormente. Opcionalmente, un alquenilo C^2-10, alquenilo C^2-20o alquenilo C^2-50puede estar interrumpido por uno o más restos tal como se define a continuación.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término "alquinilo C^2-6" solo o en combinación significa una fracción de hidrocarburo ramificada o de cadena recta que comprende al menos un triple enlace carbono-carbono con 2 a 6 átomos de carbono. Si está presente al final de una molécula, los ejemplos son -C^eCH, -CH²-CECH, CH²-CH²-CECH y CH²-CEC-CH³. Cuando dos fracciones de una molécula están unidas por el grupo alquilo, un ejemplo es -C^eC-. Cada átomo de hidrógeno de un grupo alquilo C^2-6se puede sustituir opcionalmente por un sustituyente como se ha definido anteriormente. Opcionalmente, puede haber uno o más dobles enlaces. Opcionalmente, un C^2-6alquinilo puede estar interrumpido por uno o más elementos como se define a continuación.

Por consiguiente, tal como se usa en el presente documento, el término "alquinilo C^2-10", "alquinilo C^2-20" y "alquinilo C^2-50" solo o en combinación significa un resto hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que comprende al menos un triple enlace carbono-carbono que tiene de 2 a 10, de 2 a 20 o de 2 a 50 átomos de carbono, respectivamente. Cada átomo de hidrógeno de un grupo alquinilo C^2-10, alquinilo C^2-20o alquinilo C^2-50se puede sustituir opcionalmente por un sustituyente tal como se definió anteriormente. Opcionalmente, pueden producirse uno o más dobles enlaces. Opcionalmente, un alquinilo C^2-10, alquinilo C^2-20o alquinilo C^2-50puede estar interrumpido por uno o más restos tal como se define a continuación.

Tal como se menciona anteriormente, un alquilo C^1-4, alquilo C^1-6, alquilo C^1-10, alquilo C^1-20, alquilo C^1-50, alquenilo C²-6, alquenilo C^2-10, alquenilo C^2-20, alquenilo C^2-50, alquinilo C^2-6, alquinilo C^2-10, alquenilo C^2-20o alquinilo C^2-50puede opcionalmente estar interrumpido por uno o más de los siguientes restos:

en donde

las líneas discontinuas indican unión al resto del resto o reactivo; y

Tal como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo C^3-10" significa una cadena de alquilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, que puede estar saturado o insaturado, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo o ciclodecilo. Cada átomo de hidrógeno de un carbono de cicloalquilo C^3-10se puede sustituir por un sustituyente tal como se definió anteriormente. El término "ciclocalquilo C^3-10" también incluye biciclos con puente como norbornano o norborneno.

La expresión "carbopoliciclilo de 8 a 30 miembros" o "carbopoliciclo de 8 a 30 miembros" significa un resto cíclico de dos o más anillos con 8 a 30 átomos de anillo, en donde dos anillos adyacentes comparten al menos un átomo del anillo y que pueden comprender hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que es completamente, parcialmente o insaturado). Preferentemente, un carbopoliciclilo de 8 a 30 miembros significa un resto cíclico de dos, tres, cuatro o cinco anillos, más preferentemente de dos, tres o cuatro anillos.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "heterociclilo de 3 a 10 miembros" o "heterociclo de 3 a 10 miembros" significa un anillo con 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de anillo que pueden comprender hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que es completamente, parcialmente o insaturado) en el que al menos un átomo del anillo hasta 4 átomos del anillo se sustituye por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en azufre (incluyendo -S(O)-, -S(O)²-), oxígeno y nitrógeno (incluido =N(O)-) y en el que el anillo está unido al resto de la molécula mediante un átomo de carbono o nitrógeno. Los ejemplos de heterociclos de 3 a 10 miembros incluyen aziridina, oxirano, tiirano, azirina, oxireno, tiireno, azetidina, oxetano, tietano, furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, imidazol, imidazolina, pirazol, pirazolina, oxazol, oxazolina, isoxazol, isoxazolina, tiazol, tiazolina, isotiazol, isotiazolina, tiadiazol, tiadiazolina, tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina, oxazolidina, isoxazolidina, tiazolidina, isotiazolidina, tiadiazolidina, sulfolano, pirano, dihidropirano, tetrahidropirano, imidazolidina, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, piperazina, piperidina, morfolina, tetrazol, triazol, triazolidina, tetrazolidina, diazepano, azepina y homopiperazina. Cada átomo de hidrógeno de un heterociclilo de 3 a 10 miembros o un grupo heterocíclico de 3 a 10 miembros se puede sustituir por un sustituyente tal como se define a continuación.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "heterobiciclilo de 8 a 11 miembros" o "heterobiciclo de 8 a 11 miembros" significa un resto heterocíclico de dos anillos con 8 a 11 átomos de anillo, en donde al menos un átomo del anillo es compartido por ambos anillos y que puede comprender hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que es completamente, parcialmente o insaturado) en el que al menos un átomo del anillo de hasta 6 átomos del anillo se sustituye por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en azufre (incluyendo -S(O)-, -S(O)²-), oxígeno y nitrógeno (incluido =N(O)-) y en el que el anillo está unido al resto de la molécula mediante un átomo de carbono o nitrógeno. Los ejemplos de un heterobiciclo de 8 a 11 miembros son indol, indolina, benzofurano, benzotiofeno, benzoxazol, benzoisoxazol, benzotiazol, benzoisotiazol, benzoimidazol, benzimidazolina, quinolina, quinazolina, dihidroquinazolina, quinolina, dihidroquinolina, tetrahidroquinolina, decahidroquinolina, isoquinolina, decahidroisoquinolina, tetrahidroisoquinolina, dihidroisoquinolina, benzazepina, purina y pteridina. La expresión heterobiciclo de 8 a 11 miembros también incluye estructuras espiro de dos anillos como 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decano o heterociclos con puentes como 8-aza-biciclo[3.2.1]octano. Cada átomo de hidrógeno de un heterobiciclilo de 8 a 11 miembros o un heterobiciclo de 8 a 11 miembros de carbono se puede sustituir por un sustituyente tal como se define a continuación.

De manera similar, la expresión "heteropoliciclilo de 8 a 30 miembros" o "heteropoliciclo de 8 a 30 miembros" significa un resto heterocíclico de más de dos anillos con 8 a 30 átomos de anillo, preferentemente de tres, cuatro o cinco anillos, en donde dos anillos adyacentes comparten al menos un átomo del anillo y que pueden comprender hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que es completamente, parcialmente o insaturado), en el que al menos un átomo del anillo de hasta 10 átomos del anillo se sustituye por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en azufre (incluyendo -S(O)-, -S(O)²-), oxígeno y nitrógeno (incluido =N(O)-) y en el que el anillo está unido al resto de una molécula mediante un átomo de carbono o nitrógeno.

Tal como se usa en el presente documento, "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Generalmente se prefiere que el halógeno sea flúor o cloro.

En general, el término "comprende" o "que comprende" también abarca "consiste en" o "que consiste en".

El compuesto de la presente invención es de fórmula (IV)

en donde

-D es un resto de HCh conectado al resto de la molécula a través de un grupo funcional amina; y

p1, p2, p3, p4 es independientemente un número entero comprendido entre 210 y 240 y preferentemente entre 220 a 240.

- D de fórmula (IV) está conectado al resto de la molécula a través de una amina proporcionada por una cadena lateral de lisina.

Otro aspecto de la presente invención es una formulación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula (IV) y al menos un excipiente.

En una realización, la formulación farmacéutica es una formulación líquida que comprende al menos un compuesto de fórmula (IV) y al menos un excipiente.

Preferentemente, dicha formulación líquida comprende de 3 a 300 mg/ml del compuesto de fórmula (IVI (correspondiente a 1 a 100 mg de equivalentes de HCh/ml). Más preferentemente, la formulación líquida comprende de 9 a 150 mg/ml del compuesto de fórmula (IV) (correspondiente a 3 a 50 mg equivalentes de HCh/ml). Incluso más preferentemente, la formulación líquida comprende de 15 a 120 mg/ml del compuesto de fórmula (IV) (correspondiente a 5 a 40 mg de equivalentes de HCh/ml). Incluso más preferentemente, la formulación líquida comprende de 30 a 45 mg/ml del compuesto de fórmula (IV) (correspondiente a 10 a 15 mg equivalentes de HCh/ml) o igualmente preferentemente la formulación líquida comprende de 75 a 105 mg/ml del compuesto de fórmula (IV) (correspondiente a 25 a 30 mg equivalentes de HCh/ml). En una realización particularmente preferida de la misma, la formulación líquida comprende 42 u 84 mg/ml del compuesto de fórmula (IV) (correspondiente a 14 o 28 mg equivalentes de HCh/ml). La formulación líquida del compuesto según la presente invención puede comprender uno o más excipientes. Los excipientes usados en formulaciones parenterales se pueden clasificar como, por ejemplo, agentes tamponantes, modificadores de isotonicidad, conservantes, estabilizantes, agentes antiadsorción, agentes de protección contra la oxidación, viscosificantes/agentes potenciadores de la viscosidad u otros agentes auxiliares. Sin embargo, en algunos casos, un excipiente puede tener funciones dobles o triples. La formulación líquida puede comprender uno o más de uno de los siguientes excipientes:

(i) Agentes tamponadores: tampones fisiológicamente tolerados para mantener el pH en un intervalo deseado, tales como fosfato de sodio, bicarbonato, succinato, histidina, citrato y acetato, sulfato, nitrato, cloruro, piruvato. Antiácidos como Mg(OH)²o ZnCO₃también se puede utilizar.

(ii) Modificadores de isotonicidad: para minimizar el dolor que puede ser resultado del daño celular debido a las diferencias de presión osmótica en el depósito de inyección. La glicerina y el cloruro de sodio son ejemplos. Las concentraciones eficaces se pueden determinar por osmometría usando una osmolalidad supuesta de 285-315 mOsmol/kg para el suero.

(iii) Conservantes y/o antimicrobianos: las formulaciones parenterales multidosis requieren la adición de conservantes a una concentración suficiente para minimizar el riesgo de que los pacientes se infecten tras la inyección y se han establecido los requisitos reglamentarios correspondientes. Los conservantes típicos incluyen m-cresol, fenol, metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, clorobutanol, alcohol bencílico, nitrato fenilmercúrico, timerosol, ácido sórbico, sorbato de potasio, ácido benzoico, clorocresol y cloruro de benzalconio.

(iv) Estabilizantes: La estabilización se logra mediante el fortalecimiento de las fuerzas estabilizantes de proteínas, por desestabilización del estado desnaturalizado o por unión directa de excipientes a la proteína. Los estabilizantes pueden ser aminoácidos tales como alanina, arginina, ácido aspártico, glicina, histidina, lisina, prolina, azúcares tales como glucosa, sacarosa, trehalosa, polioles tales como glicerol, manitol, sorbitol, sales tales como el fosfato de potasio, sulfato sódico, agentes quelantes, tales como EDTA, hexafosfato, ligandos tales como iones metálicos divalentes (zinc, calcio, etc.), otras sales o moléculas orgánicas tales como los derivados fenólicos. Además, se pueden usar oligómeros o polímeros tales como ciclodextrinas, dextrano, dendrímeros, PEG o PVP o protamina o HSA.

(v) Agentes antiadsorción: Se utilizan principalmente tensioactivos iónicos o no iónicos u otras proteínas o polímeros solubles para revestir o adsorber competitivamente a la superficie interna del recipiente de la formulación. Por ejemplo, poloxámero (Pluronic F-68), PEG dodeciléter (Brij 35), polisorbato 20 y 80, dextrano, polietilenglicol, PEG-polihistidina, BSA y HSA y gelatinas. La concentración y el tipo de excipiente elegidos dependen del efecto a evitar, pero normalmente se forma una monocapa de tensioactivo en la interfaz justo por encima del valor de CMC.

(vi) Agentes de protección contra la oxidación: antioxidantes tales como ácido ascórbico, ectαna, metionina, glutatión, monotioglicerol, morina, polietilenimina (PEI), propilgalato y vitamina E. También se pueden usar agentes quelantes tales como ácido cítrico, EDTA, hexafosfato y ácido tioglicólico.

(vii) Agente difusor o de difusión: modifica la permeabilidad del tejido conjuntivo mediante la hidrólisis de componentes de la matriz extracelular en el espacio intersticial tal como el ácido hialurónico, un polisacárido que se encuentra en el espacio intercelular del tejido conectivo. Un agente de difusión como la hialuronidasa disminuye temporalmente la viscosidad de la matriz extracelular y promueve la difusión de los fármacos inyectados.

(viii) Otros agentes auxiliares: tales como agentes humectantes, modificadores de la viscosidad, antibióticos, hialuronidasa. Los ácidos y bases tales como el ácido clorhídrico y el hidróxido de sodio son agentes auxiliares necesarios para el ajuste del pH durante la fabricación.

La formulación líquida del compuesto según la presente invención comprende uno o más agentes tamponadores. Se prefieren los agentes tamponadores que tienen una capacidad de tampón farmacéuticamente suficiente en el intervalo de pH deseado. En una realización preferida del mismo, el agente tamponador se selecciona del grupo que consiste en fosfato de sodio, bicarbonato, succinato, histidina, citrato y acetato. Lo más preferentemente, el agente tamponador es succinato. Por lo general, el pH se ajusta utilizando ácido succínico en una concentración de 5-50 mM, más preferentemente en una concentración de 10 mM y titulando la solución con Tris-base, más preferentemente con una solución 1 molar de Tris-base hasta el pH deseado.

En una realización preferida, el pH de una formulación líquida de la presente invención varía de pH 1 a pH 10, más preferentemente, varía de pH 3 a pH 7, incluso más preferentemente, varía de pH 4 a pH 6, incluso más preferentemente varía de pH 4,5 a 5,5 y lo más preferentemente tiene un pH de 5,0. Preferentemente, se elige una concentración de tampón y un pH para minimizar la liberación de HCh durante el almacenamiento, así como para minimizar la desamidación, agregación y precipitación de HCh.

Preferentemente, la formulación líquida del compuesto de la presente invención comprende uno o más agentes de protección contra la oxidación, tales como antioxidantes o agentes quelantes. Un antioxidante preferido es la metionina.

En una realización, la formulación líquida de la presente invención comprende trehalosa.

En una realización, la formulación líquida de la presente invención comprende uno o más conservantes y/o antimicrobianos, tales como, por ejemplo, alcohol bencílico y/o cresol.

En una realización, la formulación líquida de la presente invención comprende el compuesto de la presente invención, un agente de protección contra la oxidación y un agente tamponador; incluso más preferentemente, el compuesto de la presente invención, un agente de protección contra la oxidación, un estabilizante y un agente de tampón.

Preferentemente, la formulación líquida de la presente invención comprende el compuesto de la presente invención, metionina y succinato; incluso más preferentemente, el compuesto de la presente invención, metionina, succinato y trehalosa, opcionalmente como dihidrato.

Opcionalmente, la formulación líquida de la presente invención también comprende alcohol bencílico y/o cresol.

Preferentemente, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 25-150 mg/ml

opcionalmente metionina 1-50 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 que se titula usando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 1-100 mg equivalentes de HCh/ml.

Más preferentemente, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

opcionalmente metionina 1-50 mM

el compuesto de fórmula (IV) 9-150 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

opcionalmente metionina 1-50 mM

Incluso más preferentemente, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 15-120 mg/ml

ácido succínico 5-40 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-86 mg/ml

opcionalmente metionina 5-40 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 que se titula usando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 5-40 mg equivalentes de HCh/ml.

el compuesto de fórmula (IV) 30-45 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 75-86 mg/ml

opcionalmente metionina 5-20 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,5 a pH 5,5 que se titula utilizando un tampón adecuado, preferentemente usando T risbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 10-15 mg equivalentes de HCh/ml.

En una realización igualmente preferida, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 75-105 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-81 mg/ml

opcionalmente metionina 5-20 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,5 a pH 5,5 que se titula utilizando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 25-35 mg equivalentes de HCh/ml.

En una realización preferida, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 42 mg/ml

ácido succínico 10 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 79-86 mg/ml

opcionalmente metionina 10 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,5 a pH 5,5 que se titula utilizando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base; en donde el compuesto es un compuesto de fórmula (IV). La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 14 mg equivalentes de HCh/ml.

En otra realización preferida, la formulación líquida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 84 mg/ml

ácido succínico 10 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 70-80 mg/ml

opcionalmente metionina 10 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,5 a pH 5,5 que se titula utilizando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 28 mg equivalentes de HCh/ml.

En una realización, la formulación líquida de la presente invención comprende al menos un agente biológicamente activo adicional, ya sea en su forma libre o como profármaco, y en donde el al menos un agente biológicamente activo adicional se selecciona preferentemente del grupo que consiste en IGF-1, grelina y compuestos similares a grelina, agonistas de la hormona liberadora de gonadotropina, análogos de la hormona liberadora de gonadotropina, factor de liberación de la hormona del crecimiento, análogos del factor de liberación de la hormona del crecimiento, esteroides gonadales, antiandrógenos, inhibidores de la aromatasa no esteroideos, terapia de combinación del VIH, reguladores de ácidos grasos libres, esteroides anabólicos, agonistas y antagonistas de estrógenos, propranolol, supresores del apetito, fármacos para la osteroporosis (incluidos bisfosfonatos, agentes de formación de hueso, estrógenos, hormonas paratiroideas, moduladores selectivos del receptor y/o fármacos contra la diabetes tal como la insulina, tiazolidinedionas, sulfonilureas, miméticos de incretina, meglitinidas, biguanidas, inhibidores de la alfa-glucosidasa y análogos de amilina). Preferentemente, el al menos un agente activo biológico adicional está en su forma libre.

En otra realización, la formulación farmacéutica de la presente invención es una formulación seca.

Preferentemente, tal formulación farmacéutica seca comprende del 1 al 99,9 % (p/p), más preferentemente del 1,9 al 89 % (p/), incluso más preferentemente del 3 al 83 % (p/p), incluso más preferentemente del 9,0 al 71 % (p/p), incluso más preferentemente del 15 al 63 % (p/p), incluso más preferentemente del 26 al 36 % (p/p) o del 48 al 62 % (p/p) y más preferentemente del 32 al 34 % (p/p) o del 50 al 54 % (p/p) del compuesto de fórmula (IV).

Preferentemente, la formulación farmacéutica seca de la presente invención comprende al menos un lioprotector. El al menos un lioprotector se selecciona preferentemente del grupo que consiste en aminoácidos, metilaminas, sales liotrópicas, polioles, propilenglicol, polietilenglicol, plurónicos, almidones de hidroxialquilo y combinaciones de los mismos.

Si el lioprotector es un aminoácido, se selecciona preferentemente del grupo que consiste en glutamato monosódico e histidina.

Si el lioprotector es un poliol, se selecciona preferentemente del grupo que consiste en sacarosa, trehalosa, glicerina, eritritol, glicerol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol.

Si el lioprotector es una metilamina, preferentemente es betaína.

Si el lioprotector es una sal liotrópica, preferentemente es sulfato de magnesio.

Si el lioprotector es un hidroxialquil-almidón, preferentemente es hidroxietil-almidón.

En una realización preferida, el lioprotector es un azúcar no reductor. Incluso más preferentemente, el lioprotector es trehalosa o sacarosa. Lo más preferentemente, el lioprotector es trehalosa.

Preferentemente, la formulación farmacéutica seca de la presente invención comprende del 8 al 97 % (p/p), más preferentemente del 14 al 96 % (p/p), incluso más preferentemente del 24 al 90 % (p/p), incluso más preferentemente del 32 al 84 % (p/p), incluso más preferentemente del 60 al 73 % (p/p) o del 35 al 52 % (p/p) y más preferentemente el 64-66 % (p/p) o el 45-48 % (p/p) del al menos un lioprotector, preferentemente dihidrato de trehalosa.

Preferentemente, la formulación seca de la presente invención comprende al menos un agente tamponador. Preferentemente, el agente tamponador se selecciona del grupo que consiste en fosfato de sodio, bicarbonato, succinato, histidina, citrato y acetato. Lo más preferentemente, el agente tamponador es succinato. Preferentemente, el pH se ajusta usando ácido succínico en una concentración de 5-50 mM, más preferentemente en una concentración de 10 mM y titulando la solución con Tris-base, más preferentemente con una solución 1 molar de Tris-base hasta el pH deseado.

Preferentemente, la formulación seca se obtiene mediante un proceso que comprende las etapas de

(a) Proporcionar una formulación líquida que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 25-150 mg/ml

y que tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 que se titula usando un tampón adecuado, preferentemente usando Tris-base, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base; y

(b) Secar la formulación líquida de la etapa (a).

Más preferentemente, la formulación líquida de la etapa (a) comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 que se titula usando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base.

Más preferentemente, la formulación líquida de la etapa (a) comprende

el compuesto de fórmula (IV) 9-150 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

Incluso más preferentemente, la formulación líquida de la etapa (a) comprende

el compuesto de fórmula (IV) 15-120 mg/ml

ácido succínico 5-40 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-86 mg/ml

el compuesto de fórmula (IV) 30-45 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 75-86 mg/ml

y tiene un pH que varía de pH 4,5 a pH 5,5 que se titula utilizando un tampón adecuado, preferentemente usando Trisbase, más preferentemente usando una solución 1 molar de Tris-base.

el compuesto de fórmula (IV) 75-105 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-81 mg/ml

Mucho más preferentemente, la formulación líquida de la etapa (a) comprende

el compuesto de fórmula (IV) 42 mg/ml

ácido succínico 10 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 79-86 mg/ml

En una realización igualmente preferida, la formulación líquida de la etapa (a) comprende

el compuesto de fórmula (IV) 84 mg/ml

ácido succínico 10 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 70-80 mg/ml

Preferentemente, en la etapa (b), la formulación líquida se seca mediante liofilización.

En una realización, la formulación de la etapa (a) comprende al menos un agente biológicamente activo adicional, ya sea en su forma libre o como profármaco, y en donde el al menos un agente biológicamente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en IGF-1, grelina y compuestos similares a grelina, agonistas de la hormona liberadora de gonadotropina, análogos de la hormona liberadora de gonadotropina, factor de liberación de la hormona del crecimiento, análogos del factor de liberación de la hormona del crecimiento, esteroides gonadales, antiandrógenos, inhibidores de la aromatasa no esteroideos, terapia de combinación del VIH, reguladores de ácidos grasos libres, esteroides anabólicos, agonistas y antagonistas de estrógenos, propranolol, supresores del apetito, fármacos para la osteroporosis (incluidos bisfosfonatos, agentes de formación de hueso, estrógenos, hormonas paratiroideas, moduladores selectivos del receptor y/o fármacos contra la diabetes tal como la insulina, tiazolidinedionas, sulfonilureas, miméticos de incretina, meglitinidas, biguanidas, inhibidores de la alfa-glucosidasa y análogos de amilina). Preferentemente, el al menos un agente activo biológico adicional está en su forma libre.

Otro aspecto de la presente invención es una formulación seca que comprende, basado en el peso total de la formulación:

el compuesto de fórmula (IV) 2-89 % (p/p)

ácido succínico 0,4-1,8 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 7-97 % (p/p)

Tris 0,4-2 % (p/p).

En una realización preferida, la formulación seca de la presente invención comprende, basándose en el peso total de la formulación:

el compuesto de fórmula (IV) 3-83 % (p/p)

ácido succínico 0,6-1,6 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 14-96 % (p/p)

Tris 0,6-1,7 % (p/p)

En una realización aún más preferida, la formulación seca de la presente invención comprende, basándose en el peso total de la formulación:

el compuesto de fórmula (IV) 9,0-71 % (p/p)

ácido succínico 0,6-2,8 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 24-90 % (p/p)

Tris 0,6-2,9 % (p/p)

el compuesto de fórmula (IV) 15-63 % (p/p)

ácido succínico 0,6-2,5 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 32-84 % (p/p)

Tris 0,6-2,6 % (p/p)

el compuesto de fórmula (IV) 26-36 % (p/p)

ácido succínico 0,5-1,9 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 60-73 % (p/p)

Tris 0,5-1,9 % (p/p)

En una realización igualmente preferida, la formulación seca de la presente invención comprende, basándose en el peso total de la formulación:

el compuesto de fórmula (IV) 48-62 % (p/p)

ácido succínico 0,4-1,4 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 35-52 % (p/p)

Tris 0,4-1,4 % (p/p)

Lo más preferiblemente, la formulación seca de la presente invención comprende, basado en el peso total de la formulación:

el compuesto de fórmula (IV) 32-34 % (p/p)

ácido succínico 0,9-1,0 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 64-66 % (p/p)

Tris 0,5-1,4 % (p/p)

el compuesto de fórmula (IV) 50-54 (p/p)

ácido succínico 0,7-0,8 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 45-48 % (p/p)

Tris 0,4-1, 1 % (p/p)

En una realización, las formulaciones secas de la presente invención comprenden al menos un agente biológicamente activo adicional, ya sea en su forma libre o como profármaco, y en donde el al menos un agente biológicamente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en IGF-1, grelina y compuestos similares a grelina, agonistas de la hormona liberadora de gonadotropina, análogos de la hormona liberadora de gonadotropina, factor de liberación de la hormona del crecimiento, análogos del factor de liberación de la hormona del crecimiento, esteroides gonadales, antiandrógenos, inhibidores de la aromatasa no esteroideos, terapia de combinación del VIH, reguladores de ácidos grasos libres, esteroides anabólicos, agonistas y antagonistas de estrógenos, propranolol, supresores del apetito, fármacos para la osteroporosis (incluidos bisfosfonatos, agentes de formación de hueso, estrógenos, hormonas paratiroideas, moduladores selectivos del receptor y/o fármacos contra la diabetes tales como la insulina, tiazolidinedionas, sulfonilureas, miméticos de incretina, meglitinidas, biguanidas, inhibidores de la alfaglucosidasa y análogos de amilina). Preferentemente, el al menos un agente activo biológico adicional está en su forma libre.

Preferentemente, la formulación seca de la presente invención se obtiene por liofilización.

Preferentemente, la formulación seca de la presente invención se liofiliza en un vial, jeringa, jeringa de doble cámara, ampolla, cartucho o cartucho de doble cámara.

Un vial preferido es un vial de vidrio.

En una realización, la formulación seca de la presente invención se liofiliza en un cartucho para su uso en un inyector de pluma.

En otra realización, la formulación seca se liofiliza en una primera cámara de un cartucho de doble cámara, cuya segunda cámara está llena de solución de reconstitución.

Antes de administrar la formulación seca de la presente invención a un paciente que la necesite, la formulación seca se reconstituye. La reconstitución puede tener lugar en el recipiente en el que se proporciona la formulación seca del compuesto de fórmula (IV), tal como en un vial, jeringa, jeringa de doble cámara, ampolla, cartucho y cartucho de doble cámara, o la formulación seca de la presente invención se transfiere a un recipiente diferente y luego se reconstituye.

La reconstitución se realiza añadiendo una cantidad predefinida de solución de reconstitución a la formulación seca. La solución de reconstitución es un líquido estéril, tal como agua o tampón, que puede comprender otros aditivos, tales como conservantes y/o antimicrobianos.

En una realización, la solución de reconstitución es agua estéril que comprende alcohol bencílico al 0,7-1, 1 %, más preferentemente, que comprende alcohol bencílico al 0,9 %. En otra realización, la solución de reconstitución es agua esterilizada que comprende cresol al 0,2-0,4 %, más preferentemente, que comprende cresol al 0,3 %. Preferentemente, la solución de reconstitución es agua esterilizada.

Preferentemente, el pH de la formulación reconstituida de la presente invención varía de pH 1 a pH 10, más preferentemente, varía de pH 3 a pH 7, incluso más preferentemente, varía de pH 4 a pH 6, incluso más preferentemente varía de pH 4,5 a 5,5 y lo más preferentemente tiene un pH de 5,0.

Otro aspecto de la presente invención es un método para preparar una formulación reconstituida que comprende el compuesto de fórmula (IV), en donde el método comprende la etapa de

• poner en contacto la formulación farmacéutica seca de la presente invención con una solución de reconstitución.

Otro aspecto de la presente invención es una formulación reconstituida que se puede obtener a partir del método de preparación de una formulación reconstituida de la presente invención.

Preferentemente, la formulación reconstituida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

dihidrato de trehalosa 25-150 mg/ml

Tris 1-50 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0. La cantidad de compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 1-100 mg de equivalentes de HCh/ml.

Incluso más preferentemente, la formulación reconstituida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 3-300 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

Tris 5-50 mM

En una realización aún más preferida, la formulación reconstituida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 9-150 mg/ml

ácido succínico 5-50 mM

dihidrato de trehalosa 50-90 mg/ml

Tris 5-50 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 en la fórmula (IV). La cantidad de compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 3-50 mg de equivalentes de HCh/ml.

el compuesto de fórmula (IV) 15-120 mg/ml

ácido succínico 5-40 mM

dihidrato de trehalosa 60-86 mg/ml

Tris 5-40 mM

y tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0. La cantidad de compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 5-40 mg de equivalentes de HCh/ml.

el compuesto de fórmula (IV) 30-45 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

dihidrato de trehalosa 75-86 mg/ml

Tris 5-20 mM

y tiene un pH que varía de 4,5 a 5,5. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 10-15 mg de equivalentes de HCh/ml.

En una realización igualmente preferida, la formulación reconstituida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 75-105 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

dihidrato de trehalosa 60-81 mg/ml

Tris 5-20 mM

y tiene un pH que varía de un pH de 4,5 a un pH de 5,5. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 25-35 mg de equivalentes de HCh/ml.

Lo más preferentemente, la formulación reconstituida de la presente invención comprende

el compuesto de fórmula (IV) 42 mg/ml

ácido succínico 10 mM

dihidrato de trehalosa 79-86 mg/ml,

Tris 5-15 mM

y tiene un pH que varía de 4,5 a 5,5. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 14 mg de equivalentes de HCh/ml.

En una realización igualmente preferida, la formulación reconstituida de la presente invención comprende el compuesto de fórmula (IV) 84 mg/ml

ácido succínico 10 mM

dihidrato de trehalosa 70-80 mg/ml

Tris 5-15 mM

y tiene un pH que varía de 4,5 a 5,5. La cantidad del compuesto de fórmula (IV) se corresponde con 28 mg de equivalentes de HCh/ml.

Opcionalmente, la formulación reconstituida comprende uno o más conservantes y/o antimicrobianos. Preferentemente, el uno o más conservantes y/o antimicrobianos es alcohol bencílico en una concentración de 0,7 1,1 % (p/v), más preferentemente, en una concentración del 0,9 % (p/v). En otra realización, el uno o más conservantes y/o antimicrobianos es cresol en una concentración del 0,2-0,4 % (p/v), más preferentemente, en una concentración del 0,3 % (p/v).

El experto en la materia es consciente de que siempre que se seca, la formulación líquida o reconstituida de la presente invención comprende dihidrato de trehalosa, la forma dihidrato también podría intercambiarse por otras formas de hidratación de trehalosa, incluyendo trehalosa anhidra. El experto en la materia no tendría dificultad en calcular las cantidades correspondientes de trehalosa en estas otras formas de hidratación, incluida la trehalosa anhidra comprendida en la correspondiente formulación seca, líquida o reconstituida. Por lo tanto, se entiende que una formulación seca, líquida o reconstituida que comprende trehalosa en formas de hidratación distintas del dihidrato también está dentro del alcance de la presente invención.

Otro aspecto de la presente invención es el compuesto de fórmula (IV), o la formulación farmacéutica líquida, seca o reconstituida que comprende al menos un compuesto de fórmula (IV), para su uso como un medicamento.

Otro aspecto de la presente invención es el uso del compuesto de fórmula (IV), o la formulación farmacéutica líquida, seca o reconstituida que comprende al menos un compuesto de fórmula (IV), en un método de tratamiento de una enfermedad que se puede tratar con HCh.

Preferentemente, dicha enfermedad que se puede tratar con HCh se selecciona del grupo que consiste en la deficiencia de la hormona del crecimiento (DHC) en niños, la estatura baja idiopática (EBI), mutaciones del gen homeobox de baja estatura (SHOX), síndrome de Turner (ST), síndrome de Noonan (SN), síndrome de Prader-Willi (SPW), niños nacidos pequeños para la edad gestacional (SGA), insuficiencia renal crónica (IRC), deficiencia de la hormona del crecimiento (DHC) en adultos, deterioro progresivo debido al VIH o SIDA u otras neoplasias, síndrome del intestino corto (SIC), sarcopenia y debilidad.

En una realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es DHC en niños.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es DHC en adultos.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es EBI.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh son mutaciones del gen SHOX.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es ST.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es SN.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es SPW.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es SGA.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es CRI.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es el desgaste debido al VIH o al SIDA u otras neoplasias malignas.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es SBS.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es sarcopenia.

En otra realización, la enfermedad que se puede tratar con HCh es la debilidad.

El compuesto de fórmula (IV) o la formulación líquida o reconstituida de la presente invención se puede administrar por vía tópica, administración enteral o parenteral o por métodos de aplicación externa, inyección o infusión, incluyendo intraarticular, periarticular, intradérmico, subcutáneo, intramuscular, intravenosa, intraósea, intraperitoneal, intratecal, intracapsular, intraorbital, intravítrea, intratimpánica, intravesical, intracardíaca, transtraqueal, subcuticular, subcapsular, subaracnoidea, intramedular, intraventricular, inyección o infusión intraesternal, administración directa al cerebro a través de un dispositivo implantado que permite la administración de la invención al tejido cerebral o fluidos cerebrales (por ejemplo, depósito Ommaya), inyección o perfusión intracerebroventricular directa, inyección o infusión en el cerebro o regiones asociadas al cerebro, inyección en el espacio subcoroideo, inyección retroorbitaria e instilación ocular.

Preferentemente, la administración del compuesto de fórmula (IV) o la formulación líquida o reconstituida de la presente invención es mediante inyección, más preferentemente mediante inyección subcutánea.

En una realización preferida, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (IV), o la formulación líquida o reconstituida que comprende al menos un compuesto de fórmula (IV), para su uso en el tratamiento de DHC en niños mediante inyección subcutánea.

También se describe un recipiente que comprende el compuesto de fórmula (IV) o la formulación líquida o reconstituida de la presente invención.

Los recipientes preferidos son jeringas, jeringas de doble cámara, viales, viales con tapón y precinto, ampollas, cartuchos y cartuchos de doble cámara.

Ejemplos

Métodos

Cromatografía de intercambio catiónico

La purificación de los conjugados mediante cromatografía de intercambio catiónico se realizó utilizando un sistema AKTA Pure (GE Healthcare) equipado con una columna Macrocap SP con un volumen de columna de 279 ml. La respectiva mezcla de reacción se aplicó a la columna que se preequilibró en acetato de sodio 20 mM, tampón de L-metionina 10 mM, a pH 4,0 (tampón A). Tras la carga, la columna se lavó con tres volúmenes de columna de tampón A para eliminar cualquier reactivo de PEG sin reaccionar. Los mono-conjugados se eluyeron usando un gradiente de tampón B al 0-30% (acetato de sodio 20 mM, cloruro de sodio 1 M, pH 4,5) en 15 volúmenes de columna. Se utilizó un gradiente de 30-80% de B en tres volúmenes de columna para eluir la hormona del crecimiento sin reaccionar. La columna se limpió con 3 volúmenes de columna de tampón B al 100 %. El caudal fue de 20 ml/min para la carga y de 25 ml/min durante la elución. La elución se controló mediante detección a 280 nm.

Análisis de SDS-PAGE

Los conjugados mPEG-HCh se analizaron mediante SDS-PAGE usando geles NuPAGE® Novex al 4-12 % de Bis-Tris (1,0 mm de espesor, 12 carriles), tampón de ejecución NuPAGE MOPS SDS, estándar de proteína de alto peso molecular preteñida HiMark™ y kit de tinción Coomassie Colloidal Blue™ (Invitrogen). En cada carril se aplicaron 1 |jg de eq. de HCh del conjugado y la electroforesis y la tinción posterior se realizó de acuerdo con el protocolo del proveedor. Las imágenes de los geles se generaron usando un sistema Digi Image System (Kisker Biotech) y una cámara Power Shot G10 (Canon).

Diafiltración/Ultrafiltración

Las etapas de diafiltración y ultrafiltración se realizaron utilizando un sistema de FFT a escala de laboratorio (Millipore) equipado con membranas Pellicon XL Biomax con una membrana de 50 cm2 y un límite de peso molecular de 5 o 10 kDa solo para HCh, 10 kDa para monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y 50 kDa para monoconjugado 1 de mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x.

RP-HPLC

Se utilizaron los siguientes parámetros de RP-HPLC:

La fase móvil A estaba compuesta por TFA acuoso al 0,05 % y la fase móvil B estaba compuesta por TFA al 0,04 % en acetonitrilo. Se utilizó una columna Waters UPLC C18 BEH 300A 1,7 jm 2,1 x 50 mm. El caudal se fijó en 0,2-0,4 ml/min, la detección fue a una longitud de onda de 215 nm, la temperatura de funcionamiento de la columna fue de 30 °C (± 5 °C). La temperatura del automuestreador se fijó en 4 °C y la carga de inyección de la muestra fue de 20 jl.

Para la separación de picos se utilizó el gradiente que se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1: Gradiente de RP-HPLC

Intercambio de tampón

El intercambio de tampón se realizó utilizando un sistema AKTA explorer (GE Healthcare) equipado con una columna de desalación HiPrep 26/10 o una columna de desalación HiTrap.

Ejemplo 1: Síntesis de monoconjugado 1 transitorio de mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x (sustancia de referencia; no de acuerdo con la invención)

Se sintetizó 4x monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa de acuerdo con un procedimiento similar al descrito en el documento WO2009/133137 A2. Se prepararon las formulaciones de 4x monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa tal como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2: Formulaciones de monoconu ado 1 de mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x

Ejemplo 2: Síntesis de monoconjugado 2

transitorio de alta resistencia mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x Se sintetizó monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x de acuerdo con un procedimiento similar al descrito en el documento WO2009/133137 A2; en detalle el proceso de fabricación se llevó a cabo de la siguiente manera:

se cambió el tampón de HCh a borato de sodio 100 mM a pH 9 y la concentración de HCh se ajustó a 10 mg/ml. Se disolvió en agua un exceso molar de derivado de mPEG-pentafluorofenilcarbonato de 40 kDa ramificado de 4 brazos con respecto a la cantidad de HCh para formar una solución de reactivo al 6 % (p/p). La solución de reactivo se añadió a la solución de HCh en una proporción de 1 a 1 (basada en el peso) y se mezcló. La mezcla de reacción se incubó con agitación durante 105 min a 12-16 °C y posteriormente se inactivó añadiendo 4 volúmenes de una solución que comprendía ácido acético 27 mM y L-metionina 12,5 mM a 1 volumen de la mezcla de reacción para reducir el pH de la solución a 4-4,5. Después de la filtración estéril, la mezcla de reacción se incubó a temperatura ambiente durante 16 ± 4 h. El monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x se purificó mediante cromatografía de intercambio catiónico.

Intercambio de tampón y ajuste a la concentración deseada de monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x se logró utilizando un sistema de filtración de flujo tangencial. Con esto, el eluido de la cromatografía de intercambio catiónico se ultrafiltró y se diafiltró a tampón de formulación (ácido succínico 10 mM, 85 g/l de dihidrato de trehalosa, a pH 5,0 con solución de Tris 1M). Utilizando el mismo sistema, la concentración de trehalosa se redujo a 65 g/l y la concentración de esta solución madre se ajustó a 105±3 mg/ml de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x (correspondiente a 35 ± 1 mg de eq. de HCh/ml). Las formulaciones que se muestran en la Tabla 3 se prepararon basándose en esta solución madre de compuesto 2 diluyendo la solución madre con tampón de formulación de alta concentración (ácido succínico 10 mM, 89 g/l de dihidrato de trehalosa, ajustado a pH 5,0 con Tris-base 1 M).

T l : F rm l i n m n n 2 mPE - nl z r-H h 1 kD 4x

Los lotes individuales se analizaron mediante RP-HPLC, SE-HPLC, mapeo de péptidos y SDS-PAGE. El SDS-PAGE mostró que todas las formulaciones tienen calidades de producto comparables que son similares a las de referencia. Durante el desarrollo del método, se descubrió que la carga de la columna de cromatografía de intercambio catiónico que se utiliza para purificar el monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x podría aumentar significativamente en comparación con el procedimiento de purificación de monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x.

Conclusión:

El monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x podría sintetizarse implementando solo cambios menores en el proceso de fabricación en comparación con el proceso de fabricación descrito en el documento EP-A 2113256 y mostró una manipulación y propiedades del producto mejoradas. La carga de la columna CIEX para purificación podría al menos triplicarse sin afectar la eficacia de la separación y la calidad del producto. Adicionalmente, el contenido del producto final podría aumentarse por encima de 100 mg/ml del conjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x que corresponde a aprox. 35 mg de eq. de HCh/ml.

Ejemplo 3: Capacidad de inyección de formulaciones de alta resistencia de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x en comparación con monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x

Se investigó la capacidad de las formulaciones individuales de los ejemplos 1 y 2 para inyectarse a través de agujas de inyección con varios diámetros internos. Las pruebas se realizaron en un soporte Mecmesin Multitest 1-d, equipado con dispositivo de medición BFG 200N y utilizando el programa informático Emperor Lite (Vers. n.° 1.16-015). Las agujas de inyección probadas comprenden una aguja 27G de 0,4x13 mm 27Gx1/2" de BD (Ref 300635, Lote 101009), una aguja 29G, de 0,33x13 mm de Transcoject, y una aguja 30G de 0,30x12 mm, 30Gx1/2", de Sterican (Lote 2G13258811). El dispositivo de medición se configuró para medir la fuerza para empujar el émbolo hacia abajo para una velocidad constante dada del émbolo. Las velocidades aplicadas del émbolo que se corresponden con las velocidades de inyección aplicadas fueron las siguientes:

La prueba se realizó siguiendo las siguientes etapas:

1. Carga de una jeringa Luer-lok de 1 ml, (BD, Ref 309628) con muestra (utilizando una aguja de 20G, 0,90x40 mm, 20Gx11/2" de Sterican)

2. Eliminación de burbujas de aire

3. Colocación de la aguja de prueba (comenzando con el diámetro interior más grande) en la jeringa

4. Sujetar la jeringa en el soporte

5. Selección de los ajustes de medición adecuados

6. Inicie la medición y recoja la muestra en un vial de vidrio (colocado debajo de la jeringa)

7. Extracción de la jeringa del soporte

8. Recarga de la jeringa con material de prueba y medición del ajuste posterior -> estas etapas se repitieron para todas las agujas (con diámetro de aguja descendente) y para cada muestra de prueba.

El tampón de formulación sin monoconjugado 1 o 2 mPEG-enlazador-HCh se utilizó como solución de referencia.

Para todas las agujas de inyección diferentes y para todas las velocidades de inyección, las fuerzas de inyección se determinaron para monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y se compararon con los resultados de monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x. La Tabla 4 muestra la comparación de las fuerzas de inyección entre monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x para la aguja de 27G 0,4x13 mm 27Gx1/2" de BD (Ref 300635, Lote 101009).

Tabla 4: Fuerzas de inyección de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPE - nl z r-H h 2 kD 4x r n 27 4x1 mm 27 x12" BD

continuación

La Tabla 5 muestra la comparación de las fuerzas de inyección entre monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x para la aguja 29G, de 0,33x13 mm de Transcoject.

Tabla 5: Fuerzas de inyección de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1

- -

La Tabla 6 muestra la comparación de las fuerzas de inyección entre monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x para la aguja 30G de 0,30x12 mm, 30Gx1/2", de Sterican (Lote 2G13258811).

Tabla 6: Fuerzas de inyección de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPE - nl z r-H h 2 kD 4x r n x12mm x12" ri n

continuación

Conclusión:

La inyectabilidad de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x fue altamente mejorada y la fuerza de inyección se pudo reducirse de 3,5 veces a 4-5 veces en comparación con el monoconjugado 1 mPEG -enlazador-HCh de 20 kDa a 4x.

Ejemplo 4: Mediciones de viscosidad de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x en comparación el monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x

La viscosidad dinámica de las muestras de prueba se determinó en Infraserv Knapsack (ahora synlab Pharma Institute) utilizando un método según el método de la EP 2.2.10. Todas las mediciones se realizaron con aprox. 1-5 ml de muestra de prueba a 23,0 ± 0,1 °C utilizando un sistema de medición de cono/placa (CP50/1). La velocidad de cizallamiento estuvo en el intervalo de 100 s_1 - 10 s-1.

Todas las formulaciones probadas de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x se ajustaron a una osmolalidad igual de aprox. 290 mOsmol/kg aumentando o disminuyendo la cantidad de trehalosa en la formulación. Los valores de viscosidad dinámica medidos para todas las muestras de prueba se resumen en la Tabla 7.

Tabla 7: Valores de viscosidad dinámica para diferentes formulaciones de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x que se ajustaron a osmolalidades similares.

Conclusión:

La viscosidad dinámica del monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x podría reducirse significativamente en un factor de 4 a 5 veces en comparación con el monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x.

Ejemplo 5: Tiempo de reconstitución de liofilizados de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x

Se liofilizó 1 ml de monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x en un vial de Din2R y, después de la liofilización, la torta liofilizada se disolvió con 1 ml de agua para inyección. El tiempo de reconstitución se comparó con el tiempo de disolución de un liofilizado de monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x. Durante la reconstitución se detectaron más burbujas de gas para el monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x. Si bien la disolución de la torta de liofilización fue bastante rápida, el tiempo hasta que se obtuvo una solución clara con solo una cantidad mínima de burbujas de gas restantes, fue significativamente más corto para el monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x. Los resultados de este procedimiento de reconstitución se resumen en la Tabla 8.

Tabla 8: Tiempos de reconstitución de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1

mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x

Conclusión:

El tiempo de reconstitución hasta que se logre una solución transparente y prácticamente sin burbujas es significativamente más corto para el monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x en comparación con el monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x.

Ejemplo 6: Hidrólisis in vitro de monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x

Para la determinación de tasas de escisión in vitro del monoconjugado 2 mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x o del monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x, se cambió el tampón de los compuestos a tampón PBST a pH 7,4 y las soluciones eluidas se filtraron a través de un filtro de 0,22 |jm y se incubaron a 37 °C durante 1 semana. Se tomaron muestras a determinados intervalos de tiempo y se analizaron mediante RP-HPLC. Todos los picos se integraron y asignaron y las áreas de los picos relevantes se representaron frente al tiempo de incubación. Se aplicó un programa informático de ajuste de curvas para determinar las tasas de escisión de primer orden. La Tabla 9 muestra tasas de hidrólisis in vitro de monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh de 10 kDa a 4x y monoconjugado 1 mPEG-enlazador-HCh de 20 kDa a 4x a pH 7,4 y 37 °C.

Tabla 9: Tasas de hidrólisis in vitro de monoconjugado 2 de mPEG-enlazador-HCh 10 kDa a 4x o de

- - °

Conclusión:

las tasas de hidrólisis in vitro de los conjugados 1 y 2 a pH 7,4 y 37 °C estuvieron en el intervalo de 105 ± 5 h. Ambos tiempos de semivida fueron muy comparables y se situaron dentro del intervalo de confianza del 95 %.

Ejemplo 7: Cuantificación de conjugados 1 y 2 en muestras de suero de estudios con animales

Se utilizó un método basado en ELISA para cuantificar conjugados 1 y 2 en muestras de suero de estudios con animales. Se utilizó el mismo formato de ELISA de tipo sándwich para ambos conjugados 1 y 2, que utilizó un anticuerpo policlonal anti-HCh de oveja (Abcam, N.° de Cat ab64499) como anticuerpo de captura y un anticuerpo anti-PEG de conejo biotinilado (Epitomics, N.° de Cat. 2137-1) como anticuerpo de detección. La lectura se realizó con estreptavidina-HRP (Jackson ImmunoResearch, N.° de Cat. 016-030-084) y un sistema de sustrato líquido comercial

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (IV)

en donde

D es un polipéptido de HCh de la SEQ ID NO: 1 conectado al resto de la molécula a través de un grupo funcional amina proporcionado por una cadena lateral de lisina; y

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, donde cada p1, p2, p3, p4 es independientemente un número entero comprendido entre 220 y 240.

3. Una formulación farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 1 o 2 y al menos un excipiente.

4. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3, en donde la formulación farmacéutica es una formulación líquida que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 15-120 mg/ml

ácido succínico 5-40 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-86 mg/ml

opcionalmente metionina 5-40 mM

que tiene un pH que varía de pH 4,0 a pH 6,0 que se titula utilizando un tampón adecuado.

5. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3 o 4, en donde la formulación farmacéutica es una formulación líquida que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 30-45 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 75-86 mg/ml

opcionalmente metionina 5-20 mM

6. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3 o 4, en donde la formulación farmacéutica es una formulación líquida que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 75-105 mg/ml

ácido succínico 5-20 mM

opcionalmente dihidrato de trehalosa 60-81 mg/ml

opcionalmente metionina 5-20 mM

7. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3, donde la formulación farmacéutica es una formulación seca que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 15-63 % (p/p)

ácido succínico 0,6-2,5 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 32-84 % (p/p)

Tris 0,6-2,6 % (p/p)

8. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3 o 7, donde la formulación farmacéutica es una formulación seca que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 26-36 % (p/p)

ácido succínico 0,5-1,9 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 60-73 % (p/p)

Tris 0,5-1,9 % (p/p)

9. La formulación farmacéutica de la reivindicación 3 o 7, donde la formulación farmacéutica es una formulación seca que comprende

el compuesto de fórmula (IV) 48-62 % (p/p)

ácido succínico 0,4-1,4 % (p/p)

dihidrato de trehalosa 35-52 % (p/p)

Tris 0,4-1,4 % (p/p)

10. El compuesto de la reivindicación 1 o 2 o la formulación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9 para su uso como un medicamento.

11. El compuesto de la reivindicación 1 o 2 o la formulación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9 para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en la deficiencia de la hormona del crecimiento en niños, baja estatura idiopática, mutaciones del gen homeobox de baja estatura, síndrome de Turner, síndrome de Noonan, síndrome de Prader-Willi, niños nacidos pequeños para la edad gestacional, insuficiencia renal crónica, deficiencia de hormona del crecimiento en adultos, deterioro progresivo debido al VIH o SIDA u otras neoplasias, síndrome del intestino corto, sarcopenia y debilidad.

12. El compuesto o la formulación farmacéutica para el uso de la reivindicación 11, en donde la enfermedad es la deficiencia de la hormona del crecimiento en los niños.

13. El compuesto o la formulación farmacéutica para el uso de la reivindicación 11, en donde la enfermedad es la deficiencia de la hormona del crecimiento en los adultos.

14. El compuesto o la formulación farmacéutica para el uso de la reivindicación 11, en donde la enfermedad son los niños nacidos pequeños para la edad gestacional.