ES2859553T3 - Mitoguazona para el tratamiento de esclerosis múltiple progresiva - Google Patents

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Abstract

La MGBG para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple progresiva en un paciente, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.

Description

DESCRIPCIÓN
Mitoguazona para el tratamiento de esclerosis múltiple progresiva
En la presente se describen nuevas composiciones farmacéuticas orales de MGBG (metilglioxal bis(guanilhidrazona); mitoguazona), y su aplicación para el tratamiento de la esclerosis múltiple (EM).
La MGBG (metilglioxal bis(guanilhidrazona); mitoguazona) es un inhibidor de poliaminas competitivo de la S-adenosil metionina descarboxilasa (SAMDC, AMD-I), que cataliza la síntesis de espermidina, una poliamina. Las poliaminas derivadas de aminoácidos se llevan asociando durante mucho tiempo al crecimiento celular y al cáncer, y oncogenes y genes supresores de tumor específicos regulan el metabolismo de poliaminas. La inhibición de la síntesis de poliaminas ha demostrados no ser eficaz, en general, como estrategia anticáncer en ensayo clínicos, pero ha sido una potente estrategia de quimioprevención del cáncer en estudios preclínicos. A pesar de su nuevo mecanismo de acción y de los prometedores datos preclínicos, los ensayos clínicos iniciales de la MGBG se detuvieron a mediados de la década de los sesenta debido a una toxicidad grave, específicamente contra tejidos normales autorrenovables, tales como la médula ósea y el tracto intestinal (en particular, mucositis grave), siendo ambos dependientes de la dosis y de la programación.
No obstante, se ha continuado investigando la MGBG. Una serie de estudios han examinado los usos potenciales en combinación con otros agentes quimioterapéuticos y regímenes de dosificación innovadores, diseñados para minimizar los efectos secundarios y la dosis siempre que fuera posible. Otros se han centrado en aclarar los modos de acción de la MGBG en el cuerpo. Otros han investigado la actividad de la MGBG en enfermedades distintas del cáncer.
El documento WO2008/112659 analiza composiciones farmacéuticas que comprenden MGBG en combinación para tratar la EM. “Mitoguazone”, Drugs of the future, 1992, vol. 17, n.° 3, pp. 253-254 proporciona otros antecedentes sobre el uso y desarrollo de estas moléculas. El documento EP2343075 menciona el diazóxido como tratamiento de la EM. El documento WO2011/009039 describe composiciones que contienen MGBG.
Quizás debido a los descubrimientos clínicos negativos en estos estudios tempranos, hasta la fecha, la MGBG se ha limitado a un uso intravenoso. A fines prácticos, esto presenta una serie de problemas para el tratamiento de muchas enfermedades, en particular de afecciones crónicas o recurrentes. La administración mediante inyección o infusión IV (intravenosa) debe ser realizada por un médico en un entorno hospitalario. Esto no solo presenta un inconveniente y un mayor coste para el sujeto, sino que también le expone a infecciones nosocomiales y a dolencias, procediendo estas últimas de la venipunción y de la propia visita al hospital o clínica. En individuos inmunocomprometidos, individuos que están sometidos a un tratamiento con supresores del sistema inmunitario y personas ancianas, este es un problema importante. Por tanto, un sujeto con una afección crónica a largo plazo, tal como un trastorno autoinmunitario o hiperproliferativo, o un doctor que está tratando a dicho sujeto, puede encontrar que el coste, el inconveniente o los riesgos de dicho tratamiento son más importantes que cualquier beneficio terapéutico potencial que el fármaco pueda ofrecer. Además, los fármacos de infusión IV tiene problemas de Cmax y Tmax elevados, frente a los fármacos orales, que se absorben más lentamente.
Por contraste, una formulación oral de MGBG presentará varios beneficios. En primer lugar, una formulación oral, por ejemplo, una sencilla píldora o comprimido, pueden tomarse fuera de un entorno hospitalario, lo cual aumenta el potencial de facilidad de uso y cumplimiento por parte del paciente. Esto permite al sujeto evitar los riesgos de infección concomitantes a la administración IV y a las visitas hospitalarias. Cuando un tratamiento temprano puede prevenir el desarrollo de complicaciones de una enfermedad, esto es particularmente beneficioso. La administración crónica de dosis bajas de MGBG es prácticamente imposible en una formulación IV. Además, la administración oral generalmente evita el alto pico de concentración y la rápida depuración asociados con una dosis en embolada IV. Otra ventaja de un fármaco oral es la capacidad de formular la MGBG como una composición de combinación con uno o más agentes terapéuticos.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra las puntuaciones clínicas promedio de sujetos en el primer modelo murino de 28 días de encefalomielitis autoinmunitaria (EAE) (un modelo progresivo crónico de la EM) inducida por una inoculación con péptidos de la glicoproteína de la mielina de oligodendrocitos ("myelin oligodendrocyte glycoprotein", MOG), en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 3 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 2 muestra el cambio del porcentaje promedio en el peso corporal (con relación al inicio del estudio) de sujetos en el primer modelo de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 3 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 3 muestra la reducción en la inflamación de la médula espinal, medida mediante el número de focos inflamatorios en muestras histopatológicas de médula espinal, del modelo de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 3 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 4 muestra la reducción en la desmielinización de la médula espinal en muestras histopatológicas del modelo de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 3 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 5 muestra la reducción en la apoptosis celular en muestras histopatológicas de médula espinal del modelo de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 3 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 6 muestra las puntuaciones clínicas promedio de sujetos en el segundo modelo murino de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 1 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada; la MGBG suprimió la EAE de una manera comparable a fingolimod 1 mpk.
La figura 7 muestra el cambio del porcentaje promedio en el peso corporal (con relación al inicio del estudio) de sujetos en el segundo modelo de MOG EAE de 28 días, en el que los sujetos de ensayo se dosificaron con vehículo, MGBG 30 mpk (dos veces diarias), o fingolimod 1 mpk (una vez diaria), y se compararon con sujetos con inmunización simulada.
La figura 8 demuestra que la MGBG, pero no el fingolimod, reduce en el SNC A) las células dendríticas CD11c+ asociadas con la presentación de antígenos, y B) las células dendríticas IL12+ asociadas con la estimulación de la respuesta de Th1.
La figura 9 demuestra que la MGBG, pero no el fingolimod, reduce A) los Th1, y B) los macrófagos M1.
La figura 10 demuestra que el fingolimod preferentemente A) reprime los Th17, y B) aumenta los macrófagos M2; por tanto, la MGBG y el fingolimod tienen actividades terapéuticamente complementarias, pero diferenciadas, en la EM.
La figura 11 demuestra que, aunque los niveles en plasma de MGBG son casi indetectables a las 28 horas después de una única dosis en rata, los niveles de MGBG en el bazo y el hígado siguen siendo elevados y detectables incluso 48 horas después de la dosis. Esto resulta coherente con un mecanismo de captación selectiva para la MGBG.
La figura 12 muestra las puntuaciones clínicas promedio diarias de sujetos en el tercer modelo murino de MOG EAE de 28 días, en el que el fingolimod se dosificó a 0,1 mpk (una vez diaria); la MGBG dosificada a 30 mpk (dos veces diarias) reprimió la EAE de una manera comparable a fingolimod 0,1 mpk, y la combinación de MGBG y fingolimod reprimió totalmente el desarrollo de EAE a lo largo del desarrollo del estudio (ningún animal desarrolló la enfermedad con la terapia de combinación).
La figura 13, que muestra las puntuaciones clínicas promedio acumuladas de los sujetos en el tercer estudio de EAE, también ilustra la significancia de los anteriores resultados. La MGBG a 30 mpk (dos veces diarias) y el fingolimod a 0,1 mpk (una vez diaria) fueron igualmente eficaces para prevenir el desarrollo de EAE, y la combinación de los dos reprimió totalmente el desarrollo de EAE.
La figura 14 muestra el cambio en el peso corporal (con relación al inicio del estudio) de sujetos en el tercer modelo de EAE de 28 días, lo cual corrobora los resultados de la figura 13.
La figura 15 muestra la reducción en la inflamación de la médula espinal, medida mediante el número de focos inflamatorios en muestras histopatológicas de médula espinal, del tercer modelo de EAE. De nuevo, la MGBG a 30 mpk (dos veces diarias) y el fingolimod a 0,1 mpk (una vez diaria) fueron igualmente eficaces para reducir el número de focos inflamatorios, y la combinación de los dos aparentemente reprimió totalmente su desarrollo.
La figura 16 muestra la reducción en la apoptosis celular en muestras histopatológicas de médula espinal procedentes del tercer modelo de EAE. De nuevo, la MGBG a 30 mpk (dos veces diarias) y el fingolimod a 0,1 mpk (una vez diaria) fueron igualmente eficaces para reducir la apoptosis, y la combinación de los dos aparentemente reprimió completamente la apoptosis.
La figura 17 muestra la reducción en la desmielinización de la médula espinal en muestras histopatológicas del tercer modelo de EAE. De nuevo, la MGBG a 30 mpk (dos veces diarias) y el fingolimod a 0,1 mpk (una vez diaria) fueron igualmente eficaces para reducir la desmielinización, y la combinación de los dos aparentemente evitó la desmielinización completamente.
Por consiguiente, en la presente se proporciona un método de tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple, o uno de sus síntomas, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0023]-[0031] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
En la presente también se proporciona un método de tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple que comprende la administración contemporánea de MGBG y un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el otro agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0034]-[0041] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
En ciertas realizaciones, la formulación farmacéutica se formula para una dosificación de una vez diaria.
En ciertas realizaciones, la formulación farmacéutica se formula para una dosificación de dos veces diarias.
También se proporciona un método para la prevención de la recaída o la progresión, o para disminuir la gravedad de los síntomas en una recaída, de la esclerosis múltiple en un paciente, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de SAMDC. En ciertas realizaciones, se proporciona un método para la prevención de la progresión, o para disminuir la gravedad de los síntomas en una recaída, de la esclerosis múltiple en un paciente, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG. La enfermedad desmielinizante es la esclerosis múltiple.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad, teratogenicidad, disminución de la función pulmonar, edema macular, neuropatía periférica, reacciones cutáneas graves, aumento del riesgo de infecciones (incluyendo víricas y bacterianas latentes), alteración de la inmunidad innata, alteración de la inmunidad adaptativa, y sofocos, en comparación con otro agente terapéutico aprobado para el tratamiento de una enfermedad desmielinizante.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad. En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos dos efectos secundarios seleccionados de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de citopenia, nefrotoxicidad y hepatotoxicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce además concomitantemente con una incidencia reducida de cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0046]-[0063] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
También se proporciona un método de tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple progresiva en un paciente, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
En ciertas realizaciones, la esclerosis múltiple progresiva es progresiva primaria.
En ciertas realizaciones, la esclerosis múltiple progresiva es progresiva secundaria.
En ciertas realizaciones, la esclerosis múltiple progresiva es progresiva en recaída.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el tratamiento previene la recaída o la progresión de la EM.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad, teratogenicidad, disminución de la función pulmonar, edema macular, neuropatía periférica, reacciones cutáneas graves, aumento del riesgo de infecciones (incluyendo víricas y bacterianas latentes), alteración de la inmunidad innata, alteración de la inmunidad adaptativa, y sofocos, en comparación con otro agente terapéutico aprobado para el tratamiento de una enfermedad desmielinizante.
En ciertas realizaciones, la enfermedad desmielinizante es la esclerosis múltiple.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad. En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos dos efectos secundarios seleccionados de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de citopenia, nefrotoxicidad y hepatotoxicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce además concomitantemente con una incidencia reducida de cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0065]-[0086] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
También se proporciona un método de prevención o reducción de la gravedad de la fase de iniciación de la respuesta autoinmunitaria en un paciente que padece esclerosis múltiple, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
En ciertas realizaciones, la administración además previene o reduce la fase de amplificación de la respuesta autoinmunitaria en un paciente que padece esclerosis múltiple.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad, teratogenicidad, disminución de la función pulmonar, edema macular, neuropatía periférica, reacciones cutáneas graves, aumento del riesgo de infecciones (incluyendo víricas y bacterianas latentes), alteración de la inmunidad innata, alteración de la inmunidad adaptativa, y sofocos, en comparación con otro agente terapéutico aprobado para el tratamiento de una enfermedad desmielinizante.
En ciertas realizaciones, la enfermedad desmielinizante es la esclerosis múltiple.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos un efecto secundario seleccionado de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad. En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de al menos dos efectos secundarios seleccionados de citopenia, nefrotoxicidad, hepatotoxicidad, cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce concomitantemente con una incidencia reducida de citopenia, nefrotoxicidad y hepatotoxicidad.
En ciertas realizaciones, la citopenia se selecciona de linfopenia y neutropenia.
En ciertas realizaciones, la administración se produce además concomitantemente con una incidencia reducida de cardiotoxicidad y teratogenicidad.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0182]-[0203] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
También se proporciona un método de tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple en un paciente que lo necesita, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0112]-[0120] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
También se proporciona un método para la prevención o reducción del desarrollo de focos inflamatorios en el tejido nervioso de un sujeto que lo necesita, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
En ciertas realizaciones, la administración de MGBG es oral.
En ciertas realizaciones, la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
La enfermedad desmielinizante se selecciona de la esclerosis múltiple.
En ciertas realizaciones, el método comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
En ciertas realizaciones, el agente es fingolimod.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios.
En ciertas realizaciones, el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
En la presente también se proporcionan realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones en los párrafos [0123]-[0131 ] se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.
La presente descripción contempla no solo los métodos descritos anteriormente, sino también:
■ el correspondiente uso de los compuestos anteriores en el tratamiento de una enfermedad, y en las enfermedades específicas analizadas; y
■ el correspondiente uso de los compuestos anteriores en la fabricación de medicamentos para el tratamiento de las enfermedades analizadas.
En la presente también se describen formulaciones farmacéuticas orales de MGBG. También se describen métodos para el tratamiento de enfermedades, que comprenden la administración de MGBG .
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica para la administración oral, que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica oral, que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable, que produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz cuando se administra por vía oral a un sujeto.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 30, 36 o 48 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 6 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 12 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 18 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma sistémico terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 25, 50, 55, 60, 65, 75, 80, 85, 90 o 95 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 o 24 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 6 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 8 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 8 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 12 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 18 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 25 % de la concentración pico en plasma durante al menos 18 horas. En otras realizaciones, la concentración pico en plasma es una concentración terapéuticamente eficaz. En otras realizaciones, el porcentaje de la concentración pico en plasma es terapéuticamente eficaz a lo largo de un periodo de tiempo concreto.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende MGBG tiene una biodisponibilidad oral de al menos 10, 20, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50, 55 o 60 %. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 % o 45 %. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 30 %, al menos 35 %, al menos 40 % o al menos 45 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 20 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 30 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 35 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 40 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 45 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de una vez diaria. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de dos veces diarias. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de tres veces diarias.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende MGBG tiene una semivida de al menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30 o 36 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 12 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 18 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 20 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 24 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 48, 72, 96 o 120 horas.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica para la administración oral, que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica oral, que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable, que produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz cuando se administra por vía oral a un sujeto.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica oral, que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable, que produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz para el tratamiento del dolor cuando se administra por vía oral a un sujeto.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 30, 36 o 48 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 6 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 12 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 18 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 24 horas.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 25, 50, 55, 60, 65, 75, 80, 85, 90 o 95 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 o 24 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 4 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 6 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante al menos 8 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 8 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 12 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 50 % de la concentración pico en plasma durante al menos 18 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica produce un nivel en plasma de MGBG de al menos 25 % de la concentración pico en plasma durante al menos 18 horas. En otras realizaciones, la concentración pico en plasma es una concentración terapéuticamente eficaz. En otras realizaciones, el porcentaje de la concentración pico en plasma es terapéuticamente eficaz a lo largo de un periodo de tiempo concreto.
En otras realizaciones, la composición farmacéutica que comprende MGBG tiene una biodisponibilidad oral de al menos 10, 20, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 45, 50, 55 o 60 %. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 % o 45 %. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 30 %, al menos 35 %, al menos 40 % o al menos 45 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 20 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 30 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 35 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 40 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral de al menos 45 %. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de una vez diaria. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de dos veces diarias. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una biodisponibilidad oral que produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de tres veces diarias.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica que comprende MGBG tiene una semivida de al menos 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 26, 28, 30 o 36 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 12 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 18 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 20 horas. En otras realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 24 horas. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica tiene una semivida de al menos 48, 72, 96 o 120 horas.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica que comprende MGBG junto con al menos un excipiente oral farmacéuticamente aceptable, que produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz cuando se administra por vía oral a un sujeto, que no tiene efectos secundarios sustancialmente limitantes de la dosis. En ciertas realizaciones, dichos efectos secundarios son gastrointestinales. En otras realizaciones, dichos efectos secundarios gastrointestinales se seleccionan de náuseas, vómitos, diarrea, dolor abdominal, mucositis oral, ulceración oral, faringitis, estomatitis, perforaciones gastrointestinales, úlceras gastrointestinales, obstrucciones gastrointestinales, y sangrados gastrointestinales. En otras realizaciones, dichos efectos secundarios gastrointestinales se seleccionan de la inhibición de la proliferación mucósica gastrointestinal, la inhibición de la migración de las células del lumen epitelial en desarrollo, y la inhibición de la diferenciación de células progenitoras o madre en células del lumen epitelial. En ciertas realizaciones, dichos efectos secundarios se seleccionan de trombocitopenia, leucopenia, flebitis, laringitis, celulitis, dermatitis e hipoglucemia.
En la presente también se proporciona una composición farmacéutica oral de dosis baja para la administración crónica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, que no tiene efectos secundarios gastrointestinales sustanciales. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica oral de dosis baja para la administración crónica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, que no tiene efectos secundarios gastrointestinales sustanciales, produce un nivel en plasma terapéuticamente eficaz de MGBG durante un periodo de al menos 24 horas en el sujeto con una dosificación de una vez diaria.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica se formula como un comprimido o una cápsula. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende:
del 0,1-50 % de MGBG;
del 0,1-99,9 % de una carga;
del 0-10 % de un disgregante;
del 0-5 % de un lubricante; y
del 0-5 % de un deslizante.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende:
del 0,1-50 % de MGBG;
del 0,1-99,9 % de una carga;
del 0-10 % de un disgregante;
del 0-5 % de un lubricante; y
del 0-5 % de un deslizante.
En otras realizaciones,
dicha carga se selecciona de un azúcar, un almidón, una celulosa y un poloxámero;
dicho disgregante se selecciona de povidona y crospovidona;
dicho lubricante es estearato de magnesio; y
dicho deslizante es dióxido de silicio.
En otras realizaciones,
dicha carga se selecciona de lactosa y celulosa microcristalina;
dicho disgregante se selecciona de povidona y crospovidona;
dicho lubricante es estearato de magnesio; y
dicho deslizante es dióxido de silicio.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende:
10-300 mg de un inhibidor de la biosíntesis de poliaminas, que constituye hasta 2-50 % del contenido del comprimido o del contenido de carga de la cápsula;
del 0-10 % de un disgregante;
del 0-5 % de un lubricante;
del 0-5 % de un deslizante; y
del 30-98 % de una carga.
En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende:
10-300 mg de MGBG, que constituye hasta 2-50 % del contenido del comprimido o del contenido de carga de la cápsula;
del 0-10 % de un disgregante;
del 0-5 % de un lubricante;
del 0-5 % de un deslizante; y
del 30-98 % de una carga.
En otras realizaciones, la composición farmacéutica comprende:
del 0,1-10 % de un ligante;
del 0-5 % de un tensioactivo;
del 0-10 % de un disgregante intergranular; y
del 0-10 % de un disgregante extragranular.
En otras realizaciones, la composición farmacéutica puede comprender, además:
del 0-10 % de un ligante;
del 0-5 % de un tensioactivo;
del 0-10 % de un disgregante intergranular; y
del 0-10 % de un disgregante extragranular.
En otras realizaciones,
dicho ligante se selecciona de copolividona, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y povidona;
dicho tensioactivo se selecciona de monooleato de sorbitano-polioxietileno (20), un poloxámero y laurilsulfato de sodio;
dicho disgregante intergranular se selecciona de croscarmelosa sodio, almidón glicolato de sodio y crospovidona; y dicho disgregante extragranular se selecciona de croscarmelosa sodio, almidón glicolato de sodio y crospovidona. En la presente también se proporciona un método para tratar o retrasar la aparición o el desarrollo de una afección en un sujeto que lo necesita, que comprende la administración de una composición farmacéutica oral que comprende MGBG y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica oral se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz. En ciertas realizaciones, dicha composición farmacéutica oral tiene una biodisponibilidad de al menos 30 %. En ciertas realizaciones, dicha composición farmacéutica oral no tiene efectos secundarios sustancialmente limitantes de la dosis. En ciertas realizaciones, el nivel en plasma de MGBG es de al menos 75 % de la concentración pico en plasma durante 4 o más horas. En otras realizaciones, dicha composición farmacéutica oral produce un nivel de MGBG en plasma sistémico terapéuticamente eficaz durante un periodo de al menos 12 horas cuando se administra por vía oral a un sujeto.
Dicha afección se selecciona de la esclerosis múltiple.
En la presente también se proporciona un método de tratamiento de una afección en un sujeto que lo necesita, que comprende la administración de:
una composición farmacéutica oral que comprende MGBG y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable; y otro agente terapéutico.
En ciertas realizaciones, la MGBG se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz. En otras realizaciones, la MGBG se administra en una cantidad subterapéutica. En ciertas realizaciones, el otro agente terapéutico se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz. En otras realizaciones, el otro agente terapéutico se administra en una cantidad subterapéutica. En ciertas realizaciones, la MGBG y el otro agente terapéutico se administran juntos en cantidades que, individualmente, serían subterapéuticas, pero que juntas son terapéuticamente eficaces. En otras realizaciones, la MGBG y el otro agente terapéutico se administran juntos en cantidades que, individualmente, son terapéuticamente eficaces.
La MGBG es 1,1 '-[metiletandiiliden]dinitrilodiguanidina y también se conoce como metilglioxal bis(guanilhidrazona), metil-GAG, Me-G y mitoguazona. Tal como se emplea en la presente, la MGBG incluye la base libre y sus sales. Habitualmente se usa como un diclorhidrato, pero no necesariamente. La MGBG puede estar presente como cualquiera de los siguientes isómeros, o un tautómero y/o uno de sus isómeros syn/anti, o una mezcla de uno o más de estos:
Figure imgf000012_0001
En ciertas realizaciones, la MGBG puede estar presente como uno de los siguientes isómeros, o un tautómero y/o uno de sus isómeros syn/anti, o una mezcla de uno o más de estos:
Figure imgf000012_0002
Tal como se emplea en la presente, los siguientes términos y expresiones tienen los significados indicados.
El término “citoquina”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, significa ciertas moléculas de señalización segregadas por las células del sistema inmunitario que tiene un efecto inmunorregulador local. Las citoquinas pueden incluir, sin limitación, IL-1, IL1-Ra, IL-2, IL-6, Il8, IFNy, IP-10, IL-17, MCP-1, MMP-9, MIP-1p, TNF-a, TGFp, CRP, OPN y RANTES.
Cuando se indican intervalos de valores y se emplea la notación “de m ... a n2” o “entre m ... y n2”, cuando m y n2 son los números, entonces, a menos que se indique lo contrario, esta notación pretende incluir los propios números y el intervalo entre ellos. Este intervalo puede ser integral o continuo entre los valores finales y los incluye. Como ejemplo, el intervalo “de 2 a 6 carbonos” pretende incluir dos, tres, cuatro, cinco y seis carbonos, puesto que los carbonos se cuentan en unidades de números enteros. Compárese, como ejemplo, el intervalo de “de 1 a 3 pM (micromolar)”, que pretende incluir 1 pM, 3 pM, y todo lo que se encuentra entre ambos hasta cualquier número de cifras significativas (por ejemplo, 1,255 pM, 2,1 pM, 2,9999 pM, etc.).
El término “aproximadamente”, tal como se emplea en la presente, pretende calificar los valores numéricos a lo que modifica, indicando que dicho valor es variable dentro de un margen de error. Cuando no se indica ningún margen de error concreto, tal como una desviación estándar para un valor promedio indicado en una tabla de datos, debe entenderse que el término “aproximadamente” significa el intervalo que incluiría el valor indicado y el intervalo que surge redondeando hacia arriba o hacia abajo esa cifra, tomando en cuenta las cifras significativas.
El término “sustancialmente”, tal como se emplea en la presente, significa predominantemente o que tiene una característica invalidante, de modo que cualquier característica opuesta o detractora alcanza un nivel de insignificancia. Como ejemplo, una composición “sustancialmente” exenta de agua puede no estar absolutamente exenta de cualquier traza de agua, pero será lo suficientemente anhidra como para que cualquier agua remanente no influya en la composición de ninguna manera significativa. Como otro ejemplo, unos “efectos secundarios sustancialmente limitantes de la dosis” pueden ser efectos secundarios que limitan la dosis a un nivel que es menor que el necesario para lograr una eficacia terapéutica.
El término “enfermedad”, tal como se emplea en la presente, en general pretende ser sinónimo y se usa de modo intercambiable con los términos “trastorno”, “síndrome” y “afección” (tal como en una afección médica), y todos reflejan una condición anómala del cuerpo humano o animal o de una de sus partes, que altera el funcionamiento normal, se manifiesta generalmente por signos y síntomas distinguibles, y provoca que el ser humano o el animal tenga una duración reducida de su vida o una calidad de vida reducida.
Tal como se emplea en la presente, la esclerosis múltiple “progresiva” se refiere a formas de la enfermedad que progresan hacia un estado de enfermedad cada vez peor a lo largo del tiempo. La EM progresiva incluye, por ejemplo, la EM progresiva primaria, la EM progresiva secundaria y la EM progresiva en recaída. Estos subtipos pueden o no incluir estallidos episódicos de la enfermedad, pero cada uno está asociado con un aumento de los síntomas, tales como un aumento de la desmielinización o del dolor y una capacidad de movimiento reducida, a lo largo del tiempo.
Tal como se emplea en la presente, la referencia al “tratamiento” de un paciente pretende incluir la profilaxis. El tratamiento también puede tener una naturaleza preventiva, es decir, puede incluir la prevención de la enfermedad. La prevención de una enfermedad puede implicar la protección completa frente a la enfermedad, por ejemplo, tal como es el caso de la prevención de una infección por un patógeno, o puede implicar la prevención de la progresión de la enfermedad. Por ejemplo, la prevención de una enfermedad puede no significar la exclusión completa de cualquier efecto relacionado con la enfermedad a cualquier nivel, sino que puede significar la prevención de los síntomas de una enfermedad hasta un nivel detectable o clínicamente significativo. La prevención de enfermedades también puede significar la prevención de la progresión de una enfermedad hasta un estadio tardío de la enfermedad.
La expresión “terapia de combinación” significa la administración de dos o más agentes terapéuticos para tratar una afección o trastorno terapéutico descrito en la presente memoria descriptiva. Esta administración incluye la coadministración de estos agentes terapéuticos de una manera sustancialmente simultánea, tal como en una única cápsula que tiene una proporción fija de ingredientes activos, o en múltiples cápsulas distintas para cada ingrediente activo. Además, dicha administración también incluye el uso de cada tipo de agente terapéutico de una manera secuencial. En cualquiera de los casos, el régimen de tratamiento proporcionará los efectos beneficiosos de la combinación de fármacos para tratar las afecciones o los trastornos descritos en la presente.
El término “paciente” en general es sinónimo del término “sujeto”, y significa un animal que padece una enfermedad, trastorno o afección tratable según los métodos descritos en la presente, e incluye todos los mamíferos y seres humanos. Los ejemplos de pacientes incluyen seres humanos, ganado, tal como vacas, cabras, ovejas, cerdos y conejos, y animales de compañía, tales como perros, gatos, conejos y caballos. Preferiblemente, el paciente es un ser humano.
Una “cantidad eficaz” o una “cantidad terapéuticamente eficaz” es una cantidad de un compuesto (por ejemplo, MGBG) que es suficiente para lograr un efecto deseado en un sujeto que se está tratando. Por ejemplo, esta puede ser la cantidad necesaria para tratar una enfermedad, trastorno, afección o estado adverso o para puede alterar o aliviar de otra manera los síntomas, marcadores o mecanismos de la enfermedad, trastorno, afección o estado adverso de modo mensurable. La cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención puede variar dependiendo de la vía de administración y de la forma de dosificación. Además, las dosificaciones específicas pueden ajustarse dependiendo de las condiciones de la enfermedad, la edad, el peso corporal, las condiciones generales de salud, el sexo y la dieta del sujeto, los intervalos de dosis, las vías de administración, la tasa de excreción y las combinaciones de agentes.
La expresión “dosis baja”, en referencia a una formulación de dosis baja de un fármaco, o un método de tratamiento que emplea una “dosis baja” de un fármaco, significa una dosis que, al menos para una indicación, es subterapéutica, o es una fracción de la dosis que generalmente se administra para al menos una indicación. Tómese como ejemplo el caso de un fármaco para el tratamiento de trastornos proliferativos: una formulación de dosis baja para el tratamiento, por ejemplo, de la esclerosis múltiple, puede ser una fracción de la dosis para el tratamiento de un cáncer agresivo. De esta forma, la dosis para una enfermedad puede ser una cantidad que sería subterapéutica para otra enfermedad. Como alternativa, para un fármaco que es terapéutico en diferentes individuos o poblaciones a diferentes dosis y que está disponible en un intervalo de dosis, una dosis baja puede ser simplemente una dosis hacia el extremo inferior de la eficacia terapéutica reconocida. Las enfermedades crónicas representan una realización tratable con formulaciones y métodos de dosis bajas. Además, puede usarse una cantidad subterapéutica de un fármaco en combinación con uno o más fármacos distintos (en sí mismos en cantidades terapéutica o subterapéuticas) para producir una formulación o tratamiento de combinación que está potenciado, es decir, es más eficaz que los efectos esperados de la suma de los fármacos administrados por sí solos. Una dosis baja para el tratamiento de una indicación puede ser dos veces, tres veces, cuatro veces, cinco veces, seis veces, siete veces, ocho veces, nueve veces, diez veces, quince veces, veinte veces, treinta veces, cuarenta veces, cincuenta veces, cien veces menor que la dosis terapéutica para una indicación diferente.
La expresión “terapéuticamente eficaz” califica la cantidad de ingredientes activos usados en el tratamiento de una enfermedad o un trastorno o para conseguir un criterio de valoración clínico.
La expresión “terapéuticamente aceptable” se refiere a aquellos compuestos (o sales, profármacos, tautómeros, formas bipolares, etc.) que son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de los sujetos sin toxicidad, irritación y respuestas alérgicas indebidas, presentan una proporción de beneficio/riesgo razonable, y son eficaces para su uso previsto.
El término “fármaco” se emplea en la presente de modo intercambiable con “compuesto” y “agente”.
Cuando en la presente se indica que un compuesto “no es un regulador de células T”, esto significa que cualquier actividad directa contra células T es insignificante y/o secundaria a la actividad atribuible a otro subtipo de leucocitos. En ciertas realizaciones, una célula que “no es un regulador de células T” será una célula de linaje mieloide. En ciertas realizaciones, esta célula será una célula dendrítica, un monocito o un macrófago.
La expresión “incidencia reducida de al menos un efecto secundario”, tal como se usa en la presente, significa reducida hasta un grado que es significativo. La significancia puede demostrarse por métodos estadísticos (es decir, mediante desviaciones estándar no solapantes o intervalos de confianza apropiados). La significancia de una incidencia reducida de efectos secundarios también puede demostrarse con referencia a mediciones cualitativas, tales como, por ejemplo, la capacidad para lograr o mantener una dosis terapéutica sin toxicidad limitante de la dosis (en todos los pacientes o en una subpoblación de pacientes), la capacidad para prevenir o retrasar la recaída o la progresión de la enfermedad, o la preferencia del paciente.
La expresión “aprobado para el tratamiento de una enfermedad desmielinizante”, tal como se emplea en la presente, significa aprobado por una agencia reguladora de fármacos (en EE. UU., Europa o cualquier país EPO, Japón, Canadá o Australia) para el tratamiento de una enfermedad desmielinizante. En cualquier realización descrita en la presente, la enfermedad desmielinizante puede ser, específicamente la esclerosis múltiple.
La expresión “inhibidor de SAMDC” significa un inhibidor de la enzima S-adenosil metionina descarboxilasa. Se cree que la MGBG es uno de estos inhibidores de SAMDC.
Tal como se emplea en la presente, una “poliamina” es cualquiera de un grupo de aminas alifáticas de cadena lineal derivadas biosintéticamente de aminoácidos; las poliaminas se analizan en Marton et al. (1995), Ann. Rev. Pharm. Toxicol., 35:55-91. Una “poliamina” significa, en general, una poliamina natural o una poliamina que es producida en la naturaleza en células eucariotas. Los ejemplos de poliaminas incluyen putrescina, espermidina, espermina y cadaverina.
Tal como se emplea en la presente, un “análogo de poliamina” es un catión orgánico similar, aunque no idéntico, desde el punto de vista estructural a las poliaminas naturales, tales como espermina y/o espermidina, y su precursor, diamina putrescina. Los análogos de poliaminas pueden estar ramificados o no ramificados, o pueden incorporar restos cíclicos. Las poliaminas pueden comprender grupos amino primarios, secundarios, terciarios o cuaternarios. En una realización, todos los átomos de nitrógeno de los análogos de poliamina son independientemente grupos secundarios, terciarios o cuaternarios, pero no se limitan a estos. Los análogos de poliamina pueden incluir grupos imina, amidina y guanidina en lugar de grupos amina. La expresión “análogo de poliamina” incluye estereoisómeros, sales y derivados protegidos de análogos de poliamina.
Un “estereoisómero” es cualquier isómero óptico de un compuesto, incluyendo enantiómeros y diastereómeros. A menos que se indique lo contrario, las fórmulas estructurales de los compuestos pretenden incluir todos los estereoisómeros posibles.
Una “sal” o “sal farmacéuticamente aceptable” es un compuesto formado por la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno por elementos o grupos, y está compuesta de aniones y cationes, y habitualmente se ioniza en agua; una sal se forma, por ejemplo, mediante la neutralización de un ácido por una base. Los ejemplos de sales incluyen, pero no se limitan a sales de haluros, por ejemplo, cloruro, bromuro o yoduro, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, bifosfato, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metansulfonato, etansulfonato, bencensulfonato, p-toluensulfonato y pamoato (es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)).
Un “derivado protegido” se emplea para indicar un compuesto protegido con un grupo protector. Un “grupo protector” se refiere a un grupo químico que muestra las siguientes características: 1) reacciona selectivamente con la funcionalidad deseada con un buen rendimiento (preferiblemente al menos 80 %, más preferiblemente al menos 90 %, más preferiblemente al menos 95 %, aún más preferiblemente al menos 99 %) para producir un sustrato protegido que es estable frente a las reacciones previstas para las cuales se desea una protección; 2) puede retirarse selectivamente del sustrato protegido para producir la funcionalidad deseada; y 3) puede retirarse con un buen rendimiento (preferiblemente al menos 80 %, más preferiblemente al menos 90 %, más preferiblemente al menos 95 %, aún más preferiblemente al menos 99 %) con reactivos compatibles con el otro u otros grupos funcionales presentes o generados en dichas reacciones previstas. Pueden encontrarse ejemplos de grupos protectores adecuados en Greene et al. (1991), Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed. (John Wiley & Sons, Inc., Nueva York). Los ejemplos de grupos protectores para la funcionalidad amino incluyen, pero no se limitan a mesitilensulfonilo (MesSO2), benciloxicarbonilo (CBz), t-butiloxicarbonilo (Boc), t-butildimetilsililo (TBDIMS), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), o grupos protectores fotolábiles adecuados, tales como 6-nitroveratriloxicarbonilo (Nvoc).
El término “acilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un carbonilo unido a un alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, heteroarilo, heterociclo o cualquier otro resto en el que el átomo unido al carbonilo es carbono. Un grupo “acetilo” se refiere a un grupo —C(O)CH3. Un grupo “alquilcarbonilo” o “alcanoílo” se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular precursor a través de un grupo carbonilo. Los ejemplos de dichos grupos incluyen metilcarbonilo y etilcarbonilo. Los ejemplos de grupos acilo incluyen formilo, alcanoílo y aroílo. El término “alquenilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más dobles enlaces y que contiene de 2 a 20 átomos de carbono. En ciertas realizaciones, dicho alquenilo comprenderá de 2 a 6 átomos de carbono. El término “alquenileno” se refiere a un sistema de doble enlace carbono-carbono unido a dos o más posiciones, tal como etenileno [(—CH=CH—), (—C::C—)]. Los ejemplos de radicales alquenilo adecuados incluyen etenilo, propenilo, 2-metilpropenilo, 1,4-butadienilo y similares. A menos que se indique lo contrario, el término “alquenilo” puede incluir grupos “alquenileno”.
El término “alcoxi”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un radical alquil éter, en el que el término alquilo es como se define a continuación. Los ejemplos de radicales alquil éter adecuados incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, terc-butoxi y similares.
El término “alquilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 20 átomos de carbono. En ciertas realizaciones, dicho alquilo comprenderá de 1 a 10 átomos de carbono. En otras realizaciones, dicho alquilo comprenderá de 1 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos como se define en la presente. Los ejemplos de radicales alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isoamilo, hexilo, octilo, nonilo y similares. El término “alquileno”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo alifático saturado derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada unido a dos o más posiciones, tales como metileno (—CH2—). A menos que se indique lo contrario, el término “alquilo” puede incluir grupos “alquileno”.
El término “alquilamino”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo alquilo unido al resto molecular precursor a través de un grupo amino. Los grupos alquilamino adecuados puede estar mono- o dialquilados, formando grupos, tales como, por ejemplo, N-metilamino, N-etilamino, N,N-dimetilamino, N,N-etilmetilamino y similares.
El término “alquinilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más triples enlaces y que contiene de 2 a 20 átomos de carbono. En ciertas realizaciones, dicho alquinilo comprende de 2 a 6 átomos de carbono. En otras realizaciones, dicho alquinilo comprende de 2 a 4 átomos de carbono. El término “alquinileno” se refiere a un triple enlace carbonocarbono unido a dos posiciones, tal como etinileno (—C:::C—, —CeC—). Los ejemplos de radicales alquinilo incluyen etinilo, propinilo, hidroxipropinilo, butin-1-ilo, butin-2-ilo, pentin-1-ilo, 3-metilbutin-1-ilo, hexin-2-ilo y similares. A menos que se indique lo contrario, el término “alquinilo” puede incluir grupos “alquinileno”.
Los términos “amido” y “carbamoílo”, tal como se emplea en la presente, por sí solos o en combinación, se refieren a un grupo amino, según se describe a continuación, unido al resto molecular precursor a través de un grupo carbonilo, o viceversa. El término “C-amido”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo —C(O)N(RR'), siendo R y R' como se definen en la presente o como se definen en los grupos “R” específicamente enumerados mencionados. El término “N-amido”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo RC(O)N(R')—, siendo R y R' como se definen en la presente o como se definen en los grupos “R” específicamente enumerados mencionados. El término “acilamino”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo acilo unido al resto precursor a través de un grupo amino. Un ejemplo de un grupo “acilamino” es acetilamino (CH3C(O)NH—).
El término “amino”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a —NRR', en el que R y R' se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, acilo, heteroalquilo, arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterocicloalquilo, cualquiera de los cuales puede estar en sí mismo opcionalmente sustituido. Además, R y R' pueden combinarse para formar un heterocicloalquilo, y cualquiera puede estar opcionalmente sustituido.
El término “arilo” tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno, dos o tres anillos, en el que dichos sistemas de anillo policíclico están condensados entre sí. El término “arilo” incluye grupos aromáticos, tales como fenilo, naftilo, antracenilo y fenantrilo.
El término “arilalquilo” o “aralquilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo arilo unido al resto molecular precursor a través de un grupo alquilo. El término “carboxilo” o “carboxi”, tal como se emplea en la presente, se refiere a —C(O)OH o el correspondiente anión “carboxilato”, tal como en una sal de ácido carboxílico. Un grupo “O-carboxi” se refiere a un grupo a RC(O)O—, en el que R es como se define en la presente. Un grupo “C-carboxi” se refiere a grupos —C(O)OR, en los que R es como se define en la presente.
El término “ciano”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a —CN.
El término “cicloalquilo” o, como alternativa, “carbociclo” o “alicíclico”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un grupo alquilo saturado o parciamente saturado monocíclico, bicíclico o tricíclico, en el que cada resto cíclico contiene de 3 a 12 átomos de carbono como miembros del anillo, y que puede ser opcionalmente un sistema de anillo benzocondensado que está opcionalmente sustituido como se define en la presente. En ciertas realizaciones, dicho cicloalquilo comprenderá de 5 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de dichos grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, tetrahidronaftilo, indanilo, octahidronaftilo, 2,3-dihidro-1 H-indenilo, adamantilo y similares. “Bicíclico” y “tricíclico”, tal como se emplean en la presente, pretenden incluir sistemas de anillo condensados, tales como decahidronaftaleno, octahidronaftaleno, así como de tipo multicíclico (multicentrado) saturado o parcialmente insaturado. Los ejemplos generales de este último tipo de isómero son biciclo[1,1,1]pentano, alcanfor, adamantano y biciclo[3,2,1]octano. El término “halo” o “halógeno”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término “heteroalquilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a una cadena lineal o ramificada estable, o un radical hidrocarbonado cíclico, o sus combinaciones, totalmente saturado o que contiene de 1 a 3 grados de insaturación, que consiste en el número indicado de átomos de carbono y de uno a tres heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N y S, y en el que los átomos de nitrógeno y de azufre pueden estar opcionalmente oxidados, y el heteroátomo de nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado. El heteroátomo o heteroátomos O, N y S pueden estar colocados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo. Hasta dos heteroátomos pueden ser consecutivos, tales como, por ejemplo, —CH2—NH—OCH3.
El término “heteroarilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a un anillo heteromonocíclico insaturado de 3 a 15 miembros, o un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico condensado en el que al menos uno de los anillos condensados es aromático, que contiene al menos un átomo seleccionado del grupo que consiste en O, S y N. En ciertas realizaciones, dicho heteroarilo comprenderá de 5 a 7 átomos de carbono. El término también incluye grupos policíclicos condensados, en los que los anillos heterocíclicos están condensados con anillos de arilo, en los que los anillos de heteroarilo están condensados con otros anillos de heteroarilo, en los que los anillos de heteroarilo están condensados con anillos de heterocicloalquilo, o en los que los anillos heteroarilo están condensados con anillos de cicloalquilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen pirrolilo, pirrolinilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazolilo, piranilo, furilo, tienilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, benzimidazolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, indazolilo, benzotriazolilo, benzodioxolilo, benzopiranilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzofurilo, benzotienilo, cromonilo, cumarinilo, benzopiranilo, tetrahidroquinolinilo, tetrazolopiridazinilo, tetrahidroisoquinolinilo, tienopiridinilo, furopiridinilo, pirrolopiridinilo y similares. Los ejemplos de grupos heterocícilcos tricíclicos incluyen carbazolilo, benzidolilo, fenantrolinilo, dibenzofuranilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo y similares.
Los términos “heterocicloalquilo” y, de manera intercambiable, “heterociclo”, tal como se emplean en la presente, por sí solos o en combinación, se refieren cada uno a un grupo heterocíclico monocíclico, bicíclico o tricíclico saturado, parcialmente insaturado o totalmente insaturado que contiene al menos un heteroátomo como miembro del anillo, en los que cada uno de dichos heteroátomos puede seleccionarse independientemente del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre. En ciertas realizaciones, dicho heterocicloalquilo comprenderá de 1 a 4 heteroátomos como miembros del anillo. En otras realizaciones, dicho heterocicloalquilo comprenderá de 1 a 2 heteroátomos como miembros del anillo. En otras realizaciones, dicho heterocicloalquilo comprenderá de 3 a 8 miembros del anillo en cada anillo. En otras realizaciones, dicho heterocicloalquilo comprenderá de 3 a 7 miembros del anillo en cada anillo. En otras realizaciones, dicho heterocicloalquilo comprenderá de 5 a 6 miembros del anillo en cada anillo. “Heterocicloalquilo” y “heterociclo” pretenden incluir sulfonas, sulfóxidos, N-óxidos de miembros del anillo de nitrógeno terciario, y sistemas de anillo benzocondensados y carbocíclicos condensados; además, ambos términos también incluyen sistemas en los que un anillo de heterociclo se condensa con un grupo arilo, tal como se define en la presente, o un grupo heterociclo adicional. Los ejemplos de grupos heterociclo incluyen aziridinilo, azetidinilo, 1,3-benzodioxolilo, dihidroisoindolilo, dihidroisoquinolinilo, dihidrocinolinilo, dihidrobenzodioxinilo, dihidro[1,3]oxazolo[4,5-b]piridinilo, benzotiazolilo, dihidroindolilo, dihidropiridinilo, 1,3-dioxanilo, 1,4-dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, isoindolinilo, morfolinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, tetrahidropiridinilo, piperidinilo, tiomorfolinilo y similares. Los grupos heterociclo pueden estar opcionalmente sustituidos, a menos que se prohíba específicamente.
El término “inferior”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, cuando no se defina específicamente de otra forma, significa que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, inclusive.
El término “sulfonilo”, tal como se emplea en la presente, por sí solo o en combinación, se refiere a —S(O)2—.
Cualquier definición en la presente puede usarse en combinación con cualquier otra definición para describir un grupo estructural compuesto. Por convención, el elemento colocado al final en cualquiera de estas definiciones es el que se une al resto precursor. Por ejemplo, el grupo compuesto alquilamido representa un grupo alquilo unido a la molécula precursora a través de un grupo amido, y el término alcoxialquilo representa un grupo alcoxi unido a la molécula precursora a través de un grupo alquilo.
Cuando un grupo se define como “nulo”, esto significa que dicho grupo está ausente.
La expresión “opcionalmente sustituido” significa que el grupo anterior puede estar sustituido o no sustituido. Cuando está sustituido, los sustituyentes de un grupo “opcionalmente sustituido” pueden incluir, sin limitación, uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de los siguientes grupos o un conjunto de grupos indicados en particular, solos o en combinación; alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, alcanoílo inferior, heteroalquilo inferior, heterocicloalquilo inferior, haloalquilo inferior, haloalquenilo inferior, haloalquinilo inferior, perhaloalquilo inferior, perhaloalcoxi inferior, cicloalquilo inferior, fenilo, arilo, ariloxi, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, oxo, aciloxi inferior, carbonilo, carboxilo, alquilcarbonilo inferior, carboxiéster inferior, carboxamido inferior, ciano, hidrógeno, halógeno, hidroxi, amino, alquilamino inferior, arilamino, amido, nitro, tiol, alquiltio inferior, haloalquiltio inferior, perhaloalquiltio inferior, ariltio, sulfonato, ácido sulfónico, sililo trisustituido, N3, s H, SCH3, C(O)CH3 , CO2CH3, CO2H, piridinilo, tiofeno, furanilo, carbamato inferior y urea inferior. Dos sustituyentes pueden unirse para formar un anillo carbocíclico o heterocíclico de cinco, seis o siete miembros condensado que consiste en cero a tres heteroátomos, por ejemplo, para formar metilendioxi o etilendioxi. Un grupo opcionalmente sustituido puede no estar sustituido (por ejemplo, —CH2CH3), estar totalmente sustituido (por ejemplo, —CF2CF3), monosustituido (por ejemplo, —CH2CH2 F) o sustituido a un nivel en cualquier punto entre totalmente sustituido y monosustituido (por ejemplo, —CH2CF3). Cuando se indican sustituyentes sin calificación con respecto a la sustitución, se incluyen las formas sustituidas y no sustituidas. Cuando un sustituyente se califica como “sustituido”, se indica específicamente la forma sustituida. Además, pueden definirse diferentes conjuntos de sustituyentes opcionales para un resto concreto, si es necesario; en estos casos, la sustitución opcional será como se define, a menudo inmediatamente después de la expresión “opcionalmente sustituido con”.
El término R o el término R', cuando aparecen por sí solos y sin una denominación numérica, a menos que indique lo contrario, se refieren a un resto seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo y heterocicloalquilo, cualquiera de los cuales puede estar opcionalmente sustituido. Debe entenderse que estos grupos R y R' están opcionalmente sustituidos como se define en la presente. Tanto si un grupo R tiene una denominación numérica como si no la tiene, debe entenderse que cada grupo R, que incluye R, R' y Rn , siendo n = (1, 2, 3, ...n), cada sustituyente y cada término y expresión es independiente de cada uno de los otros, en términos de selección de un grupo. Si cualquier variable, sustituyente, término o expresión (por ejemplo, arilo, heterociclo, R, etc.) aparece más de una vez en una fórmula o estructura genérica, su definición cada vez que aparece es independiente de la definición en cualquier otra aparición. Los expertos en la técnica también reconocerán que ciertos grupos pueden estar unidos a una molécula precursora o pueden ocupar una posición en una cadena de elementos desde cualquier extremo según estén escritos. Así, solo como ejemplo, un grupo asimétrico, tal como —C(O)N(R)—, puede estar unido al resto precursor en el carbono o en el nitrógeno.
Existen centros asimétricos en los compuestos descritos en la presente. Estos centros se indican con los símbolos “R” o “S”, dependiendo de la configuración de sustituyentes alrededor del átomo de carbono quiral. Debe entenderse que la invención incluye todas las formas isoméricas estereoquímicas, incluyendo las formas diastereoméricas, enantioméricas y epiméricas, así como los d-isómeros y l-isómeros, y sus mezclas. Los estereoisómeros individuales de los compuestos pueden prepararse de modo sintético a partir de materiales de partida disponibles en el mercado que contienen centros quirales, o mediante la preparación de mezclas de productos enantioméricos, seguida de una separación, tal como una conversión en una mezcla de diastereómeros, seguido de una separación o recristalización, técnicas cromatográficas, separación directa de enantiómeros en columnas cromatográficas quirales, o cualquier otro método apropiado conocido en la técnica. Los compuestos de partida con una estereoquímica concreta están disponibles en el mercado o pueden prepararse y resolverse mediante técnicas conocidas en la técnica. Además, los compuestos descritos en la presente pueden existir como isómeros geométricos. La presente invención incluye todos los isómeros cis, trans, syn, anti, entgegen (E) y zusammen (Z), así como sus mezclas apropiadas. Además, los compuestos pueden existir como tautómeros; esta invención proporciona todos los isómeros tautoméricos. Además, los compuestos descritos en la presente pueden existir como formas no solvatadas, así como solvatadas, con disolventes farmacéuticamente aceptables, tales como agua, etanol y similares. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas no solvatadas.
El término “enlace” se refiere a un enlace covalente entre dos átomos, o dos restos cuando los átomos unidos por el enlace se consideran parte de una subestructura mayor. Un enlace puede ser sencillo, doble o triple, a menos que se indique lo contrario. Una línea discontinua entre dos átomos en un dibujo de una molécula indica que un enlace adicional puede estar presente o ausente en esa posición.
El término “profármaco” se refiere a un compuesto que se hace más activo in vivo. Ciertos compuestos descritos en la presente también pueden existir como profármacos, tal como se describe en Hydrolysis en Drug and Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry, and Enzymology (Testa, Bernard y Mayer, Joachim M. Wiley-VHCA, Zúrich, Suiza, 2003). Los profármacos de los compuestos descritos en la presente son formas estructuralmente modificadas del compuesto que pueden sufrir, con facilidad, cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proporcionar el compuesto. Además, los profármacos pueden convertirse en el compuesto mediante métodos químicos o bioquímicos en un entorno ex vivo. Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en un compuesto cuando se incluyen en un depósito de un parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuados. A menudo, los profármacos son útiles porque, en algunas situaciones, pueden ser más fáciles de administrar que el compuesto o fármaco precursor. Por ejemplo, pueden ser biodisponibles mediante administración oral, mientras que el fármaco precursor no lo es. El profármaco también puede tener mayor solubilidad en composiciones farmacéuticas frente al fármaco precursor. En la técnica se conoce una amplia diversidad de derivados de profármaco, tales como los que se basan en la ruptura hidrolítica o la activación oxidativa del profármaco. Un ejemplo, sin limitación, de un profármaco sería una compuesto que se administra como un éster (el “profármaco”), pero que después es hidrolizado metabólicamente para producir el ácido carboxílico, la entidad activa. Otros ejemplos incluyen derivados de peptidilo de un compuesto.
Los compuestos descritos en la presente pueden existir como sales terapéuticamente aceptables. La presente invención incluye los compuestos listados anteriormente en forma de sales, que incluyen las sales de adición de ácidos. Las sales adecuadas incluyen las formadas con ácidos orgánicos e inorgánicos. Estas sales de adición de ácidos normalmente serán farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las sales no farmacéuticamente aceptables pueden ser útiles para la preparación y la purificación del compuesto en cuestión. También pueden formarse sales de adición básicas y ser farmacéuticamente aceptables. Para un análisis más completo de la preparación y selección de sales, remítase a Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Stahl, P. Heinrich, Wiley-VCHA, Zúrich, Suiza, 2002).
La expresión “sal terapéuticamente aceptable”, tal como se emplea en la presente, representa sales o formas bipolares de los compuestos descritos en la presente que son solubles en agua o en aceite o dispersables, y terapéuticamente aceptables como se define en la presente. Las sales pueden prepararse durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos, o por separado haciendo reaccionar el compuesto apropiado en forma de la base libre con un ácido adecuado. Las sales de adición de ácidos representativas incluyen acetato, adipato, alginato, L-ascorbato, aspartato, benzoato, bencensulfonato (besilato), bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, digluconato, formiato, fumarato, gentisato, glutarato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato (isetionato), lactato, maleato, malonato, DL-mandelato, mesitilensulfonato, metansulfonato, naftilensulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, fosfonato, picrato, pivalato, propionato, piroglutamato, succinato, sulfonato, tartrato, L-tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluensulfonate (p-tosilato), y undecanoato. Además, los grupos básicos en los compuestos descritos en la presente pueden estar cuaternizados con cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y esterilo; y bromuros de bencilo y fenetilo. Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar sales de adición farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, y ácidos orgánicos, tales como ácido oxálico, maleico, succínico y cítrico. Las sales también pueden formarse mediante coordinación de los compuestos con un ion de metal alcalino o alcalinotérreo. Por tanto, la presente invención contempla las sales de sodio, potasio, magnesio y calcio de los compuestos descritos en la presente y similares.
Las sales de adición básicas pueden prepararse durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos haciendo reaccionar un grupo carboxi con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico o con amoniaco o una amina primaria, secundaria o terciaria orgánica. Los cationes de las sales terapéuticamente aceptables incluyen litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y aluminio, así como cationes de amina cuaternaria no tóxica, tal como amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, W,W-dimetilanilina, W-metilpiperidina, W-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibencilamina, W,W-dibencilfenetilamina, 1-efenamina, y W,W-dibenciletilendiamina. Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de bases incluyen etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina y piperazina.
Aunque es posible administrar los compuestos descritos en la presente como el producto químico bruto, también es posible presentarlos como una formulación farmacéutica. Por consiguiente, en la presente se proporcionan formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de ciertos compuestos descritos en la presente, o una o más de sus sales farmacéuticamente aceptables, ésteres, profármacos, amidas o solvatos, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables para ellos y opcionalmente uno o más ingredientes terapéuticos distintos. El vehículo o vehículos deben ser “aceptables” en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no ser perjudiciales para el receptor de la misma. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Puede usarse cualquiera de las técnicas, vehículos y excipientes muy conocidos como adecuados y tal como se entienden en la técnica, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences. Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden fabricarse de cualquier manera conocida en la técnica, por ejemplo, mediante procesos de mezclado, disolución, granulación, formación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o compresión convencionales.
La MGMG también puede administrarse en combinación con una o más entidades. En una realización, la entidad es una entidad terapéutica que incluye, pero no se limita a un agente antivírico o antirretrovírico, un esteroide u otro agente antiinflamatorio. En otra realización, la entidad es un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La dosis óptima, la frecuencia de administración y la duración del tratamiento con el agente en un sujeto puede variar de un sujeto a otro, dependiendo de la enfermedad que se va a tratar o del criterio de valoración clínico que se va a alcanzar (por ejemplo, la inhibición de la infiltración de macrófagos hacia un tejido, o la mitigación del dolor), de la condición del sujeto, de la edad, peso y respuesta al tratamiento del sujeto, y de la naturaleza de la entidad terapéutica. La determinación de la dosis óptima y la duración del tratamiento está dentro del alcance de los expertos en la técnica. La dosis óptima y la duración del tratamiento se determinarán del mejor modo controlando la respuesta del sujeto durante el desarrollo del tratamiento. En algunos casos, la administración de dosis más altas puede permitir una administración menos frecuente, y las dosis más bajas pueden requerir una administración más frecuente para lograr una mejora clínicamente significativa en la afección del sujeto. El agente o agentes de la invención pueden administrarse como una dosis individual o en múltiples dosis.
En general, una dosis terapéuticamente eficaz del agente según los presentes métodos será una o más dosis de aproximadamente 10 a aproximadamente 1100 mg/m2. Los regímenes de dosis más bajas incluyen dosis de 10-200, 10-100, 10-50 y 20-200 mg/m2. Los regímenes de dosis más altas incluyen 200-400, 250-500, 400-600, 500-800 600-1000 y 800-1100 mg/m2. En una realización, los regímenes de dosis varían de 200-400 mg/m2. En otra realización, los regímenes de dosis varían de 250-500 mg/m2. En otra realización, los regímenes de dosis varían de 600-1000 mg/m2. En algunas realizaciones, el agente se administra a diario, una vez semanal, una vez en semanas alternas o una vez mensual. En una realización, un régimen de dosis que varía de 200-400 mg/m2 se administra una vez semanal. En otra realización, un régimen de dosis que varía de 250-500 mg/m2 se administra una vez en semanas alternas.
Las dosis pueden ser constantes a lo largo del periodo de tratamiento entero, o pueden aumentar o disminuir durante el desarrollo del tratamiento. En una realización, el agente se administra una vez semanal y se inicia con la administración de 200 mg/m2, y aumenta hasta 300 mg/m2 y 400 mg/m2 en la segunda y tercera semana, respectivamente. En otra realización, el agente se administra una vez en semanas alternas y se mantiene constante durante la duración completa del tratamiento con la administración de 250 mg/m2. Las dosis del agente pueden administrarse durante al menos una semana, al menos dos semanas, al menos tres semanas, al menos cuatro semanas, al menos 6 semanas, o incluso al menos 8 semanas. El ajuste de la dosis del agente dentro de estos intervalos para un sujeto concreto está dentro de los conocimientos de un médico normal.
El agente puede administrarse a través de cualquier vía convencional que se usa normalmente para administrar un medicamento que incluye, pero no se limita a la vía oral, parenteral (que incluye subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarticular e intramedular), intraperitoneal, transmucósica (que incluye nasal), transdérmica, rectal y tópica (que incluye dérmica, bucal, sublingual e intraocular). La administración intravenosa puede realizarse mediante una inyección en embolada o mediante infusión; la infusión puede realizarse a lo largo de un periodo de menos de un minuto a varias horas a continuamente. En ciertas realizaciones, el desarrollo del tratamiento implicará la administración mediante una combinación de vías.
El agente puede administrarse como una composición farmacéutica en una diversidad de formas que incluyen, pero no se limitan a líquidos, polvos, suspensiones, comprimidos, píldoras, cápsulas, pulverizados y aerosoles. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir diversos aditivos farmacéuticamente aceptables que incluyen, pero no se limitan a vehículos, excipientes, ligantes, estabilizantes, agentes antimicrobianos, antioxidantes, diluyentes y/o soportes. Se describen ejemplos de excipientes y vehículos adecuados, por ejemplo, en “Remington's Pharmaceutical Sciences”, Mack Pub. Co., Nueva Jersey (1991). En algunas realizaciones, el agente puede administrarse a través de una infusión IV en una disolución de azúcar acuosa. El agente también puede asociarse con otra sustancia que facilite el transporte del agente. Por ejemplo, el agente puede estar asociado dentro de liposomas. Los liposomas, a su vez, pueden conjugarse con la sustancia o sustancias de transporte dirigido, tales como receptores IgGFc.
Las formulaciones de los compuestos descritos en la presente adecuadas para la administración oral pueden presentarse como unidades discretas, tales como cápsulas, sellos o comprimidos, que contienen cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o gránulos; como una disolución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también puede presentarse como una píldora grande, electuario o pasta.
Las preparaciones farmacéuticas que pueden usarse por vía oral incluyen comprimidos, cápsulas duras fabricadas de gelatina, así como cápsulas blandas selladas fabricadas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Los comprimidos pueden fabricarse mediante compresión o moldeado, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos prensados pueden prepararse comprimiendo, en una máquina adecuada, el ingrediente activo en forma fluida, tal como un polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con ligantes, diluyentes inertes o agentes lubricantes, tensioactivos o dispersantes. Los comprimidos moldeados pueden fabricarse moldeando, en una máquina adecuada, una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos pueden estar opcionalmente revestidos o llevar marcas y pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo contenido en su interior. Todas las formulaciones para la administración oral deben estar en dosificaciones adecuadas para dicha administración. Las cápsulas duras pueden contener los ingredientes activos mezclados con una carga, tal como lactosa, ligantes, tales como almidones y/o lubricantes, tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, pueden añadirse estabilizantes. Los núcleos de las grageas se proporcionan con revestimientos adecuados. Para este fin, pueden usarse disoluciones de azúcares concentradas, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, disoluciones de lacas, y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Pueden añadirse tintes o pigmentos a los comprimidos o los revestimientos de grageas para su identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis del compuesto activo.
Los compuestos pueden formularse para la administración parenteral mediante inyección, por ejemplo, mediante una inyección en embolada o una infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes de múltiples dosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar la forma de suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes suspensores, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis única o de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y pueden conservarse en forma de polvo o en una condición liofilizada que solo requiera la adición de un vehículo líquido estéril, por ejemplo, disolución salina o agua apirógena estéril, inmediatamente antes del uso. Pueden prepararse disoluciones y suspensiones para inyección improvisadas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles del tipo que se describió previamente.
Las formulaciones para la administración parenteral incluyen disoluciones para inyección estériles acuosas y no acuosas (oleosas) de los compuestos activos que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostatos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas, que pueden incluir agentes suspensores y agentes espesantes. Los vehículos o disolventes lipófilos adecuados incluyen aceites grasos, tales como aceite de sésamo, o ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos, o liposomas. Las suspensiones para inyección acuosas pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión, tales como carboximetilcelulosa sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes adecuados o agentes que aumentan la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de disoluciones altamente concentradas.
Además de las formulaciones descritas previamente, los compuestos también pueden formularse como una formulación depot (depósito de liberación lenta). Estas formulaciones de acción a largo plazo pueden administrarse mediante implantación (por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular) o mediante inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco soluble.
Para la administración bucal o sublingual, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos, pastillas para chupar, pastillas o geles formulados de la manera convencional. Estas composiciones pueden comprender el ingrediente activo en una base aromatizada, tal como sacarosa y goma arábiga o tragacanto.
Los compuestos también pueden formularse en composiciones rectales, tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases para supositorios convencionales, tales como manteca de cacao, polietilenglicol u otros glicéridos.
Ciertos compuestos descritos en la presente pueden administrarse por vía tópica, es decir, mediante una administración no sistémica. Esta incluye la aplicación de un compuesto descrito en la presente externamente a la epidermis o la cavidad bucal y la instilación de dicho compuesto al oído, ojo y nariz, de modo que el compuesto no entra significativamente en la corriente sanguínea. Por contraste, la administración sistémica se refiere a la administración oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuada para la penetración a través de la piel hasta el sitio de la inflamación, tales como geles, linimentos, lociones, cremas, ungüentos o pastas, y gotas adecuadas para la administración al ojo, oído o nariz. El ingrediente activo para la administración tópica puede comprender, por ejemplo, del 0,001 % al 10 % en p/p (en peso) de la formulación. En ciertas realizaciones, el ingrediente activo puede comprender un máximo del 10 % en p/p. En otras realizaciones, puede comprender menos del 5 % en p/p. En ciertas realizaciones, el ingrediente activo puede comprender del 2 % en p/p al 5 % en p/p. En otras realizaciones, puede comprender del 0,1 % al 1 % en p/p de la formulación.
Para la administración mediante inhalación, los compuestos pueden administrarse de modo conveniente desde un insuflador, envases presurizados con nebulizador u otro medio conveniente para administrar un pulverizado en aerosol. Los envases presurizados pueden comprender un propelente adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para que administre una cantidad dosimétrica. Como alternativa, para la administración mediante inhalación o insuflación, los compuestos según la invención pueden tomar la forma de una composición de polvo seco, por ejemplo, una mezcla de polvos del compuesto y una base de polvos adecuada, tal como lactosa o almidón. La composición de polvos puede presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en cápsulas, cartuchos, gelatina o envases de blísteres, desde los cuales los polvos pueden administrarse con la ayuda de un inhalador o insuflador.
Los ejemplos de formulaciones de dosificación unitaria son las que contienen una dosis eficaz, tal como se indica a continuación, o una fracción apropiada de esta, del ingrediente activo.
Las cargas que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todas las que se conocen y se usan en la actualidad, así como las que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos de cargas o diluyentes incluyen, sin limitación, lactosa, manitol, xilitol, dextrosa, sacarosa, sorbitol, azúcar comprimible, celulosa microcristalina ("microcrystalline cellulose", MCC), celulosa en polvo, almidón de maíz, almidón pregelatinizado, dextratos, dextrano, dextrina, dextrosa, maltodextrina, carbonato de calcio, fosfato de calcio dibásico, fosfato de calcio tribásico, sulfato de calcio, carbonato de magnesio, óxido de magnesio, poloxámeros, tales como poli(óxido de etileno), e hidroxipropilmetilcelulosa. Las cargas pueden contener moléculas de disolvente complejadas, tal como es el caso cuando la lactosa usada es lactosa monohidrato. Las cargas también pueden estar patentadas, tal como el caso de la carga PROSOLV® (disponible en JRS Pharma). PROSOLV® es una celulosa microcristalina silicificada patentada, opcionalmente de alta densidad, compuesta de 98 % de celulosa microcristalina y 2 % de dióxido de silicio coloidal. La silicificación de la celulosa microcristalina se logra mediante un proceso patentado, que produce una asociación íntima entre el dióxido de silicio coloidal y la celulosa microcristalina. ProSolv se ofrece en diferentes calidades basadas en el tamaño de partícula, y es blanca o casi blanca, un polvo fino o granular, es prácticamente insoluble en agua, acetona, etanol, tolueno y ácido diluidos y en una disolución 50 g/l de hidróxido de sodio.
Los disgregantes que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos disgregantes incluyen, sin limitación, almidón glicolato de sodio, carboximetilcelulosa sodio, carboximetilcelulosa calcio, croscarmelosa sodio, povidona, crospovidona (polivinilpolipirrolidona), metilcelulosa, celulosa microcristalina, celulosa en polvo, hidroxipropilcelulosa con bajo nivel de sustitución, almidón, almidón pregelatinizado y alginato de sodio.
Los lubricantes que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos de lubricantes incluyen, sin limitación, estearato de calcio, monoestearato de glicerilo, palmitoestearato de glicerilo, aceite vegetal hidrogenado, aceite mineral ligero, estearato de magnesio, aceite mineral, polietilenglicol, benzoato de sodio, laurilsulfato de sodio, estearilfumarato de sodio, ácido esteárico, talco y estearato de cinc.
Los deslizantes que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos de deslizantes incluyen, sin limitación, dióxido de silicio (SiO2), talco, almidón de maíz y poloxámeros. Los poloxámeros (o LUTROL@, disponible en BASF Corporation) son copolímeros en bloque A-B-A, en los que el segmento A es un homopolímero de polietilenglicol hidrófilo y el segmento B es un homopolímero de polipropilenglicol hidrófobo.
Los ligantes para comprimidos que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos de ligantes para comprimidos incluyen, sin limitación, goma arábiga, ácido algínico, carbómero, carboximetilcelulosa sodio, dextrina, etilcelulosa, gelatina, goma de guar, aceite vegetal hidrogenado, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, copolividona, metilcelulosa, glucosa líquida, maltodextrina, polimetacrilatos, povidona, almidón pregelatinizado, alginato de sodio, almidón, sacarosa, tragacanto y zeína.
Los ejemplos de tensioactivos incluyen, sin limitación, sulfonatos de alquilo y de ácido graso; tensioactivos del mercado, tales como cloruro de benzetanio (HYAMINE® 1622, disponible en Lonza, Inc., Fairlawn, N.J.); DOCUsAt E SODIUM® (disponible en Mallinckrodt Spec. Chem., St. Louis, Mo.); ésteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitano (TWEEN®, disponibles en ICI Americas Inc., Wilmington, Del.; LIPOSORB® P-20, disponible en Lipochem Inc., Patterson N.J.; CAPMUL® POE-0, disponible en Abitec Corp., Janesville, Wis.), monooleato de polioxietilen(20)sorbitano (TWEEN 80®, disponible en ICI Americas Inc., Wilmington, Del.); y tensioactivos naturales, tales como ácido taurocólico sodio, 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina, lecitina, y otros fosfolípidos y mono- y diglicéridos. Estos materiales pueden emplearse de forma ventajosa para aumentar la tasa de disolución facilitando la humectación, aumentando con ello la concentración máxima disuelta, y también inhibiendo la cristalización o precipitación del fármaco mediante su interacción con el fármaco disuelto a través de mecanismos, tales como la complejación, la formación de complejos de inclusión, la formación de micelas o la adsorción sobre la superficie del fármaco sólido.
Los agentes complejantes de fármacos y los solubilizantes que se van a usar en las composiciones de la presente incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro. Los ejemplos de agentes complejantes de fármacos o solubilizantes incluyen, sin limitación, los polietilenglicoles, cafeína, xanteno, ácido gentísico y ciclodextrinas.
La adición de modificaciones del pH, tales como ácidos, bases o tampones, también puede ser beneficiosa, retrasando o potenciando la tasa de disolución de la composición o, como alternativa, ayudando a mejorar la estabilidad química de la composición. Los modificadores del pH adecuados que se van a usar en la composición incluyen todos los que se conocen y se usan en la actualidad, así como los que se desarrollarán en el futuro.
Debe entenderse que, además de los ingredientes mencionados en concreto anteriormente, las formulaciones proporcionadas en la presente pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica con respecto al tipo de formulación en cuestión. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Puede usarse cualquiera de las técnicas, vehículos y excipientes muy conocidos como adecuados y tal como se entienden en la técnica, por ejemplo, Remington, supra. Las composiciones farmacéuticas pueden fabricarse de cualquier manera conocida en sí misma, por ejemplo, mediante procesos de mezclado, disolución, granulación, formación de grageas, levigación, emulsión, encapsulación, atrapamiento o compresión convencionales.
Los compuestos pueden administrarse por vía oral o mediante inyección a una dosis de 0,1 a 500 mg/kg diarios. El intervalo de dosis para seres humanos adultos es, en general, de 5 mg a 2 g/día. Los comprimidos u otras formas de presentación proporcionadas en unidades discretas pueden contener, de modo conveniente, una cantidad de uno o más compuestos que es eficaz a dicha dosificación o como un múltiplo de la misma, por ejemplo, unidades que contienen de 5 mg a 500 mg, de modo habitual de aproximadamente 10 mg a 200 mg.
La cantidad precisa de compuesto administrada a un sujeto será responsabilidad del médico encargado. El nivel de dosis específico para cualquier sujeto concreto dependerá de una diversidad de factores, que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el momento de la administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, el trastorno concreto que se está tratando, y la gravedad de la indicación o la afección que se está tratando. Además, la vía de administración puede variar dependiendo de la afección y de su gravedad. La frecuencia de dosificación también puede seleccionarse o ajustarse basándose en factores que incluyen los anteriores, así como la formulación del compuesto administrado. La dosificación puede producirse, por ejemplo: una vez diaria, dos veces diarias, tres o cuatro veces diarias, en días alternos, semanal, bisemanal o mensual; o en ciclos que comprende un periodo de dosificación sostenido, seguido de un periodo sin dosificación; o según sea necesario.
En ciertos casos, puede ser apropiado administrar al menos uno de los compuestos descritos en la presente (o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, ésteres o profármacos) en combinación con otro agente terapéutico. Solo como ejemplo, si uno de los efectos secundarios que sufre un sujeto tras recibir uno de los compuestos de la presente es la hipertensión, entonces puede resultar apropiado administrar un agente antihipertensor en combinación con el agente terapéutico inicial. O, solo como ejemplo, la eficacia terapéutica de uno de los compuestos descritos en la presente puede potenciarse mediante la administración de un adyuvante (es decir, en sí mismo, el adyuvante puedo tener solo un beneficio terapéutico mínimo, pero en combinación con otro agente terapéutico, el beneficio terapéutico global para el sujeto se potencia). O, solo como ejemplo, el beneficio experimentado por un sujeto puede aumentar administrando uno de los compuestos descritos en la presente con otro agente terapéutico (que también incluye un régimen terapéutico) que también tenga un beneficio terapéutico. Solo como ejemplo, en el tratamiento de una neuropatía que implica la administración de uno de los compuestos descritos en la presente, puede producirse un mayor beneficio terapéutico proporcionando también al sujeto otro agente terapéutico para la neuropatía. En cualquier caso, independientemente de la enfermedad, el trastorno o la afección que se está tratando, el beneficio global experimentado por el sujeto puede ser simplemente aditivo de los dos agentes terapéuticos o el sujeto puede experimentar un beneficio sinérgico.
En ciertas realizaciones, el otro agente terapéutico es un agente para el tratamiento de la esclerosis múltiple, tal como interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo (tecfidera) y teriflunomida, así como otros interferones y fármacos inmunomoduladores, inmunosupresores o antiinflamatorios.
En otras realizaciones, el otro agente terapéutico es un inhibidor de TNF. El inhibidor de TNF puede ser: un anticuerpo monoclonal, tal como, por ejemplo, infliximab (Remicade), adalimumab (Humira), certolizumab pegol (Cimzia), o golimumab (Simponi); una proteína de fusión de receptor circulante, tal como etanercept (Enbrel); o una molécula pequeña, tal como pentoxifilina o bupropiona (Zyban, Wellbutrin).
En otras realizaciones, el otro agente terapéutico es un fármaco antirreumático modificador de enfermedad ("disease-modifying anti-rheumatic drug", DMARD). Los ejemplos de DMARD incluyen azatioprina, ciclosporina (ciclosporina A), D-penicilamina, sales de oro, hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato (MTX), minociclina, sulfasalazina (SSZ) y ciclofosfamida.
En otras realizaciones, el otro agente terapéutico es metotrexato.
Otros agentes para ser usados en combinación incluyen bloqueantes de la interleuquina 1 (IL-1), tales como anakinra (Kineret), bloqueantes de la coestimulación de células T, tales como abatacept (Orencia), bloqueantes de la interleuquina 6 (IL-6), tales como tocilizumab (un anticuerpo antirreceptor de IL-6; RoActemra, Actemra), anticuerpos monoclonales contra células B, tales como rituximab (Rituxan), y otros productos biológicos (por ejemplo, Ocrelizumab, Ofatumumab, Golimumab, y Certolizumab pegol).
En otras realizaciones, el otro agente terapéutico es un glucocorticoide o un fármaco antiinflamatorio no esteroideo ("non-steroidal anti-inflammatory drug", NSAID). Los NSAID incluyen derivados del ácido propiónico, tales como ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno, cetoprofeno, flurbiprofeno y oxaprozina; derivados del ácido acético, tales como indometacina, sulindaco, etodolaco y diclofenaco; derivados del ácido enólico (oxicamo), tales como piroxicamo y meloxicamo; derivados del ácido fenámico, tales como ácido mefenámico y ácido meclofenámico; inhibidores de COX-2 selectivos (coxibs), tales como celecoxib (Celebrex), rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, lumiracoxib y etoricoxib.
En cualquier caso, los múltiples agentes terapéuticos (al menos uno de los cuales es un compuesto descrito en la presente) pueden administrarse en cualquier orden o incluso simultáneamente. Si se administran simultáneamente, los múltiples agentes terapéuticos pueden proporcionarse en una forma individual unificada o en múltiples formas (solo como ejemplo, como una única píldora o como dos píldoras distintas). Uno de los agentes terapéuticos puede administrarse en múltiples dosis, o ambos pueden administrarse como múltiples dosis. Si no se administran simultáneamente, el tiempo entre las dosis de los múltiples agentes terapéuticos puede ser de cualquier duración, que varía de unos pocos minutos a cuatro semanas.
Así, en otro aspecto, ciertas realizaciones proporcionan métodos para tratar trastornos en un sujeto humano o animal que necesita dicho tratamiento, que comprenden administrar a dicho sujeto una cantidad de un compuesto descrito en la presente, eficaz para reducir o prevenir dicho trastorno en el sujeto, opcionalmente en combinación con al menos un agente adicional para el tratamiento de dicho trastorno que sea conocido en la técnica. Las enfermedades específicas que van a ser tratadas mediante los compuestos, las composiciones y los métodos descritos en la presente, individualmente o en combinación, incluyen, sin limitación: dolor; neuropatía; inflamación y trastornos relacionados; artritis; trastornos inflamatorios metabólicos; trastornos respiratorios; trastornos autoinmunitarios; trastornos neurológicos; y trastornos proliferativos, incluyendo cáncer y enfermedades no cancerosas.
Los compuestos descritos en la presente también se pueden usar en el tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple (EM). Los compuestos descritos en la presente pueden regular las células TH-17 (células T auxiliares que producen interleuquina 17) o los niveles de IL-17.
Los compuestos descritos en la presente también se pueden usar en el tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple (EM).
En los siguientes ejemplos se proporcionan ejemplos de realizaciones de los presentes métodos. Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar los métodos de la invención y para ayudar a los expertos en la técnica a utilizarlos, y no deben considerarse limitantes del alcance de la invención.
Ensayos de actividad oral de MGBG
Se usan las siguientes abreviaturas convencionales para representar los parámetros farmacocinéticos asociados. AUC: Área bajo la curva hasta la última concentración mensurable más la AUC extrapolada desde la última concentración mensurable (Culta tult) hasta el infinito: AUCINFobs = AUC0-tult+Cult/lambda z (en la que Az es la constante de la velocidad de primer orden asociada con la porción terminal (logarítmica lineal) de la curva)
AUC0 -12 : Área bajo la curva entre el momento de la dosis y el momento de 12 h
AUC0-24: Área bajo la curva entre el momento de la dosis y el momento de 24 h
F: Fracción disponible (biodisponibilidad): F = [AUCoral]-dosisiv/[AUCiv]-dosisoral
Clobs: Depuración observada
Vssobs: Volumen de distribución en estado estacionario
Vd: Volumen de distribución (a menudo usado con oral)
Cl/Fobs: Depuración del cuerpo total aparente como una función de la biodisponibilidad
t 1/2 : Semivida terminal (HLaz)
Cmax: Concentración máxima observada
Tmax: Momento en que aparece la Cmax
Dosis única en macacos Rhesus
Se dejaron en ayunas durante la noche dos grupos de tres monos Rhesus macho antes de administrar el artículo de ensayo, MGBG, como una única dosis intravenosa en embolada de 1 mg/kg (grupo 1) o como una única dosis con sonda gástrica de 10 mg/kg (grupo 2). Los análisis de formulación de la dosis verificaron que las disoluciones de dosis administradas se encontraban dentro de 14 % de las concentraciones deseadas de 1 y 10 mg/kg para los grupos 1 y 2, respectivamente.
Se recogieron muestras de sangre en tubos que contenían heparina litio desde la vena/arteria femoral (aproximadamente 1,0 mL) para la medición de la concentración de MGBG en plasma de todos los animales dosificados por vía intravenosa antes de la dosificación y aproximadamente T = 0,083 (5 min), 0,25 (15 min), 0,5 (30 min), 1, 2, 4, 8 y 24 horas después de la dosificación. Se recogieron muestras de sangre para la medición de la concentración de MGBG en plasma de todos los animales dosificados por vía oral antes de la dosificación y aproximadamente T = 1, 2, 4, 8, 12, 24 y 36 horas después de la dosificación. También se les privó de alimento durante las primeras cuatro horas de la recolección de muestras de sangre.
Las muestras se centrifugaron en condiciones refrigeradas después de terminar la recolección de las muestras en cada intervalo. El plasma resultante se separó y se conservó congelado a aproximadamente-70 °C hasta el análisis. El análisis de PK se realizó sobre los perfiles de concentración en plasma-tiempo individuales para MGBG usando la estrategia no compartimentada de WinNonlin (regla trapezoidal lineal para los cálculos de AUC). Se usaron unos tiempos de toma de muestra y unos valores de dosis nominales para los cálculos. Todas las mediciones de la concentración en plasma de MGBG indicadas como BQL (<2,51 ng/mL) se ajustaron a cero para el objetivo del análisis. Después de la administración IV y PO de MGBG, se calcularon los parámetros de disposición de PK en plasma usando el criterio de selección por defecto de WinNonlin para la selección de lambda Z.
Se observaron evidencias de exposición a MGBG en plasma sistémica en todos los momentos en que se recogió plasma después de la administración IV y PO de MGBG. Se advirtió hemolisis en un animal en el grupo 1 en un solo momento, que puede haber ejercido un impacto negativo en el análisis de la concentración en plasma de MGBG para este animal. Por consiguiente, se usó un análisis de dos compartimentos dependiente de modelo para calcular la biodisponibilidad.
Dosis única en perros
Se dejaron en ayunas durante la noche dos grupos de tres perros de raza Beagle macho que pesaban 9,0-10,7 kg y con una edad de 8-30 meses antes de administrar el artículo de ensayo, MGBG, como una única dosis intravenosa en embolada de 1 mg/kg (grupo 1) o como una única dosis con sonda gástrica de 10 mg/kg (grupo 2). Los análisis de formulación de la dosis verificaron que las disoluciones de dosis administradas se encontraban dentro de 17 % de las concentraciones deseadas de 1 y 10 mg/kg para los grupos 1 y 2, respectivamente.
Se recogieron muestras de sangre (aproximadamente 2,0 mL) para la medición de la concentración de MGBG en plasma de todos los animales dosificados por vía intravenosa antes de la dosificación y aproximadamente T = 0,083 (5 min), 0,25 (15 min), 0,5 (30 min), 1, 2, 4, 8 y 24 horas después de la dosificación. Se usó un procedimiento similar para los animales dosificados por vía oral, excepto que la recolección se realizó en T = 1, 2, 4, 8, 12, 24 y 36 horas después de la dosificación. Las muestras se centrifugaron en condiciones refrigeradas después de terminar la recolección de las muestras en cada intervalo. El plasma resultante se separó y se conservó congelado a aproximadamente -70 °C hasta el análisis.
El análisis se realizó mediante LC/MS/MS, y se calcularon los parámetros de disposición de PK en plasma usando las últimas cinco concentraciones en plasma para la administración IV (1-24 h) y PO (4-36 h) para la selección de lambda Z. Debido a la variabilidad entre animales y a los datos de fase terminal limitados, estos resultados deben interpretarse con precaución.
No se descubrieron anomalías clínicas después de la administración IV u oral. Se observó exposición sistémica en todos los momentos.
Dosis única en ratas
Dieciocho ratas Sprague Dawley macho (Charles River) que pesaban 217-263 g y con una edad de 8-9 semanas fueron administrados con el artículo de ensayo, MGBG, como una única dosis intravenosa en embolada de 1 mg/kg (grupo 1) o como una única dosis con sonda gástrica de 10 mg/kg. Una cohorte de tres animales se sacrificó mediante anestesia por inhalación de CO2 después de la recolección final de sangre en cada uno de T = 2, 4, 12, 24, 36 y 48 horas después de la dosis. Los análisis de formulación de la dosis verificaron que las disoluciones de dosis administradas se encontraban dentro de 17 % de la concentración deseada de 10 mg/kg.
Se realizaron análisis mediante LC/MS/MS. Se realizaron análisis farmacocinéticos sobre los datos de concentración en plasma promedio de MGBG frente al tiempo usando la estrategia no compartimentada (regla trapezoidal lineal para los cálculos de AUC). Se usó la herramienta de toma de muestras escasas de WinNonlin para los cálculos de PK. Todas las muestras indicadas como BLQ ("Below the Limit of Quantitation", por debajo del límite de cuantificación, en plasma 2,50 ng/mL) se cambiaron a 0,00 ng/mL para el análisis. Los análisis de formulación de la dosis verificaron que las disoluciones de dosis administradas se encontraban dentro de 15 % de la concentración de dosis deseada de 10 mg/kg.
No se advirtieron descubrimientos clínicos anómalos después de la dosificación. Una única administración PO de 10 mg/kg de MGBG produjo unos niveles de MGBG mensurables en plasma hasta el momento de 12 horas; más allá de este punto, ciertas muestras empezaron a medirse como BLQ.
Además, en ratas dosificadas como se indicó anteriormente con una única administración oral de MGBG a 10 mg/kg, inmediatamente después de la recolección de las muestras de plasma para cada cohorte (es decir, 2, 4, 12, 24, 36 y 48 horas después de la dosificación), tres ratas fueron sacrificadas, y se recolectaron los tejidos de bazo e hígado y se congelaron en matraces. Tal como se muestra en la figura 11, una única administración oral de MGBG a 10 mg/kg produjo una mayor exposición global (según se evalúa mediante Cmax y AUCtodo) de MGBG en tejido de hígado (120 y 160 veces mayor, respectivamente) y bazo (4,0 y 9,3 mayor, respectivamente) comparado con el plasma. Esto resulta coherente con un mecanismo de captación selectiva para la MGBG. Aunque no se pretenda limitación alguna por la teoría, otros inhibidores de SAMDC que son captados selectivamente por células pueden ser útiles, como la MGBG, en los métodos y las composiciones descritos en la presente.
Dosis única en ratones
Veinticuatro ratones DBA/1 macho que pesaban 19,5-24,7 g y con una edad de 7-9 semanas fueron administrados con el artículo de ensayo, MGBG, como una única dosis intravenosa en embolada en la vena lateral de la cola de 1 mg/kg (grupo 1, n = 12) o como una única dosis con sonda gástrica oral de 10 mg/kg (grupo 2, n = 12). Cada grupo de dosis consistió en 4 cohortes de 3 animales cada una. Se tomaron muestras del grupo 1 a los 5, 15 y 30 minutos después de la dosificación, y 1, 2, 4, 8 y 24 horas después de la dosificación. Se tomaron muestras del grupo 2 a las 1, 2, 4, 8, 12, 24 y 36 horas después de la dosificación. Comenzando con el primer momento, se tomaron muestras de una nueva cohorte en cada momento sucesivo hasta el momento de 1 hora (grupo 1) o 12 horas (grupo 2). El orden de toma de muestras entre las cohortes se repitió para los momentos posteriores (algunas cohortes pueden ser sangradas solo una vez). El segundo sangrado para cada cohorte fue terminal. Los animales se sacrificaron mediante anestesia por inhalación de CO2 después de la recolección final de sangre.
Las muestras se centrifugaron en condiciones refrigeradas después de terminar la recolección de las muestras en cada intervalo. El plasma resultante se separó y se conservó congelado a aproximadamente -70 °C hasta el análisis. Se realizaron análisis mediante LC/MS/MS. Se realizaron análisis farmacocinéticos sobre los datos de concentración en plasma promedio de MGBG frente al tiempo usando la estrategia no compartimentada (regla trapezoidal lineal para los cálculos de AUC). Se usó la herramienta de toma de muestras escasas de WinNonlin para los cálculos de PK. Los análisis de formulación de la dosis revelaron que las formulaciones IV y PO se encontraban dentro de 15 % de sus concentraciones deseadas.
No se advirtieron descubrimientos clínicos anómalos después de la dosificación. Se observaron evidencias de exposición a MGBG en plasma sistémica en todos los momentos en que se recogió plasma después de la administración IV y PO de MGBG.
Los resultados de los anteriores ensayos se muestran a continuación en las tablas 2 y 3. Los valores indicados son promedios a través de los grupos de tratamiento sin desviación estándar.
Tabla 2
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Tabla 3
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En la anterior tabla 2, el asterisco doble indica que el AUC de la rata indicado es AUCtodo, calculado desde el momento cero hasta el momento de la última medición de la concentración en plasma. Cada uno de estos valores comporta la salvedad de que las mediciones terminales se someten a diferentes métodos de extrapolación.
Estudio de farmacocinética y tolerabilidad de múltiples dosis en ratas
El objetivo de este estudio fue determinar las propiedades farmacocinéticas (PK) y tolerabilidad de MGBG en ratas. Además, se evaluó la recuperación de cualquier efecto tóxico después de un periodo sin dosificación de siete días. La tolerabilidad se demostró en los animales tratados con el artículo de ensayo mediante los cambios en el peso corporal similares al grupo control y la falta de observaciones clínicas adversas.
Tres ratas Sprague Dawley macho por grupo (CD® IGS, Charles River) con una edad 7-9 semanas y que pesaban 222,7-252,0 g fueron administradas mediante sonda oral (PO), dos veces diarias, a 10, 20 o 30 mg/kg/dosis (20, 40 o 60 mg/kg/día) durante siete días consecutivos. A esto le siguió un periodo de lavado de siete días. Se recogió una colección de aproximadamente 200 qL de sangre entera de la vena de la cola de todos los animales en los grupos 5, 6 y 7 en los momentos seis (día 1), siete (día 7) o uno (días 9 a 15), respectivamente. Se recogieron muestras de sangre entera en un microrrecipiente de heparina litio y se procesaron para producir plasma mediante centrifugación. El plasma se congeló a -70 °C. Se realizaron análisis farmacocinéticos sobe los datos de concentración en plasma frente al tiempo de los animales individuales para MGBG usando WinNonlin (regla trapezoidal lineal para los cálculos de AUC). Se usaron unos tiempos de toma de muestra y unos valores de dosis nominales para los cálculos. Para el día 7 del estudio, se usaron los valores indicados para las concentraciones de MGBG en el momento cero en los cálculos del AUC. No se indicaron los parámetros de disposición del día 1 del estudio debido a datos de fase terminal insuficientes para caracterizar de modo adecuado estos parámetros. Después de la administración PO de MGBG en el día 7 del estudio, se calcularon los parámetros de disposición de PK en las concentraciones en plasma obtenidas después de la segunda dosis administrada (T = 12-192 h) usando el criterio de selección por defecto de WinNonlin para la selección de lambda Z, la constante de tasa de eliminación, en la que se basan la semivida, AUCINFobs, y Cl/Fobs; se tuvo en cuenta la variabilidad entre animales.
Las muestras de plasma recogidas de los animales tratados con el artículo de ensayo en el día 1 y el día 7 se sometieron a un bioanálisis y se confirmó la exposición sistémica al artículo de ensayo en todos los momentos. A través del intervalo de dosis evaluado, los valores de Tmax fueron dependientes de la dosis y variaron de 3,33 a 14,0 h, e indicaron que la absorción se retrasó ligeramente en el día 7 del estudio, en comparación con el día 1 del estudio. La exposición sistémica (evaluada mediante Cmax y AUCtodo) aumentó según crece la dosis, y el aumento en ambos parámetros fue ligeramente menor que proporcional a la dosis en cada intervalo de evaluación. Las dosificaciones PO repetidas dos veces diarias de MGBG se asociaron con aumentos en 3,77, 4,03 y 3,68 veces en los valores promedio de AUCtodos comparado con el día 1 del estudio para los grupos de dosis de 20, 40 y 60 mg/kg/día, respectivamente. En el día 7 del estudio, se observaron pruebas de disposiciones dependientes de la dosis para Cl/Fobs y la semivida de eliminación como valores de parámetros promedio para el aumento y la disminución de Cl/Fobs y la semivida de eliminación, respectivamente, con niveles crecientes de dosis.
Se advirtieron diferencias entre el grupo control y el grupo de dosis de 60 mg/kg/día para algunos parámetros hematológicos (menor recuento y porcentaje de reticulocitos) y algunos parámetros químicos del suero (por ejemplo, cambios en la osmolalidad y los electrolitos coherentes con una ligera deshidratación). Sin embargo, estos cambios no se consideraron adversos, puesto que no coinciden con otros signos de toxicidad franca, y se demostró que los cambios de la química del suero eran reversibles. No se observaron lesiones evidentes ni microscópicas en los animales tratados con el artículo de ensayo en el sacrificio terminal, y no se observaron lesiones evidentes en los animales tratados con el artículo de ensayo en el sacrificio de recuperación.
Basándose en los descubrimientos de este estudio exploratorio, el nivel de efectos adversos no observables ("no observable adverse effect level", NOAEL) para la administración de MGBG mediante sonda oral dos veces diarias durante siete días consecutivos a ratas Sprague Dawley macho es de 30 mg/kg/dosis (60 mg/kg/día).
Tabla 4
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Tabla 5
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Cambio de escala alométríco y eficacia prevista en seres humanos
Se empleó un cambio de escala alométrico de múltiples especies sobre los parámetros farmacocinéticos descritos en las tablas 2 y 3 para calcular los parámetros farmacocinéticos previstos en seres humanos según métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Ings R. M., “Interspecies scaling and comparisons in drug development and toxicokinetics”, Xenobiotica, noviembre de 1990, 20(11):1201 -31; y Khor, S. P. et al., “Dihydropyrimidine dehydrogenase inactivation and 5-fluorouracil pharmacokinetics: allometric scaling of animal data, pharmacokinetics and toxicodynamics of 5-fluorouracil in humans”, Cancer Chemother. Pharmacol. (1997), 39(3):833-38. Los valores esperados se indican a continuación en las tablas 6 y 7.
Tabla 6
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Tabla 7
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En ambos modelos de hiperalgesia y de edema de pata inducido por carragenano murino, la máxima dosis eficaz de MGBG es 30 mg/kg PO BID (que suman 60 mg/kg/día). Basándose en este paradigma de dosificación en ratones, pueden usarse al menos dos métodos para calcular la dosificación equivalente en seres humanos.
El primer método se basa en la normalización de la superficie específica corporal ("body surface area", BSA) (descrito en Reagen-Shaw et al. (2007), FASEB J., 22, 659-661), puesto que los autores advierten que la BSA se correlaciona bien a través de las especies para diversos parámetros biológicos, que incluyen la tasa metabólica basal, el volumen de sangre, el gasto calórico, los niveles de proteínas en plasma y la función renal Usando este método, una dosis de 60 mg/kg/día en ratones puede convertirse en aproximadamente 4,9 mg/kg/día en seres humanos.
El segundo método usado para convertir la dosis eficaz de 60 mg/kg/día en ratones en una dosis equivalente en seres humanos se basa más directamente en el cambio de escala alométrico. Los datos procedentes de un estudio farmacocinético de MGBG que consistió en una dosis oral de 10 mg/kg en ratones se modelaron en una simulación para determinar el valor de AUCINF teórico para un régimen de dosificación de 30 mg/kg PO BID, que era 9050 h*ng/mL. Después, se usaron los valores de depuración en seres humanos previstos, determinados mediante cambio de escala alométrico de una especie y de múltiples especies, para calcular las dosis que es probable que produzcan una exposición en seres humanos (AUCINF) similar a la de 60 mg/kg/día en ratones. Usando el cambio de escala alométrico de una sola especie y un intervalo de valores de depuración en seres humanos previstos, una dosis equivalente en seres humanos puede estar en el intervalo de 1,73 mg/kg/día a 4,51 mg/kg/día. Usando el cambio de escala alométrico de múltiples especies, la dosis equivalente en seres humanos prevista es de aproximadamente 4,2 mg/kg/día.
En los modelos de carragenano murinos, también se observó eficacia de MGBG a dosis más bajas, incluyendo 3 mg/kg PO BID y 10 mg/kg PO BID, que pueden convertirse proporcionalmente en dosis para seres humanos de aproximadamente 0,49 mg/kg/día y aproximadamente 1,6 mg/kg/día.
A menudo se supone que el peso corporal promedio de un hombre normal es de 70 kg. Por tanto, puede calcularse que las dosis diarias, basándose en las anteriores predicciones, variarán de aproximadamente 25 mg/día a aproximadamente 350 mg/día.
La dosis apropiada depende, por supuesto, de una serie de factores. El paciente puede pesar mucho más o mucho menos, o ser una mujer, ser anciano o joven, y requerir una dosis menor o mayor. El paciente puede mostrar un perfil metabólico del fármaco que pueda aconsejar una dosis más baja o más alta, tal como un nivel de expresión o la actividad de enzimas metabolizantes, tales como citocromos P450 (CYP), bajos. Esta baja expresión o nivel de actividad puede ser debida a una serie de factores. Se sabe que la expresión polimórfica de uno o más CYP (por ejemplo, CYP2C19 y CYP2D6, aunque se han descrito polimorfismos para casi todos los CYP) es responsable de que algunas poblaciones sean “deficientes”, en comparación con la mayor parte de la población, lo cual conduce a un fenotipo de “metabolizador malo”, que requerirá una dosis menor. Además, la exposición a un agente infeccioso o xenobiótico puede provocar la represión de la expresión de CYP o la inhibición de CYP existentes. Como alternativa, el paciente puede estar físicamente débil, lesionado o inmunocomprometido, todo lo cual puede aconsejar usar una dosis más baja. El paciente puede estar tomando una serie de fármacos distintos que compitan con los sistemas metabólicos (incluyendo los CYP, tal como se analizó anteriormente) para la eliminación; este efecto en el caso de tomar muchos productos farmacéuticos, que es muy conocido, puede requerir una dosis más baja. La dosis también depende, tal como se analizó anteriormente, de la afección y su gravedad. La dosis eficaz para una enfermedad o criterio de valoración clínico no será necesariamente la misma que la dosis para otra, y un caso crónico o de cualquier manera grave puede requerir una dosis más alta. Sin embargo, un caso crónico también puede requerir administrar una dosis más baja a lo largo de un periodo de tiempo más largo o incluso indefinido. Todos estos factores se analizan como ejemplo para ilustrar la variabilidad de la dosificación ideal; está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica seleccionar un intervalo de dosificación apropiado para una enfermedad, una población o un individuo.
Teniendo en mente estos factores, será evidente que es posible que la dosis diaria en seres humanos puede ser tan baja como 1 mg/día, y tan alta como 1 g/día. En ciertas realizaciones, la dosis en seres humanos puede variar de 10 mg/día a 500 mg/día, de 20 mg/día a 400 mg/día, o de 25 mg/día a 350 mg/día. En otras realizaciones, la dosis en seres humanos puede variar de 120 mg/día a 350 mg/día, de 150 mg/día a 350 mg/día, de 200 mg/día a 350 mg/día, o de 250 mg/día a 350 mg/día. En ciertas realizaciones, la dosis en seres humanos puede ser una cualquiera de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 7075, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 190, 200, 210, 220, 225, 230, 240, 250, 260, 270, 275, 280, 290, 300, 310, 320, 325, 330, 240 o 350 mg/día.
En ciertas realizaciones, la dosis en seres humanos puede ser una cualquiera de 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 350, 355, 360, 365, 370 o 375 mg/día. En una realización, la dosis puede ser de 275 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 300 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 305 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 310 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 315 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 320 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 325 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 330 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 335 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 340 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 345 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 350 mg/día.
En ciertas realizaciones, la dosis en seres humanos puede ser una cualquiera de 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550 o 600 mg/día. En una realización, la dosis puede ser de 375 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 400 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 450 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 500 mg/día.
En ciertas realizaciones, la dosis en seres humanos puede ser una cualquiera de 25, 50, 75, 100 o 125 mg/día. En una realización, la dosis puede ser de 375 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 25 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 50 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 75 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 100 mg/día. En otra realización, la dosis puede ser de 125 mg/día.
Ensayos de carragenano in vivo
Ensayo de carragenano en la pata para el edema y la hiperalgesia
La inyección de carragenano por vía subcutánea en el pie (pata) trasero de una rata o ratón induce una inflamación robusta y dolor. La respuesta inflamatoria comienza 1-2 hr después de la inyección de carragenano y persiste durante al menos cinco horas después de la inoculación. Además, la pata trasera inflamada del animal es sensible a estímulos nocivos (hiperalgesia) o inocuos (alodinia) en comparación con la pata trasera contralateral. Los compuestos pueden evaluarse en este modelo para la actividad antihiperalgesia y antiinflamatoria. Un aumento general en el umbral o el tiempo hasta la respuesta después de la administración del fármaco sugiere una eficacia analgésica. Una disminución general en el hinchamiento de la pata después de la administración del fármaco sugiere una eficacia antiinflamatoria. Es posible que algunos compuestos afecten a la pata inflamada y no afecten a las respuestas de la pata contralateral.
Se prepararon realizaciones del ensayo de edema en la pata por carragenano con los materiales, reactivos y procedimientos descritos fundamentalmente en Winter, et al. (Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 111, 544 (1962)). Se han desarrollado realizaciones profilácticas y terapéuticas, y son conocidas en la técnica. Los animales se evaluaron para su respuesta a estímulos nocivos (pellizco en la pata, ensayo plantar) o inocuos (placa fría, filamentos de von Frey). En el siguiente protocolo se usaron ratones.
Animales, compuestos y dosificación.
Para este estudio se usaron ratones Swiss Webster macho jóvenes y sanos cuya variación en el peso no excedía ±20 % del promedio. Los animales se dividieron en cuatro grupos de cuarenta, y cada grupo fue dosificado mediante sonda oral con MGBG (BID, con una diferencia de 12 horas a 30 mg/kg en disolución salina normal 5 mL/kg), dexametasona como control positivo (QD, 1 mg/kg en metilcelulosa al 0,5 % 5 mL/kg), o vehículo de disolución salina (BID, 5 mL/kg). Un cuarto grupo actuó como control sin exposición (sin carragenano, sin tratamiento). El tratamiento con MGBG tuvo lugar en cada uno de tres días antes del carragenano, una hora antes del carragenano, y 11 horas después del carragenano. El edema en la pata se desarrolla inyectando carragenano (Sigma: A-carragenano) por vía subcutánea en la región de la pata derecha del ratón a un volumen de 50 pL de carragenano al 1 % (en p/v) en disolución salina. La pata contralateral (pata izquierda) recibió el mismo volumen (50 pL) de disolución salina y actuó como control. Los ratones se anestesiaron usando una dosis ligera de ketamina antes de la inyección de carragenano.
Edema en la pata.
Inmediatamente antes de la administración subplantar de carragenano y después de 2, 3, 5 y 24 horas después del carragenano, se midió el volumen de la pata del ratón usando el pletismómetro (Ugo Basile). La evaluación del edema se expresó como el promedio del aumento en el volumen de la pata con relación al control.
Evaluación de la latencia de retirada de la pata.
Antes de la administración subplantar de carragenano y después de 0,5, 2, 3, 5 y 24 horas después del carragenano, se determinó la latencia de la respuesta de retirada colocando los ratones sobre una placa caliente medidora de la analgesia, manteniendo la temperatura de la superficie a 51 °C. Se mantuvo un periodo de corte de 30 s para evitar que se produjese cualquier lesión térmica en la pata. Inmediatamente después del ensayo, todas las patas se sumergieron en agua helada antes de devolver a los animales a la jaula. La latencia de retirada de la pata se calcula como At = retirada de la pata derecha — retirada de la pata izquierda.
Recogida de suero, plasma e histológica.
Antes de la primera dosis de fármaco en el día 0 y en momentos de picos de la enfermedad (5 y 24 horas después de la exposición al carragenano para el suero, antes de la primera dosis de fármaco en el día 0 y en la conclusión del estudio), se recogió suero o plasma de ocho ratones por grupo (cada uno) y se conservó a -70 °C hasta la determinación del nivel de citoquinas o la determinación del nivel de fármaco de MGBG. Para la recogida del suero, se recolectaron muestras de sangre entera en un tubo separador de suero, se procesaron mediante centrifugación y se congelaron a -70 °C. Para la determinación del nivel de fármaco, se recolectaron muestras de sangre entera en un microrrecipiente de heparina litio, se procesaron para obtener el plasma mediante centrifugación y el plasma se congeló a -70 °C. Además, las patas se recogieron y se conservaron en formaldehído al 10 % para la histología. Protocolo alternativo.
En una realización alternativa de este ensayo, la MGBG se dosificó PO, BID a 3, 10, and 30 mg/kg (con dexametasona como control positivo, disolución salina como negativo, y un grupo no expuesto a tratamiento/carragenano, n = 16 cada uno).
Resultados.
La MGBG fue eficaz para reducir el edema y la hiperalgesia en el anterior ensayo.
Modelo de bolsa de aire de carragenano
La inyección de aire por vía subcutánea inducirá la formación de una cavidad de tejido conectivo revestida con células que se parecen y actúan como un revestimiento sinovial. Este método se conoce normalmente como el modelo de la bolsa de aire, y es un útil modelo animal de inflamación que puede generarse en un periodo de tiempo relativamente corto. La bolsa de aire puede crearse mediante una inyección subcutánea (SQ) de un volumen de aire estéril en la región dorsal del cuello. El modelo puede usarse para ensayar la eficacia y la potencia de compuestos, tales como análogos de poliaminas e inhibidores de la biosíntesis de poliaminas, tales como MGBG, para reducir diversos indicadores celulares y bioquímicos de la inflamación cuando se administran como una sonda oral (PO). Animales, compuestos y dosificación.
Se usaron ratas Lewis macho sanas (Charles River Laboratories, Wilmington, Mass.) que pesaban entre 175-200 g. Se administró MGBG a unas dosis entre 1 y 60 mg/kg o vehículo (metilcelulosa al 0,5 %, Tween-80 al 0,025 %) mediante sonda oral (una vez diaria a un volumen de 10 mL/kg) durante 6 días. Se usó un factor de corrección de 1,49 para tomar en cuenta la forma de sal diclorhidrato/monohidrato de MGBG. Se dosificó naproxeno y dexametasona a unas dosis de 10 y 1 mg/kg, respectivamente, 1 día antes, así como en la mañana de la inyección de carragenano.
Se formaron bolsas de aire en el dorso de las ratas durante los últimos 4 días de administración de MGBG o vehículo antes de la inyección de carragenano. Brevemente, las ratas se anestesiaron con isoflurano, durante lo cual se retiró el pelo dorsal y se inyectaron 20 de aire estéril por vía subcutánea en la región intraescapular. Se dejó que se desarrollasen las bolsas durante los siguientes 4 días, volviendo a inflar las bolsas (para mantener el volumen de las bolsas) 1 día antes de la inyección de carragenano.
Una hora antes de la inyección de carragenano, los animales recibieron la última dosis del fármaco (MGBG, vehículo, naproxeno o dexametasona). Se inyectó una suspensión al 1 % de carragenano (2 mL; FMC BioPolyer, Filadelfia, Pa.) suspendido en disolución salina en la cavidad de la bolsa. Después de 3 horas o de 24 horas de la inyección de carragenano, las ratas recibieron eutanasia mediante asfixia con CO2 y se inyectaron 2,5 mL de PBS (Sigma Chemical, St. Louis, Mo.) directamente en la bolsa. La bolsa se abrió con tijeras quirúrgicas, y el fluido de la bolsa se recogió usando una pipeta de transferencia. Se recogió una parte alícuota para la medición del recuento total de células con diferencial, y otra parte alícuota para la determinación de PGE2. En el último caso, la parte alícuota se centrifugó a 1200 g durante 10 minutos a 4 °C y el sobrenadante se recogió para el análisis de PGE2 mediante ELISA (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, Mich.).
Las muestras para los grupos de 3 y 24 horas se recogieron como se describió previamente a las 3 o 24 horas después de la inyección de carragenano.
El protocolo puede variar según métodos conocidos en la técnica. Puede recogerse y/o pesarse otro tejido, y pueden realizarse otros cortes, tinciones y exámenes microscópicos.
Resultados.
El MGBG fue eficaz en este modelo, tal como muestran los cambios con relación al control, que indican una inflamación reducida. Fundamentalmente, la MGBG inhibe selectivamente el pico de producción inflamatoria de PGE2, sin afectar a los niveles basales de este mediador. Por contraste, tanto el naproxeno como la dexametasona inhibieron la producción de niveles inflamatorios y basales de este mediador.
Artritis inducida por colágeno murina in vivo
Modelos de artritis inducida por colágeno de la artritis y la artritis reumatoide
El modelo de artritis inducida por colágeno (''collagen-induced arthritis'', CIA) se considera un modelo adecuado para estudiar fármacos potencialmente activos en la artritis humana, debido a las muchas similitudes inmunitarias y patológicas con la artritis reumatoide (RA) humana, la implicación de la histocompatibilidad mayor localizada, la activación completa de linfocitos T auxiliares restringida a la clase II, y la similitud de las lesiones histológicas. Véase, por ejemplo, Rosloniec E. F. et al., “Collagen-Induced Arthritis”, Current Protocols in Immunology, unidad 15.5 (1993). Véase también el modelo que emplea un anticuerpo monoclonal contra CD18 e intregrinas VLA-4 descrito en Issekutz, A. C. etal., Immunology (1996), 88:569. Ciertas características de este modelo de CIA que son similares a las que se encuentran en pacientes con RA incluyen, sin limitación: erosión del cartílago y del hueso en los márgenes de las articulaciones (como puede verse en radiografías), sinovitis proliferativa, implicación simétrica de articulaciones periféricas de tamaño mediano y pequeño en el esqueleto apendicular, pero no en el axial. Se siguió el siguiente procedimiento para evaluar la eficacia de MGBG en el tratamiento de enfermedades artríticas. Animales y dosificación.
Pueden usarse ratones DBA/1 macho endogámicos (DBA/1OlaHsd, Harlan Laboratories) de al menos 7 semanas de edad en el siguiente modelo de artritis inducida por colágeno. Se asignaron veinte animales por compuesto o vehículo a los grupos de artritis y de disolución salina, y 4 al grupo control. Para inducir un estado artrítico, los ratones se anestesiaron con isoflurano y recibieron 1501 pL de colágeno de tipo II bovino en inyecciones de adyuvante completo de Freund (día 0 y día 21). Los ratones se aleatorizaron según el peso corporal en grupos de tratamiento en el día del estudio 7. El tratamiento consiste en MGBG 25 mg/kg , dexametasona 0,2 mg/kg como control positivo, o disolución salina como control de vehículo, todos administrados con sonda oral, comenzando en el día 0 del estudio y continuando a diario (PO, BID dos veces diarias/12 horas de separación). Pueden usarse veinte ratones por grupo, de los cuales se recoge suero de 15 animales y plasma de cinco. Cuatro animales adicionales actúan como grupo control normal (no tratados, no artríticos). La porción en estado vivo del estudio puede desarrollarse durante 35 días.
Compuestos.
Puede prepararse una disolución de MGBG a partir de la sal diclorhidrato hidratada; pueden usarse otras sales y, en cualquier caso, debe aplicarse un factor de corrección de sal/hidrato. La MGBG sólida puede conservarse a temperatura ambiente, pero las formulaciones de dosis deben prepararse frescas para cada administración. La dexametasona está disponible en el mercado.
Datos.
En los días 21-35, generalmente aparece la artritis. Durante este tiempo, se adjudicaron puntuaciones clínicas para el edema en la pata y el hinchamiento para cada una de las patas (delantera derecha, delantera izquierda, trasera derecha, trasera izquierda). Se extrae plasma en los días 0, 14 y 25 para evaluar la farmacocinética, y se extrae sangre en los días 0 y 28 para el análisis de la enfermedad. El edema se mide en los días 18-20, 22-27 y 29-34. La inflamación se evalúa mediante la infiltración de células inflamatorias y el edema. Después de la eutanasia, se recoge sangre terminal, se hepariniza y se congela a -70 °C hasta que se analiza para citoquinas, tales como osteopontina, TNFalfa, IL-1, CRP, MCP1, MIP-lbeta, RANTES, IFNgamma, TGFbeta, IP-10, IL-17 y MMP9. Se recogen las patas y rodillas delanteras y traseras, y después de 1-2 días en fijador y después 4-5 días en un descalcificador, se procesan, se sumergen, se cortan y se tiñen con azul de toluidina para el análisis histológico. La reabsorción ósea se cuantifica pro la presencia de osteoclastos, defectos o pérdidas en el hueso cortical o trabecular medular. El daño en el cartílago se evalúa estudiando la gravedad y la extensión de la pérdida de condrocitos y la alteración del colágeno. Se sigue la formación de tejido de pannus y la gravedad y la extensión de otras evidencias de destrucción de la arquitectura articular.
Análisis estadístico.
Se analizan los datos clínicos para las puntuaciones de las patas (promedios por animal) determinando el área bajo la curva de dosificación (AUC) para los días 1-15. Para el cálculo del AUC, el promedio de las puntuaciones diarias para cada ratón se introduce en Microsoft Excel y se calcula el área entre los días de tratamiento después de la aparición de la enfermedad hasta el día de terminación. Se determinan los promedios para cada grupo y se calcula el porcentaje de inhibición a partir de los controles de artritis comparando los valores para los animales tratados y normales. Se analizan las puntuaciones de las patas y los parámetros histológicos (promedio ± EE) para cada grupo para determinar diferencias usando un ensayo de la t de Student ajustando la significancia a p = 0,05. Se calcula el porcentaje de inhibición de los parámetros y se calcula el AUC como [(promedio del control de enfermedad -promedio normal) - (promedio tratado - promedio normal)]/[[(promedio del control de enfermedad - promedio normal)(promedio tratado - promedio normal)]100.
La MGBG no fue eficaz en este modelo como fármaco antirreumático modificador de enfermedad ("diseasemodifying anti-rheumatic drug", DMARD), pero sí afectó a la fase temprana del hinchamiento/inflamación de la pata. Los anteriores protocolos pueden variar según métodos conocidos en la técnica.
Modelo de esclerosis múltiple MOG-EAE murino in vivo
Se empleó un modelo murino experimental de esclerosis múltiple usando un péptido de glicoproteína de la mielina de oligodendrocitos (MOG) para inducir una encefalomielitis autoinmunitaria experimental (EAE) para determinar la eficacia de MGBG para prevenir y tratar esta enfermedad. Debido a sus muchas similitudes con la EM, la EAE se emplea habitualmente para estudiar la patogénesis de la autoinmunidad, la inflamación del SNC, la desmielinización, el tráfico de células y la inducción de tolerancia. La EAE se caracteriza por parálisis (en algunos modelos, la parálisis está en remisión-recaída), inflamación del SNC y desmielinización. La EAE es mediada principalmente por células dendríticas, células T específicas de mielina (por ejemplo, Th1 y Th17) y macrófagos M1. Las células B también pueden desempeñar un papel en algunos modelos de EAE. El peso corporal también rastrea la progresión de la enfermedad. La EAE es inducida en ratones C57BL/6 mediante una inmunización con MOG35-55 o MOG1-125 en una emulsión de CFA, seguido de la administración de la toxina pertussis (PTX) en PBS. La emulsión proporciona el antígeno que inicia la expansión y la diferenciación de células T autoinmunitarias específicas de MOG. La PTX potencia el desarrollo de EAE proporcionando adyuvante adicional y facilitando la entrada de células T autoinmunitarias hacia el SNC.
Inducción de EAE.
Una EAE crónica se desarrolla en ratones C57BL/6 después de una inmunización con una emulsión de MOG35-55/CFA o MOG1-125/CFA, seguida de una inyección de la toxina pertussis. Este modelo se usa para ensayar el potencial de compuestos para prevenir o mitigar la enfermedad de EAE. Puede llevarse a cabo con el compuesto dosificado desde el momento de la inmunización (tratamiento profiláctico) o con el objetivo de revertir el desarrollo de la enfermedad y facilitar la recuperación dosificando el compuesto desde el momento de la aparición de la EAE (tratamiento terapéutico). El modelo usa ratones C57BL/6 hembra con una edad de 10 a 14 semanas al comienzo del estudio. Generalmente, la EAE se desarrolla 8-18 días después de la inmunización. El desarrollo de la EAE habitualmente se sigue durante 4 semanas (28 días) después de la inmunización.
El estrés reduce la susceptibilidad del ratón a la EAE. Además de cualquier efecto del compuesto, la administración del tratamiento durante el periodo de inducción de la enfermedad (aproximadamente 0-10 días después de la inmunización) pospone la aparición de la enfermedad y reduce la gravedad de la enfermedad. Esto es debido al estrés de la administración del compuesto y a los efectos del vehículo sobre los ratones. Cuanto más frecuente sea la administración y menos tolerado sea el vehículo, mayor es el impacto sobre el desarrollo de la enfermedad. El estrés del tratamiento y la administración del vehículo tiene mucho menos efecto sobre el desarrollo de la enfermedad después de que hayan aparecido los signos clínicos de EAE.
Tratamiento profiláctico.
En los estudios profilácticos, el tratamiento comienza antes de la aparición de la enfermedad, en el momento de la inmunización y la asignación a los grupos. Los ratones se asignan a grupos de tratamiento de una manera equilibrada para lograr grupos con distribuciones similares de pesos corporales. Los estudios profilácticos evalúan si el tratamiento afectará al desarrollo de la enfermedad antes y después de los primeros signos clínicos de EAE. Para compensar por el estrés del tratamiento en estudios de tratamiento profiláctico y para alcanzar la gravedad de la enfermedad diana, la EAE puede inducirse con una dosis más alta de toxina pertussis que la usada en los estudios terapéuticos. La dosis de toxina pertussis se basa en el estrés previsto debido a la dosificación (vía, frecuencia y formulación del vehículo).
En los estudios profilácticos, la mediana del tiempo hasta la aparición de la enfermedad es una medición sensible de la eficacia del compuesto. Pueden producirse pequeños cambios en la respuesta inmunitaria en la aparición pospuesta de la enfermedad; se producirá una supresión de la activación y proliferación de células T, presentación de antígenos, diferenciación en células Th1 y/o Th17, en la aparición pospuesta de la EAE. La aparición retrasada de la EAE, acompañada por una menor gravedad máxima, indica la eficacia global del tratamiento, en comparación con el grupo control negativo.
Algunos estudios demostrarán una aparición de EAE pospuesta sin otros efectos significativos del compuesto. En estos casos, el compuesto puede afectar a una vía temprana en el desarrollo de la respuesta inmunitaria, pero en último término, los procesos redundantes compensarán la pérdida de la vía bloqueada. Otra posible explicación es que el fármaco no fue capaz de mantener el bloqueo de la vía durante la duración del estudio.
En otros estudios, la EAE se pospone, pero los ratones tienen unas puntuaciones de EAE finales más altas que los ratones tratados con vehículo. Habitualmente, esto no es consecuencia de que el compuesto empeore la EAE, sino que el pico de la enfermedad en los ratones se pospone y coincide con el periodo de recuperación para los ratones tratados con vehículo.
Cuando un compuesto se dosifica de modo profiláctico, una importante lectura de la eficacia es la reducción en la máxima gravedad de la enfermedad (promedio de la puntuación máxima, "mean maximum score", MMS). Un MMS reducido indica una reducción global en la gravedad de la EAE.
Puntuación.
Desde el punto de vista clínico, la progresión de la EAE se puntúa en una escala de 0 a 5, en la que cada puntuación representa las siguientes observaciones clínicas:
0: sin cambio en la función;
1: cola fláccida;
2: cola fláccida y debilidad de las patas traseras;
3: uno de lo siguiente:
■ cola fláccida y parálisis completa de las patas traseras; o
■ cola fláccida y parálisis completa de una pata delantera y una pata trasera; o
■ inclinación fuerte de la cabeza, desplazamiento por los bordes de la jaula, empujar contra la pared de la jaula y giros cuando se alza por la cola;
4: cola fláccida y parálisis completa de la pata trasera y parcial de la pata delantera;
5: uno de los siguiente:
■ parálisis completa de la pata delantera/trasera; o
■ revolcarse espontáneamente en la jaula; o
■ muerte tras una parálisis.
Desarrollo de la EAE en ratones no tratados.
Los ratones individuales presentan desarrollos de la enfermedad algo diferentes. La mayoría de los ratones muestran signos iniciales de EAE entre 9 y 14 días después de la inmunización. Cuando la EAE comienza, el pico de la enfermedad casi siempre se produce 3-4 días después. La puntuación máxima continúa durante varios días y después los ratones se recuperan parcialmente. En algunos ratones, la enfermedad continúa a la máxima gravedad hasta el final del estudio. De modo menos habitual, un ratón se mantiene en el pico de gravedad solo durante un día y después empieza a recuperarse. El grado de recuperación depende mucho de la máxima gravedad que alcanza el ratón. La mayoría de los ratones no tratados o tratados con vehículo no se recuperan totalmente, pero su puntuación final habitualmente es 0,5 a 1,5 puntos más baja que su puntuación máxima. Aproximadamente 25 % de los ratones no tratados o tratados con vehículo muestran un empeoramiento de la EAE entre 24 y 28 días después de la inmunización, parecido a una recaída. Las médulas espinales de estos ratones en el momento del empeoramiento de la EAE tienen un gran número de focos inflamatorios (>7 focos por sección), similar a los descubrimientos histológicos en el momento de la aparición y pico de la EAE, lo cual sugiere que estas son recaídas verdaderas con una nueva ola de inflamación en las médulas espinales. Cuando se realiza un seguimiento a los ratones durante un periodo de tiempo más largo, la enfermedad lentamente aumenta en gravedad, lo cual se parece al desarrollo progresivo crónico de la enfermedad observado en pacientes humanos con EM.
Durante el desarrollo de la EAE, los cambios en el peso corporal reflejan la gravedad de la enfermedad. Los ratones a menudo pierden una pequeña cantidad de peso en el día después de la inmunización. Esto parece ser debido a los efectos del adyuvante y la toxina pertussis administrados. Después, los ratones aumentan paulatinamente su peso corporal hasta la aparición de la enfermedad. En el día de la aparición de la EAE, los ratones pierden casi invariablemente 1-2 g de su peso corporal (5-10 % del peso corporal). La pérdida de peso continúa con la progresión de la gravedad de la EAE, alcanzando la pérdida aproximadamente 20 % de su peso corporal antes de la aparición en el pico de la enfermedad. Lo más probable es que la pérdida de peso sea debida a la parálisis y la menor ingesta de alimento, así como a la alta producción de citoquinas proinflamatorias, tales como TNF, durante la fase aguda de la inflamación. Después de alcanzar el pico de la enfermedad, los ratones lentamente ganan peso, incluso aunque su puntuación clínica no mejore. Este aumento de peso puede ser debido a la infrarregulación de la inflamación, lo cual produce niveles más bajos de citoquinas proinflamatorias en sangre. Los ratones no tratados o tratados con vehículo habitualmente presentan 90 % de su peso corporal antes de la inmunización 28 días después de la inmunización.
Histología.
Generalmente, el análisis histológico se realiza al final del estudio (habitualmente alrededor de 28 días después de la inmunización) o en el momento en que el grupo de vehículo alcanza el pico de la enfermedad (habitualmente 14­ 18 días después de la inmunización), y se centra en focos inflamatorios, apoptosis y desmielinización, cada uno cuales se trata a continuación. La inflamación en la EAE normalmente comienza en la región lumbar de la médula espinal, extendiéndose hasta la médula espinal completa en el pico de la enfermedad.
Apoptosis.
Se identifican células apoptóticas en secciones de H&E, y habitualmente no se descubren durante los primeros dos días de desarrollo de la enfermedad. Se encuentran en el pico y durante el estadio crónico de la EAE. El número promedio de células apoptóticas habitualmente es de entre 2 y 4 por sección. Las células apoptóticas son neuronas y su número se correlaciona con los estadios de la enfermedad. Las células apoptóticas aparecen poco después de la aparición de la enfermedad, por tanto, cuando aparece la EAE habrá muchos focos inflamatorios, pero pocas células apoptóticas. Después, el número de células apoptóticas aumenta hasta el pico de la enfermedad, después permanece elevado.
Inflamación.
Cuando aparece la enfermedad, el número de focos inflamatorios se correlaciona fuertemente con la gravedad de la enfermedad. El número de focos aumenta algo hasta el pico de la enfermedad, cuando generalmente se encuentran 6-15 focos inflamatorios/sección a lo largo de la médula espinal. En el estadio crónico de la EAE (que comienza varios días después del pico de la enfermedad), muchos focos inflamatorios se resuelven, y generalmente el resultado son 3-4 focos inflamatorios en cada sección de la médula espinal en aproximadamente 28 días después de la inmunización.
Debido a que el mayor número de focos inflamatorios está presente en un estadio temprano del desarrollo de la enfermedad, si el análisis histológico se realiza al final del estudio, los ratones que muestran una aparición de la EAE tardía a menudo tienen más focos inflamatorios en sus médulas espinales que lo esperado a partir de su puntuación clínica. Por ejemplo, en un estudio de 28 días, es probable que un ratón con una aparición de EAE a los 27 días después de la inmunización y una puntuación clínica final de 2 tendrá más focos inflamatorios que un ratón con una aparición de EAE 9 días después de la inmunización y una puntuación final de 3,5. De modo similar, un ratón que recae poco antes del final de estudio (la recaída se define como 1 o más puntos de aumento en la puntuación clínica) habitualmente tendrá más focos inflamatorios al final del estudio que un ratón con enfermedad crónica estable, incluso si los dos tienen la misma puntuación clínica al final del estudio.
Se contaron focos inflamatorios de aproximadamente 20 células en cada sección teñida con H&E. Cuando los infiltrados inflamatorios consisten en más de 20 células, se calcularon cuántos focos de 20 células estaban presentes.
Desmielinización.
No se descubre desmielinización habitualmente durante los primeros dos días después de la aparición de la enfermedad, pero sí en el pico de la enfermedad (4-5 días después de la aparición de EAE) y continúa durante la fase crónica de la EAE. Las puntuaciones de desmielinización no cambian mucho entre el pico y 28 días después de la inmunización y habitualmente son un promedio de 1,2 y 2,5. La desmielinización se puntúa en secciones teñidas con azul Luxol rápido (LFB) y en secciones con H&E. En las secciones de LFB, la materia blanca de la médula espinal se tiñe de azul oscuro, y las áreas desmielinizadas tienen un color azul más claro y están asociadas con vacuolas grandes. En las secciones teñidas con H&E, la alteración de la estructura normal con vacuolas grandes es indicativa de una desmielinización.
La puntuación de desmielinización representa un cálculo del área desmielinizada para cada sección como sigue: 0: sin desmielinización (menos del 5 % de área desmielinizada)
1: del 5 al 20 % de área desmielinizada
2: del 20 al 40 % de área desmielinizada
3: del 40 al 60 % de área desmielinizada
4: del 60 al 80 % de área desmielinizada
5: del 80 al 100 % de área desmielinizada
Para los portaobjetos teñidos con azul Luxol rápido, se calculó el tamaño del área desmielinizada basándose en la tinción azul menos intensa de la mielina. Para las secciones teñidas con H&E, se calculó el área desmielinizada buscando la interrupción de la estructura normal: la palidez y la vacuolización son coherentes con el edema y la desmielinización, y axones dilatados.
Análisis estadístico.
A menos que se indique lo contrario, el análisis estadístico se realizó como sigue: la incidencia de la enfermedad se comparó usando el ensayo de chi-cuadrado; el promedio del día de aparición de EAE, el cambio en el peso corporal, y el número de células apoptóticas se compararon usando el ensayo de la t de Student de 2 colas; la mediana del día de aparición de la EAE se comparó usando el ensayo de supervivencia de Wilcoxon; el promedio de la puntuación máxima (MMS), la puntuación final y las puntuaciones de desmielinización (LFB y H&E) se compararon usando el ensayo no paramétrico de Wilcoxon.
Primer protocolo de MOG EAE.
Materiales y métodos.
Se dividieron diez ratones C57BL/6 hembra de diez semanas que pesaban 18-23 g (Taconic Farms) en cuatro grupos: inmunizados de modo simulado (n = 3) y tres grupos inmunizados con MOG que recibieron MGBG a 30 mpk BID (como el di-HCl monohidrato con un factor de corrección de 1,49), fingolimod (FTY720) a 3 mpk QD con una segunda dosis de vehículo simulada, o vehículo de disolución salina al 0,9 % BID (n = 12 cada uno). El péptido MOG35-55 se administró mediante inyección subcutánea en dos sitios en la espalda con el componente de emulsión (que contenía MOG35-55 para el artículo de ensayo o el control positivo, o PBS para el control negativo) de Hooke Kit™ MOG35-55/CFA Emulsion PTX, número de catálogo EK-2110 (Hooke Laboratories, Lawrence Mass.). Un sitio de inyección fue en el área de la espalda alta, aproximadamente 1 cm caudal de la línea del cuello. El segundo sitio fue en el área de la espalda baja, aproximadamente 2 cm craneal a la base de la cola. El volumen de inyección fue de 0,1 mL en cada sitio. A las 2 horas de la inyección de la emulsión, y después de nuevo 24 horas después de la inyección de la emulsión, el componente de toxina pertussis del kit (diluido con PBS para lograr 176 ng/dosis para la primera inyección y 165 ng/dosis para la segunda inyección) se administró por vía intraperitoneal. El volumen de cada inyección fue de 0,1 mL.
Los ratones inoculados no tratados desarrollaron EAE 8-14 días después de la inmunización con MOG35-55/CFA y se mantuvieron crónicamente paralizados durante los 28 días de duración del experimento. Pueden medirse las puntuaciones clínicas, los pesos corporales y la histopatología de la médula espinal (por ejemplo, desmielinización, infiltrados inflamatorios y/o apoptosis) y registrarse como se indicó anteriormente.
Resultados.
Las puntuaciones clínicas, indicadas como promedio de puntuación /- el error estándar del promedio (EEP), se muestran en la figura 1. Tal como puede observarse en la figura 1, los animales tratados con vehículo desarrollaron signos clínicos de la EAE comenzando en el día 10 tal como se esperaba, aumentando el promedio de signos clínicos hasta el día 16, cuando las puntuaciones superaron 2 y después se mantuvieron entre 2 y 3. El fingolimod fue el más eficaz a la dosis alta ensayada, produciendo una promedio de puntuaciones clínicas de 0 a lo largo del experimento, un nivel casi indistinguible del grupo inmunizado de modo simulado. La MGBG también previno la aparición y la progresión de la EAE, haciéndose evidentes los primeros signos clínicos en el día 15 y después aumentando lentamente hasta un nivel aún por debajo de 1 en el día 21, y permaneciendo por debajo de 1 durante la duración del experimento. Los resultados demuestran que la MGBG, igual que el fingolimod, es eficaz para prevenir y tratar los síntomas neurológicos de la EM en un modelo aceptado de la enfermedad.
Además, tal como se muestra en la figura 2, el tratamiento con fingolimod o MGBG previene la pérdida de peso corporal en el modelo de EAE. Los resultados en la figura 2, indicados como el promedio del porcentaje de cambio desde la línea de base (inicio del estudio) /-EEP, demuestran que todos los grupos continuaron ganando peso hasta aproximadamente el día 8, cuando se observaron unos pesos corporales de aproximadamente 107-113 %. Después, el grupo tratado con vehículo comenzó a perder peso, con una pérdida rápida hasta 95 % en el día 15, y alcanzaron un punto bajo de aproximadamente 93 % en el día 20 antes de recuperarse ligeramente para el final del estudio hasta aproximadamente 95 %. Los grupos inmunizados de modo simulado y tratados con MGBG y fingolimod, en términos generales, retuvieron cada uno el peso ganado a lo largo del estudio, fluctuando entre aproximadamente 108 % y aproximadamente 114 %. Los grupos con fingolimod y vehículo mostraron una ligera tendencia a una ganancia de peso gradual y continuada a lo largo del desarrollo del estudio. Los sujetos tratados con MGBG mostraron las ganancias más sustanciales inicialmente, acercándose al 115 % en el día 11, pero mostraron una pérdida gradual hasta aproximadamente 108 % en el día 24, antes de aumentar ligeramente de nuevo. Estos resultados también demuestran que la MGBG, igual que el fingolimod, es eficaz para prevenir y tratar los síntomas de la EM.
Histopatología.
En el día 28 (final del estudio), todos los ratones fueron sacrificados para el análisis histológico y perfusionados con PBS, y las columnas se recogieron en formaldehído tamponado al 10 %. Para cada ratón se prepararon 3 secciones teñidas con azul Luxol rápido y 3 secciones de H&E, de la médula espinal lumbar, torácica y cervical, y fueron analizadas por un patólogo ciego a los grupos experimentales y todas las lecturas clínicas. Se determinó el número de focos inflamatorios, células apoptóticas y regiones desmielinizadas en cada una de las tres secciones de H&E. Los resultados histopatológicos se muestran en las figuras 3-5, y confirman que la MGBG, igual que el fingolimod, reduce los signos histopatológicos de la EM, tales como la neuroinflamación, la desmielinización (mediante ambos tintes) y la apoptosis. Además, el grupo de control negativo (los datos no se muestran) mostró unas puntuaciones de cero.
Segundo protocolo de MOG EAE.
Se realizó un segundo experimento de EAE sustancialmente como se describió anteriormente, excepto que el fingolimod se dosificó a 1 mpk QD, y la toxina pertussis se administró a 165 ng/dosis en ambas inyecciones.
Resultados.
La EAE fue más grave en este estudio que en el estudio típico realizado según este protocolo, y más grave que en el estudio previo. Todos los ratones en el grupo de vehículo desarrollaron EAE grave. El desarrollo de la enfermedad en el grupo tratado con fingolimod no fue tan fuertemente reprimido como en el estudio previo o como en el estudio típico. Esto no es sorprendente, dado que la enfermedad más grave, en general, es más difícil de reprimir. Los ratones en el grupo tratado con MGBG desarrollaron una enfermedad sustancialmente reducida, en comparación con la del grupo con vehículo, mostrando una eficacia comparable a la del fingolimod.
Los resultados se muestran en las figuras 6-10. En coherencia con el estudio previo, la MGBG fue eficaz para posponer la aparición de la enfermedad y para reducir la gravedad de la EAE.
Clasificación de células activada por fluorescencia.
Además de la puntuación clínica, se realizó un análisis citométrico de flujo en células infiltrantes en el SNC procedentes de 6 ratones de cada uno de los grupos tratados con vehículo, fingolimod y MGBG, así como en los tres ratones del grupo inmunizado de modo simulado (sin enfermedad).
En el día 28, se reunió el tejido del cerebro y la médula espinal (procedente de 6 de 12 de cada uno de los grupos inmunizados con MOG; y de los tres ratones del grupo inmunizado de modo simulado) en el segundo estudio de MOG EAE y se aislaron las células infiltrantes mediante gradiente de Percoll. Después de aislar las células infiltrantes de cada ratón por separado, las células se colocaron en cultivo con miristato acetato de forbol (PMA, 50 ng/mL), ionomicina (0,5 pg/mL) y brefeldina (1 pg/mL) y se incubaron durante 4-5 horas. Después las células se lavaron y se tiñeron para el análisis citométrico de flujo, como se especifica a continuación. Se realizaron los siguientes análisis (Becton Dickinson FACScan):
- Anti-CD4-Cy-5/anti-IL-17A-PE/anti-IFNY-FITC (células Th1/Th17)
- Anti-CD4-Cy-5/anti-CD11c-PE/anti-CD45.2-FITC (células dendríticas infiltrantes)
- Anti-CD11b-Cy-5/anti-IL-12-PE/anti-CD45.2-FITC (macrófagos M1)
- Anti-CD11b-Cy-5/anti-CD206-PE/anti-IL-10-FITC (macrófagos M2)
El número de células positivas para los tintes y las combinaciones de tintes pertinentes se computaron como porcentaje de las células analizadas y como el número promedio de células por ratón para cada grupo.
Tabla 8: Papeles de las células infiltrantes en el SNC y citoquinas
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Los ratones tratados con MGBG presentan un número absoluto y relativo significativamente reducido de células dendríticas infiltrantes en el SNC (DC, CD45RB alta, CD11c+) y un número significativamente reducido de células productoras de IL-12 entre las células CD11b infiltrantes en el SNC. Los resultados se indican en las siguientes tablas, en las que * indica p<0,05 y ** indica p<0,1. Las tablas 9 y 11 muestran los resultados en términos de porcentajes de células totales, y las tablas 10 y 12 muestran los resultados en términos de números brutos de células (103).
Tabla 9
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Tabla 10
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Tabla 11
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Tabla 12
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Tercer protocolo de MOG EAE.
Se realizó un tercer experimento de EAE sustancialmente como se describió anteriormente, excepto que el fingolimod se dosificó a 0,1 mpk QD (que se corresponde bien con la dosis típica en seres humanos o 0,5 mg/día, cambiando de escala para la superficie específica corporal), y se añadió otro grupo más que combina MGBG 30 mpk y fingolimod 0,1 mpk. También en este caso, la toxina pertussis se administró a 165 ng/dosis para ambas inyecciones.
Resultados.
Tanto el fingolimod como la MGBG mostraron por separado una eficacia comparable para reducir la gravedad de la enfermedad y posponer la aparición de la enfermedad a las dosis ensayadas. También aparecieron significativamente menos focos inflamatorios y significativamente menos desmielinización en los ratones tratados, en comparación con los ratones tratados con vehículo. De manera importante, ninguno de los ratones en el grupo de combinación de fingolimod/MGBG desarrolló EAE, y todas las demás lecturas clínicas (por ejemplo, pesos corporales) mejoraron significativamente (sin señales de EAE), en comparación con el grupo con vehículo; no se detectó enfermedad en estos ratones.
Conjuntamente, estos resultados indican que la combinación de fingolimod y MGBG fue muy eficaz para prevenir el desarrollo de la EAE. Además, los ratones que recibieron el tratamiento de combinación mostraron unas lecturas clínicas e histológicas significativamente mejoradas, en comparación con los ratones que recibieron fingolimod o MGBG por sí solos. La combinación parece prevenir que la enfermedad se desarrolle.
Pueden ensayarse con facilidad otras combinaciones de agentes en un protocolo similar al anterior. Por ejemplo, puede ensayarse cada uno de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo (tecfidera) y teriflunomida, en combinación con MGBG. También pueden ensayarse otros inhibidores de SAMDC. Se espera que estas combinaciones sean eficaces de modo similar. Aunque no se pretenda limitación alguna por la teoría, la combinación de MGBG, que parece afectar a los acontecimientos tempranos en el desarrollo de la EM, tales como la presentación de antígenos y la infiltración de células dendríticas hacia el SNC, debería ser eficaz en combinación con otros fármacos, por ejemplo, los que son similares al fingolimod que actúan en un estadio diferente (en ciertas realizaciones, después) en el desarrollo de un episodio o estallido de la esclerosis múltiple u otra enfermedad desmielinizante.
Cuarto protocolo de MOG EAE.
Se realizó un cuarto experimento de EAE de modo similar al anterior, pero se diseñó para examinar el efecto de la MGBG sobre poblaciones celulares durante la aparición y el pico de la enfermedad. En este protocolo, había 3 grupos experimentales con 20 ratones/grupo y un grupo inmunizado de modo simulado con 8 ratones. El fingolimod se dosificó a 1 mpk QD, la MGBG a 30 mpk BID, y la toxina pertussis se administró a 165 ng/dosis para ambas inyecciones. Se realizó un análisis citométrico de flujo en células infiltrantes en el SNC procedentes de 16 ratones de cada uno de los grupos tratados con vehículo, fingolimod y MGBG, así como en todos los ratones del grupo inmunizado de modo simulado. La mitad de los ratones analizados de cada grupo se recogieron en el momento de la aparición de la EAE en el grupo de vehículo, y la mitad se recogieron en el momento del pico de EAE del grupo con vehículo. La terminación de los ratones se realizó a lo largo de ocho días distintos, porque cada ratón individual en el grupo con vehículo experimentó la aparición de la EAE y el pico de EAE en días diferentes. En cada momento, se sacrificaron ocho (8) de los ratones en el grupo con vehículo. Para cada uno de estos ratones, se sacrificó un ratón correspondiente procedente de los grupos 2 y 3 en el mismo día. Para cada dos (2) de estos ratones del grupo con vehículo, se sacrificó un ratón correspondiente procedente del grupo 4. Cuando se seleccionaron los ratones correspondientes de otros grupos para la terminación, se eligió el ratón con la puntuación de EAE más alta. Si ninguno de los ratones del grupo mostraba señales de EAE, se eligió un ratón aleatoriamente.
Resultados.
La infiltración de células proinflamatorias en el SNC se redujo en ratones tratados con MGBG, lo cual es coherente con el descubrimiento clínico de que la MGBG reduce el desarrollo de la EAE. En el SNC de los ratones tratados con MGBG, se redujeron múltiples poblaciones de células proinflamatorias. De manera interesante, la proporción y el número de células dendríticas infiltrantes se redujo más en ratones tratados con MGBG que en los ratones tratados con fingolimod, y algunas diferencias fueron estadísticamente significativas. Estos resultados son coherentes con estudios previos y sugieren que la MGBG se dirige selectivamente a las células dendríticas. Además, la reducción en el número de células productoras de IL-12 apoya la idea de que la MGBG afecta al desarrollo de las respuestas de tipo Th-1.
Los resultados se indican en las siguientes tablas, en las que * indica p<0,05 y ** indica p<0,1. La tabla 13 muestra los resultados en términos de porcentajes de células totales, y la tabla 14 muestra los resultados en términos de números brutos de células (103).
Tabla 13
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Tabla 14
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La tabla 15 a continuación ilustra los efectos observados en un subconjunto de animales que no desarrollan enfermedad en el momento en que los animales tratados con vehículo se encontraban en el pico de la enfermedad. La MGBG, pero no el fingolimod, redujo el número de células dendríticas. Esto sugiere que la MGBG (y, de modo más amplio, un inhibidor de SAMDC que tiene un efecto sobre la presentación de antígenos de células dendríticas y la infiltración en el SNC) puede ser un componente importante para prevenir o reducir la gravedad de la EAE y la eM y/o su progresión y síntomas asociados, tales como la desmielinización.
Tabla 15
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Otros modelos in vivo de eficacia terapéutica
Los siguientes modelos, presentados como ejemplo, pueden usarse para evaluar los compuestos descritos en la presente para la eficacia en el tratamiento de una serie de enfermedades e indicaciones. Está dentro de la capacidad de los expertos en la técnica poder modificar estos modelos para ajustarse a las necesidades del estudio. Además, los expertos en la técnica estarán familiarizados con otros modelos de enfermedad que pueden emplearse. Se espera que la MGBG, así como otros análogos de poliamina e inhibidores de la biosíntesis de poliaminas y compuestos descritos en la presente, serán eficaces en estos modelos.
Modelos de neuropatía y dolor neuropático
Modelo de Bennett de dolor neuropático
Se produce una mononeuropatía periférica en ratas adultas colocando ligaduras constrictivas no apretadas alrededor del nervio ciático común. El comportamiento postoperatorio de estas ratas indica que se produce hiperalgesia, alodinia y, según cabe suponer, dolor espontáneo (o disestesia). Las respuestas hiperalgésicas al calor radiante nocivo generalmente son evidentes en el segundo día postoperatorio y duran más de 2 meses. También estaban presentes respuestas hiperalgésicas al dolor quimiogénico. Puede inferirse la presencia de alodinia a partir de las respuestas nocifensivas evocadas por colocar las patas sobre un suelo de metal enfriado inocuo o por una estimulación mecánica inocua (por ejemplo, con filamentos de von Frey), y por la persistencia de las ratas a mantener la pata trasera en una posición protegida. La presencia de dolor espontáneo es sugerida por la supresión del apetito y por la frecuenta aparición de respuestas nocifensivas aparentemente espontáneas. La pata trasera afectada generalmente está anómalamente caliente o fría en aproximadamente una tercera parte de las ratas. Aproximadamente la mitad de las ratas desarrollan garras muy crecidas en el lado afectado. En los modelos de eficacia del compuesto, el compuesto de ensayo generalmente se administra antes de la estimulación, y el vehículo actúa como control. Los experimentos con este modelo animal pueden avanzar en la comprensión de los mecanismos neurales de los trastornos de dolor neuropático en seres humanos (Bennett G. J., Xie Y. K., 1988, “A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man”, Pain,, abril, 33(1):87-107 (PMID: 2837713).
Modelo de Chung de dolor neuropático
Desde su introducción en 1992, el modelo de ligadura del nervio espinal ("spinal nerve ligation'', SNL) de dolor neuropático se ha usado ampliamente para diversos trabajos de investigación sobre los mecanismos del dolor neuropático, así como en ensayos de selección para el desarrollo de nuevos fármacos analgésicos. Este modelo se desarrolló ligando con fuerza uno (L5) o dos (L5 y L6) nervios espinales segmentales en la rata. La operación produce signos de comportamiento de larga duración de alodinia mecánica, hiperalgesia al calor, alodinia al frío y dolor en curso. En el proceso de su amplia utilización, se han producido muchas variaciones diferentes en el modelo de SNL, de modo intencionado o no, realizadas por diferentes investigadores. Aunque los factores que provocan estas variaciones en sí mismos son cuestiones interesantes e importantes que deben estudiarse, es probable que los mecanismos del dolor implicados en estas variaciones sean diferentes de los del modelo original. El método para producir el modelo de ligadura del nervio espinal que inducirá mínimamente factores potenciales que pueden contribuir a estas variaciones se describe en detalle en Chung J. M., Kim H. K., y Chung K., “Segmental spinal nerve ligation model of neuropathic pain”, Methods Mol. Med., 2004, 99:35-45 (PMID: 15131327).
Modelo de Chung en NHP
En un modelo de neuropatía dolorosa en primates (Macaca fascicularis), se induce un estado neuropático mediante la ligadura fuerte del nervio espinal L7, justo distal al ganglio de la raíz dorsal L7. Pueden realizarse ensayos sensoriales sobre la superficie ventral de la pata, una región que incluye el dermatoma L7. Dentro de 1 semana después de la cirugía, los primates generalmente desarrollan una marcada sensibilidad a la estimulación mecánica (por ejemplo, con pelos de von Frey), lo cual indica la presencia de alodinia mecánica. A veces también se observa una mayor sensibilidad a la estimulación mecánica en el lado contralateral. El umbral para la retirada frente a estímulos de calor disminuye, lo cual indica la presencia de hiperalgesia al calor. La presentación de diversos estímulos de enfriamiento, tal como baños de agua fría y acetona, indica que también se desarrolla alodinia al frío. Los fenómenos de comportamiento observado son similares a los observados en seres humanos diagnosticados con dolor neuropático periférico. Por tanto, el modelo es útil para evaluar una serie de parámetros pertinentes para la neuropatía y los trastornos de dolor neuropáticos en seres humanos y para evaluar la eficacia de candidatos a fármaco como tratamientos para trastornos relacionados. Véase, por ejemplo, Carlton S. M. et al., “Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate”, Pain, 1994, febrero, 56(2):155-166 (PMID: 8008406).
Evaluación de la alodinia táctil con filamentos de von Frey
La siguiente técnica de evaluación de la alodinia cuantitativa puede modificarse para medir la alodinia táctil en cualquiera de los diversos modelos animales de dolor neuropático. El siguiente resumen se ofrece como ejemplo y se refiere a un modelo de neuropatía quirúrgica en rata, en el que se evocan comportamientos nocifensivos por un ligero toque en la pata. Empleando pelos de von Frey de 0,41 a 15,1 g, en primer lugar, puede caracterizarse el porcentaje de respuesta a la intensidad de cada estímulo. Generalmente, se observa una relación logarítmica lineal uniforme. Además, o como alternativa, puede emplearse un paradigma que emplee la oscilación del estímulo alrededor del umbral de respuesta, lo cual permite unas mediciones más rápidas y eficaces. El coeficiente de correlación entre los dos métodos generalmente es alto. En las ratas neuropáticas se descubre una buena reproducibilidad intra- e interobservador para el paradigma de arriba-abajo; puede observarse cierta variabilidad en ratas normales, atribuible al ensayo exhaustivo. El hecho de que los umbrales en un grupo grande de ratas neuropáticas muestran una variabilidad insignificante a lo largo de 20 días, y que después de 50 días, 61 % siguen cumpliendo criterios estrictos de neuropatía (usando un análisis de la supervivencia), indica que la medición del umbral usando el paradigma de arriba-abajo, en combinación con el modelo de dolor neuropático, representa una herramienta poderosa para analizar los efectos de las manipulaciones del estado de dolor neuropático. Véase, por ejemplo, Chaplan S. R. et al., “Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw”, J. Neurosci. Methods, julio de 1994, 53(1 ):55-63 (PMID: 7990513).
Método de Hargreaves para evaluar la nocicepción térmica
Como alternativa, se ha descrito un método para medir la hiperalgesia cutánea frente a la estimulación térmica en animales no atados. El paradigma de ensayo emplea la detección automática del criterio de valoración de comportamiento; un ensayo repetido no contribuye al desarrollo de la hiperalgesia observada. Una inflamación inducida por carragenano produce unas latencias de retirada de la pata significativamente más cortas, en comparación con las patas tratadas con disolución salina, y estos cambios de latencia se corresponden con un umbral nociceptivo térmico disminuido. Este método térmico sensible detecta la hiperalgesia relacionada con la dosis y su bloqueo por los compuestos de ensayo y permite la medición de otros parámetros de comportamiento además del umbral nociceptivo. Véase, por ejemplo, Hargreaves K., et al., “A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia”, Pain, enero de 1988, 32(1):77-88 (PMID: 3340425).
Modelos inflamatorios y autoinmunitarios
Dermatitis por contacto y trastornos relacionados
La hipersensibilidad por contacto es un sencillo ensayo in vivo de hipersensibilidad de tipo retrasado de la función inmunitaria mediada por células que puede usarse para evaluar la eficacia terapéutica potencial en una serie de trastornos que tienen un componente inflamatorio y/o autoinmunitario. Estas enfermedades incluyen dermatitis por contacto, dermatitis atópica, psoriasis, dermatitis alérgica e irritación dérmica. Los compuestos pueden aplicarse por vía tópica, opcionalmente en una formulación tópica, o pueden administrarse mediante una vía no tópica (por ejemplo, oral, IV, etc.).
Modelo murino
En un procedimiento, la exposición cutánea a haptenos exógenos produce una reacción de hipersensibilidad de tipo retrasado que se mide y cuantifica. La sensibilidad por contacto implica una fase de sensibilización inicial, seguida por una fase de suscitación. La fase de suscitación se produce cuando los linfocitos T se encuentran con un antígeno con el que han tenido un contacto previo. Se produce un hinchamiento e inflamación, lo cual hace que este modelo sea excelente para la dermatitis por contacto alérgica humana. Los modelos murinos generalmente también tienen el beneficio adicional de ser baratos. Un procedimiento adecuado se describe en detalle en Gaspari A. A. y Katz S. I., “Contact Hypersensitivity”, Current Protocols in Immunology, unidad 4.2, John Wiley & Sons, Inc. (1994). Véase también, Grabbe S. y Schwarz T., “Immunoregulatory mechanisms involved in elicitation of allergic contact hypersensitivity”, Immun. Today, 19(1):37-44 (1998).
Modelo porcino
La elección del animal puede ser importante en estudios dermatológicos previstos para predecir una respuesta en seres humanos. Por esta razón, se prefieren los cerdos y, en particular, los minicerdos, debido a las similitudes entre la piel humana y de cerdo (en particular, la densidad folicular). Véase, por ejemplo, un ejemplo de modelo en Bilski A. J. y Thomson D. S., “Allergic contact dermatitis in the domestic pig. A new model for evaluating the topical antiinflammatory activity of drugs and their formulations”, Br. J. Dermatol., julio de 1984, 111, supl. 27:143 (PMID: 6743545).
Modelo de cobaya sin pelo
También se han evaluado las reacciones por contacto alérgicas e irritantes en la cobaya sin pelo recientemente identificada Cr1 :IAF(HA)BR, un mutante que surge de la raza Hartley. La dermatitis por contacto irritante puede inducirse con aceite de crotón, 2,4-dinitroclorobenceno (DNCB), o antralina. Tanto las cobayas sin pelo como las cobayas con pelo desarrollan reacciones similares ante estos productos químicos. También puede inducirse una sensibilización por contacto fotoalérgica con tetraclorosalicilanilida (TCSA), o con ciclofosfamida antes de la sensibilización con tribromosalicilanilida (TBS). Se observan cambios cutáneos macroscópicos y microscópicos según métodos conocidos en la técnica. Así, pueden usarse cobayas sin pelo como modelos animales para la evaluación de los compuestos de ensayo en el tratamiento de reacciones por contacto inmunológicas y no inmunológicas y trastornos relacionados. Véase, por ejemplo, Miyauchi H. y Horio T., “A new animal model for contact dermatitis: the hairless guinea pig”, J. Dermatol., marzo de 1992, 19(3):140-5 (PMID: 1640019).
También puede estudiarse la irritación dérmica simple en cobayas sin pelo. En un ejemplo de modelo, los compuestos de ensayo se administran en una o más formulaciones tópicas durante una exposición diaria de 30 min durante 4 días. Se realiza una puntuación a diario; se mide la evaporimetría (pérdida de agua epidérmica total, "total epidermal water loss", TEWL)), la hidratación y la colorimetría en la línea de base (día 0) en mitad y al final del tratamiento. Los compuestos de ensayo se aplican dos veces diarias. Véase, por ejemplo, Andersen F. et al., “The hairless guinea-pig as a model for treatment of cumulative irritation in humans”, Skin Res. Technol., febrero de 2006, 12(1):60-7 (PMID: 16420540).
Modelo de quimeras de psoriasis murina
Además, los compuestos descritos en la presente pueden ensayarse en modelos animales para enfermedades similares a la psoriasis. Las investigaciones acerca de la causa y los mecanismos patofisiológicos subyacentes a la expresión de las lesiones psoriásicas de la piel se han visto dificultadas por la falta de un modelo animal apropiado para esta enfermedad cutánea enigmática y común. Un modelo adecuado es la quimera de piel humana/SCID de ratón preparada como se describe en Nickoloff B. J. et al., “Severe combined immunodeficiency mouse and human psoriatic skin chimeras. Validation of a new animal model”, Am. J. Pathol., marzo de 1995, 146(3):580-8 (PMID: 7887440). Los métodos descritos en ese documento caracterizan muestras de piel normal, piel prepsoriásica y piel con placas psoriásicas trasplantadas a ratones con inmunodeficiencia grave combinada. Se trasplantan muestras de piel normal, prepsoriásica o de queratoma de placas psoriásicas a ratones con inmunodeficiencia grave combinada de forma fiable con altas tasas de supervivencia del injerto (>85 %) y observándose los cambios reproducibles coherentemente a lo largo de periodos prolongados de injerto. Después del trasplante, mediante evaluación clínica y microscopía óptica normal, la piel normal sigue siendo fundamentalmente normal, mientras que la piel prepsoriásica se hace más espesa y la piel con placas psoriásicas conserva sus características escamas y elevación del tipo de las placas. Usando un panel de anticuerpos y análisis inmunohistoquímicos, el fenotipo global de tipos de células humanas (que incluyen inmunocitos) que persisten en la piel trasplantada es notablemente similar al inmunofenotipo de las muestras de piel pretrasplantadas. Además, pueden identificarse zonas interfaciales claramente reconocibles entre la piel humana y murina dentro de los compartimentos epidérmicos y dérmicos mediante microscopía e inmunotinción habituales, con áreas focales de quimerismo. Las muchas similitudes entre las muestras humanas pre- y postrasplantadas de piel normal y psoriásica que se injertan en ratones con inmunodeficiencia combinada grave hacen que este modelo animal sea apropiado para su uso en la evaluación de compuestos de ensayo para su eficacia para tratar la psoriasis y trastornos relacionados.
Modelo SCID/SCID de psoriasis murina
Como alternativa, los compuestos descritos en la presente pueden ensayarse en el modelo de ratón SCID/SCID descrito por Schon M. P. et al., “Murine psoriasis-like disorder induced by naive CD4+ T cells”, Nat. Med., febrero de 1997, 3(2):183-8 (PMID: 9018237). En este modelo, la reconstitución de ratones SCID/SCID con linfocitos T CD4+ no expuestos con histocompatibilidad menor no correspondiente produce alteraciones de la piel que se parecen muchísimo a la psoriasis humana desde el punto de vista clínico, histopatológico y en la expresión de citoquinas. Asma
Los compuestos también pueden evaluarse para la eficacia en el tratamiento del asma y trastornos pulmonares relacionados. En un modelo murino de asma, ratones control de tipo salvaje [C57BL/6J, (+/+)] y ratones con inactivación de ICAM-1 (molécula de adhesión intercelular-1) [C57BL/6J-ICAM-1, (-/-)] se sensibilizan a la ovoalbúmina (OVA), y se exponen a OVA administrada mediante aerosol (OVA-OVA) para inducir un fenotipo coherente con una respuesta asmática. Puede medirse la respuesta bronquial a la metacolina y los recuentos de número de células y las mediciones del contenido en eosinófilos y los niveles de citoquinas en el fluido de lavado broncoalveolar ("bronchoalveolar lavage fluid", BALF). Además, puede medirse la proliferación de linfocitos en respuesta a antígenos, la migración de eosinófilos hacia las vías respiratorias y el desarrollo de hiperreactividad de las vías respiratorias (''airway hyperreactivity", AHR) en ratones sensibilizados y expuestos a alérgenos in vivo o ex vivo según métodos conocidos en la técnica. Véase Wolyniec W. W. et al., “Reduction of antigen-induced airway hyperreactivity and eosinophilia in ICAM-1-deficient mice”, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., junio de 1998, 18(6):777-85 (PMID: 9618382).
Enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa
Los compuestos descritos en la presente también pueden evaluarse para la actividad en modelos animales de enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. El protocolo descrito por Scheiffele F., Fuss I. J., “Induction of TNBS colitis in mice”, Curr. Protoc. Immunol., agosto de 2002, capítulo 15, unidad 15.19 (PMID: 18432874), es uno de varios que se han usado para estudiar la inmunopatogénesis de estas enfermedades. El modelo emplea el uso de ácido 2,4,6-trinitrobencensulfónico (TNBS), que induce una inflamación colónica grave cuando se administra por vía rectal en ratones SJL/J. La colitis que se produce por este procedimiento presenta resultados clínicos e histopatológicos que se parecen a los que se observan en la enfermedad de Crohn. Scheifflele y Fuss analizan los parámetros críticos necesarios para la inducción con éxito de TNBS-colitis, así como métodos para controlar y clasificar los niveles de enfermedad, y ofrecen un protocolo de apoyo para aislar células mononucleares de la lámina propia procedentes de cólones de ratón. Véase también Morris G. P. et al., “Hapteninduced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon”, Gastroenterology, marzo de 1989, 96(3):795-803 (PMID: 2914642), que describen el modelo de rata original de inflamación colónica crónica mediante la instilación intraluminal de una disolución que contiene un “disruptor de barrera” (por ejemplo, 0,25 ml de etanol al 50 %) y un hapteno (por ejemplo, TNBS, 5-30 mg). A una dosis de 30 mg, la ulceración inducida por ácido trinitrobencensulfónico/etanol y el marcado espesamiento de la pared intestinal persistieron durante al menos 8 semanas. Desde el punto de vista histológico, la respuesta inflamatoria incluye infiltración mucósica y submucósica por leucocitos polimorfonucleares, macrófagos, linfocitos, mastocitos de tejido conectivo y fibroblastos. Granulomas (3 semanas después de la inducción de la inflamación), células gigantes de tipo Langhan, ulceración e inflamación segmental. Las características y duración relativamente larga de la inflamación y la ulceración inducidas en estos modelos ofrecen una oportunidad para estudiar la patofisiología de la enfermedad inflamatoria colónica de una forma específicamente controlada, y evaluar nuevos tratamientos potencialmente aplicables a la enfermedad inflamatoria intestinal en seres humanos.
Ejemplos de formulaciones farmacéuticas orales
A continuación, se ofrecen ejemplos de composiciones que pueden usarse para administrar por vía oral los compuestos descritos en la presente como una cápsula.
Una forma sólida de un compuesto de fórmula VI puede hacerse pasar a través de uno o más tamices para producir un tamaño de partícula constante. También los excipientes pueden hacerse pasar a través de un tamiz. Pueden medirse pesos apropiados de los compuestos, suficientes para lograr la dosificación diana por cápsula, y añadirse a un recipiente o aparato de mezclado, y después la mezcla se combina hasta que sea uniforme. La uniformidad de la mezcla puede lograrse, por ejemplo, tomando muestras en 3 puntos dentro del recipiente (arriba, en la parte intermedia y abajo) y ensayando cada muestra para la potencia. Un resultado de ensayo del 95-105 % de la diana, con un RSD de 5 %, se considera ideal; opcionalmente, puede mezclarse durante más tiempo para lograr una mezcla uniforme. Tras unos resultados aceptables de la uniformidad de la mezcla, una parte alícuota medida de esta formulación madre puede separarse para fabricar potencias más bajas. El estearato de magnesio puede hacerse pasar a través de un tamiz, recogerse, pesarse, añadirse al mezclador como lubricante, y mezclarse hasta que se disperse. La mezcla final se pesa y se reconcilia. Después las cápsulas pueden abrirse y los materiales mezclados fluidos se introducen en el cuerpo de la cápsula usando una espátula. Las cápsulas en bandejas pueden apisonarse para que la mezcla se asiente en cada cápsula para asegurar un peso de carga diana uniforme, y después sellarse combinando los cuerpos cargados con las tapas.
Ejemplos de composición
En los siguientes ejemplos de composición, las dosificaciones diana pueden ajustarse para que tener en cuenta el peso de los contraiones y/o solvatos, si se administran como una de sus sales o polimorfos solvatados. En este caso, se reduce el peso de los otros excipientes, generalmente la carga. Por ejemplo, con la sal diclorhidrato monohidrato de MGBG, se emplea un factor de corrección de 1,49 (por ejemplo, 360 mg de la sal para obtener 240,8 mg de la base libre).
Ejemplo 1A: Cápsula de 300 mg
El peso de carga total de la cápsula es de 500 mg, sin incluir el peso de la cápsula. La dosificación diana del compuesto es de 300 mg por cápsula.
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Ejemplo 1B: Cápsula de 150 mg
El peso de carga total de la cápsula es de 300 mg, sin incluir el peso de la cápsula. La dosificación diana del compuesto es de 150 mg por cápsula.
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Ejemplos de combinación de MGBG-fingolimod
El peso de carga total de la cápsula se indica a continuación en mg, sin incluir el peso de la cápsula.
Figure imgf000045_0003
La invención descrita en la presente proporciona realizaciones, en las que cada una de las anteriores realizaciones se combina con una o más de las otras realizaciones no contradictorias, de modo que la realización resultante incluye dichos dos o más elementos y/o limitaciones mencionados.

Claims (9)

  1. REIVINDICACIONES
    1 La MGBG para su uso en el tratamiento de la esclerosis múltiple progresiva en un paciente, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de MGBG.
  2. 2.- La MGBG para su uso según la reivindicación 1, en la que la administración de MGBG es oral.
  3. 3.- La MGBG para su uso según la reivindicación 2, en la que la MGBG se dosifica de 20 mg/día a 400 mg/día.
  4. 4. - La MGBG para su uso según la reivindicación 2, que comprende además la administración de un agente seleccionado de interferón beta-1a, interferón beta-1b, acetato de glatiramero, mitoxantrona, natalizumab, fingolimod, laquinimod, fumarato de dimetilo y teriflunomida.
  5. 5. - La MGBG para su uso según la reivindicación 4, en la que el fingolimod se dosifica a 0,5 mg diarios, o en la que el fingolimod se dosifica a menos de 0,5 mg diarios, o en la que el fingolimod se dosifica a 0,25 mg diarios.
  6. 6. - La MGBG para su uso según la reivindicación 2, en la que la composición farmacéutica oral se formula para una dosificación de una vez diaria, o se formula para una dosificación de dos veces diarias.
  7. 7. - La MGBG para su uso según la reivindicación 1, en la que el tratamiento previene la recaída o l parogresión de la EM.
  8. 8. - La MGBG para su uso según la reivindicación 1, en la que la esclerosis múltiple progresiva es la esclerosis múltiple progresiva primaria.
  9. 9. - La MGBG para su uso según la reivindicación 1, en la que la esclerosis múltiple progresiva es la esclerosis múltiple progresiva secundaria.
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