ES2842773T3 - Gentian extract without genciopicroside - Google Patents
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Abstract
Un proceso para la preparación de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida, en el que la cantidad de genciopicrósido es menor que 0,5% de área, según lo determinado por UPLC y detección UV a 254 nm, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de (i) Extraer las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida con una mezcla de agua/disolvente orgánico para obtener, después de la filtración, un extracto que comprende genciopicrósido, seguido de (ii) Eliminar el disolvente orgánico para obtener un extracto acuoso, seguido de (iii) Hidrolizar el genciopicrósido en el extracto acuoso a genciopicral.A process for the preparation of an extract of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida, in which the amount of genciopicroside is less than 0.5% area, as determined by UPLC and UV detection at 254 nm, said procedure comprising the steps of (i) Extracting the aerial parts (flower, leaf, stem) of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida with a water / organic solvent mixture to obtain, after filtration, an extract comprising genciopicroside, followed by (ii ) Remove the organic solvent to obtain an aqueous extract, followed by (iii) Hydrolyze the genciopicroside in the aqueous extract to genciopicral.
Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Extracto de genciana sin genciopicrósidoGentian extract without genciopicroside
La presente invención se refiere a extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. Además, se refiere a composiciones cosméticas que comprenden tal extracto Gentiana acaulis o Gentiana septemfida libre genciopicrósido, así como a mezclas de los mismos.The present invention relates to extracts of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida free of genciopicroside. Furthermore, it relates to cosmetic compositions comprising such an extract Gentiana acaulis or Gentiana septemfida free genciopicroside, as well as mixtures thereof.
Es cada vez más importante que los seres humanos luzcan sanos, y una piel hermosa con arrugas limitadas siempre se percibe como un signo de buena salud. Hay muchos ingredientes cosméticos que afirman tener efectos cosméticos, pero algunos de ellos son difíciles de formular, poco solubles en preparaciones cosméticas, inestables durante el almacenamiento del producto cosmético final, o presentan signos de toxicidad o incluso generan reacciones alérgicas cuando se usan de forma regular.It is increasingly important that human beings look healthy, and beautiful skin with limited wrinkles is always perceived as a sign of good health. There are many cosmetic ingredients that claim to have cosmetic effects, but some of them are difficult to formulate, poorly soluble in cosmetic preparations, unstable during storage of the final cosmetic product, or show signs of toxicity or even generate allergic reactions when used regularly. .
En el proceso de envejecimiento, aparecen diversos signos en la piel como resultado de una modificación de la estructura cutánea y de la función cutánea.In the aging process, various signs appear on the skin as a result of a change in skin structure and skin function.
Un signo característico del envejecimiento de la piel, independientemente de la etiología, es la pérdida de elasticidad como resultado de la producción reducida de colágeno y la degradación del colágeno existente. Los colágenos son proteínas estructurales fibrosas y un componente principal de la matriz extracelular del tejido conjuntivo. El colágeno contribuye a la resistencia y elasticidad de la piel humana, y su degradación conduce a cambios en el aspecto y/o función de la piel, tales como arrugas, incluyendo arrugas superficiales finas, y arrugas profundas gruesas, líneas, hendiduras, protuberancias, poros agrandados, cicatrización, descamación, pérdida de elasticidad de la piel, flacidez (incluyendo la hinchazón en el área de los ojos y la papada), pérdida de firmeza de la piel, propiedades de barrera comprometidas, decoloración (incluyendo las ojeras), manchas, palidez, pigmentación moteada, manchas de la edad, pecas, queratosis, diferenciación anormal, hiperqueratinización, elastosis, telangiectasia, y otros cambios histológicos en el estrato córneo, dermis, epidermis, sistema vascular de la piel. Además, existe una tendencia continua en la técnica de proporcionar ingredientes para el cuidado de la piel de origen natural para su aplicación a la piel.A characteristic sign of skin aging, regardless of etiology, is the loss of elasticity as a result of reduced collagen production and the degradation of existing collagen. Collagens are fibrous structural proteins and a major component of the extracellular matrix of connective tissue. Collagen contributes to the strength and elasticity of human skin, and its degradation leads to changes in the appearance and / or function of the skin, such as wrinkles, including fine surface wrinkles, and thick deep wrinkles, lines, indentations, bumps, enlarged pores, scarring, peeling, loss of skin elasticity, sagging (including puffiness in the eye and double chin area), loss of skin firmness, compromised barrier properties, discoloration (including dark circles), blemishes , paleness, mottled pigmentation, age spots, freckles, keratosis, abnormal differentiation, hyperkeratinization, elastosis, telangiectasia, and other histological changes in the stratum corneum, dermis, epidermis, vascular system of the skin. Furthermore, there is a continuing trend in the art to provide naturally derived skin care ingredients for application to the skin.
De este modo, existe una necesidad continua de ingredientes naturales y extractos de plantas naturales que tengan beneficios cosméticos, particularmente en lo que respecta al envejecimiento de la piel, que sean fáciles de formular, y seguros para el usuario final.Thus, there is a continuing need for natural ingredients and natural plant extracts that have cosmetic benefits, particularly with regard to aging skin, that are easy to formulate, and safe for the end user.
En la técnica anterior se ha descrito que los extractos de genciana, tales como, por ejemplo, los extractos de Gentiana acaulis, tienen efectos beneficiosos sobre la piel (documento FR2990350). Estos extractos de genciana, sin embargo, contienen cantidades significativas de genciopicrósido (CAS No. 20831-76-9), un glucósido secoiridoide del que se ha dado a conocer que tiene efectos mutagénicos, clastogénicos y dañinos para el ADN (K. Mustafayeva et al. /J. Nat. Prod. 2010, 73, 99-103). Por lo tanto, debido a problemas de seguridad, los extractos de genciana no se encuentran todavía en los productos cosméticos comerciales, y existe una necesidad continua de un extracto de genciana que no contenga genciopicrósido y que al mismo tiempo proporcione efectos cosméticos beneficiosos.Gentian extracts, such as, for example, Gentiana acaulis extracts, have been described in the prior art to have beneficial effects on the skin (FR2990350). These gentian extracts, however, contain significant amounts of genciopicroside (CAS No. 20831-76-9), a secoiridoid glycoside known to have mutagenic, clastogenic and DNA damaging effects (K. Mustafayeva et al. / J. Nat. Prod. 2010, 73, 99-103). Therefore, due to safety concerns, gentian extracts are not yet found in commercial cosmetic products, and there is a continuing need for a gentian extract that does not contain genciopicroside and that at the same time provides beneficial cosmetic effects.
Los presentes inventores han encontrado ahora una manera de proporcionar extractos de genciana libres de genciopicrósido que todavía exhiben excelentes beneficios cosméticos.The present inventors have now found a way to provide gentian extracts free of genciopicroside which still exhibit excellent cosmetic benefits.
Así, en una primera realización, la presente invención se refiere a un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida que está sustancialmente libre de genciopicrósido.Thus, in a first embodiment, the present invention relates to an extract of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida that is substantially free of genciopicroside.
En otra realización, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de un extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida que está sustancialmente libre de genciopicrósido, comprendiendo dicho procedimiento las etapas deIn another embodiment, the present invention relates to a process for the preparation of an extract of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida that is substantially free of genciopicroside, said process comprising the steps of
(i) Extraer las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida con una mezcla de agua/disolvente orgánico para obtener, después de la filtración de las partes aéreas, un extracto que comprende genciopicrósido, seguido de(i) Extract the aerial parts (flower, leaf, stem) of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida with a water / organic solvent mixture to obtain, after filtration of the aerial parts, an extract comprising genciopicroside, followed by
(ii) Eliminar el disolvente orgánico para obtener un extracto acuoso, seguido de(ii) Remove the organic solvent to obtain an aqueous extract, followed by
(iii) Hidrolizar el genciopicrósido en el extracto acuoso a genciopicral.(iii) Hydrolyze the genciopicroside in the aqueous extract to genciopicral.
Gentiana acaulis (genciana sin tallo) es una especie de planta con flores perteneciente a la familia de las gentianaceae, originaria del centro y sur de Europa, desde el este de España hasta los Balcanes, que crece especialmente en regiones montañosas, tales como los Alpes, Cevennes y Pirineos, a alturas de 800 - 3.000 metros. Gentiana acaulis (stemless gentian) is a species of flowering plant belonging to the Gentianaceae family, native to central and southern Europe, from eastern Spain to the Balkans, which grows especially in mountainous regions, such as the Alps. , Cevennes and Pyrenees, at altitudes of 800 - 3,000 meters.
Es una planta perenne, que crece hasta 2 cm de altura y 10 cm o más de anchura. Las hojas son siempre verdes, de 2 a 3,5 cm de largo, en una roseta basal, formando grupos. Las flores terminales en forma de trompeta son azules con gargantas longitudinales manchadas de color verde oliva. Crecen en un pedúnculo muy corto, de 3 a 6 cm de largo. El tallo de la flor a menudo no tiene hojas o tiene 1 o 2 pares de hojas. Le gusta el sol pleno, es totalmente resistente, y florece a finales de primavera y en verano. Esta planta, como otras de su género, se valora en el cultivo por el azul intenso inusualmente puro de sus flores. It is a perennial plant, growing up to 2 cm in height and 10 cm or more in width. The leaves are evergreen, 2 to 3.5 cm long, in a basal rosette, forming groups. The terminal trumpet-shaped flowers are blue with olive-green spotted longitudinal throats. They grow on a very short peduncle, 3 to 6 cm long. The flower stalk is often leafless or has 1 or 2 pairs of leaves. It likes full sun, is totally hardy, and blooms in late spring and summer. This plant, like others of its genus, is valued in cultivation for the unusually pure deep blue of its flowers.
Gentiana septemfida (genciana crestada o genciana de verano) es una especie de planta con flores de la familia Gentianaceae, originaria del Cáucaso y Turquía. Es una planta herbácea perenne de crecimiento bajo que alcanza entre 15 y 20 cm de alto por 30 cm de ancho, con hasta ocho flores de color azul brillante en forma de trompeta en verano, con interiores rayados. Requiere un suelo rico y húmedo y pleno sol. Gentiana septemfida (crested gentian or summer gentian) is a species of flowering plant in the Gentianaceae family, native to the Caucasus and Turkey. It is a low-growing perennial herbaceous plant that reaches 15-20 cm tall by 30 cm wide, with up to eight bright blue trumpet-shaped flowers in summer, with striped interiors. It requires rich, moist soil and full sun.
El termino “sustancialmente libre de”, como se usa aquí, se refiere a concentraciones de menos de 0,5%. Preferiblemente, la concentración de genciopicrósido es menor que 0,1%, más preferiblemente menor que 0,01%, lo más preferible menor que 0,001%. En particular, el extracto ya no contiene genciopicrósido detectable (todo el % dado para la concentración de genciopicrósido en el extracto es el % de área medido por UPLC (columna: columna de fase inversa C-18, eluyente: agua/acetonitrilo) y detección UV a 254 nm).The term "substantially free of", as used herein, refers to concentrations of less than 0.5%. Preferably, the genciopicroside concentration is less than 0.1%, more preferably less than 0.01%, most preferably less than 0.001%. In particular, the extract no longer contains detectable genciopicroside (all% given for the concentration of genciopicroside in the extract is the area% measured by UPLC (column: C-18 reversed phase column, eluent: water / acetonitrile) and detection UV at 254 nm).
En todas las realizaciones de la presente invención, los extractos preferiblemente también están sustancialmente libres de genciopicral, que se elimina del extracto acuoso obtenido en (iii) en una etapa de extracción posterior (iv).In all embodiments of the present invention, the extracts are preferably also substantially free of genciopicral, which is removed from the aqueous extract obtained in (iii) in a subsequent extraction step (iv).
En todas las realizaciones según la presente invención, la concentración de genciopicral en el extracto de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida según la presente invención es menor que 0,5%, lo más preferible menor que 0,1%, tal como en particular menor que 0,01%. La extracción se realiza hasta que el extracto ya no contiene genciopicral detectable (todos los % proporcionados para la concentración de genciopicral en el extracto son % de área medidos por UPLC (columna: columna de fase inversa C-18, eluyente: agua/acetonitrilo) y detección UV a 254 nm).In all embodiments according to the present invention, the concentration of genciopicral in the extract of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida according to the present invention is less than 0.5%, most preferably less than 0.1%, as in particular less than 0.01%. Extraction is performed until the extract no longer contains detectable genciopicral (all% provided for the concentration of genciopicral in the extract are% area measured by UPLC (column: C-18 reversed phase column, eluent: water / acetonitrile) and UV detection at 254 nm).
Preferiblemente, el disolvente orgánico utilizado para la extracción de las partes aéreas se selecciona del grupo que consiste en alcoholes de C1-C6, más preferiblemente de metanol, etanol e isopropanol, así como mezclas de los mismos. Lo más preferible, el disolvente orgánico es etanol.Preferably, the organic solvent used for the extraction of the aerial parts is selected from the group consisting of C 1 -C 6 alcohols, more preferably methanol, ethanol and isopropanol, as well as mixtures thereof. Most preferably, the organic solvent is ethanol.
En todas las realizaciones de la presente invención, la cantidad de agua en la mezcla de agua/disolvente orgánico se selecciona preferiblemente en el intervalo de 10-50% en peso, más preferiblemente en el intervalo de 30-50% en peso, tal como lo más preferible en el intervalo de 35 a 45% en peso, basado en el peso total de la mezcla de disolventes. In all embodiments of the present invention, the amount of water in the water / organic solvent mixture is preferably selected in the range of 10-50% by weight, more preferably in the range of 30-50% by weight, such as most preferably in the range of 35 to 45% by weight, based on the total weight of the solvent mixture.
La cantidad de mezcla de agua/disolvente orgánico utilizada para la extracción de las partes aéreas se selecciona preferiblemente en el intervalo de 1 a 50% en peso, preferiblemente en el intervalo de 5 a 30% en peso, lo más preferible en el intervalo de 5 a 15% en peso, tal como en el intervalo de 10 a 12% en peso, basado en el peso de las partes aéreas.The amount of the water / organic solvent mixture used for the extraction of the aerial parts is preferably selected in the range of 1 to 50% by weight, preferably in the range of 5 to 30% by weight, most preferably in the range of 5 to 15% by weight, such as in the range of 10 to 12% by weight, based on the weight of the aerial parts.
En una realización preferida, la mezcla de agua/disolvente orgánico contiene una cantidad eficaz de carbón activo, preferiblemente en una cantidad de 5-20% (p/p) basado en las partes de plantas secas utilizadas, más preferiblemente en una cantidad de 10-25% (p/p).In a preferred embodiment, the water / organic solvent mixture contains an effective amount of activated carbon, preferably in an amount of 5-20% (w / w) based on the parts of dry plants used, more preferably in an amount of 10 -25% (w / w).
En una realización preferida, las partes aéreas se cortan antes de la extracción.In a preferred embodiment, the aerial parts are cut prior to extraction.
En el caso del uso de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida (para obtener un extracto de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida), las partes secas de la planta se mezclan antes de la extracción. Alternativamente, los extractos respectivos se pueden preparar individualmente y mezclar después de la preparación para obtener el extracto que consiste en Gentiana acaulis y Gentiana septemfida. In the case of the use of Gentiana acaulis and Gentiana septemfida (to obtain an extract of Gentiana acaulis and Gentiana septemfida), the dry parts of the plant are mixed before extraction. Alternatively, the respective extracts can be prepared individually and mixed after preparation to obtain the extract consisting of Gentiana acaulis and Gentiana septemfida.
La extracción de las partes aéreas se realiza preferiblemente a una temperatura seleccionada en el intervalo de 30-60°C, preferiblemente en el intervalo de 45-55°C, lo más preferible a alrededor de 50°C durante un período de 1 a 5 h, preferiblemente de 1,5 a 3 h. Lo más preferido, la extracción se lleva a cabo durante 2 h a 50°C.The extraction of the aerial parts is preferably carried out at a temperature selected in the range of 30-60 ° C, preferably in the range of 45-55 ° C, most preferably around 50 ° C for a period of 1 to 5 h, preferably 1.5 to 3 h. Most preferably, the extraction is carried out for 2 h at 50 ° C.
La hidrólisis de genciopicrósido a genciopicral en el extracto acuoso se realiza preferiblemente usando una pglucosidasa (EC 3.2.1.21), más preferiblemente una p-glucosidasa unida a una fase sólida tal como una resina activada con epoxi, en particular una resina metacrílica/estireno activada con epoxi. Tales resinas están, por ejemplo, comercialmente disponibles con el nombre comercial Purolite. La hidrólisis se realiza preferiblemente hasta que la concentración de genciopicrósido esté dentro de los límites descritos anteriormente, preferiblemente sin embargo hasta que ya no sea detectable genciopicrósido por UPLC.The hydrolysis of genciopicroside to genciopicral in the aqueous extract is preferably carried out using a p-glucosidase (EC 3.2.1.21), more preferably a p-glucosidase bound to a solid phase such as an epoxy activated resin, in particular an activated methacrylic / styrene resin. with epoxy. Such resins are, for example, commercially available under the trade name Purolite. The hydrolysis is preferably carried out until the concentration of genciopicroside is within the limits described above, preferably however until genciopicroside is no longer detectable by UPLC.
La extracción de genciopicral se realiza preferiblemente utilizando un disolvente orgánico. Los disolventes orgánicos adecuados para la extracción de genciopicral pueden ser seleccionados fácilmente por un experto en la técnica, y abarcan éteres tales como éter dietílico o éter terc-butílico, cetonas tales como acetona, disolventes de éster tales como acetato de etilo, disolventes halogenados tales como cloroformo y diclorometano, así como disolventes de hidrocarburos aromáticos tales como tolueno y benceno. Sin embargo, un disolvente adecuado particular para la eliminación del genciopicral es el acetato de etilo, ya que tiene la ventaja de eliminar selectivamente el genciopicral sin eliminar los otros ingredientes activos (en particular los flavonoides) necesarios para lograr los efectos cosméticos deseados.Genciopicral extraction is preferably carried out using an organic solvent. Suitable organic solvents for genciopicral extraction can be readily selected by one skilled in the art, and include ethers such as diethyl ether or tert-butyl ether, ketones such as acetone, ester solvents such as ethyl acetate, halogenated solvents such such as chloroform and dichloromethane, as well as aromatic hydrocarbon solvents such as toluene and benzene. However, a particular suitable solvent for genciopicral removal is ethyl acetate, as it has the advantage of selectively removing genciopicral without removing the other active ingredients (particularly flavonoids) necessary to achieve the desired cosmetic effects.
La eliminación (evaporación) de los disolventes se puede realizar mediante métodos estándar en la técnica, por ejemplo, por evaporación en un dispositivo Rotavap a 50°C y atmósfera de 50 mbares. Removal (evaporation) of solvents can be accomplished by standard methods in the art, for example, by evaporation in a Rotavap device at 50 ° C and 50 mbar atmosphere.
En una realización preferida, los procedimientos según la presente invención contienen además una etapa (ii-1) que sigue a la etapa (ii), etapa la cual consiste en tratar un extracto acuoso concentrado obtenido en (ii) con etanol puro (es decir, ETOH abs.) para precipitar azúcares y/o proteínas, seguido de filtración y evaporación del etanol. Preferiblemente, la precipitación tiene lugar durante 1 h a 36 h, más preferiblemente durante 12 h-30 h, lo más preferible durante 18-28 h. La cantidad de etanol en esta etapa es preferiblemente alrededor de 2 a 8 veces la cantidad del extracto acuoso, preferiblemente alrededor de 4 a 6 veces. La cantidad de etanol usada para la precipitación es preferiblemente al menos 2 veces la cantidad del extracto acuoso, más preferiblemente la cantidad se selecciona de 4 a 6 veces la cantidad del extracto acuoso.In a preferred embodiment, the processes according to the present invention also contain a stage (ii-1) that follows stage (ii), which stage consists of treating a concentrated aqueous extract obtained in (ii) with pure ethanol (i.e. , ETOH abs.) To precipitate sugars and / or proteins, followed by filtration and evaporation of the ethanol. Preferably the precipitation takes place for 1 hr to 36 hr, more preferably 12 hr-30 hr, most preferably 18-28 hr. The amount of ethanol in this step is preferably about 2 to 8 times the amount of the aqueous extract, preferably about 4 to 6 times. The amount of ethanol used for the precipitation is preferably at least 2 times the amount of the aqueous extract, more preferably the amount is selected from 4 to 6 times the amount of the aqueous extract.
En una realización preferida, el o los extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención están estandarizados en el contenido de flavonoides calculado como isorientina. Los principales compuestos químicos activos del extracto consisten en: iridoides y seco-iridoides: swertiamarina, swerósido, gelidósido, triflorósido, y flavonoides: iso-orientina, iso-vitexina, isoorientin-4’-O-glucósido e iso-saponarina. In a preferred embodiment, the genciopicroside-free Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida extracts according to the present invention are standardized in flavonoid content calculated as isorientin. The main active chemical compounds of the extract consist of: iridoids and dry-iridoids: swertiamarin, sweroside, gelidoside, trifloroside, and flavonoids: iso-orientine, iso-vitexin, isoorientin-4'-O-glucoside and iso-saponarin.
En una realización particular ventajosa, el contenido de flavonoides en el extracto según la presente invención está en el intervalo de 1 a 6% en peso, preferiblemente en el intervalo de 2 a 5% en peso, basado en el extracto seco. In a particular advantageous embodiment, the content of flavonoids in the extract according to the present invention is in the range of 1 to 6% by weight, preferably in the range of 2 to 5% by weight, based on the dry extract.
El o los extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención se pueden utilizar como extracto acuoso o en forma seca (polvo).The genciopicroside-free Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida extracts according to the present invention can be used as aqueous extract or in dry form (powder).
En una realización preferida particular, el extracto de Gentiana libre de genciopicrósido según la presente invención es un extracto de una mezcla de las partes aéreas de Gentiana acaulis y Gentiana septemfida. Más preferiblemente, la mezcla consiste en una relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida comprendida entre 5/95 masa/masa y 50/50 masa/masa, incluso más preferiblemente, la relación de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 10/90 masa/masa y 30/70 masa/masa, lo más preferible, la relación de partes aéreas de Gentiana acaulis a Gentiana septemfida está comprendida entre 15/85 masa/masa y 25/75 masa/masa.In a particular preferred embodiment, the genciopicroside-free Gentiana extract according to the present invention is an extract of a mixture of the aerial parts of Gentiana acaulis and Gentiana septemfida. More preferably, the mixture consists of a ratio of Gentiana acaulis to Gentiana septemfida comprised between 5/95 mass / mass and 50/50 mass / mass, even more preferably, the ratio of Gentiana acaulis to Gentiana septemfida is comprised between 10/90 mass / mass and 30/70 mass / mass, most preferably, the ratio of aerial parts of Gentiana acaulis to Gentiana septemfida is between 15/85 mass / mass and 25/75 mass / mass.
Sorprendentemente, se ha encontrado que el uso del extracto de Gentiana acaulis y/o el extracto de Gentiana septemfida libres de genciopicrósido según la presente invención todavía exhibe los efectos cosméticos beneficiosos, más particularmente con respecto a los efectos anti-envejecimiento.Surprisingly, it has been found that the use of Genciopicroside-free Gentiana acaulis extract and / or Gentiana septemfida extract according to the present invention still exhibits beneficial cosmetic effects, more particularly with regard to anti-aging effects.
De este modo, la invención también se refiere a composiciones cosméticas que comprenden tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. Además, se refiere al uso cosmético de una composición que comprende tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido. También se refiere a un método de tratamiento cosmético, comprendiendo dicho método aplicar tópicamente sobre la piel de un individuo que busca tal tratamiento una composición cosmética que comprende tal extracto o extractos de Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida libres de genciopicrósido.Thus, the invention also relates to cosmetic compositions comprising such extract or extracts of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida free of genciopicroside. Furthermore, it relates to the cosmetic use of a composition comprising such extract or extracts of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida free of genciopicroside. It also relates to a method of cosmetic treatment, said method comprising applying topically to the skin of an individual seeking such treatment a cosmetic composition comprising such extract or extracts of Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida free of genciopicroside.
La expresión “composición cosmética”, como se usa aquí, se refiere a cualquier sustancia o preparación destinada a ponerse en contacto con cualquier parte de las superficies externas del cuerpo humano (es decir, la epidermis, el sistema capilar, las uñas, los labios, y los genitales externos), o con los dientes y las membranas mucosas de la cavidad oral, con el fin exclusiva o principalmente de limpiarlos, perfumarlos, modificar su aspecto, protegerlos, mantenerlos en buen estado, o corregir los olores corporales, salvo que dicha limpieza, perfumado, protección, cambio, conservación, o corrección tenga como único fin tratar o prevenir enfermedades.The term "cosmetic composition", as used herein, refers to any substance or preparation intended to come into contact with any part of the external surfaces of the human body (ie, the epidermis, the capillary system, the nails, the lips , and the external genitalia), or with the teeth and the mucous membranes of the oral cavity, with the sole or main purpose of cleaning, perfuming them, modifying their appearance, protecting them, keeping them in good condition, or correcting body odors, unless said cleaning, perfumed, protection, change, conservation, or correction has the sole purpose of treating or preventing diseases.
Preferiblemente, en todas las realizaciones de la presente invención, la composición cosmética según la presente invención comprende entre 0,001 y 20% en peso de un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, un extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos (basado en la materia seca). Más preferiblemente, la composición cosmética comprende entre 0,01 y 10% en peso, incluso más preferiblemente, comprende entre 0,01 y 5% en peso, de un extracto de Gentiana acaulis, extracto de Gentiana septemfida, o mezcla de los mismos.Preferably, in all embodiments of the present invention, the cosmetic composition according to the present invention comprises between 0.001 and 20% by weight of a Genciopicroside-free Gentiana acaulis extract, a Genciopicroside-free Gentiana septemfida extract, or a mixture of the themselves (based on dry matter). More preferably, the cosmetic composition comprises between 0.01 and 10% by weight, even more preferably, it comprises between 0.01 and 5% by weight, of a Gentiana acaulis extract, Gentiana septemfida extract, or a mixture thereof.
Según la presente invención, el extracto de Gentiana acaulis, el extracto Gentiana septemfida, o mezclas de los mismos, se pueden utilizar como tales o en forma encapsulada, por ejemplo en forma liposomal. Los liposomas se forman preferiblemente con lecitinas, con o sin adición de esteroles o fitoesteroles. La encapsulación de los ingredientes activos puede realizarse sola o junto con otros ingredientes activos. Otras realizaciones incluyen cápsulas sólidas o semisólidas destinadas a proteger el extracto de Gentiana acaulis, el extracto de Gentiana septemfida, o la mezcla de los mismos, de la degradación o para el suministro controlado. Las tecnologías de encapsulación adecuadas se describen, por ejemplo, en los documentos WO 0180823, WO 9903450, WO 9317784 o en Fragrance Journal (2001), 29(2), 83-90.According to the present invention, the Gentiana acaulis extract , the Gentiana septemfida extract, or mixtures thereof, can be used as such or in encapsulated form, for example in liposomal form. Liposomes are preferably formed with lecithins, with or without the addition of sterols or phytosterols. The encapsulation of the active ingredients can be done alone or together with other active ingredients. Other embodiments include solid or semi-solid capsules intended to protect Gentiana acaulis extract, Gentiana septemfida extract, or mixture thereof, from degradation or for controlled delivery. Suitable encapsulation technologies are described, for example, in WO 0180823, WO 9903450, WO 9317784 or in Fragrance Journal (2001), 29 (2), 83-90.
La composición cosmética preferida según la presente invención es una composición tópica, más preferiblemente comprende además un vehículo cosmético convencional, incluso más preferiblemente, es una preparación para el cuidado de la piel (cara y cuerpo), una preparación decorativa, una preparación de protección contra la luz, o una preparación funcional.The preferred cosmetic composition according to the present invention is a topical composition, more preferably it further comprises a conventional cosmetic vehicle, even more preferably, it is a preparation for skin care (face and body), a decorative preparation, a preparation for protection against light, or a functional preparation.
Ejemplos de preparaciones para el cuidado de la piel son, en particular, cremas faciales, aceites corporales, lociones corporales, geles corporales, cremas de tratamiento, ungüentos protectores de la piel, preparaciones para el afeitado, tales como espumas o geles de afeitar, geles hidratantes, pulverizaciones hidratantes, pulverizaciones corporales revitalizantes, geles para la celulitis, hidratantes faciales y/o corporales, limpiadores faciales y/o corporales, y mascarillas faciales. Los más preferidos son los productos para el cuidado facial.Examples of skin care preparations are, in particular, face creams, body oils, body lotions, body gels, treatment creams, skin-protecting ointments, shaving preparations, such as shaving foams or gels, moisturizing gels, moisturizing sprays, revitalizing body sprays, cellulite gels, facial and / or body moisturizers, facial and / or body cleansers, and facial masks. The most preferred are facial care products.
Las composiciones cosméticas tópicas preferidas según la invención son preparaciones para el cuidado de la piel, o preparaciones funcionales.Preferred topical cosmetic compositions according to the invention are skin care preparations, or functional preparations.
Ejemplos de preparaciones decorativas son, en particular, barras de labios, sombras de ojos, máscaras, formulaciones de maquillaje secas y húmedas, coloretes, polvos, y/o bronceadores.Examples of decorative preparations are, in particular, lipsticks, eye shadows, masks, dry and wet make-up formulations, blushes, powders, and / or bronzers.
Ejemplos de preparaciones funcionales son composiciones cosméticas que contienen otros ingredientes activos tales como hormonas, vitaminas, extractos de vegetales y/o frutas, ingredientes anti-envejecimiento, y/o ingredientes antimicrobianos (antibacterianos o antifúngicos), sin limitarse a ellos.Examples of functional preparations are cosmetic compositions containing other active ingredients such as hormones, vitamins, vegetable and / or fruit extracts, anti-aging ingredients, and / or antimicrobial ingredients (antibacterial or antifungal), without being limited thereto.
La composición cosmética para uso según la invención puede estar en forma de un líquido, loción, loción espesa, gel, crema, leche, ungüento, pasta, polvo, maquillaje, o una barrita de tubo sólida, y opcionalmente se puede envasar como un aerosol, y se puede proporcionar en forma de una mus tal como una mus en aerosol, una espuma o espumas de pulverización, pulverizaciones, barritas, un gel, un emplasto, un polvo, un limpiador, un jabón, o aerosoles o toallitas. Las composiciones tópicas preferidas comprenden una crema, una emulsión, un gel, un ungüento, una loción, una tintura, un espray, una mus, una composición limpiadora o espuma.The cosmetic composition for use according to the invention can be in the form of a liquid, lotion, thick lotion, gel, cream, milk, ointment, paste, powder, makeup, or a solid tube stick, and optionally can be packaged as an aerosol , and may be provided in the form of a mousse such as an aerosol mousse, a spray foam or foams, sprays, sticks, a gel, a plaster, a powder, a cleanser, a soap, or sprays or wipes. Preferred topical compositions comprise a cream, an emulsion, a gel, an ointment, a lotion, a tincture, a spray, a mousse, a cleansing composition, or a foam.
En otra realización, la composición cosmética para uso según la presente invención se caracteriza por que además comprende al menos un agente de filtrado de UV, y/o un hidratante, y/o un agente anti-envejecimiento, y/o un agente de tono de piel, y un vehículo cosmético convencional.In another embodiment, the cosmetic composition for use according to the present invention is characterized in that it further comprises at least one UV filtering agent, and / or a moisturizer, and / or an anti-aging agent, and / or a toning agent. of skin, and a conventional cosmetic vehicle.
Los vehículos cosméticos convencionales comprenden excipientes o diluyentes usados convencionalmente en composiciones tópicas. Las cantidades necesarias de adyuvantes y aditivos cosméticos y dermatológicos pueden ser determinadas fácilmente por el experto, basándose en el producto deseado.Conventional cosmetic carriers comprise excipients or diluents conventionally used in topical compositions. The necessary amounts of cosmetic and dermatological adjuvants and additives can be easily determined by the skilled person, based on the desired product.
Con respecto al tipo de composición cosmética tópica y la preparación de las preparaciones cosméticas tópicas, así como a otros aditivos adecuados, se puede consultar la bibliografía pertinente, por ejemplo, a Novak G.A., Die kosmetischen Praparate - Band 2, Die kosmetischen Praparate - Rezeptur, Rohstoffe, wissenschaftliche Grundlagen (Verlag für Chem. Industrie H. Ziolkowski KG, Augsburg).Regarding the type of topical cosmetic composition and the preparation of topical cosmetic preparations, as well as other suitable additives, the relevant literature can be consulted, for example, Novak GA, Die kosmetischen Praparate - Band 2, Die kosmetischen Praparate - Rezeptur , Rohstoffe, wissenschaftliche Grundlagen (Verlag für Chem. Industrie H. Ziolkowski KG, Augsburg).
Preferiblemente, las composiciones cosméticas tópicas utilizadas en la presente invención se encuentran en forma de suspensión o dispersión en disolventes o sustancias grasas, o alternativamente en forma de emulsión o microemulsión (en particular de tipo O/W o W/O, tipo O/W/O o W/O/W), emulsiones de PET, emulsiones múltiples, emulsiones Pickering, hidrogeles, geles alcohólicos, lipogeles, disoluciones monofásicas o multifásicas, o una dispersión vesicular, y otras composiciones habituales, que también se pueden aplicar por bolígrafos, como máscaras o como pulverizaciones. Las emulsiones también pueden contener tensioactivo o tensioactivos aniónicos, no iónicos, catiónicos o anfóteros.Preferably, the topical cosmetic compositions used in the present invention are in the form of a suspension or dispersion in solvents or fatty substances, or alternatively in the form of an emulsion or microemulsion (in particular of the O / W or W / O type, O / W type / O or W / O / W), PET emulsions, multiple emulsions, Pickering emulsions, hydrogels, alcohol gels, lipogels, monophasic or multiphasic solutions, or a vesicular dispersion, and other usual compositions, which can also be applied by ballpoint pens, as masks or as sprays. The emulsions may also contain anionic, nonionic, cationic or amphoteric surfactant (s).
Las composiciones cosméticas tópicas utilizadas en la presente invención también pueden contener adyuvantes y aditivos cosméticos habituales, tales como conservantes/antioxidantes, sustancias grasas/aceites, agua, disolventes orgánicos, siliconas, espesantes, suavizantes, emulsionantes, protectores solares, agentes antiespumantes, hidratantes, fragancias, tensioactivos, cargas, agentes secuestrantes, polímeros aniónicos, catiónicos, no iónicos o anfóteros, o mezclas de los mismos, propelentes, agentes acidulantes o alcalinizantes, tintes, colorantes, pigmentos o nanopigmentos, por ejemplo los adecuados para proporcionar un efecto fotoprotector bloqueando físicamente la radiación ultravioleta, o cualquier otro ingrediente normalmente formulado en composiciones cosméticas tópicas. Las cantidades necesarias de adyuvantes y aditivos cosméticos y dermatológicos pueden ser escogidas fácilmente por un experto en este campo, basándose en el producto deseado, y se ilustrarán en los ejemplos, sin limitarse a ellos. Los adyuvantes y aditivos cosméticos habituales tales como emulsionantes, espesantes, ingredientes tensioactivos, y formadores de película pueden presentar sinergias que pueden ser determinadas por el experto en el campo con ensayos habituales, o con las consideraciones habituales con respecto a la formulación de la composición cosmética tópica.The topical cosmetic compositions used in the present invention may also contain customary cosmetic adjuvants and additives, such as preservatives / antioxidants, fatty / oil substances, water, organic solvents, silicones, thickeners, softeners, emulsifiers, sunscreens, antifoaming agents, moisturizers, fragrances, surfactants, fillers, sequestering agents, anionic, cationic, nonionic or amphoteric polymers, or mixtures thereof, propellants, acidifying or alkalizing agents, dyes, colorants, pigments or nanopigments, for example those suitable to provide a photoprotective effect by blocking physically ultraviolet radiation, or any other ingredient normally formulated in topical cosmetic compositions. The necessary amounts of cosmetic and dermatological adjuvants and additives can easily be chosen by one skilled in the art, based on the desired product, and will be illustrated in the examples, without being limited thereto. The usual cosmetic adjuvants and additives such as emulsifiers, thickeners, surfactant ingredients, and film formers can exhibit synergies that can be determined by the person skilled in the field with routine tests, or with the usual considerations regarding the formulation of the cosmetic composition. topical.
Normalmente, las composiciones cosméticas tópicas también contienen ingredientes tensioactivos tales como emulsionantes, solubilizantes, y similares. Un emulsionante permite combinar de forma homogénea dos o más componentes inmiscibles. Además, el emulsionante actúa estabilizando la composición. Los solubilizantes que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero no se restringen a, PEG/PPG-18/18 dimeticona, aceite de ricino hidrogenado PEG-40, estearato de PEG-20, estearato de glicerilo PEG-30, y cocoato de glicerilo PEG-7. Los emulsionantes que se pueden usar en la presente invención para formar emulsiones/microemulsiones O/W, W/O, O/W/O o W/O/W incluyen oleato de sorbitán, sesquioleato de sorbitán, isoestearato de sorbitán, trioleato de sorbitán, diisoestearato de poliglicerilo-3, ésteres de poliglicerol de ácido oleico/isoesteárico, hexarricinolato de poliglicerilo-6, oleato de poliglicerilo-4, oleato de poliglicerilo-4/cocoato de propilenglicol PEG-8, oleamida DEA, miristato de TEA, estearato de TEA, estearato de magnesio, estearato de sodio, laurato de potasio, ricinoleato de potasio, cocoato de sodio, seboato de sodio, castorato de potasio, oleato de sodio, y mezclas de los mismos. Además, se pueden usar uno o más polímeros sintéticos como emulsionantes. Por ejemplo, copolímero de PVP eicoseno, polímero cruzado de acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30, copolímero de acrilatos/metacrilato de esteareth-20, copolímero de PEG-22/dodecilglicol, copolímero de PEG-45/dodecilglicol, y mezclas de los mismos. Los emulsionantes preferidos son copolímero de PVP eicoseno, polímero cruzado de acrilatos/acrilato de alquilo de C10-30, isoestearato de sorbitán PEG-20, isoestearato de sorbitán, y mezclas de los mismos. El uno o más emulsionantes están presentes en una cantidad total de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 20% en peso del peso total de la composición cosmética tópica para uso en la presente invención. Preferiblemente, se usa alrededor de 0,1% en peso a alrededor de 10% en peso de emulsionantes.Typically, topical cosmetic compositions also contain surface active ingredients such as emulsifiers, solubilizers, and the like. An emulsifier makes it possible to homogeneously combine two or more immiscible components. Furthermore, the emulsifier acts by stabilizing the composition. Solubilizers that can be used in the present invention include, but are not restricted to, PEG / PPG-18/18 dimethicone, PEG-40 hydrogenated castor oil, PEG-20 stearate, PEG-30 glyceryl stearate, and cocoate. of glyceryl PEG-7. Emulsifiers that can be used in the present invention to form O / W, W / O, O / W / O or W / O / W emulsions / microemulsions include sorbitan oleate, sorbitan sesquioleate, sorbitan isostearate, sorbitan trioleate , polyglyceryl-3 diisostearate, polyglycerol esters of oleic / isostearic acid, polyglyceryl hexarricinolate-6, polyglyceryl oleate-4, polyglyceryl oleate-4 / propylene glycol cocoate PEG-8, oleamide DEA, myristate from TEA, TEA myristate TEA, magnesium stearate, sodium stearate, potassium laurate, potassium ricinoleate, sodium cocoate, sodium tallowate, potassium castorate, sodium oleate, and mixtures thereof. In addition, one or more synthetic polymers can be used as emulsifiers. For example, PVP eicosne copolymer, cross polymer of C 10-30 alkyl acrylates / acrylate, steareth-20 acrylates / methacrylate copolymer, PEG-22 / dodecylglycol copolymer, PEG-45 / dodecylglycol copolymer, and mixtures thereof. Preferred emulsifiers are PVP eicosene copolymer, acrylates / C 10-30 alkyl acrylate crosspolymer, PEG-20 sorbitan isostearate, sorbitan isostearate, and mixtures thereof. The one or more emulsifiers are present in a total amount of from about 0.01% by weight to about 20% by weight of the total weight of the topical cosmetic composition for use in the present invention. Preferably, about 0.1% by weight to about 10% by weight of emulsifiers is used.
La fase lipídica de las composiciones cosméticas tópicas puede escogerse ventajosamente de: aceites minerales y ceras minerales; aceites tales como triglicéridos de ácido caprínico o ácido caprílico y aceite de ricino; aceites o ceras y otros aceites naturales o sintéticos, en una realización preferida ésteres de ácidos grasos con alcoholes, por ejemplo isopropanol, propilenglicol, glicerina, o ésteres de alcoholes grasos con ácidos carboxílicos o ácidos grasos; alquilbenzoatos; y/o aceites de silicona tales como dimetilpolisiloxano, dietilpolisiloxano, difenilpolisiloxano, ciclometiconas, y mezclas de los mismos.The lipid phase of the topical cosmetic compositions can advantageously be chosen from: mineral oils and mineral waxes; oils such as triglycerides of caprinic acid or caprylic acid and castor oil; oils or waxes and other natural or synthetic oils, in a preferred embodiment fatty acid esters with alcohols, for example isopropanol, propylene glycol, glycerin, or fatty alcohol esters with carboxylic acids or fatty acids; alkylbenzoates; and / or silicone oils such as dimethylpolysiloxane, diethylpolysiloxane, diphenylpolysiloxane, cyclomethicones, and mixtures thereof.
Las sustancias grasas ejemplares que pueden incorporarse en la fase oleosa de la emulsión, microemulsión, oleogel, hidrodispersión o lipodispersión de la composición cosmética tópica de la presente invención se escogen ventajosamente de ésteres de ácidos alquilcarboxílicos lineales o ramificados, saturados y/o insaturados, con 3 a 30 átomos de carbono, y alcoholes saturados y/o insaturados, lineales y/o ramificados con 3 a 30 átomos de carbono, así como ésteres de ácidos carboxílicos aromáticos y de alcoholes saturados y/o insaturados, lineales o ramificados de 3-30 átomos de carbono. Dichos ésteres se pueden seleccionar ventajosamente de palmitato de octilo, cocoato de octilo, isoestearato de octilo, dodecilmiristato de octilo, isononanoato de cetearilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, estearato de isopropilo, oleato de isopropilo, estearato de n-butilo, laurato de n-hexilo, oleato de n-decilo, estearato de isooctilo, estearato de isononilo, isononanoato de isononilo, palmitato de 2-etilhexilo, laurato de 2-etilhexilo, estearato de 2-hexildecilo, palmitato de 2-octildodecilo, heptanoato de estearilo, oleato de oleilo, erucato de oleilo, oleato de erucilo, erucato de erucilo, estearato de tridecilo, trimelitato de tridecilo, así como mezclas sintéticas, semisintéticas o naturales de tales ésteres, por ejemplo aceite de jojoba.Exemplary fatty substances that can be incorporated into the oil phase of the emulsion, microemulsion, oleogel, hydrodispersion or lipodispersion of the topical cosmetic composition of the present invention are advantageously chosen from saturated and / or unsaturated linear or branched alkylcarboxylic acid esters, with 3 to 30 carbon atoms, and saturated and / or unsaturated, linear and / or branched alcohols with 3 to 30 carbon atoms, as well as esters of aromatic carboxylic acids and of saturated and / or unsaturated, linear or branched alcohols of 3- 30 carbon atoms. Said esters can be advantageously selected from octyl palmitate, octyl cocoate, octyl isostearate, octyl dodecylmyristate, cetearyl isononanoate, isopropyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl stearate, isopropyl oleate, n-butyl stearate, laurate n-hexyl, n-decyl oleate, isooctyl stearate, isononyl stearate, isononyl isononanoate, 2-ethylhexyl palmitate, 2-ethylhexyl laurate, 2-hexyldecyl stearate, 2-octyldodecyl palmitate, stearyl heptanoate , oleyl oleate, oleyl erucate, erucil oleate, erucillus erucate, tridecyl stearate, tridecyl trimellitate, as well as synthetic, semi-synthetic or natural mixtures of such esters, for example jojoba oil.
Otros componentes grasos adecuados para uso en las composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención incluyen aceites polares tales como lecitinas y triglicéridos de ácidos grasos, a saber, ésteres de triglicerol de ácido carboxílico lineal o ramificado saturado y/o insaturado con 8 a 24 átomos de carbono, preferiblemente de 12 a 18 átomos de carbono, mientras que los triglicéridos de ácidos grasos se escogen preferiblemente de aceites sintéticos, semisintéticos o naturales (por ejemplo, cocoglicérido, aceite de oliva, aceite de girasol, aceite de soja, aceite de cacahuete, aceite de colza, aceite de almendras dulces, aceite de palma, aceite de coco, aceite de ricino, aceite de ricino hidrogenado, aceite de trigo, aceite de semilla de uva, aceite de nuez de macadamia, y otros); aceites apolares tales como hidrocarburos lineales y/o ramificados y ceras, por ejemplo aceites minerales, vaselina (petrolato); parafinas, escualano y escualeno, poliolefinas, poliisobutenos hidrogenados e isohexadecanos, las poliolefinas favorecidas son polidecenos; éteres de dialquilo tales como dicaprililéter; aceites de silicona lineales o cíclicos tales como preferiblemente ciclometiconas (octametilciclotetrasiloxano; cetildimeticona, hexametilciclotrisiloxano, polidimetilsiloxano, poli(metilfenilsiloxano), y mezclas de los mismos.Other suitable fatty components for use in the topical cosmetic compositions for use according to the present invention include polar oils such as lecithins and triglycerides of fatty acids, namely, triglycerol esters of linear or branched carboxylic acid saturated and / or unsaturated with 8 to 24 carbon atoms, preferably 12 to 18 carbon atoms, while the triglycerides of fatty acids are preferably chosen from synthetic, semi-synthetic or natural oils (for example, cocoglyceride, olive oil, sunflower oil, soybean oil, soybean oil peanut, rapeseed oil, sweet almond oil, palm oil, coconut oil, castor oil, hydrogenated castor oil, wheat oil, grape seed oil, macadamia nut oil, and others); nonpolar oils such as linear and / or branched hydrocarbons and waxes, for example mineral oils, petrolatum (petrolatum); paraffins, squalane and squalene, polyolefins, hydrogenated polyisobutenes and isohexadecanes, the favored polyolefins are polydecenes; dialkyl ethers such as dicaprylyl ether; linear or cyclic silicone oils such as preferably cyclomethicones (octamethylcyclotetrasiloxane; cetyldimethicone, hexamethylcyclotrisiloxane, polydimethylsiloxane, poly (methylphenylsiloxane), and mixtures thereof.
Otros componentes grasos que se pueden incorporar ventajosamente en composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención son isoeicosano; diheptanoato de neopentilglicol; dicaprilato/dicaprato de propilenglicol; succinato caprílico/cáprico/diglicerilo; caprilato/caprato de butilenglicol; lactato de alquilo de C12-13; tartrato de dialquilo de C12-13; triisoestearina; hexacaprilato/hexacaprato de dipentaeritritilo; monoisoestearato de propilenglicol; tricaprilina; dimetilisosorbida. Especialmente beneficioso es el uso de mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 e isoestearato de 2-etilhexilo, mezclas de benzoato de alquilo de C12-15 e isononanoato de isotridecilo, así como mezclas de benzoato de alquilo de C12-15, isoestearato de 2-etilhexilo e isononanoato de isotridecilo.Other fatty components that can be advantageously incorporated into topical cosmetic compositions for use according to the present invention are isoeicosan; Neopentyl glycol diheptanoate; propylene glycol dicaprylate / dicaprate; caprylic / capric / diglyceryl succinate; butylene glycol caprylate / caprate; C 12-13 alkyl lactate; C 12-13 dialkyl tartrate; triisostearin; hexacaprilat / dipentaerythrityl hexacaprate; propylene glycol monostearate; tricaprylin; dimethylisosorbide. Especially beneficial is the use of mixtures of C 12-15 alkyl benzoate and 2-ethylhexyl isostearate, mixtures of C 12-15 alkyl benzoate and isotridecyl isononanoate, as well as mixtures of C 12-15 alkyl benzoate. , 2-ethylhexyl isostearate and isotridecyl isononanoate.
La fase oleosa de las composiciones cosméticas tópicas para uso según la presente invención también puede contener ceras naturales vegetales o animales tales como cera de abeja, cera china, cera de abejorro y otras ceras de insectos, así como manteca de karité y manteca de cacao.The oil phase of the topical cosmetic compositions for use according to the present invention may also contain natural vegetable or animal waxes such as beeswax, Chinese wax, bumblebee wax and other insect waxes, as well as shea butter and cocoa butter.
Puede incorporarse un agente hidratante en una composición cosmética tópica usada según la presente invención para mantener la hidratación o rehidratar la piel. Los hidratantes que evitan que el agua se evapore de la piel al proporcionar una capa protectora se denominan emolientes. Además, un emoliente proporciona un efecto suavizante o calmante sobre la superficie de la piel, y generalmente se considera seguro para uso tópico. Los emolientes preferidos incluyen aceites minerales, lanolina, vaselina, trigliceraldehídos cápricos/caprílicos, colesterol, siliconas tales como dimeticona, ciclometicona, aceite de almendras, aceite de jojoba, aceite de aguacate, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de girasol, aceite de coco y aceite de semilla de uva, manteca de cacao, aceite de oliva, extractos de aloe, ácidos grasos tales como oleico y esteárico, alcoholes grasos tales como cetilo y hexadecilo (ENJAY), adipato de diisopropilo, ésteres de hidroxibenzoato, ésteres de ácido benzoico de alcoholes de C9-15, isononanoato de isononilo, éteres tales como polioxipropilen butil éteres y polioxipropilen cetil éteres, y benzoatos de alquilo de C12-15, y mezclas de los mismos. Los emolientes más preferidos son los ésteres de hidroxibenzoato, aloe vera, benzoatos de alquilo de C12-15, y mezclas de los mismos. Un emoliente está presente en una cantidad de alrededor de 1% en peso a alrededor de 20% en peso del peso total de la composición cosmética tópica. La cantidad preferida de emoliente es alrededor de 2% en peso a alrededor de 15% en peso, y lo más preferible alrededor de 4% en peso a alrededor de 10% en peso.A moisturizing agent can be incorporated into a topical cosmetic composition used in accordance with the present invention to maintain hydration or rehydrate the skin. Moisturizers that prevent water from evaporating from the skin by providing a protective layer are called emollients. Additionally, an emollient provides a smoothing or calming effect on the surface of the skin, and is generally considered safe for topical use. Preferred emollients include mineral oils, lanolin, petroleum jelly, capric / caprylic triglycerides, cholesterol, silicones such as dimethicone, cyclomethicone, almond oil, jojoba oil, avocado oil, castor oil, sesame oil, sunflower oil, oil coconut and grapeseed oil, cocoa butter, olive oil, aloe extracts, fatty acids such as oleic and stearic, fatty alcohols such as cetyl and hexadecyl (ENJAY), diisopropyl adipate, hydroxybenzoate esters, esters of C 9-15 alcohols benzoic acid, isononyl isononanoate, ethers such as polyoxypropylene butyl ethers and polyoxypropylene cetyl ethers, and C 12-15 alkyl benzoates, and mixtures thereof. The most preferred emollients are hydroxybenzoate esters, aloe vera, C 12-15 alkyl benzoates, and mixtures thereof. An emollient is present in an amount from about 1% by weight to about 20% by weight of the total weight of the topical cosmetic composition. The amount Preferred emollient is about 2% by weight to about 15% by weight, and most preferably about 4% by weight to about 10% by weight.
Los hidratantes que se unen al agua y la retienen en la superficie de la piel se denominan humectantes. Se pueden incorporar humectantes adecuados en una composición cosmética tópica de la presente invención, tales como glicerina, polipropilenglicol, polietilenglicol, ácido láctico, ácido pirrolidincarboxílico, urea, fosfolípidos, colágeno, elastina, ceramidas, lecitina, sorbitol, PEG-4, y mezclas de los mismos. Los hidratantes adecuados adicionales son hidratantes poliméricos de la familia de polisacáridos solubles en agua y/o hinchables y/o que gelifican con el agua tales como ácido hialurónico, quitosano y/o un polisacárido rico en fucosa que está disponible, por ejemplo, como Fucogel®1000 (número CAS 178463-23-5) por SOLABIA S. Uno o más humectantes están opcionalmente presentes en alrededor de 0,5% en peso a alrededor de 8% en peso en una composición cosmética tópica de la presente invención, preferiblemente alrededor de 1% en peso a alrededor de 5% en peso.Moisturizers that bind to and retain water on the skin's surface are called humectants. Suitable humectants can be incorporated into a topical cosmetic composition of the present invention, such as glycerin, polypropylene glycol, polyethylene glycol, lactic acid, pyrrolidine carboxylic acid, urea, phospholipids, collagen, elastin, ceramides, lecithin, sorbitol, PEG-4, and mixtures of the same. Additional suitable moisturizers are polymeric moisturizers from the water-soluble and / or swellable and / or water-gelling polysaccharide family such as hyaluronic acid, chitosan and / or a fucose-rich polysaccharide which is available, for example, as Fucogel ®1000 (CAS number 178463-23-5) by SOLABIA S. One or more humectants are optionally present at about 0.5% by weight to about 8% by weight in a topical cosmetic composition of the present invention, preferably around from 1% by weight to about 5% by weight.
La fase acuosa de las composiciones cosméticas tópicas preferidas para uso en la presente invención puede contener los aditivos cosméticos habituales tales como alcoholes, especialmente alcoholes inferiores, preferiblemente etanol y/o isopropanol, dioles o polioles inferiores y sus éteres, preferiblemente propilenglicol, glicerina, etilenglicol, éter monoetílico o éter monobutílico de etilenglicol, éter monometílico o monoetílico o monobutílico de propilenglicol, éter monometílico o monoetílico de dietilenglicol, y productos análogos, polímeros, estabilizadores de espuma; electrolitos, y especialmente uno o más espesantes. Sin embargo, preferiblemente las composiciones cosméticas tópicas para uso en la presente invención están libres de etanol, más preferiblemente están libres de alcoholes, y lo más preferible están libres de disolventes orgánicos, ya que tales compuestos pueden causar irritación de la piel.The aqueous phase of the preferred topical cosmetic compositions for use in the present invention may contain the usual cosmetic additives such as alcohols, especially lower alcohols, preferably ethanol and / or isopropanol, diols or lower polyols and their ethers, preferably propylene glycol, glycerin, ethylene glycol , ethylene glycol monoethyl or monobutyl ether, propylene glycol monomethyl or monoethyl or monobutyl ether, diethylene glycol monomethyl or monoethyl ether, and the like, polymers, foam stabilizers; electrolytes, and especially one or more thickeners. However, preferably the topical cosmetic compositions for use in the present invention are free of ethanol, more preferably they are free of alcohols, and most preferably they are free of organic solvents, as such compounds can cause skin irritation.
Los espesantes que pueden usarse en composiciones cosméticas tópicas para uso en la presente invención para ayudar a hacer que la consistencia de un producto sea adecuada incluyen carbómero, dióxido de silicio, silicatos de magnesio y/o aluminio, cera de abejas, ácido esteárico, polisacáridos de alcohol estearílico y sus derivados tales como goma de xantano, hidroxipropilcelulosa, poliacrilamidas, polímeros cruzados de acrilato, preferiblemente un carbómero, tal como carbopole® de tipo 980, 981, 1382, 2984, 5984, solos o mezclas de los mismos.Thickeners that can be used in topical cosmetic compositions for use in the present invention to help make the consistency of a product suitable include carbomer, silicon dioxide, magnesium and / or aluminum silicates, beeswax, stearic acid, polysaccharides. of stearyl alcohol and its derivatives such as xanthan gum, hydroxypropyl cellulose, polyacrylamides, acrylate crosspolymers, preferably a carbomer, such as carbopole® type 980, 981, 1382, 2984, 5984, alone or mixtures thereof.
Agentes neutralizantes adecuados que se pueden incluir en la composición cosmética tópica de la presente invención para neutralizar componentes tales como por ejemplo un emulsionante o un mejorador/estabilizador de espuma incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos alcalinos tales como hidróxido de sodio y potasio; bases orgánicas tales como dietanolamina (DEA), trietanolamina (TEA), aminometilpropanol, y mezclas de los mismos; aminoácidos tales como arginina y lisina, y cualquier combinación de cualquiera de los anteriores. El agente neutralizante puede estar presente en una cantidad de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 8% en peso en la composición cosmética tópica de la presente invención, preferiblemente 1% en peso a alrededor de 5% en peso.Suitable neutralizing agents that can be included in the topical cosmetic composition of the present invention to neutralize components such as for example an emulsifier or a foam enhancer / stabilizer include, but are not limited to, alkali hydroxides such as sodium and potassium hydroxide; organic bases such as diethanolamine (DEA), triethanolamine (TEA), aminomethylpropanol, and mixtures thereof; amino acids such as arginine and lysine, and any combination of any of the above. The neutralizing agent may be present in an amount from about 0.01% by weight to about 8% by weight in the topical cosmetic composition of the present invention, preferably 1% by weight to about 5% by weight.
La adición de electrolitos a la composición cosmética tópica para uso según la presente invención puede ser necesaria para cambiar el comportamiento de un emulsionante hidrófobo. De este modo, las emulsiones/microemulsiones para uso según esta invención pueden contener preferiblemente electrolitos de una o varias sales que incluyen aniones tales como cloruro, sulfatos, carbonato, borato y aluminato, sin estar limitado a ellos. Otros electrolitos adecuados pueden estar basados en aniones orgánicos tales como, pero sin limitarse a, lactato, acetato, benzoato, propionato, tartrato y citrato. Como cationes, se seleccionan preferiblemente amonio, alquilamonio, metales alcalinos o alcalinotérreos, iones de magnesio, hierro o cinc. Las sales especialmente preferidas son cloruro de potasio y sodio, sulfato de magnesio, sulfato de cinc, y mezclas de los mismos. Los electrolitos pueden estar presentes en una cantidad de alrededor de 0,01% en peso a alrededor de 8% en peso en la composición cosmética tópica de la presente invención. The addition of electrolytes to the topical cosmetic composition for use according to the present invention may be necessary to change the behavior of a hydrophobic emulsifier. Thus, the emulsions / microemulsions for use according to this invention may preferably contain electrolytes of one or more salts including anions such as chloride, sulfates, carbonate, borate and aluminate, without being limited thereto. Other suitable electrolytes may be based on organic anions such as, but not limited to, lactate, acetate, benzoate, propionate, tartrate, and citrate. As cations, ammonium, alkylammonium, alkali or alkaline earth metals, magnesium, iron or zinc ions are preferably selected. Especially preferred salts are sodium and potassium chloride, magnesium sulfate, zinc sulfate, and mixtures thereof. Electrolytes may be present in an amount from about 0.01% by weight to about 8% by weight in the topical cosmetic composition of the present invention.
También es un objeto de la presente invención proporcionar una composición cosmética que comprende un extracto de Gentiana acaulis, un extracto de Gentiana septemfida, o una mezcla de los mismos, y un vehículo cosmético convencional. El vehículo cosmético preferido para la presente invención es glicerina.It is also an object of the present invention to provide a cosmetic composition comprising a Gentiana acaulis extract , a Gentiana septemfida extract, or a mixture thereof, and a conventional cosmetic carrier. The preferred cosmetic vehicle for the present invention is glycerin.
La presente invención también se refiere al uso de una composición cosmética como se describe anteriormente para la aplicación cosmética a la piel de un ser humano. La aplicación cosmética es preferiblemente tópica, y se realiza mediante la aplicación al menos una vez al día, por ejemplo, dos o tres veces al día en la piel, preferiblemente en la cara.The present invention also relates to the use of a cosmetic composition as described above for cosmetic application to the skin of a human. The cosmetic application is preferably topical, and is carried out by application at least once a day, for example two or three times a day on the skin, preferably on the face.
La aplicación cosmética según la presente invención se selecciona de combatir el envejecimiento cutáneo y en particular la aparición de arrugas, incluyendo inhibir la inflamación de las células cutáneas, retardar el envejecimiento, estimular la síntesis de proteínas por las células de la dermis y la epidermis, proteger las células cutáneas frente al estrés oxidativo, estimular la síntesis de glicosaminoglicanos por las células de la dermis, inhibir la colagenasa y/o elastasa en las células de la piel. Más particularmente, se selecciona de la inducción de la síntesis de colágeno IV, aumento de la producción de hialuronano, disminución de la caspasa-3, inducción de citocinas proinflamatorias. The cosmetic application according to the present invention is selected to combat skin aging and in particular the appearance of wrinkles, including inhibiting inflammation of skin cells, delaying aging, stimulating protein synthesis by cells of the dermis and epidermis, protect skin cells against oxidative stress, stimulate glycosaminoglycan synthesis by dermis cells, inhibit collagenase and / or elastase in skin cells. More particularly, it is selected from the induction of collagen IV synthesis, increased hyaluronan production, decreased caspase-3, induction of pro-inflammatory cytokines.
Además, la presente invención se refiere a un método de tratamiento cosmético, comprendiendo dicho método aplicar tópicamente sobre la piel de un individuo que busca dicho tratamiento una composición cosmética que comprende un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, un extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos como se define en todas las realizaciones anteriores de la invención. Furthermore, the present invention relates to a method of cosmetic treatment, said method comprising applying topically to the skin of an individual seeking said treatment a cosmetic composition comprising an extract of Gentiana acaulis free of genciopicroside, an extract of Gentiana septemfida free of genciopicroside, or a mixture thereof as defined in all previous embodiments of the invention.
La expresión “una cantidad eficaz” se refiere a una cantidad necesaria para obtener un efecto fisiológico. El efecto fisiológico se puede lograr mediante una dosis de aplicación o mediante aplicaciones repetidas. La dosis administrada puede variar, por supuesto, dependiendo de factores conocidos, tales como la frecuencia del tratamiento y el efecto deseado, y se puede ajustar por un experto en la técnica.The term "an effective amount" refers to an amount necessary to obtain a physiological effect. The physiological effect can be achieved by one application dose or by repeated applications. The administered dose can, of course, vary depending on known factors, such as the frequency of treatment and the desired effect, and can be adjusted by one skilled in the art.
La presente invención también se refiere a un método como se describe anteriormente, en el que se aplica de alrededor de 0,2 mg a alrededor de 200 mg de un extracto de Gentiana acaulis libre de genciopicrósido, extracto de Gentiana septemfida libre de genciopicrósido, o una mezcla de los mismos, como se define en todas las realizaciones anteriores de la invención, por centímetro cuadrado de piel por día.The present invention also relates to a method as described above, in which about 0.2 mg to about 200 mg of a genciopicroside-free Gentiana acaulis extract, genciopicroside-free Gentiana septemfida extract, or a mixture thereof, as defined in all previous embodiments of the invention, per square centimeter of skin per day.
La utilidad de los agentes para combatir el envejecimiento de la piel se puede determinar mediante métodos conocidos en la técnica.The usefulness of the agents to combat aging of the skin can be determined by methods known in the art.
La invención se ilustra adicionalmente mediante los Ejemplos que siguen, sin limitarse a ellos.The invention is further illustrated by the Examples which follow, without being limited thereto.
EJEMPLOSEXAMPLES
Ejemplo 1: Composición para el cuidado de la pielExample 1: Skin care composition
El pH de la formulación se ajusta a alrededor de pH 6,5.The pH of the formulation is adjusted to around pH 6.5.
Ejemplo 2: Preparación de un extracto de genciana libre de genciopicrósido/genciopicral:Example 2: Preparation of a gentian extract free of genciopicroside / genciopicral:
a- Preparación de la enzima unida en fase sólida (etapa conocida por la bibliografía)a- Preparation of the enzyme bound in solid phase (step known from the literature)
La enzima p-glucosidasa (EC 3.2.1.21) (100 mg) se incubó con 15,4 mg de glucosa disuelta en 82 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) a temperatura ambiente durante 1 hora.The enzyme p-glucosidase (EC 3.2.1.21) (100 mg) was incubated with 15.4 mg of glucose dissolved in 82 ml of buffer (pH = 7.75) at room temperature for 1 hour.
La resina Purolite ECR 8214F se mezcla por separado con 30 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) durante 5 minutos, y después se filtra (etapa de lavado).Purolite ECR 8214F resin is mixed separately with 30 ml of buffer (pH = 7.75) for 5 minutes, and then filtered (washing step).
Después, la resina filtrada se añadió a la disolución amortiguadora que contenía la enzima a 25°C, y se mezcló suavemente durante 24 horas. Después de 24 horas, la disolución se filtró, y la resina resultante se lavó con 60 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75) y dos veces con 60 ml de agua desionizada. Después, la resina se mezcló en 80 ml de disolución amortiguadora (pH = 7,75), y se añadió 1 ml de BSA (bis(trimetilsilil)acetamida). La suspensión se mezcló suavemente durante 24 horas. Después de 24 horas, la resina se filtró y se lavó dos veces con 100 ml de agua desionizada.Then, the filtered resin was added to the buffer containing the enzyme at 25 ° C, and mixed gently for 24 hours. After 24 hours, the solution was filtered, and the resulting resin was washed with 60 ml of buffer (pH = 7.75) and twice with 60 ml of deionized water. The resin was then mixed in 80 ml of buffer (pH = 7.75), and 1 ml of BSA (bis (trimethylsilyl) acetamide) was added. The suspension was mixed gently for 24 hours. After 24 hours, the resin was filtered and washed twice with 100 ml of deionized water.
La disolución amortiguadora es una mezcla de 14,4 ml de disolución de KH2PO4 (68 g/500 ml) y 86,6 ml de disolución de K2HPO4 (87,1 g/500 ml).The buffer is a mixture of 14.4 ml of KH 2 PO 4 solution (68 g / 500 ml) and 86.6 ml of K 2 HPO 4 solution (87.1 g / 500 ml).
b- Preparación del extracto de genciana libre de genciopicrósido: transformación del genciopicrósido en genciopicral en el extracto de genciana.b- Preparation of the gentian extract free of genciopicroside: transformation of the genciopicroside into genciopicral in the gentian extract.
b-1) Un extracto de 50 g de las partes aéreas (flor, hoja, tallo) de plantas alpinas raras de la especie Gentiana (Gentiana acaulis y/o Gentiana septemfida) se preparó como sigue: las plantas secas cortadas se extrajeron dos veces con 10 veces (p/p) de etanol al 60% (con carbón activo) durante 2 horas a 50°C. A continuación, el extracto se filtró y se concentró en un dispositivo Rotavapor a 50°C y una atmósfera de 50 mbares para obtener una disolución acuosa concentrada. A este concentrado se le añadió etanol puro (5 veces la cantidad en peso de la disolución acuosa) para precipitar azúcares y proteínas; después, tras la filtración, el etanol se eliminó una vez más en un dispositivo Rotavapor dando como resultado alrededor de 54 g de extracto acuoso que comprende alrededor de 36% (% de área) de genciopicrósido (determinado por UPLC: columna de fase inversa C18, eluyente: agua/acetonitrilo, detección: 254 nm) que se usó en la etapa b-2) subsiguiente:b-1) An extract of 50 g of the aerial parts (flower, leaf, stem) of rare alpine plants of the Gentiana species ( Gentiana acaulis and / or Gentiana septemfida) was prepared as follows: the cut dried plants were extracted twice with 10 times (w / w) 60% ethanol (with activated carbon) for 2 hours at 50 ° C. The extract was then filtered and concentrated on a Rotavapor device at 50 ° C and 50 mbar atmosphere to obtain a concentrated aqueous solution. Pure ethanol (5 times the amount by weight of the aqueous solution) was added to this concentrate to precipitate sugars and proteins; then, after filtration, the ethanol was removed once more in a Rotavapor device resulting in about 54 g of aqueous extract comprising about 36% (area%) genciopicroside (determined by UPLC: C18 reverse phase column, eluent: water / acetonitrile, detection: 254nm) used in subsequent step b-2):
b-2) La disolución acuosa obtenida como se describe en b-1) se colocó en un matraz a 28°C (baño), y la enzima (5 g) preparada en la etapa a) (polvo blanco) se añadió para extraer la disolución. La reacción se realizó durante unos días, y se siguió mediante UPLC. Se controló de cerca el porcentaje de transformación del genciopicrósido. Si fue necesario, se añadió una cantidad suplementaria de enzima unida. Cuando el genciopicrósido se transformó completamente en genciopicral, la reacción se terminó mediante filtración y posterior lavado de la resina filtrada con 50 ml de agua desionizada. La disolución de lavado se recogió junto con la disolución principal.b-2) The aqueous solution obtained as described in b-1) was placed in a flask at 28 ° C (bath), and the enzyme (5 g) prepared in step a) (white powder) was added to extract dissolution. The reaction was carried out for a few days, and was followed by UPLC. The percentage of transformation of the genciopicroside was closely monitored. If necessary, a supplemental amount of bound enzyme was added. When the genciopicroside was completely transformed into genciopicral, the reaction was terminated by filtration and subsequent washing of the filtered resin with 50 ml of deionized water. The wash solution was collected together with the main solution.
La fase sólida unida con la enzima se lavó y se secó (liofilizó) para reutilizarla.The enzyme-bound solid phase was washed and dried (lyophilized) for reuse.
c- Eliminación del genciopicral.c- Elimination of genciopicral.
La disolución obtenida en la etapa b-2) (100 ml) se extrajo dos veces con una cantidad igual de acetato de etilo (100 ml). Después, se separaron las fases orgánica y acuosa. La disolución acuosa se analizó mediante UPLC: columna de fase inversa C18, eluyente: agua/acetonitrilo, detección: 254 nm) para determinar si el genciopicral se eliminó por completo. Si fue necesario, se realizó una tercera extracción con 100 ml de acetato de etilo. La fase acuosa obtenida se destiló a vacío para eliminar las trazas restantes de acetato de etilo. La disolución acuosa finalmente obtenida se puede utilizar para formulación directamente o para fabricación de extracto seco.The solution obtained in step b-2) (100 ml) was extracted twice with an equal amount of ethyl acetate (100 ml). Then the organic and aqueous phases were separated. The aqueous solution was analyzed by UPLC: C18 reverse phase column, eluent: water / acetonitrile, detection: 254 nm) to determine if the genciopicral was completely removed. If necessary, a third extraction was carried out with 100 ml of ethyl acetate. The aqueous phase obtained was vacuum distilled to remove the remaining traces of ethyl acetate. The aqueous solution finally obtained can be used for formulation directly or for manufacturing dry extract.
Los estudios se realizaron con los extractos de genciana individual o como mezclas de ambas plantas en una relación de Gentiana acaulis/Gentiana septemfida, 15/85 masa/masa o 25/75 masa/masa.The studies were carried out with individual gentian extracts or as mixtures of both plants in a Gentiana acaulis / Gentiana septemfida ratio, 15/85 mass / mass or 25/75 mass / mass.
Ejemplo 3: Efecto de un extracto de genciana sobre la producción de hialuronano:Example 3: Effect of a gentian extract on the production of hyaluronan:
Se usó extracto de genciana (Gentiana acaulis/Gentiana septemfida, 25/75 m/m).Gentian extract ( Gentiana acaulis / Gentiana septemfida, 25/75 m / m) was used.
Se sembraron fibroblastos humanos normales (NHF) P2 1 a 5000 células/pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos (Nunclon) en MEM FCS al 10% (Pan Biotech). Después de tres días de crecimiento, se añadió la disolución de extracto de genciana en medio sin FCS, y se incubaron las células durante tres días más. El hialuronano segregado en el medio de crecimiento se midió usando un kit de ensayo de hialuronano (K-1200, Echelon, Salt Lake City, Utah). Normal human fibroblasts (NHF) P2 1 were seeded at 5000 cells / well in 96-well cell culture plates (Nunclon) in MEM 10% FCS (Pan Biotech). After three days of growth, the gentian extract solution in medium without FCS was added, and the cells were incubated for a further three days. The hyaluronan secreted in the growth medium was measured using a hyaluronan assay kit (K-1200, Echelon, Salt Lake City, Utah).
En comparación con las células no tratadas, mostramos un aumento del 26 ± 4,9% en la producción de hialuronano con extracto de genciana al 0,001%, y TGFbeta1 (10 ng/ml), que sirvió como control positivo, se estimuló en un 45,6 ± 1,1%.Compared with untreated cells, we showed a 26 ± 4.9% increase in hyaluronan production with 0.001% gentian extract, and TGFbeta1 (10 ng / ml), which served as a positive control, was stimulated in a 45.6 ± 1.1%.
Ejemplo 4: Efecto de un extracto de genciana sobre la reparación de CPD (dímero de ciclobutano pirimidina):Example 4: Effect of a gentian extract on the repair of CPD (cyclobutane pyrimidine dimer):
Se sembraron un promedio de 400000 células en placas de 6 pocillos. Después de una noche de incubación en medio de crecimiento, las células se lavaron dos veces con PBS, se recubrieron con 1 ml de PBS, y se irradiaron con 20 mJ/cm2 de UVB. Posteriormente, las células se incubaron con medio de crecimiento y extracto de genciana. En puntos de tiempo definidos, las células se tripsinizaron, y el ADN se aisló usando un kit de aislamiento de ADN de Qiagen. Se colocaron 200 ng de ADN en placas de ELISA, y los CPDs se detectaron usando un anticuerpo biotinilado anti-CPD de Kamiya a una dilución 1:2000. El extracto consiste en Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m.An average of 400,000 cells were seeded in 6-well plates. After an overnight incubation in growth medium, cells were washed twice with PBS, coated with 1 ml of PBS, and irradiated with 20 mJ / cm2 UVB. Subsequently, the cells were incubated with growth medium and gentian extract. At defined time points, cells were trypsinized, and DNA was isolated using a Qiagen DNA isolation kit. 200 ng of DNA was placed on ELISA plates, and CPDs were detected using a biotinylated anti-CPD antibody from Kamiya at a 1: 2000 dilution. The extract consists of Gentiana acaulis and Gentiana septemfida, 25/75 m / m.
Estos resultados en la tabla a continuación muestran un aumento del 40% de la reparación de CPD después de 4 horas con extracto de genciana al 0,1%.These results in the table below show a 40% increase in CPD repair after 4 hours with 0.1% gentian extract.
Ejemplo 5: Efecto de un extracto de genciana sobre citocinas proinflamatorias y las MMP:Example 5: Effect of a gentian extract on pro-inflammatory cytokines and MMPs:
Material y métodoMaterial and method
Medida de citocinas y de las MMPMeasurement of cytokines and MMPs
Se cultivaron queratinocitos humanos normales (NHK) P4 1 hasta subconfluencia en medio de crecimiento CnT-07 (CELLnTEC, Berna, Suiza). Después de la irradiación con 100 mJ/cm2 UVB con un simulador de luz solar (SOL500RF, Dr. Hoenle, Alemania), las células se incubaron nuevamente durante 24 h en CnT-07 que contiene 0,1% de extracto de Gentiana (Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m) o vehículo. Se recogió el sobrenadante del cultivo celular a lo largo del tiempo, y se congeló a -20C hasta que se midieron las citocinas y las MMP en un dispositivo Luminex100. Las medidas de Luminex100 se realizaron utilizando un kit multiplex hecho a medida (Panomics, Italia) según las instrucciones del fabricante.Normal human keratinocytes (NHK) P4 1 were cultured to subconfluence in CnT-07 growth medium (CELLnTEC, Bern, Switzerland). After irradiation with 100 mJ / cm2 UVB with a sunlight simulator (SOL500RF, Dr. Hoenle, Germany), the cells were incubated again for 24 h in CnT-07 containing 0.1% extract of Gentiana ( Gentiana acaulis and Gentiana septemfida, 25/75 m / m) or vehicle. Cell culture supernatant was collected over time, and frozen at -20C until cytokines and MMPs were measured on a Luminex100 device. Luminex100 measurements were made using a custom made multiplex kit (Panomics, Italy) according to the manufacturer's instructions.
Se encontró una inhibición de la liberación de citocinas proinflamatorias IL-1 b, IL-8, TNFa, MMP-1 como se destaca en la siguiente tablaAn inhibition of the release of pro-inflammatory cytokines IL-1 b, IL-8, TNFa, MMP-1 was found as highlighted in the following table
Tabla con resultados para el ejemplo 8: % de inhibición de la liberación de citocinas de células irradiadas con UVB tratadas con extracto de genciana al 0,1% en comparación con células irradiadas con UV, pero sin tratar.Table with results for Example 8:% inhibition of cytokine release from UVB irradiated cells treated with 0.1% gentian extract compared to UV irradiated but untreated cells.
Ejemplo 6: Reducción de la producción intracelular de especies reactivas de oxígeno por un extracto de Genciana:Example 6: Reduction of the intracellular production of reactive oxygen species by a Gentian extract:
Detección de especies reactivas de oxígeno (ROS)Detection of reactive oxygen species (ROS)
La generación de ROS intracelulares se determinó utilizando la sonda específica de ROS H2DCF-DA (Molecular Probes). La oxidación de H2DCF-DA al producto fluorescente DCF sirve como indicador del grado general de estrés oxidativo intracelular.The generation of intracellular ROS was determined using the ROS H 2 DCF-DA specific probe (Molecular Probes). The oxidation of H 2 DCF-DA to the fluorescent product DCF serves as an indicator of the general degree of intracellular oxidative stress.
Se sembraron fibroblastos humanos primarios a 5000 células/pocillo en placas de cultivo celular de 96 pocillos en DMEM, FCS al 10%, Pen/Strep al 1%. Después de 24 h, se añadió el extracto de Gentiana (Gentiana acaulis y Gentiana septemfida, 25/75 m/m) a la disolución, y las células se incubaron durante 72 h adicionales. Después del tratamiento con el compuesto, incubamos las células con H2DCF-DA (25 mM) y Hoechst 33258 (1 ug/ml) en HBSS/HEPES al 2,5% durante 45 min a 37°C en la oscuridad. Lavamos las células dos veces con HBSS/HEPES para eliminar cualquier H2DCF-DA que no ha sido internalizado, y las sometimos H2O2 al 30%. La producción de ROS se midió en un lector de placas fluorescentes (SpectraMax GeminiXS) después de 30 min (a 520 nM), y se normalizó al contenido de ADN.Primary human fibroblasts were seeded at 5000 cells / well in 96-well cell culture plates in DMEM, 10% FCS, 1% Pen / Strep. After 24 h, the Gentiana extract ( Gentiana acaulis and Gentiana septemfida, 25/75 m / m) was added to the solution, and the cells were incubated for an additional 72 h. After compound treatment, we incubated cells with H 2 DCF-DA (25 mM) and Hoechst 33258 (1 ug / ml) in 2.5% HBSS / HEPES for 45 min at 37 ° C in the dark. We washed the cells twice with HBSS / HEPES to remove any H 2 DCF-DA that had not been internalized, and subjected them to 30% H 2 O 2. ROS production was measured on a fluorescent plate reader (SpectraMax GeminiXS) after 30 min (at 520 nM), and normalized to DNA content.
En este estudio mostramos, en comparación con células no tratadas, una reducción del 30% de la producción de ROS intracelular en las células tratadas con extracto de genciana al 0,05%.In this study we show, compared to untreated cells, a 30% reduction in intracellular ROS production in cells treated with 0.05% gentian extract.
Todos estos datos demuestran un efecto positivo sobre el fotoenvejecimiento y el antienvejecimiento in vitro. All these data demonstrate a positive effect on photoaging and anti-aging in vitro.
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