ES2819234T3

ES2819234T3 - Formulaciones de partículas para la administración de agonistas de TLR y antígenos

Info

Publication number: ES2819234T3
Application number: ES14754426T
Authority: ES
Inventors: Mark Mitchnick; Andrew Loxley; Garry Gwozdz
Original assignee: Particle Sciences Inc
Current assignee: Lubrizol Life Science Health Inc
Priority date: 2013-02-25
Filing date: 2014-02-24
Publication date: 2021-04-15
Anticipated expiration: 2034-02-24
Also published as: EP2958551A4; WO2014130921A1; US20160000905A1; EP2958551B1; EP2958551A1

Abstract

Una composición que comprende un agonista de TLR5, uno o más antígenos y una primera pluralidad de partículas a las que el agonista de TLR5 y los uno o más antígenos se unen mediante interacciones no covalentes, estando dichos uno o más antígenos y dicho agonista de TLR5 en un relación que aumenta la inmunogenicidad frente a los uno o más antígenos y disminuye la reactogenicidad frente al agonista de TLR5, donde la relación del agonista de TLR5 al antígeno es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso.

Description

DESCRIPCIÓN

Formulaciones de partículas para la administración de agonistas de TLR y antígenos

Esta solicitud de patente reivindica el beneficio de prioridad de la solicitud provisional de Estados Unidos n.° de serie 61/768.617, depositada el 25 de febrero de 2013.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones que comprenden uno o más agonistas del receptor tipo Toll (TLR) y uno o más antígenos adsorbidos o unidos a las mismas partículas. En una realización, la presente invención se refiere a una composición de vacuna en la que un antígeno y un agonista de TLR se han adsorbido o unido a la misma partícula. Dichas composiciones proporcionan vacunas mejoradas con inmunogenicidad mejorada y/o reactogenicidad reducida tras la administración.

Antecedentes de la invención

El documento WO 2008/121926 describe formulaciones farmacéuticas que contienen partículas comprendidas por material orgánico hidrófobo co-disuelto o co-disperso con un ingrediente farmacéutico activo.

La patente de Estados Unidos n.° 5.716.637 describe nanoemulsiones de partículas que comprenden un núcleo líquido compuesto por un lípido que es sólido o líquido a temperatura ambiente, el cual es estabilizado por una envoltura de fosfolípidos.

El documento WO 2004/069227 describe un proceso para la preparación de una dispersión estable de partículas sólidas, en un medio acuoso que comprende la combinación de un compuesto de pirrolcarboxamida, un disolvente orgánico miscible en agua y un inhibidor con una fase acuosa que comprende agua y un estabilizador. Bodmeier y col. (J. Microencapsulation 9(1): 89-98 (1992)) describen la formación de micropartículas mediante una técnica de dispersión en estado fundido, en la que la masa fundida fármaco-cera se emulsionó en una fase acuosa calentada seguido de enfriamiento para formar las micropartículas.

Mauricio A Arias y col. se refieren a las nanopartículas de cera de carnauba indicando que mejoran las fuertes respuestas inmunitarias celulares y humorales sistémicas y de la mucosa respecto al antígeno gp140 del VIH (Vaccine, vol. 29, n.° 6, 2010, páginas 1258-1269).

El documento W02010003009 se refiere a composiciones que incluyen un antígeno seleccionado, un ligando de TLR4 y un ligando de TLR7/TLR8, donde el antígeno y los ligandos de TLR están encapsulados en nanopartículas. La co administración de tanto un ligando de TLR4 como un ligando de TLR7/TLR8 da como resultado la inducción sinérgica del humor y la inmunidad celular, como lo demuestra un aumento en la producción de citocinas proinflamatorias, un aumento en el número de células T efectoras y T de memoria CD8+, un aumento en el título de anticuerpos específicos de antígeno, un aumento en afinidad de anticuerpos, un aumento en la proliferación de células B vírgenes y/o una mejora significativa en la persistencia de anticuerpos y respuestas de células T. Las composiciones y procedimientos proporcionados en esta invención pueden usarse para estimular una respuesta inmunitaria tal como una respuesta inmunitaria a un patógeno o a un tumor.

Resumen de la invención

Existe una necesidad de proporcionar composiciones y composiciones para su uso en procedimientos para administrar combinaciones de agonista de TLR y antígeno donde la relación de agonista de TLR y antígeno se pueda alterar para mejorar la inmunogenicidad del antígeno y/o reducir la reactogenicidad del agonista de TLR.

Un aspecto de la presente invención se refiere a composiciones y composiciones para su uso en procedimientos para producir y administrar composiciones que comprenden una relación de agonistas de TLR y antígenos que mejoran o aumentan la tolerabilidad de la vacuna mientras retienen la actividad de activación de TLR. Las composiciones y composiciones para su uso en los procedimientos de la presente invención implican el uso de partículas como un medio para presentar antígenos y agonistas de TLR en relaciones ajustables que permiten la optimización de la inmunogenicidad frente al antígeno y/o la reducción de la reactogenicidad frente al agonista de TLR. El uso de partículas en las composiciones y composiciones para su uso en los procedimientos de la presente invención también permite que los antígenos no proteináceos y las preparaciones de antígeno de vacuna purificadas existentes se combinen con agonistas de TLR en relaciones ajustadas para la optimización para optimizar la inmunogenicidad frente al antígeno y/o reducir la reactogenicidad frente al agonista de TLR.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición que comprende un agonista de TLR5, uno o más antígenos y una primera pluralidad de partículas a las que se unen el agonista de TLR5 y los uno o más antígenos mediante interacciones no covalentes, estando dichos uno o más antígenos y dicho agonista de TLR5 en una relación que aumenta la inmunogenicidad frente a los uno o más antígenos y disminuye la reactogenicidad frente al agonista de TLR5, donde la relación del agonista de TLR5 al antígeno es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso.

El agonista de TLR5 y uno o más antígenos se adsorben o se unen a la misma partícula.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a procedimientos para fabricar estas composiciones de partículas, expuestos en las reivindicaciones 8 y 9 de las reivindicaciones adjuntas.

Otro aspecto más de la presente invención se refiere a composiciones para su uso en procedimientos de uso de estas composiciones de partículas para invocar, aumentar y/o mejorar una respuesta inmunitaria frente al antígeno.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 es un gráfico de la capacidad de ajuste de la carga superficial de las partículas de la invención mediante la selección de emulsionantes o tensioactivos particulares en la fabricación de las partículas. Las barras en la figura etiquetadas de la A a la O representan los siguientes emulsionantes/tensioactivos: A = polímero de silicona catiónica; B = gluconato de isoestearilamidopropildimetilamina; C = bromuro de cetiltrimetilamino (CTAB); D = bromuro de cetilpiridinio; E = cloruro de dimetildialquilamonio; F = manano; G = Brij 700; H = Brij 58; I = heparina de sodio; J = goma acacia; K = laurilsulfosuccinato de disodio; L = laurilsulfato de sodio; M = dodecilbencenosulfonato de sodio; N = octilsulfosuccinato de disodio; y O = behenato de trietanolamonio.

Descripción detallada de la invención

La presente descripción se refiere a composiciones de partículas donde uno o más agonistas de TLR y uno o más antígenos se unen o adsorben a la misma partícula en relaciones ajustables para optimizar la inmunogenicidad frente al antígeno y/o reducir la reactogenicidad frente al agonista de TLR. Por consiguiente, las composiciones de partículas de la presente invención permiten relaciones de agonista de TLR a antígeno que son ajustables y difieren de las relaciones 1:1 requeridas por fusión de un agonista de TLR con un antígeno como en la técnica anterior. Las composiciones comprenden partículas donde la relación del agonista de TLR5 a los uno o más antígenos es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso. La descripción menciona que la composición puede comprender el agonista de TLR5 y los uno o más antígenos ubicados en diferentes pluralidades de partículas y la relación de agonista de TLR a antígeno es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso o de molécula a molécula.

Por receptores de tipo Toll o TLR, como se usa en esta invención, se entiende que se refiere a la familia de proteínas receptoras que son homólogas a la proteína Toll de Drosophila melanogaster . Los TLR son proteínas receptoras de señalización transmembrana de tipo I caracterizadas por un dominio de repetición rico en leucina extracelular y un dominio intracelular homólogo a un receptor de interleucina 1. Los TLR incluyen TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, ^tLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11 y TLR12.

Por "agonista de TLR", para los fines de la presente invención, se entiende un agente que tiene afinidad y estimula la actividad fisiológica de un TLR normalmente estimulado por sustancias de origen natural. Para TLR1, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, lipopéptidos de triacilo, glicolípidos, lipopéptidos y lipoproteínas. Para TLR2, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, ácido lipoteicoico, HSP70 y zymosan. Para TLR3, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, ARN bicatenario, poli I:C lipopolisacárido, fibrinógeno y diversas proteínas de choque térmico. Para TLR4, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de sulfato de heparina y ácido hialurónico, níquel y diversos opioides. Para TLR5, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, flagelina. Para TLR6, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, varios lipopéptidos de diacilo e imidazoquinolina. Para TLR7, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, análogos de guanosina tales como loxorribina, bropirimina y ARN monocatenario. Para TLR8, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, pequeños compuestos sintéticos y ARN monocatenario. Para TLR9, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, ADN oligodesoxinucleótido con CpG no metilado. Para TLR10, los ejemplos de agonistas incluyen, pero no se limitan a, profilina. En la presente descripción, el agonista de TLR tiene afinidad y estimula la actividad fisiológica de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11 o TLR12. En la presente invención, el agonista de TLR tiene afinidad y estimula la actividad fisiológica de TLR5.

Cualquier antígeno que provoque una respuesta inmunitaria en un ser humano puede usarse en las composiciones de partículas de la presente invención en combinación con un agonista de TLR. Por antígeno, se entiende que incluye, pero no se limita a, proteínas, péptidos, carbohidratos, glicoproteínas, lipopéptidos y antígenos de subunidades. Los ejemplos de antígenos usados en las composiciones de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, antígenos virales tales como antígenos virales de influenza (por ejemplo, proteína hemaglutinina (HA) de influenza A, B y/o C donde la proteína hemaglutinina viral de la influenza puede ser al menos un miembro seleccionado de entre el grupo que consiste en H1, H2, H3, H5, H7 y H9, proteína de la matriz 2 (M2), neuraminidasa), antígenos del virus respiratorio sincitial (VRS) (por ejemplo, proteína de fusión, glicoproteína de unión), papiloma viral (por ejemplo, virus del papiloma humano (VPH), tal como una proteína E6, proteína E7, proteína L1 y proteína L2), herpes simple, virus de la rabia y antígenos virales de flavivirus (por ejemplo, antígenos virales del dengue, antígenos virales del Nilo Occidental), antígenos virales de la hepatitis, incluyendo antígenos de VHB y HC. Los antígenos usados en las composiciones de la presente invención también incluyen, pero no se limitan a, antígenos bacterianos, incluidos los de Streptococcus pneumonía, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus, Clostridium difficile y patógenos gramnegativos entéricos que incluyen Escherichia, Salmonella, Shigella, Yersinia, Klebsiella, Pseudomonas, Enterobacter, Serratia, Proteus. Los antígenos usados en las composiciones de la presente invención también incluyen, pero no se limitan a, antígenos fúngicos que incluyen los de Candida spp., Aspergillus spp., Crytococcus neoformans, Coccidiodes spp., Histoplasma capsulatum, Pneumocystis carinii, Paracoccidiodes brasiliensis, Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, y Plasmodium malariae. Los antígenos para las vacunas contra el VPH incluirían E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7 y el extremo N-terminal de HPVL2 solos o en combinación. Los antígenos para las vacunas de VRS incluyen, pero no se limitan a, proteínas F o G del VRS, solas o en combinación. Los antígenos para las vacunas contra la malaria incluyen, pero no se limitan a, la proteína CSP1, otros antígenos de la etapa preeritrocítica y antígenos que bloquean la transmisión (tales como, Pfs25, Pfs48 y homólogos) solos o en combinación. Los antígenos usados en la presente invención también incluyen antígenos tumorales y/o antígenos asociados a tumores tales como, pero no se limitan a, PSA, CEA, Mart-1, gp100, TRP-1, MAGE, NY-ESO-1, PAP, Mucina-1 y PSMA. Las realizaciones de la presente invención también incluyen partículas con un agonista de TLR y antígeno o antígenos del dengue adsorbidos en las mismas. La enfermedad del dengue es causada por cuatro flavivirus relacionados serológicamente y transmitidos por mosquitos conocidos como DEN 1 (también denominados en esta invención Den 1), DEN 2 (Den-2), DEN 3 (Den 3) o DEN 4 (Den 4). Las composiciones de la invención incluyen secuencias de antígeno tales como las secuencias descritas en WO 2009/128949 (PCT/US2009/002427), Izquierdo y col., 2008-814669, Mota y col., 2005, Khanam y col., 2006, Pattnaik y col., 2007, Tripathi y col., 2008; A. Zulueta, y col., Virus Research 121 (2006) 65-73. En una realización, el antígeno es T1BT, una polioxima, construida por ligación quimioselectiva, mediante enlaces de oxima, de un núcleo tetrarramificado con un módulo peptídico que contiene epítopos de células B y un epítopo de células T universal de la proteína circumsporozoito de Plasmodium falciparum .

Se pueden usar varias partículas en las composiciones de partículas de la presente invención.

En una realización, se usan lípidos para preparar las partículas. Los ejemplos de lípidos que pueden usarse incluyen, pero no se limitan a, cera de carnauba, cera de abejas, alcohol behenílico (docosanol), alcohol cetílico, triglicéridos microcristalinos tales como dynasan 118 (tristearato de glicerilo) y cera de polietileno. En una realización, el lípido es cera de carnauba que incluye una carnauba que comprende ésteres alifáticos, diésteres de ácido 4-hidroxicinámico, ácidos u>-hidroxicarboxílicos y alcoholes de ácido graso.

Sin embargo, como entenderá el experto en la materia al leer esta descripción, las partículas también pueden estar comprendidas por no lípidos.

En una realización, las composiciones de partículas comprenden además un tensioactivo. Los tensioactivos que pueden usarse en las composiciones de partículas incluyen tensioactivos catiónicos, aniónicos y no iónicos. Los ejemplos de tensioactivos incluyen, pero no se limitan a, bromuro de cetiltriamonio (CTAB), metilsulfato de N-[1-(2,3-dioleoiloxi)]-N,N,N-trimetilamonio propano DOTAP, bromuro de cetilpiridinio(CPB), tensioactivos de polisorbato tal como Tween 20, Tween 80 (monoloaurato de polioxietilen sorbitán), éter estearílico de polietileno tal como Brij 70, estearato de sodio, miristato de sodio, dodecilsulfato de sodio, dioctilsulfosuccinato de sodio tal como a Ot y combinaciones de los mismos. El tensioactivo puede presentarse en un nivel de aproximadamente 0,01 % a aproximadamente 10 %, o de aproximadamente 0,05 % a aproximadamente 5 % o de aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 2 % o de aproximadamente 0,5 % a aproximadamente 2 % o de aproximadamente 1,0 % a aproximadamente 2,0 %.

En una realización, la carga superficial de la partícula se altera para optimizar la unión del agonista de TLR y/o antígeno uniendo restos cargados o ajustando el tipo de tensioactivo y/o matriz usado en la producción de las partículas. La figura 1 demuestra cómo se puede alterar la carga superficial de las partículas en función de la selección del tensioactivo.

El tamaño de partícula es preferiblemente inferior a 1 pm con las partículas que varían en tamaño entre aproximadamente 10 nm y 1000 nm o entre aproximadamente 20 nm y aproximadamente 900 nm o de aproximadamente 30 nm a aproximadamente 800 nm o de aproximadamente 40 nm a aproximadamente 700 nm o de aproximadamente 50 nm a aproximadamente 650 nm o de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 750 nm o de aproximadamente 200 nm a aproximadamente 750 nm o de aproximadamente 300 nm a aproximadamente 750 nm o de aproximadamente 300 nm a aproximadamente 650 nm o de aproximadamente 400 nm a aproximadamente 750 nm o de aproximadamente 400 nm a aproximadamente 660 nm o de aproximadamente 500 nm a aproximadamente 750 nm o de aproximadamente 500 nm a aproximadamente 650 nm. La forma de las partículas puede ser, pero no se limita a, esferas, esferoides alargados y achatados, formas cilíndricas e irregulares.

Las composiciones de la presente invención pueden comprender además una estructura diana tal como, pero no se limita a, un anticuerpo o Fabs. Tales restos de direccionamiento también están unidos a la partícula.

La invención se refiere además a procedimientos para fabricar estas composiciones de partículas.

En una realización, el procedimiento comprende un proceso de fusión-emulsificación-enfriado en el que se añade una solución de tensioactivo acuoso caliente a un lípido fundido, como se establece en la reivindicación 8 de las reivindicaciones adjuntas. A continuación, la mezcla se sonica y se enfría para producir partículas lipídicas solidificadas. En una realización, la solución de tensioactivo acuoso caliente comprende una solución de tensioactivo catiónico que se añade a una cera fundida comprendida por ésteres alifáticos, diésteres de ácido 4-hidroxicinámico, ácidos u>-hidroxicarboxílicos y alcoholes de ácido graso. Un ejemplo no limitante de una cera fundida es la cera de carnauba amarilla (CA) comprendida por 40 % de ésteres alifáticos, 21 % de diésteres de ácido 4-hidroxicinámico, 13 % de ácidos u>-hidroxicarboxílicos y 12 % de alcoholes de ácido graso. Este proceso produce una partícula lipídica solidificada que tiene moléculas de tensioactivo orientadas de tal manera que sus cabezas están en la superficie externa de la partícula mientras que las colas hidrófilas están hacia el interior de la partícula.

La presente descripción se refiere además a procedimientos para preparar formulaciones inmunológicas que comprenden preparar una solución de tensioactivo acuoso caliente, añadir el tensioactivo caliente a un lípido fundido, añadir esta mezcla a una fase acuosa, enfriar la mezcla y añadir agonista o agonistas de TLR y/o antígeno o antígenos. En las composiciones de partículas de la presente invención, el o los antígenos y/o el o los agonistas de TLR son absorbidos o unidos a las partículas por interacciones no covalentes, tales como interacciones hidrófilas o electrostáticas.

Las composiciones de partículas de la invención proporcionan composiciones inmunológicas que son más potentes que el antígeno solo. Las composiciones de partículas de la invención también pueden proporcionar composiciones inmunológicas en las que el agonista de TLR provoca una respuesta mediada por TLR, pero en la que la reactogenicidad del agonista de TLR se reduce en comparación con el agonista de TLR en solución cuando se administra.

Las composiciones y procedimientos de la presente divulgación emplean cualquier agonista de TLR en combinación con un antígeno. En la presente invención, el agonista de TLR es un agonista de TLR-5. En esta realización, un agonista de TLR-5 preferido es la flagelina y en particular la flagelina tipo 2 de Salmonella typhimurium, sin embargo, se puede usar cualquiera de una variedad de flagelinas capaces de unirse y desencadenar t LR-5 para esta invención, incluidas las flagelinas modificadas como se describe en el documento WO 2009/128950.

A diferencia de los procedimientos de la técnica anterior de combinar un agonista de TLR con un antígeno que requería una correspondencia uno a uno de agonista a antígeno, la presente invención se refiere a composiciones que no requieren una correspondencia uno a uno del agonista al antígeno. En las presentes composiciones, el agonista de TLR está presente en una cantidad menor que el antígeno cuando tanto el agonista como el antígeno están acoplados a la partícula. La relación de agonista de TLR a antígeno puede ser inferior a aproximadamente 1:2 o, por ejemplo, puede ser inferior a aproximadamente 1:3 o 1:4 o 1:5 o 1:6 o 1:7 o 1:8 o 1:9 o 1:10 o de aproximadamente 1:20 o 1:30 o 1:50 o 1:100 o 1:250 o 1:500 o 1:1000 o 1:10.000 como se mide por el número de moléculas de agonista de TLR y el número de moléculas de antígeno. Además, la relación de agonista de TLR a antígeno es inferior a 1:2 o puede ser inferior a aproximadamente 1:3 o 1:4 o 1:5 o 1:6 o 1:7 o 1:8 o 1:9 o 1:10 o de aproximadamente 1:20 o 1:30 o 1:50 o 1:100 o 1:250 o 1:500 o 1:1000 o 1:10.000 como se mide mediante una comparación de peso a peso del agonista de TLR con el antígeno. Por el contrario, las composiciones de la presente descripción incluyen aquellas composiciones donde el antígeno está presente en una cantidad menor que el agonista de TLR. Por ejemplo, la relación de antígeno al agonista de TLR puede ser inferior a aproximadamente 1:2 o 1:3 o 1:4 o 1:5 o 1:6 o 1:7 o 1:8 o 1:9 o 1:10 o de aproximadamente 1:20 o 1:30 o 1:50 o 1:100 o 1:250 o 1:500 o 1:1000 o 1:10.000 como se mide por el número de moléculas de agonista de TLR y el número de moléculas de antígeno. Además, la relación de antígeno a agonista de TLR puede ser inferior a aproximadamente 1:2 o 1:3 o 1:4 o 1:5 o 1:6 o 1:7 o 1:8 o 1:9 o 1:10 o de aproximadamente 1:20 o 1:30 o 1:50 o 1:100 o 1:250 o 1:500 o 1:1000 o 1:10.000 como se mide por una comparación de peso a peso del agonista de TLR con el antígeno.

En la presente invención, la relación de agonista de TLR5 a antígeno es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso.

Las composiciones de la presente invención pueden comprender más de un tipo de antígeno, tanto si el antígeno es del mismo organismo o es de un organismo diferente. Las composiciones de la presente invención pueden comprender más de un tipo de agonista de TLR, tal como más de un tipo de flagelina del mismo organismo o de diferentes organismos.

La dosis de agonista de TLR y antígeno puede seleccionarse para optimizar la respuesta inmunogénica mientras se intenta mantener baja la reactogenicidad. Al menos una dosis seleccionada de entre el grupo que consiste en una dosis de 0,1 |jg, dosis de 0,5 |jg, dosis de 1 |jg, dosis de 2 |jg, dosis de 3 |jg, dosis de 4 |jg, dosis de 5 |jg, dosis de 6 |jg, dosis de 7 jig, dosis de 8 jig, dosis de 9 jig, dosis de 10 jig, dosis de 15 jig, dosis de 20 jig, dosis de 25 jig y dosis de 30 jig puede ser suficiente para inducir una respuesta inmunitaria en seres humanos. La dosis del agonista de TLR y el antígeno puede ser administrada al ser humano dentro de un intervalo de dosis que incluye desde aproximadamente 0,1 jg a aproximadamente 500 jg, 1 jg a aproximadamente 100 jg, 1 jg a aproximadamente 50 jg, de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 30 jg, de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 25 jg, de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 20 jg, de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 15 jg, de aproximadamente 1 jg a aproximadamente 10 jg, de aproximadamente 2 jg a aproximadamente 50 jg, 2 jg a aproximadamente 30 jg, de aproximadamente 2 jg a aproximadamente 20 jg, de aproximadamente 2 jg a aproximadamente 10 jg, de aproximadamente 2 jg a aproximadamente 8 jg, de aproximadamente 3 jg a aproximadamente 50 jg, 3 jg a aproximadamente 30 jg, de aproximadamente 3 jg a aproximadamente 20 jg, de aproximadamente 3 jg a aproximadamente 10 jg, de aproximadamente 3 jg a aproximadamente 8 jg, de aproximadamente 3 jg a aproximadamente 5 jg, de aproximadamente 4 jg a aproximadamente 50 jg, 4 jg a aproximadamente 30 jg, de aproximadamente 4 jg a aproximadamente 20 jg, de aproximadamente 4 jg a aproximadamente 10 jg, de aproximadamente 4 jg a aproximadamente 8 jg, de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 50 jg, 5 jg a aproximadamente 30 jg, de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 20 jg, de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 10 jg, de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 9 jg, y de aproximadamente 5 jg a aproximadamente 8 jg.

Con respecto a las composiciones que comprenden un agonista de TLR y antígeno, la dosificación se refiere a la cantidad de proteína total presente en la vacuna dada al ser humano donde parte de la cantidad de proteína se relaciona con el antígeno y parte de la cantidad de proteína se relaciona con el agonista de TLR.

Las composiciones inmunogénicas para su uso según la presente descripción pueden ser administradas como una dosis inyectable estándar de 0,01-2,0 ml y contienen de aproximadamente 0,1 jg a aproximadamente 50 jg de antígeno. En una descripción preferida de las composiciones inmunogénicas para su uso según la presente invención es una dosis inyectable de 0,1 ml y contiene aproximadamente 1 jg de antígeno, 1,4 jg de cera de carnauba y 0,14 jg de tensioactivo. El volumen de la vacuna puede estar entre 0,05 y 1,0 ml o entre aproximadamente 0,05 y 0,5 ml o aproximadamente 0,10 a aproximadamente 0,25 ml. Se puede proporcionar una dosis de vacuna según la presente invención en un volumen menor que la dosificación convencional. Las dosis de volumen bajo según la presente invención están convenientemente por debajo de 0,5 ml, normalmente por debajo de 0,3 ml y generalmente no inferior a 0,01 ml.

Por tanto, la presente invención proporciona composiciones y composiciones para su uso en procedimientos para optimizar la antigenicidad (es decir, aumentar la antigenicidad) y/o la reactogenicidad (es decir, disminuir la reactogenicidad) de las combinaciones de agonista de TLR/antígeno como compuestas en partículas individuales, incluyendo combinaciones de agonistas de TLR/antígeno que han sido poco inmunogénicas y/o altamente reactogénicas. Las composiciones de partículas inmunogénicas de la presente descripción que comprenden uno o más agonistas de TLR y uno o más antígenos pueden ser más inmunogénicas que la combinación de agonista de TLR y antígeno como proteína de fusión. Las composiciones de partículas inmunogénicas de la presente invención que comprenden un agonista de TLR5 y uno o más antígenos pueden ser más inmunogénicas que la combinación de agonista de TLR y antígeno como proteína de fusión. Por ejemplo, la inmunogenicidad del antígeno medida por la respuesta del anticuerpo al antígeno puede ser mayor para las composiciones de partículas de la presente invención que el antígeno solo en solución o como una fusión de agonista de TLR-antígeno en más del 10 % o más de aproximadamente 20 % o más de aproximadamente 30 % o más de aproximadamente 40 % o más de aproximadamente 50 % o más de aproximadamente 60 % o más de aproximadamente 70 % o más de aproximadamente 80 % o más de aproximadamente 90 % o más de aproximadamente 100 % o más de aproximadamente 200 % o más de aproximadamente 500 % o más de aproximadamente 1000 %. Las composiciones de partículas inmunogénicas que comprenden uno o más agonistas de TLR y uno o más antígenos pueden ser menos reactogénicas que la combinación de agonista de TLR y antígeno como proteína de fusión. Por ejemplo, la reactogenicidad frente al agonista de TLR medida por la respuesta de anticuerpos al agonista de TLR puede ser menor para las composiciones de partículas de la presente invención que el antígeno solo en solución o como una fusión de agonista de TLR-antígeno en menos de aproximadamente 10 % o menos de aproximadamente 20 % o menos de aproximadamente 30 % o menos de aproximadamente 40 % o menos de aproximadamente 50 % o menos de aproximadamente 60 % o menos de aproximadamente 70 % o menos de aproximadamente 80 % o menos de aproximadamente 90 % o menos de aproximadamente 100 % o menos de aproximadamente 200 % o menos de aproximadamente 500 % o menos de aproximadamente 1000 %. Aunque el agonista de TLR es menos reactogénico en las composiciones de la presente invención, las composiciones de partículas de la presente invención aún mantienen la capacidad de desencadenar una respuesta agonista de TLR.

Por consiguiente, las composiciones y composiciones para su uso en procedimientos de la presente invención son útiles en la producción de formulaciones de vacunas para invocar una respuesta inmunitaria en un ser humano. Además, las composiciones de la presente invención son útiles para aumentar la respuesta de anticuerpos a un antígeno, incluso un antígeno poco antigénico, en un animal con el fin de generar anticuerpos terapéuticos y/o de diagnóstico para ser extraídos y purificados.

Los intervalos se pueden expresar en esta invención como de aproximadamente un valor particular y/o hasta aproximadamente otro valor particular. Cuando se expresa dicho intervalo, otro aspecto incluye desde un valor particular y/o hasta el otro valor particular. De forma similar, cuando los valores se expresan como aproximaciones, mediante el uso del antecedente aproximadamente, se entenderá que el valor particular constituye otro aspecto. Se entenderá además que los valores extremos de cada uno de los intervalos son significativos en relación con el otro valor extremo, e independientemente del otro valor extremo. Cuando se dan intervalos en esta invención, se incluyen valores extremos. Es más, se debe entender que, a menos que se indique lo contrario, o sea evidente de otro modo mediante el contexto y el entendimiento de un experto en la materia, los valores que se expresan como intervalos pueden adoptar cualquier valor o subintervalo específico dentro de los intervalos establecidos en las diferentes realizaciones de la invención, hasta una décima parte de la unidad del extremo inferior del intervalo, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

Dentro de esta descripción, cualquier indicación de que una característica es opcional está destinada a proporcionar un soporte adecuado (por ejemplo, a tenor de 35 U.S.C. 112 o Art. 83 y 84 de la CPE) para reivindicaciones que incluyen un lenguaje cerrado o exclusivo o negativo con referencia a la característica opcional. El lenguaje exclusivo excluye específicamente la característica particular enumerada de incluir cualquier objeto adicional. Por ejemplo, si se indica que A puede ser el fármaco X, dicho lenguaje está destinado a respaldar una afirmación que especifica explícitamente que A consiste en X solo, o que A no incluye ningún otro fármaco además de X. El lenguaje "negativo" excluye explícitamente la característica opcional en sí del alcance de las reivindicaciones. Por ejemplo, si se indica que el elemento A puede incluir X, dicho lenguaje está destinado a respaldar una afirmación que especifica explícitamente que A no incluye X. Los ejemplos no limitativos de términos exclusivos o negativos incluyen "solamente", "únicamente", "que consiste (n) en ", "que consiste (n) esencialmente en ", "solo ", "sin ", "en ausencia de (por ejemplo, otros artículos del mismo tipo, estructura y/o función)" "excluyente", "no incluido", "no", "no se puede" o cualquier combinación y/o variación de tal lenguaje.

De manera similar, los referentes como "un", "uno", "una", "dicho", "dicha" o "el", "la", están destinados a respaldar apariciones en singular y/o en plural a menos que el contexto indique lo contrario. Por ejemplo, "un perro" pretende incluir apoyo para un perro, no más de un perro, al menos un perro, una pluralidad de perros, etc. Los ejemplos no limitantes de términos calificativos que indican singularidad incluyen "uno solo", "una sola" "uno", "una" "solo", "sola", "solo uno ", "solo una", "no más de uno", "no más de una", etc. Los ejemplos no limitantes de términos calificativos que indican pluralidad (potencial o real) incluyen "al menos uno", "uno o más", " más de uno", "dos o más", "una multiplicidad", "una pluralidad", "cualquier combinación de", "cualquier permutación de", "uno o más de", etc. Las reivindicaciones o descripciones que incluyen "o" entre uno o más miembros de un grupo se consideran satisfactorias si uno, más de uno o todos los miembros del grupo están presentes, empleados en, o son relevantes de otro modo para un producto o proceso dado, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otra manera a partir del contexto.

La enumeración de cualquier publicación para su descripción previa a la fecha de presentación no se entenderá como una admisión de que la presente invención no tiene el derecho a considerarse anterior a dicha publicación en virtud de la invención previa.

Si bien la presente invención se mostró de forma particular y se describió con referencia a las realizaciones de ejemplo de la misma, los expertos en la materia comprenderán que pueden realizarse diversos cambios en forma y detalle en la misma sin apartarse del alcance de la invención abarcado por las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Fabricación de formulaciones de partículas

Selección de antígeno y agonista de TLR

El antígeno A se selecciona de entre los antígenos para cualquiera de las enfermedades infecciosas enumeradas en la Tabla 1 (véase también en.wikipedia con la extensión.org/wiki/List_of_infectious_diseases de la World Wide Web).

Tabla 1: Lista de enfermedades infecciosas en seres humanos

El agonista de TLR B se selecciona de entre los enumerados en la Tabla 2 (véase también Zuany-Amorim y col. Nature Reviews Drug Discovery 20021: 797-807).

Tabla 2: Rece tores ti o Toll

Una composición que comprende un agonista de TLR5, uno o más antígenos y una primera pluralidad de partículas a las que se unen el agonista de TLR5 y los uno o más antígenos mediante interacciones no covalentes forma la presente invención.

Fabricación de partículas de antígeno A y agonista de TLR B

Las partículas catiónicas madre se preparan mediante un proceso de fusión-emulsificación-enfriado de la siguiente manera. La cera de carnauba amarilla (CA), 10 gramos, comprendida por 40 % de ésteres alifáticos, 21 % de diésteres de ácido 4-hidroxicinámico, 13 % de ácidos u>-hidroxicarboxílicos y 12 % de alcoholes de ácido graso se funde en un vaso de precipitados de vidrio de 250 ml a 90 °C. En un segundo vaso de precipitados de vidrio de 250 ml, 90 ml de 1 % de solución de tensioactivo catiónico (bromuro de cetiltriamonio (CTAB) o bromuro de cetilpiridinio (CPB)) se calienta a 90 °C. La solución de tensioactivo acuoso caliente se añade a la cera de CA fundida con sonicación de punta durante 3 minutos para formar una emulsión. La emulsión se enfría a continuación rápidamente usando un baño de hielo con un agitador vertical. Una dispersión al 1 % en p/p se prepara diluyendo esta solución madre en emulsión con agua.

La solución de agonista de TLR B seleccionada se prepara por dilución con agua para lograr 1 mg/ml o 10 mg/ml de solución de trabajo.

La solución de antígeno A se prepara en una mezcla al 10 % de DMSO/agua y se usa inmediatamente para evitar la degradación del antígeno.

Los volúmenes requeridos de la solución de agonista de TLR B y la solución de antígeno A para lograr la concentración final deseada se pipetean en un vial de plástico estéril de 2 ml, VIAL 1, y se mezclan por inversión. El volumen requerido de 1 % en p/p de la dispersión de partículas catiónicas y el volumen requerido de agua consistente con la concentración final deseada se pipetean en un vial de plástico estéril separado de 2 ml, VIAL 2, y se mezclan por inversión. Cada formulación final se prepara transfiriendo con una pipeta Eppendorf, con adición gota a gota, todas las soluciones del VIAL 1 al VIAL 2. La mezcla final en el VIAL 2 se invierte a continuación tres veces para producir la formulación final de partículas de antígeno A y agonista de TLR B lista para usar.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un agonista de TLR5, uno o más antígenos y una primera pluralidad de partículas a las que el agonista de TLR5 y los uno o más antígenos se unen mediante interacciones no covalentes, estando dichos uno o más antígenos y dicho agonista de TLR5 en un relación que aumenta la inmunogenicidad frente a los uno o más antígenos y disminuye la reactogenicidad frente al agonista de TLR5, donde la relación del agonista de TLR5 al antígeno es inferior a 1:2 sobre una base de peso a peso.

2. La composición de la reivindicación 1, donde las partículas están comprendidas por un lípido.

3. La composición de la reivindicación 2, donde el lípido se selecciona de entre el grupo que consiste en una combinación de Dynasan118/aceite de ricino de PEG35, cera de carnauba natural, cera de carnauba sintética, cera de abejas, una cera autoemulsionante, cera de polietileno, alcohol behenílico y ácido oleico/compritol.

4. La composición de la reivindicación 2, donde el lípido es cera de carnauba, opcionalmente donde la cera de carnauba comprende ésteres alifáticos, diésteres de ácido 4-hidroxicinámico, ácidos w-hidroxicarboxílicos y alcoholes de ácido graso.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además un tensioactivo; opcionalmente

donde el tensioactivo se selecciona de entre el grupo que consiste en bromuro de cetiltriamonio (CTAB), metilsulfato de N-[1-(2,3-dioleoiloxi)]-N,N,N-trimetilamonio propano DOTAP, bromuro de cetilpiridinio (CPB), Tween 20, Tween 80 (monoloaurato de polioxietilen sorbitán), Brij 70, estearato de sodio, miristato de sodio, dodecilsulfato de sodio, dioctilsulfosuccinato de sodio y combinaciones de los mismos.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende además una estructura diana.

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la relación del agonista de TLR5 al antígeno es inferior a 1:20 sobre una base de peso a peso.

8. Un procedimiento para preparar la composición de la reivindicación 5 cuando depende de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 cuando dependen de la reivindicación 1, que comprende:

(a) preparar una solución de tensioactivo acuoso caliente;

(b) añadir el tensioactivo caliente a un lípido fundido para formar una mezcla lípido/tensioactivo caliente;

(c) añadir la mezcla lípido/tensioactivo caliente a una fase acuosa para formar una segunda mezcla;

(d) sonicar la segunda mezcla;

(e) enfriar la segunda mezcla; y

(f) añadir un agonista de TLR5 y uno o más antígenos para formar una composición que comprende partículas a las que se une el agonista de t LR5 y uno o más antígenos mediante interacciones no covalentes.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, donde el tensioactivo es bromuro de cetiltriamonio; o donde el tensioactivo es bromuro de cetilpiridinio.

10. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde el antígeno es al menos un 10 % más inmunogénico que el antígeno solo en solución; o

donde el antígeno es al menos un 10 % más inmunogénico que el antígeno fusionado con el agonista de TLR; o donde el agonista de TLR es al menos un 10 % menos reactogénico que el agonista de TLR solo en solución; o donde el agonista de TLR es al menos un 10 % menos reactogénico que el antígeno fusionado con el agonista de TLR.

11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en un procedimiento para inducir una respuesta inmunitaria en un ser humano, comprendiendo dicho procedimiento administrar la composición al ser humano.

12. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en un procedimiento para aumentar una respuesta de anticuerpos frente a un antígeno poco antigénico en un animal, comprendiendo dicho procedimiento administrar la composición al animal.