ES2770583T3 - Péptido secretado por Lactobacillus plantarum con función inmunomoduladora - Google Patents

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Ordiz David Bernardo
Stella C Knight
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Abstract

Entre las menos de 10 proteínas secretadas de forma mayoritaria por la especie

Description

DESCRIPCIÓN
Péptido secretado por Lactobacillus plantarum con función inmunomoduladora
La presente invención, que describe el uso de un péptido secretado por un lactobacilo en inmunoterapia humana, está relacionada tanto con el sector de la tecnología alimentaria como con la medicina. Se refiere a la secuencia de aminoácidos (péptido ST) que podría usarse en la inmunoterapia de determinadas enfermedades inflamatorias, tales como enfermedad inflamatoria intestinal (EII; dividido en enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y reservoritis) y en otras patologías donde la tolerancia oral está deteriorada (como en el caso de enfermedad celíaca con respecto al gluten en la dieta). La vía de administración podría ser la inclusión en un alimento funcional o mediante maduración dirigida de células dendríticas de donantes (vacunas de células dendríticas).
Técnica anterior
El tubo digestivo humano es el hogar de una gran variedad de bacterias comensales, mutualistas y patógenas y es precisamente donde está uno de los principales puntos de contacto entre las bacterias y el sistema inmunitario. Este conjunto de bacterias contribuye en gran medida al conjunto de antígenos o sustancias extrañas junto con los antígenos en la dieta contra los que, en condiciones normales, el sistema inmunitario reaccionaría con el objetivo de eliminarlos, como sucede en la inmunidad sistémica. Sin embargo, en el compartimento intestinal esto no sucede en absoluto de esta manera y en su lugar se implementa un mecanismo de tolerancia inmunológica contra dichos antígenos, denominada tolerancia oral, destinado a mantener la homeostasis de la mucosa (Feng y Elson (2010) Adaptive immunity in host - microbiota dialog. Muc. Immunol. 4, 15-21). En determinadas circunstancias, esta homeostasis se pierde y el sistema inmunitario reacciona de manera anómala contra la microbiota intestinal, con el desarrollo de procesos inflamatorios más o menos graves, tales como enfermedad inflamatoria intestinal (EII) o contra algunos antígenos en la dieta (como en el caso del gluten en la enfermedad celíaca). Por otra parte, también se conoce la relación que existe entre determinadas enfermedades autoinmunitarias y la desregulación en la composición de la microbiota intestinal (Adams et al. (2008) IgG antibodies against common gut bacteria are more diagnostic for Crohn's Disease than IgG against mannan or flagellin. Am. J. Gastroenterol. 103, 386-396).
El proceso de tolerancia a la microbiota intestinal está mediado, en gran parte, por dos tipos celulares que, incorporados en la mucosa intestinal, son responsables del procesamiento y reconocimiento correctos de los antígenos que se originan en la microbiota intestinal. Estos son los linfocitos T y las células dendríticas (CD). Las CD son células fagocíticas especializadas en el procesamiento y la presentación de antígenos; en el caso de las CD intestinales, desempeñan un papel esencial en el reconocimiento de los microorganismos que están presentes allí, extendiendo pseudópodos entre los enterocitos del epitelio intestinal hacia la luz (Rescigno et al. (2001) Dendritic cells express tight junction proteins and penetrate gut epithelial monolayers to sample bacteria. Nat Immunol. 2, 361­ 367). Las CD envuelven las partículas bacterianas y las procesan, experimentando una serie de cambios denominados maduración y presentando estos antígenos bacterianos en su superficie, de modo que puedan ser reconocidos por otras células del sistema inmunitario. Este cambio, por otra parte, va acompañado de una serie de alteraciones fenotípicas en las CD, tales como la producción de determinadas citocinas. Las CD son, a su vez, cruciales para la proliferación y diferenciación de los linfocitos T en células efectoras de tipo Th1 (inducen una respuesta proinflamatoria), Th2 (inducen una respuesta antiinflamatoria) o Th17 (están implicadas en la protección de tejidos superficiales contra infecciones), o bien en células reguladoras (Treg) (Zhu y Pau (2008) c D4 T cells: fates, functions, and faults. Blood 112, 1557-1569). Complementando las CD, los linfocitos T son las células responsables de la respuesta inmunitaria celular.
Algunas cepas que pertenecen al grupo de bacterias del ácido láctico se consideran probióticas, ya que son capaces de modular la composición de la microbiota intestinal de manera favorable, con efectos beneficiosos sobre la salud humana (Rijkers, G.T. et al. (2010) Guidance for substantiating the evidence for beneficial effects of probiotics: current status and recommendations for future research. J. Nutr. 140, 671S-676S). En los últimos años, diversos equipos de investigación han estado acumulando pruebas científicas que sugieren que determinados componentes extracelulares podrían ser responsables de algunos de los efectos beneficiosos atribuidos a los probióticos. Esto tiene más sentido si se tiene en cuenta que, en condiciones normales, en individuos sanos, la microbiota no está en contacto directo con la capa de enterocitos y/o las CD. De hecho, la microbiota está incluida en la capa protectora de moco que cubre la capa epitelial del intestino. Por lo tanto, es plausible que estos efectos beneficiosos de los probióticos no se deban a la interacción directa de las bacterias con las CD. Por el contrario, los probióticos podrían realizar su función al producir determinados componentes que pueden atravesar la capa de moco, facilitando su captura por las CD. Entre estos componentes extracelulares, se pueden mencionar los exopolisacáridos, ácidos teicoicos, indoles y las proteínas de superficie y extracelulares (Lebeer et al. (2010) Host interactions of probiotic bacterial surface molecules: comparison with commensals and pathogens. Nat Rev. Microbiol. 8, 171-84). Estas últimas se definen como el grupo de proteínas que se secretan durante el crecimiento bacteriano y que se liberan al medio que las rodea (Sanchez et al. (2008) Exported proteins in probiotic bacteria: adhesion to intestinal surfaces, host immunomodulation and molecular cross-talking with the host. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 54, 1-17). Actualmente, las proteínas extracelulares constituyen un área activa de investigación para la identificación y caracterización de los mecanismos moleculares de acción de los probióticos.
Las proteínas extracelulares se pueden dividir en dos grupos principales. El primero comprende las proteínas que tienen un péptido señal que se ubica en su parte N-terminal y guía la preproteína a la maquinaria de secreción, a través de la cual se secreta al medio. El segundo grupo comprende las proteínas que, además de un péptido señal, tienen dominios de unión a superficie celular y se liberan al medio durante el proceso de renovación de la pared bacteriana. Por último, algunos autores identifican un tercer grupo de proteínas extracelulares, que comprende proteínas del metabolismo central, sin dominios de secreción, y para las que se desconoce el mecanismo responsable de su secreción al ambiente extracelular.
Los sistemas para secretar proteínas están muy conservados dentro de la división Eubacteria. Estos sistemas están particularmente bien caracterizados en bacterias gramnegativas, donde se identifican al menos siete sistemas (tipos 1-6 y el sistema de "argininas gemelas") (Sibbald y van Dijl (2009) Bacterial secreted proteins: secretory mechanisms and role in pathogenesis. Ed. Wooldridge, Caister Academic Press). En bacterias grampositivas, el grupo taxonómico que comprende la mayoría de cepas probióticas, las proteínas extracelulares serían exportadas por sistemas similares.
Hasta ahora, la bioinformática ha sido la herramienta usada para identificar proteínas extracelulares en probióticos y solo una pequeña proporción ha sido bien identificada o caracterizada experimentalmente. Entre las proteínas extracelulares producidas por las bifidobacterias, se puede mencionar el inhibidor de la serina proteasa (serpina), producida por diversas especies de bifidobacterias (Turroni et al. (2010) Characterization of the serpin-encoding gene of Bifidobacterium breve 210B. Appl. Environ. Microbiol. 76, 3206-3219). Esta proteína inhibe eficazmente las elastasas secretadas tanto por el páncreas exocrino como por los neutrófilos, células inmunitarias implicadas en procesos inflamatorios. Por esta razón, se ha postulado que la serpina podría ser responsable de algunos de los efectos antiinflamatorios de las bifidobacterias. También se ha sugerido que las proteínas secretadas por una cepa de Bifidobacterium breve podría ser capaz de producir factores solubles, muy probablemente péptidos pequeños, que después de interactuar con las CD reducirían los procesos inflamatorios en el epitelio intestinal (Heuvelin et al. (2009) Mechanisms involved in alleviation of intestinal inflammation by Bifidobacterium breve soluble factors. PLoS ONE. 4:e5184).
Estos trabajos son solo ejemplos de cómo el proceso de comunicación intercelular entre bacterias y células inmunitarias del sistema innato podría mediar en una serie de respuestas fisiológicas dirigidas a regular la homeostasis inmunológica de nuestra mucosa intestinal y, por lo tanto, de nuestro cuerpo. Parte de este proceso, como se muestra por los resultados descritos en la presente invención, podría estar mediado por péptidos codificados dentro de las proteínas principales secretadas por las bacterias del ácido láctico presentes en nuestro tubo digestivo.
Con respecto a patentes similares disponibles en las bases de datos, se puede mencionar la patente EP95900421.9 que se refiere a la protección de algunas composiciones que se unen específicamente con células de cáncer colorrectal y al método de uso de las mismas. Este documento describe el uso de otros péptidos ST, en este caso derivados de una toxina termoestable producida por una cepa de la bacteria Escherichia coli, cuyas secuencias no corresponden a la secuencia del péptido descrito en la presente invención. Aunque este documento define los "péptidos ST" como los péptidos de unión al receptor de ST de entre 13 y 25 aminoácidos, estos péptidos se originan de E. coli y están incluidos en compuestos conjugados, que también comprenden un resto activo radioestable y son capaces de dirigirse específicamente a células de cáncer colorrectal metastatizadas.
Por otro lado, el documento WO2009138092 se refiere a la cepa 299v de Lactobacillus plantarum y enfatiza las propiedades probióticas de la cepa Lb. plantarum DSM 21379, que describe el uso de la misma en el desarrollo de un alimento funcional y de un medicamento para mejorar la inmunidad celular. Las funciones de este microorganismo que se enfatizan incluyen la de inducir la producción de citocinas para mejorar el sistema inmunitario del animal. Aunque este documento describe cómo Lb. plantarum produce citocinas para mejorar el sistema inmunitario, dichas citocinas son proinflamatorias (IL-6).
Por lo tanto, existe en la actualidad la necesidad de identificar un péptido ST derivado de proteínas secretadas por bacterias del ácido láctico, con función tanto inmunomoduladora como antiinflamatoria para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la desregulación de la microbiota intestinal, enfermedades inflamatorias y/o enfermedades donde la tolerancia oral está deteriorada.
Breve descripción de la invención
La presente invención proporciona un péptido ST con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, caracterizado por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos 95 % de similitud con la SEQ ID NO: 1, tiene un contenido de al menos 50 % de los aminoácidos serina y treonina y en donde el péptido comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para las proteasas: pepsina, tripsina y quimotripsina. En la medida en que se desvelan otros péptidos ST, estos se incluyen únicamente con fines de referencia.
La secuencia del péptido ST, codificado dentro de una de las proteínas secretadas por una bacteria del ácido láctico, preferentemente Lactobacillus plantarum (hasta ahora sin función conocida), dicho péptido de 30 kDa contiene un fragmento sin sitios de escisión para las proteasas intestinales más importantes. También se caracteriza por tener un contenido de serina y treonina de al menos 50 %. Si este péptido se pone en contacto con CD obtenidas tanto de sangre como de biopsias intestinales humanas, puede modularlas a un fenotipo regulador donde la producción de IL-12 (interleucina proinflamatoria característica de células presentadoras de antígeno) está bloqueada y la producción de IL-10 (citocina antiinflamatoria mediante el bloqueo de la síntesis de procitocinas inflamatorias por otros tipos de células inmunitarias, tales como los linfocitos T) se expande. Estas CD tratadas con el péptido ST también adquieren una funcionalidad diferente, ya que los linfocitos T que estimulan adquieren un perfil migratorio dirigido preferentemente a la piel con un perfil de citocinas no proinflamatorias. Este mecanismo de acción contribuye de manera activa a mantener la homeostasis intestinal no cebando los mecanismos de tolerancia inmunológica sino en su lugar de ignorancia inmunológica. Por tanto, las CD maduras con el péptido ST en el intestino promueven la migración secundaria de las células efectoras (linfocitos T) a la piel, obstaculizando de este modo el establecimiento de una respuesta inmunitaria activa contra la flora comensal en el tubo digestivo.
En resumen, el péptido ST promueve los mecanismos de homeostasis intestinal a través de su acción sobre las CD. Ya que es capaz de bloquear una interleucina antiinflamatoria (IL-12) y de aumentar la síntesis de una interleucina antiinflamatoria (IL-10), el péptido ST podría usarse en inmunoterapia, en el contexto de determinadas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias, en las que se sabe que existe una respuesta inmunitaria anómala a la microbiota intestinal, así como en otras patologías donde se pierden los mecanismos de tolerancia oral a otros antígenos. Esto proporcionaría la base científica para la creación de una gama completa de alimentos funcionales que contendrían las moléculas, producidas por los probióticos, que son responsables de su acción beneficiosa sobre la salud humana.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona un péptido ST con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, caracterizado por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos 95 % de similitud con la SEQ ID NO: 1, tiene un contenido de al menos 50 % de los aminoácidos serina y treonina y en donde el péptido comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para las proteasas: pepsina, tripsina y quimotripsina. En la medida en que se desvelan otros péptidos ST, estos se incluyen únicamente con fines de referencia.
Un péptido ST con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias puede caracterizarse por que:
a) es secretado por una bacteria del género Lactobacillus,
b) su secuencia de aminoácidos tiene un contenido de entre 30 y 60 % de los aminoácidos serina y treonina, y c) comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para al menos una proteasa intestinal. La expresión "péptido ST" se refiere a un péptido preferentemente de 73 aminoácidos, con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, que es secretado preferentemente por una bacteria Lactobacillus, preferentemente por Lactobacillus plantarum, más preferentemente por las cepas Lb. plantarum NCIMB 8826, Lb. plantarum 299V y Lb. plantarum BMCM12, cuya secuencia de aminoácidos tiene un contenido de al menos 50 % de los aminoácidos serina y treonina y comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para al menos una proteasa intestinal. Este péptido puede tener al menos 80-100 % de homología con la SEQ ID NO: 1 o el ortólogo de la misma.
En la presente invención, la expresión "con propiedades inmunomoduladoras" se refiere a su capacidad para modular la respuesta de células del sistema inmunitario humano, tales como las células dendríticas, que a su vez son capaces de modular la función de otras células inmunitarias tales como los linfocitos T. Esta modulación de la respuesta inmunitaria comprende bloqueo.
En la presente invención, la expresión "con propiedades antiinflamatorias" se refiere a su capacidad para inducir la producción de interleucina 10, una potente citocina antiinflamatoria, así como para bloquear la producción de interleucina 12, una citocina de naturaleza proinflamatoria, en células dendríticas aisladas tanto de sangre periférica como de mucosa intestinal humana. Por otra parte, los linfocitos T madurados en presencia de dichas células dendríticas también adquirirán un perfil de producción de citocinas no proinflamatorias.
En una realización preferida dicha bacteria Lactobacillus es Lactobacillus plantarum. Más preferentemente, la cepa de dicha bacteria Lactobacillus plantarum se selecciona del siguiente grupo de cepas: Lb. plantarum NCIMB 8826, Lb. plantarum 299V y Lb. plantarum BMCM12.
En la presente invención, dicho péptido ST se caracterizad por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos 95 % de similitud con la SEQ ID NO: Preferentemente, dicho péptido ST se caracteriza por que su secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 1 o el ortólogo de la misma.
El término "homología" se refiere al concepto de "homología de secuencia", que se refiere al grado de similitud entre dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos.
En la presente invención, el término "ortólogo" se refiere a dos cadenas de aminoácidos o nucleótidos, procedentes de dos organismos diferentes, que comparten un alto grado de homología.
En una realización preferida de la presente invención, dicho péptido ST se caracteriza por que la proteasa intestinal se selecciona del siguiente grupo: pepsina, tripsina, quimotripsina y combinaciones de los mismos.
La presente invención proporciona un péptido ST con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias caracterizadas por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos 95 % de similitud con la SEQ ID NO: 1, tiene un contenido de al menos 50 % de los aminoácidos serina y treonina y en donde el péptido comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para las proteasas: pepsina, tripsina y quimotripsina, para su uso en medicina. En la medida en que otros péptidos ST, se describen para su uso en medicina, estos se incluyen únicamente con fines de referencia.
La presente invención también se refiere al uso de dicho péptido ST en un método para tratar y/o prevenir un trastorno intestinal, caracterizándose dicho método por que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST definido anteriormente a un paciente, para activar el proceso de ignorancia o tolerancia inmunológica a las bacterias comensales del intestino de dicho paciente.
La presente invención proporciona un péptido ST con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, caracterizado por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos 95 % de similitud con la SEQ ID NO: 1, tiene un contenido de al menos 50 % de los aminoácidos serina y treonina y en donde el péptido comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para las proteasas: pepsina, tripsina y quimotripsina, para su uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno intestinal.
En la medida en que se describen otros péptidos ST proporcionados para su uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno intestinal, estos se incluyen únicamente con fines de referencia.
En la presente invención, el término "trastorno intestinal" se refiere a cualquier dolencia intestinal en la que el sistema inmunitario está implicado en su origen o en su tratamiento.
En la presente invención, el término "tolerancia inmunológica" se refiere al conjunto de procesos inducidos por los cuales el sistema inmunitario no responde a un antígeno, endógeno o exógeno.
En la presente invención, el término "ignorancia inmunológica" se refiere a su capacidad para promover los mecanismos de la homeostasis intestinal, no solo promoviendo la tolerancia inmunológica (diferenciando las células dendríticas aisladas tanto de sangre periférica como de mucosa intestinal humana hacia un perfil regulador de citocinas) sino también sensibilizando los linfocitos T que se estimulan con una mayor capacidad de migración hacia tejidos cutáneos donde no estarán expuestos a los antígenos microbianos del tubo digestivo.
En la presente invención, la expresión "bacterias comensales del intestino del paciente" se refiere al conjunto de bacterias que viven en el tubo digestivo humano.
En una realización preferida de la presente invención, dicho trastorno intestinal es una enfermedad inflamatoria, seleccionada entre una enfermedad inflamatoria intestinal (EII) o una enfermedad celíaca.
En una realización aún más preferida de la presente invención, dicha enfermedad inflamatoria intestinal (EII) se selecciona del siguiente grupo: enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y reservoritis.
En una realización preferida de la presente invención, dicho trastorno intestinal es provocado por una enfermedad autoinmunitaria o una enfermedad provocada por desregulación en la composición y/o actividad/metabolismo de la microbiota intestinal.
En una realización preferida de la presente invención, dichas propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias se manifiestan respectivamente en el hecho de que la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST a un paciente comprende:
a) inducir, en las células dendríticas de dicho paciente, la producción de una citocina antiinflamatoria y homeostática, preferentemente interleucina 10 (IL-10) y/o
b) bloquear, en las células dendríticas de dicho paciente, la producción de una citocina proinflamatoria, preferentemente interleucina proinflamatoria 12 (IL-12), cuando esta está presente, además de otras citocinas proinflamatorias tales como IL-6 que son muy relevantes en la enfermedad inflamatoria intestinal.
El método de tratamiento y/o prevención definido anteriormente puede caracterizarse por que dichas células dendríticas inducen a su vez la maduración de linfocitos T, que:
a) adquieren un perfil de migración a la piel, y/o
b) adquieren un perfil de producción de citocinas no proinflamatorias.
Preferentemente, el perfil de migración a la piel definido en a) comprende una disminución de la expresión del marcador de migración a la mucosa intestinal integrina p7 y un aumento de la expresión del marcador de migración a la piel CLA. Preferentemente, el perfil de producción de citocinas no proinflamatorias definidas en b) comprende una disminución de la expresión de citocinas proinflamatorias IFNy e interleucina 17 (IL-17).
En otra realización preferida de la presente invención, dicha administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST se caracteriza por que dicho péptido ST está contenido en un alimento funcional (probiótico) o en una composición farmacéutica, preferentemente en forma de una cápsula.
Otro aspecto protegido por la presente invención se refiere a un alimento funcional, caracterizado por que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST definido anteriormente.
En la presente invención, la expresión "alimento funcional" se refiere al conjunto de alimentos que, además de sus características nutricionales, confieren un beneficio a la salud del consumidor o ayudan a evitar la contracción de enfermedades.
Otro aspecto protegido por la presente invención se refiere a una composición, preferentemente farmacéutica, caracterizada por que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST definido anteriormente. En la presente invención, la expresión "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de principios activos y excipientes con un formato adecuado para su uso en ser humanos.
El alimento funcional o la composición definidos anteriormente se pueden usar para activar el proceso de tolerancia inmunológica hacia las bacterias comensales del intestino del paciente.
La presente invención también se refiere al uso de dicho péptido ST para preparar un cosmético.
Otro aspecto protegido por la invención se refiere a un cosmético, caracterizado por que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido ST definido anteriormente.
En la presente invención, la expresión "aplicación cosmética" se refiere al uso en cosméticos destinados a mejorar el estado de la piel humana, notablemente de la cara.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones, no se pretende que la palabra "comprende" y sus variantes excluyan otras características técnicas, aditivos, componentes o etapas. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan con fines ilustrativos y no se pretende que limiten la presente invención.
Descripción de las figuras
Fig. 1. Gel de proteínas en condiciones desnaturalizantes que muestra las proteínas totales y proteínas secretadas por 3 cepas de Lactobacillus plantarum. Carriles 1-3: proteínas totales de las cepas nCiMb 8826, 299v y BMCM12. Carril 4: proteínas presentes en el medio de cultivo. Carriles 5-7: proteínas secretadas por las cepas NCIMB 8826, 299v y BMCM12. MM: marcador de peso molecular de proteínas (kDa).
Fig. 2. A. Zona rica en serinas y treoninas presentes en la zona central de la proteína D1 identificada como SEQ ID NO: 2, entre las posiciones de aminoácidos 70 y 135, y B. Secuencia de aminoácidos del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1, descrito en la presente patente. Los aminoácidos subrayados en la SEQ ID NO: 1 representan los cambios del péptido ST en relación con la zona central de la proteína D1 identificada como SEQ ID NO: 2.
Fig. 3. Sitios de escisión teórica de las proteasas intestinales principales en el fragmento central de la proteína D1, identificado como SEQ ID NO: 2. Como se puede ver (indicado con una flecha), el fragmento ST no contiene sitios de escisión teóricos. A. Representa el fragmento de la proteína D1 entre las posiciones de aminoácidos 61 y 120, identificado como SEQ ID NO: 3, y B. representa el fragmento de la proteína D1 entre las posiciones de aminoácidos 121 y 180, identificado como SEQ ID NO: 4.
Fig. 4. Migración del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 purificado en gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes.
Fig. 5. a) Producción de marcadores de migración a la mucosa intestinal (integrina p7) y a la piel (CLA) en células dendríticas enriquecidas de sangre humana (LDC). Las condiciones probadas fueron el punto de referencia (ausencia de señalización), 0,0, 0,1, 1,0 o 10 microgramos/mililitro del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1. b) la prueba realizada con este péptido no altera los marcadores de migración a tejidos (p7 y CLA), ni las moléculas del MHC de tipo II (HLA-DR) ni determinadas moléculas coestimulantes (CD40) o moléculas activadoras (CD83) en células dendríticas enriquecidas de sangre humana. Se usó estimulación con lipopolisacárido (LPS) como control de la estimulación con un componente bacteriano proinflamatorio.
Fig. 6. Modificación del perfil de producción de citocinas medido en el citoplasma de células dendríticas enriquecidas de sangre humana inducida por diferentes concentraciones del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1. Se usó estimulación con LPS como control de la estimulación con un componente bacteriano proinflamatorio. IL-6: interleucina 6, TGFp: factor de crecimiento transformante beta, IL-10: interleucina 10, IL-12: interleucina 12.
Fig. 7. Modificación del perfil de producción de las citocinas IL-10 e IL-12 medido en el citoplasma de células dendríticas enriquecidas de biopsias de mucosa de colon (CD intestinales).
Fig. 8. De izquierda a derecha, representaciones obtenidas por citometría de flujo que representa poblaciones de linfocitos T estimulados con células dendríticas alógenas. Panel izquierdo: detección de células viables mediante la técnica de "dispersión directa lateral". Panel central: identificación del marcador DC3. Panel derecho: los linfocitos T estimulados se identificaron por la pérdida de tinción para CFSE producida por la división celular. Fig. 9. Diagramas de citometría de flujo que muestran cambios inducidos en linfocitos T estimulados por células dendríticas enriquecidas de la sangre (LDC) y expuestos al péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (LDC BP) o a lipopolisacárido (LPS LDC). En todos los casos, la comparación fue con los cambios producidos en los linfocitos T en reposo (linfocitos T en reposo) y usando LDC no estimuladas (LDC basales). A) Cambios en los niveles del marcador de migración a la mucosa intestinal integrina p7 inducidos por diferentes concentraciones del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (BP LDC) y de lipopolisacárido (LPS LDC). B) Cambios en los niveles del marcador de migración a la piel CLA inducidos por diferentes concentraciones del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (BP LDC) y de lipopolisacárido (LPS LDC). C) Representación en gráfico de barras de los resultados de 3 experimentos independientes.
Fig. 10. Diagramas de citometría de flujo que muestran cambios en la producción de las citocinas IL-10, TGFp, IFNy e IL-17 en linfocitos T estimulados por células dendríticas enriquecidas de la sangre (LDC) y pulsados con diferentes concentraciones del péptido St identificado como SEQ ID NO: 1 (BP LDC) o lipopolisacárido (LPS LDC). En todos los casos, la comparación fue con los cambios producidos en los linfocitos T en reposo (linfocitos T en reposo) y usando LDC no estimuladas (LDC basales).
Fig. 11. Representación gráfica de los datos en la fig. 10 que muestra los valores de 3 experimentos independientes y sus desviaciones.
Fig. 12. Diagramas de citometría de flujo que muestran cambios en la producción de las citocinas TGFp, IL-10, IL-17 e IFNy en linfocitos T estimulados por células dendríticas enriquecidas de biopsias de colon (CD intestinales) en ausencia de estimulación (CD intestinales basales) (panel central) o pulsadas de antemano con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (CD intestinales con péptido) (panel inferior). El panel superior muestra la producción de las mismas citocinas en linfocitos T en reposo (linfocitos T en reposo).
Fig. 13. Diagramas de citometría de flujo que muestran cambios en la producción de los marcadores de migración p7 (mucosa intestinal) y CLA (mucosa epitelial) en linfocitos T estimulados con células dendríticas enriquecidas de biopsias de colon (CD intestinales) en ausencia de estimulación (CD intestinales basales) (panel central) o pulsadas previamente con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (CD intestinales con péptido) (panel inferior). El panel superior muestra la producción de los mismos marcadores de migración en linfocitos T en reposo (linfocitos T en reposo).
Fig. 14. Diagramas de citometría de flujo que representan la producción de IL-10 e IL-12 en un donante cuyas células dendríticas de la mucosa del colon presentaron producción anómala de IL-12. Estas células dendríticas se incubaron en presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (+BP). En comparación con las condiciones basales (basal), la presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 fue capaz de inducir la producción de IL-10 y de bloquear la producción de IL-12.
BIBLIOGRAFÍA
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Ejemplos
Los siguientes ejemplos específicos que se proporcionan en el presente documento de patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen únicamente con fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitaciones de la invención reivindicada en el presente documento. Por lo tanto, los ejemplos descritos a continuación ilustran la invención sin limitar el campo de aplicación de la misma.
Identificación de las proteínas secretadas por Lb. plantarum y del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1
Lb. plantarum es una bacteria mesófila del ácido láctico que puede aislarse de una gran cantidad de alimentos fermentados, incluyendo productos vegetales y lácteos (Tallon et al. (2003) Isolation and characterization of two exopolysaccharides produced by Lactobacillus plantarum EP56. Res. Microbiol. 154, 705-712). La capacidad de algunas cepas para sobrevivir en las condiciones del tubo digestivo humano ha hecho que algunos investigadores se hayan interesado por su potencial probiótico. Por tanto, los efectos beneficiosos de algunas cepas de Lb. plantarum en la salud humana, comercializadas en la actualidad como probióticos (como es el caso de la cepa 299v), se han demostrado científicamente (de Vries, et al. (2006) Lactobacillus plantarum- survival, functional and potential probiotic properties in the human intestinal tract. Int. Dairy J. 16, 1018-1028).
Actualmente, existe un creciente interés en la investigación de las proteínas secretadas por bacterias probióticas, ya que son mediadores potenciales de la comunicación intercelular entre bacterias y células del sistema inmunitario del hospedador. Como se puede ver en la fig. 1, que muestra las principales proteínas secretadas por Lb. plantarum NCIMB 8826, Lb. plantarum 299v y Lb. plantarum BMCM12 (carriles 5, 6 y 7), existe similitud relativa entre las proteínas secretadas por diferentes miembros de la especie Lb. plantarum. La secuencia del péptido ST, cuya secuencia se muestra en la fig. 2 identificada como SEQ ID NO: 1, procede de la zona central de la proteína designada D1 (número de identificación de GenBank gi|28270057) identificada como SEQ ID NO: 2, con algunas modificaciones e inclusiones de aminoácidos que se muestran subrayadas en la SEQ ID NO: 1 (fig. 2). Esta zona se caracteriza por su riqueza en los aminoácidos serina y treonina, de donde procede su nombre, y se caracteriza por la ausencia de sitios de escisión para algunas de las proteasas más importantes del tubo digestivo (pepsina, tripsina y quimotripsina) (fig. 3). Sanchez et al., 2008, J. Mol. Microbiol. Biotechnol.17: 158-162 también muestra las principales proteínas secretadas por Lb. plantarum NCIMB 8826, Lb. plantarum 299v y Lb. plantarum BMCM12 en gel de SDS-Page. Se identifica la proteína D1 (véase fig. 1a), y en la fig. 1c se desvela la secuencia del dominio rico en S/T. Dicho dominio rico en SAT presenta 84 % de identidad y 86 % de similitud con la SEQ ID NO: 1 de la presente solicitud.
Clonación y purificación del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 (verificación de la ausencia de lipopolisacáridos)
La secuencia de ADN que codifica el fragmento ST (correspondiente a la secuencia de aminoácidos marcada en la fig. 2 como SEQ ID NO: 2) se clonó en Lactococcus lactis y se purificó en una columna de afinidad de níquel según protocolos convencionales. Este péptido se secreta al sobrenadante de cultivo, de donde puede aislarse y purificarse, y se caracteriza por formar artefactos en geles de agarosa en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE), migrando a un tamaño correspondiente a aproximadamente 100 kDa (fig. 4). La secuencia del amino terminal del péptido se verificó mediante degradación de Edman.
Se pueden encontrar regiones ricas en serina y treonina en proteínas codificadas por muchas otras bacterias del ácido láctico y en géneros del tubo digestivo, de modo que las conclusiones obtenidas de la presente invención podrían aplicarse a péptidos ST procedentes de otras secuencias de otros microorganismos.
Interacción del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 con células dendríticas
Ya que los péptidos ST liberados por las proteasas intestinales o por las proteasas de las células presentadoras de antígeno pueden ser capaces de influir en la función del sistema inmunitario innato asociado con mucosas, los inventores emprendieron una investigación de su interacción con las principales células presentadoras de antígenos, las CD. En primer lugar, se verificó la ausencia de lipopolisacárido en las muestras de péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 usando el kit cromogénico de Genscript. La hipótesis de partida de los inventores fue considerar que el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1, producido en el ambiente intestinal o ingerido con alimentos, podría interactuar con las CD de la mucosa intestinal, afectando de este modo a la función inmunitaria.
Ejemplo 1.- Interacción del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 con células dendríticas procedentes de sangre
1.1. Material y métodos
Las células dendríticas se obtuvieron de pacientes sanos que no tenían enfermedades autoinmunitarias, ni enfermedades inflamatorias ni alergias ni tumores malignos. Estos sujetos habían dado su consentimiento por escrito para que su sangre se usara con fines científicos. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron por centrifugación diferencial en Ficoll-Paque Plus (Amersham Biosciences, Chalfont St. Giles, Reino Unido). La fracción celular LDC (células de baja densidad) se obtuvo por centrifugación durante una noche en solución NycoPrepeTM. Las células presentes en esta fracción de LDC fueron positivas para HLA-DR en el 98­ 100 % de los casos, con características morfológicas normales de las CD (Ng, et al. (2009). A novel population of human CD56+ human leukocyte antigen D-related (HLA-DR+) colonic lamina propria cells is associated with inflammation in ulcerative colitis. Clin. Exp. Immunol. 158, 205-218).
Se cultivaron medio millón de LDC por mililitro en medio completo (RPMI 1640 con modificación holandesa (Sigma-Aldrich, Dorset, Reino Unido) que contiene penicilina/estreptomicina 100U/ml, L-glutamina 2mM, gentamicina 50 U/ml (Sigma-Aldrich) y suero bovino fetal al 10 % (v/v) (TCS cellworks, Buckingham, Reino Unido)). Estos cultivos se llevaron a cabo en presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 purificado a concentraciones de 10 |jg/ml, 1 |jg/ml y 0,1 jg/ml, y de LPS (100 ng/ml) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Estados Unidos) como control positivo. Los resultados se compararon con cultivos paralelos sin péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 ni LPS añadido, que actúan como controles negativos.
Para los diversos experimentos, se llevó a cabo marcaje de las células con los diversos anticuerpos (tabla 1) en PBS complementado con EDTA 1 mM y azida de sodio al 0,02 % (p/v) (tampón de FACS). Se llevó a cabo marcaje durante 20 minutos en hielo, en oscuridad. Después las células se lavaron con tampón de FACS y se fijaron con paraformaldehído al 1 % (v/v) en solución salina y se almacenaron a 4 °C hasta la adquisición de datos en el citómetro de flujo. Los controles negativos usados fueron anticuerpos de isotipo coincidente sin especificidad, marcados con el mismo fluorocromo, que se obtuvieron de la misma empresa (controles de isotipo).
Los datos de citometría de flujo se obtuvieron en un citómetro FACSCalibur (BD Biosciences) y los datos se analizaron con el software WinList 5.0 (Verity, ME, Estados Unidos). La proporción de muestras positivas para un marcador particular se determinó en relación con los controles de isotipo. Para la cuantificación por histogramas, se realizó un análisis con el software WinList, en el que el histograma de tinción de isotipo se restó del histograma de tinción específica usando resta de Dmáx superpotenciada (SED) normalizada (Bagwell, C.B. (2005). Hyperlog - a flexible log-like transform for negative, zero, and positive valued data. Cytometry. 64, 34-42).
Tinción intracelular de citocinas
Las CD se cultivaron durante 4 horas en presencia/ausencia de monensina. Después se tiñeron para determinar los marcadores de superficie como se ha descrito anteriormente. A continuación se fijaron con LeucopermA y se permeabilizaron con LeucopermB antes de añadir los anticuerpos de tinción intracelular. Después de la incubación, las CD se lavaron en tampón de FACS, se fijaron y se adquirieron como se ha descrito anteriormente. El análisis se realizó mediante la resta de SED detallada anteriormente, donde el histograma de cada citocina de las CD que no se habían incubado con monensina se restó del histograma de cada citocina de las CD que se habían incubado en ausencia de monensina. Este protocolo ha sido ampliamente validado por compañeros de los inventores (Hart et al., (2005) Characteristics of intestinal dendritic cells in inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 129, 50-65) y permite cuantificar los cambios en la producción natural de citocinas por parte de las CD en ausencia de estímulos externos tales como PMA y/o ionomicina. Usando este enfoque, no se determina el contenido intracelular de cada citocina. En su lugar, se determinan los cambios inducidos en la producción de citocinas en una ventana temporal de 4 horas (tiempo de incubación con monensina) independientemente del contenido inicial de citocinas.
1.2. Resultados
Como se puede ver en la fig. 5 (panel A), el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 no produjo cambios en los marcadores de migración de las CD enriquecidas con sangre periférica (integrina p7, marcador de mucosa intestinal, y CLA, marcador de piel). El péptido tampoco produjo cambios en la inducción de moléculas del MHC de tipo II (HLA-DR) o de determinadas moléculas coestimulantes (CD40) o moléculas de activación (CD83) (fig. 5, panel B). Como se puede ver en estas últimas, LPS (control positivo) indujo sobreexpresión en todas ellas.
Con respecto a los cambios en la producción de citocinas (intracelulares) inducidos por el péptido en LDC, esto no afectó a la molécula reguladora TGFp, implicada en el control del crecimiento celular, en la proliferación celular y en procesos de diferenciación y apoptosis. Por el contrario, el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 indujo una reducción de la síntesis de IL-6 (inductora de la generación de linfocitos Th17) e IL-12 (proinflamatoria) y un aumento de la síntesis de IL-10 (antiinflamatoria y homeostática) (fig. 6).
En conclusión, la presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 en células dendríticas enriquecidas de sangre humana (LDC) significa que estas adquieren un perfil de producción de citocinas reguladoras, reduciendo la producción de la citocina proinflamatoria IL-12 y aumentando la producción de la citocina antiinflamatoria IL-10. La reducción de la síntesis de IL-6, con la consiguiente reducción teórica de la síntesis de linfocitos T de tipo Th17, también es interesante, ya que en el contexto de determinadas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias se observa un aumento de este tipo celular (Stockinger y Veldhoen (2007) Differentiation and function of Th17 T cells. Curr. Opin. Immunol. 19, 281-286).
Ejemplo 2.- Interacción del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 con células dendríticas obtenidas de biopsia de mucosa intestinal
Ya que el sitio de acción del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 sería, en principio, la mucosa intestinal, los inventores decidieron intentar validar los experimentos descritos en el ejemplo 1 usando CD aisladas de dicha ubicación.
2.1. Material y métodos
Se obtuvieron biopsias del colon de tres pacientes sanos, que dieron su consentimiento por escrito para participar en este estudio (una mujer y dos hombres, intervalo de edad de 30-58 años). Estos pacientes tenían intestinos normales, tanto macroscópica como histológicamente, y habían sido examinados después de comunicar cambios en el tránsito intestinal o hemorragia rectal. Una vez obtenidas, las biopsias se recogieron en medio completo enfriado a 4 °C y se procesaron antes de la primera hora contando desde el momento en que se obtuvieron. Las biopsias se incubaron en Solución salina equilibrada de Hanks (HBSS) (Gibco BRL, Paisley, Escocia, Reino Unido) que contenía ditiotreitol (DTT) 1 mM (Sigma-Aldrich) durante 20 minutos. A continuación, se incubaron en una solución 1 mM de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) para eliminar tanto las células epiteliales como la capa de moco y sus bacterias asociadas. Se extrajeron las células mononucleares de la lámina propia mediante digestión en presencia de colagenasa D 1 mg/ml (Roche Diagnostics Ltd, Lewes, Reino Unido) en medio completo, que no afecta al fenotipo ni a la función de las CD (Hart et al. (2005) Characteristics of intestinal dendritic cells in inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 129, 50-65). Las suspensiones celulares de células mononucleares de la lámina propia (200000 células/ml) se incubaron durante 4 horas en presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 purificado (10|jg/ml) y en presencia/ausencia, a su vez, de monensina, con sus correspondientes controles negativos. Las CD de la lámina propia se identificaron mediante citometría de flujo a partir de la presencia de los marcadores HLA-DR+ y CD3-CD14-CD16-CD19-CD34-(Hart et al. (2005) Characteristics of intestinal dendritic cells in inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 129, 50-65).
Los procedimientos restantes seguidos en este ejemplo fueron los mismos que en la sección 1 del ejemplo 1.
2.2. Resultados
Usando el modelo de CD intestinales, pudieron confirmarse los dos puntos más interesantes descritos en el ejemplo 1, el aumento de la producción de IL-10 y la ausencia de cualquier aumento de la producción de IL-12. En este punto, debe tenerse en cuenta que las CD aisladas de la mucosa intestinal de individuos sanos tienen niveles muy bajos de producción de la citocina proinflamatoria IL-12 (fig. 7).
Ejemplo 3.- Interacción de células dendríticas obtenidas de sangre madurada con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 con linfocitos T
3.1. Material y métodos
Los linfocitos T se obtuvieron de células mononucleares de sangre periférica (PBMC). Las PBMC, obtenidas de sangre recién extraída como se ha descrito en el ejemplo 1, se resuspendieron en tampón MiniMACs (PBS complementado con seroalbúmina bovina al 0,5 % (p/v) y EDTA 2 mM). Esta suspensión se enriqueció con linfocitos T eliminando las células CD14 positivas, CD19 positivas y HLA-DR positivas con perlas inmunomagnetizadas (Miltenyi Biotech, Bisley, Reino Unido) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se obtuvo un porcentaje de linfocitos T del 94,91 % ± 1,06 (media ± desviación típica) como el valor medio de todas las extracciones/enriquecimientos.
Los linfocitos T se marcaron con éster succinimidílico de diacetato de 5-carboxifluoresceína (CFSE, Invitrogen Ltd, Reino Unido) según las instrucciones del fabricante. Los linfocitos T marcados de este modo (4x105 células por pocillo) se incubaron durante 5 días con CD a 0, 1, 2 o 3 % en placas de microtitulación con fondo en forma de U. Los linfocitos T proliferativos se identificaron y cuantificaron mediante citometría de flujo como los que contenían una pequeña cantidad de CFSE (CFSEbajo) (fig. 8).
Los protocolos de citometría de flujo restantes se llevaron a cabo como se ha descrito en la sección 1 del ejemplo 1.
3.2. Resultados
La fracción de linfocitos T que no se pusieron en contacto con CD (linfocitos T en reposo) mostró un perfil de "orientación" (marcadores que indican a qué tejido se dirigen) y de producción de interleucinas (IL-10, TGFp, IFNy, IL-17) característico de cada donante. Como era de esperar, tanto los valores absolutos de marcadores de "orientación" como los de producción de citocinas producidas por LDC (ejemplo 1) no condicionadas con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 o con LPS, también fueron diferentes en cada donante. A pesar de ello, las CD incubadas previamente con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 o con LPS (control positivo), siempre indujeron el mismo perfil de producción de citocinas y de marcadores de "orientación" en los linfocitos T de los diversos donantes. Centrándose en las CD incubadas con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1, estas indujeron, en los linfocitos T, una disminución del marcador de migración a la mucosa intestinal integrina p7, mientras que, por el contrario, la cantidad de marcador CLA (marcador de migración a la piel) aumentó considerablemente (fig. 9). Por lo tanto, las CD enriquecidas con sangre incubada en presencia del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 imprimen marcadores de migración a la piel en los linfocitos T. Desde el punto de vista inmunológico, esto puede interpretarse como un mecanismo de ignorancia inmunitaria de los antígenos presentes en el tubo digestivo. En este sentido, los linfocitos T, una vez que están en la piel, nunca encontrarían el antígeno contra el que se seleccionaron en la mucosa intestinal y, por lo tanto, están inactivos.
Por otra parte, el perfil de producción de citocinas en estos mismos linfocitos T (coincubados con CD que se habían incubado previamente con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1) difería en el sentido de que tanto la producción de IFNy como de iL-17 disminuyeron (figs. 10 y 11). Ambas citocinas son proinflamatorias, y en el caso de IL-17 (linfocitos Th17) se sabe que su producción por los linfocitos T es mayor en determinadas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias.
Por lo tanto, los linfocitos T madurados con CD condicionadas por el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 adquieren un perfil de producción de citocinas no proinflamatorias y un perfil de migración a la piel.
Ejemplo 4.- Interacción de células dendríticas obtenidas de la mucosa intestinal maduradas con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 con linfocitos T vírgenes
Este ejemplo es el mismo que el ejemplo anterior, excepto que en este caso se usaron CD aisladas de la mucosa intestinal. Como se puede ver en la fig. 12, las CD intestinales ya son "homeostáticas" en el sentido de que el perfil de citocinas que imprimen en los linfocitos T es inducir IL-10 (antiinflamatorio), mientras que no hay ningún aumento de otras interleucinas (TGFp, IL-17 e IFNy). Las CD incubadas con el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 inducen un aumento aún mayor de la producción de IL-10 y de la producción de TGFp en los linfocitos T (fig. 12c). Por último, al igual que en el ejemplo anterior, las CD condicionadas por el péptido inducen un mayor número de linfocitos que expresan el marcador de migración a la piel (fig. 13) de modo que, una vez más, se demuestra que el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 promovería el proceso de ignorancia inmunitaria.
Ejemplo 5. Uso potencial del péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 en enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedades autoinmunitarias con manifestaciones cutáneas y cosméticos
Uno de los donantes que dio su consentimiento por escrito para donar una biopsia de la mucosa intestinal del colon para los experimentos de los inventores tenía algunas CD que producían niveles excepcionalmente altos de IL-12, la interleucina proinflamatoria clásica de las células presentadoras de antígenos. Como se puede ver en la fig. 14, el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 canceló por completo la producción de IL-12 en estas células dendríticas, además de aumentar la producción de la interleucina antiinflamatoria IL-10.
Aunque es un solo ejemplo, los inventores sugieren que el péptido ST identificado como SEQ ID NO: 1 definido anteriormente podría incluirse en programas de inmunoterapia en el contexto tanto de enfermedad inflamatoria intestinal como de otras enfermedades inflamatorias y en el contexto de enfermedades autoinmunitarias que evolucionan con síntomas inflamatorios.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un péptido con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, caracterizado por que su secuencia de aminoácidos tiene al menos un 95 % de similitud con la SEQ ID NO: 1, tiene un contenido de al menos un 50 % de los aminoácidos serina y treonina y en donde el péptido ST comprende un fragmento de al menos 30 kDa sin sitios de escisión para las proteasas: pepsina, tripsina y quimotripsina.
2. El péptido según la reivindicación 1, caracterizado por que es secretado por una bacteria del ácido láctico o procede de una proteína secretada por una bacteria del ácido láctico.
3. El péptido según la reivindicación 2, en donde la bacteria del ácido láctico es una bacteria Lactobacillus, opcionalmente en donde la bacteria Lactobacillus es Lactobacillus plantarum.
4. El péptido según las reivindicaciones 1-3, caracterizado por que su secuencia de aminoácidos es la SEQ ID NO: 1 o el ortólogo de la misma.
5. Un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en medicina.
6. Un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno intestinal.
7. El péptido para su uso según la reivindicación 6, caracterizado por que el trastorno intestinal es una enfermedad inflamatoria seleccionada entre una enfermedad inflamatoria intestinal o una inflamación celíaca.
8. El péptido para su uso según la reivindicación 7, caracterizado por que la enfermedad inflamatoria intestinal se selecciona del siguiente grupo: enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y reservoritis.
9. El péptido para su uso según la reivindicación 6, caracterizado por que el trastorno intestinal está causado por una enfermedad autoinmunitaria o una enfermedad causada por desregulación en la composición de la microbiota intestinal.
10. El uso de un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para preparar un alimento funcional en donde el término "alimento funcional" se refiere al conjunto de alimentos que, además de sus características nutricionales, confieren un beneficio a la salud del consumidor o ayudan a evitar contraer enfermedades.
11. Un alimento, caracterizado por que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4.
12. Una composición farmacéutica o un medicamento, caracterizados por que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4.
13. El uso de un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para preparar un cosmético.
14. Un cosmético, caracterizado por que comprende una cantidad eficaz de un péptido como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-4.
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