ES2728350T3 - Politerapia de un anticuerpo para CD20 afucosilado con un inhibidor de la BTK - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo anti-CD20 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-CD20 de tipo I y obinutuzumab para su uso en el tratamiento del cáncer en combinación con una 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma.

Description

DESCRIPCIÓN

Politerapia de un anticuerpo para CD20 afucosilado con un inhibidor de la BTK

La presente invención se dirige a la politerapia de un anticuerpo para CD20 afucosilado con un inhibidor de la BTK para el tratamiento del cáncer.

Antecedentes de la invención

Anticuerpos afucosilados

Las funciones efectoras mediadas por células de los anticuerpos monoclonales se pueden potenciar genomanipulando su componente oligosacárido, como se describe en Umaña, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; y el documento US 6.602.684. Los anticuerpos de tipo IgG1, los anticuerpos más comúnmente usados en la inmunoterapia contra el cáncer, son glucoproteínas que tienen un sitio de glucosilación unido a N conservado en Asn297 de cada dominio CH2. Los dos oligosacáridos biantenarios complejos acoplados a Asn297 están enterrados entre los dominios CH2, formando extensos contactos con la cadena principal polipeptídica, y su presencia es esencial para que el anticuerpo medie en las funciones efectoras, tales como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., y Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32). Umaña, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 y el documento WO 99/154342 mostraron que la sobreexpresión en células de ovario de hámster chino (CHO) de p(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III ("GnTIM"), una glucosiltransferasa que cataliza la formación de oligosacáridos bisecados, incrementa significativamente la actividad de ADCC in vitro de los anticuerpos. Las alteraciones en la composición del carbohidrato en N297 o su eliminación también afectan a la unión de Fc que se une a FcyR y C1q (Umaña, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294; Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547; Radaev, S., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem.

276 (2001) 6591-6604; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740; Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147).

Se ha informado de estudios que analizan las actividades de anticuerpos afucosilados y fucosilados, incluyendo anticuerpos anti-CD20 (por ejemplo, Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887; Natsume, A., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103; Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173; Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294.

CD20 y anticuerpos anti-CD20

La molécula CD20 (también llamada antígeno de diferenciación restringido a linfocitos B humanos o Bp35) es una proteína transmembranaria hidrófoba localizada en los linfocitos pre-B y B maduros que se ha descrito extensamente (Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; y Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568). CD20 se expresa en más de un 90 % de los linfomas no hodgkinianos (LNH) de linfocitos B (Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433) pero no se encuentra en las células madre hematopoyéticas, linfocitos pro-B, células plasmáticas normales u otros tejidos normales (Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (1985) 973-979).

Existen dos tipos diferentes de anticuerpos anti-CD20 que difieren significativamente en su modo de unión a CD20 y actividades biológicas (Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; y Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052). Los anticuerpos de tipo I, como, por ejemplo, rituximab (un anticuerpo no afucosilado con una cantidad de fucosa de un 85 % o más alta), son potentes en la citotoxicidad mediada por el complemento.

Los anticuerpos de tipo II, como, por ejemplo, los anticuerpos Tositumomab (B1), 11B8, AT80 o B-Ly1 humanizado, inician eficazmente la muerte de las células diana por medio de la inducción de la muerte de las células independiente de caspasa con exposición a fosfatidilserina simultánea.

BTK e inhibidores de la BTK

La tirosina cinasa de Bruton o tirosina cinasa de agammaglobulinemia de Bruton (abreviada Btk o BTK) es un miembro de la familia TEC de cinasas. BTK se asocia con la enfermedad de inmunodeficiencia primaria agammaglobulinemia ligada al cromosoma X (agammaglobulinemia de Bruton). El mecanismo de acción exacto es desconocido. El gen BTK codifica la proteína BTK, que es fundamental para el desarrollo y la maduración de los linfocitos B como activación de los mastocitos a través del receptor de IgE de afinidad alta. Los pacientes con agammaglobulinemia ligada al cromosoma X tienen poblaciones de linfocitos pre-B normales en la médula ósea, sin embargo, estas células ni maduran ni entran en la circulación. El gen BTK se localiza en el cromosoma X. Se han identificado más de 400 mutaciones del gen BTK.

BTK se activa en dirección 5' mediante las cinasas de la familia Src Blk, Lyn y Fyn y da lugar a la activación en dirección 3' de vías de supervivencia celular esenciales, tales como NF-kB y cinasas MAP. BTK contiene un dominio de homología con pleckstrina (PH) que se une a (3,4,5)-trisfosfato de fosfatidilinositol (PI(3,4,5)P3). La unión a PI(3,4,5)P3 induce a Btk a fosforilar la fosfolipasa Cy (PLCy), que, a su vez, hidroliza PI(4,5)P2, un fosfatidilinositol, en dos segundos mensajeros, trifosfato de inositol (IP3) y diacilglicerol (DAG), que, a continuación, proceden a modular la actividad de las proteínas en dirección 3' durante la señalización de los linfocitos B. Posteriormente, se moviliza Ca2+ y se activan las vías de NF-kB y cinasas MAP.

Un inhibidor de la BTK ejemplar descrito en la técnica es ibrutinib (PCI-32765; Advani et al.; J Clin Oncol. 2013: 1 de enero; 31(1), página 88-94) que es un inhibidor de la BTK irreversible de molécula pequeña.

Burger et al. (Lancet Oncology, vol. 15, n.° 10, 15 de septiembre de 2014, páginas 1090-1099) divulgan la seguridad y actividad de rituximab en combinación con ibrutinib en el tratamiento de la LLC (fig. 1).

Damler et al. (Cancer Research, vol. 73, n.° 8, abril de 2013, página 3531) divulgan la eficacia terapéutica en 27 de 28 pacientes con LLC que usan rituximab y bendamustina (BR) en combinación con ibrutinib.

Hoellenriegel et al. (Blood, vol. 120, n.° 21, noviembre de 2012, página 186) divulgan la eficacia terapéutica usando una combinación de ibrutinib y rituximab en cuarenta pacientes con LLC de riesgo alto.

Golay et al. (Blood, vol. 122, n.° 20, 8 de octubre de 2013, páginas 3482-3491) divulgan que obinutuzumab es superior a rituximab y ofatumumab en modelos preclínicos in vitro y modelos preclínicos in vivo.

Sumario de la invención

Ahora se ha descubierto que la combinación de un anticuerpo anti-CD20 de tipo II afucosilado con un inhibidor de la BTK demostró efectos antiproliferativos significativamente potenciados. De forma sorprendente, esta combinación es más que aditiva, es decir, altamente sinérgica. La materia objeto de la invención se define mediante las reivindicaciones y se refiere a una combinación de un anticuerpo anti-CD20 de tipo I u obinutuzumab y 6-amino-9-[3R]-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma en el tratamiento del cáncer.

Un aspecto de la descripción es un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK.

Otro aspecto de la descripción es el uso de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK.

Otro aspecto de la descripción es un procedimiento de tratamiento de un paciente que padece cáncer administrando un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, en combinación con un inhibidor de la BTK, a un paciente que necesita dicho tratamiento.

En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 40 % y un 60 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297. En otro aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa es de un 0 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297.

En un aspecto de la descripción, el anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo IgG1. En otro aspecto, dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20, preferentemente un linfoma o leucemia linfocítica. En un aspecto de la descripción, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo B-Ly1 humanizado. En otro aspecto de la descripción, dicho anticuerpo afucosilado es un anticuerpo anti-CD20 de tipo II.

En un aspecto, dicho inhibidor de la BTK es un compuesto seleccionado de los compuestos descritos en los documentos WO2011/152351 y WO2013/081016. Dicho inhibidor de la BTK es preferentemente un compuesto de acuerdo con la fórmula I o de acuerdo con la fórmula I-1 como se divulga en el presente documento. Preferentemente, el inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma.

En un aspecto de la descripción, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo B-Ly1 humanizado y dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: los compuestos descritos en los documentos WO2011/152351 y WO2013/081016. Dicho inhibidor de la BTK es preferentemente un compuesto de acuerdo con la fórmula I o de acuerdo con la fórmula I-1 como se divulga en el presente documento. Preferentemente, el inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma, y dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20, en un modo de realización, un linfoma o leucemia linfocítica.

En un aspecto, el anticuerpo anti-CD20 afucosilado se une a CD20 con una KD de 10'8 M a 10'13 M.

Un aspecto de la descripción de la divulgación es una composición farmacéutica que comprende una combinación de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, (en un aspecto de la descripción, un anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado) y un inhibidor de la BTK (en un aspecto, el inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: los compuestos descritos en los documentos WO2011/152351 y WO2013/081016). Dicho inhibidor de la BTK es preferentemente un compuesto de acuerdo con la fórmula I o de acuerdo con la fórmula I-1 como se divulga en el presente documento. Preferentemente, el inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma) para el tratamiento del cáncer.

Descripción de las figuras

Figura 1: Estudio de actividad antitumoral: curvas de volumen tumoral medio (a) y curvas de la mediana del volumen tumoral (b) de ratones portadores de células TMD8 subcutáneas.

Los ratones se xenoinjertaron el D0. La aleatorización se realizó el D14 (día 0 como se indica en la figura 1). Los ratones recibieron una administración v.o. del vehículo y compuesto A a 10 mg/kg dos veces al día (Q0,5D x 24) sola o en combinación con una inyección i.v. de GA101 a 1 y 3 mg/kg una vez a la semana (Q7D x 4). Los ratones recibieron una inyección i.v. de Rituximab (a 3 mg/kg) o una inyección i.v. de GA101 (a 1 y 3 mg/kg) una vez a la semana (D14 (día 0), 21 (día 7), 28 (día 14) y D35 (día 21): q 7d x 4). Los volúmenes tumorales se supervisaron y registraron dos veces a la semana.

Figura 2: Estudio de actividad antitumoral: curvas de volumen tumoral medio (a) y curvas de la mediana del volumen tumoral (b) de ratones portadores de células TMD8 subcutáneas.

Los ratones se xenoinjertaron el D0. La aleatorización se realizó el D14 (400-450 mm3: día 0, como se indica en la figura 2). Los ratones recibieron una administración v.o. del vehículo y compuesto A a 10 mg/kg dos veces al día (Q0,5D x 24) sola o en combinación con una inyección i.v. de GA101/RTX a 1 y 3 mg/kg una vez a la semana (Q7D x 4). Los ratones recibieron una inyección i.v. de Rituximab (a 3 mg/kg) o una inyección i.v. de GA101 (a 3 mg/kg) una vez a la semana (D14 (día 0), 21 (día 7), 28 (día 14) y 35 (día 21): Q7D x 4). Los volúmenes tumorales se supervisaron y registraron dos veces a la semana.

Descripción detallada de la invención

La divulgación proporciona un anticuerpo anti-CD20 afucosilado de isotipo IgG1 o IgG3 con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK.

La divulgación proporciona el uso de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado de isotipo IgG1 o IgG3 con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK.

En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 40 % y un 60 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297.

El término "anticuerpo" engloba las diversas formas de anticuerpos que incluyen, pero que no están limitados a, anticuerpos completos, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados y anticuerpos genomanipulados, como anticuerpos monoclonales, anticuerpos quiméricos o anticuerpos recombinantes, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que se retengan las propiedades características de acuerdo con la invención. Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal" como se usa en el presente documento se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpo de una composición de aminoácidos única. En consecuencia, el término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que presentan una especificidad de unión única que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En un aspecto, los anticuerpos monoclonales humanos se producen por un hibridoma que incluye un linfocito B obtenido a partir de un animal transgénico no humano, por ejemplo, un ratón transgénico, que tiene un genoma que comprende un transgén de cadena pesada humana y un transgén de cadena ligera humana fusionados a una célula inmortal.

El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo monoclonal que comprende una región variable, es decir, una región de unión, de una fuente o especie y al menos una porción de una región constante derivada de una fuente o especie diferente, preparado normalmente mediante técnicas de ADN recombinante. Son especialmente preferentes los anticuerpos quiméricos que comprenden una región variable murina y una región constante humana. Dichos anticuerpos quiméricos murinos/humanos son el producto de genes de inmunoglobulina expresados que comprenden segmentos de ADN que codifican regiones variables de inmunoglobulina murina y segmentos de ADN que codifican regiones constantes de inmunoglobulina humana. Otras formas de "anticuerpos quiméricos" englobadas por la presente invención son aquellas en las que la clase o subclase se ha modificado o cambiado a partir de la del anticuerpo original. Dichos anticuerpos "quiméricos" también se denominan "anticuerpos de cambio de clase". Los procedimientos para producir anticuerpos quiméricos implican técnicas de ADN recombinante y transfección génica convencionales actualmente bien conocidos en la técnica. Véanse, por ejemplo, Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; los documentos US 5.202.238 y US 5.204.244.

El término "anticuerpo humanizado" se refiere a anticuerpos en los que se han modificado la región estructural o las "regiones determinantes de la complementariedad" (CDR) para comprender la CDR de una inmunoglobulina de especificidad diferente en comparación con la de la inmunoglobulina original. En un aspecto preferente de la descripción, se injerta una CDR murina en la región estructural de un anticuerpo humano para preparar el "anticuerpo humanizado". Véanse, por ejemplo, Riechmann, L. et al., Nature 332 (1988) 323-327; y Neuberger, M.S. et al., Nature 314 (1985) 268-270. Las CDR preferentes en particular se corresponden con las que representan secuencias que reconocen los antígenos indicados anteriormente para anticuerpos bi- o multiespecíficos y quiméricos.

Como se usa en el presente documento, se pretende que el término "anticuerpo humano" incluya anticuerpos que tengan regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk, M.A. y van de Winkel, J.G., Curr. Opin. in Chem. Biol. 5 (2001) 368-374). En base a dicha tecnología, se pueden producir anticuerpos humanos frente a una gran variedad de dianas. Los ejemplos de anticuerpos humanos se describen, por ejemplo, en Kellermann, S.A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597.

Como se usa en el presente documento, se pretende que el término "anticuerpo humano recombinante" incluya todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aíslan mediante medios recombinantes, tales como los anticuerpos aislados de una célula huésped, tal como una célula NS0 o CHO, o de un animal (por ejemplo, un ratón) que sea transgénico para los genes de inmunoglobulina humana o anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula huésped. Dichos anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana en forma reordenada. Los anticuerpos humanos recombinantes de acuerdo con la invención se han sometido a hipermutación somática in vivo. Por tanto, las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivan de y se relacionan con las secuencias de VH y VL de la línea germinal humana, pueden no existir de forma natural en el repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanos in vivo.

El término “anticuerpo bi- o multiespecífico” como se usa en el presente documento se refiere a anticuerpos monoclonales que tienen especificidades de unión por al menos dos sitios diferentes. En determinados aspectos, una de las especificidades de unión es para CD20 y la otra es para cualquier otro antígeno. En determinados aspectos, los anticuerpos biespecíficos se pueden unir a dos epítopos diferentes de CD20. También se pueden usar anticuerpos biespecíficos para localizar agentes citotóxicos con respecto a las células que expresan CD20. Se pueden preparar anticuerpos biespecíficos como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpo.

Como se usa en el presente documento, el término “unión” o “unión específica” se refiere a la unión del anticuerpo a un epítopo del antígeno tumoral en un ensayo in vitro, preferentemente en un ensayo de resonancia de plasmón (BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Suecia) con antígeno natural purificado. La afinidad de la unión se define mediante los términos ka (constante de velocidad para la asociación del anticuerpo del complejo anticuerpo/antígeno), kD (constante de disociación) y Kd (kD/ka). Unión o unión específica significa una afinidad de unión (Kd) de 10'8 M o menos, preferentemente de 10'8 M a 10'13 M (en un aspecto, de 10'9 M a 10'13 M). Por tanto, un anticuerpo afucosilado de acuerdo con la invención se une específicamente al antígeno tumoral con una afinidad de unión (Kd) de 10'8 mol/l o menos, preferentemente de 10'8 M a 10'13 M (en un aspecto, de 10'9 M a 10' 13 M).

Como se usa en el presente documento, se pretende que el término "molécula de ácido nucleico" incluya moléculas de ADN y moléculas de ARN. Una molécula de ácido nucleico puede ser monocatenaria o bicatenaria, pero preferentemente es ADN bicatenario.

Los "dominios constantes" no están implicados directamente en la unión del anticuerpo a un antígeno, pero están implicados en las funciones efectoras (ADCC, unión al complemento y CDC).

La "región variable" (región variable de una cadena ligera (VL), región variable de una cadena pesada (VH)) como se usa en el presente documento indica cualquiera del par de cadenas ligera y pesada que está implicado directamente en la unión del anticuerpo al antígeno. Los dominios de las cadenas ligera y pesada humanas variables tienen la misma estructura general y cada dominio comprende cuatro regiones estructurales (FR) cuyas secuencias están ampliamente conservadas, conectadas por tres "regiones hipervariables" (o regiones determinantes de la complementariedad, CDR). Las regiones estructurales adoptan una conformación de lámina p y las CDR pueden formar bucles que conectan la estructura de lámina p. Las CDR en cada cadena se mantienen en su estructura tridimensional mediante las regiones estructurales y forman, conjuntamente con las CDR de la otra cadena, el sitio de unión a antígeno.

El término "región hipervariable" cuando se usa en el presente documento se refiere a los residuos de aminoácido de un anticuerpo que son responsables de la unión a antígeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácido de las "regiones determinantes de la complementariedad" o "CDR". Las regiones "estructurales" o "FR" son aquellas regiones del dominio variable distintas de los residuos de la región hipervariable como se define en el presente documento. Por lo tanto, las cadenas ligera y pesada de un anticuerpo comprenden, desde el extremo N al C, los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. Especialmente, el CDR3 de la cadena ligera es la región que más contribuye a la unión a antígeno. Las regiones c Dr y FR se determinan de acuerdo con la definición estándar de Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5.a ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991) y/o los residuos de un "bucle hipervariable".

El término “anticuerpo afucosilado” se refiere a un anticuerpo de isotipo IgG1 o IgG3 (preferentemente de isotipo IgG1) con un patrón de glucosilación alterado en la región Fc en Asn297 que tiene una cantidad reducida de residuos de fucosa. La glucosilación de IgG1 o IgG3 humana se produce en Asn297 como glucosilación de oligosacáridos complejos biantenarios fucosilados nucleares terminada con hasta 2 residuos Gal. Estas estructuras se designan como los residuos de glucano G0, G1 (a1,6 o a1,3) o G2, dependiendo de la cantidad de residuos de Gal terminales (Raju, T.S., BioProcess Int. 1 (2003) 44-53). La glucosilación de tipo CHO de las partes Fc de un anticuerpo se describe, por ejemplo, por Routier, F.H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207. Los anticuerpos que se expresan de forma recombinante en células huésped CHO no glucomodificadas normalmente están fucosilados en Asn297 en una cantidad de al menos un 85 %. Se debe entender que el término anticuerpo afucosilado como se usa en el presente documento incluye un anticuerpo que no tiene ninguna fucosa en su patrón de glucosilación. Comúnmente se sabe que la posición del residuo glucosilado típica en un anticuerpo es la asparagina en la posición 297 de acuerdo con el sistema de numeración EU (“Asn297”).

En general, se usa el “sistema de numeración EU” o “índice EU” cuando se hace referencia a un residuo en una región constante de la cadena pesada de inmunoglobulina (por ejemplo, el índice EU que se informa en Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5.a ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)).

Por tanto, un anticuerpo afucosilado para su uso de acuerdo con la invención significa un anticuerpo de isotipo IgG1 o IgG3 (preferentemente de isotipo IgG1) en el que la cantidad de fucosa es de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297 (lo que significa que al menos un 40 % o más de los oligosacáridos de la región Fc en Asn297 están afucosilados). En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 40 % y un 60 % de los oligosacáridos de la región Fc en Asn297. En otro aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa es de un 50 % o menos, y todavía en otro aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa es de un 30 % o menos de los oligosacáridos de la región Fc en Asn297. La “cantidad de fucosa” significa la cantidad de dicho oligosacárido (fucosa) en la cadena de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297 en relación con la suma de todos los oligosacáridos (glúcidos) acoplados a Asn297 (por ejemplo, estructuras complejas, híbridas y de alto contenido en manosa) medida mediante espectrometría de masas MALDI-TOF y calculada como valor promedio (para un procedimiento detallado para determinar la cantidad de fucosa, véase, por ejemplo, el documento WO 2008/077546). Además, en un aspecto de la descripción, los oligosacáridos de la región Fc están bisecados. El anticuerpo afucosilado para su uso de acuerdo con la invención se puede expresar en una célula huésped glucomodificada genomanipulada para expresar al menos un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene actividad GnTIII en una cantidad suficiente para fucosilar parcialmente los oligosacáridos en la región Fc. En un aspecto de la descripción, el polipéptido que tiene actividad GnTIII es un polipéptido de fusión. De forma alternativa, se puede disminuir o eliminar la actividad a l ,6-fucosiltransferasa de la célula huésped de acuerdo con el documento US 6.946.292 para generar células huésped glucomodificadas. La cantidad de fucosilación del anticuerpo se puede predeterminar, por ejemplo, mediante condiciones de fermentación (por ejemplo, tiempo de fermentación) o bien mediante combinación de al menos dos anticuerpos con diferente cantidad de fucosilación. Dichos anticuerpos afucosilados y respectivos procedimientos de glucomanipulación se describen en los documentos WO 2005/044859, WO 2004/065540, WO 2007/031875, Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180, WO 99/154342, WO 2005/018572, WO 2006/116260, WO 2006/114700, WO 2005/011735, WO 2005/027966, WO 97/028267, US 2006/0134709, US 2005/0054048, US 2005/0152894, WO 2003/035835, WO 2000/061739. Estos anticuerpos glucomanipulados tienen una ADCC incrementada. Otros procedimientos de glucomanipulación que proporcionan anticuerpos afucosilados de acuerdo con la invención se describen, por ejemplo, en Niwa, R., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160; Shinkawa, T., et al., J. Biol. Chem, 278 (2003) 3466-3473; los documentos WO 03/055993 o US 2005/0249722.

Por tanto, un aspecto de la descripción es un anticuerpo anti-CD20 afucosilado de isotipo IgG1 o IgG3 (preferentemente de isotipo IgG1) que se une específicamente a CD20 con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK. Otro aspecto de la descripción es el uso de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado de isotipo IgG1 o IgG3 (preferentemente de isotipo IgG1) que se une específicamente a CD20 con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de la BTK. En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 60 % y un 20 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297. En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 60 % y un 40 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297. En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa es de un 0 % de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297.

CD20 (también conocido como antígeno CD20 de los linfocitos B, antígeno de superficie de los linfocitos B B1, Leu-16, Bp35, BM5 y LF5; la secuencia se caracteriza por la entrada en la base de datos SwissProt P11836) es una proteína transmembranaria hidrófoba con un peso molecular de aproximadamente 35 kD localizada en los linfocitos pre-B y B maduros (Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568). El gen humano correspondiente es el de 4 dominios que atraviesan la membrana, subfamilia A, miembro 1, también conocido como MS4A1. Este gen codifica un miembro de la familia de genes 4A que atraviesan la membrana. Los miembros de esta familia de proteínas nacientes se caracterizan por rasgos característicos estructurales comunes y límites de ayuste entre intrones/exones similares y presentan patrones de expresión únicos entre células hematopoyéticas y tejidos no linfáticos. Este gen codifica la molécula de superficie de los linfocitos B que desempeña un papel en el desarrollo y diferenciación de los linfocitos B en las células plasmáticas. Este miembro de la familia se localiza en 11q12, entre un grupo de miembros de la familia. El ayuste alternativo de este gen da como resultado dos variantes de transcripción que codifican la misma proteína.

Los términos "CD20" y "antígeno CD20" se usan de manera intercambiable en el presente documento e incluyen cualquier variante, isoforma y homólogo de especie del CD20 humano que se expresen de forma natural por células o se expresen en células transfectadas con el gen CD20. La unión de un anticuerpo para su uso de acuerdo con la invención al antígeno CD20 media en la destrucción de las células que expresan CD20 (por ejemplo, una célula tumoral) inactivando CD20. La destrucción de las células que expresan CD20 se puede producir mediante uno o más de los siguientes mecanismos: inducción de la muerte de las células/apoptosis, ADCC y CDC.

Los sinónimos de CD20, como se reconoce en la técnica, incluyen el antígeno CD20 de los linfocitos B, el antígeno de superficie de los linfocitos B B1, Leu-16, Bp35, BM5 y LF5.

El término “anticuerpo anti-CD20” como se usa en la invención es un anticuerpo que se une específicamente al antígeno CD20. Dependiendo de las propiedades de unión y las actividades biológicas de los anticuerpos anti-CD20 con respecto al antígeno CD20, se pueden distinguir dos tipos de anticuerpos anti-CD20 (anticuerpos anti-CD20 de tipo I y de tipo II) de acuerdo con Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; y Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052, véase la tabla 1.

Tabla 1: Propiedades de los anticuerpos anti-CD20 de tipo I y de tipo II

Los ejemplos de anticuerpos anti-CD20 de tipo II incluyen, por ejemplo, anticuerpo IgG1 B-Ly1 humanizado (un anticuerpo IgG1 humanizado quimérico como se divulga en el documento WO 2005/044859), IgG1 11B8 (como se divulga en el documento w O 2004/035607) e IgG1 AT80. Típicamente, los anticuerpos anti-CD20 de tipo II del isotipo IgG1 muestran propiedades de CDC características. Los anticuerpos anti-CD20 de tipo II tienen una CDC disminuida (en caso de isotipo IgG1) en comparación con los anticuerpos de tipo I del isotipo IgG1.

Los ejemplos de anticuerpos anti-CD20 de tipo I incluyen, por ejemplo, rituximab, IgG3 HI47 (ECACC, hibridoma), IgG1 2C6 (como se divulga en el documento WO 2005/103081), IgG1 2F2 (como se divulga en los documentos WO 2004/035607 y WO 2005/103081) e IgG1 2H7 (como se divulga en el documento WO 2004/056312).

Los anticuerpos anti-CD20 afucosilados de acuerdo con la descripción, en un aspecto de la descripción, son un anticuerpo anti-CD20 de tipo II, en otro aspecto de la descripción, un anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado.

Los anticuerpos anti-CD20 afucosilados para su uso de acuerdo con la invención tienen una citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) incrementada, a diferencia de los anticuerpos anti-CD20 que no tienen ninguna cantidad reducida de fucosa.

Por “anticuerpo anti-CD20 afucosilado con citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) incrementada” se entiende un anticuerpo anti-CD20 afucosilado, como se define el término en el presente documento, que tiene una ADCC incrementada como se determina mediante cualquier procedimiento adecuado conocido por los expertos en la técnica. Un ensayo de ADCC in vitro aceptado es como sigue:

1) el ensayo usa células diana que se sabe que expresan el antígeno diana reconocido por la región de unión a antígeno del anticuerpo;

2) el ensayo usa células mononucleares de sangre periférica (PBMC) humanas, aisladas de la sangre de un donante sano elegido al azar, como células efectoras;

3) el ensayo se lleva a cabo de acuerdo con el siguiente protocolo:

i) las PBMC se aíslan usando procedimientos de centrifugación por densidad estándar y se suspenden a 5 x 106 células/ml en medio de cultivo celular RPMI;

ii) las células diana se cultivan mediante procedimientos de cultivo tisular estándar, se recogen de la fase de crecimiento exponencial con una viabilidad más alta de un 90 %, se lavan en medio de cultivo celular RPMI, se marcan con 100 microcurios de 51Cr, se lavan dos veces con medio de cultivo celular y se resuspenden en medio de cultivo celular a una densidad de 105 células/ml;

iii) 100 microlitros de la suspensión de células diana final anterior se transfieren a cada pocillo de una placa de microvaloración de 96 pocillos;

iv) el anticuerpo se diluye en serie de 4000 ng/ml a 0,04 ng/ml en medio de cultivo celular y se añaden 50 microlitros de las soluciones de anticuerpo resultantes a las células diana en la placa de microvaloración de 96 pocillos, sometiendo a prueba por triplicado diversas concentraciones de anticuerpo que abarcan todo el intervalo de concentraciones anterior;

v) para los controles de liberación máxima (MR), 3 pocillos adicionales en la placa que contiene las células diana marcadas reciben 50 microlitros de una solución acuosa al 2 % (VN) de un detergente no iónico (Nonidet, Sigma, St. Louis), en lugar de la solución de anticuerpo (punto iv anterior);

vi) para los controles de liberación espontánea (SR), 3 pocillos adicionales en la placa que contiene las células diana marcadas reciben 50 microlitros de medio de cultivo celular RPMI en lugar de la solución de anticuerpo (punto iv anterior);

vii) a continuación, la placa de microvaloración de 96 pocillos se centrifuga a 50 x g durante 1 minuto y se incuba durante 1 hora a 4 °C;

viii) 50 microlitros de la suspensión de PBMC (punto i anterior) se añaden a cada pocillo para proporcionar una proporción de células efectoras:diana de 25:1 y las placas se disponen en una estufa de incubación en una atmósfera con un 5 % de CO² a 37 °C durante 4 horas;

ix) el sobrenadante libre de células de cada pocillo se recoge y la radioactividad liberada experimentalmente (ER) se cuantifica usando un contador gamma;

x) el porcentaje de lisis específica se calcula para cada concentración de anticuerpo de acuerdo con la fórmula (ER-MR)/(MR-SR) x 100, donde ER es la radioactividad cuantificada promedio (véase el punto ix anterior) para esa concentración de anticuerpo, MR es la radioactividad cuantificada promedio (véase el punto ix anterior) para los controles de MR (véase el punto v anterior) y SR es la radioactividad cuantificada promedio (véase el punto ix anterior) para los controles de SR (véase el punto vi anterior);

4) la "ADCC incrementada" se define como tanto un incremento del porcentaje máximo de lisis específica observado en el intervalo de concentraciones de anticuerpo sometido a prueba anterior y/o como una reducción de la concentración de anticuerpo requerida para lograr la mitad del porcentaje máximo de lisis específica observado en el intervalo de concentraciones de anticuerpo sometido a prueba anterior. El incremento de la ADCC es relativo a la ADCC, medida con el ensayo anterior, mediada por el mismo anticuerpo, producido por el mismo tipo de células huésped, usando los mismos procedimientos estándar de producción, purificación, formulación y almacenamiento, que son conocidos por los expertos en la técnica, pero que no se ha producido por células huésped genomanipuladas para sobreexpresar GnTIII.

Se puede obtener dicha "ADCC incrementada" glucomanipulando dichos anticuerpos, lo que significa potenciar dichas funciones efectoras naturales mediadas por células de los anticuerpos monoclonales genomanipulando su componente oligosacárido como se describe en Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 y el documento US 6.602.684.

El término "citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)" se refiere a la lisis de las células diana tumorales humanas por el anticuerpo de acuerdo con la invención en presencia del complemento. La CDC se mide preferentemente mediante el tratamiento de una preparación de células que expresan CD20 con un anticuerpo anti-CD20 de acuerdo con la invención en presencia del complemento. Se encuentra la CDC si el anticuerpo induce, a una concentración de 100 nM, la lisis (muerte de las células) de un 20 % o más de las células tumorales después de 4 horas. El ensayo se realiza preferentemente con células tumorales marcadas con 51Cr o Eu y medición de 51Cr o Eu liberado. Los controles incluyen la incubación de las células diana tumorales con complemento, pero sin el anticuerpo.

El anticuerpo "rituximab" (anticuerpo de referencia; ejemplo de un anticuerpo anti-CD20 de tipo I) es un dominio constante murino gamma 1 humano quimérico genomanipulado que contiene un anticuerpo monoclonal dirigido frente al antígeno CD20 humano.

El anticuerpo "rituximab" (anticuerpo de referencia; ejemplo de un anticuerpo anti-CD20 de tipo I) es un dominio constante murino gamma 1 humano quimérico genomanipulado que contiene un anticuerpo monoclonal dirigido frente al antígeno CD20 humano. Este anticuerpo quimérico contiene dominios constantes gamma 1 humanos y se identifica con el nombre de "C2B8" en el documento US 5.736.137 (Anderson et. al.) publicado el 17 de abril de 1998, asignado a IDEC Pharmaceuticals Corporation. Rituximab está aprobado para el tratamiento de pacientes con linfoma no hodgkiniano de linfocitos B, positivo para CD20, de escasa malignidad o folicular y recidivante o resistente al tratamiento. Los estudios in vitro del mecanismo de acción han demostrado que rituximab presenta citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) humano (Reff, M.E., et. al., Blood 83 (1994) 435-445). Adicionalmente, presenta una actividad significativa en ensayos que miden la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Rituximab no está afucosilado.

Tabla 2

El término “anticuerpo B-Ly1 humanizado” se refiere a un anticuerpo B-Ly1 humanizado, como se divulga en los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875, que se obtuvo a partir del anticuerpo anti-CD20 monoclonal murino B-Ly1 (región variable de la cadena pesada (VH) murina: SEQ ID NO:1; región variable de la cadena ligera (VL) murina: SEQ ID NO:2 (véase Poppema, S. y Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139) mediante quimerización con un dominio constante humano de IgG1 y seguido de humanización (véanse los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875). Estos “anticuerpos B-Ly1 humanizados” se divulgan en detalle en los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875.

En un aspecto de la descripción, el “anticuerpo B-Ly1 humanizado” tiene una región variable de la cadena pesada (VH) seleccionada del grupo de SEQ ID NO:3 a SEQ ID NO:19 (B-HH2 a B-HH9 y B-HL8 a B-HL17 de los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875). En un aspecto específico de la descripción, dicho dominio variable se selecciona del grupo que consiste en las SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13 y SEQ ID NO:15 (B-HH2, BHH-3, B-HH6, B-HH8, B-HL8, B-HL11 y B-HL13 de los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875). En un aspecto específico de la descripción, el “anticuerpo B-Ly1 humanizado” tiene una región variable de la cadena ligera (VL) de SEQ ID NO:20 (B-KV1 de los documentos W o 2005/044859 y WO 2007/031875). En un aspecto específico de la descripción, el “anticuerpo B-Ly1 humanizado” tiene una región variable de la cadena pesada (VH) de SEQ ID NO:7 (B-HH6 de los documentos WO 2005/044859 y WO 2007/031875) y una región variable de la cadena ligera (VL) de SEQ ID NO:20 (B-KV1 de los documentos W o 2005/044859 y W o 2007/031875). Además, en un aspecto de la descripción, el anticuerpo B-Ly1 humanizado es un anticuerpo IgG1. Dichos anticuerpos B-Ly1 humanizados afucosilados para su uso de acuerdo con la invención se glucomanipulan (GM) en la región Fc de acuerdo con los procedimientos descritos en los documentos WO 2005/044859, WO 2004/065540, WO 2007/031875, Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 y WO 99/154342. En un aspecto de la descripción, el B-Ly1 humanizado glucomanipulado afucosilado es B-HH6-B-KV1 GM. En un modo de realización, el anticuerpo anti-CD20 es obinutuzumab (DCI recomendada, WHO Drug Information, vol. 26, n.° 4, 2012, p. 453). Como se usa en el presente documento, obinutuzumab es sinónimo de GA101. El nombre comercial es GAZYVA. El documento WHO Drug Information reemplaza todas las versiones previas (por ejemplo, vol. 25, n.° 1, 2011, p. 75-76) y es conocido antiguamente como afutuzumab (DCI recomendada, WHO Drug Information, vol. 23, n.° 2, 2009, p. 176; vol. 22, n.° 2, 2008, p.

124).

BTK como se usa en el presente documento es la “tirosina cinasa de Bruton” o “tirosina cinasa de agammaglobulinemia de Bruton” (abreviada Btk o BTK), que es un miembro de la familia TEC de cinasas. El gen BTK codifica la proteína BTK, que es fundamental para el desarrollo y la maduración de los linfocitos B como activación de los mastocitos a través del receptor de IgE de afinidad alta. El gen BTK se localiza en el cromosoma X. Se han identificado más de 400 mutaciones del gen BTK.

El término “inhibidor de la BTK” se refiere a agentes que previenen la actividad cinasa de BTK con una CI50 de 0,001 pM a aproximadamente 2 pM, en un aspecto, con 0,002 pM a aproximadamente 2 pM. En un aspecto, los inhibidores de la BTK son anticuerpos, oligonucleótidos antisentido, péptidos.

En otro aspecto, los inhibidores de la BTK son compuestos de peso molecular pequeño con un peso molecular (PM) de menos de 1500 dalton (Da).

En un aspecto, dichos compuestos inhibidores de la BTK de peso molecular pequeño son los compuestos descritos en los documentos WO2011/152351 y WO2013/081016.

En un aspecto, un compuesto inhibidor de la BTK de peso molecular pequeño de acuerdo con la invención se caracteriza por la fórmula general (I)

En la fórmula, L representa (1) -O -, (2) -S -, (3) -S O -, (4) -S O ²-, (5) -N H -, (6) -C(O )-, (7) -CH ²-O -, (8) -O -C H ²-, (9) -CH ²- o (10) -CH(OH)-;

R1 representa (1) un átomo de halógeno, (2) un grupo alquilo C^{1 -4} , (3) un grupo alcoxi C^{1 -4} , (4) un grupo haloalquilo C^1-4 o (5) un grupo haloalcoxi C^{1 -4} ;

el anillo 1 representa un grupo cíclico de 4 a 7 miembros, que puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) átomos de halógeno, (2) grupos alquilo C^{1 -4} , (3) grupos alcoxi C^{1 -4} , (4) nitrilo, (5) grupos haloalquilo C^1-4 y (6) grupos haloalcoxi C^{1 -4} , en el que cuando están presentes dos o más sustituyentes en el anillo 1, estos sustituyentes pueden formar un grupo cíclico de 4 a 7 miembros conjuntamente con los átomos en el anillo 1 al que están enlazados estos sustituyentes; el anillo 2 representa un heterociclo saturado de 4 a 7 miembros, que puede estar sustituido con de uno a tres -K -R 2;

K representa (1) un enlace, (2) un alquileno C^{1 -4} , (3) -C(O )-, (4) -C(O)-CH ²-, (5) -CH ²-C(O)-, (6) -C(O )O - o (7) -SO ²- (en los que el enlace a la izquierda está enlazado al anillo 2);

R2 representa (1) un alquilo C^{1 -4} , (2) un alquenilo C^2-4 o (3) un grupo alquinilo C^{2 -4} , cada uno de los cuales puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) NR3R4, (2) átomos de halógeno, (3) CONR5R6, (4) CO²R⁷ y (5) OR8;

R3 y R4 representan cada uno independientemente (1) un átomo de hidrógeno o (2) un grupo alquilo C^1-4 que puede estar sustituido con OR9 o c On R10R11;

R3 y R4, conjuntamente con el átomo de nitrógeno al que están enlazados, pueden formar un heterociclo saturado nitrogenado de 4 a 7 miembros, que puede estar sustituido con un grupo oxo o un grupo hidroxilo;

R5 y R6 representan cada uno independientemente (1) un átomo de hidrógeno, (2) un grupo alquilo C^1-4 o (3) un grupo fenilo;

R7 representa (1) un átomo de hidrógeno o (2) un grupo alquilo C^{1 -4} ;

R8 representa (1) un átomo de hidrógeno, (2) un grupo alquilo C^{1 -4} , (3) un grupo fenilo o (4) un grupo benzotriazolilo;

R9 representa (1) un átomo de hidrógeno o (2) un grupo alquilo C^{1 -4} ;

R10 y R11 representan cada uno independientemente (1) un átomo de hidrógeno o (2) un grupo alquilo C^{1 -4} ; n representa un número entero de 0 a 4;

m representa un número entero de 0 a 2; y

cuando n es dos o más, los R1 pueden ser iguales entre sí o pueden ser diferentes entre sí),

un isómero óptico de los mismos o su mezcla, una sal de los mismos, un solvato de los mismos, un N-óxido de los mismos o un profármaco de los mismos;

[2] el compuesto de acuerdo con [1] anterior, en el que R2 es un grupo alquenilo C^{2 -4} o un grupo alquinilo C^{2 -4} , cada uno de los cuales puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) NR3R4, (2) átomos de halógeno, (3) CONR5R6, (4) CO²R⁷ y (5) OR8;

[3] el compuesto de acuerdo con [1] anterior, en el que el anillo 1 es un anillo de benceno, ciclohexano o piridina, cada uno de los cuales puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) átomos de halógeno, (2) grupos alquilo C^{1 -4} , (3) grupos alcoxi C^{1 -4} , (4) nitrilo y (5) CF³ ;

[4] el compuesto de acuerdo con [1] anterior, en el que el anillo 2 es un heterociclo saturado nitrogenado de 4 a 7 miembros, que puede estar sustituido con de uno a tres -K -R 2;

[5] el compuesto de acuerdo con [4] anterior, en el que el heterociclo saturado nitrogenado de 4 a 7 miembros es un anillo de azetidina, pirrolidina o piperidina;

[6] el compuesto de acuerdo con [1] anterior, representado mediante la fórmula general (I-1)

En la fórmula, el anillo 1-1 representa un anillo de benceno, ciclohexano o piridina, cada uno de los cuales puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) átomos de halógeno, (2) grupos alquilo C^{1 -4} , (3) grupos alcoxi C^{1 -4} , (4) nitrilo y (5) CF³ , y el anillo 2-1 representa un heterociclo saturado nitrogenado de 4 a 7 miembros, que puede estar sustituido con de uno a tres -K -R 2, en el que los demás símbolos tienen las mismas definiciones que anteriormente);

[7] el compuesto de acuerdo con [6] anterior, en el que R2 es un grupo alquenilo C^{2 -4} o un grupo alquinilo C^{2 -4} , cada uno de los cuales puede estar sustituido con de uno a cinco sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en (1) NR3R4, (2) átomos de halógeno, (3) CONR5R6, (4) CO²R⁷ y (5)

[8] el compuesto de acuerdo con [1] anterior, que es (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1-acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona u (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o un isómero óptico de los mismos o su mezcla;

Preferentemente, el inhibidor de la BTK de acuerdo con la invención es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma.

La preparación del inhibidor de la BTK para su uso de acuerdo con la invención se lleva a cabo como se divulga en el documento WO2011/152351.

"Sal" se refiere a las sales de los compuestos como una sal farmacéuticamente aceptable. Dichas sales se pueden ejemplificar mediante las sales con metales alcalinos (potasio, sodio y similares), sales con metales alcalinotérreos (calcio, magnesio y similares), la sal de amonio, sales con aminas orgánicas farmacéuticamente aceptables (tetrametilamonio, trietilamina, metilamina, dimetilamina, ciclopentilamina, bencilamina, fenetilamina, piperidina, monoetanolamina, dietanolamina, tris(hidroximetil)aminometano, lisina, arginina, N-metil-D-glucamina y similares), y sales de adición de ácidos (sales de ácidos inorgánicos (el clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, fosfato, nitrato y similares) y sales de ácidos orgánicos (el acetato, trifluoroacetato, lactato, tartrato, oxalato, fumarato, maleato, benzoato, citrato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, toluenosulfonato, isetionato, glucuronato, gluconato y similares)).

La “CI50” se refiere a la concentración de un compuesto particular requerida para inhibir un 50 % de una actividad medida específica. La CI50 de los inhibidores de la BTK que inhiben la actividad cinasa de BTK se puede medir, entre otros, como se describe posteriormente.

Ensayo de actividad in vitro para la determinación de la CI50 de un inhibidor de la BTK:

Se midió la actividad inhibidora de la enzima Btk en base al protocolo proporcionado por el fabricante, usando Btk (Invitrogen Corporation) y el kit de ensayo para cinasas Z'-LYTE™-péptido Tyr1 (Invitrogen Corporation), que contenía los siguientes reactivos: péptido Tyr-1, fosfopéptido Thy-1, tampón cinasa 5x, ATP, reactivo de desarrollo B, tampón de desarrollo y reactivo de detención. Se distribuyeron 5 pl/pocillo de una solución de un inhibidor de la BTK diluida con dimetilsulfóxido (DMSO), o DMSO, y 10 pl/pocillo de la solución de mezcla de sustrato/enzima en una placa de ensayo de 96 pocillos y se llevó a cabo una reacción durante 20 minutos a 30 °C. Se preparó la solución de mezcla de sustrato/enzima mediante dilución con el tampón cinasa (DL-ditiotreitol (DTT, 2,7 mM), tampón cinasa 1,33x) para proporcionar una concentración final para el péptido Tyr-1 de 4 pM y una concentración de Btk final de 5 nM. A continuación, se añadieron 5 pl/pocillo de trifosfato de adenosina (ATP, concentración final = 36 pM) y se llevó a cabo una reacción durante 1 hora a 30 °C. Después del final de la reacción, se añadieron 10 pl de una solución de desarrollo, proporcionada diluyendo el reactivo de desarrollo B a 128x usando el tampón de desarrollo, y se llevó a cabo una reacción durante 1 hora adicional a 30 °C. A continuación, se detuvo la reacción enzimática añadiendo 10 pl de la solución de detención. Se midió la intensidad de fluorescencia a 445 nm y 520 nm en cada pocillo usando un lector de placas de fluorescencia Fusion Universal Microplate Analyzer (PerkinElmer Inc.). Se determinó el porcentaje de fosforilación usando la proporción de la emisión a 445 nm (emisión de cumarina) con respecto a la emisión a 520 nm (emisión de fluoresceína) de acuerdo con el protocolo proporcionado con el kit.

El porcentaje de inhibición (%) mediante un inhibidor de la BTK se calculó usando la siguiente ecuación.

porcentaje de inhibición (%) de la fosforilación = 1 - {(AC - AX)/(AC - AB)} x 100

AX : % de fosforilación cuando se ha añadido un inhibidor de la BTK

AB : % de fosforilación en ausencia de adición de ATP (blanco)

AC : % de fosforilación cuando solo se ha añadido DMSO (control)

Se determinó el valor de inhibición del 50 % (valor de CI50) para un inhibidor de la BTK a partir de la curva de inhibición en base al % de inhibición a cada concentración de un inhibidor de la BTK.

El componente oligosacárido puede afectar significativamente a las propiedades pertinentes a la eficacia de una glucoproteína terapéutica, incluyendo la estabilidad física, la resistencia al ataque por proteasas, las interacciones con el sistema inmunitario, la farmacocinética y la actividad biológica específica. Dichas propiedades pueden depender no solo de la presencia o ausencia, sino también de las estructuras específicas de los oligosacáridos. Se pueden realizar algunas generalizaciones entre la estructura de oligosacárido y la función de la glucoproteína. Por ejemplo, determinadas estructuras de oligosacárido median en el rápido aclaramiento de la glucoproteína de la circulación sanguínea a través de interacciones con proteínas de unión a carbohidrato específicas, mientras que otras se pueden unir mediante anticuerpos y desencadenar reacciones inmunitarias no deseadas (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).

Las células de mamífero son huéspedes excelentes para la producción de glucoproteínas terapéuticas debido a su capacidad de glucosilar proteínas en la forma más compatible para su aplicación en seres humanos (Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981). Las bacterias casi nunca glucosilan proteínas y, como otros tipos de huéspedes comunes, tales como levaduras, hongos filamentosos, células vegetales y de insecto, proporcionan patrones de glucosilación asociados con el rápido aclaramiento de la circulación sanguínea, interacciones inmunitarias no deseables y, en algunos casos específicos, una actividad biológica reducida. Entre las células de mamífero, más comúnmente se han usado las células de ovario de hámster chino (CHO) durante las últimas dos décadas. Además de proporcionar patrones de glucosilación adecuados, estas células permiten la generación consistente de líneas de células clonales genéticamente estables y altamente productivas. Se pueden cultivar a densidades altas en biorreactores simples usando medios libres de suero y permiten el desarrollo de bioprocedimientos seguros y reproducibles. Otras células animales comúnmente usadas incluyen las células de riñón de cría de hámster (BHK), las células de mieloma de ratón NS0 y SP2/0. Más recientemente, también se ha sometido a prueba la producción de animales transgénicos (Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981).

Todos los anticuerpos contienen estructuras de carbohidrato en posiciones conservadas en las regiones constantes de la cadena pesada, poseyendo cada isotipo un conjunto distinto de estructuras de carbohidrato unido a N, que afectan de forma variable al ensamblaje, secreción o actividad funcional de las proteínas (Wright, A., y Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). La estructura del carbohidrato unido a N acoplado varía considerablemente dependiendo del grado de procesamiento y puede incluir oligosacáridos de alto contenido en manosa, con ramificaciones múltiples, así como oligosacáridos complejos biantenarios (Wright, A., y Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32). Típicamente, existe un procesamiento heterogéneo de las estructuras de oligosacárido nuclear acopladas en un sitio de glucosilación particular, de tal manera que incluso los anticuerpos monoclonales existan como glucoformas múltiples. Asimismo, se ha demostrado que se producen diferencias importantes en la glucosilación de anticuerpos entre líneas de células e incluso se observan diferencias leves para una línea de células dada cultivada en condiciones de cultivo diferentes (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822).

Una forma de obtener grandes incrementos de la potencia, mientras se mantiene un procedimiento de producción simple y se evitan potencialmente los efectos secundarios no deseables significativos, es potenciar las funciones efectoras naturales mediadas por células de los anticuerpos monoclonales genomanipulando su componente oligosacárido como se describe en Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180 y el documento US 6.602.684. Los anticuerpos de tipo IgG1, los anticuerpos más comúnmente usados en la inmunoterapia contra el cáncer, son glucoproteínas que tienen un sitio de glucosilación unido a N conservado en Asn297 de cada dominio CH2. Los dos oligosacáridos biantenarios complejos acoplados a Asn297 están enterrados entre los dominios CH2, formando extensos contactos con la cadena principal polipeptídica, y su presencia es esencial para que el anticuerpo medie en las funciones efectoras, tales como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) (Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A. y Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32).

Se demostró previamente que la sobreexpresión en células de ovario de hámster chino (CHO) de p(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III ("GnTIII7y), una glucosiltransferasa que cataliza la formación de oligosacáridos bisecados, incrementa significativamente la actividad en ADCC in vitro de un anticuerpo antineuroblastoma monoclonal quimérico (chCE7) producido por las células CHO genomanipuladas (véase Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; y el documento WO 99/154342). El anticuerpo chCE7 pertenece a una gran clase de anticuerpos monoclonales no conjugados que tienen afinidad y especificidad tumorales altas, pero tienen muy poca potencia para ser útiles clínicamente cuando se producen en líneas de células industriales estándar que carecen de la enzima GnTIII (Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180). Este estudio fue el primero en demostrar que se podían obtener grandes incrementos de la actividad en ADCC genomanipulando las células productoras de anticuerpos para expresar GnTIII, lo que también dio lugar a un incremento de la proporción de oligosacáridos bisecados asociados a la región constante (Fc), incluyendo oligosacáridos bisecados no fucosilados, por encima de las cantidades encontradas en anticuerpos naturales.

El término “cáncer” como se usa en el presente documento incluye linternas, leucemias linfocíticas, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico (CPNM), cáncer de pulmón de tipo bronquioloalveolar, cáncer de huesos, cáncer pancreático, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de partes blandas, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, mesotelioma, cáncer hepatocelular, cáncer biliar, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), tumores de la médula espinal, glioma del tronco encefálico, glioblastoma multiforme, astrocitomas, schwanomas, ependimomas, meduloblastomas, meningiomas, carcinomas de células escamosas, adenoma hipofisario, incluyendo las versiones resistentes al tratamiento de cualquiera de los cánceres anteriores o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores. En un modo de realización, el término cáncer se refiere a un cáncer que expresa CD20.

El término "expresión del antígeno CD20” pretende indicar un nivel de expresión significativo del antígeno CD20 en una célula, preferentemente en la superficie celular de un linfocito T o B, más preferentemente un linfocito B, de un tumor o cáncer, respectivamente, preferentemente una neoplasia hematológica. Se pueden determinar los pacientes que tienen un “cáncer que expresa CD20” mediante ensayos estándar conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede medir la expresión del antígeno CD20 usando detección inmunohistoquímica (IHQ), FACS o por medio de detección basada en PCR del ARNm correspondiente.

El término “cáncer que expresa CD20” como se usa en el presente documento se refiere a todos los cánceres en los que las células cancerosas muestran una expresión del antígeno CD20. Preferentemente cáncer que expresa CD20 como se usa en el presente documento se refiere a linfomas (preferentemente linfomas no hodgkinianos (LNH) de linfocitos B) y leucemias linfocíticas. Dichos linfomas y leucemias linfocíticas incluyen, por ejemplo, a) linfomas foliculares, b) linfomas de células pequeñas no hendidas/linfoma de Burkitt (incluyendo linfoma de Burkitt endémico, linfoma de Burkitt esporádico y linfoma no Burkitt), c) linfomas de la zona marginal (incluyendo linfoma de linfocitos B de la zona marginal extraganglionar (linfomas de tejido linfático asociado a mucosa, TLAM), linfoma de linfocitos B de la zona marginal ganglionar y linfoma de la zona marginal esplénica), d) linfoma de células del manto (LCM), e) linfoma de células grandes (incluyendo linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de células mixtas, linfoma inmunoblástico, linfoma primario mediastínico de linfocitos B, linfoma angiocéntrico-linfoma pulmonar de linfocitos B, f) tricoleucemia, g) linfoma linfocítico, macroglobulinemia de Waldenstrom, h) leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño (LLP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B, i) neoplasias de células plasmáticas, mieloma de células plasmáticas, mieloma múltiple, plasmocitoma, j) enfermedad de Hodgkin.

En un modo de realización, el cáncer que expresa CD20 es un linfoma no hodgkiniano (LNH) de linfocitos B. En otro modo de realización, el cáncer que expresa CD20 es un linfoma de células del manto (LCM), leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma de Burkitt, tricoleucemia, linfoma folicular, mieloma múltiple, linfoma de la zona marginal, trastorno linfoproliferativo posterior al trasplante (PTLD), linfoma asociado al VIH, macroglobulinemia de Waldenstrom o linfoma primario del SNC.

El término "un procedimiento de tratamiento" o sus equivalentes, cuando, por ejemplo, se aplica al cáncer, se refiere a un procedimiento o acción que está diseñado para reducir o eliminar el número de células cancerosas en un paciente o para aliviar los síntomas de un cáncer. "Un procedimiento de tratamiento" del cáncer u otro trastorno proliferativo no significa necesariamente que las células cancerosas u otro trastorno se eliminarán realmente, que el número de células o trastorno se reducirán realmente o que los síntomas de un cáncer u otro trastorno se aliviarán realmente. A menudo, un procedimiento de tratamiento del cáncer se realizará incluso con una probabilidad de éxito baja, pero, dados los antecedentes médicos y la expectativa de supervivencia estimada de un paciente, se considera, no obstante, que induce una acción beneficiosa global.

Los términos “combinación”, “coadministración” o “coadministrar” se refieren a la administración de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK como dos formulaciones separadas (o como una formulación única). La coadministración puede ser simultánea o secuencial en cualquier orden, en la que preferentemente existe un periodo de tiempo durante el que ambos (o todos los) agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas. Dicho anticuerpo afucosilado anti-CD20 y dicho inhibidor de la BTK se coadministran simultánea o bien secuencialmente (por ejemplo, por vía intravenosa (i.v.) a través de una infusión continua (una para el anticuerpo anti-CD20 y finalmente una para dicho inhibidor de la BTK; o, por ejemplo, el anticuerpo anti-CD20 se administra por vía intravenosa (i.v.) a través de una infusión continua y dicho inhibidor de la BTK se administra por vía oral). Cuando ambos agentes terapéuticos se coadministran secuencialmente, la dosis se administra el mismo día en dos administraciones separadas o bien uno de los agentes se administra el día 1 y el segundo se coadministra del día 2 al día 7, preferentemente del día 2 al 4. Por tanto, en un aspecto, el término “secuencialmente” significa en los 7 días después de la dosis del primer componente (anticuerpo anti-CD20 o inhibidor de la BTK), preferentemente en los 4 días después de la dosis del primer componente; y el término “simultáneamente” significa al mismo tiempo. El término “coadministración” con respecto a las dosis de mantenimiento de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK significa que las dosis de mantenimiento también se pueden coadministrar simultáneamente, si el ciclo de tratamiento es apropiado para ambos fármacos, por ejemplo, cada semana. O el inhibidor de la BTK se administra, por ejemplo, cada primer a tercer día y dicho anticuerpo afucosilado se administra cada semana. O las dosis de mantenimiento se coadministran secuencialmente, en uno o bien en varios días.

Es evidente que los anticuerpos se administran al paciente en una “cantidad terapéuticamente eficaz” (o simplemente “cantidad eficaz”) que es la cantidad del respectivo compuesto o combinación que provocará la respuesta médica o biológica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca el investigador, veterinario, médico u otro facultativo.

La cantidad de coadministración de dicho anticuerpo afucosilado anti-CD20 y dicho inhibidor de la BTK y el tiempo de coadministración dependerán del tipo (especie, sexo, edad, peso, etc.) y estado del paciente que se va a tratar y la gravedad de la enfermedad o afección que se trata. Dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK se coadministran adecuadamente al paciente de una vez o durante una serie de tratamientos, por ejemplo, el mismo día o al día siguiente.

Si la administración es intravenosa, el tiempo de infusión inicial para dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado o dicho inhibidor de la BTK puede ser más largo que los tiempos de infusión posteriores, por ejemplo, de aproximadamente 90 minutos para la infusión inicial y de aproximadamente 30 minutos para las infusiones posteriores (si la infusión inicial se tolera bien).

Dependiendo del tipo y gravedad de la enfermedad, de aproximadamente 0,1 mg/kg a 50 mg/kg (por ejemplo, 0,1­ 20 mg/kg) de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado; y de 1 pg /kg a 50 mg/kg (por ejemplo, 0,1-20 mg/kg) de dicho inhibidor de la BTK es una dosificación experimental inicial para la coadministración de ambos fármacos al paciente. En un aspecto, la dosificación preferente de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado (preferentemente el anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado, más preferentemente obinutuzumab) estará en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg. Por tanto, se pueden coadministrar al paciente una o más dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, 10 mg/kg o 30 mg/kg (o cualquier combinación de las mismas). En un aspecto, la dosificación preferente de dicho inhibidor de la BTK (preferentemente 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma) estará en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg. Por tanto, se pueden coadministrar al paciente una o más dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, 10 mg/kg o 30 mg/kg (o cualquier combinación de las mismas).

Dependiendo del tipo (especie, sexo, edad, peso, etc.) y estado del paciente y del tipo de anticuerpo anti-CD20 afucosilado, preferentemente el anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado, más preferentemente obinutuzumab, la dosificación y la pauta posológica de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado puede diferir de dicho inhibidor de la BTK. Por ejemplo, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado se puede administrar, por ejemplo, cada una a tres semanas y dicho inhibidor de la BTK se puede administrar diariamente o cada 2 a 10 días. También se puede administrar una dosis de carga inicial más alta, seguida de una o más dosis más bajas.

En un aspecto, la dosificación preferente de dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado (preferentemente el anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado, más preferentemente obinutuzumab) será de 800 a 1600 mg (en un aspecto, de 800 a 1200 mg) el día 1, 8, 15 de un ciclo de dosificación de 3 a 6 semanas y, a continuación, en una dosificación de 400 a 1200 (en un aspecto, de 800 a 1200 mg el día 1 de hasta nueve ciclos de dosificación de 3 a 4 semanas).

En un aspecto, la dosis para dicho inhibidor de la BTK seleccionado del grupo que consiste en: (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1-acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona es como sigue. La dosis para dicho inhibidor de la BTK seleccionado del grupo de un isómero óptico de dichos compuestos (1) a (8) y la mezcla de los mismos es como sigue. La dosis para dicho inhibidor de la BTK 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma es como sigue. Dicha dosis de acuerdo con la invención es de 10 mg/kg a 70 mg/kg, preferentemente de 20 mg/kg a 55 mg/kg, una vez diariamente o cada dos días como administración oral.

La dosis recomendada puede variar si existe otra coadministración de agente quimioterápico y se basa en el tipo de agente quimioterápico.

En un modo de realización, la presente invención es útil para prevenir o reducir las metástasis u otra diseminación en dicho paciente que padece cáncer, preferentemente un cáncer que expresa CD20. La presente invención es útil para incrementar la duración de la supervivencia de dicho paciente, incrementar la supervivencia sin progresión de dicho paciente, incrementar la duración de la respuesta, dando como resultado una mejora estadísticamente significativa y clínicamente valiosa del paciente tratado como se mide mediante la duración de la supervivencia, la supervivencia sin progresión, la tasa de respuesta o la duración de la respuesta. En un modo de realización preferente, la presente invención es útil para incrementar la tasa de respuesta en un grupo de pacientes.

En el contexto de la presente invención, otros agentes citotóxicos, quimioterápicos o antineoplásicos adicionales, o compuestos o radiación ionizante que potencian los efectos de dichos agentes (por ejemplo, citocinas) se pueden usar en la politerapia con el anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK del cáncer. Dichas moléculas están presentes de forma adecuada en combinación en cantidades que sean eficaces para el propósito pretendido. En un aspecto de la descripción, dicha politerapia con anticuerpo anti-CD20 afucosilado, preferentemente el anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado, más preferentemente obinutuzumab del modo de realización, y dicho inhibidor de la BTK se usa sin dichos agentes citotóxicos, quimioterápicos o antineoplásicos adicionales, o compuestos que potencian los efectos de dichos agentes adicionales.

Dichos agentes adicionales incluyen, por ejemplo: agentes alquilantes o agentes con una acción alquilante, tales como ciclofosfamida (CTX; por ejemplo, cytoxan®), clorambucilo (CHL; por ejemplo, leukeran®), cisplatino (CisP; por ejemplo, platino®), busulfano (por ejemplo, myleran®), melfalán, carmustina (BCNU), estreptozocina, trietilenomelamina (TEM), mitomicina C y similares; antimetabolitos, tales como metotrexato (MTX), etopósido (VP16; por ejemplo, vepesid®), 6-mercaptopurina (6MP), 6-tioguanina (6TG), citarabina (Ara-C), 5-fluorouracilo (5-FU), capecitabina (por ejemplo, Xeloda®), dacarbazina (DTIC) y similares; antibióticos, tales como actinomicina D, doxorubicina (DXR; por ejemplo, adriamycin®), daunorubicina (daunomicina), bleomicina, mitramicina y similares; alcaloides, tales como alcaloides de la vinca, tales como vincristina (VCR), vinblastina y similares; y otros agentes antitumorales, tales como paclitaxel (por ejemplo, taxol®) y derivados de paclitaxel, los agentes citostáticos, glucocorticoides, tales como dexametasona (DEX; por ejemplo, decadron®) y corticoesteroides, tales como prednisona, inhibidores enzimáticos nucleosídicos, tales como hidroxiurea, enzimas que degradan aminoácidos, tales como como asparaginasa, ácido folínico y otros derivados del ácido fólico y diversos agentes antitumorales similares. También se pueden usar los siguientes agentes como agentes adicionales: amifostina (por ejemplo, ethyol®), dactinomicina, mecloretamina (mostaza nitrogenada), estreptozocina, ciclofosfamida, lomustina (CCNU), doxorubicina liposómica (por ejemplo, doxil®), gemcitabina (por ejemplo, gemzar®), daunorubicina liposómica (por ejemplo, daunoxome®), procarbazina, mitomicina, docetaxel (por ejemplo, taxotere®), aldesleucina, carboplatino, oxaliplatino, cladribina, camptotecina, CPT 11 (irinotecán), 10-hidroxi-7-etilcamptotecina (SN38), floxuridina, fludarabina, ifosfamida, idarubicina, mesna, interferón beta, interferón alfa, mitoxantrona, topotecán, leuprorelina, megestrol, melfalán, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegaspargasa, pentostatina, pipobromano, plicamicina, tamoxifeno, tenipósido, testolactona, tioguanina, tiotepa, uramustina, vinorelbina, clorambucilo. En un modo de realización, la politerapia con el anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK se usa sin dichos agentes adicionales.

El uso de los agentes citotóxicos y antineoplásicos descritos anteriormente, así como de los fármacos antineoplásicos antiproliferativos específicos de diana, como los inhibidores de proteínas cinasas, en tratamientos quimioterápicos, en general, está bien caracterizado en las técnicas de tratamiento del cáncer y su uso en el presente documento se encuentra bajo las mismas consideraciones para supervisar la tolerabilidad y eficacia y para controlar las vías de administración y dosificaciones, con algunos ajustes. Por ejemplo, las dosificaciones reales de los agentes citotóxicos pueden variar dependiendo de la respuesta de las células cultivadas del paciente determinado usando procedimientos de histocultivo. En general, la dosificación se reducirá en comparación con la cantidad usada en ausencia de otros agentes adicionales.

Las dosificaciones típicas de un agente citotóxico eficaz pueden estar en los intervalos recomendados por el fabricante y, cuando se indique por las respuestas in vitro o las respuestas en modelos animales, se pueden reducir en hasta aproximadamente un orden de magnitud de concentración o cantidad. Por tanto, la dosificación real dependerá del juicio del médico, el estado del paciente y la eficacia del procedimiento terapéutico en base a la reactividad in vitro de las células malignas cultivadas primarias o la muestra de tejido histocultivado, o las respuestas observadas en modelos animales apropiados.

En el contexto de la presente invención, se puede aplicar una cantidad eficaz de radiación ionizante y/o se puede usar un radiofármaco además de la politerapia con el anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK del cáncer que expresa CD20. La fuente de radiación puede ser externa o bien interna al paciente que se trata. Cuando la fuente es externa al paciente, el tratamiento es conocido como radioterapia de haz externo (RHE). Cuando la fuente de radiación es interna al paciente, el tratamiento se llama braquirradioterapia (BT). Los átomos radiactivos para su uso en el contexto de la presente invención se pueden seleccionar del grupo que incluye, pero que no está limitado a, radio, itrio 90, cesio 137, iridio 192, americio 241, oro 198, cobalto 57, cobre 67, tecnecio 99, yodo 123, yodo 131 e indio 111. También es posible marcar el anticuerpo con dichos isótopos radioactivos. En un aspecto, la politerapia con el anticuerpo anti-CD20 afucosilado y dicho inhibidor de la BTK se usa sin dicha radiación ionizante.

La radioterapia es un tratamiento estándar para controlar tumores y/o metástasis tumorales irresecables o inoperables. Se han observado resultados mejorados cuando la radioterapia se ha combinado con quimioterapia. La radioterapia se basa en el principio de que la radiación de dosis alta administrada a un área diana dará como resultado la muerte de células reproductoras tanto en los tejidos tumorales como en los normales. La pauta de dosificación de radiación se define, en general, en términos de dosis de radiación absorbida (Gy), tiempo y fraccionamiento, y se debe definir cuidadosamente por el oncólogo. La cantidad de radiación que recibe un paciente dependerá de diversas consideraciones, pero las dos más importantes son la localización del tumor en relación con otras estructuras u órganos críticos del cuerpo y la extensión a la que se ha propagado el tumor. Un ciclo de tratamiento típico para un paciente que se somete a radioterapia será un plan de tratamiento durante un periodo de 1 a 6 semanas, con una dosis total de entre 10 y 80 Gy, administrada al paciente en una fracción diaria única de aproximadamente 1,8 a 2,0 Gy, 5 días a la semana. En un aspecto preferente de la descripción de la presente invención, existe una sinergia cuando los tumores en pacientes humanos se tratan con la politerapia de la invención y radiación. En otras palabras, la inhibición del crecimiento tumoral por medio de los agentes que comprenden la combinación para su uso en la invención se potencia al combinarse con radiación, opcionalmente con agentes quimioterápicos o antineoplásicos adicionales. Los parámetros de las radioterapias posquirúrgicas, por ejemplo, están contenidos en el documento WO 99/60023.

Los anticuerpos anti-CD20 afucosilados se administran a un paciente de acuerdo con procedimientos conocidos, mediante administración intravenosa como una infusión intravenosa rápida o mediante infusión continua durante un periodo de tiempo, mediante las vías intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinal, subcutánea, intrarticular, intrasinovial o intratecal. En un aspecto de la descripción, la administración del anticuerpo es intravenosa o subcutánea.

El inhibidor de la BTK se administra a un paciente de acuerdo con procedimientos conocidos, mediante administración intravenosa como una infusión intravenosa rápida o mediante infusión continua durante un periodo de tiempo, por vía oral, mediante las vías intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinal, subcutánea, intrarticular, intrasinovial o intratecal. En un aspecto de la descripción, la administración del inhibidor de la BTK es intravenosa o por vía oral.

Como se usa en el presente documento, se pretende que un "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluya cualquiera y todos los materiales compatibles con la administración farmacéutica, incluyendo disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y otros materiales y compuestos compatibles con la administración farmacéutica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla el uso del mismo en las composiciones de la invención. También se pueden incorporar compuestos activos complementarios en las composiciones.

Composiciones farmacéuticas:

Las composiciones farmacéuticas se pueden obtener procesando el anticuerpo anti-CD20 y/o el inhibidor de la BTK con vehículos inorgánicos u orgánicos farmacéuticamente aceptables. Se pueden usar lactosa, almidón de maíz o derivados del mismo, talco, ácido esteárico o sus sales y similares, por ejemplo, como dichos vehículos para comprimidos, comprimidos recubiertos, grageas y cápsulas de gelatina dura. Los vehículos adecuados para las cápsulas de gelatina blanda, por ejemplo, son grasas vegetales, ceras, grasas, polioles semisólidos y líquidos y similares. Sin embargo, dependiendo de la naturaleza de la sustancia activa, normalmente no se requiere ningún vehículo en el caso de las cápsulas de gelatina blanda. Los vehículos adecuados para la producción de soluciones y jarabes, por ejemplo, son agua, polioles, glicerol, grasa vegetal y similares. Los vehículos adecuados para supositorios, por ejemplo, son aceites naturales o hidrogenados, ceras, grasas, polioles semilíquidos o líquidos y similares.

Además, las composiciones farmacéuticas pueden contener conservantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, saborizantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de enmascaramiento o antioxidantes. Todavía también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas.

En un aspecto de la descripción, la composición comprende tanto dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos (preferentemente el anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado, más preferentemente obinutuzumab) como dicho inhibidor de la BTK para su uso en el tratamiento del cáncer, en particular, de cáncer que expresa CD20 (preferentemente un linfoma o leucemia linfocítica, más preferentemente un linfoma no hodgkiniano (LNH) de linfocitos B, linfoma de células del manto (LCM), leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma de Burkitt, tricoleucemia, linfoma folicular, mieloma múltiple, linfoma de la zona marginal, trastorno linfoproliferativo posterior al trasplante (PTLD), linfoma asociado al VIH, macroglobulinemia de Waldenstrom o linfoma primario del SNC).

Dicha composición farmacéutica puede comprender además uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

La presente descripción proporciona además una composición farmacéutica, por ejemplo, para su uso en el cáncer, que comprende (i) una primera cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos, (preferentemente un anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado); y (ii) una segunda cantidad eficaz de un inhibidor de la BTK. Dicha composición comprende opcionalmente vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas del anticuerpo anti-CD20 afucosilado solo usadas de acuerdo con la presente invención se preparan para su almacenamiento mezclando un anticuerpo que tenga el grado de pureza deseado con vehículos, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables opcionales (Remington's Pharmaceutical Sciences 16.a edición, Osol, A. (ed.) (1980)), en forma de formulaciones liofilizadas o de soluciones acuosas. Los vehículos, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas e incluyen tampones, tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos, tales como metil- o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como seroalbúmina, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos, tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros carbohidratos, incluyendo glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes, tales como EDTA; glúcidos, tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales, tales como sodio; complejos de metal (por ejemplo, complejos Zn-proteína) y/o tensioactivos no iónicos, tales como TWEEN™, PLURONlCS™ o polietilenglicol (PEG).

Las composiciones farmacéuticas de los inhibidores de la BTK pueden ser similares a las descritas anteriormente para el anticuerpo anti-CD20 afucosilado.

Las composiciones farmacéuticas del inhibidor de la BTK de molécula pequeña incluyen las adecuadas para su administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las composiciones se pueden presentar convenientemente en una forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquier procedimiento bien conocido en la técnica de farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única variará dependiendo del huésped que se trata, así como del modo de administración particular. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosificación única, en general, será la cantidad de un inhibidor de la BTK que produce un efecto terapéutico. En general, de un cien por ciento, esta cantidad variará desde aproximadamente un 1 por ciento a aproximadamente un noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, preferentemente desde aproximadamente un 5 por ciento a aproximadamente un 70 por ciento, lo más preferentemente desde aproximadamente un 10 por ciento a aproximadamente un 30 por ciento. Los procedimientos de preparación de estas composiciones incluyen la etapa de asociar un inhibidor de la BTK con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes auxiliares. En general, las composiciones farmacéuticas del inhibidor de la BTK se preparan asociando uniforme e íntimamente un inhibidor de la BTK con vehículos líquidos, o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y, a continuación, si es necesario, conformando el producto. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración oral pueden estar en forma de cápsulas, obleas, sobres, pastillas, comprimidos, pastillas para chupar (usando una base con sabor, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto), polvos, granulados, o como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga) y/o como enjuagues bucales y similares, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada de un inhibidor de la BTK como ingrediente activo. También se puede administrar un inhibidor de la BTK como una infusión intravenosa rápida, electuario o pasta.

En otro aspecto de la descripción, el anticuerpo anti-CD20 afucosilado y el inhibidor de la BTK se formulan en dos composiciones farmacéuticas separadas.

Los ingredientes activos también pueden estar atrapados en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli(metacrilato de metilo), respectivamente, en sistemas de administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se divulgan en Remington's Pharmaceutical Sciences 16.a edición, Osol, A. (ed.) (1980).

Se pueden preparar preparaciones de liberación mantenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación mantenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo, estando dichas matrices en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación mantenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo) o poli(alcohol vinílico)), polilactidas (documento US 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y L-glutamato de Y-etilo, copolímeros de etileno-acetato de vinilo no degradables, de ácido láctico-glicólico degradables, tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-glicólico y acetato de leuprorelina) y poli(ácido D-(-)-3-hidroxibutírico).

Las formulaciones que se van a usar para su administración in vivo deben ser estériles. Esto se consigue fácilmente mediante filtración a través de membranas de filtración estériles.

Un aspecto de la descripción es una composición farmacéutica que comprende una combinación de un anticuerpo B-Ly1 humanizado que está afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos de la cantidad total de oligosacáridos (glúcidos) en Asn297 y 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma, para el tratamiento del cáncer.

Otro aspecto proporciona un procedimiento para el tratamiento del cáncer, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento (i) una primera cantidad eficaz de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos, (preferentemente un anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado); y (ii) una segunda cantidad eficaz de un inhibidor de la BTK.

En un aspecto de la descripción, la cantidad de fucosa está entre un 40 % y un 60 %.

Preferentemente, dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20.

Preferentemente, dicho cáncer que expresa CD20 es un linfoma o leucemia linfocítica.

Preferentemente, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo anti-CD20 de tipo II.

Preferentemente, dicho anticuerpo es un anticuerpo B-Ly1 humanizado como se divulga en el presente documento.

Preferentemente, dicho anticuerpo es obinutuzumab.

Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1-acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona. También, preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo de un isómero óptico de dichos compuestos (1) a (8) y la mezcla de los mismos.

Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma.

Preferentemente, dicha sal es un clorhidrato.

Preferentemente, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo B-Ly1 humanizado y dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1-acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona. También, preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo de un isómero óptico de dichos compuestos (1) a (8) y la mezcla de los mismos. Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma y dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20, preferentemente un linfoma o leucemia linfocítica.

Como se usa en el presente documento, el término "paciente" se refiere preferentemente a un ser humano que necesita tratamiento con un anticuerpo anti-CD20 afucosilado (por ejemplo, un paciente que padece un cáncer que expresa CD20) para cualquier propósito y, más preferentemente un ser humano que necesita dicho tratamiento para tratar el cáncer, o una afección o lesión precancerosa. Sin embargo, el término "paciente" también se puede referir a animales no humanos, preferentemente mamíferos, tales como perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, ovejas y primates no humanos, entre otros.

En un modo de realización, la invención hace uso de un anticuerpo anti-CD20 afucosilado con una cantidad de fucosa de un 60 % o menos y un inhibidor de la BTK para su uso en el tratamiento del cáncer.

Preferentemente, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo B-Ly1 humanizado.

Preferentemente, dicho anticuerpo B-Ly1 humanizado afucosilado es obinutuzumab.

Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1-acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1 -(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona. También, preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo de un isómero óptico de dichos compuestos (1) a (8) y la mezcla de los mismos.

Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma. Dicho compuesto también se muestra como la siguiente estructura:

Preferentemente, dicha sal es un clorhidrato.

Preferentemente, dicho anticuerpo anti-CD20 afucosilado es un anticuerpo B-Ly1 humanizado, más preferentemente obinutuzumab, y dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo que consiste en: (1) 9-(1-acriloil-3-azetidinil)-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (2) 6-amino-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (3) 9-[(1 -acriloil-4-piperidinil)metil]-6-amino-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (4) 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (5) 6-amino-9-{(3S)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (6) 6-amino-7-[4-(3-clorofenoxi)fenil]-9-{(3R)-1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, (7) 6-amino-9-[1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y (8) 6-amino-9-{1-[(2E)-4-(dimetilamino)-2-butenoil]-3-pirrolidinil}-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona. También, preferentemente, dicho inhibidor de la BTK se selecciona del grupo de un isómero óptico de dichos compuestos (1) a (8) y la mezcla de los mismos. Preferentemente, dicho inhibidor de la BTK es 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma y dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20, preferentemente un linfoma o leucemia linfocítica.

Se proporcionan los siguientes ejemplos y figuras para ayudar al entendimiento de la presente invención, exponiéndose su verdadero alcance en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-CD20 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-CD20 de tipo I y obinutuzumab para su uso en el tratamiento del cáncer en combinación con una 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma.

2. El anticuerpo para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que dicho cáncer es un cáncer que expresa CD20.

3. El anticuerpo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado por que dicho cáncer que expresa CD20 es un linfoma o leucemia linfocítica.

4. El anticuerpo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que dicho anticuerpo anti-CD20 de tipo I es rituximab.

5. El anticuerpo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que se administran uno o más de otros agentes citotóxicos, quimioterápicos o antineoplásicos adicionales, o compuestos o radiación ionizante que potencian los efectos de dichos agentes.

6. Una composición farmacéutica que comprende una combinación de un anticuerpo anti-CD20 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-CD20 de tipo I y obinutuzumab, y un inhibidor de la BTK que se selecciona del grupo que consiste en 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona y una sal de la misma para su uso en el tratamiento del cáncer.

7. La composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada por que dicho anticuerpo anti-CD20 de tipo I es rituximab.

8. El anticuerpo para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la combinación del anticuerpo anti-CD20 de tipo I u obinutuzumab y 6-amino-9-[(3R)-1-(2-butinoil)-3-pirrolidinil]-7-(4-fenoxifenil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona o una sal de la misma se administra como dos formulaciones separadas.