ES2711801T3 - Proceso de fabricación de un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o de 3-fenilimino-3H-fenoxazina - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para formar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o un mediador de 3-fenilimino-3Hfenoxazina, comprendiendo el procedimiento las acciones de: proporcionar un primer reactivo que incluye fenotiazina o una fenoxazina; proporcionar un primer disolvente en el que la fenotiazina o la fenoxazina presentan una solubilidad en el mismo; proporcionar un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina; proporcionar un segundo disolvente en el que el segundo reactivo presenta una solubilidad en el mismo; combinar el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una solución de reactivos; añadir persulfato de sodio a la solución de reactivos para acoplar el primer y el segundo reactivos, dando como resultado una solución de reacción que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3- fenilimino-3H-fenoxazina; y después de añadir el persulfato de sodio, procesar adicionalmente la solución de reacción que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina a fin de aislar al mediador que comprende el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina, en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina tiene la fórmula**Fórmula** en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina tiene la fórmula**Fórmula** y en las que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, resto cíclico, resto heterocíclico, halógeno, haloalquilo, carboxi, carboxialquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, resto ceto aromático, resto ceto alifático, alcoxi, ariloxi, nitro, dialquilamino, aminoalquilo, sulfo, dihidroxiboro y combinaciones de los mismos.

Description

DESCRIPCION

Proceso de fabricacion de un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o de 3-fenilimino-3H-fenoxazina

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere en general a un procedimiento de formacion de un mediador. Mas especificamente, la presente invencion se refiere en general a un procedimiento de formacion de un mediador para su utilizacion en un sensor de analisis electroquimico que esta adaptado para ayudar a determinar informacion relacionada con un analito.

Antecedentes de la invencion

La determinacion cuantitativa de analitos en fluidos corporales es de gran importancia en el diagnostico y el mantenimiento de determinadas condiciones fisicas. Por ejemplo, en determinados individuos deben supervisarse el lactato, el colesterol y la bilirrubina. En particular, es importante que los individuos con diabetes comprueben con frecuencia el nivel de glucosa en sus fluidos corporales para regular la ingesta de glucosa en sus dietas. Los resultados de dichos analisis pueden usarse para determinar, si es necesario, que insulina, u otra medicacion, debe administrarse. En un tipo de sistema de analisis de glucosa en la sangre, los sensores de analisis se utilizan para analizar una muestra de sangre.

Un sensor de analisis contiene material de biodeteccion o reactivo que reacciona con, por ejemplo, la glucosa de la sangre. Un tipo de sensor de analisis electroquimico es un sensor de analisis multicapa que incluye una base o un sustrato y una cubierta. Otro tipo de sensor de analisis electroquimico incluye una base, un espaciador y una cubierta. Los sensores de analisis electroquimicos existentes incluyen al menos dos electrodos en forma de patron de electrodo. Se aplica un potencial a traves de estos electrodos y se mide una corriente en el electrodo de trabajo. La medicion de la corriente es directamente proporcional al tamano del electrodo de trabajo.

Los sensores de analisis electroquimicos se basan en reacciones quimicas catalizadas por enzimas que involucran el analito de interes. En caso de realizar un seguimiento de la glucosa, la reaccion quimica relevante es la oxidacion de la glucosa a gluconolactona o su acido correspondiente. Esta oxidacion esta catalizada por una diversidad de enzimas, algunas de las cuales pueden utilizar coenzimas tales como (fosfato de) nicotinamida adenina dinucleotido (NAD(P)), mientras que otras pueden utilizar coenzimas tales como flavina adenina dinucleotido (FAD) o pirroloquinolina quinona (PQQ).

En las aplicaciones de sensores de analisis, los equivalentes redox generados en el transcurso de la oxidacion de la glucosa se transportan a la superficie de un electrodo, generandose una senal electrica. La magnitud de la senal electrica se correlaciona despues con la concentracion de glucosa. La transferencia de equivalentes redox del sitio de reaccion quimica de la enzima a la superficie del electrodo se realiza mediante mediadores de transferencia de electrones.

Muchos mediadores tales como, por ejemplo, el ferricianuro tienen una corriente de fondo elevada, de forma que la relacion senal-ruido cuando se formula en un sensor de analisis de glucosa es baja. Tipicamente, una relacion senal-ruido baja tiene como consecuencia una mayor imprecision en el analisis, particularmente a niveles mas bajos de glucosa y niveles de muestra de hematocrito elevados. Con analisis de muestra mas rapidos (por ejemplo, tiempos de analisis inferiores a 10 segundos), puede ser dificil eliminar la elevada corriente de fondo en el tiempo asignado para realizar el analisis. Debido a los tiempos de analisis de muestra mas rapidos, esto requiere que los ingredientes activos interactuen rapidamente cuando la muestra se aplica para dar una respuesta rapida.

Por lo tanto, seria deseable formar un mediador que tenga una corriente de fondo baja, y que simultaneamente posea aun otros atributos deseables de un mediador, incluyendo estabilidad.

En la tecnica anterior, la reaccion de fenotiazina y una anilina es la ruta mas practica para formar un derivado de 3-fenilimino-3H-fenotiazina, al igual que la divulgacion en Journal of Heterocyclic Chemistry, vol. 28, 1991, paginas 295-299, asi como los documentos EP 0177317A y EP0775699A. Sin embargo, estos procedimientos de la tecnica anterior no son aun suficientes para lograr obtener un mediador satisfactorio con una corriente de fondo reducida y una buena estabilidad.

Sumario de la invencion

A fin de lograr el objetivo de la presente invencion, se proporciona un procedimiento de formacion de un mediador tal como se describe en nuestra reivindicacion 1.

En las reivindicaciones dependientes se describen algunas formas de realizacion ventajosas.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1a es un sensor de analisis segun una forma de realizacion.

La figura 1 b es una vista lateral del sensor de analisis de la figura 1 a.

La figura 2 es un grafico de la corriente de fondo frente a varios lotes de mediadores de la invencion y comparativos. La figura 3a es un grafico de la corriente de fondo utilizando varios procesos de neutralizacion o de tamponamiento y algunos procesos sin neutralizacion ni tamponamiento.

La figura 3b es un grafico de cambio en la corriente de fondo entre una lfnea de base y la corriente de fondo medida en la figura 3a.

Descripcion detallada de formas de realizacion ilustradas

En un proceso, la presente invencion se refiere a un procedimiento mejorado para producir un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o un mediador de 3-feniliminio-3H-fenoxazina de corriente de fondo reducida. En otro proceso, la presente invencion se refiere a un procedimiento mejorado para estabilizar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o un mediador de 3-feniliminio-3H-fenoxazina de corriente de fondo reducida. Los mediadores de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o los mediadores de 3-feniliminio-3H-fenoxazina son mediadores utiles para sensores de analisis electroqufmicos y en un ejemplo son utiles en la regeneracion electroqufmica (oxidacion) de NADH.

Los mediadores que se van a formar en la presente invencion incluyen fenotiazinas que tienen la formula

y fenoxazinas que tienen la formula

en las que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, resto cfclico, resto heterocfclico, halogeno, haloalquilo, carboxi, carboxialquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, resto ceto aromatico, resto ceto alifatico, alcoxi, ariloxi, nitro, dialquilamino, aminoalquilo, sulfo, dihidroxiboro y combinaciones de los mismos. Se contempla que tambien se puedan formar isomeros de los mismos.

El mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina esta adaptado para su utilizacion con sensores de analisis electroqufmicos. Los sensores de analisis electroqufmicos estan adaptados para recibir una muestra de fluido y analizarla utilizando un instrumento o medidor. El sensor de analisis ayuda a determinar la informacion relacionada con los analitos, tal como las concentraciones de analito. Los analitos que pueden medirse incluyen glucosa, colesterol, perfiles lipfdicos, microalbumina, urea, creatinina, creatina, fructosa, lactato o bilirrubina. Se contempla que se puedan determinar otras concentraciones de analito. Los analitos pueden encontrarse en, por ejemplo, una muestra de sangre completa, una muestra de suero sangufneo, una muestra de plasma sangufneo, otros fluidos corporales tales como ISF (lfquido intersticial) y orina, y fluidos no corporales.

Los sensores de analisis descritos en el presente documento son sensores de analisis electroqufmicos. Los medidores utilizados con los sensores de analisis electroqufmicos pueden tener aspectos opticos para detectar la informacion de calibracion y aspectos electroqufmicos para determinar la informacion relacionada con el analito (por ejemplo, la concentracion de analito en la muestra de fluido). Un ejemplo no limitante de un sensor de analisis electroqufmico se muestra en la figura 1a. La figura 1a representa un sensor de analisis 10 que incluye una base 11, un canal capilar y una pluralidad de electrodos 16 y 18. Una region 12 muestra un area que define el canal capilar (por ejemplo, despues de disponer una cubierta sobre la base 11). La pluralidad de electrodos incluye un contraelectrodo 16 y un electrodo de trabajo (de medicion) 18. El sensor de analisis electroqufmico tambien puede contener al menos tres electrodos, tales como un electrodo de trabajo, un contraelectrodo, un electrodo de disparo o un electrodo de hematocrito. El electrodo de trabajo que se emplea en sensores electroquimicos segun las formas de realizacion de la presente invencion puede variar, con electrodos adecuados que incluyen, pero sin limitacion, carbono, platino, paladio, oro, rutenio, rodio y combinaciones de los mismos.

Los electrodos 16, 18 estan acoplados a una pluralidad de cables conductores 15a, b, que, en la forma de realizacion ilustrada, terminan con areas mas grandes denominadas contactos del sensor de analisis 14a, b. El canal capilar generalmente se ubica en un area de recepcion de fluido 19. Se contempla que se puedan emplear otros sensores de analisis electroquimicos con los mediadores de la presente invencion.

El area de recepcion de fluido 19 incluye al menos un reactivo para convertir el analito de interes (por ejemplo, glucosa) presente en la muestra de fluido (por ejemplo, sangre) en una especie quimica que se puede medir electroquimicamente, en terminos de la corriente electrica que produce, mediante los componentes del patron de electrodo. El reactivo tipicamente incluye una enzima especifica de analito que reacciona con el analito y con un aceptor de electrones para producir una especie medible electroquimicamente que puede detectarse por medio de los electrodos. El reactivo incluye un mediador que ayuda a transferir electrones entre el analito y los electrodos. El reactivo puede incluir aglutinantes que mantienen la enzima y el mediador juntos, otros ingredientes inertes o combinaciones de los mismos.

Se puede aplicar una muestra de fluido (por ejemplo, sangre) al area de recepcion de fluido 19. La muestra de fluido reacciona con el, al menos un, reactivo. Despues de reaccionar con el reactivo y junto con la pluralidad de electrodos, la muestra de fluido produce senales electricas que ayudan a determinar la concentracion del analito. Los cables conductores 15a, b llevan la senal electrica de vuelta hacia un segundo extremo opuesto 42 del sensor de analisis 10, en el que los contactos del sensor de analisis 14a, b transfieren las senales electricas al medidor. Con referencia a la figura 1b, se muestra una vista lateral del sensor de analisis 10 de la figura 1a. Tal como se muestra en la figura 1 b, el sensor de analisis 10 de la figura 1 b incluye ademas una cubierta 20 y un espaciador 22. La base 11, la cubierta 20 y el espaciador 22 pueden estar fabricados de una diversidad de materiales tales como materiales polimericos. Los ejemplos no limitantes de materiales polimericos que se pueden utilizar para formar la base 11, la cubierta 20 y el espaciador 22 incluyen policarbonato, poli(tereftalato de etileno) (PET), poli(naftalato de etileno) (PEN), poliimida y combinaciones de los mismos. Se contempla que se puedan utilizar otros materiales para formar la base 11, la cubierta 20 y/o el espaciador 22.

Para formar el sensor de analisis 10 de las figuras 1a, 1b, la base 11, el espaciador 22 y la cubierta 20 se unen, por ejemplo, por medio de un adhesivo o termosellado. Cuando la base 11, la cubierta 20 y el espaciador 22 estan unidos, se forma el area de recepcion de fluido 19. El area de recepcion de fluido 19 proporciona una via de flujo para introducir la muestra de fluido en el sensor de analisis 10. El area de recepcion de fluido 19 se forma en un primer extremo o extremo de analisis 40 del sensor de analisis 10. Los sensores de analisis de las formas de realizacion de la presente invencion pueden formarse con una base y una cubierta en ausencia de un espaciador, formandose el area de recepcion de fluido directamente en la base y/o la cubierta.

Tambien se contempla que el sensor de analisis electroquimico pueda formarse en ausencia de un espaciador. Por ejemplo, el sensor de analisis electroquimico puede incluir una base y una cubierta de modo que se forme un canal (por ejemplo, un canal capilar) cuando la base y la cubierta estan unidas entre si.

La base, el espaciador y la cubierta pueden estar fabricados de una diversidad de materiales tales como materiales polimericos. Los ejemplos no limitantes de materiales polimericos que se pueden utilizar para formar la base, el espaciador y la cubierta incluyen policarbonato, poli(tereftalato de etileno) (PET), poliestireno, poliimida y combinaciones de los mismos. Se contempla que la base, el espaciador y la cubierta puedan estar fabricados independientemente de otros materiales. El patron de electrodo puede estar fabricado de una diversidad de materiales conductores que incluyen, pero sin limitacion, oro, platino, rodio, paladio, rutenio, carbono o combinaciones de los mismos.

En otra forma de realizacion, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-feniliminio-3H-fenoxazina se puede utilizar en un sensor de analisis optico. El mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-feniliminio-3H-fenoxazina seria un mediador estable en dicho sistema.

En un procedimiento, se forma un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina e incluye proporcionar un primer reactivo que incluye fenotiazina. Se proporciona un primer disolvente en el que la fenotiazina tenga una solubilidad deseada. Se proporciona un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina. Se proporciona un segundo disolvente en el que el segundo reactivo tenga una solubilidad deseada. El primer reactivo y el primer disolvente se combinan entre si para formar una primera solucion de reactivo. El segundo reactivo y el segundo disolvente se combinan entre si para formar una segunda solucion de reactivo. La primera y la segunda soluciones de reactivo se combinan entre si para formar una solucion de reactivos. Se prepara una solucion de persulfato de sodio y se anade a la solucion de reactivos. La solucion de persulfato de sodio se forma tipicamente utilizando el segundo disolvente (el mismo disolvente que se utiliza en la formacion de la segunda solucion de reactivo). El persulfato de sodio provoca el acoplamiento de los primer y segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion con el producto formado.

En este procedimiento, se produce un procesamiento adicional de la solucion de reaccion para aislar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina. En una forma de realizacion, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina se encuentra en forma de una sal. En otra forma de realizacion, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina se encuentra en forma de un acido. Algunos mediadores de 3-fenilimino-3H-fenotiazina pueden no encontrarse en forma de sal ni de acido. Se selecciona un segundo reactivo para formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina deseado. Por ejemplo, el segundo reactivo puede ser acido anilina-2,5-disulfonico. Cuando se usa acido anilina-2,5-disulfonico, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina especifico formado es el mediador (3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina.

Se contempla que puedan utilizarse otros segundos reactivos para formar diferentes mediadores de 3-fenilimino-3H-fenotiazina. Por ejemplo, el segundo reactivo para formar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina se puede seleccionar de entre los siguientes: 4-dietilaminoanilina; 4-cloroanilina; 4-etilanilina; 4-trifluorometilanilina; 4-aminobenzoato de metilo; 4-nitroanilina; 4-metoxianilina; acido 4-(4'-aminofenil)butirico; 4-aminobencilamina; 4-(2'-aminoetil)anilina; acido 5-amino-1,3-bencenodicarboxilico; acido 4-aminobenzoico; 2,5-(4'-aminofenil)-1,3,4-oxadiazol; 4-[2'-(2'-etanoloxi)etoxi]etoxianilina y 2,5-disulfoanilina. Se contempla que pueden usarse otros segundos reactivos para formar otros mediadores de 3-fenilimino-3H-fenotiazina.

Se selecciona un primer disolvente que sea compatible con el primer reactivo. Es deseable que el primer reactivo tenga una solubilidad generalmente alta en el primer disolvente. En un procedimiento, el primer disolvente es tetrahidrofurano (THF). El primer disolvente es, de forma deseable, tetrahidrofurano (THF) debido a que la fenotiazina tiene una solubilidad generalmente alta en el mismo. El primer disolvente tambien es, de forma deseable, miscible con el segundo disolvente a fin de formar una solucion generalmente o sustancialmente uniforme.

Se contempla que se puedan usar otros primeros disolventes en lugar de tetrahidrofurano (THF) tales como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida, metanol, etanol, 1,4-dioxano y sulfolano. Tambien se contempla que se puedan usar otros primeros disolventes.

Se selecciona un segundo disolvente que es compatible con el segundo reactivo. Es deseable que el segundo reactivo tenga una solubilidad generalmente alta en el segundo disolvente. En un procedimiento, el segundo disolvente es agua. En otro procedimiento, el segundo disolvente es una combinacion de agua e hidroxido de sodio (NaOH). El hidroxido de sodio es deseable porque la solubilidad de al menos algunos segundos reactivos se mejora al ser mas basica. Se contempla que se puedan anadir otras soluciones basicas con el segundo disolvente para lograr una solubilidad mejorada del segundo reactivo en el mismo. Se contempla que se puedan usar otros segundos disolventes en lugar de agua.

El persulfato de sodio promueve el acoplamiento entre el primer y el segundo reactivo. El persulfato de sodio es un agente de acoplamiento deseable porque se cree que evita la formacion de subproductos no deseados. El uso de persulfato de sodio como agente de acoplamiento ayuda a obtener una corriente de fondo baja constante, lo que significa que se esta formando una cantidad generalmente baja de subproductos no deseados que permanecen en la solucion. Ademas, el uso de persulfato de sodio ayuda a aislar mas facilmente el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina deseado de la reaccion al facilitar la precipitacion de material organico.

Para formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina, se realiza un procesamiento adicional despues de que el agente de acoplamiento se anada a la solucion de reactivos que incluye el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente. El primer disolvente (por ejemplo, tetrahidrofurano) se puede eliminar o extraer de la solucion. El primer disolvente puede eliminarse, por ejemplo, con acetato de etilo. El acetato de etilo ayuda a extraer el primer disolvente y tambien puede ayudar a eliminar otros materiales organicos residuales no deseados (por ejemplo, materiales organicos hidrosolubles) de la solucion de reaccion.

Se contempla que se puedan utilizar otros compuestos para eliminar el primer disolvente tales como, por ejemplo, dietileter, cloroformo y diclorometano.

El segundo disolvente (por ejemplo, agua) se elimina del producto mediante enfriamiento y filtracion. La eliminacion del segundo solvente tambien ayuda a prevenir o inhibir la descomposicion. Al prevenir o inhibir la descomposicion, la corriente de fondo normalmente se encontrara a un nivel inferior mas deseado. El segundo disolvente residual (por ejemplo, agua residual) no eliminado mediante, por ejemplo, enfriamiento y filtracion puede eliminarse del producto mediante diversos procedimientos. Por ejemplo, el segundo disolvente residual se puede eliminar mediante (a) un secado en un horno de vacio, (b) la adicion de un compuesto al producto o (c) la liofilizacion de una solucion del producto.

En un proceso se anade acetonitrilo al segundo disolvente residual para ayudar a eliminar el segundo disolvente residual de la solucion. Se contempla que se puedan utilizar otros compuestos para eliminar el segundo disolvente residual tales como, por ejemplo, acetona y tolueno.

Se contempla que pueda realizarse otro procesamiento en la formacion del mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina. Por ejemplo, un acto de procesamiento antes de la eliminacion del segundo disolvente puede incluir la reconstitucion del mediador en agua, enfriamiento y a continuacion filtracion a temperatura ambiente para eliminar algo del exceso de sales. Tambien se contempla que pueden realizarse otros actos de procesamiento.

En otro procedimiento, se forma un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina e incluye proporcionar un primer reactivo que incluye fenoxazina. Se proporciona un primer disolvente en el que la fenoxazina tiene una solubilidad deseada. Se proporciona un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina. Se proporciona un segundo disolvente en el que el segundo reactivo tiene una solubilidad deseada. El primer reactivo y el primer disolvente se combinan entre si para formar una primera solucion de reactivo. El segundo reactivo y el segundo disolvente se combinan entre si para formar una segunda solucion de reactivo. La primera y la segunda soluciones de reactivo se combinan entre si para formar una solucion de reactivos. Se prepara una solucion de persulfato de sodio y se anade a la solucion de reactivos. La solucion de persulfato de sodio se forma tipicamente utilizando el segundo disolvente (el mismo disolvente que se usa en la formacion de la segunda solucion de reactivo). El persulfato de sodio provoca el acoplamiento de los primer y segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion con el producto formado.

En este procedimiento, se realiza un procesamiento adicional de la solucion de reaccion para aislar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina. En una forma de realizacion, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina se encuentra en forma de una sal. En otra forma de realizacion, el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina se encuentra en forma de un acido. Algunos mediadores de 3-fenilimino-3H-fenoxazina pueden no estar en forma de sal ni de acido.

En este procedimiento, si se forma el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina, se pueden utilizar segundos reactivos, primeros disolventes, segundos disolventes iguales o similares a los descritos anteriormente con respecto al procedimiento de formacion del mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina. Ademas, el procesamiento de aislamiento del mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina mediante la eliminacion sustancial de al menos el primer y el segundo disolventes se puede realizar de una forma similar o igual a la descrita anteriormente con respecto al mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina.

Se contempla que puedan formarse muchos mediadores de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o mediadores de 3-feniliminio-3H-fenoxazina diferentes utilizando los procedimientos de la invencion. Un ejemplo deseable de una fenotiazina que se ha preparado y se ha encontrado que tiene propiedades adecuadas como mediador para NADH es el mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina. Otro ejemplo deseable es el mediador 3-(3',5'-dicarboxifenilimino)-3H-fenotiazina que se ha preparado y se ha descubierto que tiene propiedades adecuadas como mediador para NADH.

Entre las fenotiazinas y fenoxazinas que se han preparado y se ha descubierto que tienen propiedades adecuadas como mediadores para NADH se encuentran 3-(4'-cloro-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-dietilamino-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-etil-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-trifluorometil-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-metoxicarbonilfenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-nitro-fenilimino-3H-fenotiazina; 3-(4'-metoxi-fenilimino)-3H-fenotiazina; 7-acetil-3-(4'-metoxicarbonilfenilimino)-3H-fenotiazina; 7-trifluorometil-3-(4'-metoxicarbonilfenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-wcarboxi-n-butil-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-aminometil-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-(2"-(5"-(p-aminofenil)-1,3,4-oxadiazoil)fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-p-aminoetil-fenilimino)-3H-fenotiazina; 6-(4'-etilfenil)amino-3-(4'-etilfenilimino)-3H-fenotiazina; 6-(4'-[2-(2-etanoloxi)etoxi]-etoxifenil)amino-3-(4'-[2-(2-etanoloxi)etoxi]etoxifenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-[2-(2-etanoloxi)etoxi]etoxi-fenilimino)-3H-fenotiazina; acido 3-(4'-fenilimino)-3H-fenotiazinaboronico, 3-(3',5'-dicarboxi-fenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(4'-carboxifenilimino)-3H-fenotiazina; 3-(3',5-dicarboxifenilimino)-3H-fenoxazina; acido 3-(2',5'-fenilimino)-3H-fenotiazina-disulfonico y acido 3-(3'-fenilimino)-3H-fenotiazina-sulfononico.

Se contempla que las fenotiazinas y fenoxazinas que se han preparado y que se ha encontrado que tienen propiedades adecuadas se puedan usar con flavoproteinas tales como FAD-glucosa oxidasa, flavina-hexosa oxidasa y FAD-glucosa deshidrogenasa. Tambien se contempla que las fenotiazinas y fenoxazinas puedan prepararse para su uso, y para que tengan propiedades adecuadas, con quionoproteinas tales como, por ejemplo, PQQ-glucosa deshidrogenasa.

En otra divulgacion, la estabilizacion del mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina tambien puede mejorarse mediante neutralizacion o tamponamiento. La accion de neutralizacion o tamponamiento ayuda a estabilizar el mediador para que sea robusto durante las condiciones de almacenamiento que se va a encontrar. Se contempla que la accion de neutralizacion o tamponamiento puede realizarse antes o despues de que se haya realizado un procesamiento adicional para aislar al mediador. Por ejemplo, la accion de neutralizacion o de tamponamiento puede realizarse antes de que el mediador se seque en forma de polvo. En otro ejemplo, la accion de neutralizacion o de tamponamiento puede realizarse despues de que el mediador se haya secado en forma de polvo.

El agente neutralizante o de tamponamiento puede seleccionarse de entre materiales que incluyen, pero sin limitacion, hidroxido de sodio, bicarbonato de sodio, fosfato de sodio, hidroxido de tetrabutilamonio, hidroxido de calcio, hidroxido de potasio, fosfato de potasio, bicarbonato de potasio y combinaciones de los mismos. Se contempla que se puedan usar otros materiales como agente neutralizante o de tamponamiento.

Despues de anadir el agente neutralizante o de tamponamiento a la solucion de mediador, el pH generalmente es de aproximadamente 5 a aproximadamente 8. Mas tfpicamente, despues de anadir el agente neutralizante o de tamponamiento a la solucion de mediador, el pH es de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 7 y de forma incluso mas deseable de aproximadamente 6 a aproximadamente 7.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Preparación del mediador (3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina

Se disolvio fenotiazina (1,53 moles, 1,1 equivalentes, 306 g) con agitacion en 6,0 l de tetrahidrofurano (THF) y despues se enfrio a 0 °C. Se disolvio acido anilina-2,5-disulfonico (1,38 moles, 350 g) en 7,0 l de agua y se anadio hidroxido de sodio 1 M (NaOH) (128 ml) durante la agitacion. La solucion de acido anilina-2,5-disulfonico se anadio lentamente, en el transcurso de aproximadamente 2 horas, a la solucion de fenotiazina, para proporcionar una suspension blanca turbia. La suspension de fenotiazina/anilina se encontraba a una temperatura de aproximadamente 0 °C - 4 °C. Se disolvio persulfato de sodio (5,52 moles, 4 equivalentes, 1314 g) en 4,0 l de agua para formar una solucion de persulfato de sodio.

La solucion de persulfato de sodio se anadio gota a gota a lo largo de un periodo de 3 horas a la suspension de fenotiazina/anilina a una temperatura de entre aproximadamente 0 °C y 3 °C y dio como resultado una solucion muy oscura. La solucion muy oscura se mantuvo frfa utilizando un bano de hielo y se agito durante la noche. El contenido se transfirio despues a un evaporador rotatorio Buchi y el tetrahidrofurano se elimino en el transcurso de aproximadamente 2 horas a una temperatura inferior a 35 °C. Despues de la accion de evaporacion, la solucion restante se transfirio a un separador de 25 l y se volvio a lavar con acetato de etilo. La solucion restante se retrolavo 3 veces utilizando 2 l de acetato de etilo cada vez. Los fluidos de reaccion se enfriaron mientras se agitaba a -3 °C en un bano de acetona/CO2. El solido precipitado se filtro a traves de dos panos en dos embudos Buchner de 24 cm el mismo dfa. El solido precipitado se dejo durante la noche en los embudos para que se secara y despues se transfirio a un matraz que contenfa 2 l de acetonitrilo y se agito durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. A continuacion, para eliminar el agua residual, la muestra se filtro y se lavo con mas acetonitrilo. El mediador se seco hasta un peso constante en un horno de vacfo a 35 °C.

El mediador formado usando este proceso fue acido 3-(2',5'-fenilimino)-3H-fenatiazina-sulfonico o 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina. El mediador se muestra a continuacion:

Ejemplo 2

Corriente de fondo de los procesos de la invencion y comparativos

Se compararon las corrientes de fondo de mediadores 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina preparados mediante dos procesos diferentes. El proceso de la invencion para formar el mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina utilizo persulfato de sodio como agente de acoplamiento y fue sustancialmente el mismo que el proceso descrito anteriormente en el ejemplo 1. Este mediador se denominara el mediador de la invencion. El proceso comparativo para formar el mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina utilizo persulfato de amonio como agente de acoplamiento. El proceso comparativo fue sustancialmente el mismo que el proceso de la invencion, excepto por el uso de persulfato de sodio como agente de acoplamiento. Este mediador se denominara el mediador comparativo.

Cada uno de los mediadores de la invencion y comparativo se anadieron por separado a una solucion tamponada. Cada una de las soluciones tamponadas inclufa 100 mM de fosfato de sodio. Despues de anadir los mediadores de la invencion y comparativos a las soluciones tamponadas, se ajusto el pH en ambas soluciones a 7,2. Las soluciones de mediador de la invencion y comparativo se dispusieron individualmente en electrodos de carbono. Despues de tres segundos, se aplico un potencial de 250 mV durante cinco segundos a los electrodos de carbono y despues se registraron las lecturas de las corrientes de fondo del mediador respectivo.

Con referencia a la figura 2, las corrientes de fondo (en nA) de los mediadores 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina se representaron para diferentes lotes de mediadores formados mediante los procesos de la invencion y comparativo. Especificamente, se evaluaron cinco mediadores comparativos diferentes (denominados mediadores comparativos 1-5) y cuatro mediadores de la invencion diferentes (denominados mediadores de la invencion 1-4) de diferentes lotes.

Tal como se muestra en la figura 2, habia tres lotes de mediadores comparativos que tenian corrientes de fondo muy altas. Veanse los mediadores comparativos 1, 4 y 5 de la figura 2 que presentan unas corrientes de fondo, respectivamente, de 2687, 1158 y 1971 nA. El mediador comparativo 2 presentaba una corriente de fondo de 75 nA, mientras que el mediador comparativo 3 presentaba una corriente de fondo de 221 nA. Todos los mediadores de la invencion 1-4 presentaban una corriente de fondo deseable inferior a aproximadamente 100 nA. Especificamente, los mediadores de la invencion 1-4 presentaban unas corrientes de fondo, respectivamente, de 88, 93, 106 y 99 nA.

Ejemplo 3

Comparacion de las estabilidades de 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina utilizando diferentes procesos Se compararon las estabilidades de la 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina preparada mediante dos procesos diferentes. El proceso de la invencion para formar el mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina utilizo persulfato de sodio como agente de acoplamiento y fue sustancialmente el mismo que el proceso descrito anteriormente en el ejemplo 1. Este mediador se denominara el mediador de la invencion. El proceso comparativo para formar el mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina utilizo persulfato de amonio como agente de acoplamiento. El proceso comparativo fue sustancialmente el mismo que el proceso de la invencion, excepto por el uso de persulfato de sodio como agente de acoplamiento. Este mediador se denominara el mediador comparativo. Se compararon las estabilidades de los mediadores de la invencion y comparativos. Los mediadores de los procesos de la invencion y comparativo se formularon en mezclas de reactivos respectivas. Las mezclas de reactivos incluyen adicionalmente tampon de fosfato, Fad-GDH, polimero de celulosa y tensioactivo. Las mezclas de reactivos se dispusieron en electrodos de oro para formar un sensor de analisis de glucosa. Las muestras de los sensores de analisis con mediadores de la invencion y comparativos se expusieron a una temperatura de -20 °C durante un periodo de dos semanas. Los sensores de analisis formulados con mediadores del mismo lote de los procesos de la invencion y comparativo tambien se expusieron a una temperatura de 50 °C durante un periodo de dos semanas. Las mezclas de reactivos incluian el mediador de la invencion o el mediador comparativo expuestos. La respuesta de los electrodos se midio a un potencial aplicado de 250 mV utilizando cuatro concentraciones diferentes (0 mg/dl, 50 mg/dl, 100 mg/dl y 400 mg/dl) de muestras de glucosa en sangre completa con un analizador de glucosa de Yellow Springs (YSI, Inc., Yellow Springs, Ohio). Las respuestas electricas se convirtieron en concentraciones de glucosa utilizando la pendiente y la interseccion de los reactivos respectivos con referencia a las mediciones de glucosa del YSI. Las concentraciones de glucosa se determinaron y se compararon para los reactivos que incluyen el mediador de la invencion o comparativo expuestos entre las temperaturas de -20 °C y 50 °C y se compararon para determinar si existia alguna variacion o sesgo entre los mismos. Por ejemplo, utilizando 50 mg/dl de glucosa, el reactivo que incluye el mediador de la invencion se comparo entre las temperaturas de -20 °C y 50 °C para ver si habia alguna variacion entre las lecturas. Se determino el % de sesgo entre estas lecturas.

El % de sesgo se muestra para cada una de las diferentes concentraciones de glucosa y los mediadores de la invencion y comparativos en la tabla 1 de la forma siguiente:

Tabla 1

Proceso de la invencion Proceso comparativo

0 mg/dl -0,7% 7,1%

50 mg/dl -1,8% 5,9%

100 mg/dl 0,2% 4,9%

400 mg/dl 2,4% -8,2%

Por lo tanto, tal como se muestra en la tabla 1, la 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina formada utilizando el proceso de la invencion tuvo una estabilidad mucho mayor despues de haber estado expuesta a 50 °C durante dos semanas que la 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina formada utilizando el proceso comparativo. El proceso de la invencion presento una mayor estabilidad porque las concentraciones de glucosa medidas no variaron mucho despues de la exposicion a la temperatura de 50 °C, tal como se muestra mediante los reducidos % de sesgo. El proceso comparativo, por otra parte, presento una estabilidad mucho menor debido a que las concentraciones de glucosa medidas variaron mucho mas que en el proceso de la invencion despues de la exposicion a la temperatura de 50 °C, tal como se muestra por medio de los % de sesgo mas elevados.

Ejemplo ilustrativo 4

Efecto de neutralizacion o de tamponamiento sobre la 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina con respecto a la estabilidad

En cada uno de las analisis de neutralizacion o tamponamiento del ejemplo 4, se uso el mismo mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina. Se utilizo tambien el mismo mediador en los analisis que no incluyeron un analisis de neutralizacion o de tamponamiento. El mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina se formo utilizando persulfato de sodio como agente de acoplamiento y fue sustancialmente el mismo que en el proceso descrito anteriormente en el ejemplo 1.

El ejemplo 4 analizo tres procesos utilizando diferentes agentes de neutralizacion o de tamponamiento y los comparo con dos procesos que no incluian un agente de neutralizacion o de tamponamiento. Con referencia a las figuras 3a, 3b, los procesos para formar los mediadores 1 y 2 no incluyeron ninguna accion de neutralizacion o de tamponamiento. El proceso para formar el mediador 1 incluia el secado del mediador en un horno de vacio. El proceso para formar el mediator 2 incluia liofilizacion, que se controlo a un pH de 2,4.

Cada uno de los procesos de formacion de los mediadores 3-5 incluia una accion de neutralizacion o de tamponamiento. Cada una de las acciones de neutralizacion o de tamponamiento dio como resultado un pH de 6,1. Especificamente, el mediador 3 uso 20 mM de fosfato de sodio. Esta solucion se formo tomando 5 gramos de mediador 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina y disolviendo los mismos en un tampon de fosfato de sodio 20 mM con un pH de 7,2. El pH se ajusto a 6,1 con NaOH 1 M. El uso de tampon de fosfato de sodio generalmente se denomina ajuste del pH.

El mediador 4 utilizo 1 M de hidroxido de sodio. Esta solucion se formo tomando 5 gramos de 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina y disolviendo los mismos en 100 ml de agua fria. Se anadio gota a gota una solucion de hidroxido de sodio 1 M mientras se agitaba hasta obtener un pH medido de 6,1. El uso de hidroxido de sodio en este procedimiento neutraliza la solucion y, por lo tanto, se denominara agente neutralizante.

El mediador 5 utiliza 1 M de bicarbonato de sodio. Esta solucion se formo tomando 5 gramos de 3-(2',5'-disulfofenilimino)-3H-fenotiazina y disolviendo los mismos en 100 ml de agua fria. Se anadio gota a gota una solucion de bicarbonato de sodio 1 M mientras se agitaba hasta obtener un pH medido de 6,1. El uso de bicarbonato de sodio en este procedimiento neutraliza la solucion y, por lo tanto, se denominara agente neutralizante.

Cada uno de los mediadores 3-5 se congelo despues en un bano de isopropanol/hielo seco y se liofilizo hasta obtener un polvo seco utilizando un modelo de liofilizador 4K de sobremesa VirTis® modelo N° 4KBTXL (Gardiner, N.Y.).

La forma de polvo seco de los mediadores 1 -5 se sometio a tensiones durante dos semanas en diversas condiciones de almacenamiento. Especificamente, se analizaron nueve condiciones diferentes en las que las temperaturas variaron entre -40 °C y 50 °C. Antes de exponerlas a las condiciones de temperatura, las muestras secas se dispusieron en viales de vidrio, se sellaron con tapas y despues se almacenaron. Se realizaron dos analisis a -40 °C y 30 °C en los que se anadio un componente de "uso". Especificamente, el componente de "uso" incluyo exponer los mediadores 1-5 a la temperatura ambiente durante un periodo de 30 minutos antes de sellar la tapa y abrir la tapa despues de una semana y volver a exponerlos a la temperatura ambiente durante otro periodo de 30 minutos. Esta exposicion de "uso" se realizo solo a las temperaturas respectivas de -40 °C y 30 °C. En el analisis "inicial" se realizo el analisis sin condiciones de almacenamiento.

Cada una de las muestras de mediador se analizo para determinar la corriente de fondo utilizando un ensayo de deteccion de la corriente de fondo. Las muestras de mediador se prepararon como en el ejemplo 1 y con un ajuste de pH a 7,2 usando fosfato de sodio 100 mM tal como se describe en el ejemplo 2. Estas muestras de mediador se anadieron a un electrodo de carbono. Despues de tres segundos, se aplico un potencial de 250 mV durante un periodo de cinco segundos y despues se midio la corriente de fondo.

Tal como se muestra en la figura 3a, la corriente de fondo (en nA) fue mucho menor en los mediadores que incluian la accion de neutralizacion o de tamponamiento cuando se expusieron a temperaturas mas altas durante este periodo de tiempo. Comparense las corrientes de fondo a temperaturas superiores a 25 °C para los mediadores 1-5. Este fue el caso, en particular, a la temperatura de exposicion mas alta de 50 °C.

La figura 3b representa el cambio en la corriente de fondo (%) entre la corriente de fondo medida de la figura 3a a partir de la linea de base que se midio antes de las diferentes exposiciones. De forma similar, la corriente de fondo (%) fue mucho menor en los mediadores que incluyeron la accion de neutralizacion o de tamponamiento cuando se expusieron a temperaturas mas altas durante este periodo de tiempo. Comparese el % de cambio en las corrientes de fondo a temperaturas superiores a 25 °C para los mediadores 1-5. Este fue el caso, en particular, a la temperatura de exposicion mas alta de 50 °C.

La presente divulgacion se refiere a los procesos siguientes:

Proceso A

Un procedimiento para formar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina, comprendiendo el procedimiento las acciones de:

proporcionar un primer reactivo que incluye fenotiazina;

proporcionar un primer disolvente en el que la fenotiazina tiene una solubilidad deseada;

proporcionar un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina;

proporcionar un segundo disolvente en el que el segundo reactivo tiene una solubilidad deseada;

combinar el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una solucion de reactivos;

anadir persulfato de sodio a la solucion de reactivos para acoplar el primer y el segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina; y

despues de anadir el persulfato de sodio, procesar adicionalmente la solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina para aislar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina.

Proceso B

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el primer disolvente incluye tetrahidrofurano (THF).

Proceso C

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el segundo disolvente incluye agua.

Proceso D

El procedimiento del proceso alternativo C, en el que el segundo disolvente incluye adicionalmente hidroxido de sodio.

Proceso E

El procedimiento del proceso alternativo A en el que se combinan el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente que incluye las acciones de combinar el primer reactivo y el primer disolvente para formar una primera solucion de reactivo, y de combinar el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una segunda solucion de reactivo antes de combinar entre si el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar la solucion de reactivos.

Proceso F

El procedimiento del proceso alternativo A, en el que el procesamiento adicional incluye generalmente eliminar el segundo disolvente mediante la adicion de acetonitrilo.

Proceso G

El procedimiento del proceso alternativo A, en el que el procesamiento adicional incluye eliminar generalmente el primer disolvente mediante la adicion de acetato de etilo.

Proceso H

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el segundo reactivo incluye acido anilina-2,5-disulfonico.

Proceso I

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el procesamiento adicional incluye eliminar sustancialmente al menos el primer disolvente y el segundo disolvente de la segunda solucion a fin de aislar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina.

Proceso J

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina se encuentra en forma de una sal.

Proceso K

El procedimiento del proceso alternativo A en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina se encuentra en forma de un acido.

Proceso L

Un procedimiento para formar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina, comprendiendo el procedimiento las acciones de:

proporcionar un primer reactivo que incluye fenoxazina;

proporcionar un primer disolvente en el que la fenoxazina tiene una solubilidad deseada;

proporcionar un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina;

proporcionar un segundo disolvente en el que el segundo reactivo tiene una solubilidad deseada;

combinar el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una solucion de reactivos;

anadir persulfato de sodio a la solucion de reactivos para acoplar el primer y el segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina; y

despues de anadir el persulfato de sodio, procesar adicionalmente la solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina a fin de aislar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina.

Proceso M

El procedimiento del proceso alternativo L en el que el primer disolvente incluye tetrahidrofurano (THF).

Proceso N

El procedimiento del proceso alternativo L en el que el segundo disolvente incluye agua.

Proceso O

El procedimiento del procedimiento alternativo N en el que el segundo disolvente incluye adicionalmente hidroxido de sodio.

Proceso P

El procedimiento del proceso alternativo L en el que se combinan el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente, que incluye las acciones de combinar el primer reactivo y el primer disolvente para formar una primera solucion de reactivo, y de combinar el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una segunda solucion de reactivo antes de combinar entre si el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar la solucion de reactivos.

Proceso Q

El procedimiento del proceso alternativo L, en el que el procesamiento adicional incluye generalmente la eliminacion del segundo disolvente residual mediante la adicion de acetonitrilo.

Proceso R

El procedimiento del proceso alternativo L, en el que el procesamiento adicional incluye generalmente la eliminacion del primer disolvente mediante la adicion de acetato de etilo.

Proceso S

El procedimiento del proceso alternativo L en el que el procesamiento adicional incluye eliminar sustancialmente al menos el primer disolvente y el segundo disolvente de la segunda solucion a fin de aislar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina.

Proceso T

El procedimiento del proceso alternativo L en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina se encuentra en forma de una sal.

Proceso U

El procedimiento del proceso alternativo L en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina se encuentra en forma de un acido.

Proceso V

Un procedimiento para formar y estabilizar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina, comprendiendo el procedimiento las acciones de:

proporcionar un primer reactivo que incluye fenotiazina o fenoxazina;

proporcionar un primer disolvente en el que la fenotiazina o la fenoxazina tienen una solubilidad deseada; proporcionar un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina;

proporcionar un segundo disolvente en el que el segundo reactivo tiene una solubilidad deseada;

combinar el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una solucion de reactivos;

anadir un agente de acoplamiento a la solucion de reactivos para acoplar el primer y el segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina; y

despues de anadir el agente de acoplamiento, procesar adicionalmente la solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina para aislar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina; y

estabilizar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina a un pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8.

Proceso W

El procedimiento del proceso alternativo V en el que el pH es de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 7.

Proceso X

El procedimiento del proceso alternativo W en el que el pH es de aproximadamente 6 a aproximadamente 7.

Proceso Y

El procedimiento del proceso alternativo W en el que la estabilizacion del mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina incluye la adicion de hidroxido de sodio, bicarbonato de sodio, fosfato de sodio, hidroxido de tetrabutilamonio, hidroxido de calcio, hidroxido de potasio, fosfato de potasio, bicarbonato de potasio o combinaciones de los mismos.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para formar un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina, comprendiendo el procedimiento las acciones de:

proporcionar un primer reactivo que incluye fenotiazina o una fenoxazina;

proporcionar un primer disolvente en el que la fenotiazina o la fenoxazina presentan una solubilidad en el mismo; proporcionar un segundo reactivo para ayudar a formar el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina;

proporcionar un segundo disolvente en el que el segundo reactivo presenta una solubilidad en el mismo; combinar el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una solucion de reactivos;

anadir persulfato de sodio a la solucion de reactivos para acoplar el primer y el segundo reactivos, dando como resultado una solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina; y

despues de anadir el persulfato de sodio, procesar adicionalmente la solucion de reaccion que incluye el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina a fin de aislar al mediador que comprende el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina o el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina,

en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina tiene la formula

en el que el mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina tiene la formula

y en las que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, resto cfclico, resto heterocfclico, halogeno, haloalquilo, carboxi, carboxialquilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, resto ceto aromatico, resto ceto alifatico, alcoxi, ariloxi, nitro, dialquilamino, aminoalquilo, sulfo, dihidroxiboro y combinaciones de los mismos.

2. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que se forma un mediador de 3-fenilimino-3H-fenotiazina y el primer reactivo incluye fenotiazina.

3. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que se forma un mediador de 3-fenilimino-3H-fenoxazina y el primer reactivo incluye fenoxazina.

4. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el primer disolvente incluye tetrahidrofurano (THF).

5. El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el segundo disolvente incluye agua.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se combina el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente, que incluye las acciones de combinar el primer reactivo y el primer disolvente para formar una primera solucion de reactivo, y de combinar el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar una segunda solucion de reactivo antes de combinar entre si el primer reactivo, el primer disolvente, el segundo reactivo y el segundo disolvente para formar la solucion de reactivos.

7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el segundo reactivo incluye acido anilina-2,5-disulfonico.

8. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el mediador se encuentra en forma de una sal.

9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el mediador se encuentra en forma de un acido.