ES2694784T3

ES2694784T3 - Combinaciones antitumorales que contienen anticuerpos que reconocen específicamente CD38 y bortezomib

Info

Publication number: ES2694784T3
Application number: ES11801669.0T
Authority: ES
Inventors: Jutta Deckert; Pascale Lejeune; Michele F Mayo; Peter U Park
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 2010-12-10
Filing date: 2011-12-08
Publication date: 2018-12-27
Anticipated expiration: 2031-12-08
Also published as: BR112013014370A2; ZA201304845B; CA2820382A1; CY1121179T1; CN103282050B; PT2648747T; EP3412311A1; LT2648747T; DOP2013000132A; EA201390850A1; TW201307392A; AU2011340472A1; RS57997B1; TR201816532T4; TN2013000245A1; PE20140004A1; MY165109A; NZ612055A; EP2648747B1; ECSP13012669A

Abstract

Una combinación farmacéutica que comprende un anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 y al menos bortezomib, en donde dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ por apoptosis, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC), y en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 66, y en donde dicha cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en las SEQ ID NOS: 62 o 64.

Description

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DESCRIPCIÓN

Combinaciones antitumorales que contienen anticuerpos que reconocen específicamente CD38 y bortezomib.

La presente invención se refiere a combinaciones de anticuerpos monoclonales dirigidos contra CD38 y bortezomib que son terapéuticamente útiles en el tratamiento de enfermedades neoplásicas.

La CD38 es una glucoproteína transmembranaria tipo II de 45 kD con un dominio extracelular largo en el extremo C y un dominio citoplasmático corto en el extremo N. La proteína CD38 es una ectoenzima bifuncional que puede catalizar la conversión de NAD+ en ADP-ribosa cíclica (cADPR, por sus siglas en inglés) y también hidrolizar cADPR en ADP-ribosa. La CD38 se presenta elevada y se la ha implicado en muchas neoplasias hematopoyéticas.

Los anticuerpos monoclonales 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39, que reconocen específicamente la CD38, se describen en la solicitud PCT núm. WO2008/047242. Tales anticuerpos anti-CD38 son capaces de destruir las células CD38+ mediante tres mecanismos citotóxicos diferentes, la inducción de la apoptosis, la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC, por sus siglas en inglés) y la citotoxicidad dependiente de complemento (CDC, por sus siglas en inglés). Además, estos anticuerpos son capaces de inducir directamente la apoptosis de células CD38+, incluso sin la presencia de células estromales ni citocinas derivadas del estroma. Las combinaciones antitumorales que contienen tales anticuerpos y melfalán se han descrito en la solicitud PCT núm. WO2010061357.

El término “anticuerpo” se usa en la presente memoria en el sentido más amplio y abarca específicamente anticuerpos monoclonales (incluidos anticuerpos monoclonales de longitud completa) de cualquier isotipo tal como IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos, anticuerpos quiméricos y fragmentos de anticuerpo. Un anticuerpo de IgG típico comprende dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas que se enlazan mediante enlaces disulfuro. Cada cadena pesada y ligera contiene una región constante y una región variable. Cada región variable contiene tres segmentos denominados “regiones de determinación de la complementariedad” (“CDR”, por sus siglas en inglés) o “regiones hipervariables”, que son principalmente responsables de unirse a un epítopo de un antígeno. Normalmente se denominan CDR1, CDR2 y CDR3, numeradas de manera secuencial desde el extremo N. Las porciones más altamente conservadas de las regiones variables fuera de las CDR se denominan “regiones marco”.

Según se usa en la presente memoria, “Vh” o “VH” se refiere a la región variable de una cadena pesada de inmunoglobulina de un anticuerpo, que incluye la cadena pesada de un fragmento Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' o F(ab')2. Cuando se hace referencia a “Vl” o “VL” se refiere a la región variable de una cadena ligera de inmunoglobulina de un anticuerpo, que incluye la cadena ligera de un fragmento Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' o F(ab')2.

El anticuerpo 38SB13 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 50 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 38, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 1, 2 y 3, y dicha cadena ligera comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 4, 5 y 6.

El anticuerpo 38SB18 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 52 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 40, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 7, 8 y 9, y dicha cadena ligera comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 10, 11 y 12.

El anticuerpo 38SB19 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 54 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 42, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 13, 14 (u 81) y 15, y dicha cadena ligera comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 16, 17 y 18.

El anticuerpo 38SB30 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 56 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 44, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 19, 20 y 21, y dicha cadena ligera comprende tres CDR

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secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 22, 23 y 24.

El anticuerpo 38SB31 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 58 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 46, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 25, 26 y 27, y dicha cadena ligera comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 28, 29 y 30.

El anticuerpo 38SB39 comprende al menos una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 60 y al menos una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 48, dicha cadena pesada comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 31, 32 y 33, y dicha cadena ligera comprende tres CDR secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos que consisten en las SEQ ID NOS: 34, 35 y 36.

Las líneas celulares de hibridoma que producen los anticuerpos anti-CD38 murinos 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39 se depositaron en la American Type Culture Collection (10801 University Bid, Manassas, VA, 20110-2209, EE. UU.), el 21 de junio de 2006, con los números de depósito PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 y PTA-7671, respectivamente (según se describe en WO2008/047242).

El término “anticuerpo humanizado”, según se usa en la presente memoria, se refiere a un anticuerpo quimérico que contiene una secuencia mínima derivada de una inmunoglobulina no humana. El objetivo de la humanización es la reducción de la inmunogenicidad de un anticuerpo xenógeno, tal como un anticuerpo murino, para su introducción en un humano, mientras se mantienen la afinidad de unión a antígeno y la especificidad completas del anticuerpo. Los anticuerpos humanizados o anticuerpos adaptados para no ser rechazados por otros mamíferos se pueden producir utilizando diversas tecnologías tales como rebarnizado e injerto de CDR. Según se usa en la presente memoria, la tecnología de rebarnizado utiliza una combinación de modelado molecular, análisis estadístico y mutagénesis para alterar las superficies distintas de CDR de las regiones variables del anticuerpo para que se parezcan a las superficies de anticuerpos conocidos del hospedante diana. La tecnología de injerto de CDR implica sustituir las regiones de determinación de la complementariedad de, por ejemplo, un anticuerpo de ratón, por un dominio de marco humano, p. ej., véase la WO 92/22653. Los anticuerpos quiméricos humanizados pueden tener regiones constantes y regiones variables distintas de las regiones de determinación de la complementariedad (CDR) derivadas sustancialmente o exclusivamente de las regiones del anticuerpo humano correspondiente y CDR derivadas sustancialmente o exclusivamente de un mamífero distinto de un humano.

Las estrategias y métodos para rebarnizar los anticuerpos y otros métodos para reducir la inmunogenicidad de los anticuerpos dentro de un hospedante diferente se describen en la patente estadounidense núm. 5.639.641. Los anticuerpos se pueden humanizar mediante el uso de una variedad de técnicas distintas que incluyen injerto de CDR (EP 0 239 400; WO 91/09967; patentes estadounidenses núms. 5.530.101; y 5.585.089), rechapado o rebarnizado (EP 0 592 106; EP 0 519 596; Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91: 969-973), transposición de cadena (patente estadounidense núm. 5.565.332), e identificación de residuos flexibles (PCT/US2008/074381). Los anticuerpos humanos se pueden producir mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica que incluyen métodos de visualización en fagos. Véanse también las patentes estadounidenses núms. 4.444.887, 4.716.111, 5.545.806 y 5.814.318; y las publicaciones de solicitud de patente internacionales con número WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 y WO 91/10741.

La presente invención es como se define en las reivindicaciones.

Los anticuerpos anti-CD38 de la combinación farmacéutica de la presente memoria descriptiva son anticuerpos humanizados que reconocen CD38 y destruyen células CD38+ por medio de apoptosis, ADCC y CDC. En un aspecto adicional, los anticuerpos humanizados de la memoria descriptiva son capaces de destruir dichas células CD38+ por medio de apoptosis incluso en ausencia de células estromales o citocinas derivadas del estroma.

Una realización de tal anticuerpo humanizado es un anticuerpo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 o 38SB39 humanizado o un fragmento de unión a epítopo de este.

Las CDR de los anticuerpos 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39 se identifican mediante modelado y se han previsto sus estructuras moleculares. Por lo tanto, en un aspecto, la presente memoria

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descriptiva proporciona anticuerpos humanizados o fragmento de unión a epítopo de estos que comprenden una o más CDR que tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NOS: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 y 81. En un aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB13, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 1, 2 y 3, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 4, 5 y 6. En otro aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB18, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 7, 8 y 9, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 10, 11 y 12. En otro aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB19, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 13, 14 (u 81) y 15, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 16, 17 y 18. En otro aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB30, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 19, 20 y 21, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 22, 23 y 24. En otro aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB31, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 25, 26 y 27, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 28, 29 y 30. En otro aspecto, se proporciona una versión humanizada de 38SB39, que comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 31, 32 y 33, y en donde dicha cadena ligera comprende tres regiones de determinación de la complementariedad secuenciales que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEQ ID NOS: 34, 35 y 36.

En un aspecto, la presente memoria descriptiva proporciona anticuerpos humanizados o fragmentos de estos que comprenden una Vh que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NOS: 66 y 72. En una realización, se proporciona un anticuerpo humanizado 38SB19 que comprende una Vh que tiene una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 66. En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo humanizado 38SB31 que comprende una Vh que tiene una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO: 72.

En otro aspecto, la presente memoria descriptiva proporciona anticuerpos humanizados o fragmentos de estos que comprenden una Vl que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NOS: 62, 64, 68 y 70. En una realización, se proporciona un anticuerpo humanizado 38SB19 que comprende una Vl que tiene una secuencia de aminoácidos elegida del grupo de las SEQ ID NOS: 62 y 64. En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo humanizado 38SB31 que comprende una Vl que tiene una secuencia de aminoácidos elegida del grupo de las SEQ ID NOS: 68 y 70.

Se ha demostrado que cada una de las versiones humanizadas de los anticuerpos 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 y 38SB39 es particularmente ventajosa como agente anticanceroso. La preparación, propiedades físicas y propiedades farmacológicas beneficiosas de estas se describen en WO 2008/047242. Generalmente, las dosis usadas para tratar a seres humanos, que dependen de factores distintivos del sujeto que se va a tratar, están entre 1 y 150 mg/kg, 10 y 100 mg/kg o 50 y 100 mg/kg administrados oralmente o entre 1 y 150 mg/kg, 10 y 100 mg/kg o 50 y 100 mg/kg administrados intravenosamente.

Bortezomib es un dipéptido del ácido borónico ácido ([(1R)-3-metil-1-({(2S)-3-fenil-2-[(pirazin-2-

ilcarbonil)amino]propanoil}amino)butil]borónico; nombre comercial: Velcade™), con actividad antitumoral

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(Richardson et al., N. Engl. J. Med., 352: 2487-2498, 2005). Bortezomib es un inhibidor muy específico, reversible del proteasoma 26 S. En células normales, el proteasoma regula la expresión y función proteica mediante la degradación de proteínas ubiquitiniladas; además, participa en la eliminación de proteínas con plegado defectuoso. El mecanismo de acción del bortezomib implica la estabilización de NF-kB, p21, p27, p53, Bid y Bax, la inhibición de la activación de caveolina-1 y la activación de JNK, así como la respuesta al estrés del retículo endoplasmático (Boccadoro et al. Cancer Cell Int., 5(1): 18, 2005). Aunque es probable que participen múltiples mecanismos, la inhibición del proteasoma, por lo tanto, puede permitir la activación de la muerte celular programada en células neoplásicas que dependen de la supresión de las vías proapoptóticas. De manera específica, el agente inhibe el factor (NF)-kappaB nuclear e interfiere, de esta manera, en la supervivencia celular, el crecimiento tumoral y la angiogénesis mediadas por NF-kappaB. Por lo tanto, bortezomib se utiliza para tratar múltiples mielomas y linfomas de las células del manto. El bortezomib normalmente se administra por vía intravenosa.

Se ha descubierto ahora y, para la presente invención, que la eficacia de los anticuerpos anti-CD38 humanizados se puede mejorar considerablemente cuando se administran en combinación con al menos una sustancia que es terapéuticamente útil en los tratamientos anticancerosos y tiene un mecanismo idéntico o diferente del de los anticuerpos anti-CD38 humanizados y que se limita en la presente invención a bortezomib.

Además, dado que la actividad de los productos depende de las dosis usadas, es posible usar dosis más bajas y aumentar la actividad mientras se disminuyen los fenómenos de toxicidad. La eficacia mejorada de una combinación según la invención se puede demostrar mediante la determinación de la sinergia terapéutica. Una combinación manifiesta sinergia terapéutica si es terapéuticamente superior que el mejor agente del estudio usado solo a su máxima dosis tolerada o a su dosis más alta evaluada cuando no se puede alcanzar la toxicidad en las especies animales.

Esta eficacia se puede cuantificar, por ejemplo, mediante la destrucción celular logi0, que se determina según la siguiente fórmula:

Destrucción celular logio = T-C (días)/3,32 x Td

en la que T - C representa el retraso en el crecimiento tumoral, que es la mediana del tiempo en días para los tumores del grupo tratado (T) y los tumores del grupo testigo (C) para que hayan alcanzado un valor predeterminado (1 g, por ejemplo), y Td representa el tiempo en días necesario para que el volumen del tumor se duplique en los animales testigo [T.H. Corbett et al., Cancer, 40: 2660-2680 (1977); F.M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17: 3-51, Nueva York, Academic Press Inc. (1979)]. Se considera que un producto es activo si la destrucción celular log10 es mayor o igual que 0,7. Se considera que un producto es muy activo si la destrucción celular log10 es mayor o igual que 2,8.

La combinación manifestará sinergia terapéutica cuando la destrucción celular log10 sea mayor que el valor de la destrucción celular log 0 del mejor constituyente administrado solo a su máxima dosis tolerada o a su dosis más alta evaluada.

La eficacia de las combinaciones en tumores sólidos puede determinarse experimentalmente de la siguiente manera:

Los animales que se someten al experimento, generalmente ratones, reciben injertos por vía subcutánea unilateral o bilateralmente con células tumorales o fragmento el día 0. Los animales que presentan tumores se aleatorizan en función del tamaño de su tumor antes de someterse a los diversos tratamientos y controles. La quimioterapia se inicia cuando los tumores han alcanzado un tamaño predeterminado después del injerto, dependiendo del tipo de tumor, y se observa a los animales diariamente. Los diferentes grupos de animales se pesan a diario durante el tratamiento hasta que se alcanza la pérdida de peso máxima y después de que se ha producido la recuperación de peso total. A continuación, los grupos se pesan una o dos veces por semana hasta el fin del ensayo.

Los tumores se miden 1 a 5 veces por semana, dependiendo del tiempo de duplicación del tumor, hasta que el tumor alcanza aproximadamente 750 mg o hasta que el animal muere (si esto se produce antes de que el tumor alcance los 750 mg). Los animales se someten a autopsia inmediatamente después de la eutanasia o muerte.

La actividad antitumoral se determina según los diferentes parámetros registrados.

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Los resultados obtenidos con las combinaciones de hu38SB19 y bortezomib usados a sus dosis óptimas se indican más adelante en la presente como ejemplos.

La presente memoria descriptiva también se refiere, por lo tanto, a composiciones farmacéuticas que contienen las combinaciones según la invención.

Los constituyentes que componen la combinación pueden administrarse simultáneamente, semisimultáneamente, por separado o distanciadas por un período de tiempo para obtener la máxima eficacia de la combinación; es posible variar la duración de cada administración de una administración rápida a una perfusión continua.

El tiempo entre al menos una administración del anticuerpo que reconoce específicamente CD38 y al menos una administración de bortezomib es de aproximadamente 1 mes o menos o aproximadamente 2 semanas o menos, o aproximadamente 1 día o menos.

En consecuencia, a los efectos de la presente invención, las combinaciones no se limitan exclusivamente a aquellas que se obtienen por la asociación física de los constituyentes, sino que también a aquellas que permiten una administración separada, que pueden ser simultáneas o estar distanciadas por un período de tiempo.

Las composiciones según la memoria descriptiva son preferiblemente composiciones que pueden administrase parentalmente. Sin embargo, estas composiciones pueden administrarse oralmente, subcutáneamente o intraperitonealmente en el caso de tratamientos regionales localizados.

Las composiciones para administración parental son generalmente disoluciones o suspensiones estériles, farmacéuticamente aceptables, que opcionalmente pueden prepararse en el momento del uso. Para la preparación de disoluciones o suspensiones no acuosas, se pueden usar aceites vegetales naturales tales como aceite de oliva, aceite de sésamo o vaselina líquida o ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Las disoluciones acuosas estériles pueden consistir en una disolución del producto en agua. Las disoluciones acuosas son adecuadas para administración intravenosa siempre que el pH se ajuste adecuadamente y la solución se convierta en isotónica, por ejemplo, con una cantidad suficiente de cloruro de sodio o glucosa. La esterilización se puede llevar a cabo mediante calentamiento o mediante cualquier otro medio que no afecte de manera adversa la composición. Las combinaciones también pueden tener la forma de liposomas o la forma de una asociación de vehículos como ciclodextrinas o polietilenglicoles.

Las composiciones para administración oral, subcutánea o intraperitoneal pueden ser, preferiblemente, suspensiones o disoluciones acuosas.

En las combinaciones según la invención, en la aplicación de los constituyentes, que puede ser simultánea, separada o distanciada por un período de tiempo, es especialmente ventajoso que la cantidad de anticuerpo anti- CD38 humanizado represente de 10 a 90% en peso de la combinación, es posible que este contenido varíe según la naturaleza de la sustancia asociada, la eficacia que se busca y la naturaleza del cáncer que se trata.

Las combinaciones según la invención son especialmente útiles para el tratamiento de diversos tipos de cánceres que incluyen (pero no se limitan a) los siguientes: carcinoma y adenocarcinoma, incluidos los de vejiga, mama, colon, vías respiratorias y digestivas altas, próstata, riñón, hígado, pulmón, ovario, páncreas, estómago, cuello uterino, tiroides y piel, e incluido el carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, incluido mieloma múltiple, leucemia, leucemia linfocítica (o linfática) aguda y crónica, leucemia linfoblástica aguda y crónica, linfoma de linfocitos B, linfoma de linfocitos T, linfoma no hodgkiniano (p. ej., de Burkitt); tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, incluidas leucemias mielógenas (mieloides o mielocíticas) agudas y crónicas y leucemia promielocítica; tumores de origen mesenquimatoso, incluidos fibrosarcoma, osteosarcoma y rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluidos astrocitoma, neuroblastoma, glioma y schwannomas; y otros tumores, incluidos melanoma, teratocarcinoma, xerodermia pigmentosa, queratoacantoma y seminoma, y otros cánceres que todavía se deben determinar en los que se expresa CD38.Son principalmente útiles para tratar leucemias, linfomas y cánceres resistentes a los agentes anticancerosos usados comúnmente dado que los anticuerpos anti-CD38 de la memoria descriptiva tienen un mecanismo de acción único.

En una realización, la eficacia antitumoral de la combinación es de aproximadamente 11-42% T/C. T/C(%) es la relación entre la mediana del volumen tumoral de los tratados / la mediana del volumen tumoral de los testigos x 100.

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En otra realización, la eficacia antitumoral de la combinación es de aproximadamente 0-10% T/C.

Por lo tanto, un aspecto de la invención es las combinaciones mencionadas anteriormente para su uso en el tratamiento del cáncer. En otro aspecto, la memoria descriptiva también abarca el uso de las combinaciones mencionadas anteriormente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

Otra realización descrita en la presente memoria es un artículo de fabricación que comprende:

a) un material de envasado

b) una combinación de un anticuerpo que reconoce específicamente CD38 y al menos bortezomib, en donde dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ por apoptosis, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC), y

c) una etiqueta o prospecto del envase contenido dentro de dicho material de envasado que indica que dicha combinación de estos es eficaz para tratar el cáncer.

Ejemplo:

En este ejemplo, se demostró in vivo la eficacia de una combinación de anticuerpo anti-CD38/bortezomib de la invención para la inhibición del crecimiento tumoral.

Administración del artículo de prueba:

Los tratamientos con Hu38SB19 y Bortezomib se iniciaron treinta y cuatro días después de la inoculación de células y las dosis se calcularon en función de los pesos corporales de los animales individuales determinados a partir de la última medición tomada antes de la dosificación. La administración de PBS y anticuerpo hu38SB19 se llevó a cabo a través de inyección intraperitoneal (IP) y el bortezomib mediante inyección intravenosa (IV) a través de la vena de la cola, usando una jeringa de 1,0 mL provista con una ajuga calibre 27, de A pulgada.

Diseño del estudio específico:

El modelo de xenoinjerto subcutáneo de mieloma múltiple NCI-H929 se inició en ratones CB.17 SCID hembra mediante inyección subcutánea de 1 x 107 células por ratón, suspendidas en 0,1 ml de medio de cultivo sin suero.

Treinta y tres días después de la inoculación de las células tumorales, se aleatorizaron sesenta y cuatro ratones en 8 grupos (n=8) por volumen tumoral. Los volúmenes tumorales variaron de 86,7 a 355,2 (189,0 ± 74,3, mediana ± DT) mm3 Los pesos corporales de los ratones variaron de 17,2 a 22,4 (19,4 ± 1,1, mediana ± DT) gramos. Los ratones en cada grupo se identificaron mediante una punción en la oreja.

Los grupos de tratamiento incluían el testigo con PBS (200 pl/ratón/tratamiento), anticuerpo hu38SB19 (5,0 mg/kg/tratamiento), bortezomib (1,0, 0,6 y 0,4 mg/kg/tratamiento) y tres grupos de combinación con hu38SB19 (5,0 mg/kg/tratamiento) y bortezomib (1,0, 0,6 y 0,4 mg/kg/tratamiento). El PBS, el hu38SB19 y el bortezomib se administraron dos veces por semana durante una semana (días 34 y 37 para un total de 2 tratamientos). Los tratamientos se iniciaron el día 34 después de la inoculación de las células tumorales.

Los volúmenes tumorales se midieron una a dos veces por semana en tres dimensiones usando un compás calibrador. El volumen tumoral se expresó en mm3 (o mg) utilizando la fórmula:

V = Longitud x Ancho x Altura x Vz.

Los pesos corporales se midieron dos veces por semana como un índice aproximado de la toxicidad del agente de prueba. El volumen tumoral y el peso corporal se determinaron y registraron mediante el programa informático Labcat.

Resultados:

La actividad antitumoral del anticuerpo hu38SB19 y el bortezomib solos y en combinación se evaluó en ratones SCID hembra que tenían xenoinjertos de tumor NCI-H929 subcutáneos, un modelo de mieloma múltiple humano.

Se utilizaron los siguientes criterios de valoración:

La toxicidad se declaró a dosificaciones que inducían >20% de pérdida de peso corporal o >10% de muerte por el fármaco,

La eficacia antitumoral se determinó al calcular:

5

10

15

20

25

T/C(%) = mediana del volumen tumoral de los tratados / mediana del volumen tumoral de los testigos x 100,

en donde un T/C <42% es el nivel mínimo de actividad antitumoral. Un T/C <10% se considera un nivel de actividad antitumoral elevado;

destrucción celular logia = (valor T-C en días) / (3,32 x Td en días)]

en donde T, C y Td son según se definieron anteriormente. No se declaró ninguna actividad antitumoral para la destrucción celular log <0,7.

Supervivientes sin tumor (TFS, por sus siglas en inglés): corresponde a la regresión completa por debajo del límite de palpación (63 mg) para la duración completa del estudio (>100 días después del último tratamiento).

Sinergia terapéutica: una combinación tiene sinergia terapéutica si es más activa que el mejor agente simple del estudio.

El anticuerpo Hu38SB19 solo a 5,0 mg/kg/inyección tuvo una actividad antitumoral leve con un %T/C de 41% y una destrucción celular log10 de 0,5 (véase la Tabla 1).

Asimismo, el bortezomib fue inactivo en las dosis de 0,4 y 0,6 mg/kg/inyección, con un T/C de 45 y 75%, y destrucción celular log10 de 0,1 y 0,3, respectivamente. No se observó ningún TFS con 0,6 mg/kg/inyección, mientras que se obtuvo un solo TFS con 0,4 mg/kg/inyección. Solo la dosis más alta evaluada de bortezomib (1,0 mg/kg/inyección) fue algo activa con un %T/C de 15% y se obtuvieron 2 TFS; sin embargo, la destrucción celular log10 fue de solo 0,6.

Por otro lado, la combinación del anticuerpo hu38SB19 (5,0 mg/kg/inyección) y el bortezomib es activa incluso en las dosis más bajas. De hecho, cuando se administra huSB3819 con 0,4 y 0,6 mg/kg/inyección, el %T/C es 8,7 y 11%, respectivamente. En ambos casos, la destrucción celular log10 fue de aproximadamente 1 (0,9 y 1,5, respectivamente), y se obtuvieron 3 TFS de 8 ratones con las combinaciones.

Por lo tanto, la combinación del anticuerpo hu38SB19 (5 mg/kg/inyección) y el bortezomib (0,4, 0,6 y 1,0 mg/kg/inyección) demostró mayor actividad que el mejor agente simple del estudio (bortezomib).

Concluimos que la combinación del anticuerpo hu38SB19 y el bortezomib exhibe sinergia terapéutica.

Tabla I: Combinación de hu38SB19 y bortezomib contra el mieloma múltiple NCI-H929 implantado en ratones SCID.




: Pérdida de Tiempo

Agente, vía: Dosificación en mg/kg/inyección (dosis total) Pauta en días peso corporal promedio en % por ratón en el nadir hasta que la mediana tumoral alcance 750 %T/C T-C en días destrucción celular log TFS el día 176 Comentarios




: (día del nadir) mg en días

PBS: * 62

Hu38SB19, IP: 5 (10) 34, 37 * 92 41 30 0,5 2/8 Levemente activo

: 1,0 (2,0) 34, 37 7,0 (d36) 99 15 37 0,6 2/8 Activo

Bortezomib, IV: 0,6 (1,2) 34, 37 0,6 (d40) 80 45 18 0,3 0/8 Inactivo

: 0,4 (0,8) 34, 37 0,8 (d36) 69 74 7 0,1 1/8 Inactivo

Hu38SB19, IP: 5 (10) y 1,0 (2,0) 34, 37 7,5 (d36) 142 0 80 1,2 6/8 Muy activo

y bortezomib,: 5 (10) y 0,6 (1,2) 34, 37 2,0 (d40) 156 11 94 1,5 3/8 Activo

5 (10) y 0,4 (0,8): 34, 37 4,7 (d40) 122 8,7 60 0,9 3/8 Muy activo


: Pérdida de Tiempo

Dosificación en Agente, vía mg/kg/inyección (dosis total): Pauta en días peso corporal promedio en % por ratón en el nadir hasta que la mediana %T/C tumoral alcance 750 T-C en días destrucción celular log TFS ,el Comentarios día 176


: (día del nadir) mg en días

IV

Células tumorales NCI-H929 implantadas sc. 1,0x107 células/ratón. Tiempo de duplicación tumoral = 19,5 días. Mediana del tamaño tumoral en el inicio del tratamiento = 153 - 201 mg, T-C = retraso del crecimiento tumoral, TFS = supervivientes sin tumor. Formulaciones: hu38SB19 = disolución salina tamponada con fosfato sin Ca2+ ni Mg2+, pH 7,4, bortezomib = glucosa al 5 % en agua.

5

10

15

20

25

30

35

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> SANOFI-AVENTIS

<120> COMBINACIONES ANTITUMORALES QUE CONTIENEN ANTICUERPOS QUE RECONOCEN ESPECÍFICAMENTE CD38 Y BORTEZOMIB

<130> FR2010-069 PCT

<160> 81

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

< 211> 5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 1

Ser Tyr Gly Met Asn 1 5

<210> 2

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>2

Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 15 10 15

Gly

<210> 3

< 211> 5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>3

Arg Gly Phe Ala Tyr 1 5

<210>4

< 211> 15

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>4

Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu lie Tyr Gly Asn Gly Phe Met Asn 15 10 15

<210> 5

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

5

10

15

20

25

30

35

<400>5

Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5

<210>6

< 211>9

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>6

Gln Gln lie Asn Glu Asp Pro Phe Thr

1 5

<210>7

< 211> 5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>7

Asn Ser Gly Met Asn 1 5

<210>8

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>8

Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

15 10 15

Gly

<210> 9

< 211> 5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>9

Arg Gly Phe Val Tyr 1 5

<210> 10

< 211> 15

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 10

Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala lie Tyr Gly Asn Ser Phe Leu Lys 15 10 15

<210> 11

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 11

Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5

5

10

15

20

25

30

35

<210> 12

< 211>9

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 12

Gln Gln lie Asn Glu Asp Pro Tyr Thr

1 5

<210> 13

< 211> 5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 13

Asp Tyr Trp Met Gln 1 5

<210> 14

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 14

imagen1

<210> 15 < 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 15

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr 15 10

<210> 16

< 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 16

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val Val Ala 15 10

<210> 17

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 17

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr lie 1 5

<210> 18 < 211> 9

5

10

15

20

25

30

35

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 18

Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr 1 5

<210> 19

< 211>5

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 19

Gly Ser Trp Met Asn

1 5

<210> 20

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 20

Arg lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp lie lie Tyr Asn Gly Asn Phe Arg

15 10 15

Asp

<210> 21 < 211> 10

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400>21

Trp Gly Thr Phe Thr Pro Ser Phe Asp Tyr 15 10

<210> 22

< 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 22

Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala Val Ala 15 10

<210> 23

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 23

Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr 1 5

<210> 24

< 211> 9

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 24

Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr Thr 1 5

<210> 25

< 211>5

<212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 25

Ser Tyr Thr Leu Ser 1 5

<210> 26

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 26

Thr lie Ser lie Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu 15 10 15

imagen2

<210> 27 < 211>8

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 27

Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe 1 5

<210> 28

< 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 28

Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala Val Ala 15 10

<210> 29

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 29

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5

<210> 30

< 211> 9

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 30

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5

5

10

15

20

25

30

35

<210> 31

< 211>5

<212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 31

Asn Phe Gly Met His 1 5

<210> 32

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 32

Tyr lie Arg Ser Gly Ser Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Asp Thr Val Lys 15 10 15

Gly

<210> 33 < 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 33

Ser Tyr Tyr Asp Phe Gly Ala Trp Phe Ala Tyr 15 10

<210> 34

< 211> 11

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 34

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

15 10

<210> 35

< 211> 7

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 35

Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser 1 5

<210> 36

< 211>9

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 36

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5

<210> 37 < 211> 336

10

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(336)

<400> 37

aac att gtg ctg Asn lie Val Leu

1

cag agg gen acc Gln Arg Ala Thr 20

ggc aat ggt ttt Gly Asn Gly Phe 35

aaa etc etc ate Lys Leu Leu lie 50

agg ttc agt ggc Arg Phe Ser Gly 65

cct gtg gag gct Pro Val Glu Ala

gag gat cea ttc Glu Asp Pro Phe 100

ace caa tet cea gct Thr Gln Ser Pro Ala

5

ata tcc tgc aga gee lie Ser Cys Arg Ala 25

atg aac tgg ttc cag Met Asn Trp Phe Gln 40

tat cgt gca tcc aac Tyr Arg Ala Ser Asn 55

agt ggg tet agg aca Ser Gly Ser Arg Thr 70

gat gat gtt gca acc Asp Asp Val Ala Thr 85

acg ttc ggc teg ggg Thr Phe Gly Ser Gly 105

tet: ttg gct gtg tet ctt ggg

Ser: Leu Ala Val Ser Leu Gly

10: 15

agt: gaa agt gtt gag att tat

Ser: Glu Ser Val Glu lie Tyr




: 30

cag: aaa cea gga cag cea CCC

Gln: Lys Pro Gly Gln Pro Pro



: 45

cta: gaa tet ggg ate cct gee

Leu: Glu Ser Gly lie Pro Ala


: 60

gag: ttc acc etc acc att gat

Glu: Phe Thr Leu Thr lie Asp

: 75 80

tat: tac tgt caa caa att aat

Tyr
Tyr: Cys Gln Gln lie Asn

90: 95

aca: aag ttg gaa ata aaa cgg

Thr: Lys Leu Glu lie Lys Arg




: 110

48

96

144

192

240

288

336

<210> 38 <211> 112 <212> PRT < 213> Mus sp.

<400> 38

Asn lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15

Gln Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu lie Tyr 20 25 30

Gly Asn Gly Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45

Lys Leu Leu lie Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lie Pro Ala 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Asp 65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln lie Asn 85 90 95

Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 110

10

<210> 39

< 211> 336

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(336)

<400> 39

gac: att gta ctg acc caa tet cea gct tet ttg gct gtg tet cta ggg

Asp: lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1: 5 10 15

cag: agg gee ace ata tcc tgc aga gee agt gag agt gtt gct att tat

Gln: Arg Ala Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala lie Tyr



: 20 25 30

ggc: aat agt ttt ctg aaa tgg ttc cag cag aaa ccg gga cag cea CCC

Gly: Asn Ser Phe Leu Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro


: 35 40 45

aaa: etc etc ate tat cgt gca tcc aac cta gaa tet ggg ate cct gee

Lys: Leu Leu lie Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lie Pro Ala

: 50 55 60

agg: ttc agt ggc agt ggg tet ggg aca gac ttc acc etc acc att aat

Arg: Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Asn

65: 70 75 80

cct: gtg gag gct gat gat gtt gca acc tat tac tgt cag caa att aat

Pro: Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln lie Asn




: 85 90 95

gag: gat □cg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa cgg

Glu: Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg



: 100 105 110

48

96

144

192

240

288

336

<210> 40 <211> 112

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 40

imagen3

5

10

imagen4

<210> 41

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 41

gac

Asp

1

gac

Asp

gtg

Val

tac

Tyr

agt

Ser

65

gaa

Glu

acg

Thr

att: gtg atg gcc cag tet cae aaa ttc atg tcc aca tea gtt gga

lie: Val Met Ala Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly



: 5 10 15

agg: gtc age ate acc tgc aag gcc agt cag gat gtg agt act gtt

Arg: Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val


: 20 25 30

gcc: tgg tat caa cag aaa cea gga caa tet cct aaa cga ctg att

Ala: Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu lie

: 35 40 45

tcg: ge a tcc tat cgg tat att gga gtc cct gat cgc ttc act ggc

Ser: Ala Ser Tyr Arg Tyr lie Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50: 55 60

gga: tet ggg acg gat ttc act ttc acc ate age agt gtg cag gct

Gly: Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Val Gln Ala




: 70 75 80

gac: ctg ge a gtt tat tac tgt cag caa cat tat agt cct ccg tac

Asp: Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr



: 85 90 95

ttc: gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa cgg

Phe: Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg


: 100 105

48

96

144

192

240

288

324

<210> 42 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

5

10

<400> 42

Asp lie Val Met Ala Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr lie Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105

<210> 43

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 43

gac att gtg atg acc Asp lie Val Met Thr 1 5

gac agg gtc agt ate Asp Arg Val Ser lie 20

gtt gee tgg ttt caa Val Ala Trp Phe Gln

35

tat: teg ge a tcc cae

Tyr: Ser 50 Ala Ser His

agt: gga tet ggg aca

Ser 65: Gly Ser Gly Thr

gaa: gac ctg gea gtt

Glu: Asp Leu Ala Val 85

cag: tet cae aaa ttc ttg tcc aca tea gtt gga

Gln: Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly




: 10 15

acc: tgc aag gee agt cag gat gtg gtt act gct

Thr: Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala



: 25 30

cag: aaa cea gga caa tet cea aaa cta ctg att

Gln: Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie


: 40 45

cgg: tac act gga gtc cct gat cgc ttc act ggc

Arg: Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

: 55 60

gat: ttc act ttc acc ate ate agt gtg cag gct

Asp: Phe Thr Phe Thr lie lie Ser Val Gln Ala

70: 75 80

tat: tac tgt caa caa cat tat act act ccc acg

Tyr
Tyr: Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr

90 95

acg ttc ggt gga ggc Thr Phe Gly Gly Gly 100

acc aag ctg gac Thr Lys Leu Asp 105

ttc aga cgg Phe Arg Arg

48

96

144

192

240

288

10

<210> 44 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 44

Asp lie Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala 20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie lie Ser Val Gln Ala 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Phe Arg Arg 100 105

<210> 45

< 211> 324 <212>ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 45

gac act gtg atg acc cag tct cae aaa ttc ata tcc aca tea gtt gga 48

Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe lie Ser Thr Ser Val Gly

15 10 15

gac agg gtc age ate acc tgc aag gee agt cag gtt gtg ggt agt gct 96

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala

20 25 30

gta gee tgg tat caa cag aaa cea ggg caa tct cct aaa cta ctg att 144

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie

35 40 45

5

10

tac: tgg gca tcc

Tyr: Trp 50 Ala Ser

agt: gga tet ggg

Ser 65: Gly Ser Gly

gaa: gac ttg gca

Glu: Asp Leu Ala

acg: ttc gga ggg

Thr: Phe Gly Gly 100

acc: cgg cae act

Thr: Arg His
Thr


: 55

aca: gat ttc act

Thr: Asp Phe
Thr

: 70

gat: tat ttc tgt

Asp: Tyr Phe Cys

85

ggg: acc aag ctg

Gly: Thr Lys Leu

gga gtc cct gat cgc ttc Gly Val Pro Asp Arg Phe 60

etc acc att age aat gtg Leu Thr lie Ser Asn Val 75

cag caa tat aac age tat Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr 90

gaa ata aaa cgg Glu lie Lys Arg 105

aca ggc Thr Gly

cag tet Gln Ser 80

ccg tac Pro Tyr 95

192

240

288

324

<210> 46 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 46

Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His

1 5

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys 20

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 35 40

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys 85

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100

Lys Phe lie Ser Thr Ser Val Gly 10 15

Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala 25 30

Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie 45

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 60

Leu Thr lie Ser Asn Val Gln Ser 75 80

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 90 95

Glu lie Lys Arg 105

<210> 47

< 211> 324 <212>ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

5

<400> 47

gac: att gtg atg acc cag tct caa

Asp: lie Val Met Thr Gln Ser Gln

1: 5

gac: agg gtc age gtc acc tgc aag

Asp: Arg Val Ser Val Thr Cys Lys



: 20

gtt: gcc tgg tat caa cae aaa cea

Val: Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro


: 35 40

tat: tcg gcg tcc tcc cgg tac agt

Tyr: Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser

: 50 55

agt: gga tct ggg aca ctt ttc act

Ser: Gly Ser Gly Thr Leu Phe Thr

65: 70

gaa: gac ttg ge a gag tat ttc tgt

Glu: Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys




: 85

acg: ttc ggc tcg ggg aca aag ttg

Thr: Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu

100

<210> 48 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 48

Asp lie Val Met Thr Gln Ser Gln

1 5

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys 20

Val Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro 35 40

Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Leu Phe Thr 65 70

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys 85

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu 100

aaa: ttc atg tcc aca tea gta gga

Lys: Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

: 10 15

gcc: agt cag aat gtg ggt act aat

Ala: Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

25: 30

gga: caa tcc cct aaa ata atg att

Gly: Gln Ser Pro Lys He Met He




: 45

gga: gtc cct gat cgc ttc aca ggc

Gly: Val Pro Asp Arg Phe Thr
Gly



: 60

etc: acc ate aac aat gtg cag tct

Leu: Thr lie Asn Asn Val Gln Ser


: 75 80

cag: caa tat aac age tat cct etc

Gln
Gln: Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

: 90 95

gaa ata aaa cgg Glu lie Lys Arg 105

Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 10 15

Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 25 30

Gly Gln Ser Pro Lys lie Met He 45

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 60

Leu Thr lie Asn Asn Val Gln Ser 75 80

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 90 95

Glu lie Lys Arg 105

48

96

144

192

240

288

324

<210> 49

< 211> 342 <212>ADN

< 213> Mus sp.

5

10

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(342)

<400> 49 cag ate cag Gln lie Gln 1

aca gtc aag Thr Val Lys

gga atg aac Gly Met Asn 35

ggc tgg ata Gly Trp lie 50

aag gga cgt Lys Gly Arg 65

ttg cag ate Leu Gln lie

gta aga cgc Val Arg Arg

tet gca Ser Ala

ttg gtg cag tet gga cct gag ctg aag aag cct gga gag

Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

5 10 15

ate tec tge aag get tet ggg tat ace ote aea age tac

lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

tgg gtg aag cag get cea gga aag ggt tta aag tgg atg

Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

40 45

aac aoc tac act gga gaa cea aca tat get gat gac ttt

Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

55 60

ttt gee ttc tet ttg gaa ace tet gee age act gee ttt

Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe

70 75 80

aac aac etc aaa aat gag gao acg get aca tat ttc tgt

Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

ggg ttt get tac tgg ggc caa ggg act ctg gtc act gtc

Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

48

96

144

192

240

288

336

342

<210> 50 <211> 114 <212> PRT < 213> Mus sp.

<400> 50

Gln lie Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

5

10

Gly Trp 50

lie Asn Thr

Tyr Thr Gly Glu Pro 55

Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe 65 70

Ser Leu Glu Thr

Ser Ala Ser Thr Ala 75

Phe

80

Leu Gln lie Asn Asn Leu Lys Asn 85

Glu Asp 90

Thr Ala Thr Tyr

Phe

95

Cys

Val Arg Arg Gly

100

Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 105 110

Ser Ala

<210> 51

< 211> 342

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(342)

<400> 51

cag: ate cag ttg gtg cag tct gga cct gag ctg aag aag cct

Gln 1: lie Gln Leu Val 5 Gln Ser Gly Pro Glu 10 Leu Lys Lys Pro

aca: gtc aag ate tcc tgc aag gct tct ggg tat acc ttc
aca

Thr: Val Lys lie 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Thr Phe Thr 30

gga: atg aac tgg gtg aag cag gct cea gga aag ggt tta aag

Gly: Met Asn 35 Trp Val Lys Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Lys

ggc: tgg ata aac acc tac act gga gag ccg aca tat gct gat

Gly: Trp 50 He Asn Thr Tyr Thr 55 Gly Glu Pro Thr Tyr 60 Ala Asp

aag: gga cgg ttt gcc ttc tct ttg gaa acc tct gcc age tct

Lys 65: Gly Arg Phe Ala Phe 70 Ser Leu Glu Thr Ser 75 Ala Ser Ser

ttg: cag ate agt aac etc aaa aat gag gac acg gct aca tat

Leu: Gln lie Ser Asn 85 Leu Lys Asn Glu Asp 90 Thr Ala Thr Tyr

gca: aga agg ggt ttt gtt tac tgg ggc caa ggg act ctg gta

Ala: Arg Arg Gly 100 Phe Val Tyr Trp Gly 105 Gln Gly Thr Leu Val 110

gga gag Gly Glu 15

aac tct Asn Ser

tgg atg Trp Met

gac

Asp

gcc

Ala

ttc

Phe

95

ttc

Phe

tat

Tyr

80

tgt

Cys

act gtc Thr Val

48

96

144

192

240

288

336

tct gca Ser Ala

<210> 52 <211> 114

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

5

10

<400> 52

Gln lie Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Ser Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gln lie Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Arg Arg Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110

Ser Ala

<210> 53

< 211> 360

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(360)

<400> 53

cag gtt cag etc cag cag tet ggg gct gag ctg gca aga cct ggg act

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr

15 10 15

tea gtg aag ttg tcc tgt aag gct tet ggc tac ace ttt act gac tac

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

tgg atg cag tgg gta aaa cag agg cct gga cag ggt ctg gag tgg att

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie

35 40 45

48

96

144

5

10

ggg: act att tat cct gga gat ggt

Gly: Thr 50 lie Tyr Pro Gly Asp 55
Gly

aag: ggc aag gec aca ttg act gcg

Lys 65: Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr Ala

atg: cae etc age agt ttg gct tet

Met: His Leu Ser Ser 85 Leu Ala Ser

gca: aga ggg gat tac tac ggt agt

Ala: Arg Gly Asp 100 Tyr Tyr Gly Ser

gga: acc tea gtc acc gtc tcc tea

Gly: Thr Ser 115 Val Thr Val Ser Ser 120

60

75

90

105

cag: aag ttc

Gln: Lys Phe

aca: gtc tac

Thr: Val Tyr 80

tat: tac tgt

Tyr: Tyr 95 Cys

tgg: ggt caa

Trp 110: Gly Gln

<210> 54 <211> 120

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

<400> 54

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 15 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Thr lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr 65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120

192

240

288

336

360

<210> 55

< 211> 357

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(357)

5

<400> 55

cag: gtc cag tta cag caa

Gln 1: Val Gln Leu Gln 5 Gln

tea: gtg aag att tcc tgc

Ser: Val Lys lie 20 Ser Cys

tgg: atg aac tgg gtg aag

Trp: Met Asn 35 Trp Val Lys

gga: cgg att tat ccg
gga

Gly: Arg 50 lie Tyr Pro
Gly

agg: gac aag gtc aca ctg

Arg 65: Asp Lys Val Thr Leu 70

atg: cag etc age age ctg

Met: Gln Leu Ser Ser 85 Leu

teg: aga tgg ggg aca ttt

Ser: Arg Trp Gly 100 Thr Phe

acc: act etc aca gtc tcc

Thr
Thr: Leu 115 Thr Val Ser

<210> 56 <211> 119 <212> PRT < 213> Mus sp.

tet: gga cct gaa ctg gtg

Ser: Gly Pro Glu 10 Leu Val

aaa: act tet ggc tac gca

Lys: Thr Ser 25 Gly Tyr Ala

cag: agg cct gga cag ggt

Gln: Arg 40 Pro Gly Gln Gly

gat: gga gat ate att tac

Asp 55: Gly Asp lie lie Tyr 60

tet: gca gac aaa tcc tcc

Ser: Ala Asp Lys Ser 75
Ser

acc: tet gtg gac tet gcg

Thr: Ser Val Asp 90 Ser Ala

acg: ccg agt ttt gac tat

Thr: Pro Ser 105 Phe Asp Tyr

tea

Ser

agg cct ggg gee 48

Arg Pro Gly Ala

15

ttc agt ggc tcc 96

Phe Ser Gly Ser

30

cta gag tgg att 144

Leu Glu Trp lie

45

aat ggg aat ttc 192

Asn Gly Asn Phe

aac aca gee tac 240

Asn Thr Ala Tyr

80

gtc tat ttt tgt 288

Val Tyr Phe Cys

95

tgg ggc caa ggc 336

Trp Gly Gln Gly

110

357

<400> 56

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Gly Ser

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Arg lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp lie lie Tyr Asn Gly Asn Phe 50 55 60

Arg Asp Lys Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Thr Phe Thr Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115

10

<210> 57

< 211> 351

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(351)

<400> 57

gac: gtg aag ctg

Asp 1: Val Lys Leu

tcc: ctg aaa etc

Ser: Leu Lys Leu 20

acc: ctg tct tgg

Thr: Leu Ser 35 Trp

gca: acc att agt

Ala: Thr 50 He Ser

gag: ggc cga ttc

Glu 65: Gly Arg Phe

ctg: caa atg aac

Leu: Gln Met Asn

aca: aga gat ttt

Thr: Arg Asp Phe 100

etc: aca gtc tcc

Leu: Thr Val 115 Ser

gtg: gag tct ggg

Val: Glu Ser Gly

5

tcc: tgt gaa gcc

Ser: Cys Glu Ala

gtt: cgc cag act

Val: Arg Gln Thr



: 40

att: ggt ggt cgc

He: Gly Gly Arg


: 55

acc: ate tcc aga

Thr: lie Ser Arg

: 70

agt: ctg aag tct

Ser: Leu Lys
Ser

85

aat: ggt tac tct

Asn: Gly Tyr Ser

tea

Ser

gga ggc tta gtg Gly Gly Leu Val 10

tct gga ttc act Ser Gly Phe Thr 25

ccg gag acg agg Pro Glu Thr Arg

tac acc tat tat Tyr Thr Tyr Tyr 60

gac aat gcc aag Asp Asn Ala Lys 75

gag gac aca gcc Glu Asp Thr Ala 90

gac ttc tgg ggc Asp Phe Trp Gly 105

aag: cct gga ggg

Lys: Pro Gly 15 Gly

ttc: agt age tat

Phe: Ser 30 Ser Tyr

ctg: gag tgg gtc

Leu 45: Glu Trp val

cea: gac agt gtg

Pro: Asp Ser Val

aac: acc ctg tac

Asn: Thr Leu Tyr 80

atg: tat tac tgt

Met: Tyr Tyr 95 Cys

caa: ggc acc act

Gln: Gly 110 Thr Thr

48

96

144

192

240

288

336

351

<210> 58

< 211> 117 <212> PRT

< 213> Mus sp.

5

10

<400> 58

Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Thr Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Thr Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Thr lie Ser lie Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser 115

<210> 59

< 211> 360

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(360)

<400> 59

aat gta cag ctg gta gag tct ggg gga ggc tta gtg cag cct gga ggg

Asn Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

15 10 15

tcc cgg aaa etc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc agt aac ttt

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe

20 25 30

gga atg cae tgg gtt cgt cag gct cea gag aag ggt ctg gag tgg gtc

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

gca tac att cgt agt ggc agt ggt acc ate tac tat tea gac aca gtg

Ala Tyr lie Arg Ser Gly Ser Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Asp Thr Val

48

96

144

5

10

: 50 55

aag: ggc cga ttc acc ate tcc aga

Lys 65: Gly Arg Phe Thr lie 70 Ser Arg

ctg: caa atg acc agt cta agg tet

Leu: Gln Met Thr Ser 85 Leu Arg Ser

gca: aga tcc tac tat gat ttc ggg

Ala: Arg Ser Tyr 100 Tyr Asp Phe Gly

ggg: act ctg gtc act gtc tet gca

Gly: Thr Leu 115 Val Thr Val Ser Ala 120

<210> 60 <211> 120

< 212> PRT

< 213> Mus sp.

60

gac aat ccc aag aac acc ctg ttc

Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe

75 80

gag gac acg gcc atg tat tac tgt

Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

90 95

gcc tgg ttt gct tac tgg ggc caa

Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

105 110

<400> 60

Asn Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Tyr lie Arg Ser Gly Ser Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Asp Thr Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Phe Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120

<210> 61

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

240

288

336

360

5

<400>61

gat ate gta atg acc cag tcc cae etg agt

Asp lie Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser

15 10

gat cct gtg tea ate act tgc aag gee tea

Asp Pro Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser

20 25

gtt gct tgg tat cag cag aag ccc ggg caa

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40

tac tea gca tea tac cgt tac ate ggg gtg

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr lie Gly Val

50 55

tet ggc gct ggc aca gat ttc acc ttt aca

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70

gaa gac etg gee gtg tac tac tgc cag cag

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90

atg: agt acc tcc etg gga

Met: Ser Thr Ser Leu 15 Gly

cag: gat gtg age acc gtc

Gln: Asp Val Ser 30 Thr Val

tea: ccc aga cgt etc ate

Ser: Pro Arg 45 Arg Leu lie

cct: gac cga ttt act ggc

Pro: Asp 60 Arg Phe Thr Gly

att: agt tcc gtc cag gee

lie 75: Ser Ser Val Gln Ala 80

cae: tac agt ccc cea tac

His: Tyr Ser Pro Pro 95 Tyr

act ttc ggg gga ggg act aag etc gaa ate aaa cgt Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105

<210> 62 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Homo sapiens

<400> 62

Asp lie Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Pro Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr lie Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg

100 105

48

96

144

192

240

288

324

<210> 63

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

5

10

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 63

gac: att gtt atg gct caa age cat

Asp 1: lie Val Met Ala 5 Gln Ser His

gat: cct gtg tcc ate act tgc aaa

Asp: Pro Val Ser 20 lie Thr Cys Lys

gtt: gca tgg tat caa cag aag cea

Val: Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys Pro 40

tac: tea gct tct tac cga tac ate

Tyr: Ser 50 Ala Ser Tyr Arg Tyr 55 lie

agt: ggg gee ggt act gac ttc act

Ser 65: Gly Ala Gly Thr Asp 70 Phe Thr

gaa: gac ctg gca gta tat tac tgc

Glu: Asp Leu Ala Val 85 Tyr Tyr Cys

aca: ttc ggc ggg ggt act aag ctg

Thr: Phe Gly Gly 100 Gly Thr Lys Leu

<210> 64 < 211> 108 <212> PRT < 213> Homo sapiens

<400> 64

Asp lie Val Met Ala Gln Ser His

1 5

Asp Pro Val Ser lie Thr Cys Lys 20

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 35 40

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr lie 50 55

Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr 65 70

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys 85

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100

ctg tct atg age ana tet ctg gga Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 10 15

gee: agt caa gac gtg tct aca gtt

Ala 25: Ser Gln Asp Val Ser 30 Thr Val

ggc: cag tea ccc aga cgg etc att

Gly: Gln Ser Pro Arg 45 Arg Leu He

ggg: gtc cct gac aga ttt aca ggt

Gly: Val Pro Asp 60 Arg Phe Thr
Gly

ttt: act ate tea tcc gta caa gee

Phe: Thr lie 75 Ser Ser Val Gln Ala 80

cag: caa cat tat tcc cea ccc tac

Gln: Gln 90 His Tyr Ser Pro Pro 95 Tyr

gaa att aaa cgt Glu lie Lys Arg 105

Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 10 15

Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 25 30

Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu lie 45

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 60

Phe Thr lie Ser Ser Val Gln Ala 75 80

Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 90 95

Glu lie Lys Arg 105

48

96

144

192

240

288

324

5

10

<210> 65

< 211> 360

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(360)

<400> 65

cag: gta cag etc gtt cag tcc ggc gcc

Gln 1: Val Gln Leu Val 5 Gln Ser Gly Ala

tcc: gta aaa ttg tcc tgt aag gct
tcc

Ser: Val Lys Leu 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25

tgg: atg cag tgg gta aaa cag cgg cea

Trp: Met Gln 35 Trp Val Lys Gln Arg 40 Pro

gga: aca ata tat ccc ggc gac ggc gac

Gly: Thr 50 lie Tyr Pro Gly Asp 55 Gly Asp

caa: ggc aag gca acc ctt act gct gat

Gln 65: Gly Lys Ala Thr Leu 70 Thr Ala Asp

atg: cat ctg tct tcc ttg gca tct gag

Met: His Leu Ser Ser 85 Leu Ala Ser Glu

gct: agg ggg gac tac tat ggg tea aat

Ala: Arg Gly Asp 100 Tyr Tyr Gly Ser Asn 105

ggc: acc agt gtc acc gtg age age

Gly: Thr Ser 115 Val Thr Val Ser Ser 120

gag gta gct aag cct ggt act Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr 10 15

ggg tac aca ttt aca gac tac Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 30

ggt cag ggc ctg gag tgg att Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 45

aca ggc tat gcc cag aag ttt Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 60

aaa tct tcc aag act gtc tac Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr 75 80

gat age gct gtc tat tac tgt Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

tcc ctg gat tac tgg ggc cag Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 110

48

96

144

192

240

288

336

360

<210> 66 <211> 120

< 212> PRT

< 213> Homo sapiens

5

10

<400> 66

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr 15 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Thr lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr 65 70 75 80

Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 67

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 67

gac: acc gtg atg

Asp 1: Thr Val Met

gac: cgg gtg tcc

Asp: Arg Val Ser 20

gtg: gee tgg tat

Val: Ala Trp 35 Tyr

tac: tgg gee tcc

acc cag tcc ccc tcc acc ate tcc acc tet gtg ggc 48

Thr Gln Ser Pro Ser Thr lie Ser Thr Ser Val Gly

5 10 15

ata acc tgt aag gee tcc cag gtg gtg ggc tcc gee 96

lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala

25 30

cag cag aag cct ggc cag tcc cct aag ctg ctg ate 144

Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu He

40 45

acc cgg cat acc ggc gtg cct gac cgg ttc acc ggc 192

5

10

Tyr: Trp 50 Ala Ser

tcc Ser 65: ggc Gly age Ser ggc Gly

gac Asp
gac Asp: ctg Leu gee Ala

acc Thr: ttt Phe ggc Gly ggc Gly 100

Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 55 60

acc gac ttc acc ctg acc ate tcc aac gtg cag tcc

Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Val Gln Ser

70 75 80

gac tac ttc tgc cag cag tac aac tcc tac cct tac

Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr

85 90 95

gga aca aag ctg gag ate aag cgt Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 105

240

238

324

<210> 68 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Homo sapiens

<400> 68

Asp Thr Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr lie Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80

Asp Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105

<210> 69

< 211> 324

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(324)

<400> 69

gac acc gtg atg acc cag tcc ccc tcc tcc ate tcc acc tcc ate ggc

5

Asp: Thr Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser lie Ser Thr Ser lie Gly

1: 5 10 15

gac: cgg gtg tcc ate acc tgt aag gcc tcc cag gtg gtg ggc tcc gcc

Asp: Arg Val Ser He Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala



: 20 25 30

gtg: gcc tgg tat cag cag aag cct ggc cag tcc cct aag ctg ctg ate

Val: Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu He


: 35 40 45

tac: tgg gcc tcc acc cgg cat acc ggc gtg cct gcc cgg ttc acc ggc

Tyr: Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly val Pro Ala Arg Phe Thr Gly

: 50 55 60

tcc: ggc age ggc acc gac ttc acc ctg acc ate tcc aac gtg cag
tcc

Ser: Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Asn Val Gln
Ser

65: 70 75 80

gag: gac ctg gcc gac tac ttc tgc cag cag tac aac tcc tac cct tac

Glu: Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr




: 85 90 95

acc: ttt ggc ggc gga aca aag ctg gag ate aag cgt

Thr: Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg



: 100 105

<210> 70 <211> 108

< 212> PRT

< 213> Homo sapiens

<400> 70

Asp Thr Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser lie Ser Thr Ser lie Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105

96

144

192

240

288

324

<210> 71

< 211> 351

< 212> ADN

< 213> Homo sapiens

5

10

<220>

< 221> CDS

< 222> (1)..(351)

<400> 71

gag: gtg cag ctg gtg gag tet ggc ggc gga ctg gtg aag cct ggc ggc

Glu: Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1: 5 10 15

tcc: ctg agg ctg tcc tgt gag gcc tcc ggc ttc acc ttc tcc tcc tac

Ser: Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr



: 20 25 30

acc: ctg tcc tgg gtg agg cag acc cct ggc aag ggc ctg gag tgg gtg

Thr: Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val


: 35 40 45

gcc: acc ate tcc ate ggc ggc agg tac acc tac tac cct gac tcc gtg

Ala: Thr He Ser He Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

: 50 55 60

aag: ggc cgg ttc acc ate tcc cgg gac aac gcc aag aac acc ctg tac

Lys: Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65: 70 75 80

ctg: cag atg aac tcc ctg aag tcc gag gac acc gcc atg tac tac tgt

Leu: Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

acc: cgg gac ttc aac ggc tac tcc gac ttc tgg ggc cag ggc acc aca

Thr: Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly
Thr
Thr



: 100 105 110

48

96

144

192

240

288

336

ctg acc gtg tcc tcc Leu Thr Val Ser Ser 115

351

<210> 72 <211> 117 <212> PRT < 213> Homo sapiens

<400> 72

Glu Val Gln Leu Val

1 5

Glu

Ser Gly Gly Gly Leu Val

10

Lys Pro Gly Gly 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys 20

Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 25 30

Thr

Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

5

10

15

20

25

30

imagen5

<210> 73

< 211> 36

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<400> 73

ggaggatcca tagacagatg ggggtgtcgt tttggc 36

<210> 74

< 211> 32

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<400> 74

ggaggatccc ttgaccaggc atcctagagt ca 32

<210> 75

< 211> 32

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> característica_div

< 222> (1)..(32)

< 223> las bases mixtas se definen de la siguiente manera: H=A+T+C, S=G+C, Y=C+T, K= G+T, M=A+C, R=A+G, W=A+T, V = A+C+G, N = A+C+G+T

<400> 75

cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tc 32

<210> 76

< 211> 35

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> característica_div

< 222> (1)..(35)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

<400> 76

cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tcwgg 35

<210> 77

< 211> 31

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<220>

< 221> característica_div

< 222> (1)..(31)

<400> 77

ggagctcgay attgtgmtsa cmcarwctmc a 31

<210> 78

< 211> 46

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<400> 78

tatagagctc aagcttggat ggtgggaaga tggatacagt tggtgc 46

<210> 79 < 211> 21

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<400> 79

atggagtcac agattcaggt c 21

<210> 80

< 211> 32

< 212> ADN

< 213> Mus sp.

<400> 80

ttttgaattc cagtaacttc aggtgtccac tc 32

<210> 81

< 211> 17

< 212> PRT

< 213> Artificial

<220>

< 223> humanizado

<400> 81

Thr lie Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 15 10 15

imagen6

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

REIVINDICACIONES

1. Una combinación farmacéutica que comprende un anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 y al menos bortezomib, en donde dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ por apoptosis, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC), y en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 66, y en donde dicha cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en las SEQ ID NOS: 62 o 64.
2. Una combinación farmacéutica según la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el cáncer expresa CD38.
3. La combinación para el uso según la reivindicación 2 en donde la eficacia antitumoral de la combinación es de 11 a 42% T/C, en donde T/C(%) es la relación entre la mediana del volumen tumoral de los tratados / la mediana del volumen tumoral de los testigos x 100.
4. La combinación para el uso según la reivindicación 2 en donde la eficacia antitumoral de la combinación es de 0 a 10% T/C, en donde T/C(%) es la relación entre la mediana del volumen tumoral de los tratados / la mediana del volumen tumoral de los testigos x 100.
5. La combinación para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 en donde el anticuerpo que reconoce específicamente CD38 y el bortezomib se administran por separado.
6. La combinación para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 en donde el anticuerpo que reconoce específicamente CD38 y el bortezomib se administran semisimultáneamente.
7. La combinación para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4 en donde la administración del anticuerpo que reconoce específicamente CD38 y el bortezomib se distancia por un período de tiempo para obtener la máxima eficacia de la combinación.
8. La combinación para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7 en donde el cáncer que expresa CD38 es un tumor hematopoyético de linaje linfoide o mieloide.
9. La combinación para el uso según la reivindicación 8, en donde el cáncer hematológico se selecciona del grupo que consiste en mieloma múltiple, leucemia, leucemia linfocítica aguda y crónica, leucemia linfocítica aguda y crónica, leucemia linfoblástica aguda y crónica, linfoma de linfocitos B, linfoma de linfocitos T, linfoma no hodgkiniano; leucemias mielógenas agudas y crónicas y leucemia promielocítica.
10. Un artículo de fabricación que comprende:

a) un material de envasado

b) una combinación de un anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 y al menos bortezomib, en donde dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ por apoptosis, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC), y en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 66, y en donde dicha cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en las SEQ ID NOS: 62 o 64, y

c) una etiqueta o prospecto del envase contenido dentro de dicho material de envasado que indica que dicha combinación de estos es eficaz para tratar el cáncer.
11. Un anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 para su uso en el tratamiento de un cáncer que expresa CD38 en combinación con al menos bortezomib, en donde dicho anticuerpo es capaz de destruir una célula CD38+ por apoptosis, citotoxicidad mediada por célula dependiente de anticuerpo (ADCC) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC), y en donde dicho anticuerpo comprende al menos una cadena pesada y al menos una cadena ligera, en donde dicha cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 66, y en donde dicha cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que consiste en las SEQ ID NOS: 62 o 64.
12. El anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 para el uso según la reivindicación 11 en donde el cáncer que expresa CD38 es un tumor hematopoyético de linaje linfoide o mieloide.
13. El anticuerpo humanizado que reconoce específicamente CD38 para el uso según la reivindicación 12, en donde el cáncer hematológico se selecciona del grupo que consiste en mieloma múltiple, leucemia, leucemia linfocítica

aguda y crónica, leucemia linfocítica aguda y crónica, leucemia linfoblástica aguda y crónica, linfoma de linfocitos B, linfoma de linfocitos T, linfoma no hodgkiniano; leucemias mielógenas agudas y crónicas y leucemia promielocítica.