ES2692530T3

ES2692530T3 - Dispositivo y método para la transfección de grandes volúmenes

Info

Publication number: ES2692530T3
Application number: ES14166918.4T
Authority: ES
Inventors: Ludger Altrogge; Timo Gleissner; Andreas Heinze; Sven Hermsmeier
Original assignee: Lonza Cologne GmbH
Current assignee: Lonza Cologne GmbH
Priority date: 2014-05-02
Filing date: 2014-05-02
Publication date: 2018-12-04
Anticipated expiration: 2034-05-02
Also published as: CA2946472C; EP2940121A1; US10336996B2; JP6642875B2; EP3260163B1; AU2015254739B2; CN106459872B; CN106255746A; AU2015254741B2; CN111321077A; CN106255746B; JP2019213539A; KR20170017899A; EP2940120B1; US20170233715A1; CN106459872A; AU2018205130B2; EP3260163A1; US20170233716A1; DK2940121T3

Abstract

Dispositivo (1) para aplicar un campo eléctrico a una suspensión de células, derivados celulares, orgánulos, partículas subcelulares y/o vesículas, comprendiendo al menos una cámara (6) que comprende al menos dos electrodos (4, 5) y al menos un elemento de separación (13) que es movible dentro de la cámara (6) entre dos puntos terminales (14, 15) y que es un miembro de sellado que, si está en una posición entre los puntos terminales (14, 15), asegura la separación a prueba de líquidos y/o gases de al menos un primer compartimento (26) de la cámara (6) de al menos un segundo compartimento (27) de la cámara (6), en donde el primer compartimento (26) está diseñado para mantener una parte alícuota de la suspensión y comprende al menos un puerto (7, 8) para cargar o descargar la suspensión dentro o fuera del primer compartimento (26), caracterizado por que el elemento de separación (13) comprende un material flexible y/o elástico y el segundo compartimento (27) está diseñado para mantener otra parte alícuota de la suspensión y comprende al menos un puerto (10, 11) para cargar o descargar la suspensión dentro o fuera del segundo compartimento (27).

Description

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DESCRIPCION

Dispositivo y metodo para la transfeccion de grandes volumenes

La invencion se refiere a un dispositivo para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partmulas subcelulares y/o vesmulas, que comprende al menos una camara que comprende al menos dos electrodos y al menos un elemento de separacion que es movible dentro de la camara entre dos puntos terminales y que es un miembro de sellado que, si esta en una posicion entre los puntos terminales, asegura la separacion a prueba de lfquidos y/o gases de al menos un primer compartimento de la camara de al menos un segundo compartimento de la camara, en donde el primer compartimento ha sido disenado para mantener una parte alfcuota de la suspension y comprende al menos un puerto para cargar o descargar la suspension dentro o fuera del primer compartimento. La invencion se refiere ademas a un metodo para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesmulas.

La introduccion de moleculas biologicamente activas, por ejemplo, ADN, ARN o protemas, en celulas vivas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesmulas puede, por ejemplo, servir para examinar las funciones biologicas de estas moleculas y es, ademas, una condicion previa esencial para el exito del uso terapeutico de estas moleculas, por ejemplo, en terapia genica. Un metodo preferido para introducir moleculas externas en las celulas se llama electroporacion, que a diferencia de los metodos qmmicos limita los cambios indeseables en la estructura y en la funcion de la celula objeto. En la electroporacion, las moleculas externas son introducidas en las celulas a partir de una solucion acuosa, preferiblemente una solucion tampon espedficamente adaptada a las celulas, o un medio de cultivo celular, por medio de un corto flujo de corriente, es decir, por ejemplo, el pulso de un condensador que es descargado y que hace que la membrana celular sea transitoriamente permeable a las moleculas externas. Los "poros" temporales que se forman en la membrana celular permiten que las moleculas biologicamente activas alcancen primero el citoplasma en el que ya pueden realizar su funcion o ejercer cualquier accion terapeutica para ser examinadas, y a continuacion, bajo ciertas condiciones, alcanzan tambien el nucleo celular como se requiere, por ejemplo, en aplicaciones de terapia genica.

Debido a una breve aplicacion de un campo electrico fuerte, es decir, un pulso corto con una alta densidad de corriente, las celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas pueden fusionarse tambien. En esta llamada electrofusion, las celulas, por ejemplo, son puestas inicialmente en contacto estrecho con la membrana por un campo electrico alterno no homogeneo. La aplicacion posterior de un impulso de campo electrico conduce a la interaccion entre las partes de la membrana, lo que finalmente da lugar a la fusion. Los dispositivos comparables a los usados en la electroporacion pueden ser usados tambien en la electrofusion.

Los volumenes mas pequenos de suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas son tratados en general mediante un proceso por lotes en recipientes relativamente simples. La solucion o suspension celular, respectivamente, se encuentra con frecuencia en una cubeta, es decir, en un recipiente estrecho abierto por la parte superior, que cerca de la parte inferior tiene dos electrodos paralelos opuestos en las paredes laterales que sirven para aplicar el voltaje electrico. Sin embargo, dichos recipientes no son adecuados para tratar volumenes mayores, ya que el espacio de reaccion disponible para el tratamiento electrico esta limitado por la distancia maxima limitada entre los electrodos. Por tanto, los procesos de flujo por medio de los que la suspension de celulas o vesfculas es alimentada de forma continua o discontinua a traves del espacio de reaccion entre los electrodos son utilizados frecuentemente en la electroporacion o electrofusion de volumenes mayores.

La patente de los EE. UU. US-A-6 150 148 describe, por ejemplo, una cubeta modificada para procesos de flujo continuo. El puerto de la cubeta esta sellado por una tapa a traves de la que es guiada una lmea de alimentacion. En la parte inferior de una region entre los electrodos, la cubeta tiene un puerto adicional al que se conecta una descarga. Debido a esta disposicion, la suspension a ser tratada puede ser alimentada por medio de la lmea de alimentacion al espacio de reaccion y salir a traves de la descarga. Debido al intercambio repetido, continuo o discontinuo de la suspension en la sala de reaccion y los pulsos electricos repetidos respectivos, se pueden tratar volumenes mas grandes con esta cubeta. La patente de los EE. UU. US-A-6 l5o 148 describe ademas camaras de flujo continuo que son de diseno tubular o ranurado y en sus extremos cada una tiene una conexion para una entrada y un canal de salida. Las camaras representan un espacio de reaccion alargado que esta rodeado por dos cilindros, dispuestos concentricamente o electrodos planos con configuracion plana-paralela. Estos dispositivos permiten tambien tratar volumenes mayores mediante pulsos repetitivos conforme son alimentados a traves de la camara.

Sin embargo, los procesos de electroporacion de flujo continuo o incluso de electrofusion son diffciles de controlar, ya que la velocidad de flujo continuo debe corresponderse con la frecuencia de pulsacion. El calentamiento de la suspension y la formacion de burbujas de gas por electrolisis plantean otros problemas importantes. La generacion repetitiva de las corrientes muy altas frecuentemente requeridas para estos procesos conduce a un aumento de la produccion de calor y a un gran numero de pequenas burbujas de gas que se forman por procesos electroqmmicos en la solucion de electrolito en la que estan suspendidas las celulas o vesmulas a ser tratadas. Estas burbujas perturban el flujo de la suspension a traves de la camara y pueden dar lugar a un reflujo de la suspension ya tratada en la camara. Ademas, el riesgo de formacion de arco aumenta conforme la suspension se distribuye de manera desigual dentro de la camara. Estos problemas, por una parte, conducen a resultados que ya no son reproducibles y, por otra parte, si se tratan celulas vivas, a una mayor tasa de mortalidad.

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El documento WO 2004/083379 A2 describe un metodo de electroporacion para la insercion de material exogeno en vesfculas mediante el cual el volumen de tratamiento de la suspension es escalable y el tiempo de tratamiento de las vesfculas en la camara es sustancialmente uniforme. En este metodo, el volumen de la suspension es mayor que el volumen de la camara del dispositivo de electroporacion. Una porcion inicial del volumen de la suspension es movida a la camara, retenida y tratada en la camara, y sacada de la camara. Una porcion adicional del volumen de la suspension es movida a continuacion a la camara, retenida y tratada en la camara, y sacada de la camara. Otras porciones del volumen de la suspension son movidas secuencialmente hacia la camara, retenidas y tratadas en la camara, y sacadas de la camara hasta agotar el volumen de la suspension.

El documento WO 2005/113820 A2 describe un dispositivo de electroporacion que comprende una camara de electroporacion de flujo regulado que permite condiciones en las que una muestra es tratada uniformemente en fracciones o volumenes individuales en un sistema esteril completamente cerrado. La camara incluye un puerto de entrada y un puerto de salida, a traves de los que la suspension celular a ser tratada puede ser cargada y desplazada desde la camara, respectivamente, para que las muestras de la suspension puedan ser tratadas en unidades que se producen al proporcionar un contorno entre los volumenes tratados y no tratados de la muestra. El contorno es proporcionado mediante el ciclado de un gas o fluido no de muestra en la camara entre dos fracciones de la muestra. El gas o fluido que no es de muestra puede fluir dentro o fuera de la camara a traves de un tercer puerto de la camara.

La patente de los EE. UU. US 2007/0128708 A1 y el documento WO 2007/120234 A2 describen un dispositivo escalable para electroporar volumenes relativamente grandes de un medio fluido que transporta celulas biologicas o vesfculas a una camara segmentada, en donde cada segmento comprende dos electrodos. El volumen efectivo de la camara puede ser variado moviendo un embolo a lo largo del eje longitudinal de la camara. Por tanto, el volumen elegido esta directamente relacionado con el volumen de la muestra a ser electroporada. La muestra es aspirada y purgada de la camara por medio de un puerto dispuesto en la pared final de la camara. La muestra dentro de la camara es tratada aplicando secuencialmente pulsos de voltaje a los pares de electrodos de los segmentos individuales de la camara.

Sin embargo, un inconveniente de los dispositivos y metodos de la tecnica anterior es que el tratamiento de volumenes mayores lleva mucho tiempo, ya que una muestra ya tratada debe ser completamente descargada de la camara antes de que la siguiente muestra pueda ser cargada en la camara. Otro inconveniente de los dispositivos y metodos de la tecnica anterior es que las burbujas y los residuos celulares no se eliminan completamente de la camara de reaccion de una manera fiable.

Por tanto, un objeto de la invencion es proporcionar un dispositivo y un metodo para tratar celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas, con lo que se acelera el tratamiento de volumenes mayores, lo que permite el tratamiento en condiciones reproducibles y asegura una limpieza fiable de la camara de reaccion despues del tratamiento.

El objeto es alcanzado mediante un dispositivo que aplica un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas segun se ha especificado inicialmente, en donde el elemento de separacion comprende un material flexible y/o elastico y el segundo compartimento de la camara esta disenado para mantener otra parte alfcuota de la suspension y comprende al menos un puerto para cargar o descargar la suspension dentro o fuera del segundo compartimento. Es decir, cada compartimento de la camara puede recibir y mantener una parte alfcuota de la suspension que es movible dentro y fuera de la camara por medio de al menos dos puertos, en donde cada compartimento esta provisto de al menos un puerto a traves del que se puede llenar el compartimento respectivo con la suspension y/o a traves del que se puede purgar la suspension de este compartimento. Esta configuracion ventajosa permite la carga y descarga simultaneas de la camara, de manera que se minimiza el tiempo necesario para cambiar la suspension y, por tanto, el lapso de tiempo entre dos tratamientos electricos posteriores de la suspension. Esta minimizacion da como resultado una aceleracion significativa del tiempo de tratamiento para grandes volumenes, es decir, volumenes por encima de 1 ml. Otra ventaja del dispositivo segun la invencion es que permite un proceso escalable mediante la carga y el tratamiento repetitivos de la suspension. Por ejemplo, si la camara tiene un volumen total de 1 ml, cualquier volumen multiplo de este puede ser tratado facilmente de manera expedita. Segun la invencion, el elemento de separacion es un elemento de sellado que asegura la separacion a prueba de lfquidos y/o gases de los diferentes compartimentos de la camara si esta en una posicion entre los puntos terminales. El elemento de separacion comprende un material flexible y/o elastico. Debido a su deformabilidad elastica, el elemento de separacion es ademas capaz de compensar los picos de presion dentro de la camara.

Por consiguiente, el dispositivo segun la invencion no es un dispositivo de flujo continuo sino un dispositivo que permite la carga y descarga de la camara al mismo tiempo mediante un tipo de mecanismo de vaiven.

Segun una realizacion ejemplar de la invencion, al menos un puerto esta dispuesto en un extremo de la camara y al menos un puerto adicional esta dispuesto en el extremo en oposicion de la camara. La disposicion de los puertos en los extremos en oposicion de la camara permite establecer facilmente el mecanismo de vaiven donde el elemento de separacion, y por tanto la suspension, pueden ser movidos entre dos puntos terminales de la camara para cargar simultaneamente un compartimento dispuesto en un extremo de la camara y descargar otro compartimento dispuesto en el extremo en oposicion de la camara. Ademas, tal disposicion geometrica permite la integracion optima del

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dispositivo segun la invencion en un sistema de electroporacion o electrofusion, ya que los puertos estan separados entre sf y, por tanto, se puede acceder a ellos desde diferentes extremos del dispositivo.

En una realizacion donde al menos dos puertos estan dispuestos en cada extremo de la camara, un puerto puede ser usado como puerto de entrada para cargar la suspension, mientras que el otro puerto puede ser usado como puerto de salida para descargar la suspension.

La minimizacion de los volumenes muertos se puede lograr reduciendo el tamano del puerto o puertos de la camara, en particular el puerto o puertos de entrada. Una medida adicional o alternativa para asegurar pequenos volumenes muertos puede ser el uso de conexiones en Y de tubos cerca de los puertos de salida/entrada de la camara.

Ademas, la conexion de los tubos a los puertos de salida del dispositivo permite la compensacion de los picos de presion en la camara.

En otra realizacion de la invencion, el elemento de separacion esta acoplado al menos a un elemento de ajuste que opera y/o controla el elemento de separacion. En una realizacion ventajosa, el elemento de ajuste esta dispuesto fuera de la camara de manera que cada compartimento carece de cualquier elemento de interferencia que pueda afectar la funcion del dispositivo segun la invencion. Por ejemplo, el elemento de separacion puede ser movido dentro de la camara al menos parcialmente por medio del elemento de ajuste.

El elemento de ajuste puede ser, por ejemplo, un cuerpo giratorio que esta acoplado operativamente al elemento de separacion. Por ejemplo, el cuerpo giratorio puede ser un elemento similar a un rotor que mueve el elemento de separacion de manera que este realiza un movimiento giratorio. Dichas realizaciones aseguran un control preciso y un movimiento constante del elemento de separacion, en particular si la camara tiene una forma curva. Sin embargo, en una realizacion alternativa de la invencion, el elemento de ajuste y, por tanto, el elemento de separacion pueden realizar un movimiento en otra direccion, por ejemplo, en una direccion lineal.

El elemento de separacion puede ser accionado por el elemento de ajuste por medio de un componente seleccionado del grupo que consiste en un tornillo sin fin, un engranaje de dientes rectos, un engranaje conico, una barra de engranajes, una transmision por correa y una barra de acero cuadrada. Sin embargo, se pueden usar tambien otros mecanismos de engranajes o elementos de transmision de potencia, si son adecuados.

El elemento de separacion puede ser disenado, por ejemplo, como una parte de plastico de 2 componentes que incluye un material elastico para que tenga mejores propiedades de sellado. El elemento de separacion puede comprender ademas labios de sellado para una limpieza optima de la camara. Con este proposito, los labios de sellado pueden estar orientados en una direccion adaptada a la superficie interior de la camara y/o a la superficie de los electrodos y/o a los otros componentes del elemento de separacion. En una realizacion ventajosa de la invencion, una desviacion potencial del elemento de separacion o de sus partes puede estar limitada por topes contra sacudidas, para mantener su funcion de sellado.

En una realizacion particular, el elemento de separacion comprende al menos dos partes separadas, en donde el espacio interior entre las partes separadas del elemento de separacion comprende un material compresible. Dicho diseno proporciona una compensacion de presion efectiva para que el elemento de separacion actue como un tipo de amortiguador que equilibra las variaciones de presion en la camara. El material compresible puede ser simplemente aire o cualquier otro gas, o una espuma compresible o material celular.

Segun otra realizacion ejemplar de la invencion, la camara comprende al menos dos segmentos, en donde cada segmento comprende al menos un electrodo. Una ventaja de esta realizacion es que cada segmento puede ser direccionado electricamente de manera individual, de forma que se puede conseguir con precision la generacion controlada de campos electricos dentro de la camara. Por ejemplo, para evitar la formacion de arcos y/o el calentamiento no deseado de la suspension, se pueden aplicar pulsos de voltaje a diferentes segmentos de un compartimento de forma secuencial. Para este fin, cada segmento puede estar provisto de al menos un primer electrodo y de al menos un segundo electrodo, en donde el segundo electrodo puede ser un electrodo comun de al menos dos segmentos. En una realizacion de la invencion, cada compartimento de la camara puede comprender al menos un segmento provisto de al menos un electrodo.

La camara del dispositivo segun la invencion comprende rebajos correspondientes de dos componentes que estan acoplados entre sf. Es decir, el dispositivo segun la invencion puede ser ensamblado, por ejemplo, acoplando dos componentes entre sf, en donde cada componente comprende un rebajo que se corresponde con el rebajo del otro componente. Si estos dos componentes estan acoplados entre sf, sus rebajos alineados forman la camara del dispositivo. Para producir un campo electrico dentro de la camara, cada rebajo puede estar provisto de al menos un electrodo. Al menos algunos de los electrodos pueden estar segmentados. Por ejemplo, una mitad de los electrodos (en un lado del eje de simetna) puede estar segmentada, mientras que la otra mitad de los electrodos (en el otro lado del eje de simetna) puede ser un electrodo simple y no segmentado que puede ser usado como un contraelectrodo. En una realizacion ventajosa, los dos componentes son identicos, de manera que se asegura una produccion rentable. Como los componentes identicos son simetricos giratoriamente, en este caso es todavfa posible un ensamblaje facil acoplando los componentes entre sf.

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En una realizacion particular, la camara comprende ademas al menos un miembro de base que esta hecho al menos sustancialmente de un material aislante e incluye al menos una superficie a la que esta aplicado el electrodo, en donde dicha superficie comprende al menos una superficie conductora disenada para proporcionar una conexion electrica entre el electrodo y al menos un punto de contacto electrico. La superficie conductora puede ser, por ejemplo, al menos un orificio, una caractenstica tridimensional de la superficie o una superficie plana. El orificio puede ser un orificio dispuesto en el miembro de base que esta provisto de un material electricamente conductor, al menos en su superficie interior. El orificio puede estar al menos parcialmente lleno de un material electricamente conductor que proporciona un camino electricamente conductor desde el electrodo a la misma o a otra superficie del miembro de base. La caractenstica tridimensional puede ser seleccionada del grupo que consiste en hoyos, baches, lmeas, rebajos, depresiones, salientes y pozos. La superficie conductora puede estar electricamente acoplada al menos con un punto de contacto electrico por medio de al menos un camino conductor, por ejemplo, una pista de placa de circuito impreso (PCB). El punto de contacto electrico esta hecho de un material conductor de electricidad y esta disenado para ser contactado al menos por un contacto electrico, por ejemplo, un contacto de resorte, que proporciona una conexion electrica directa o indirecta con un suministro de energfa. El uso de dichos miembros de base permite una produccion rentable del dispositivo segun la invencion, ya que los miembros que incluyen electrodos y puntos de contacto correspondientes pueden ser producidos en un proceso de fabricacion de un unico paso que ahorra tiempo. Ademas, en esta realizacion, el diseno del electrodo es independiente de la situacion de los contactos electricos, de manera que el diseno optimizado del electrodo puede ser combinado con una conexion electrica optima. Los medios para hacer contacto con los electrodos pueden ser disenados independientemente del diseno y la posicion del electrodo.

En una realizacion ventajosa de la invencion, el miembro de base puede ser una placa de circuito impreso (PCB) o similar. La PCB puede incluir un termistor interno (resistencia termica) para un mejor control de la temperatura, a fin de permitir un tratamiento mas lento de la suspension para permitir la disipacion del calor.

Por ejemplo, los electrodos pueden estar hechos de un poffmero electricamente conductor, en particular un poffmero dopado con material electricamente conductor. El poffmero puede consistir en o estar al menos basado en policarbonato, polieteretercetona, polipropileno, poliamida, polifenilensulfuro o una mezcla de estos poffmeros. El poffmero puede estar dopado, por ejemplo, con fibras de carbono, grafito, holffn, nanotubos de carbonoy/o un material sintetico intrmsecamente conductor. Alternativamente, puede ser usado como material electrodo un poffmero intrmsecamente conductor, tal como polianilina, poliacetileno, poli-parafenileno, poli-para-fenilensulfuro, polipirrol, politiofeno, polipropileno o similares.

Con el proposito de proporcionar un miembro de base adecuado, el poffmero puede ser moldeado sobre un lado del miembro de base provisto de al menos dos superficies conductoras en uno o mas lados del miembro de base, en donde el poffmero forma un contacto ffsico estrecho al menos parcialmente al menos con una superficie conductora, en donde las superficies conductoras pueden ser planas o la superficie de un hoyo o un orificio a traves del miembro de base y el poffmero se extiende hacia los orificios o a traves de los orificios y se forman electricamente caminos conductores desde los electrodos hasta puntos de contacto que no estan sobremoldeados con el poffmero conductor.

Un aspecto de la invencion es proporcionar un dispositivo para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, organulos y/o vesmulas, que comprende al menos una camara para mantener la suspension, en donde la camara comprende al menos un electrodo, y en donde la camara comprende ademas al menos un miembro de base que esta hecho al menos sustancialmente de un material aislante e incluye una superficie a la que esta aplicado el electrodo, en donde dicha superficie incluye al menos una superficie conductora disenada para proporcionar una conexion electrica entre el electrodo y al menos un punto de contacto electrico. La superficie conductora en la superficie del miembro de base puede ser un hoyo u orificio al menos parcialmente moldeado o relleno con un material electricamente conductor y que proporciona un camino electricamente conductor desde el electrodo hasta el punto de contacto. Con este dispositivo puede ser beneficioso que el electrodo y el material electricamente conductor esten hechos del mismo material. Por ejemplo, los electrodos pueden estar hechos de un poffmero electricamente conductor, en particular un poffmero dopado con material electricamente conductor o un poffmero intrmsecamente conductor como ha sido descrito anteriormente. El poffmero puede ser moldeado sobre un lado del miembro de base y puede formar un contacto ffsico estrecho a una superficie conductora plana, o extenderse a hoyos chapados conductivamente o a traves de orificios chapados conductivamente, para formar caminos electricamente conductores desde el electrodo hasta el punto de contacto. En una realizacion ventajosa de la invencion, el miembro de base puede ser una placa de circuito impreso (PCB) o similar.

El contacto de los electrodos mediante el sobremoldeo de la PCB permite disenar los electrodos independientemente de la situacion de los contactos electricos, de manera que el diseno optimizado del electrodo puede ser combinado con una conexion electrica optima. Es decir, los medios para hacer contacto con los electrodos pueden ser disenados independientemente del diseno y la posicion del electrodo. La PCB puede incluir un termistor interno o cualquier otro componente electrico sensible a la temperatura, para un mejor control de la temperatura, con objeto de permitir una ralentizacion del tratamiento de la suspension que permita la disipacion del calor.

Alternativamente, los electrodos de la camara pueden estar hechos de metal, por ejemplo, aluminio, o de cualquier otro material conductor.

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El dispositivo segun la invencion puede comprender ademas medios para fijar el elemento de separacion fuera de la camara, de manera que la camara escalable pueda ser transformada facilmente en una camara estatica con un volumen fijo. Por ejemplo, la variante estatica del dispositivo puede tener un volumen de tratamiento fijo de aproximadamente 0,5 ml, 1,0 ml, 1,5 ml o 2,0 ml.

Para sellar la camara contra otros componentes del dispositivo segun la invencion, al menos una junta puede estar dispuesta entre el elemento de ajuste y la camara.

La camara puede comprender ademas al menos una capa de sellado que se extiende al menos parcialmente a lo largo de un lado de la camara para sellar este lado contra el medio ambiente. Esta capa de sellado puede estar dispuesta en un lado de la camara en oposicion a la junta mencionada anteriormente, es decir, en el lado de la camara en oposicion al elemento de ajuste. Si la capa de sellado comprende un material elastico y compresible, habilita ademas la compensacion de presion dentro de la camara. La capa de sellado puede estar hecha de espuma de silicona o de un material inerte similar.

Segun otra realizacion ejemplar, el dispositivo segun la invencion puede comprender ademas medios de apilamiento para acoplar este dispositivo a otro dispositivo segun la invencion. Es decir, el rendimiento de un sistema de electroporacion o electrofusion puede ser facilmente mejorado apilando una pluralidad de dispositivos segun la invencion, para aumentar el volumen tratable por unidad de tiempo. Por ejemplo, los dispositivos apilados pueden ser acoplados de manera que una pluralidad de camaras esten conectadas en paralelo. De esta manera, es ventajosamente posible aumentar el volumen total del sistema, por ejemplo, 10 veces.

Otro enfoque para aumentar la capacidad del dispositivo segun la invencion es la disposicion de dos o mas camaras dentro de un dispositivo. En este caso, las camaras pueden estar dispuestas en paralelo o ser concentricas.

Con la version apilable y/o multicamara, el volumen total del sistema puede ser facilmente aumentado hasta 10 ml o incluso 100 ml o mas. Basicamente, el numero de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas a procesar no esta de ninguna manera limitado. Por ejemplo, una ampliacion adecuada permite el tratamiento de 107 a 108, 107 a 109 o 107 a 1010 celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas.

En una realizacion ventajosa de la invencion, el dispositivo esta disenado de manera que tenga una orientacion vertical en el estado funcional. Esta orientacion vertical en combinacion con el puerto o puertos de salida de la camara que estan dispuestos en la parte superior de la camara asegura la eliminacion completa de burbujas.

El objetivo se cumple ademas mediante un metodo para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas, que comprende:

a) Cargar una parte alfcuota de la suspension al menos en una camara de un dispositivo para aplicar un campo electrico a la suspension, dicha camara comprende al menos dos electrodos, en donde un elemento de separacion dispuesto dentro de la camara es movido en una primera direccion;

b) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota por medio de al menos dos electrodos de la camara;

c) Descargar la parte alfcuota de la camara y al mismo tiempo cargar una parte alfcuota adicional de la suspension en la camara, en donde el elemento de separacion es movido en una segunda direccion opuesta a la primera direccion, y en donde el elemento de separacion es un miembro de sellado que asegura una separacion a prueba de lfquidos y/o gases de las partes alfcuotas entre sf;

d) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota adicional por medio de al menos dos electrodos de la camara.

El proceso puede ser terminado en este punto descargando completamente la parte alfcuota adicional de la camara, en donde el elemento de separacion es movido en la primera direccion opuesta a la segunda direccion.

En el ventajoso metodo segun la invencion, la carga y descarga simultaneas de la camara se realizan de manera que se minimiza el tiempo necesario para cambiar la suspension y, por tanto, el retardo de tiempo entre dos tratamientos electricos posteriores de la suspension. Esta minimizacion da lugar a una aceleracion significativa del tiempo de tratamiento para grandes volumenes, es decir, volumenes superiores a 1 ml.

El metodo segun la invencion puede ser continuado para el tratamiento adicional de volumenes mayores por medio de:

e) Descargar la parte alfcuota adicional de la camara y al mismo tiempo cargar una parte alfcuota adicional de la suspension en la camara, en donde el elemento de separacion es movido en la primera direccion opuesta a la segunda direccion, y en donde el elemento de separacion separa las partes alfcuotas una de otra;

f) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota adicional por medio de al menos dos electrodos de la camara;

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g) Opcionalmente, repetir los pasos c) a f) para otras partes alfcuotas de la suspension hasta que sea tratada toda la suspension.

Por consiguiente, debido a la carga y al tratamiento repetitivo de la suspension, el metodo segun la invencion es un proceso escalable. Por ejemplo, si la camara tiene un volumen total de 1 ml, cualquier volumen multiple de este puede ser tratado facilmente de manera expedita.

Por ejemplo, el dispositivo utilizado en dicho metodo puede ser el dispositivo segun la invencion como ha sido descrito anteriormente.

Por ejemplo, el elemento de separacion puede ser movido dentro de la camara al menos parcialmente por medio de un elemento de ajuste que esta acoplado operativamente al elemento de separacion. Si el elemento de ajuste es un cuerpo giratorio, por ejemplo, un elemento similar a un rotor, el elemento de separacion puede ser movido girando el elemento de ajuste. Dicha realizacion asegura un control preciso y un movimiento constante del elemento de separacion, en particular si la camara tiene una forma curva.

La suspension puede ser cargada y descargada de la camara mediante un elemento de bombeo, por ejemplo, una bomba de vacfo o una bomba peristaltica o similar. Con este proposito, el dispositivo segun la invencion puede estar provisto de conectores Luer-slip, o cualquier otro conector que sea conectable y desconectable, que haga que el dispositivo sea compatible con los sistemas de bombeo comunes. La presion de bombeo es soportada por el movimiento del elemento de separacion que limpia las superficies internas de la camara para asegurar el desplazamiento completo de la muestra tratada en la camara. Ademas, la combinacion de bombeo y limpieza da como resultado la eliminacion efectiva de burbujas de aire, residuos celulares y cualquier otra partfcula.

En aplicaciones particulares puede ser necesario o ventajoso proporcionar las celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas a ser tratadas y los sustratos o reactivos en recipientes separados y mezclarlos justo antes del llenado de la camara y del tratamiento posterior.

La invencion se describe adicionalmente de manera ejemplar en detalle haciendo referencia a las Figuras.

La Figura 1 muestra una realizacion ejemplar de un componente individual de un dispositivo segun la invencion que comprende unos medios de ajuste giratorios y un diseno de camara curva.

a) Elemento de separacion en una posicion en un punto terminal inferior.

b) Elemento de separacion en una posicion intermedia.

La Figura 2 muestra una representacion esquematica de diferentes posiciones del elemento de separacion del dispositivo segun la Figura 1.

a) Posicion en un punto terminal inferior

b) Posicion en un punto terminal superior

c) Posicion intermedia

d) Posicion de estacionamiento

La Figura 3 muestra una vista en perspectiva del lado exterior del dispositivo segun la Figura 1.

La Figura 4 muestra diferentes vistas del miembro de base segun la Figura 3.

a) Lado interior del miembro de base con electrodos

b) Lado exterior del miembro de base con superficies conductoras

La Figura 5 muestra detalles de tres realizaciones ejemplares del dispositivo segun las Figuras 3 y 4.

a) Electrodo que se extiende a traves de orificios

b) Electrodo aplicado a una superficie plana

c) Electrodo aplicado a un rebajo

Las Figuras 1a y 1b muestran una realizacion ejemplar de un componente individual de un dispositivo 1 segun la invencion. El dispositivo 1 comprende un miembro de base 2 que tiene un rebajo curvo 3 que esta provisto de cuatro electrodos 4, 5. Tres de estos electrodos son electrodos segmentados 4 mientras que un electrodo es un contraelectrodo 5. El miembro de base 2 representa un componente del dispositivo 1, que es un ensamblaje de dos componentes que estan unidos entre sf, en donde al menos los lados internos de estos componentes son identicos. Es decir, el miembro de base 2 y un segundo miembro de base (miembro de base 30 mostrado en la Figura 3) que

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tienen un lado interno identico estan unidos entre s^ de manera que el rebajo 3 y un rebajo correspondiente del segundo miembro de base forman una camara 6 para mantener una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas. En esta camara 6 se puede aplicar un campo electrico a las celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas, por ejemplo, para transferir moleculas biologicamente activas tales como acidos nucleicos o protemas a las celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas. Con este proposito, los electrodos 4, 5 del miembro de base 2 y los electrodos correspondientes del segundo miembro de base establecen pares de electrodos, en donde los electrodos segmentados 4 del miembro de base 2 y un contraelectrodo dispuesto en oposicion al segundo miembro de base establecen tres pares de electrodos mientras que el contraelectrodo 5 del miembro de base 2 y tres electrodos segmentados dispuestos en oposicion al segundo miembro de base establecen tambien tres pares de electrodos. En esta configuracion, el contraelectrodo 5 del miembro de base 2 y el contraelectrodo del segundo miembro de base son cada uno de ellos electrodos comunes de tres segmentos, de manera que la camara 6 comprende seis segmentos, en donde cada segmento esta provisto de un electrodo segmentado y una superficie de un contraelectrodo comun.

Dos puertos 7, 8 estan dispuestos en un extremo 9 de la camara 6 y dos puertos 10, 11 estan dispuestos en el extremo en oposicion 12 de la camara 6. Un puerto de los puertos superiores 7, 8 puede ser usado como puerto de entrada para cargar la camara 6 y el otro puerto de los puertos 7, 8 puede ser usado como puerto de salida para descargar la camara 6. De manera similar, un puerto de los puertos inferiores 10, 11 puede ser usado como puerto de entrada para cargar la camara 6 y el otro puerto de los puertos 10, 11 puede ser usado como puerto de salida para descargar la camara 6. Por consiguiente, cada extremo 9, 12 tiene dispuestos dos puertos 7, 8, 10, 11 a traves de los que se puede llenar el compartimento respectivo de la camara 6 con la suspension y/o a traves de los que se puede purgar la suspension de este compartimento. Esta configuracion permite la carga y descarga simultaneas de la camara 6, de manera que se minimiza el tiempo necesario para cambiar la suspension y, por tanto, el lapso de tiempo entre dos tratamientos electricos posteriores de la suspension. La disposicion de los puertos 7, 8, 10, 11 en los extremos opuestos 9, 12 de la camara 6 permite establecer facilmente un mecanismo de vaiven donde la suspension puede ser movida entre los dos extremos 9, 12 de la camara 6 para cargar simultaneamente un compartimento por un extremo 9 de la camara 6 y descargar otro compartimento por el extremo en oposicion 12 de la camara 6. Por consiguiente, el dispositivo 1 no es un dispositivo de flujo continuo sino un dispositivo que permite cargar y descargar la camara 6 al mismo tiempo, mediante un mecanismo de vaiven con el que el lfquido sale siempre de la camara por el mismo lado por el que entro.

Para separar la suspension que ya ha sido tratada por el campo electrico de la suspension a ser tratada, hay dispuesto un elemento de separacion 13. El elemento de separacion 13 puede ser movido dentro de la camara 6 entre dos puntos terminales 14, 15 y divide la camara 6 en dos compartimentos si este esta en una posicion entre los dos puntos terminales 14, 15 segun se muestra en las Figuras 1b y 2c. En la realizacion ejemplar representada en las Figuras 1 y 2, el elemento de separacion 13 comprende dos partes 16, 17 que estan separadas entre sf y rodean un espacio interior 18 que comprende un material compresible. Las dos partes separadas 16, 17 son dedos en forma de limpiaparabrisas, por lo que el elemento de separacion 13 es un elemento de sellado que asegura la separacion a prueba de lfquidos y/o gases de los diferentes compartimentos de la camara 6 si este esta en una posicion entre los puntos terminales 14, 15 (Figuras 1b y 2c). Con este proposito, el elemento de separacion 13 puede estar hecho de un material flexible y/o elastico de manera que pueda compensar tambien los picos de presion dentro de la camara 6. El elemento de separacion 13 puede comprender ademas unos labios de sellado para una limpieza optima de la camara 6. El material compresible que llena el espacio interior 18 puede ser aire o cualquier otro gas, o una espuma compresible o material celular, para proporcionar una compensacion de presion efectiva en la camara 6. Por consiguiente, el elemento de separacion 13 actua tambien como un tipo de amortiguador que equilibra las variaciones de presion en la camara 6.

El elemento de separacion 13 esta acoplado a un elemento de ajuste 19 que opera y/o controla al elemento de separacion 13. Es decir, el elemento de separacion 13 puede ser movido dentro de la camara 6 por medio del elemento de ajuste 19. El elemento de ajuste 19 esta dispuesto fuera de la camara 6, de manera que cada compartimento de la camara 6 esta desprovisto de cualquier elemento de interferencia que pueda afectar la funcion del dispositivo 1. El elemento de ajuste 19 comprende un cuerpo giratorio 20 que esta acoplado operativamente a las partes separadas 16, 17 del elemento de separacion 13. En esta realizacion ejemplar, el cuerpo giratorio 20 es un elemento similar a un rotor que mueve al elemento de separacion 13 de manera que puede realizar un movimiento giratorio a lo largo de la doble flecha 21. Esta realizacion asegura un control preciso y un movimiento constante del elemento de separacion 13 dentro de la camara curvada 6. El cuerpo giratorio 20 esta rodeado por una junta 22 que sella el elemento de ajuste 19 contra la camara 6, en donde el cuerpo giratorio 20 esta conectado a la junta 22 por medio de los radios 23 hechos de un material elastico.

El dispositivo 1 comprende ademas una capa de sellado 24 que se extiende a lo largo del lado exterior de la camara 6 en oposicion a la junta 22 descrita anteriormente y sella los compartimentos 26 y 27 de la camara 6 uno contra otro. La capa de sellado 24 esta hecha de un material elastico y compresible, por ejemplo, espuma de silicona o un material inerte similar, de manera que permite la compensacion de presion dentro de la camara.

Ventajosamente, el dispositivo 1 incluye medios para fijar el elemento de separacion 13 fuera de la camara 6, de manera que la camara escalable 6 puede ser facilmente transformada en una camara estatica 6 que tiene un volumen fijo segun se muestra en la Figura 2d. Con este proposito, el elemento de separacion 13 es movido por medio del

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elemento de ajuste 19 a un lugar de estacionamiento 25 donde es fijado, para proporcionar todo el volumen de la camara 6 para el tratamiento de la suspension en un proceso por lotes.

Las Figuras 2a-d muestran diferentes posiciones del elemento de separacion 13 del dispositivo 1 segun la Figura 1. El metodo segun la invencion es un proceso escalable para tratar electricamente una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares. y/o vesfculas. En la Figura 2a, el elemento de separacion 13 esta dispuesto en una posicion en el punto terminal inferior 15. Si el elemento de separacion 13 es girado a una posicion en el punto terminal superior 14 (Figura 2b), una primera parte alfcuota de la suspension es inyectada en uno de los puertos inferiores 10, 11 y, por tanto, es cargada en la camara 6. La primera parte alfcuota es tratada a continuacion en la camara 6 aplicando un campo electrico a las celulas suspendidas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas. Posteriormente, la primera parte alfcuota tratada es descargada a traves de uno de los puertos inferiores 10, 11 girando el elemento de separacion 13 de vuelta a la posicion del punto terminal inferior 15 y, al mismo tiempo, una segunda parte alfcuota de la suspension es inyectada en uno de los puertos superiores 7, 8 y, por tanto, es cargada en la camara 6. La segunda parte alfcuota es tratada a continuacion en la camara 6 aplicando un campo electrico a las celulas suspendidas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas. Posteriormente, la segunda parte alfcuota tratada es descargada a traves de uno de los puertos superiores 7, 8 girando el elemento de separacion 13 de vuelta a la posicion del punto terminal superior 14 y, al mismo tiempo, una tercera parte alfcuota de la suspension es inyectada en uno de los puertos inferiores 10, 11 y, por tanto, es cargada en la camara 6. La tercera parte alfcuota es tratada a continuacion en la camara 6 aplicando un campo electrico a las celulas suspendidas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas. Este mecanismo de vaiven con carga y descarga simultaneas de la suspension puede ser repetido hasta que toda la suspension haya sido tratada.

El elemento de separacion 13 separa la camara 6 en dos compartimentos 26, 27 si este esta en una posicion entre los puntos terminales 14, 15 (Figura 2c), en donde cada compartimento 26, 27 de la camara 6 esta disenado para sostener una suspension y comprende dos puertos 7, 8 y 10, 11 para cargar o descargar la camara 6. Cada compartimento 26, 27 puede recibir y mantener una parte alfcuota de la suspension que es movible dentro y fuera de la camara 6 a traves de los puertos 7, 8 y 10, 11. Los compartimentos 26, 27 tienen dispuestos cada uno un puerto 7, 10 a traves de los que los respectivos compartimentos 26, 27 pueden ser llenados con la suspension y con un puerto 8, 11 a traves del que la suspension de este compartimento 26, 27 puede ser purgada. Cuando se hace girar el elemento de separacion 13, un compartimento 26, 27 de la camara 6 es llenado con una parte alfcuota de la muestra, mientras que otra parte alfcuota de la muestra es descargada e impulsada hacia afuera desde el otro compartimento 26, 27. Se puede conectar un recipiente para la muestra entrante a un puerto de entrada superior y a uno inferior 7, 10 y un puerto de salida superior y uno inferior 8, 11 pueden ser conectados a un deposito para la muestra tratada. Como resultara evidente segun la Figura 2, el dispositivo 1 no funciona en forma de flujo continuo sino en vaiven con el que la muestra inyectada es descargada despues del tratamiento por el mismo lado donde fue cargada. La camara 6 posee seis segmentos de electrodo, uno de los cuales esta siempre cubierto por el elemento de separacion 13 y, por tanto, no es utilizable. Por ejemplo, la camara 6 puede aceptar 1000|jl por ciclo. Por tanto, en este caso, 2000|jl pueden ser procesados en un ciclo completo.

En una realizacion ventajosa de la invencion, el elemento de separacion esta ajustado de manera que cubre exactamente uno o mas electrodos segmentados para que se puedan establecer los mismos parametros electricos dentro de cada otro segmento de electrodo.

La variante estatica del dispositivo 1 no permite que gire el elemento de separacion 13. En lugar de eso, el elemento de separacion 13 esta fijado fuera de la camara 6 en el lugar del estacionamiento 25, sin cubrir ningun segmento de electrodo segun se muestra en la Figura 2d. Con esta variante se pueden usar los seis segmentos de electrodos y, por tanto, se puede procesar una muestra de 1200|jl. Por ejemplo, la muestra puede ser inyectada en un puerto de entrada inferior o superior 7, 10 del dispositivo 1 y puede ser recogida en el puerto de salida inferior 11. El llenado repetitivo no es posible en este estado del dispositivo 1.

La Figura 3 muestra una vista en perspectiva del lado exterior del dispositivo 1 segun la Figura 1. El dispositivo 1 comprende un miembro de base 30, cuyo lado interno (no visible) es identico al lado interno del miembro de base 2 de la Figura 1. El miembro de base 30 representa un componente adicional del dispositivo 1 que es un ensamblaje de dos componentes (los miembros de base 2 y 30) que estan unidos entre sf. En su lado exterior, el miembro de base 30 tiene dispuestos los conectores 31 para conectar conductos a los puertos 7, 8, 10, 11 de la camara 6 segun las Figuras 1 y 2. Uno o mas recipientes para la suspension a ser tratada y uno o mas depositos para la suspension tratada pueden estar conectados a los conectores 31 por medio de conductos adecuados. La suspension puede ser cargada a y descargada de la camara por medio de un elemento de bombeo, por ejemplo, una bomba de vacfo o una bomba peristaltica o similar, que puede estar conectada al circuito de suspension entre el recipiente o los recipientes/deposito o depositos y los conectores 31. Para hacer que el dispositivo 1 sea compatible con conductos y sistemas de bombeo comunes, los conectores 31 pueden ser conectores Luer-slip o Luer-lock.

El elemento de ajuste 19 del dispositivo 1 puede estar conectado a una unidad de energfa (no mostrada), por ejemplo, un motor electrico, por medio de un tornillo sin fin, un engranaje de dientes rectos, un engranaje conico, una barra de engranajes, una transmision por correa y una barra de acero cuadrada, o mecanismos de engranajes similares o elementos de transmision de potencia (no mostrados).

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El miembro de base 30 comprende ademas una multitud de superficies conductoras 32 para proporcionar una conexion electrica a los electrodos dispuestos en la camara. Las superficies conductoras 32 pueden comprender un poKmero electricamente conductor, en particular un polfmero dopado con material electricamente conductor o un polfmero intrmsecamente conductor. Las superficies conductoras 32 han sido disenadas para proporcionar una conexion electrica entre los electrodos y al menos un punto de contacto electrico 33. En esta realizacion, las superficies conductoras 32 son orificios dispuestos en el miembro de base 30 que estan al menos parcialmente llenos del material conductor de electricidad. Las superficies conductoras 32 estan acopladas electricamente al menos a un punto de contacto electrico 33 por medio de al menos un camino conductor (no mostrado). El punto de contacto electrico puede ser contactado al menos por un contacto electrico, para proporcionar una conexion electrica directa o indirecta a una fuente de energfa.

Las Figuras 4a y 4b muestran diferentes vistas del miembro de base 30 segun la Figura 3. La superficie interior 34 del miembro de base 30 esta representada en la Figura 4a. Los electrodos 4, 5 estan aplicados a la superficie interior 34. Tres de estos electrodos 4, 5 son electrodos segmentados 4, mientras que uno de estos electrodos 4, 5 es un contraelectrodo mayor 5. Los electrodos 4, 5 estan aplicados y conectados a superficies conductoras 32 que se extienden desde la superficie interior 34 hasta la superficie exterior 35 del miembro de base 30. Por ejemplo, los electrodos 4, 5 y el material electricamente conductor dentro de la superficie conductora 32 estan hechos del mismo material, por ejemplo, un polfmero electricamente conductor, en particular un polfmero dopado con material electricamente conductor o un polfmero intrmsecamente conductor como ha sido descrito anteriormente. El polfmero puede estar moldeado sobre la superficie interior 34 y la superficie conductora 32 del miembro de base 30 y extenderse a traves de los orificios de la zona conductora 32 segun se muestra en detalle en la Figura 5a. Las superficies conductoras 32 estan acopladas electricamente al menos a un punto de contacto electrico 33 por medio de al menos un camino conductor (no mostrado). El punto de contacto electrico 33 puede ser contactado al menos por un contacto electrico, para proporcionar una conexion electrica directa o indirecta a una fuente de energfa. En una realizacion ventajosa de la invencion, el miembro de base 30 es una placa de circuito impreso (PCB).

Las Figuras 5a-c muestran detalles de tres realizaciones alternativas del dispositivo segun las Figuras 3 y 4. Como se describe con referencia a las Figuras 3 y 4, el miembro de base 30 incluye las superficies conductoras 32 a las que estan unidos los electrodos 4. En la realizacion mostrada en la Figura 5a, que ha sido realizada tambien en el dispositivo mostrado en las Figuras 3 y 4, la superficie conductora 32 comprende los orificios 36 que estan al menos parcialmente llenos de un material electricamente conductor. Si el material conductor sobresale de un orificio 36 y forma una especie de abultamiento 37 en la superficie exterior 35 del miembro de base 30, la estabilidad de la conexion del electrodo 4 al miembro de base 30 aumenta de manera ventajosa. En las realizaciones mostradas en las Figuras 5b y 5c, las superficies conductoras 32 no comprenden orificios que estan llenos de un material conductor, sino una superficie plana (Figura 5b) o un rebajo (Figura 5c) que comprende un material electricamente conductor. De esta manera, los electrodos 4 pueden estar aplicados alternativamente a una superficie plana o a un rebajo del miembro de base 30.

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REIVINDICACIONES

1. Dispositivo (1) para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas, comprendiendo al menos una camara (6) que comprende al menos dos electrodos (4, 5) y al menos un elemento de separacion (13) que es movible dentro de la camara (6) entre dos puntos terminales (14, 15) y que es un miembro de sellado que, si esta en una posicion entre los puntos terminales (14, 15), asegura la separacion a prueba de lfquidos y/o gases de al menos un primer compartimento (26) de la camara (6) de al menos un segundo compartimento (27) de la camara (6), en donde el primer compartimento (26) esta disenado para mantener una parte alfcuota de la suspension y comprende al menos un puerto (7, 8) para cargar o descargar la suspension dentro o fuera del primer compartimento (26), caracterizado por que el elemento de separacion (13) comprende un material flexible y/o elastico y el segundo compartimento (27) esta disenado para mantener otra parte alfcuota de la suspension y comprende al menos un puerto (10, 11) para cargar o descargar la suspension dentro o fuera del segundo compartimento (27).
2. Dispositivo segun la reivindicacion 1, en donde al menos un puerto (7, 8) esta dispuesto en un extremo (9) de la camara (6) y al menos un puerto adicional (10, 11) esta dispuesto en el extremo en oposicion (12) de la camara (6).
3. Dispositivo segun la reivindicacion 1 o 2, en donde el elemento de separacion (13) esta acoplado al menos a un elemento de ajuste (19) que esta dispuesto fuera de la camara (6).
4. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el elemento de separacion (13) comprende al menos dos partes separadas (16, 17), en donde el espacio interior (18) entre las partes separadas (16, 17) del elemento de separacion (13) comprende un material compresible.
5. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la camara (6) comprende al menos dos segmentos, en donde cada segmento comprende al menos un electrodo (4, 5).
6. Dispositivo segun la reivindicacion 5, en donde cada segmento esta provisto de al menos un primer electrodo (4) y al menos un segundo electrodo (5), en donde el segundo electrodo (5) es un electrodo comun que tiene dos segmentos al menos.
7. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la camara (6) comprende rebajos correspondientes (3) de dos componentes que estan unidos entre sf.
8. Dispositivo segun la reivindicacion 7, en donde cada rebajo (3) tiene dispuesto al menos un electrodo (4, 5).
9. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde la camara (6) comprende ademas al menos un miembro de base (2, 30) que esta hecho sustancialmente al menos de un material aislante e incluye al menos una superficie a la que el electrodo (4, 5) esta aplicado, en donde dicha superficie comprende al menos una superficie conductora (32) disenada para proporcionar una conexion electrica entre el electrodo (4, 5) y al menos un punto de contacto electrico (33).
10. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, en donde al menos una junta (22) esta dispuesta entre el elemento de ajuste (19) y la camara (6).
11. Dispositivo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la camara (6) comprende al menos una capa de sellado (24) que se extiende al menos parcialmente a lo largo de un lado de la camara (6), en donde la capa de sellado (24) comprende un material compresible.
12. Metodo para aplicar un campo electrico a una suspension de celulas, derivados celulares, organulos, partfculas subcelulares y/o vesfculas, comprendiendo:

a) Cargar una parte alfcuota de la suspension en al menos una camara de un dispositivo para aplicar un campo electrico a la suspension, comprendiendo dicha camara al menos dos electrodos, en donde un elemento de separacion dispuesto dentro de la camara es movido en una primera direccion;

b) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota por medio de al menos dos electrodos de la camara;

c) Descargar la parte alfcuota de la camara y al mismo tiempo cargar una parte alfcuota adicional de la suspension en la camara, en donde el elemento de separacion es movido en una segunda direccion opuesta a la primera direccion, y en donde el elemento de separacion comprende un material flexible y/o elastico y es un elemento de sellado que asegura una separacion a prueba de lfquidos y/o gases de las partes alfcuotas entre sf;

d) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota adicional por medio de los al menos dos electrodos de la camara.
13. Metodo segun la reivindicacion 12, comprendiendo ademas:

e) Descargar la parte alfcuota adicional de la camara y al mismo tiempo cargar una parte alfcuota adicional de la suspension en la camara, en donde el elemento de separacion es movido en la primera direccion opuesta a la segunda direccion, y en donde el elemento de separacion separa las partes alreuotas una de otra;

f) Aplicar un impulso de voltaje a la parte alfcuota adicional por medio de al menos dos electrodos de la camara;

5 g) Opcionalmente, se repiten los pasos c) a f) para otras partes alfcuotas de la suspension hasta que toda la suspension ha sido tratada.
14. Metodo segun la reivindicacion 12 o 13, en donde el elemento de separacion es movido girando un elemento de ajuste que esta acoplado operativamente al elemento de separacion.