ES2674393T3 - Método para el diagnóstico serológico de la artritis reumatoide - Google Patents

Abstract

Anticuerpo que comprende un residuo de citrulina, en donde el anticuerpo se dirige contra un componente de la superficie celular externa de un glóbulo rojo.

Description

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En una realización preferida de este método, el anticuerpo citrulinado se inmoviliza sobre un soporte sólido. Existen numerosos métodos para realizar este método, y el experto conoce bien los diversos soportes sólidos, que tienen todos sus ventajas y desventajas específicas. El soporte sólido se puede elegir ventajosamente del grupo que consiste en vidrio, nitrocelulosa, poliestireno, papel o cualquier otro tipo de soporte disponible comercialmente. En una realización particularmente preferida, el soporte sólido es poliestireno, tal como, por ejemplo, una placa de ELISA. En una realización preferida adicional, la invención se refiere a un método realizado en un formato de ensayo de ELISA.

El descubrimiento de que los pacientes con RA producían anticuerpos contra anticuerpos citrulinados (ACA) permitió preparar a los presentes inventores formatos de ensayo que tienen ventajas específicas sobre los ensayos descritos en la técnica anterior.

En un método según una realización preferida de la invención, un anticuerpo citrulinado se liga a un glóbulo rojo. Eso se puede hacer al incubar glóbulos rojos con anticuerpos citrulinados con especificidad aleatoria, tales como anticuerpos de IgG o anticuerpos de cualquier otro isotipo. También se puede hacer de un modo específico, a saber al usar anticuerpos citrulinados que son específicamente reactivos con un componente de la superficie celular externa de un glóbulo rojo.

Por ejemplo, se prepararon anticuerpos citrulinados que se dirigían contra glicoforina A, un componente de la superficie celular externa de un glóbulo rojo. El Ejemplo 1 muestra los detalles exactos de los anticuerpos y su citrulinación usando PAD.

El término "un componente de la superficie celular externa de un glóbulo rojo" se usa en la presente para indicar un determinante antigénico expresado en el exterior de un glóbulo rojo. Actualmente, existen más de 300 determinantes antigénicos de la superficie de glóbulos rojos reconocidos por the International society of Blood transfusion. La mayoría de estos pertenecen a 1 de 29 sistemas de grupos sanguíneos (Daniels, G., ISBT Science Series, 1: 3 -8 (2006). El sistema antigénico MNS es un sistema de grupo sanguíneo humano basado en dos genes (glicoforina A y glicoforina B) en el cromosoma 4.

Componentes de la superficie celular externa alternativos y/o preferidos se listan en la tabla 1 de Daniels (anteriormente) e incluyen transportador de urea (UT)-B, acuaporina 1, acuaporina 3, CD233, CD241, CD240D, CD240CE, proteína Xk, CD234, CD329, CD242, ERMAP, CD147, CD47, CD55, CD59, CD35, CD44, CD99, CD108, CD151, acetilcolesterinasa, CD238, CD297, CD236C, CD236D, CD235A y CD235B.

Las glicoforinas A (GYPA) y B (GYPB) se prefieren allí y son importantes sialoglicoproteínas de la membrana de eritrocitos humanos que soportan los determinantes antigénicos para los grupos sanguíneos M, N y Ss. Además de los antígenos M o N y S o s, que se presentan comúnmente en todas las poblaciones, se han identificado aproximadamente 40 fenotipos de variantes relacionadas. Estas variantes incluyen todas las variantes del complejo de Miltenberger y varias isoformas de Sta; además, Dantu, Sat, He, Mg y la variantes de eliminación Ena, S-s-U-y Mk. La mayoría de las variantes son el resultado de recombinaciones génicas entre GYPA y GYPB.[http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene?Db=gene&Cmd=ShowDetailView&TermToSearch=299 3]

Están disponibles comercialmente anticuerpos con glicoforina A humana, por ejemplo de BioLegend (http://www.biolegend.com/pacific-blue-anti-human-cd235a-glycophorin-a-antibody-7880.html), de Abcam, Cambridge, Reino Unido, o de Antibodies Online, ABIN337240, un anticuerpo de IgG policlonal de conejo, dirigido contra la parte N-terminal de GlycA. También se han descritos nanocuerpos específicos para glicoforina A (30).

Los anticuerpos de glicoforina A citrulinados obtenidos según el procedimiento esbozado en el ejemplo 1 permitieron a los presentes inventores determinar la presencia de anticuerpos contra antígenos citrulinados (ACA) en muestras obtenidas de pacientes con RA usando un formato de ensayo de hemaglutinación (ejemplo 4).

En una de sus realizaciones, la invención se refiere por lo tanto a un método como el descrito anteriormente en el que la detección se produce en un ensayo de hemaglutinación.

Con más detalle, la invención se refiere a un método como el descrito anteriormente que comprende las etapas de: a) proporcionar un anticuerpo citrulinado, b) proporcionar una muestra que comprende anticuerpos procedentes de un sujeto, c) proporcionar glóbulos rojos, d) poner en contacto el anticuerpo citrulinado con la muestra y los glóbulos rojos y e) detectar si se produce la aglutinación de los glóbulos rojos, en donde la aglutinación indica la presencia de anti-anticuerpos citrulinados específicos para la artritis reumatoide en la muestra.

La etapa d) del método anterior no se debe considerar tan estrictamente que el contacto del anticuerpo citrulinado con la muestra y los glóbulos rojos se deba realizar necesariamente al mismo tiempo. El método funciona bien si el anticuerpo citrulinado se pone en contacto con los glóbulo rojos en primer lugar y solo posteriormente con la muestra que contiene los anticuerpos contra el anticuerpo citrulinado (ACA). Sin embargo, desde una perspectiva de eficacia de uso, se prefiere que el contacto tenga lugar simultáneamente o aproximadamente al mismo tiempo.

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Claims (1)

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