ES2641367T3 - Un método in vitro para el diagnóstico de endometriosis - Google Patents
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Abstract
Un método in vitro para el diagnóstico de endometriosis en un sujeto, que comprende las siguientes etapas: a) determinar 5 la concentración de la SEQ ID NO: 6, (Zn-alfa-2-glicoproteína (ZAG)) o mutantes y/o variantes postraducción de la misma, en una muestra biológica de dicho sujeto y en una muestra de control; b) comparar dicha concentración en dicha muestra biológica y dicha muestra de control en el que un aumento de la concentración de dicha SEQ ID NO 6 con respecto a la misma proteína en dicho control es indicativo de endometriosis.
Description
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La determinación de la concentración de proteína a los extremos de la monitorización debe realizarse en una primera muestra biológica y en al menos una segunda muestra biológica de un sujeto, obtenida respectivamente en un tiempo t=0 y t>0. El sujeto bajo examen puede ser, en particular, tanto un sujeto sometido a terapia contra la endometriosis como un sujeto monitoreado a tiempo sin necesariamente someterse a ningún tipo de terapia. En otros términos, por lo tanto, la primera muestra biológica obtenida en el momento t=0 puede ser una muestra adquirida, en un sujeto sometido a terapia contra la endometriosis, por ejemplo, antes del inicio de la terapia en sí, y en su lugar un sujeto no sometido a terapia, adquirido en un tiempo genérico t=0a. De lo contrario, la segunda muestra biológica puede adquirirse en uno o más intervalos de tiempo a partir de dicho tiempo t=0, por lo tanto definida como tiempos t>0, por ejemplo, cada 15, 20, 30 días. Preferiblemente, la primera y segunda muestra se obtienen respectivamente antes del inicio de una terapia contra la endometriosis y durante y/o después de dicha terapia. A continuación, una comparación entre la concentración obtenida en dicha primera y dicha al menos segunda muestra para una misma proteína, entre las indicadas aquí, proporcionará información sobre el curso del estado patológico del paciente.
La variación de la concentración de al menos una de las proteínas que comprende o que consiste en las SEQ ID NO 1-6 entre las dos muestras analizadas es, por lo tanto, el instrumento que permite al clínico una evaluación de la efectividad o ineficacia de la estrategia terapéutica seleccionada. En particular, una disminución de la concentración de dicha al menos una proteína que comprende o que consiste en las SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 4 o SEQ ID NO 5 y/o un aumento de la concentración de dicha proteína que comprende o consiste en las SEQ ID NO 2, SEC ID NO 3
o SEQ ID NO 6 en dicha primera muestra con respecto a dicho al menos al segundo, es indicativo de una progresión de la endometriosis, en otros términos, por lo tanto, de una terapia escasamente eficaz. Viceversa, un aumento de la concentración de dicha al menos una proteína que comprende o que consiste en las SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 4 o SEQ ID NO 5 y/o una disminución de la concentración de dicha proteína que comprende o consiste en las SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 o SEQ ID NO 6 en dicha primera muestra con respecto a dicho al menos segundo, es indicativo de la efectividad de la terapia contra la endometriosis. Alternativamente, una no variación de la concentración de las proteínas anteriores en dichas muestras puede indicar una desaceleración y/o detención de la progresión de la endometriosis en el paciente.
Como ya se ha resaltado, el tipo de terapia a monitorizar es una terapia genérica contra la endometriosis. En particular, la terapia también puede ser un tratamiento detipo quirúrgico.
Un objeto de la presente descripción es también el uso de un kit para el diagnóstico de la endometriosis y/o la monitorización de la endometriosis en un sujeto. Preferiblemente, el kit puede ser un kit para la monitorización de una terapia contra la endometriosis. En particular, dicho kit comprende al menos una alícuota de uno o más reactivos necesarios para la determinación de la concentración de al menos una proteína que comprende o que consiste en una secuencia seleccionada del grupo de: SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5 y SEQ ID NO 6, o mutantes y/o variantes postraducción de los mismos, en una muestra biológica de dicho sujeto. En una realización preferida de la presente invención, dichos uno o más reactivos son necesarios para la determinación de la concentración de una proteína que comprende o que consiste en la SEQ ID NO: 6.
Preferiblemente, el kit de acuerdo con la invención podría contener una o más alícuotas de al menos un anticuerpo específico monoclonal o policlonal primario contra una de las secuencias definidas en las SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5 o SEQ ID NO. 6. El kit también podría contener una o más alícuotas de un anticuerpo secundario marcado o no marcado, siendo dicho anticuerpo secundario, por supuesto, específico para el sistema inmune del que se hizo el anticuerpo primario. Por lo tanto, si el anticuerpo primario se hace en ratón, el secundario será anti-ratón, si se hace en ratón será anti-conejo, etc.
El kit podría además contener controles negativos y/o controles positivos. En particular, el kit puede contener como control positivo una o más alícuotas que comprenden una o más secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo de: SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5 y SEQ ID NO 6.
Además, el kit puede comprender reactivos ymedios adecuados para el procedimiento de detección de las proteínas anteriores mediante el uso de anticuerpos, tales como el regulador PBS u otros reactivos comúnmente utilizados para la detección de anticuerpos.
Los siguientes ejemplos y resultados experimentales tienen el propósito de indicar modos de realización de la presente descripción, sin ser sin embargo limitativos de lamisma.
Ejemplos
Ejemplo 1: Recolección y almacenamiento dematerial biológico
Diez muestras de plasma, respectivamente de 5 pacientes con endometriosis determinada, después de la recolección de suero con cirugía y examen histológico, y de 5 pacientes sanos de control, se recolectaron y se almacenaron a una temperatura de -80 ºC. En detalle, las recolecciones de sangre realizadas por punción de las
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