ES2641017T3 - Polimixinas, composiciones, métodos de fabricación y métodos de uso - Google Patents

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ES2641017T3
ES2641017T3 ES14704292.3T ES14704292T ES2641017T3 ES 2641017 T3 ES2641017 T3 ES 2641017T3 ES 14704292 T ES14704292 T ES 14704292T ES 2641017 T3 ES2641017 T3 ES 2641017T3
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polymyxin
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Sølvi GUNNES
Vidar BJØRNSTAD
Torben Koch
Claes MELANDER
Martin MÅNSSON
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Xellia Pharmaceuticals ApS
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • C07K7/60—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation occurring through the 4-amino group of 2,4-diamino-butanoic acid
    • C07K7/62—Polymyxins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Abstract

Una composición que comprende una polimixina o una sal de la misma representada por la fórmula (I) **(Ver fórmula)** en la que R1 es un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifático, o R5 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, o -CH2C6H5; R6 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, o -CH(CH3)CH2CH3; R2, R3, R4, R7 y R8 es (CH2)xCH2N(CH2SO3M)2; en la que x es 0 o 1; y en la que M es un catión monovalente.

Description

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DESCRIPCION
Polimixinas, composiciones, metodos de fabricacion y metodos de uso Campo de la invencion
Se describe en este documento una composition que comprende al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I).
Antecedentes
Las polimixinas se descubrieron en 1947 como antibioticos producidos por Bacillus polymyxa. Las polimixinas son decapeptidos antibioticos que contienen un anillo heptapeptldico y un acido graso acoplado a amida N-terminal. Hoy, dos mezclas comerciales de polimixina estan en uso cllnico; polimixina B y polimixina E (colistina). Ambas mezclas comprenden una variedad de componentes como se describe por Goevaerts et al 2002 and Van den Bossche et al 2011. De acuerdo con la farmacopea EP, la colistina deberla comprender mas del 77% de la polimixina E1, E2, E3, E1-i y E1-7MOA, pero menos del 10% de cada uno de los componentes menores polimixina e3, E1-i y E1-MOA.
Debido a la toxicidad asociada con la colistina, la mezcla se mejoro por sulfometilacion en los anos cincuenta. La colistina sulfometilada se llama colistimetato de sodio (CMS), que se considera un profarmaco de colistina. El CMS esta todavla en uso cllnico como una option de tratamiento de ultima llnea para organismos resistentes a multifarmacos como Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumonia y otros patogenos Gramnegativos. Durante muchos anos, las soluciones de CMS tambien se han administrado por nebulizacion en los pulmones de pacientes con fibrosis qulstica (FC) para controlar la colonization o las infecciones causadas por P. aeruginosa.
El hecho de que los productos CMS comerciales contengan una mezcla compleja de derivados de diferentes polimixinas tiene varias consecuencias. El primero de ellos se refiere al valor terapeutico de cualquier producto comercializado. Puesto que la CMS se puede considerar un deposito de colistina una vez inyectado o inhalado en el cuerpo, es importante que una cantidad apropiada de CMS se transforme en colistina antes de que se excrete. Si no, el nivel serico de colistina puede no alcanzar un nivel suficientemente alto para matar o prevenir el crecimiento de la bacteria patogena a la que se dirige. De este modo, al ser capaces de fabricar un CMS con una cantidad controlada de sustituyentes, ya sea en mezcla o como mono componente, aumentan el potencial terapeutico mediante la prevention de la baja o la sobre dosificacion. Tambien puede aumentar las caracterlsticas de profarmaco de la molecula afectando la velocidad de hidrolisis del CMS (la tasa de conversion in vivo de CMS a colistina).
CA 56: 37780 describe metasulfonato de colistina, FR-A-1586834 (Alphachimie) describe polimixinas metasulfonadas, pero no se derivan en su totalidad,
Resumen
Una composicion que comprende al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I)
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en la que
R1 es un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico, o
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R5 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, o -CH2C6H5;
R6 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, o -CH(CH3)CH2CH3; cada uno de R2, R3, R4, R7 y R8 es (CH2)xCH2N(CH2SO3M)2; en la que x es 0 o 1;
en la que M es un cation monovalente; y
en la que R2, R3, R4, R7 y R8 son -(CH2)xCH2N(CH2SO3M)2.
Description detallada
Breve descripcion de las figuras
Figura 1. Estructura de PE1-(SM)io1,35,8,9.
Figura 2. Estructura de PE1-(SM)81,5,8,9.
Figura 3. Estructura de PE1-(SM)61,5,9.
Figura 4. Una estructura qulmica general de algunas polimixinas sulfometiladas como se describe en este documento (vease la tabla 1).
Figura 5. Estructura de una polimixina decasulfometilada que contiene un residuo DAP en la position 3.
Figura 6. Cromatogramas UHPLC de PE1-(SM)1o1,35,8,9 (Figura 1, parte superior) y patron de trabajo de CMS (parte inferior).
Figura 7. Estructura de PE2-(SM)1o1,35,8,9.
Figura 8. Estructura de PE1-/-(SM)101,35,8,9.
Figura 9. Estructura de los componentes de polimixina en la composition de PE-(MS)101,35,8,9 descrita en el ejemplo
4.
Figura 10. Estructura de los componentes de polimixina en la composicion de PB-(MS)101,35,8,9 descrita en el ejemplo
5.
Figura 11. Porcentaje de citolisis de celulas HK-2 en presencia de colistina (Sigma, C4461)
Figura 12. Porcentaje de citolisis de celulas HK-2 en presencia de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E1
Figura 13. Porcentaje de citolisis de celulas HK-2 en presencia de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E2
Figura 14. Porcentaje de citolisis de celulas HK-2 en presencia de penta (NY-bis-sulfometil)DAB1,35,8,9 polimixina E1-i
Figura 15. Porcentaje de citolisis de celulas HK-2 en presencia de penta (NY-bis-sulfometil)DAB1,35,8,9 polimixina B
Definiciones
La frase "un" o "una" entidad como se usa en este documento se refiere a una o mas de esa entidad; por ejemplo, un compuesto se refiere a uno o mas compuestos o al menos un compuesto.
Como tal, los terminos "un" (o "una"), "uno o mas", y "al menos uno" se pueden usar indistintamente en este documento.
Los terminos "opcional" o "opcionalmente" como se usa en este documento significan que un suceso o circunstancia descrito posteriormente puede, pero no necesita ocurrir, y que la descripcion incluya casos en los que ocurre el suceso o circunstancia y casos en los que no ocurre. Por ejemplo, "enlace opcional" significa que el enlace puede o no estar presente, y que la descripcion incluye enlaces simples, dobles o triples.
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El termino "estereoisomero" tiene su significado sencillo y ordinario.
La polimixina o sal de la misma representada por la formula (I) contiene una serie de estereocentros basados en carbono que pueden tener designaciones estereoqulmicas de residuos de aminoacidos naturales (L-) y no naturales (D-). Se entendera que las unidades estructurales -CH(CH3)CH2CH3 y -CH(OH)CH3 contienen estereocentros basados en carbono que tienen la misma estereoqulmica que los radicales encontrados en L-isoleucina y L-treonina.
La expresion "un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico", como se describe en este documento, se refiere a un sustituyente que contiene una unidad estructural carbonilo y una unidad estructural no carbonilo e incluye los grupos acilo encontrados en compuestos de polimixina conocidos, los cuales incluyen, pero no se limitan a heptanollo, metilheptanollo (incluyendo (S)-6-metilheptanollo), octanollo, metiloctanollo (incluyendo (S)-6- metiloctanollo, (S)-7-metiloctanollo), nonanollo, metilnonanollo (incluyendo (S)-6-metilnonanollo, (S)-7- metilnonanollo, y (S)-8-metilnonanollo) y decanollo.
El termino "sales" o "sal del mismo" como se describe en este documento, se refiere a un compuesto que comprende un cation y un anion, que se puede preparar mediante cualquier procedimiento conocido para un experto en el arte, por ejemplo, por la protonacion de una unidad estructural de aceptacion de protones y/o desprotonacion de una unidad estructural de donacion de protones. Alternativamente, la sal se puede preparar mediante ya sea una metatesis de cation/anion o una reaccion de intercambio cation/anion.
El termino "M es un cation monovalente" como se describe en este documento, se refiere a una especie cationica que contiene una unica carga positiva, ejemplos de los cuales incluyen, pero no se limitan a Li+, Na+, K+, HmN(alquilo C1-4)n+, donde m es 0-4 y n es 0-4 con la condicion de que m+n=4.
El termino "alquilo C1-4" como se describe en este documento, se refiere a un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 atomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo C1-4 incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, i-propilo y n-butilo.
El termino "DAB" como se describe en este documento, se refiere al radical derivado del acido 2,4-diaminobutanoico, en el que el atomo de carbono adyacente al carbono carbonilo (esto es, el a-carbono) tiene una estereoqulmica designada como la configuracion L. L-DAB se denomina alternativamente en la bibliografla como L-DBU.
El termino "residuo de DAB" como se describe en este documento, se refiere a un compuesto de 2,4-diaminobutirato acoplado con amida a al menos un aminoacido. Las polimixinas de origen natural comprenden habitualmente 6 residuos DAB de los cuales 5 tienen un grupo g-amino libre.
El termino "sulfometilo" como se describe en este documento se refiere a la unidad estructural -CH2SO3M, en la que M es como se definio anteriormente. La unidad estructural sulfonato (-SO3) puede estar en forma acida, pero en un entorno fisiologico (in vivo) tendra una carga negativa y tendra un cation asociado, tal como M.
El termino "DAP" como se describe en este documento se refiere al compuesto 2,3-diaminopropionato.
El termino “residuo de DAP” como se describe en este documento se refiere a un compuesto de 2,3- diaminopropionato acoplado a amida a al menos un aminoacido.
El termino "FA" como se describe en este documento es una abreviatura de la expresion "acilo graso", y esta cubierto por la expresion "un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico", en relacion con al menos una polimixina o sal de la misma representada por la formula (I).
El termino "en una cantidad de al menos X% por UHPLC" como se describe en este documento se debe entender como el area integrada relativa del o de los picos correspondientes en el cromatograma resultante de un metodo UHPLC como se describe en la parte de materiales y metodos de esta solicitud.
El termino "pureza de mas de Y% basado en el cromatograma de UHPLC" se debe entender como el area integrada relativa de(los) pico(s) correspondiente(s) en el cromatograma resultante de un metodo de UHPLC como se describe en la parte de materiales y metodos de esta solicitud.
Una primera realizacion se dirige a una composicion que comprende al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I)
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en la que
R1 es un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico, o
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R5 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, o -CH2C6H5;
R6 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, o -CH(CH3)CH2CH3; cada uno de R2, R3, R4, R7 y R8 es (CH2)xCH2N(CH2SO3M)2; en la que x es 0 o 1;
en la que M es un cation monovalente; y
en la que al menos tres de R2, R3, R4, R7 y R8 son -(CH2)xCH2N(CH2SO3M)2.
Todos los aspectos tecnicos siguientes no cubiertos por las reivindicaciones deben ser entendidos como solo ilustrativos.
En un primer aspecto de la primera realizacion, R1 es heptanollo, metilheptanollo, octanollo, metiloctanollo, nonanollo, metilnonanollo o decilo.
En un segundo aspecto de la primera realizacion, R1 es heptanollo, (S)-6-metilheptanollo, octanollo, (S)-6- metiloctanollo, (S)-7-metiloctanollo, nonanollo, (S)-6-metilnonanollo, (S)-7-metilnonanollo, (S)-8-metilnonanollo o decanollo.
En un tercer aspecto de la primera realizacion, las composiciones descritas anteriormente se caracterizan porque M se selecciona del grupo que consiste en Na+, K+, HmN(alquilo Ci_4)n+, o combinaciones de los mismos, donde m es 04 y n es 0-4 con la condicion de que m+n=4.
En un cuarto aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+.
En un quinto aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+ y tres de R2, R3, R4, R7 y R8 son -
CH2CH2N(CH2SO3M)2.
En un sexto aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+ y cada uno de R2, R4 y R8 es - CH2CH2N(CH2SO3M)2.
En un septimo aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+ y cuatro de R2, R3, R4, R7 y R8 son -
CH2CH2N(CH2SO3M)2.
En un octavo aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+ y cada uno de R2, R4, R7 y R8 es -
CH2CH2N(CH2SO3M)2.
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En un noveno aspecto de la primera realizacion, x es 1 y M es H+, Na+ o K+ y cada uno de R2, R3, R4, R7 y R8 es -
CH2CH2N(CH2SO3M)2;
En un decimo aspecto de la primera realizacion, las composiciones descritas por uno cualquiera de los 2° a 9° aspectos de la primera realizacion se caracterizan porque la al menos una polimixina o sal de la misma esta

presente en una cantidad de al menos 10% por UHPLC, al menos 20% por UHPLC, al menos 30% por UHPLC, al

menos 40% por UHPLC, al menos 50% por UHPLC, al menos 60% por UHPLC, al menos 70% por UHPLC, al

menos 80% por UHPLC, al menos 90% por UHPLC, al menos 95% por UHPLC, al menos 97% por UHPLC, al
menos 98% por UHPLC, o al menos 99% por UHPLC.
En un 11° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende mas de 5 grupos sulfometilo.
En un 12° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 6-10 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino de los residuos de DAB.

En un 13° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la
formula (I) comprende 6, 8 o 10 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en los residuos de DAB.

En un 14° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la
formula (I) comprende 10 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en los residuos de DAB.

En un 15° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la
formula (I) comprende 8 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en los residuos de DAB.
En un 16° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 6 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en los residuos de DAB.
En un 17° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a cada uno de los cinco grupos g-amino en los residuos de DAB en la polimixina. Tales polimixinas son decasulfometiladas.
En un 18° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a cuatro de los grupos g-amino en los residuos de DAB en polimixina. Tales polimixinas son octasulfometiladas.
En un 19° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a tres de los grupos g-amino en los residuos de DAB en polimixina. Tales polimixinas son hexasulfometiladas.
En un 20° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 3, 5, 8 y 9, usando el sistema de numeracion de polimixina convencional (Figura 4.). Dicho compuesto de polimixina se designa en este documento como penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35, ,9 polimixina. La estructura para polimixina E1 decasulfometilada se muestra en la figura 1 y se da el nombre abreviado PE1-(SM)i01,35,8,9.
En un 21° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 5, 8 y 9, usando el sistema de numeracion de polimixina convencional (Figura 4). Un ejemplo de dicho compuesto de polimixina se designa en este documento como tetra (Ng-bissulfometil) DAB1,5, ,9 polimixina E1. Un ejemplo de dicho compuesto se muestra en la figura 2. El nombre abreviado para este compuesto es PE1-(SM)a1,5,8,9.
Otros ejemplos de polimixinas octasulfometiladas son tetra (Ng-bis-sulfometil) DAB1, . , polimixina E1, tetra (Ng-bis- sulfometil) DAB1,3,8,9 polimixina E1, tetra (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,9 polimixina E1, tetra (Ng-bissulfometil) DAB35,8,9
polimixina E1.
En un 22° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 5, y 9. Un ejemplo de dicha polimixina se designa en este documento como tri (Ng-bis-sulfometil) DAB1,5,9 polimixina E1, cuya estructura se muestra en la figura 3. Un nombre abreviado para este compuesto es PE1-(SM)61,5,9. Otros ejemplos de polimixinas hexasulfometiladas se muestran en la tabla 1.
Tabla 1: Ejemplos de polimixinas que son penta, treta y tri Ng-bis-sulfometiladas
Posicion DAB
l
3 5 S 9
-t—' <x> E £ tn i LO jD jJ 5
Renta X X X X X
Tetra (5 Diferentes)
X X X X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
villi _______
X
X
X
X X X X
Tri (10 Diferentes)
X X X ... ...< , ... .
X
X
X
X
X
X
!-££5i '-“S
X X X
X X X
fadl i
X ■ X X
X
X
X
X
x X
■ ^ ""
X X i m X
X
■ ' ' X X
Cada x representa una g-amina de DAB bis-sulfometilada.
En un 23° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 3, 5, 8 y 9 en 5 polimixina E.
En un 24° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 5, 8 y 9 en polimixina E.
En un 25° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la 10 formula (I) comprende 2 grupos sulfometilo unidos a los grupos g-amino en los residuos de DAB 1, 5, y 9 en polimixina E.
En un 26° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) es polimixina E o una sal de la misma.
En un 27° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la 15 formula (I) es polimixina B o una sal de la misma.
En un 28° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 10% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 29° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 20% en base al cromatograma de UHPLC.
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En un 30° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 30% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 31° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 40% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 32° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 50% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 33° aspecto de aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 60% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 34° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 70% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 35° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 80% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 36° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 90% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 37° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) tiene una pureza de mas de 95% en base al cromatograma de UHPLC.
En un 38° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende al menos 10% p/p de al menos una polimixina o sal de la misma que comprende 6-10 grupos sulfometilo.
En un 39° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende al menos 20% p/p de la al menos una polimixina o sal de la misma que comprende 6-10 grupos sulfometilo.
En un 40° aspecto de la primera realizacion, la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) comprende al menos 30% p/p de la al menos una polimixina o una sal de la misma que comprende 6-10 grupos sulfometilo.
En un 41° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 42° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 43° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 44° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 45° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 46° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 47° aspecto de la primera formula (I) comprende al menos grupos sulfometilo.
En un 48° aspecto de la primera realizacion la al menos una polimixina o sal de la misma representada por la formula (I) comprende una cualquiera de (A) a (J), en la que
(A) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CHa)2;
realizacion, la al menos una polimixina o 40% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 50% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 60% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 70% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 80% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 90% p/p de la al menos una polimixina
realizacion, la al menos una polimixina o 95% p/p de la al menos una polimixina
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
una sal de la misma representada por la o sal de la misma que comprende 6-10
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(B) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R3 es -CH2CH2NH2; y cada uno
de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(C) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; cada uno de R3 y R7 es - CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(D) R1 es
cada uno de R2 CH2CH(CH3)2;
R4
R7
y R8 es
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- CH2CH2N(CH2SO3M)2; R3 es -CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y
R6 es -
(E) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(F) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(G)
(1) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(2) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(3) R1 es octanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(4) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6
es - CH2CH(CH3)2; y
(5) R1 es 7-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(H)
(I) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(2) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(I) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R3 es -CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2; y
(J) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; cada uno de R3 y R7 es -CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2.
En un 49° aspecto de la primera realization, la al menos una polimixina o sal de la misma representada por la formula (I) comprende una cualquiera de (A) a (J), en la que
(A) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(B) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R3 es -CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es -CH2CH(CH3)2;
(C) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; cada uno de R3 y R7 es -
CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es -CH2CH(CH3)2;
(D) R1 es
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cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -ChhCl-hlSKCl-bSOaNak;
R3 es -CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
(E) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(F) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2;
R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
(G)
(1) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(2) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(3) R1 es octanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(4) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6 es -CH2CH(CH3)2; y
(5) R1 es 7-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(H)
(1) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
CH2CH(CH3)2;
(2) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es - CH2CH(CH3)2;
(I) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2;
R3 es -CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es -CH2CH(CH3)2; y
(J) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R4, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; cada uno de R3 y R7 es -CH2CH2NH2; y cada uno de R5 y R6 es -CH2CH(CH3)2.
En un 50° aspecto de la primera realizacion la al menos una polimixina esta representada por la estructura como se muestran en la figura 1, figura 2, figura 3, figura 5, figura 7 o figura 8.
En un 51° aspecto de la primera realizacion, la composition comprende polimixinas representadas por las estructuras como se muestran en la figura 9 o figura 10.
Las polimixinas son decapeptidos antibioticos que contienen un anillo heptapeptldico y un acido graso acoplado a amida N-terminal. Varias polimixinas son producidas naturalmente por Bacillus polymyxa. La estructura y la historia de las polimixinas son conocidas y se describen, por ejemplo, por Velkov et al. J. Med. Chem. (2010) 53(5): 18981916.
Las polimixinas como se describen en este documento abarcan muchas especies moleculares con respecto al numero de sustituyentes y sus posiciones. Por ejemplo, en soluciones acuosas, la carga dependera del pH. Los compuestos de polimixinas, como se describen en este documento, cubren todas las sales farmaceuticamente aceptables e iones de los mismos. Entre tales polimixinas se encuentran por supuesto las sales de hexa-, octa- y deca-sodio. Otras sales farmaceuticamente aceptables tambien se incluyen, por ejemplo, sales de potasio, litio y amonio (tales como HmN(alquilo C1-4)n+ donde m es 0-4 y n es 0-4 con la condition de que m+n=4), o combinaciones de los mismos.
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Las polimixinas, como se describen en este documento, comprenden cualquier compuesto de polimixina que tenga 6-10 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en los residuos de DAB.
La numeracion de residuos en polimixinas esta de acuerdo con Velkov et al, vease, por ejemplo, la figura 4. En las polimixinas de origen natural, el acido graso se une al residuo 1 de aminoacido N-terminal y el residuo de aminoacido (10) forma una estructura de variables con residuos de aminoacidos (4). En otras palabras, el grupo acilo graso (tal como el 6-metil-heptanoico o el acido 6-metil-octanoico) esta acoplado con amida al residuo de L- DAB (1) y el residuo treonina (10) esta acoplado con amida al residuo L-DAB (4) en algunas polimixinas de origen natural.
La unica diferencia en la estructura entre la polimixina B y la polimixina E (colistina) radica en los componentes aminoacidos. Las polimixinas contienen principalmente L-aminoacidos dispuestos como un anillo de heptapeptido clclico con una cadena lateral de tripeptido, con la cadena lateral unida covalentemente a un acido graso. (Vease, por ejemplo, la figura 4). La diferencia entre la polimixina B y la polimixina E esta en el residuo 6. En la polimixina B, el residuo (6) es la D-fenilalanina y en la polimixina E, el residuo (6) es la D-leucina, conteniendo ambos L-leucina en el residuo (7).
Se apreciara que las designaciones estereoqulmicas identificadas en la figura 4 no pretenden limitar las posibles designaciones estereoqulmicas de los estereocentros basados en carbono que estan presentes en la al menos una polimixina o una sal de la misma representada
por la formula (I).
Tabla 2: Ejemplos de polimixinas sulfometiladas
Polimixinas sulfometiladas
Abr. FA Dab 1 (Ng) Dab 3 (Ng) Dab 5 (Ng) X 6 Y 7 Dab 8 (Ng) Dab 9 (Ng)
penta (Ng-bis- sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E1
PE1- (SM)101,35,8,9 6-MOA 2SM 2SM 2SM Leu Leu 2SM 2SM
penta (Ng-bis- sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E2
PE2- (SM)101,35,8,9 6-MHA 2SM 2SM 2SM Leu Leu 2SM 2SM
penta (Ng-bis- sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E1-i
PE1-i- 1,3.5,8,9 (SM)10 6-MOA 2SM 2SM 2SM Leu Ile 2SM 2SM
penta (Ng-bis- sulfometil) DAB1,35,8,9 colistina
PE- (SM)101,35,8,9 6-MOA/ 6- MHA/ 6- OCT 2SM 2SM 2SM Leu Leu/Ile 2SM 2SM
penta (Ng-bis- sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina B
PB- (SM)101,35,8,9 6-MOA/ 6- MHA/ 6- OCT 2SM 2SM 2SM Phe Leu 2SM 2SM
tetra (Ng-bis-sulfometil) DAB1,5,8,9 polimixina E1
PE1- (SM)81,5,8,9 6-MOA 2SM 2H 2SM Leu Leu 2SM 2SM
tri (Ng-bis-sulfometil) DaB1,5,9 polimixina E1
PE1-(SM)61,5,9 6-MOA 2SM 2H 2SM Leu Leu 2H 2SM
(FA = acilo graso, 6-MOA = 6-metiloctanollo, 6-MHA = 6-metilheptanollo, 6-OCT = octanollo, 2SM = bis-sulfometilo, Leu = residuo leucina, Ile = residuo isoleucina, Phe = residuo fenilalanina, DAB1 = residuo DAB numero 1, etc.)
Muchas de las polimixinas de origen natural comprenden 6-metil-heptanoico o el acido 6-metil-octanoico acoplado al peptido por un enlace amida. Numerosas polimixinas con acidos grasos naturales intercambiados con acidos grasos sinteticos se han producido en la tecnica anterior. Las polimixinas de la presente invencion estan tambien disenadas para abarcar tales polimixinas semisinteticas si de otro modo cumplen las caracterlsticas de las reivindicaciones. Por ejemplo, muchas polimixinas semisinteticas se describen en la bibliografla, vease, por ejemplo, Magee et al. J. Med. Chem. (2013) 56: 5079-5093.
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El termino "CMS" como se describe en el presente documento se refiere a una composicion que comprende polimixina E1 sulfometilada y polimixina E2 sulfometilada. Los resumenes qulmicos han asignado a dicha composicion el numero 8068-28-8 para CMS.
El termino "colistina" como se describe en este documento se refiere a una composicion que comprende polimixina E1 y polimixina E2. Los resumenes qulmicos han asignado el numero 1066-17-7 para la colistina. De acuerdo con la farmacopea EP, la colistina debe comprender mas del 77% de polimixina E1, E2, E3, E1-i y E1-7MOA, pero menos del 10% de cada uno de los componentes menores polimixina E3, E1-i y E1-MOA.
El termino "polimixina E" como se describe en este documento se usa indistintamente con "colistina".
El termino "polimixina E1" como se describe en este documento se refiere al compuesto que tiene el CAS no 772244-3. La polimixina E1 se usa indistintamente con la colistina A.
El termino "polimixina E2" como se describe en este documento se refiere al compuesto que tiene el CAS no 723948-7. La polimixina E2 se usa indistintamente con la colistina B.
La expresion "polimixina sulfometilada" como se describe en este documento se refiere a una polimixina que comprende al menos un grupo sulfometilo unido a un grupo g-amino en un residuo de L-DAB.
Ciertos derivados de polimixina abarcados por la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) incluyen la al menos una polimixina o una sal de la misma que comprende 6-10 grupos sulfometilo unidos a grupos g-amino en residuos de L-DAB o los grupos g-amino en residuos de L-DAP, como se describe en el documento WO 2012/168820, que corresponde al documento US 2012/0316105. En este caso, los compuestos no contienen 6-10 grupos sulfometilo. Un ejemplo de la al menos una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I) incluye el compuesto que tiene la siguiente estructura:
Una segunda realizacion esta dirigida a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de cualquiera de las composiciones descritas en los numerosos aspectos de la primera realizacion.
En un primer aspecto de la segunda realizacion, la composicion farmaceutica comprende ademas un excipiente farmaceuticamente aceptable. El excipiente farmaceuticamente aceptable puede incluir un conservante, una solucion reguladora, un antioxidante o un diluyente. Los diluyentes apropiados incluyen, pero no se limitan a diluyentes: agua para inyeccion, NaCl al 0.9%, dextrosa al 5% en NaCl al 0.9%, dextrosa al 5% en agua, dextrosa al 5% en NaCl al 0.45%, dextrosa al 5% en NaCl al 0.225%, y solucion de Ringer con lactato.
La composicion farmaceutica puede ser un producto liofilizado capaz de ser reconstituido usando un diluyente apropiado para administration por una via inyectable (por ejemplo, administration ya sea parenteral o intravenosa) o por inhalation usando, por ejemplo, un nebulizador u otro dispositivo de inhalation de este tipo.
El termino "cantidad eficaz" como se usa en este documento significa una cantidad requerida para reducir los slntomas de una infection bacteriana, tal como una infection bacteriana gramnegativa, tal como, por ejemplo, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, etc. en un sujeto. La dosis se ajustara a las necesidades individuales en cada caso particular. Dicha dosificacion puede variar dentro de amplios llmites dependiendo de numerosos factores tales como la gravedad de la enfermedad que se va a tratar, la edad y estado general de salud del paciente, otros medicamentos con los que el paciente esta siendo tratado, la ruta y forma de administracion y la preferencia y experiencia del medico involucrado.
Una tercera realizacion esta dirigida a un uso de una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de cualquiera de las composiciones descritas en los numerosos aspectos de la primera realizacion en el tratamiento de una infeccion bacteriana gramnegativa.
En un primer aspecto de la tercera realizacion, el uso es el mismo para productos farmaceuticos de polimixina comercialmente disponibles, tales como, por ejemplo, Colistimetato para inyeccion, USP.
En un segundo aspecto de la tercera realizacion, el uso es para el tratamiento de infecciones causadas o mediadas por Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, o una combinacion de las mismas.
Una cuarta realizacion esta dirigida a un metodo de tratamiento de una infeccion bacteriana gramnegativa en un paciente infectado, que comprende administrar al paciente una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de cualquiera de las composiciones descritas en los numerosos aspectos de la primera realizacion.
En un primer aspecto de la cuarta realizacion, el metodo de tratamiento es sustancialmente el mismo que el uso indicado para productos farmaceuticos de polimixina comercialmente disponibles, tales como, por ejemplo, Colistimetato para inyeccion, USP.
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En un segundo aspecto de la cuarta realizacion, la infeccion bacteriana gramnegativa es causada o mediada por Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter
aerogenes, o una combination de las mismas.
Una quinta realizacion se refiere a un metodo para tratar una infeccion bacteriana gramnegativa en un paciente infectado, que comprende administrar al paciente una composition farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de una cualquiera de las composiciones descritas en los numerosos aspectos de la primera realizacion en combinacion con otro agente antibacteriano.
En un primer aspecto de la quinta realizacion, la administration de la composicion farmaceutica y otro agente antibacteriano se lleva a cabo concurrentemente o alternativamente sin orden particular de administracion temporal.
En un segundo aspecto de la quinta realizacion, la infeccion bacteriana gramnegativa es causada o mediada por Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Enterobacter
aerogenes, o una combinacion de las mismas.
Una sexta realizacion se refiere a un procedimiento de preparation de una cualquiera de las composiciones descritas en los numerosos aspectos de la primera realizacion, que comprende:
hacer reaccionar un compuesto o una sal del mismo para la formula II con un reactivo de metilsulfonacion
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en la que
R1 es un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico, o
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R5 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, o -CH2C6H5;
R6 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, o -CH(CH3)CH2CH3; cada uno de R2, R3, R4, R7 y R8 es -(CH2)xCH2NH2; y en la que x es 0 o 1.
Una septima realizacion esta dirigida a un producto obtenido por un procedimiento como se describe en la quinta realizacion.
Materiales y metodos
Cromatografla llquida de ultra alta resolution (UHPLC):
El metodo UHPLC utilizado fue un sistema Waters Acquity equipado con un sistema de bomba cuaternaria con un detector UV. La columna utilizada fue una Waters Acquity UPLC CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm, mantenida a 30°C. Todos los cromatogramas se registraron usando Empower 2. La velocidad de flujo fue de 0.30 mL/min y el volumen de inyeccion fue de 2 pL. Las fases moviles consistieron en; A) solution reguladora de fosfato 0.05 M pH
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6.5 y acetonitrilo (MeCN) en una proportion 95:5 v/v B) solution reguladora de fosfato 0.05 M pH 6.5 y MeCN en una proportion de 50:50 v/v. Todos los solventes y productos quimicos eran de calidad analitica y se filtraron a traves de un filtro de 0.2 pm antes de su uso. El gradiente utilizado fue; Inicial, 20% de B; 0-10 min, lineal a 32% de B; 10-35 min, lineal a 47% de B; 35-36 min, lineal hasta 20% de B; 36 min-44 min, 20% de B. Todos los cromatogramas se registraron a 210 nm. Todos los solventes y productos quimicos se adquirieron de Merck, Alemania, eran de calidad analitica o proanalisis (PA).
Preparation de la solution de muestra de ensayo para UHPLC y MS
Las muestras se prepararon disolviendo el patron de trabajo de CMS en agua, seguido directamente por dilution con metanol (MeOH) de manera que la concentration final de las muestras fuese de 2 mg/mL y el contenido de agua fuera de 5%. Esto aumenta la estabilidad de la muestra disminuyendo la hidrolisis de los compuestos sulfometilados. La identification de los componentes individuales se realizo disolviendo el componente aislado en metanol puro a una concentration de aproximadamente 1 mg/mL. Todas las muestras se almacenaron en la nevera o en un muestreador automatico a 2-8°C antes de su uso.
Espectrometria de masas (MS)
Todas las muestras se analizaron mediante un espectrometro de masas de tiempo de vuelo de infusion por electroaspersion (ESI-TOF MS) (Bruker microTOF) en modo negativo. Las muestras se disolvieron en metanol hasta una concentration de 0.5 mg/mL y se pusieron en un bano de ultrasonidos durante 30 min. Las muestras se infundieron a una velocidad de flujo de 250 pL/hora durante aproximadamente 30 segundos. Las configuraciones de MS fueron; Desplazamiento de la placa final-500 V, Capilar 3500 V, Nebulizador 3,0 Bar, Gas seco, 4.0 mL/min a 250°C, Salida capilar variada de -80 V a 120 V con un valor general de -100.0 V, Skimmer 1-33.3 V, Hexapole 1 -
23.5 V, Hexapole RF 300.0 Vpp, Skimmer 2 -223.5 V. La salida capilar afecta significativamente la fragmentation de los componentes. Por lo tanto, era necesaria la optimization de este parametro para los componentes individuales. Todavia se observo alguna fragmentation para algunos de los compuestos. Debido a la presencia de sales misc., en la descomposicion de la fuente, y otros componentes, los espectros MS no son puros y pueden contener senales adicionales. Sin embargo, dado que cada componente se aislo como monocomponente (verificado por UHPLC) se esperaba que la masa mas alta posible fuera la molecula intacta y todas las demas masas con masa mas baja fueran fragmentos. Esto tambien se verifico variando la energia de salida capilar.
RMN: Los experimentos se obtuvieron usando un espectrometro Bruker de 600 MHz bajo secuencias de pulso estandar para experimentos de RMN 1D y 2D. Los datos se registraron en CD3OH a 298 K. Los cambios quimicos se reportaron en ppm respecto a CHD2OH (8h 3.30 ppm) y CD3OH (8c 49.0 ppm). Se adquirieron los siguientes experimentos de RMN: 1H, 13C, DEPT, COSY, HMBC, HSQC, TOCSY y NOESY. Los desplazamientos quimicos 15N se referenciaron usando relaciones de frecuencia como se describe por Wishart et al. J. Biomol. NMR (1995) 6: 135140).
Ejemplos
A no ser limitados a modo de ejemplo, los siguientes ejemplos sirven para facilitar una mejor comprension del objeto descrito en este documento.
Ejemplo 1
Preparation de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9
polimixina E1 (PE1-(SM)101,35,8,9 (figura 1))
Se mezclaron sulfato de polimixina E1 aislado (3.5 g) y una solution acuosa al 45% p/p de aducto de formaldehido- bisulfito de sodio (11.3 g) y se calento a 60°C con agitation. El pH se mantuvo entonces a 7.0-7.5 mediante varias adiciones de NaOH 2 M. Despues de 18 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto en bruto se proporciono como un solido de color blanco por precipitation en 200 mL de metanol/acetonitrilo 1/1 v/v.
El producto fue desalado y se refino mediante el siguiente procedimiento: Una columna C18 de 6 p, por ejemplo, Phenomenex X Bridge Prep Shield 10 x 250 mm o similar fue lavada y equilibrada con MeCN al 5% (sin sal). La columna se monto en un sistema de HPLC Waters Delta Prep, flujo maximo de 150 mL/min. El detector era un Waters 2487 ajustado a 280 nm. Una mezcla de 9 mL de solution de MeCN al 5% de 230 mg de PE1-(SM)101,35,8,9 y 1 mL de NaCl 2m se cargo en la columna y el flujo fue de 6-8 mL/min.
Eluir y desalar con MeCN al 5% con 6-8 mL/min y recoger la fraction de PE1-(SM)i01,35,8,9 Se produjo cierta degradation en la columna durante el procedimiento, pero cortando la cabeza y la cola, se mantendra la alta pureza. La fraction de cabeza, aprox. 35 mL, se recogio directamente en 450 mL de MeCN al 100% y se adicionaron 550 mL mas de MeCN al 100% antes de la evaporation al vacio de la solution MeCN:H2O 97:3 en un matraz de evaporation en forma de pera de 2 L. El procedimiento de destilacion se realizo con un rotavapor Buchi. El azeotropo 94:6 se destila fabricando un residuo de PE1-(SM)101,35,8,9 libre de agua en el matraz de destilacion al vacio de 2 L. El residuo se retiro con 3 x 8 mL de MeOH al 100% (seco) y se vertio en un matraz de evaporation al vacio de 50 mL y se evaporo a vacio a 1-2 mL de suspension de MeOH-PE1-(SM)101,35,8,9 Se adicionaron 15 mL de
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MeCN al 100% y la solucion/suspension se evaporo a vaclo adicionalmente a sequedad con una temperatura del bano de agua de 35°C. La presion disminuyo de 70-60 Torr a 20-15 Torr durante el procedimiento. Se realizo un secado al vaclo adicional durante 30 minutos con rotacion lenta en el bano de agua a 35°C con vaclo sostenido. El rendimiento fue de 150 mg de sustancia del PE1-(SM)101,35,8,9. Se realizaron varias ejecuciones para dar 990 mg de lote con una pureza cromatografica relativa superior al 90%.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) mostro un unico pico, con PE1- (SM)101,35,8,9, C63H110N16Na10O43S10. La pureza fue de 93% cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm, vease la figura 6. El analisis se realizo tambien mediante infusion directa de componente aislado usando ESI-TOF MS (modo negativo): calc. m/z para C63H110N16Na10O43S10 [M] = 2328.3. Encontrado [M+8 Na]-2: m/z 1141.2 y [M+7Na]-3 m/z 753.1. El producto se determino por espectroscopla RMN 1H-, 13C, y 15N (datos no mostrados).
Ejemplo 2
Preparacion de penta (NY-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9
polimixina E2 (PE2-(SM)101,35,8,9 (figura 7))
Se mezclaron sulfato de polimixina E2 (3.5 g) y una solucion acuosa al 45% p/p de aducto de formaldehldo-bisulfito de sodio (11.3 g) y se calento a 60°C con agitacion. El pH se mantuvo a continuacion entre 7.0-7.5 mediante varias adiciones de NaOH 2M. Despues de 18 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto en bruto se proporciono como un solido de color blanco por precipitacion en 200 mL de metanol/acetonitrilo 1/1 v/v. El producto se desalo adicionalmente y se refino como se describe en el ejemplo 1.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) mostro un unico pico, con PE2- (SM)101,35,8,9, C62H108N16Na10O43S10. La pureza fue del 81 % cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm. El analisis tambien se realizo mediante infusion directa de componente aislado usando ESI-TOF MS (modo negativo): calc. m/z para C62H108N16Na10O43S1o [M] = 2314.5. Encontrado [M+8 Na]-2: m/z 1135.2 y [M+7Na]'3: m/z 748.5. El producto se determino por espectroscopia de RMN.
Ejemplo 3
Preparacion de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina E1-/ (PE1-/-(SM10)1,3'5,8,9 (figura 8))
Se mezclaron sulfato de polimixina E1-i (3.5 g) y una solucion acuosa al 45% p/p de aducto de formaldehldo-bisulfito de sodio (11.3 g) y se calento a 60°C con agitacion. El pH se mantuvo a continuacion entre 7.0-7.5 mediante varias adiciones de NaOH 2M. Despues de 18 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto en bruto se proporciono como un solido de color blanco por precipitacion en 200 mL de metanol/acetonitrilo 1/1 v/v. El producto se desalo adicionalmente y se refino como se describe en el ejemplo 1.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) mostro un unico pico, con PE1-i- (SM)10, C63H110N16Na10O43S10. La pureza fue del 95% cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm. El analisis tambien se realizo por infusion directa del componente aislado usando ESI-TOF MS (modo negativo): Encontrado [M+8 Na]-2: m/z 1141.2 y [M+7Na]-3: m/z 753.1.
Ejemplo 4
Preparacion de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9
polimixina E (PE-(SM)10)1,35,8,9 (figura 9)
La mezcla de sulfato de colistina (3.5 g) y una solucion acuosa al 45% p/p de aducto de formaldehldo-bisulfito de sodio (11.3 g) y se calentaron a 60°C con agitacion. El pH se mantuvo a continuacion entre 7.0-7.5 mediante varias adiciones de NaOH 2M. Despues de 18 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto en bruto se proporciono como un solido de color blanco por precipitacion en 200 mL de metanol/acetonitrilo 1/1 v/v. Los productos; El PE-(SM) 101,35,8,9 (figura 9) se desalo adicionalmente y se refino como se describe en el ejemplo 1.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm 150 x 2.1 mm) mostro un unico pico para cada componente principal de polimixinas, abreviado PE-(SM)101,35,8, . La pureza relativa total de los 5 principales picos de polimixina fue del 83% cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm. El analisis tambien se realizo por infusion directa de la mezcla de PE-(SM)101,35,8,9 usando ESI-TOF MS en modo negativo calculado para los componentes principales calc. m/z para E1:C63Hn0N16Na10O43S10 [M] = 2328.3 y m/z para E2: C62H10sN16Na10O43S10 [M] = 2314.5. Encontrado [M+8 Na]'2: m/z 1141.2 + 1135.1 y [M+7Na]-3: m/z 748.5 y 753.1, respectivamente.
Ejemplo 5
Preparacion de penta (Ng-bis-sulfometil) DAB1,35,8,9 polimixina B (PB-(SM)10)1,35,8,9 (figura 10))
Se mezclaron sulfato de polimixina B (3.5 g) y una solucion acuosa al 45% p/p de aducto de formaldehldo-bisulfito de sodio (11.3 g) y se calento a 60°C con agitacion. A continuacion, el pH se mantuvo entre 7.0-7.5 mediante varias adiciones de NaOH 2M. Despues de 18 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y el producto en bruto se proporciono como un solido de color blanco por precipitacion en 200 mL de metanol/acetonitrilo 1/1 v/v. Los
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productos; PB-(SM)io1,3'5,8’9 (figura 10.) se desalaron adicionalmente y se refinaron como se describe en el ejemplo 1.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) mostro el PB-(SM)io1,35’8’9. El analisis tambien se realizo por infusion directa de la mezcla PMB-(SM)1o1,35,8,9 usando ESI-TOF MS (modo negativo) calculado para los componentes principales calc. m/z para B1: C66H108N16Na1oO43S1o [M] = 2362.3 y m/z para B2: C65H106N16Na1oO43S1o [M] = 2348.3. Encontrado M-2: m/z 1158.2 + 1151.2, y M"3 m/z 764.4 y 759.8 como componentes principales (mezcla de componentes de polimixina B para cada masa encontrada).
Ejemplo 6
Actividad antibacteriana de polimixinas decasulfometiladas contra Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa y Escherichia coli.
Las polimixinas decasulfometiladas se ensayaron para determinar la actividad antibacteriana determinando la concentracion inhibitoria minima (MIC) mediante el uso del metodo de dilucion en caldo segun EUCAST. 4 se utilizaron, 4 organismos indicadores bacterianos, por ejemplo, Acinetobacter baumannii colistina-sensitive, Klebsiella pneumonia #3010, Pseudomonas aeruginosa, ATCC27853, Escherichia coli ATCC25922 y Escherichia coli DSA443. Las pruebas se realizaron en, Statens Serum Institut, Copenhagen, Denmark department for Microbiology and Infection Control.
El intervalo de concentracion utilizado fue 0.125-128 pg/mL. La gentamicina se incluyo como un control de calidad positivo. Preparacion de gentamicina: Solucion madre 1000 pg/mL: 0.125 mL de una solucion de 40 mg/mL de Hexamicina + 4.875 mL de agua esteril. 128 pg/mL: 0,640 mL de "solucion madre 1000 pg/mL" + 4.36 mL de caldo Mueller - Hinton (MHB).
Preparacion de los compuestos descritos en este documento: solucion madre de 5 mg/mL: a un vial de 5 mg se le adiciono 1.0 mL de agua esteril. Solucion de 512 pg/mL: 0.205 mL de "solucion madre de 5 mg/mL" + 1.795 mL de MHB
Preparacion del inoculo: Se suspendieron colonias frescas durante la noche a partir de placas de agar de sangre de caballo al 5% a una turbidez de 0.5 McFarland y se diluyo adicionalmente en caldo Mueller-Hinton a 1x106 CFU/mL. Se adiciono un total de 50 pL de suspension bacteriana diluida (caldo Mueller Hinton BBL II, SSI) a pozos que contenlan 50 pL de compuestos de dos veces descritos en este documento o diluciones de gentamicina. Todos los compuestos se ensayaron por triplicado. Las placas se incubaron a 35°C, 16-20 h.
Los resultados se muestran en la tabla 3. La MIC para la gentamicina de control positivo estaba dentro del llmite para P. aeruginosa ATCC27853 (0.5-2 pg/mL) y E. coli ATCC 25922 (0.25-1 pg/mL) que indica un procedimiento correcto.
Para todas las cepas, la sustancia de control CMS tenia valores de MIC mas bajos que las polimixinas decasulfometiladas, excepto para la cepa A. baumannii colistina sensitive donde 3 de 5 polimixinas decasulfometiladas mostraron actividad comparable al control CMS. Los datos de MIC muestran actividad antimicrobiana para todas las sustancias de polimixinas decasulfometiladas, pero en general con menor actividad en comparacion con el control de CMS.
Tabla 3. Resultados de MIC (pg/mL) para polimixinas decasulfometiladas
Cepa bacteriana
E. coli P. aeruginosa A. baumannii K. pneumonia
Ejemplo
ATCC 25922 DSA 443 ATCC 27853 ColistinS #3010
1 (PE1-(SM)1o 1,3A8,9)
8 16 8 4 16
2 (PE2-(SM) 10 1,3A8,9)
8 16 8 4 16
3 (PE1-i-(SM) 10 1’3A8’9)
8 16 8 4 16
4 (PE-(SM) 10 1,3,s,B,a)
8 16 8 8 16
5 (PB-(SM) 10 1,3,s,B,a)
16 16 8 8 16
CMS
2 4 4 4 4
Gentamicina
1 >32 1 >32 0.125
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Ejemplo 7
Preparacion de tetra (NY-bis-sulfometil) DAB1,5,8,9 polimixina E1 (PE1-(SM)a1,5,8,9 (figura 2))
Se disolvio el aducto de bisulfito de sodio-formaldehido (9.80 g, 68.5 mmol) en agua (100 mL) y se adiciono HCl al 37% (1.75 g, 17,7 mmol). A continuacion, se adiciono lentamente polimixina E1 (11.7 g, 10.0 mmol) a la solucion agitada. La dispersion resultante se calento luego a 40°C, durante 10 h y posteriormente se liofilizo en un solido de color blanco.
Se disolvieron 400 mg de la polimixina E1 sulfometilada en 20 mL de metanol al 50% y se cargo una Waters Nova Pak C18 de 6 pm, 60 A, 40 x 310 mm montada en una Waters Prep LC Universal Base a un flujo de 20 mL/min. La columna se equilibro con el eluyente A antes de la aplicacion de la solucion de la sustancia.
El eluyente A fue CH3CN: Solucion reguladora Trietilamina 10 mM NaCl 40 mM, 1:9
El eluyente B fue CH3CN: Solucion reguladora Trietilamina 10 mM NaCl 40 mM, 4:6
El sistema de elucion fue isocratico 0-5 min, 100% de eluyente A y durante 20 min 100% de A a 50% de A como gradiente lineal.
Se recogieron y analizaron los primeros 5 picos principales. El primer pico principal a la RT 12 min fue PE1- (SM)81,5, 9. Las fracciones se almacenaron en un congelador a -80°C antes de continuar el tratamiento. Las fracciones de 50-100 mL de fusion rapida, aun frias, con PE1-(SM)a1,5,8,9 (figura 11) se diluyeron con CH3CN al 100% para dar aprox. 4% de agua en CH3CN. Las fracciones diluidas que contenian 15-30 mg de PE1-(SM)8 con 75-85% de pureza, se evaporaron al vacio hasta sequedad y se volvieron a disolver en metanol al 100% y se recogieron en el congelador a -20°C para dar 150-300 mg de sustancia.
Las sustancias fueron procesadas nuevamente por HPLC preparativa de la misma manera que se ha descrito anteriormente y finalmente fueron desaladas y refinadas como en el ejemplo 1. El producto se determino mediante espectroscopia de RMN de 1H, 13C y 15N
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) del PE1-(SM)81,5,8,9 purificado mostro un unico pico, con polimixinas octasulfometiladas. La pureza del PE1-(SM)81,5,8,9 fue de 94% cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm. El analisis tambien se realizo por infusion directa de la mezcla de colistina hexa y octasulfonada usando ESI-TOF MS (modo negativo): calc. m/z para C61H108N16Na8O37S8 [M] = 2096.4 Encontrado para el PE1-(SM)81,5,8,9 [M+8Na]-2 m/z 1025.2, y [M+7Na]-3 m/z 675.8.
Tabla 4. Resultados de MIC (pg/ml) para polimixina E1 octa sulfometiladas
Cepa Bacteriana
f. coli ATCC 25922 P. aeruginosa A. baumannii K. ATCC27H53 pneumonia
PE1-(SM)*1S^
K X 4 1 (S
Ejemplo 8
Preparacion de tri (Ng-bis-sulfometil) DAB1,5,9 polimixina E1 (Abreviado: PE1-(SM)61,5,9 (figura 3))
Se disolvio el aducto de bisulfito de sodio-formaldehido (9.80 g, 68.5 milimol) en agua (100 mL) y se adiciono HCl al 37% (1.75 g, 17.7 mmol). A continuacion, se adiciono lentamente polimixina E1 (11.7 g, 10.0 mmol) a la solucion agitada. La dispersion resultante se calento despues a 40°C, durante 10 h y posteriormente se liofilizo en un solido de color blanco.
Se disolvieron 400 mg de la polimixina E1 sulfometilada en 20 mL de metanol al 50% y se cargo una Waters Nova Pak C18 de 6 pm, 60 A, 40 x 310 mm montada en una Base Universal Waters Prep LC a un flujo de 20 mL/min. La columna se equilibro con el eluyente A antes de la aplicacion de la solucion de la sustancia.
El eluyente A fue CH3CN: Solucion reguladora Trietilamina 10 mM NaCl 40 mM, 1:9
El eluyente B fue CH3CN: Solucion reguladora Trietilamina 10 mM NaCl 40 mM, 4:6
El sistema de elucion fue isocratico 0-5 min 100% de eluyente A y durante 20 min 100% de A a 50% de A como gradiente lineal.
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Se recogieron y analizaron los primeros 5 picos principales. El ultimo pico principal a 22 min fueron PE1-(SM)6 ’ ’ (figura 3). Las fracciones se almacenaron en un congelador a -80°C, antes de continuar el tratamiento. Las fracciones de 50-100 mL, aun frlas, de fusion rapida, con PE1-(SM)61,5,9 se diluyeron con CH3CN al 100% para dar aprox. 4% de agua en CH3CN. Las fracciones diluidas que contenlan 15-30 mg de PE1-(SM)61,5,9 con 75-85% de pureza, se evaporaron con vaclo a sequedad y se volvieron a disolver en metanol al 100% y se recogieron en el congelador a -20°C para dar 150-300 mg de sustancia.
Las sustancias fueron procesadas nuevamente por HPLC preparativa de la misma manera que antes y finalmente desaladas y refinadas como en el ejemplo 1. El producto se determino por espectroscopia de RMN.
La UHPLC con gradiente en fase reversa (CSH C18, 1.7 pm, 150 x 2.1 mm) mostro un unico pico, con PE1- (SM)61,5,9. La pureza del PE1-(SM)61,5,9 fue de 87% cuando se controlo el eluyente de la columna a 210 nm. El analisis tambien se realizo por infusion directa de la polimixina E1 octa y hexasulfometilada usando ESI-TOF MS (modo negativo): calc. m/z para C59H1o6N16Na6O31S6 [M] = 1864.5 Encontrado para PE1-(SM)61,5,9 [M+8 Na]-2 m/z 909.3 y [M+7Na]-3 m/z 598.5
Tabla 5 Resultados de MIC (pg/mL) para polimixina E1 hexasulfometilada
Cepa bacteriana
E. coli ATCC 25922 P. aeruginosa ATCC27853
PE1-(SM)6 1,5,9
8 8
Ejemplo 9
Estudios de toxicidad in vitro
Se sembraron celulas HK-2 (16 llneas celulares transformadas de virus del papiloma humano del tubo proximal de nefron renal) en placas de 96 pozos y se cultivaron en medio libre de suero de queratinocitos con 0.05 mg/mL de extracto pituitario bovino y 5 ng/mL de EGF, durante 24 horas. Las celulas se trataron con los compuestos especificados en presencia de Sytox Green que penetra solo en las membranas de las celulas danadas.
La formacion de imagenes en intervalos de tiempo se realizo con 1 imagen cada 2 horas mostrando el porcentaje de celulas citolizadas. Los resultados se visualizan en las figuras 11-15 e indican una diferencia entre la colistina y las polimixinas decasulfometiladas con respecto a la capacidad de lisar celulas HK-2 in vitro. La diferencia es evidente para cualquier concentracion por encima de 100 pg/mL, y mas prominente durante las primeras 24 horas del tratamiento.

Claims (11)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    REIVINDICACIONES
    1. Una composicion que comprende una polimixina o una sal de la misma representada por la formula (I)
    imagen1
    en la que
    R1 es un grupo acilo C6-C10 lineal o ramificado alifatico, o
    imagen2
    R5 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, o -CH2C6H5;
    R6 es -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, o -CH(CH3)CH2CH3;
    R2, R3, R4, R7 y R8 es (CH2)xCH2N(CH2SO3M)2;
    en la que x es 0 o 1; y
    en la que M es un cation monovalente.
  2. 2. La composicion de la reivindicacion 1, en la que
    R1 es heptanollo, metilheptanollo, octanollo, metiloctanollo, nonanollo, metilnonanollo o decilo.
  3. 3. La composicion de la reivindicacion 2, en la que
    R1 es heptanollo, (S)-6-metilheptanollo, (S)-7-metilheptanollo, octanollo, (S)-6-metiloctanollo, nonanollo, (S)-6- metilnonanollo, (S)-7-metilnonanollo, (S)-8-metilnonanollo, o decanollo.
  4. 4. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que M se selecciona del grupo que consiste en Na+, K+, HmN(alquilo C1-4)n+, o combinaciones de los mismos, donde m es 0-4 y n es 0-4 con la condicion de que m+n=4.
  5. 5. La composicion de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la polimixina o sal de la misma esta
    presente en una cantidad de al menos 10% por UHPLC, al menos 20% por UHPLC, al menos 30% por UHPLC, al menos 40% por UHPLC, al menos 50% por UHPLC, al menos 60% por UHPLC, al menos 70% por UHPLC, al
    menos 80% por UHPLC, al menos 90% por UHPLC, al menos 95% por UHPLC, al menos 97% por UHPLC, al
    menos 98% por UHPLC, o al menos 99% por UHPLC.
  6. 6. La composicion de la reivindicacion 1, en la que x es 1 y M es H+, Na+ o K+.
  7. 7. La composicion de la reivindicacion 6, en la que la polimixina o sal de la misma esta presente en una cantidad de
    al menos 10% por UHPLC, al menos 20% por UHPLC, al menos 30% por UHPLC, al menos 40% por UHPLC, al menos 50% por UHPLC, al menos 60% por UHPLC, al menos 70% por UHPLC, al menos 80% por UHPLC, al menos 90% por UHPLC, al menos 95% por UHPLC, al menos 97% por UHPLC, al menos 98% por UHPLC, o al menos 99% por UHPLC.
    5
    10
    15
    20
    25
    30
  8. 8. La composicion de la reivindicacion 1, en la que la polimixina o sal de la misma representada por la formula (I) se selecciona de uno cualquiera de (A) a (H), en la que
    (A) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es - CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es -
    CH2CH(CH3)2;
    (B) R1 es
    imagen3
    cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2;
    R3 es
    -CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
    (C) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
    (D) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2;
    R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
    (E) R1 es octanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es -
    CH2CH(CH3)2;
    (F) R1 es 7-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
    (G) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
    CH2CH(CH3)2;
    (H) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3M)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
    CH2CH(CH3)2;
  9. 9. La composicion de la reivindicacion 1, en la que la polimixina o sal de la misma representada por la formula (I) se selecciona de uno cualquiera de (A) a (H), en la que
    (A) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es - CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
    (B) R1 es
    imagen4
    cada uno de R2, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2;
    R3 es -CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
    (C) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es - CH2CH(CH3)2;
    (D) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2;
    R5 es -CH(CH3)CH2CH3; y R6 es -CH2CH(CH3)2;
    (E) R1 es octanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y
    cada uno de R5 y R6 es -CH2CH(CH3)2;
    (F) R1 es 7-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; y cada uno de R5 y R6 es -
    CH2CH(CH3)2;
    (G) R1 es 6-metiloctanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es -
    5 CH2CH(CH3)2;
    (H) R1 es 6-metilheptanollo; cada uno de R2, R3, R4, R7, y R8 es -CH2CH2N(CH2SO3Na)2; R5 es -CH2C6H5; y R6 es - CH2CH(CH3)2;
  10. 10. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de una cualquiera de las composiciones de las reivindicaciones 1- 9 y opcionalmente un excipiente farmaceuticamente aceptable.
    10 11. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 10 para uso en el tratamiento de una infeccion bacteriana
    gramnegativa.
  11. 12. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 11, en la que la infeccion es causada por Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, o una combinacion de las mismas.
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