ES2640875T3 - Método para la expresión de ARN celular - Google Patents

Método para la expresión de ARN celular Download PDF

Info

Publication number
ES2640875T3
ES2640875T3 ES11791447.3T ES11791447T ES2640875T3 ES 2640875 T3 ES2640875 T3 ES 2640875T3 ES 11791447 T ES11791447 T ES 11791447T ES 2640875 T3 ES2640875 T3 ES 2640875T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
pkr
inhibitor
cells
stem cell
rna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES11791447.3T
Other languages
English (en)
Inventor
Ugur Sahin
Tim Beissert
Marco Poleganov
Stephanie Herz
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TRON Translationale Onkologie an der Universitaetsmedizin der Johannes Gutenberg Universitaet Mainz gGmbH
Biontech RNA Pharmaceuticals GmbH
Original Assignee
TRON Translationale Onkologie an der Universitaetsmedizin der Johannes Gutenberg Universitaet Mainz gGmbH
Biontech RNA Pharmaceuticals GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TRON Translationale Onkologie an der Universitaetsmedizin der Johannes Gutenberg Universitaet Mainz gGmbH, Biontech RNA Pharmaceuticals GmbH filed Critical TRON Translationale Onkologie an der Universitaetsmedizin der Johannes Gutenberg Universitaet Mainz gGmbH
Application granted granted Critical
Publication of ES2640875T3 publication Critical patent/ES2640875T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/70—Enzymes
    • C12N2501/72—Transferases (EC 2.)
    • C12N2501/727—Kinases (EC 2.7.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Un método para proporcionar células que tienen características de células madre in vitro que comprende las etapas de (i) reducir la actividad de la proteína quinasa dependiente de ARN (PKR) en una población celular que comprende células somáticas, (ii) introducir ARN capaz de expresar uno o más factores que permiten la reprogramación de las células somáticas a células que tienen características de células madre en al menos una porción de las células somáticas y (iii) permitir el desarrollo de células que tienen características de células madre.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
imagen7
imagen8
imagen9
imagen10
imagen11
imagen12
imagen13
imagen14
5
10
15
20
25
30
35
40
45
inhibidor (por ejemplo, molécula antisentido, ribozima, ARNi, ARNpi o un ADN que codifica el mismo) hibridando selectivamente y siendo específico para PKR, inhibiendo de este modo (por ejemplo, reduciendo) la transcripción y/o traducción de los mismos.
Los ácidos nucleicos inhibidores de esta invención incluyen oligonucleótidos que tienen secuencias en la orientación antisentido con relación a los ácidos nucleicos objetivo. Los oligonucleótidos inhibidores adecuados típicamente varían en longitud de cinco a varios cientos de nucleótidos, más típicamente de aproximadamente 20-70 nucleótidos de longitud o más cortos, incluso más típicamente de aproximadamente 10-30 nucleótidos de longitud. Estos oligonucleótidos inhibidores pueden aplicarse, ya sea in vitro o in vivo, como ácidos nucleicos libres (desnudos) o en formas protegidas, por ejemplo, encapsulados en liposomas. El uso de formas liposomales u otras formas protegidas puede ser ventajoso ya que puede mejorar la estabilidad in vivo y facilitar así el suministro a sitios objetivo.
También, el ácido nucleico objetivo puede usarse para diseñar ribozimas que apuntan a la escisión de los ARNm correspondientes en las células. De manera similar, estos ribozimas se pueden administrar en forma libre (desnuda)
o mediante el uso de sistemas de suministro que aumentan la estabilidad y/o direccionamiento, por ejemplo, liposomas.
También, el ácido nucleico objetivo se puede usar para diseñar ARNpi que pueden inhibir (por ejemplo, reducir) la expresión del ácido nucleico. Los ARNpi pueden administrarse en forma libre (desnuda) o mediante el uso de sistemas de suministro que aumentan la estabilidad y/o el direccionamiento, por ejemplo, liposomas. También se pueden administrar en forma de sus precursores o ADN codificantes.
El ARNpi comprende preferiblemente una cadena de ARN sentido y una cadena de ARN antisentido, en la que las cadenas de ARN sentido y antisentido forman un dúplex de ARN y en la que la cadena de ARN sentido comprende una secuencia de nucleótidos sustancialmente idéntica a una secuencia objetivo de aproximadamente 19 a aproximadamente 25 nucleótidos contiguos en un ácido nucleico objetivo, preferiblemente ARNm que codifica para PKR.
En una realización, dicho inhibidor de PKR se dirige a la proteína PKR y preferiblemente es específico para PKR. La PKR se puede inhibir de varias maneras, por ejemplo, a través de la inhibición de la autofosforilación y/o dimerización de PKR, proporcionando un pseudoactivador de PKR o proporcionando un pseudosustrato de PKR. El inhibidor de PKR puede ser un agente que está implicado en un mecanismo de defensa viral tal como se discutió anteriormente. Por ejemplo, el virus vacuna E3L codifica una proteína de unión a ARNbc que inhibe PKR en células infectadas con virus, presumiblemente secuestrando activadores de ARNbc. K3, también codificada por el virus vacuna, funciona como un inhibidor de pseudosustrato por unión a PKR. Por lo tanto, proporcionar el virus vacuna E3L puede dar como resultado la inhibición de PKR. Proporcionar ARN VAI de adenovirus, ARN de Tat de HIV o del virus de Epstein-Barr EBER1 puede dar lugar a pseudoactivación de PKR. Por lo tanto, por ejemplo, se pueden usar todos los factores virales, es decir, inhibidores viralmente derivados, bloqueando la actividad de PKR tal como aquellos descritos en la presente memoria, para reducir la actividad de PKR. Tales factores pueden proporcionarse a una célula ya sea en forma de ácido nucleico tal como ARN o péptido/proteína, según sea apropiado.
En una realización, el inhibidor de PKR es un inhibidor químico. Preferiblemente, el inhibidor de PKR es un inhibidor de la autofosforilación de PKR inducida por ARN. Preferiblemente, el inhibidor de PKR es un inhibidor dirigido al sitio de unión al ATP de PKR.
En una realización, el inhibidor de PKR es 6,8-dihidro-8-(1H-imidazol-5-ilmetilen)-7H-pirrolo[2,3-g]benzotiazol-7-ona. En una realización, el inhibidor de PKR tiene la siguiente fórmula:
imagen15
En una realización, el inhibidor de PKR es 2-aminopurina. En una realización, el inhibidor de PKR tiene la siguiente fórmula:
imagen16
Preferiblemente, se utiliza un inhibidor como se ha descrito anteriormente en una concentración de al menos 0,5 µM
o superior, al menos 1 µM o superior o al menos 2 µM o superior y preferiblemente en una concentración de hasta 5 µM, hasta 4 µM, hasta 3 µM o hasta 2 µM.
16
imagen17
imagen18
imagen19
imagen20
imagen21
imagen22
imagen23
imagen24
imagen25
imagen26
imagen27
imagen28
imagen29
imagen30
imagen31
imagen32

Claims (1)

  1. imagen1
ES11791447.3T 2010-12-03 2011-12-02 Método para la expresión de ARN celular Active ES2640875T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/EP2010/007362 WO2012072096A1 (en) 2010-12-03 2010-12-03 Method for cellular rna expression
WOPCT/EP2010/007362 2010-12-03
PCT/EP2011/006061 WO2012072269A1 (en) 2010-12-03 2011-12-02 Method for cellular rna expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2640875T3 true ES2640875T3 (es) 2017-11-07

Family

ID=44202296

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES11791447.3T Active ES2640875T3 (es) 2010-12-03 2011-12-02 Método para la expresión de ARN celular

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20140030808A1 (es)
JP (2) JP6131433B2 (es)
AU (1) AU2011335428B2 (es)
CA (1) CA2819522C (es)
DK (1) DK2646557T3 (es)
ES (1) ES2640875T3 (es)
HU (1) HUE034558T2 (es)
LT (1) LT2646557T (es)
PT (1) PT2646557T (es)
WO (2) WO2012072096A1 (es)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ME02871B (me) * 2010-12-03 2018-04-20 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Postupak za ćelijsku ekspresiju rnk
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HUE057725T2 (hu) 2011-10-03 2022-06-28 Modernatx Inc Módosított nukleozidok, nukleotidok és nukleinsavak és ezek felhasználása
HRP20220717T1 (hr) 2011-12-16 2022-07-22 Modernatx, Inc. Modificirani pripravci mrna
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
AU2013243947A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
AU2013343864B2 (en) * 2012-11-09 2019-04-04 BioNTech SE Method for cellular RNA expression
ES2921623T3 (es) 2012-11-26 2022-08-30 Modernatx Inc ARN modificado terminalmente
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
HRP20220070T1 (hr) 2014-04-23 2022-04-01 Modernatx, Inc. Cjepiva nukleinske kiseline
JP6754761B2 (ja) 2014-07-11 2020-09-16 セルジーン コーポレイション Ｔリンパ球へのベクター導入効率の改善方法
KR101668074B1 (ko) 2015-02-12 2016-10-21 전북대학교산학협력단 Ｐｋｒ 저해제를 유효성분으로 포함하는 기관지 천식의 예방 또는 치료용 조성물
CN107592807B (zh) 2015-02-26 2022-04-15 Sio2医药产品公司 具有耐划伤且抗静电的涂层的环烯烃聚合物容器
EP3405579A1 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
WO2017180917A2 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Modernatx, Inc. Lipid compositions and their uses for intratumoral polynucleotide delivery
ES2941411T3 (es) 2016-05-18 2023-05-22 Modernatx Inc Polinucleótidos que codifican interleucina-12 (IL12) y usos de los mismos
CN114176043B (zh) * 2016-06-14 2024-04-23 明尼苏达大学董事会 用于治疗疾病的遗传修饰的细胞、组织和器官
WO2018132712A1 (en) * 2017-01-12 2018-07-19 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. High-throughput and single nucleotide resolution techniques for the determination of rna post-transcriptional modifications
WO2018231990A2 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase
AU2021252164A1 (en) 2020-04-09 2022-12-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998004717A2 (en) * 1996-07-30 1998-02-05 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Double-stranded rna dependent protein kinase derived peptides to promote proliferation of cells and tissues in a controlled manner
IL126757A0 (en) * 1998-09-07 1999-08-17 Yissum Res Dev Co Regulation of gene expression through manipulation of mRNA splicing and its uses
PT2796553T (pt) 2000-03-30 2019-09-27 Massachusetts Inst Technology Mediadores de interferência de arn específicos de sequência de arn
EP2072618A1 (en) * 2007-12-14 2009-06-24 Johannes Gutenberg-Universität Mainz Use of RNA for reprogramming somatic cells
WO2010124143A1 (en) * 2009-04-23 2010-10-28 Nevada Cancer Institute Reprogramming of somatic cells with purified proteins

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017079749A (ja) 2017-05-18
CA2819522C (en) 2019-07-16
WO2012072096A8 (en) 2012-07-26
LT2646557T (lt) 2017-10-10
JP2013545469A (ja) 2013-12-26
HUE034558T2 (en) 2018-02-28
DK2646557T3 (en) 2017-10-02
WO2012072096A1 (en) 2012-06-07
CA2819522A1 (en) 2012-06-07
JP6131433B2 (ja) 2017-05-24
AU2011335428A1 (en) 2013-05-30
AU2011335428B2 (en) 2016-12-22
WO2012072269A1 (en) 2012-06-07
US20140030808A1 (en) 2014-01-30
PT2646557T (pt) 2017-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2640875T3 (es) Método para la expresión de ARN celular
ES2312753T5 (es) Procedimientos para producir moléculas de ARN de interferencia en células de mamífero y usos terapéuticos para tales moléculas
Aparicio et al. Adenovirus virus-associated RNA is processed to functional interfering RNAs involved in virus production
Kurreck siRNA efficiency: structure or sequence—that is the question
Sakamoto et al. Photo-regulation of constitutive gene expression in living cells by using ultrafast photo-cross-linking oligonucleotides
WO2013192576A3 (en) Oligonucleotide-based inhibitors comprising locked nucleic acid motif
JP2014527401A5 (es)
Abe et al. Interaction of human T-cell lymphotropic virus type I Rex protein with Dicer suppresses RNAi silencing
JP2008278784A (ja) １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
EP1817416A2 (en) Compositions for treating respiratory viral infections and their use
AR123420A1 (es) Inhibidores de dux4 y métodos de uso de estos
Migault et al. Definition and identification of small RNA sponges: Focus on miRNA sequestration
BRPI0617860A2 (pt) pequenos oligonucleotìdeos de interferência que compreendem nucleotìdeos modificados com arabinose
WO2007149521A2 (en) Nucleotide motifs providing localization elements and methods of use
EP2459230B1 (en) Oligonucleotides inhibiting cellular migration
Schneider et al. Use of fully modified 2′‐O‐methyl antisense oligos for loss‐of‐function studies in vertebrate embryos
WO2009104896A3 (ko) 암 치료용 핵산 의약 조성물
Gvozdeva et al. Nuclease‐resistant 63‐bp trimeric si RNA s simultaneously silence three different genes in tumor cells
AR102762A1 (es) Secuencia de oligonucleótidos para uso en ingeniería de rutas metabólicas
US20100068814A1 (en) Multi-microrna methods and compositions
Zenke et al. Novel fugu U6 promoter driven shRNA expression vector for efficient vector based RNAi in fish cell lines
KR100694804B1 (ko) 작은 헤어핀 ｒｎａ 분자를 포함하는 자궁 내막암 치료또는 예방용 조성물 및 그를 이용한 자궁 내막암 치료 또는예방 방법
WO2005019433A3 (en) VIRALLY-ENCODED RNAs AS SUBSTRATES, INHIBITORS AND DELIVERY VEHICLES FOR RNAi
AR071532A1 (es) Composiciones y metodos para usar arn de interferencia en el control de nematodos
CN105008537B (zh) 抑制核糖体蛋白的胞内表达的小干扰rna