ES2640363T3 - Microgránulos biodegradables con capacidad de adsorción mejorada de fármacos anticancerígenos, que contienen albúmina y sulfato de dextrano, y método para su preparación - Google Patents

Abstract

Microgránulos biodegradables, comprendiendo los microgránulos: (i) albúmina que es reticulada mediante reticulación térmica para formar una estructura de un gránulo; y (ii) sulfato de dextrano, como un polímero aniónico, incluido en el producto reticulado de albúmina.

Description

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DESCRIPCION

Microgranulos biodegradables con capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos, que contienen albumina y sulfato de dextrano, y metodo para su preparacion

Campo tecnico

La presente invencion se refiere a microgranulos biodegradables con una capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos, y un metodo para su preparacion, y un metodo para el tratar el cancer mediante su uso.

Antecedentes de la tecnica

El reciente desarrollo de tecnologias de formacion de imagenes puede localizar un cancer que se oculta en el cuerpo y, por tanto, el cancer ser eliminado mediante diversos metodos como irradiacion de radiaciones y operacion por endoscopia. Sin embargo, incluso aunque se encuentre la localizacion exacta de los canceres, la exclusion quirurgica de los canceres es imposible debido a varias razones, como la extension del cancer fuera todo el conjunto de organos o la anexion a otro organo. El cancer de higado, el cancer de pancreas o similares, incluso aunque sean detectados, no pueden ser radicalmente curados a traves de una operacion quirurgica.

Actualmente, la quimioembolizacion transarterial (TACE), que se hace lo mas habitualmente en el tratamiento de un tumor de higado, es un tratamiento en el que un farmaco anticancerigeno es administrado a la arteria que suministra nutricion al tumor del higado, y seguidamente el vaso sanguineo es bloqueado. Los tejidos del higado reciben oxigeno y nutrientes a traves de la vena portal que gira alrededor del intestino delgado y el intestino grueso, y la arteria hepatica, que sale directamente de la arteria principal.

Los tejidos vivos normales reciben sangre principalmente de la vena portal y los tejidos tumorales reciben sangre principalmente de la arteria hepatica. Por lo tanto, en los casos en que es administrado un farmaco anticancerigeno a la arteria hepatica, que suministra nutricion al tumor, y seguidamente la vena sanguinea es bloqueada, solamente el tumor puede ser selectivamente necrotizado sin danar los tejidos de higado normales. Este tratamiento tiene muchas ventajas, como no tener restricciones segun el progreso del cancer y, por tanto, tener una amplia gama de aplicaciones y tener pocas limitaciones en los objetos del tratamiento y, por tanto, actualmente constituye una gran contribucion a la mejora en la tasa de curacion del cancer de higado. En cuanto a la quimioembolizacion, se inserta en primer lugar un cateter en la arteria femoral en la ingle y se aproxima a la arteria hepatica y seguidamente se inyecta un medio de contraste vascular para obtener la informacion necesaria para el tratamiento, como las posiciones, tamanos y aspectos de suministro de sangre a los tumores. Cuando esta decidido el protocolo de tratamiento, se inserta un tubo fino con un grosor de aproximadamente 1 mm en el cateter y seguidamente se encuentra la arteria que va a ser dirigida a diana, seguido de una operacion quirurgica.

Actualmente, de forma representativa, la embolizacion hepatica usando lipiodol ha sido clinicamente aplicada lo mas frecuentemente y se ha informado tambien de un numero significativo de tecnologias de patentes usando la embolizacion hepatica. El lipiodol contiene mucho yodo como elemento constituyente y, por tanto, permite la formacion de imagenes CT proporcionando asi un procedimiento quirurgico conveniente. Sin embargo, con el fin de introducir doxorubicina, una inyeccion en la que un farmaco esta disuelto necesita ser agitada y mezclada con lipiodol aceitoso inmediatamente antes de la operacion quirurgica. Ademas, se ha informado clinicamente que despues de la operacion quirurgica, la doxorubicina disuelta en fase acuosa no se acumula en el sitio del cancer de higado, sino que escapa inmediatamente en la sangre corporal, no consiguiendo asi la obtencion de un efecto anticancerigeno suficiente y provocando un efecto secundario considerable en los pacientes.

La patente de EE.UU. n° 7.442.385 describe un metodo en el que, despues de que se reticula poli(alcohol vinilico) (PVA) para preparar particulas de tamano micrometrico, la doxorubicina como farmaco anticancerigeno es adsorbida sobre las superficies de los granulos a traves de una atraccion electrica y seguidamente es transferida al sitio del cancer de higado, consiguiendo asi una liberacion sostenida del farmaco anticancerigeno asi como un efecto de embolizacion. Para conseguir esto, durante un procedimiento de reticulacion de poli(alcohol vinilico), el acido 2- acrilamido-2-metilpropano-sulfonico (AMPS), que es un monomero anionico, se una covalentemente al extremo de la reticulacion para modificar el polimero, permitiendo asi que el polimero adsorba un farmaco anionico, como la doxorubicina. Sin embargo, segun la embolizacion hepatica usando poli(alcohol vinilico), el PVA reticulado no se degrada en el cuerpo y, por tanto, despues de la necrotizacion del tumor de higado, los granulos de PVA estaban irregularmente difundidos en el cuerpo, provocando una inflamacion o, de forma mas desafortunada, los granulos de PVA pasan al vaso sanguineo y se extienden a otro organo, provocando una enfermedad cerebrovascular. Por tanto, se requiere un sistema de suministro de farmaco capaz de conseguir una funcion como portador de farmacos anticancerigenos, asi como una funcion de embolizacion vascular para resolver los problemas que anteceden. El documento WO 95/13798 A1 y la publicacion de CHEN, Y. ET AL. ("SYNTHESIS OF ALBUMIN-DEXTRAN SULFATE MICROSPHERES POSSESSING FAVOURABLE LOADING AND RELEASE CHARACTERISTICS FOR THE ANTICANCER DRUG DOXORUBICIN", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, vol. 31, n°. 1, agosto de 1994 (1994-08), paginas 49-54, DOI: 10,1016/0168-3659(94)90250-X) describen microgranulos que comprenden dextrano y albumina quimicamente reticulada. Ademas, cuando se preparan los microgranulos su usa normalmente

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un agente reticulante quimico como glutaraldehido. En los casos en que la reticulacion se realice usando glutaraldehido, el flujo de entrada de glutaraldehido en el cuerpo provoca el riesgo de fibrosis de tejidos y, por tanto, es necesario neutralizar completamente el glutaraldehido residual usando hidrogeno-sulfito de sodio al 5% y seguidamente se lava con agua destilada varias veces. Por lo tanto, debido al procedimiento de supresion de glutaraldehido, el procedimiento de preparacion de microgranulos usando glutaraldehido es complejo y costos y el farmaco anticancerigeno adsorbido sobre los granulos, asi como el glutaraldehido, es tambien suprimido, rebajando asi finalmente la velocidad de adsorcion del farmaco anticancerigeno.

En toda esta solicitud, se proporcionan diversas patentes y publicaciones como referencias y citaciones entre parentesis. La descripcion de estas patentes y publicaciones y sus autores se incorporan como referencias a la presente memoria descriptiva en esta solicitud con el fin de describir mas en detalle esta invencion y el estado de la tecnica al que se refiere esta invencion.

Descripcion detallada de la invencion

Problema tecnico

Los presentes inventores se han esforzado en desarrollar un metodo para preparar microgranulos, capaz de resolver el problema de los microgranulos existentes para que el tratamiento local de un cancer no se degrade en el cuerpo permitiendo que se adsorban grandes cantidades de un farmaco anticancerigeno sobre microgranulos y simplificando el procedimiento de preparacion para mejorar la eficacia economica. Como resultado, se uso albumina como un material polimero para formar una estructura de un granulo, y se prepararon microgranulos de forma que el sulfato de dextrano, que es un polimero anionico, fuera incluido en el producto reticulado de albumina con el fin de permitir que un farmaco anticancerigeno se adsorba sobre las superficies de los granulos, y de este modo se completo la presente invencion. Ademas, como consecuencia de la preparacion de microgranulos en la que la albumina fue termicamente reticulada y seguidamente se comprobo la capacidad de adsorcion del farmaco anticancerigeno de los microgranulos, se confirmo que la capacidad de adsorcion de los farmacos anticancerigenos de los presentes microgranulos era considerablemente superior a la de los granulos preparados usando glutaraldehido como agente reticulante y, por tanto, se completo asi la presente invencion.

Por la tanto, un aspecto de la presente invencion es proporcionar microgranulos biodegradables con una capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos.

Otro aspecto de la presente invencion es proporcionar un metodo para preparar microgranulos biodegradables con una capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos.

Todavia, otro aspecto de la presente invencion es proporcionar microgranulos para tratar cancer.

Otros objetos y ventajas de la presente invencion resultaran evidentes a partir de la descripcion detallada que sigue, tomada conjuntamente con las reivindicaciones anejas y los dibujos.

Solucion tecnica

De acuerdo con un aspecto de la presente invencion, se proporcionan microgranulos biodegradables con una capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos, incluyendo el microgranulo:

(i) albumina que es reticulada mediante reticulacion termica para formar la estructura de un granulo; y

(ii) sulfato de dextrano, como un polimero anionico, incluido en el producto reticulado de albumina.

Los presentes inventores se han esforzado en desarrollar un metodo para preparar microgranulos, capaz de resolver el problema en cuanto que los microgranulos existentes para un tratamiento local de cancer no se degradan en el cuerpo, permitiendo que grandes cantidades de un farmaco anticancerigeno se adsorban en los microgranulos, y simplificando el procedimiento de preparacion para mejorar la eficacia economica. Como resultado, se uso albumina como un material polimero para formar una estructura de un granulo y los microgranulos se prepararon de forma que se incluyera sulfato de dextrano, que es un polimero anionico, en un producto reticulado de albumina con el fin de permitir que un farmaco anticancerigeno se adsorba en las superficies de los granulos. Ademas, como resultado de preparar microgranulos en los que la albumina fue termicamente reticulada y verificando seguidamente la capacidad de adsorcion de los farmacos anticancerigenos de los microgranulos, se confirmo que la capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos de los presentes microgranulos era considerablemente superior a la de los granulos preparados usando glutaraldehido como agente reticulante.

Segun una realizacion de la presente invencion, los microgranulos comprenden adicionalmente un farmaco anticancerigeno adsorbido sobre una superficie del granulo mediante una atraccion electrostatica con el polimero anionico.

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En una realizacion especifica, el farmaco anticancerigeno es un farmaco anticancerigeno basado en antraciclina. Ejemplos del farmaco anticancerigeno basado en antraciclina son doxorubicina, daunorubicina, epirubicina, idarubicina, gemcitabina, mitoxantrona, pararubicina, y valrubicina.

En otra realizacion especifica, el farmaco anticancerigeno es irinotecano.

Segun una realizacion de la presente invencion, los microgranulos de la presente invencion son microgranulos para ser usados en una quimioembolizacion para el tratamiento de un cancer solido.

En una realizacion especifica, los microgranulos de la presente invencion son granulos para la quimioembolizacion de cancer de higado (embolizacion de arterias hepaticas). En cuanto al cancer solido al que es aplicable la embolizacion, aparte del tratamiento del cancer de higado, el carcinoma rectal puede ser tratado a traves de la arteria rectal (K. Tsuchiya, Urology, 55(4):495-500 (2000)).

Los microgranulos de la presente invencion incluyen, como elementos constitutivos de los mismos, albumina y sulfato de dextrano. La albumina es termicamente reticulada para actuar como un soporte para formar y mantener la estructura de un microgranulo. El sulfato de dextrano, que es un polimero anionico, es incluido en la albumina reticulada para permitir que el farmaco anticancerigeno se adsorba sobre la superficie de los granulos. La albumina y el sulfato de dextrano, que son ambos materiales polimeros biocompatibles, se pueden degradar en el cuerpo y, por tanto, pueden resolver los problemas provocados por la no degradacion de granulos convencionales usando poli(alcohol vinilico) en el cuerpo, por ejemplo, el poli(alcohol vinilico) esta irregularmente difundido, provocando una inflamacion, o pasa a los vasos sanguineos y se extiende en otro organo, provocando una enfermedad cerebrovascular.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el termino “biodegradable” se refiere a que es capaz de degradarse cuando es expuesto a una solucion fisiologica y, por ejemplo, se refiere a que es capaz de degradarse por el fluido corporal o microorganismos en las estructuras vivas de mamiferos, incluido un ser humano.

Segun una realizacion de la presente invencion, la albumina es una proteina que esta ampliamente distribuida en el fluido corporal e incluye albuminas animales y albuminas vegetales.

En una realizacion especifica, la albumina animal incluye ovalbumina, albumina de suero, lactalbumina y miogen y las albuminas vegetales incluyen leucosina (semillas de cebada), legumelina (guisantes) y lisina (semillas de ricino). La albumina incluye variantes de albumina.

Segun una realizacion de la presente invencion, la reticulacion de la albumina se realiza mediante reticulacion termica. Como se comprueba en los siguientes ejemplos, los microgranulos, en los que albumina estaba reticulada, tenian una capacidad de adsorcion superior de farmacos anticancerigenos a los granulos preparados usando glutaraldehido como agente reticulante; tenian una excelente compatibilidad con el cuerpo debido a la ausencia de uso de un agente reticulante que pueda ser perjudicial para el cuerpo; y tenia ventajas economicas debido a la omision de una etapa de separacion del agente reticulante (veanse las Tablas 2 a 4). La reticulacion de albuminas se puede realizar mediante un agente reticulante de aldehido. El agente reticulante basado en aldehido se puede seleccionar entre el grupo que consiste en glutaraldehido, formaldehido, almidon de dialdehido, aldehido de succinato, acril-aldehido, oxalaldehido, 2-metilacrilaldehido y 2-oxopropanal.

Segun una realizacion de la presente invencion, la capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos de los microgranulos de la presente invencion es de 10-100 mg por 1 ml de microgranulos. La capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos de los microgranulos de la presente invencion es de 20-60 mg por 1 ml de microgranulos para una realizacion especifica, 20-55 mg por 1 ml de microgranulos para otra realizacion especifica y 20-50 mg para 1 ml de microgranulos para todavia otra realizacion especifica.

Segun una realizacion de la presente invencion, la capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos de los microgranulos de la presente invencion se mejora en 20-45% de la cantidad de farmaco anticancerigeno adsorbido sobre los microgranulos preparados en las mismas condiciones, con la excepcion de que se usa un agente reticulante de glutaraldehido en lugar de la reticulacion termica. La capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos de los microgranulos de la presente invencion es mejorada en 21-43% para una realizacion especifica, 22-42% para otra realizacion especifica y 23-41% para todavia otro ejemplo especifico.

Segun una realizacion de la presente invencion, los microgranulos de la presente invencion exhiben una propiedad de liberacion sostenida. Los siguientes ejemplos verificaron que la doxorubicina se liberaba lentamente desde los microgranulos de la presente invencion durante un mes (vease la figura 7).

Los microgranulos de la presente invencion pueden ser preparados en un vial junto con una solucion (tipo de microgranulo humedo) y pueden selectivamente pulverizados para su uso (tipo de microgranulo seco).

De acuerdo con otro aspecto de la invencion se proporciona un metodo para preparar microgranulos biodegradables

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con una capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos, incluyendo el metodo:

(a) emulsionar una solucion para preparar granulos, en la que se disuelven albumina y sulfato de dextrano como un polimero anionico, para formar burbujas de tamano micrometrico; y

(b) reticular termicarmente las burbujas de tamano micrometrico en la etapa (a) para formar microgranulos en los que la albumina es reticulada y se incluye sulfato de dextrano en el producto reticulado de albumina.

Segun una realizacion de la presente invencion, el metodo de la presente invencion puede incluir ademas, despues de la etapa (b), (c) poner los microgranulos de la etapa (b) en contacto con un agente anticancerigeno para permitir que el farmaco anticancerigeno se adsorba sobre las superficies de los microgranulos mediante una atraccion electrostatica del sulfato de dextrano de los microgranulos.

Segun una realizacion de la presente invencion, la relacion en la composicion de albumina y sulfato de dextrano en la solucion para preparar granulos en la etapa (a) es de 15-50:10% (p/v). En los casos en que la cantidad de albumina sea significativamente mas pequena que la de sulfato de dextrano en la solucion para preparar granulos, no se forman granulos fuertemente. En los casos en que la cantidad de sulfato de dextrano sea significativamente mas pequena que la de albumina, se deteriora la capacidad de adsorcion de farmacos anticancerigenos.

La relacion de composicion de albumina y sulfato de dextrano en la solucion para preparar granulos en la etapa (a) es de 15-45:10% (p/v) para una realizacion especifica, 15-40:10% (p/v) para otra realizacion especifica, 15-35:10% (p/v), 5-30:10% (p/v) para todavia otra realizacion especifica, 20-45:10% (p/v) para todavia otra realizacion especifica, 20-40:10% (p/v) para todavia otra realizacion especifica, 20-35:10% (p/v) para todavia otra realizacion especifica y 20-30:10% (p/v) para todavia otra realizacion especifica.

Segun una realizacion de la presente invencion, el emulsionamiento de la solucion para preparar granulos en la etapa (a) se realiza usando un disolvente organico que contiene un aceite natural o un agente de aumento de la viscosidad. Ejemplos de un aceite natural utilizable pueden ser aceite MCT, aceite de semilla de algodon, aceite de maiz, aceite de almendras, aceite de albaricoque, aceite de aguacate, aceite de calabaza, aceite de manzanilla, aceite de manteca de cacao, aceite de coco, aceite de higado de bacalao, aceite de cafe, aceite de pescado, aceite de linaza, aceite de jojoba, aceite de calabaza, aceite de semilla de uva, aceite de avellana, aceite de lavanda, aceite de limon, aceite de semilla de mango, aceite de naranja, aceite de oliva, aceite de vison, aceite de palma, aceite de romero, aceite de sesamo, manteca de karite, aceite de soja, aceite de girasol, aceite de nueces y similares.

Ejemplos del disolvente organico utilizable pueden ser acetona, etanol, acetato de butilo y similares. El disolvente organico puede incluir un agente de aumento de la viscosidad para proporcionar la viscosidad apropiada. Ejemplos del agente de aumento de la viscosidad pueden ser polimeros basados en celulosa, como hidroximetil-celulosa, hidroxipropil-metil-celulosa y acetato-butirato de celulosa. Preferentemente, el disolvente organico que contiene el agente para aumentar la viscosidad es acetato de butilo que contiene acetato-butirato de celulosa.

Segun una realizacion de la presente invencion, las burbujas de tamano micrometrico en la etapa (a) se pueden formar usando un sistema microfluido o un encapsulador. El sistema microfluido es un metodo en el que los granulos se preparan usando un chip microestructurado. Despues de que se coloca un tubo mas pequeno dentro de un tubo mas grande, se permite que fluyan una fase acuosa y una fase aceitosa a traves de los tubos en direcciones opuestas, formando asi granulos por la tension de los mismos. Es decir, cuando la solucion para preparar los granulos en forma de un fluido interno y el aceite natural o disolvente organico (solucion de recogida) en forma de un fluido externo se dejan fluir, se forman los granulos por tension. Los granulos se recogen en la solucion de recogida y seguidamente se preparan los granulos a traves de una reaccion de reticulacion termica.

La encapsulacion es similar al electrohilado, y se caracteriza porque un campo electrico, que se forma entre una boquilla y una solucion de recogida, finalmente divide gotas de agua generadas por tension, dispersando asi gotitas de tamano muy pequeno. La solucion para preparar los granulos se transfiere a una jeringa correspondiente a su volumen y la jeringa se dispone en una bomba de jeringa y seguidamente se conecta a un encapsulador. Ademas, la solucion de recogida se transfiere a un plato correspondiente a su volumen y seguidamente se coloca en un agitador. El entorno del encapsulador se ajusta apropiadamente y seguidamente la solucion para preparar granulos se pulveriza a la solucion de recogida para formar burbujas. Preferentemente, las condiciones del encapsulador son preferentemente de un caudal de 1-5 ml/minuto, energia electrica aplicada de 1.000-3.000 V, onda ultrasonica de 2.000-6.000 Hz y numero de revoluciones de 1.000 rpm. El tamano de una boquilla de liberacion se selecciona segun el tamano de los granulos que van a ser preparados.

Segun otra realizacion de la presente invencion, las burbujas de tamano micrometrico en la etapa (a) pueden ser preparadas mediante un metodo de emulsionamiento en el que una solucion para preparar granulos se mezcla con una solucion de recogida y seguidamente la mezcla se agita a un numero de revoluciones apropiado. En este caso, el tamano de los granulos depende del numero de revoluciones y del tiempo de agitacion. Cuando se forman burbujas de tamano apropiado, la solucion de recogida se calienta, formando asi microgranulos a traves de

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reticulacion termica de albumina.

Segun una realizacion de la presente invencion, la agitacion continua manteniendo una reaccion de reticulacion de albumina hasta que se completa la reaccion de reticulacion de la albumina y, tras completarse la reaccion, los granulos se lavan varias veces usando una gran cantidad de acetona o etanol para lavar la solucion de recogida.

Segun una realizacion de la presente invencion, en la etapa (b) de la presente invencion, las burbujas de tamano micrometrico obtenidas en la etapa (b) se calientan, con lo que la albumina es termicamente reticulada para formar una estructura de un microgranulo y se incluye sulfato de dextrano en el producto termicamente reticulado de albumina.

Segun una realizacion de la presente invencion, la temperatura de reticulacion es de 60-160 °C y el tiempo de reticulacion es de 1 a 4 horas. En una realizacion especifica, la temperatura de reticulacion es de 80-160 °C y el tiempo de reticulacion es de 1 a 4 horas.

Segun una realizacion de la presente invencion, en los casos en los que la albumina es termicamente reticulada, la cantidad de farmaco anticancerigeno adsorbido sobre los microgranulos es aumentado en 20-45% en comparacion con los microgranulos preparados en las mismas condiciones, con la excepcion de que se usa un agente reticulante de glutaraldehido en lugar de la reticulacion termica. La cantidad de farmaco anticancerigeno adsorbido sobre los microgranulos es aumentada en 21-43% para una realizacion especifica, 22-42% para otra realizacion especifica y 23-41% para todavia otro ejemplo especifico.

De acuerdo con todavia otro aspecto de la presente invencion, se proporciona un metodo para tratar cancer, incluyendo el metodo la administracion a un paciente de microgranulos biodegradables con capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos, incluyendo los microgranulos albumina que es reticulada para formar una estructura de un granulos; sulfato de dextrano como un polimero anionico, incluido en el producto reticulado de albumina y un farmaco anticancerigeno adsorbido sobre una superficie de granulo mediante una atraccion electrostatica con el polimero anionico.

Segun la presente invencion, los microgranulos de la presente invencion se administran a un paciente de cancer, tratando asi el cancer a traves de quimioembolizacion.

Segun una realizacion de la presente invencion, el paciente es un paciente de cancer de higado y los microgranulos son administrados a la arteria hepatica del paciente.

Efectos ventajosos

Las caracteristicas y ventajas de esta invencion se resumen como sigue:

(i) La presente invencion proporciona microgranulos biodegradables con capacidad de adsorcion mejorada de farmacos anticancerigenos y un metodo para su preparacion y un metodo para tratar el cancer usando los mismos.

(ii) Los microgranulos de la presente invencion son seguros para el cuerpo humano ya que los microgranulos se preparan en forma de un polimero biocompatible y biodegradable y pueden inhibir eficazmente el crecimiento de tumores bloqueando efectivamente el vaso sanguineo que suministra nutricion al tumor de higado y libera continuamente un farmaco anticancerigeno adsorbido sobre la superficie de los granulos.

(iii) La presente invencion puede preparar microgranulos a traves de reticulacion termica. Los microgranulos tienen una capacidad de adsorcion superior de farmacos anticancerigenos en comparacion con los microgranulos preparados usando un agente reticulante quimico, tienen una excelente compatibilidad corporal debido al no uso de un agente reticulante, que puede ser perjudicial para el cuerpo y tienen ventajas economicas debido a la omision de una etapa de separacion del agente reticulante.

(iv) Por lo tanto, la presente invencion puede ser favorablemente utilizada para la quimioembolizacion del cancer de higado.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 es una vista esquematica de un sistema microfluido autofabricado.

La figura 2 muestra imagenes de microgranulos preparados mediante el sistema microfluido segun la relacion de composicion 1.

La figura 3 muestra imagenes de granulos preparados mediante un encapsulador segun la relacion de composicion

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La figura 4 muestra imageries de granulos preparados mediante un metodo de emulsionamiento segun la relacion de composicion 1.

La figura 5 es una vista en seccion transversal de un granulo de albumina/sulfato de dextrano adsorbido en doxorubicina.

La figura 6 es un grafico que muestra un comportamiento de liberacion a corto plazo de granulos de albumina adsorbidos en doxorubicina que no contienen sulfato de dextrano.

La figura 7 es un grafico que muestra un comportamiento de liberacion a largo plazo de granulos de albumina/sulfato de dextrano adsorbido en doxorubicina.

Modo de llevar a cabo la invencion

La presente invencion se describira seguidamente mas en detalle mediante ejemplos. Sera obvio para los expertos en la tecnica que estos ejemplos estan concebidos para ilustrar mas concretamente y que el alcance de la presente invencion como se expone en las reivindicaciones anejas, no esta limitado por los ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo preparativo: Preparacion de microgranulos 1. Composicion de microgranulos

Las composiciones de albumina y polimero anionico para preparar microgranulos se muestran en la tabla 1 siguiente.

Tabla 1

p/v %

Composicion 1 Composicion 2 Composicion 3 Composicion 4 Composicion 5

Albumina

Albumina de suero humano 20 30 - - 10

Albumina de suero bovino

- - 20 30 10

Polimero anionico

Sulfato de dextrano 10 10 10 10 10

2. Preparacion de granulos usando microfluidos

Como se muestra en la figura 1, las soluciones que tienen composiciones de 1 a 5 anteriores como fluidos internos, se deja que fluyan hasta un caudal de 2 ml/h a traves de un sistema microfluido autoproducido y un aceite de MCT, que es un aceite de recogida, como un fluido externo, se deja que fluya a un caudal de 10 ml/h, formando asi los granulos. Seguidamente, los granulos formados se recogen en una solucion de recogida que contiene glutaraldehido como agente reticulante, seguido de reaccion con agitacion durante 24 horas. La figura 2 muestra imagenes de microgranulos preparados mediante el sistema microfluido segun la relacion de composicion 1.

3. Preparacion de granulos para quimioembolizacion usando un encapsulador

Se prepararon granulos con las composiciones 1 a 5 anteriores usando un encapsulador (B-390, BUCHI). Las condiciones de preparacion fueron: un caudal de 1 a 5 ml/min, energia electrica aplicada de 1.000-3.000 V, onda ultrasonica de 2.000-6.000 Hz y numero de revoluciones de 100 rpm. El tamano de la boquilla de liberacion se selecciono segun el tamano de los granulos que iban a ser preparados. Los granulos preparados se recogieron en una solucion de recogida y seguidamente se agitaron durante 24 horas. Como solucion de recogida, se uso acetato de butilo que contenia 5-10% de acetato-butirato de celulosa o acetona que contenia propil-metil-celulosa. La figura 3 muestra imagenes de los microgranulos preparados mediante el sistema microfluido segun la relacion de composicion 1.

4. Preparacion de granulos para quimioembolizacion usando encapsulador

Se formaron granulos con las mismas composiciones y bajo las condiciones del ejemplo 3 con la excepcion de que no se uso el agente reticulante y la solucion de recogida se calento a 120 °C para albumina termicamente reticulada, que es una proteina, formando asi los granulos. El tiempo de reaccion fue de 2 horas.

5. Preparacion de granulos para quimioembolizacion usando emulsionamiento

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Las soluciones que tenian las composiciones 1 a 5 anteriores se mezclaron con una solucion de recogida, seguido de agitacion. Simultaneamente con la agitacion, se anadio glutaraldehido como agente reticulante. La reaccion se realizo durante 24 horas. Como solucion de recogida, se uso acetato de butilo que contenia 5-10% de acetato- burilato de celulosa o acetona que contenia propil-metil-celulosa. La figura 4 muestra imagenes de los granulos preparados mediante el metodo de emulsionamiento segun la relacion de composicion 1.

Ejemplo de ensayo 1: Ensayo de adsorcion de doxorubina

El ensayo de adsorcion de doxorubicina se realizo como sigue. En primer lugar, se disolvieron 50 mg de doxorubicina en 2 ml de agua destilada. Seguidamente se tomo 1 ml de granulos y se puso en una solucion de doxorubicina y a continuacion se mezclo bien. Despues de que la mezcla se dejara a temperatura ambiente durante 20 minutos, se tomo la parte sobrenadante y se midio la absorbancia a 483 nm mediante un espectrometro ultravioleta. La cantidad de doxorubicina que escapo a partir de 50 mg/2 ml de solucion de doxorubicina se puede determinar calculando la concentracion a traves de la comparacion con la curva de calibracion previamente preparada, y este valor fue la cantidad de doxorubicina adsorbida sobre los granulos. Los resultados del ensayo se muestran en la tabla 2.

Tabla 2

Albumina:sulfato de dextrano

20:10 30:10

Escape de la reticulacion termica

45±1 mg/ml 33±1 mg/ml

Escape de glutaraldehido

34±1 mg/ml 25±1 mg/ml

Como se muestra en la tabla 2, las cantidades de adsorcion de doxorubicina de los granulos que tienen las composiciones 1 y 3 fueron de 33-35 mg/ml para una reticulacion usando glutaraldehido, etildimetilaminopropilcarbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS), pero de 44-46 mg/ml para la desnaturalizacion de proteina a traves de la aplicacion de calor. Ademas, las cantidades de adsorcion de doxorubicina de los granulos que tenian las composiciones 2 y 4 fueron de 24-26 mg/ml para una reticulacion con glutaraldehido pero de 32-34 mg/ml para una desnaturalizacion de proteina a traves de la aplicacion de calor.

Como resultado de ensayar las cantidades de adsorcion de daunorubicina y epirubicina mediante el mismo metodo, las cantidades de adsorcion de daunorubicina y epirubicina se comprobo que eran equivalentes a las cantidades de adsorcion de doxorubicina (Tabla 3).

Tabla 3

Clasificacion

Doxorubicina Daunorubicina Epirubicina

Albumina:Sulfato de dextrano

20:10 30:10 20:10 30:10 20:10 30:10

Reticulacion termica (mg/ml)

45±1 33±1 44±1 31 ±1 43±1 32±1

Reticulacion de glutaraldehido (mg/ml)

34±1 25±1 32±1 24±1 33±1 23±1

Ejemplo de ensayo 2: Verificacion de glutaraldehido residual

El glutaraldehido residual despues de la reticulacion se neutralizo con hidrogeno-sulfito de sodio al 5%. En este caso, con el fin de verificar la cantidad residual de glutaraldehido segun el numero de veces de tratamiento, el tratamiento con hidrogeno-sulfito de sodio se realizo durante un numero diferente de veces, 0, 1 y 5 veces y durante 30 minutos cada vez. Despues de esto, el glutaraldehido residual se confirmo a 483 nm usando HPLC. Se midio tambien la cantidad de adsorcion de doxorubicina para cada grupo. Los resultados del ensayo se muestran en la tabla 4.

Tabla 4

Sin neutralizacion Neutralizacion una vez Neutralizacion cinco veces

Glutaraldehido residual (pg/ml)

113,6 22,2 14,6

Doxorubicina adsorbida (mg/ml)

44,6±0,3 38,7±0,2 38,2±0,4

Como se puede comprobar en la tabla 4, cuando se repitio la desnaturalizacion, la cantidad residual de glutaraldehido disminuyo, pero disminuyo tambien la cantidad de adsorcion de doxorubicina. El flujo de entrada del glutaraldehido residual en el cuerpo puede provocar riesgo de fibrosis de tejidos. Sin embargo, como se puede comprobar en el ejemplo de ensayo 1, cuando se prepararon granulos mediante reticulacion de albumina a traves de calentamiento, no hay peligro de glutaraldehido residual y la capacidad de adsorcion mejoro (42-46 mg/ml de

adsorcion de doxorubicina). La capacidad de adsorcion anterior es bastante mayor que la capacidad de adsorcion de doxorubicina (37 mg/ml) y se adquirieron granulos de DC de la entidad Biocompatible UK, que estan actualmente en el comercio. Ademas, cuando los granulos se producen en masa a escala industrial, no es necesario el procedimiento de neutralizacion de glutaraldehido, simplificando asi el procedimiento.

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Ejemplo de ensayo 3: ensayo de liberacion de doxorubicina

Se comprobo la liberacion de doxorubicina para dos grupos. En primer lugar, los granulos se dividieron fundamentalmente en un grupo de granulos de albumina/sulfato de dextrano para comprobar el comportamiento de 10 liberacion de los granulos y un grupo de granulos de albumina que no contenia sulfato para comprobar la influencia del sulfato de dextrano como polimero anionico. El metodo de ensayo fue como sigue. Se pusieron granulos correspondientes a 3,5 mg de doxorubicina en un tubo conico de 50 ml, que se relleno con 50 ml de solucion de liberacion (PBS, pH 7,4), seguido de incubacion a 37 °C. La solucion de liberacion se recogio toda en el momento de la recogida y seguidamente se intercambio con una solucion de liberacion nueva. La curva de liberacion se calculo 15 como un valor acumulativo. El farmaco liberado se analizo mediante HPLC. Los resultados se muestran en las figs. 6 y 7.

Como se muestra en la figura 6, la doxorubicina se adsorbio tambien en los granulos de albumina que no contenian sulfato de dextrano debido a la polaridad de la propia proteina, pero su comportamiento de liberacion fue muy 20 rapido. Mientras tanto, como se muestra en la figura 7, la atraccion electrostatica de los granulos de albumina que contenian sulfato de dextrano era mas fuerte, y por tanto se libero lentamente doxorubicina durante un mes.

Claims (10)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   REIVINDICACIONES

   1. Microgranulos biodegradables, comprendiendo los microgranulos:

   (i) albumina que es reticulada mediante reticulacion termica para formar una estructura de un granulo; y

   (ii) sulfato de dextrano, como un polimero anionico, incluido en el producto reticulado de albumina.
2. 2. Los microgranulos de la reivindicacion 1, que comprenden adicionalmente un farmaco anticancerigeno adsorbido sobre una superficie del granulo por una atraccion electrostatica con el polimero anionico.
3. 3. Los microgranulos de la reivindicacion 2, en los que el farmaco anticancerigeno es un farmaco anticancerigeno basado en antraciclina.
4. 4. Los microgranulos de la reivindicacion 3, en que el farmaco anticancerigeno basado en antraciclina se selecciona entre el grupo que consiste en daunorubicina, doxorubicina, epirubicina, idarubicina, gemcitabina, mitoxantrona, pirarubicina y valrubicina.
5. 5. Los microgranulos de la reivindicacion 2, en que el farmaco anticancerigeno es irinotecano.
6. 6. Los microgranulos de la reivindicacion 1, que tienen una capacidad de adsorcion de farmaco anticancerigeno de 10-100 mg por 1 ml de microgranulos.
7. 7. Microgranulos biodegradables, comprendiendo los microgranulos:

   (i) albumina que es reticulada mediante reticulacion termica para formar una estructura de un granulo; y

   (ii) sulfato de dextrano, como un polimero anionico, incluido en el producto reticulado de albumina; para ser usados en quimioembolizacion.
8. 8. Los microgranulos para ser usados de la reivindicacion 7, en los que la quimioembolizacion es una quimioembolizacion para cancer de higado.
9. 9. Un metodo para preparar microgranulos biodegradables, comprendiendo el metodo:

   (a) emulsionar una solucion para preparar granulos, en que se disuelven albumina y sulfato de dextrano como un polimero anionico, para formar burbujas de tamano micrometrico; y

   (b) reticular termicamente las burbujas de tamano micrometrico de la etapa (a) para formar microgranulos en los que la albumina es reticulada y es incluido sulfato de dextrano en el producto reticulado de albumina.
10. 10. El metodo de la reivindicacion 9, que comprende adicionalmente, despues de la etapa (b), (c) poner en contacto los microgranulos de la etapa (b) con un farmaco anticancerigeno para permitir que el farmaco anticancerigeno se adsorba sobre la superficie de los microgranulos mediante una atraccion electrostatica del sulfato de dextrano de los microgranulos.