ES2625227T3 - Método para promover inmunoterapias - Google Patents

Abstract

Uso de ligandos específicos para anticuerpos autólogos o para antígenos solubles asociados con cáncer, en muestras de sangre para la fabricación de una columna, que exhibe los ligandos unidos a ella, para el tratamiento de cáncer caracterizado porque el tratamiento comprende las etapas de: a) preparación de una muestra de sangre de un paciente; b) someter la muestra de sangre a una inmunoaféresis usando la columna así como administrar al paciente la muestra de sangre tratada de esta manera; c) administración al paciente un anticuerpo con eficacia terapéutica en cuyo caso la sustancia terapéuticamente activa está dirigida contra antígenos asociados al cáncer t.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

DESCRIPCION

Metodo para promover inmunoterapias

La presente invencion se refiere al uso de ligandos especlficos para anticuerpos autologos o para antlgenos solubles asociados a cancer en muestra de sangre, para la fabricacion de una columna, que tiene los ligandos acoplados a ella, para el tratamiento de cancer.

Ademas del tratamiento de cancer convencional que se basa en medidas quirurgicas, en el uso de medicamentos quimioterapeuticos y/o en irradiacion, se ha establecido la inmunoterapia con anticuerpos. De la misma manera, como una terapia opcional se reconoce ya una gran cantidad de productos biotecnologicos, entre los cuales tambien se cuentan, entre otros, los anticuerpos terapeuticos para el tratamiento de enfermedades autoinmunes. En la actualidad, en estudios cllnicos se investigan los llamados anticuerpos que neutralizan el VIH para el tratamiento del sida.

Las estructuras diana-objetivo, los llamados antlgenos, difieren en gran medida para las diversas enfermedades y los modos de accion de las respectivas terapias con anticuerpos pueden ser muy diferentes dependiendo de estas estructuras diana. Los antlgenos de superficie que sirven como estructuras diana para el tratamiento de enfermedades malignas son, entre otros, protelnas de membrana permanente (EGFR/HER2/VEGFR), asociadas al cancer, sobre expresadas o tambien protelnas especlficas de celula (CD20/CD52). La cantidad de las celulas positivas de antlgeno en el desarrollo de linfomas es extremadamente grande, de modo que una reduccion en esta poblacion de celulas representa un objetivo terapeutico reconocido. Ademas del tratamiento de linfomas, la disminucion orientada a una diana de las celulas positivas de antlgeno tambien es adecuada para tratar enfermedades autoinmunes y opcionalmente para suprimir la respuesta inmune como, por ejemplo, en el caso de trasplantes. Los anticuerpos o tambien las protelnas de fusion, dirigidos contra mensajeros celulares como el factor de necrosis del tumor soluble, son medicamentos importantes para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.

Los primeros anticuerpos monoclonales modernos (inmunoglobulina principalmente del tipo IgG1) eran de origen de murino, es decir se produjeron mediante llneas celulares de hibridoma de ratones o de ratas. Estas moleculas de IgG1 se reconocen como ajenas, sin embargo, por parte del organismo del ser humano, de modo que son neutralizadas por el sistema inmune humano. Por esta razon, han sido preparados anticuerpos mas modernos, llamados quimericos, que se componen de porciones de murino y porciones humanas en la estructura de IgG. La llamada humanizacion, hasta la variante optimizada de modo biotecnologico de los anticuerpos completamente humanos, representa el siguiente paso a una mayor minimizacion de las porciones de murino. Anticuerpos IgG1 quimericos, humanizados y humanos, durante la terapia pueden emplearse durante un perlodo de tiempo mas largo, por ejemplo durante meses. (Abdullah N., Cancer Immunther. 48, 517-524), (Adams GP, Weiner LM, Nature Biotechnology, 2005; 23(9): 1146 - 1157).

Ademas, se llevan a cabo inmunoterapias con agentes que enlazan el receptor FCg, entre otros. Los receptores FCg (FcR) son una familia de receptores que son especlficos para las partes Fc de la inmunoglobulina (IgG). Estos receptores tienen tareas importantes en el sistema inmune normal y su resistencia a infecciones. De esta manera, IgG son una clase de moleculas que enlazan los receptores FCg

Hay receptores para cada clase de inmunoglobulina. Estos se definen por la clase de inmunoglobulina a la cual se enlazan. Por ejemplo, el receptor FCg ( FCgR) enlaza IgG, el receptor Fce (FceR) enlaza IgE, etc. entre los receptores FCgR se hace una distincion entre tres miembros de subfamilias: FCgRI, el cual es un receptor con gran afinidad por IgG, FCgRII, que son receptores con afinidad mas baja por IgG, los cuales sin embargo se enlazan bien a agregados de los complejos inmunes, y FCgRIII los cuales son receptores con baja afinidad que se enlazan a complejos inmunes.

A pesar de que todos estos receptores estan relacionados estructuralmente entre si, estos tienen diversas tareas.

FCgR se expresan por la mayorla de celulas hematopoyeticas y desempenan un papel clave en el enlazamiento a IgG durante la homeostasis del sistema inmune y la defensa contra infecciones. Principalmente, FCgRII es un receptor con afinidad baja por IgG, el cual se enlaza esencialmente solo a complejos inmunes de IgG, y se expresa en una gran cantidad de piezas de celula, que comprenden, por ejemplo, monocitos, macrofagos, neutrofilos, eosinofilos, plaquetas y linfocitos B.

Los receptores FCg participan en diversas respuestas inmunes e inflamatorias que incluyen citotoxicidad facilitada por celulas y dependiente de anticuerpos (ADCC). La citotoxicidad celular facilitada por anticuerpos (ADCC) es responsable del efecto de medicamentos biologicos como, por ejemplo, de anticuerpos poli- y monoclonales, pero tambien de protelnas de fusion. La efectividad de la ADCC esta directamente relacionada con la interaccion descrita de la region constante del anticuerpo, o tambien con las propiedades de enlace de la protelna correspondiente con

los receptores FCg. Para la ADCC, el enlace a los receptores FCg I y III activadores parece ser relevante; por lo contrario, el enlace de un medicamento predominantemente a receptores FCgII suprime la respuesta inmune.

Un uso continuo de protelnas terapeuticas, tales como, por ejemplo, de anticuerpos o de agentes que enlazan FcR, principalmente para tratar enfermedades cancerosas y autoinmunes, enfermedades infecciosas y para suprimir 5 reacciones de rechazo de trasplantes, se ve limitado porque estos medicamentos tienen que aplicarse en dosis altas durante una terapia continua.

Al usar anticuerpos, otro anticuerpo, aunque incluso tambien humanizado o humano, se reconocen estas protelnas ajenas por parte del sistema inmune del paciente y dependiendo de la inmunogenicidad respectiva se neutralizan mediante el desarrollo de anticuerpos (anticuerpos humanos anti-especies) propios del organismo (autologos). Esta 10 respuesta inmune es facilitada por, por ejemplo, anticuerpos humanos anti-murinos (HAMA) en el caso de anticuerpos murinos, HARA en el caso de anticuerpos de conejos, (HAMA) en el caso de anticuerpos murino o por anticuerpos humanos anti-humanos (HAHA) en el caso de anticuerpos humanizados o humanos. Obviamente, productos de anticuerpos mono- y policlonales que se obtienen a partir de otras especies tales como, por ejemplo, ratas, caballos, cabras, ovejas, reses o tambien cerdos, tambien inducen el desarrollo de anticuerpos humanos 15 dirigidos contra las especies respectivas, lo cual con frecuencia puede conducir a reacciones inmunes fuertes y a una perdida de eficiencia. Esta forma de anticuerpos autologos contra anticuerpos de otros organismos se denomina de manera sinoptica anticuerpos humanos anti-especies.

La inmunogenicidad de los productos biotecnologicos, exogenos limita su efectividad terapeutica, por ejemplo por el desarrollo de la respuesta de HAMA y HAHA arriba descrita del sistema inmune.

20 La relativamente baja efectividad observada in vivo de las preparaciones terapeuticas de anticuerpo contrasta fuertemente con la citotoxicidad celular facilitada por anticuerpo (ADCC) frecuentemente muy alta que ha sido detectada en previas investigaciones in vitro. Este fenomeno tambien ocurre en terapias de combinacion de terapias medicamentosas convencionales, por ejemplo quimioterapias, con inmunoterapias. Si en lo sucesivo se habla en general de medicamentos, esto quiere decir medicamentos convencionales sin efecto inmunoterapeutico, muy 25 particularmente se entiende de manera preponderante que son productos quimioterapeuticos y/o citostaticos. Una posible explication de este fenomeno es la inhibition descrita de los anticuerpos terapeuticos por medio de HAMA/HaHa (Preithner, S. et al. en Molecular Immunology, 43 (2006) 1183-1193.) Ademas, las IgG1 de procedencia natural representan moleculas en la sangre del paciente que de manera comparable compiten con los anticuerpos terapeuticos por los receptores Fc correspondientes, ya que estas IgG1 tambien se enlazan a los 30 receptores correspondientes y de esta manera los ocupan.

Se esperaba que los anticuerpos humanizados o humanos conducirlan a una efectividad mejorada y a un mejor perfil de seguridad. Como ya se ha mencionado arriba, de manera sorprendente casi todos los anticuerpos humanizados o humanos tambien presentan una efectividad dramaticamente disminuida in vivo, en comparacion con una actividad in vitro.

35 Por lo tanto, es necesario administrar al paciente dosis de anticuerpos que sean varias veces mas altas, por lo cual se incrementa el riesgo de efectos secundarios no deseados.

En el caso de un uso dirigido de quimioterapias clasicas en combinacion con inmunoterapias a base de anticuerpos, lo cual es una terapia estandar aceptada en el campo de la oncologla para el tratamiento de diversas enfermedades malignas, por ejemplo en el caso de cancer de mama (Trastuzumab), linfomas (Rituximab) o tambien en el caso de 40 cancer de intestino (Cetuximab y Panitumumab), la efectividad necesaria tampoco se logra in vivo, tal como ya se indico previamente.

El incremento sinergico en la efectividad de la terapia de combinacion ha sido descrito cllnicamente y pre- cllnicamente. Los mas nuevos hallazgos basados en experimentos in vitro demuestran que la interaction con celulas positivas a FcR, tales como NK, DC y similares, es la base del sinergismo observado. Se ha demostrado que, por 45 una parte, mediante el uso de medicamentos tales como, por ejemplo, Paclitaxel (Miura D. et al., Journal of Clinical Oncology, 2007, Part I. Vol 25, No. 18S (suplemento del 20 de junio), Lenalidomida y Pomalidomide (Bartlett J.B. et al., Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S (suplemento del 20 de junio)), pero tambien inhibidores de cinasa como, por ejemplo, Sorafinib (Hipp et al, Journal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S (suplemento del 20 de junio) tienen una 50 influencia directa en la homeostasis de las celulas que presentan antlgeno pero tambien en diversas poblaciones de celulas T, tales como, por ejemplo, celulas T citotoxicas (CTLs). Para Sorafinib se ha detectado una influencia negativa en las celulas que presentan antlgeno y el desarrollo de una respuesta CTL, por lo cual los inhibidores de cinasa tales como Sunitib aparecen como adecuados para una terapia de combinacion con inmunoterapeuticos, tambien diversos inhibidores de cinasa Her2 tales como, por ejemplo, Lapatinip o tambien Canertinib. En los trabajos 55 citados arriba, el efecto sinergico se atribuyo a las poblaciones celulares positivas a FcR, las cuales facilitan la ADCC.

Cilnicamente, en el caso de terapias de combinacion existentes, desafortunadamente se registra que una mayorla de los pacientes tratados desarrollan mecanismos de resistencia a la quimioterapia usada y a la correspondiente inmunoterapia a base de anticuerpos. Diversos mecanismos desempenan un rol aqul, de manera independiente entre si. Algunos mecanismos de resistencia, dependientes de la diana pero tambien independientes de la diana, 5 han sido descritos para las inmunoterapias listadas arriba (Herceptin:Ritter C.A. et al.,Clinical Cancer Research 2007, 13(16):4909-4919; Valabrega G. et al., Annals of Oncology, 2007; Nahta R, et al., Natl Clin Pract Oncol 2006, 3:269-280; Esteva FJ et al., J Clin Oncol 2002, 20:1800-1808; Nagata Y et al., Cancer Cell 2004, 6:117-127; Scaltriti M et al., J Natl Cancer Inst 2007, 99:628-638; Rituximab: Van Meerten t et al., Clinical Cancer Research Vol. 12, 4027-4035, Julio 1, 2006;).

10 R. A. Montgomery et al. describen (Transplantation, Vol. 70, 887-895, Septiembre 27, 2000) un procedimiento terapeutico para prevenir reacciones de rechazo del trasplante de organos. Aqul se combina una plasmaferesis (PP) con gammaglobulina intravenosa (IVIG) y citogama. Una sobredosis de anticuerpos de Ig administrada en la sangre del paciente conduce a un bloqueo de receptores de Fc y de esta manera a una inmunosupresion. Sin embargo, un bloqueo de los receptores de Fc no es deseable en el contexto de la invencion, sino por lo contrario, los receptores 15 de Fc deben mantenerse especlficamente libres de anticuerpos a fin de que los anticuerpos terapeuticos puedan enlazarse a estos sitios y efectuar una ADCC. Debe excluirse una combinacion de PP/IVIG y opcionalmente citogama.

H. Borberg divulga un metodo para disminuir IgG por medio de una columna de adsorcion de anti-IgG (H. Borberg, Transfusion and Apheresis Science, 34, 2006, 51-73) en combinacion con una administracion de IVIG. Aqul tambien 20 la consecuencia son los problemas arriba descritos de un bloqueo de los receptores de Fc-

La US 6,406,861 B1 manifiesta un metodo para disminuir anticuerpos de virus, principalmente anticuerpos de adenovirus, mediante adsorcion extracorporal con el objetivo de mejorar la eficiencia de una terapia de vector de virus. La US 6,406,861 B1 no se refiere entonces a una inmunoterapia.

Por lo tanto, es objetivo de la presente invencion principalmente mejorar la eficacia de agentes que se unen a Fcy-R, 25 principalmente anticuerpos, de modo que las desventajas descritas previamente puedan evitarse.

Es objetivo de la presente invencion el uso en muestras de sangre de ligandos especlficos para anticuerpos autologos o para antlgenos asociados al cancer solubles, para la fabrication de una columna que exhibe los ligandos acoplados a ella, para el tratamiento de cancer, en cuyo caso el tratamiento comprende los pasos de:

30 a) preparar una muestra de sangre de un paciente;

b) someter la muestra de sangre a una inmunoaferesis usando la columna, y administrar al paciente la muestra de sangre tratada de esta manera;

c) administrar al paciente un anticuerpo con eficacia terapeutica,

en cuyo caso el anticuerpo con eficacia terapeutica esta dirigido contra antlgenos asociados al cancer.

35 En el marco de la invencion, preferiblemente el principio activo que se une al receptor Fcy es un anticuerpo terapeutico, principalmente de modo preferido un anticuerpo monoclonal y/o recombinante o un principio activo con regiones que se unen a FcR, compuesto de fragmentos de anticuerpo o peptidos unidos a agente terapeutico.

Como paso adicional d) puede efectuarse la administracion de un medicamento. De esta manera se obtienen una terapia de combinacion que consiste en un tratamiento medicamentoso con una inmunoterapia.

40 Preferiblemente, la terapia de combinacion debe efectuarse con inmunoglobulinas, sus fragmentos o tambien protelnas de fusion que enlazan CD16 o CD64 de manera dirigida.

Ademas se prefiere que la inmunoglobulina, sus fragmentos o protelna de fusion induzcan una respuesta inmune facilitada por celulas T ademas de la ADCC.

Mas preferible aun es que la inmunoglobulina, sus fragmentos o protelna de fusion contengan anticuerpos 45 biespeclficos con un brazo de enlace CD3.

Asimismo se prefiere una terapia de combinacion con inmunoglobulinas, sus fragmentos o tambien protelnas fusion, en la cual se impida la ocurrencia de resistencias mediante las respuestas celulares antitumorales previamente mencionadas.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Los medicamentos preferidos para el uso de la invencion son productos citostaticos y quimioterapeuticos, principalmente paclitaxel, lenalidomida, pomalidomida, epirubicina, 5Fu y sus derivados, e inhibidores de cinasa tales como sunitinib, lapatinib, canertinib. Ademas, tambien pueden usarse combinaciones de diversos medicamentos tales como CHOP, ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisolona (esteroide), lenalidomidas/dexametasona, pomalidomida/dexametasona y paclitaxel/carboplatina.

En los metodos o usos de la invencion, pueden emplearse inmunoglobulinas con inmunoglobulina humana, quimerica, de murino e hlbrida, cuyos fragmentos o tambien protelnas de fusion que poseen propiedades de enlace CD16/CD64. Ademas se prefieren inmunoglobulinas que estan dirigidas contra antlgenos asociados a tumores, as! como contra antlgenos que estan asociados con linfomas o leucemia, as! como antlgenos que estan asociados con enfermedades autoinmunes. Estos son Her2/neu, EGFR, Epcam, VEGF, VEGFR, MUC-1, CA 125,CEA, MAGE, CD20, CD19, CD40, CD33, anhidrasa carbonica IX, A3, antlgeno especlfico para anticuerpos A33, BrE3-antlgeno, CD1, CDIa, CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD16, CD21, CD22, CD23, CD25, CD30, CD37, CD38, CD40, CD40L CD45, CD 46, CD52, CD54, CD74, CD79a, CD80, CD126, CD138, CD154, B7, la, li, HM1.24, HLA-DR, NCA95, NCA90, HCG y subunidades, CEA (CEACAM-5), CEACAM-6, CSAp, EGFR, EGP-I, EGP-2, Ba 733, factor de induccion de hipoxia (HIF), KC4-antlgeno, KS-I-antlgeno, KS1-4, Le-Y, factor de inhibicion de macrofagos (MIF), MUC2, MUC3, MUC4, P1GF, ED-B fibronectina, NCA 66a-d, PAM-4-antlgeno, PSA, PSMA, RS5, SlOO, TAG-72, T101, TAG TRAIL-R1, TRAIL-R2, p53, Tenascin, IL-6, IL-8, factor-1 de crecimiento de insulina (IGF-I), antlgeno Tn, antlgenos Thomson-Friedenreich, antlgenos de necrosis de tumor y analogos de ellos que se unen a celulas positivas para FcR.

En el paso respectivo b) del uso arriba mencionados se sacan los anticuerpos autologos mediante la inmunoaferesis de la muestra de sangre o los agentes enlazantes de Fcg-R.

La eliminacion de los anticuerpos humanos anti-especies y anticuerpos de IgG del paciente antes de la administracion del anticuerpo terapeutico y en caso de una terapia de combinacion incluso antes de la administracion del medicamento conduce de modo sorprendente a que la efectividad de la terapia de anticuerpos, as! como tambien de la terapia de combinacion pueda mejorarse en muchas veces, y la efectividad in vivo corresponde ahora virtualmente a la efectividad esperada tal como se determino in vitro. La dosificacion de anticuerpos terapeuticos puede disminuirse al menos en cinco veces, preferiblemente 10 veces, en modalidades muy particularmente preferidas en 20 veces, en comparacion con la dosificacion de anticuerpos terapeuticos en caso de metodos convencionales.

La combinacion de medicamentos con inmunoterapia, que ademas de antlgeno asociado a tumor, enlazan de manera dirigida celulas FcR-positivas, superan de esta manera posibles desarrollos de resistencia que podrian facilitarse por los antlgenos (Her2/EGFR/CD20), cascadas de transduccion de senal intracelular secundaria (apoptosis o perdida de PTEN), u otras actividades de cinasa (HER3/PI3K/Akt). Estas inmunoterapias reclutan celulas que presentan antlgeno de manera dirigida, por lo cual las celulas T se activan a su vez mediante senales co-estimulatorias (CD28/CD40).

Los candidatos ideales para una terapia de combinacion representan anticuerpos humanizados completos y biespecificos similares a IgG (Asano et al., 2007, JBC) y anticuerpos biespecificos trifuncionales, preferiblemente quimeras IgG2a/IgG2b raton/rata. En el caso de estas quimeras IgG2a/IgG2b raton/rata, las celulas T se enlazan incluso todavia, de manera dirigida, con las celulas FcR I y III positivas por el segundo brazo de enlace CD-3. Ambos receptores estan entre los receptores facilitadores de ADCC.

Ademas de los anticuerpos trifuncionales, ya existen otras diferentes inmunoterapias que reclutan de manera dirigida celulas CD16- o tambien CD64 positivas (Her2/CD16; CD30/CD16; CD19/CD64; CD15/CD64; Her2/CD64 etc.) o hacen posible un refuerzo de la ADCC mediante propiedades de enlazamiento de FcR mejoradas. Incluso aquellas inmunoterapias en las que se eluden mecanismos de resistencia potenciales y puede concebirse una terapia cinegetica representan candidatos adecuados para una terapia de combinacion.

Una terapia de combinacion con anticuerpos humanizados y biespecificos similares a IgG y/o anticuerpos trifuncionales y una inmunoadsorcion antepuesta no solamente provoca una sinergia mas fuerte respecto de la ADCC y la citotoxicidad facilitada por celulas T, sino que tambien hace posible el tratamiento a largo plazo de la terapia de combinacion con los anticuerpos de murino. La inmunoadsorcion antepuesta tambien neutraliza las inmunoglobulinas potencialmente neutralizantes (HAMA, ADA), que estan dirigidas contra los anticuerpos terapeuticos.

Eliminando los anticuerpos autologos, la inmuno-reaccion a los anticuerpos terapeuticos se vuelve mucho mas suave y la efectividad de los anticuerpos terapeuticos se intensifica in vivo asi de manera sorprendente.

Moleculas que interaction con Fcg-receptores son, por ejemplo, inmunoglobulinas o tambien la proteina C- reactiva pro-inflamatoria (Das, T., FEBS Lett., 2004), las cuales ocupan los Fcg-receptores disponibles.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Un ejemplo es la citotoxicidad celular facilitada por anticuerpos (ADCC) la cual es responsable del efecto de medicamentos biologicos tales como, por ejemplo, anticuerpos poli- y monoclonales, pero tambien de protelnas de fusion. La efectividad de la ADCC esta directamente relacionada con la interaccion de la region constante del anticuerpo pero tambien con las propiedades de enlazamiento de la protelna correspondiente con los Fcg- receptores. El enlace a los receptores activadores FcgI y III parece ser aqul especialmente relevante para la ADCC. El enlace de un medicamento predominantemente a Fcg receptores reprime por lo contrario la respuesta inmune. Por ejemplo, hay anticuerpos biespeclficos que estan dirigidos contra una protelna diana tal como, por ejemplo, HER2 pero tambien al mismo tiempo contra el Fcg-receptor I o el Fcg-receptor III.

Otras sustancias activas preferidas que enlazan los Fcg-receptores son normalmente anticuerpos policlonales y monoclonales de origen animal y humano, anticuerpos recombinantes, anticuerpos monoclonales primatizados, humanizados y humanos, quimericos, dominios de anticuerpos y fragmentos de los mismos, anticuerpos bi-, tri- y multiespeclficos y constructos de fragmentos de anticuerpos, as! como moleculas o sustancias activas que pueden unirse de manera especlfica a receptores Fcy, como protelnas y peptidos naturales y recombinantes que interaction con el receptor Fcy, protelnas de fusion que interaction con los receptores FcY-Rezeptoren, peptidos sinteticos que interaction con los receptores FcY-Rezeptoren y receptores Fcy solubles. as! mismo se entienden dentro de ello tratamientos con sustancias activas que influyen en la expresion de receptores Fcy, como tratamientos con citoquinas y protelna de fusion de citoquina, hormonas o derivados, esteroides, glucocorticoides y sustancias dopaminergicas.

Por ejemplo, el desarrollo de estrategias de inoculacion, utilizando el control dirigido de celulas dendrlticas positivas del Fcg-receptor, por ejemplo mediante el acoplamiento de vacunas de ADN con estructuras de IgG (Zhaoyang You et al., 2001, Cancer Research) ilustra el rango de usos posibles que se abren mediante Fc-receptores y agentes que se enlazan a los mismos.

Sacando las moleculas que interaction con los Fcg-receptores en la sangre, hay menos competencia por los sitios de enlace para un ingrediente activo que enlaza Fcg-R, administrado a continuacion, de modo que las sustancias activas que enlazan Fcg-R ahora pueden enlazarse de manera preferida.

Despues del tratamiento con anticuerpos terapeuticos o con sustancias activas que enlazan Fcg-receptores, o despues de la terapia de combinacion, los anticuerpos autologos tambien pueden retornarse al paciente, por ejemplo a continuacion de la administracion de los agentes que enlazan Fc-R.

El retiro temporal de anticuerpos humanos anti-especies tales como, por ejemplo, HAMA y HARA as! como de anticuerpos de IgG en general es seguro para el paciente y no eleva el riesgo de infecciones.

De acuerdo con la invencion, la muestra de sangre puede ser sangre humana o plasma sangulneo. El plasma en este caso puede obtenerse en una etapa antepuesta, por ejemplo mediante filtracion de plasma o separacion de celulas mediante centrifugado de la sangre.

De esta manera, por ejemplo la sangre del paciente o el plasma tambien puede hacerse pasar en un paso extracorporal por un adsorbente que enlaza agentes que enlazan Fcg, principalmente anticuerpos. La sangre o el plasma pueden retornarse al paciente.

Por el termino "ligandos especlficos" se entienden aquellos ligandos que retiran selectivamente anticuerpos de la sangre aunque no los otros componentes de la sangre.

Como ligando especlfico puede usarse, por ejemplo, la protelna A o moleculas que son equivalentes en su accion a los Fcg-receptores, fragmentos de las mismas, peptidos artificiales, protelnas, etc. Otros ejemplos se indican a continuacion.

La matriz de la columna usada para la inmunoaferesis se compone en este caso de Sefarosa y compuestos acrllicos tal como se describe, por ejemplo, en la EP 222 146 B1.

Antes de aplicar el ligando, la matriz se activa preferiblemente con CN-Br o compuestos con efecto similar.

Como ligandos se usan preferiblemente la protelna A, protelna G, peptidos o anti-anticuerpos. Ademas, como ligandos tambien se consideran receptores FcR, fragmentos de los mismos o moleculas naturales o sinteticas equivalentes con propiedades de enlace equivalentes.

En otra forma preferida de realizacion de la invencion, la remocion extracorporal de anticuerpos humanos anti- especies y de anticuerpos de IgG puede lograrse mediante un sistema de combinacion, que se compone de un

dispositivo para generacion de plasma sangulneo y un segundo dispositivo en el cual el plasma se hace pasar sobre una columna adsorbente. Esta columna adsorbente funciona en teorla como una columna de cromatografla.

La columna adsorbente se compone normalmente de una carcasa plastica biocompatible y contiene 20 a 1500 ml de una matriz inerte sobre la cual estan inmovilizados ligandos especlficos con una afinidad por anticuerpos humanos 5 anti-especies, por ejemplo, tales como HAMA, HARA y IgG1 humana.

Si el plasma se hace pasar sobre la columna adsorbente, los anticuerpos humanos anti-especies y los anticuerpos IgG1 de la sangre del paciente se enlazan por estos ligandos y se eliminan por lo tanto del plasma.

Sistemas y materiales de este tipo son conocidos, por ejemplo, de la EP 0 082 345.

Las columnas absorbentes son regenerables y pueden usarse repetidamente.

10 En un sistema tlpico de dos columnas, solamente una columna esta en uso mientras que la segunda columna se regenera automaticamente. De esta manera la velocidad para la disminucion de las especies que van a agotarse puede incrementarse en hasta 60% durante una unica sesion de tratamiento.

De modo alternativo a esto, tambien pueden usarse columnas mas grandes con mas ligandos selectivos y una mayor capacidad de adsorcion como columnas individuales.

15 Las terapias basadas en anticuerpos que estan dirigidas contra antlgenos solubles, asociados al cancer y enlazados a la membrana celular, se encuentran en la actualidad en evaluacion cllnica. Tales antlgenos asociados a cancer incluyen, entre otros, CH125, PSA, MUC1, MAGE-1, HER2, CEA, AFP, EpCAM. El ligando especlfico usado posee una alta afinidad especlfica de enlace hacia el antlgeno asociado a cancer. Como ligandos principalmente pueden usarse anticuerpos especlficos contra antlgenos asociados a cancer.

20 La adsorcion especlfica de acuerdo con la invention de los antlgenos solubles asociados a cancer conduce a impedir que los anticuerpos terapeuticos o incluso peptidos formen complejos con los antlgenos solubles libres. De esta manera se incrementa la concentration de sustancia activa en la estructura objetivo, el antlgeno sobre la celula, y con esto tambien la efectividad. Ademas, con esto la citotoxicidad celular facilitada por anticuerpo (ADCC) puede habilitarse como respuesta inmune primaria, dirigida contra el tumor positivo a antlgeno y por consiguiente 25 extremadamente eficiente. Ademas, la adsorcion especlfica, por ejemplo de PSA, conduce a un refuerzo en la efectividad de receptores solubles de celula T que se enlazan especlficamente a PSA.

La invencion sigue explicandose por medio de un ejemplo no limitante con referencia a la figura 1.

Ejemplo 1:

Supresion de la inhibition de suero de ADCC facilitada por herceptina mediante absorcion de IgG:

30 Estructura experimental:

1. Sembrado de celulas tumorales (Her-2/neu positiva SKOV-3 celulas de ovario) por una noche;

2. Aislamiento de PBMC (celulas de sangre mononucleares perifericas) de la capa leucocitaria (pellcula de leucocitos);

3. Co-cultivo de PBMC y celulas tumorales con herceptina en presencia de IgG-agotada (Sa) y suero nativo (Sn);

35 4. Las concentraciones de herceptina son de 0,0001, 0,001, 0,01, 0,1, 1 y 10 mg/ml;

5. El tiempo de incubation fue de 20 horas;

6. La medicion de citotoxicidad se efectuo por medio de XTT;

La figura 1 muestra que la citotoxicidad de la PBMC se suprime adicionando suero humano normal (curva PBMC + Sn). Despues de adicionar plasma agotado de IgG (curva PBMC + Sa) queda la citotoxicidad de la PBMC. En el 40 rango inferior de la concentracion de herceptina esta se refuerza aun mas.

Claims (12)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   REIVINDICACIONES

   1. Uso de ligandos especlficos para anticuerpos autologos o para antlgenos solubles asociados con cancer, en muestras de sangre para la fabricacion de una columna, que exhibe los ligandos unidos a ella, para el tratamiento de cancer caracterizado porque el tratamiento comprende las etapas de:

   a) preparacion de una muestra de sangre de un paciente;

   b) someter la muestra de sangre a una inmunoaferesis usando la columna as! como administrar al paciente la muestra de sangre tratada de esta manera;

   c) administracion al paciente un anticuerpo con eficacia terapeutica

   en cuyo caso la sustancia terapeuticamente activa esta dirigida contra antlgenos asociados al cancer t.
2. 2. Uso de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque como ligandos se usan protelna A, protelna G, peptidos y/o anticuerpos.
3. 3. Uso de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque los antlgenos asociados con cancer son elegidos de entre el grupo que comprende CH125, PSA, MUC1, MAGE-1, HER2, CEA, AFP y EpCAM.
4. 4. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 3, caracterizado porque los ligandos son anticuerpos especlficos contra antlgenos asociados a cancer.
5. 5. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la matriz de la columna consiste en Sefarosa o compuestos de acrilo.
6. 6. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la matriz es activada antes de la aplicacion del ligando con CN-Br.
7. 7. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque como etapa d) adicional ocurre la administracion de un medicamento.
8. 8. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque el medicamento es un quimioterapeutico o citostatico.
9. 9. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el medicamento se selecciona de un grupo que comprende paclitaxel, lenalidomida, pomalidomida, epirubicina, 5FU y sus derivados, e inhibidores de cinasa tales como sunitinib, lapatinib, canertinib, o combinaciones de diferentes medicamentos seleccionados del grupo que comprende CHOP, ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisolona (esteroide), lenalidomidas/dexametasona, pomalidomida/dexametasona y paclitaxel/carboplatina.
10. 10. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque los anticuerpos sacados de la muestra de sangre en el paso b) se administran al paciente de nuevo a continuacion del paso c).
11. 11. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la muestra de sangre es sangre humana o plasma sangulneo.
12. 12. Ligandos especlficos para anticuerpos autologos o para antlgenos solubles asociados con cancer, en muestras de sangre, en el que los ligandos estan unidos a una columna, para uso en el tratamiento de cancer, en el que el tratamiento comprende las etapas de

    a) preparar una muestra de sangre de un paciente;

    b) someter la muestra de sangre a una inmunoaferesis usando la columna, as! como administrar al paciente la muestra de sangre tratada de esta manera;

    c) administrar al paciente un anticuerpo con eficacia terapeutica,

    en la que el anticuerpo con eficacia terapeutica esta dirigido contra antlgenos asociados a cancer.