ES2624767T3

ES2624767T3 - Potenciación de tratamientos de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias mediante oligonucleótidos inmunorreguladores (IRO) antagonistas de TLR7 y TLR9

Info

Publication number: ES2624767T3
Application number: ES10783933.4T
Authority: ES
Inventors: Fu-Gang Zhu; Ekambar R. Kandimalla; Sudhir Agrawal
Original assignee: Idera Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Aceragen Inc
Priority date: 2009-06-01
Filing date: 2010-06-01
Publication date: 2017-07-17
Anticipated expiration: 2030-06-01
Also published as: US8987221B2; WO2010141483A2; US20110171209A1; CN102612561A; CA2762206A1; JP2012528867A; WO2010141483A3; JP6275380B2; EP2437791B1; CA2762206C; EP2437791A2

Abstract

Compuesto IRO para la utilización en un procedimiento para tratar terapéuticamente un mamífero que presenta una enfermedad que presenta un componente autoinmunitario o inflamatorio, comprendiendo dicho procedimiento administrar al mamífero un compuesto IRO que presenta la estructura 5'-Nm-N3N2N1CGN1N2N3-Nm -3': en el que: CG es un motivo oligonucleotídico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotídico de pirimidina que es un nucleótido de pirimidina que presenta una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azúcar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleótido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotídico de purina que es un nucleótido de purina que presenta una base que no es guanina o adenina y/o un azúcar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleótido; N1-N3 en cada aparición, es independientemente i) un nucleótido, ii) un derivado nucleotídico que es un nucleótido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azúcar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleótido, o iii) un enlace no nucleotídico siempre que por lo menos un N1-N3 sea un derivado nucleotídico o un enlace no nucleotídico que suprima la actividad del motivo oligonucleotídico; N1-N3, en cada aparición, es independientemente i) un nucleótido, ii) un derivado nucleotídico que es un nucleótido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azúcar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleótido, o iii) un enlace no nucleotídico; Nm y Nm, en cada aparición, es independientemente un nucleótido, derivado nucleotídico que es un nucleótido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azúcar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleótido, o un enlace no nucleotídico; y siempre que además el compuesto contenga menos de 3 nucleótidos de guanosina consecutivos; en el que el motivo oligonucleotídico sería inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotídico o el enlace no nucleotídico que suprime la actividad del motivo oligonucleotídico; en el que m es un número desde 0 a aproximadamente 30 en combinación con un agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-αen una cantidad farmacéuticamente eficaz.

Description

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DESCRIPCION

Potenciacion de tratamientos de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias mediante oligonucleotidos inmunorreguladores (IRO) antagonistas de TLR7 y TLR9.

Antecedentes de la invencion

Campo de la invencion

La invencion en general se refiere al campo de la inmunologfa y la inmunoterapia, y mas especfficamente al tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias por medio de inhibidores competitivos del factor de necrosis tumoral alfa.

Sumario de la tecnica relacionada

La inflamacion es una respuesta biologica compleja de los tejidos del organismo a los agentes proinflamatorios, como los patogenos. En esta respuesta, el organismo intenta eliminar el agente proinflamatorio a la vez que inicia el proceso de curacion. En algunas enfermedades que tienen un componente inflamatorio (por ejemplo enfermedades autoinmunitarias), el sistema inmunitario del organismo responde de forma inapropiada a una sustancia que normalmente esta presente en el organismo. En esta situacion, el sistema inmunitario dana los propios tejidos del organismo.

Historicamente, las enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias han sido tratadas con farmacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE -como aspirina, ibuprofeno o naproxeno), corticosteroides (como prednisona), farmacos antipaludicos (como hidroxicloroquina) u otros medicamentos no especfficos que incluyen metotrexato, sulfasalazina, leflunomida, ciclofosfamida y micofenolato. Sin embargo, la efectividad de estos tratamientos es limitada.

Mas recientemente, se han desarrollado inhibidores competitivos del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) como tratamientos mas especfficos de trastornos autoinmunitarios e inflamatorios. Dichos inhibidores competitivos incluyen etanercept (Enbrel®), infliximab (Remicade®) y adalimumab (Humira®). Estos agentes actuan uniendose a TNF-a, haciendolo por tanto inaccesible a su receptor y, de esta forma, impidiendo que inicie una cascada inflamatoria, y representan una mejora importante en el tratamiento de los trastornos autoinmunitarios e inflamatorios.

Dichos inhibidores competitivos de TNF-a han sido aprobados para el tratamiento de una gran variedad de enfermedades, que incluyen artritis reumatoide, artritis psoriasica, psoriasis, uveitis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn y sarcoidosis.

Se ha demostrado que los inhibidores competitivos de TNF-a son utiles tambien en otras aplicaciones. Popivanova et al. (2008) J. Clin. Invest. 118:560-70, muestra que el bloqueo de TNF-a en ratones reduce la carcinogenesis colorrectal asociada a la colitis cronica. Fries et al. (2008) Int. J. Med. Sci. 5: 169-80, y (2008) Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294:G938-G947, respectivamente, muestran que infliximab y etanercept reducen la apoptosis de enterocitos en colitis experimental en ratones y previenen la perdida de ocludina y zonula occludens-1 in las uniones estrechas de los enterocitos. Coppieters et al. (2006) Arthritis & Rheumatism 54:1856-66, describe que la protefna VHH anti-TNF de camelidos supera la de infliximab y adalimumab en un modelo de raton de artritis reumatoide. Zalevsky et al. (2007) J. Immunol. 179:1872-83, muestra que los inhibidores dominantenegativos de TNF disminuyen la artritis experimental en un modelo de raton. Rubbert-Roth and Finckh (2009) Arthritis Res. Ther. 11 (Suppl 1):S1, revisa las limitaciones de la efectividad de los inhibidores competitivos de TNF-a aprobados por la FDA.

En un enfoque alternativo, Newton et al. (2001) Ann. Rheum. Dis. 60:iii25-iii32, muestra que los inhibidores de TACE, la enzima que convierte pro TNF-a en TNF-a son efectivos en un modelo de raton de artritis.

Lamentablemente, todos los inhibidores competitivos de TNF-a aprobados en la actualidad han estado implicados en el desarrollo de infecciones graves, incluyendo tuberculosis, sepsis e infecciones fungicas. Se ha asociado la disminucion en el recuento de linfocitos, eritrocitos y plaquetas y el aumento de ciertos tipos de cancer al tratamiento con estos farmacos.

Los receptores de tipo Toll (TLR) estan presentes en muchas celulas del sistema inmunitario y se ha descrito que estan implicados en la respuesta inmunitaria innata (Hornung et al., (2002) J. Immunol. 168: 4531-37). En vertebrados, esta familia consiste en diez protefnas denominadas de TLR1 a TLR10, que son conocidas por reconocer patrones moleculares asociados a patogenos a partir de bacterias, hongos, parasitos y virus (Poltorak et al. (1998) Science 282:2085-88; Underhill et al. (1999) Nature 401:811-15; Hayashi et al. (2001) Nature 410:1099103; Zhang et al. (2004) Science 303:1522-26; Meier et al. (2003) Cell. Microbiol. 5:561-70; Campos et al. (2001) J. Immunol. 167:416-23; Hoebe et al. (2003) Nature 424:743-48; Lund (2003) J. Exp. Med. 198:513-20; Heil et al. (2004) Science 303:1526-29; Diebold et al. (2004) Science 303:1529-31; Hornung et al. (2004) J. Immunol.

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173:5935-43). Los TLR son un medio clave por el que los mamfferos reconocen y generan una respuesta inmunitaria a moleculas extranas y tambien proporcionan un medio mediante el cual se vinculan las respuestas inmunitarias innata y adaptativa (Akira et al. (2001) Nat. Immunol. 2:675-80; Medzhitov (2001) Nature Rev. Immunol. 1:135-45). Tambien se ha demostrado que los TLR juegan un papel en la patogenesis de muchas enfermedades, incluyendo autoimmunitarias, infecciosas e inflamatorias (Cook et al. (2004) Nat. Immunol. 5:975-79) y que la activacion de la regulacion mediada por TLR utilizando agentes apropiados puede proporcionar un medio para intervenir en la enfermedad.

Algunos TLR estan ubicados en la superficie celular para detectar e iniciar una respuesta a patogenos extracelulares y otros TLR estan ubicados dentro de la celula para detectar e iniciar una respuesta a patogenos intracelulares. La Tabla 1 representa los TLR, los tipos celulares que contienen el receptor y los agonistas conocidos de estos (Diebold et al. (2004) Science 303:1529-31; Liew et al. (2005) Nature 5:446-58; Hemmi et al. (2002) Nat. Immunol. 3:196-200; Jurk et al. (2002) Nat. Immunol. 3:499; Lee et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:6646-51; Alexopoulou (2001) Nature 413:732-38).

Tabla 1:

Molecula de TLR: Agonista Tipos de celulas que contienen el receptor

TLR de la superficie celular:

TLR2: Lipopeptidos bacterianos Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas mieloides; mastocitos

TLR4: Bacterias gram negativas Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas mieloides; mastocitos; epitelio intestinal

TLR5: Bacterias moviles Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas; epitelio intestinal

TLR6: Bacterias gram positivas Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas; linfocitos B

TLR endosomicos:

TLR3: Virus de ARN bicatenarios Celulas dendrfticas; linfocitos B

TLR7: Virus de ARN monocatenarios; complejos ARN-inmunoglobulina Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas plasmocitoides; linfocitos B

TLR8: Virus de ARN monocatenarios; complejos ARN-inmunoglobulina Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas; mastocitos

TLR9: ADN que contiene motivos "CpG" no metilados; complejos AND inmunoglobulina Monocitos/macrofagos; celulas dendrfticas plasmocitoides; linfocitos B

Se ha mostrado que algunos motivos CpG no metilados presentes en el ADN bacteriano y sintetico activan el sistema inmunitario e inducen actividad antitumoral (Tokunaga et al. (1984) J. Natl. Cancer Inst. 72:955-62; Shimada et al. (1986) Jpn. J. Cancer Res. 77:808-16; Yamamoto et al. (1986) Jpn. J. Cancer Res. 79:866-73). Otros estudios han mostrado que los oligonucleotidos antisentido que contienen dinucleotidos CpG tambien estimulan la respuesta inmunitaria (Zhao et al. (1996) Biochem. Pharmacol. 26:173-82). Estudios posteriores han demostrado que TLR9 reconoce motivos CpG no metilados presentes en el ADN bacteriano y sintetico (Hemmi et al. (2000) Nature 408:740-45). Otras modificaciones de oligonucleotidos de fosforotioato que contienen CpG tambien pueden afectar a su capacidad para actuar como moduladores de la respuesta inmunitaria a traves de TLR9 (vease, por ejemplo, Zhao et al. (1996) Biochem.Pharmacol. 51:173-82; Zhao et al. (1996) Biochem. Pharmacol. 52:1537-44; Zhao et al. (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:495-502; Zhao et al. (1999) Bioorg. Med.Chem.Lett.9:3453-58; Zhao et al. (2000) Bioorg.Med.Chem.Lett. 10:1051-54; Yu et al. (2000) Bioorg.Med.Chem.Lett. 10:2585-88; Yu et al. (2001) Bioorg.Med.Chem.Lett. 11:2263-67; and Kandimalla et al. (2001) Bioorg.Med.Chem. 9:807-13). Ademas, los estudios de relaciones entre la actividad y la estructura han permitido identificar motivos sinteticos y compuestos novedosos basados en ADN que inducen perfiles de respuestas inmunitarias especfficos que son distintos de los resultantes de los dinucleotidos CpG no metilados (Kandimalla et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:6925-30; Kandimalla et al. (2003) Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 100:14303-08; Cong et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 310:1133-39; Kandimalla et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 306:948-53; Kandimalla et al. (2003) Nucleic Acids Res. 31:2393-400; Yu et al. (2003) Bioorg. Med. Chem. 11:459-64; Bhagat et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 300:853-61; Yu et al. (2002) Nucleic Acids Res. 30:4460-69; Yu et al. (2002) J. Med. Chem. 45:4540-48; Yu et al. (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 297:83-90; Kandimalla et al. (2002) Bioconjug. Chem. 13:966-74; Yu et al. (2002) Nucleic Acids Res. 30:1613-19; Yu et al. (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:2803-08; Yu et al. (2001) Bioorg. Med. Chem. Lett. 11:2263-67; Kandimalla et al. (2001) Bioorg. Med. Chem. 9:80713; Yu et al. (2000) Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:2585-88; Putta et al. (2006) Nucleic Acids Res. 34:3231-38).

La localizacion selectiva de los TLR y la senalizacion generada por los mismos proporciona cierta perspectiva acerca del papel que juegan en la respuesta inmunitaria. La respuesta inmunitaria implica tanto una respuesta innata como una respuesta adaptativa en funcion del subconjunto de celulas implicadas en la respuesta. Por ejemplo, los linfocitos T auxiliares (Th) implicados en las funciones clasicas mediadas por celulas, como la hipersensibilidad de tipo retardado y activacion de los linfocitos T citotoxicos (LTC) son los linfocitos Th1. Esta es la respuesta innata del

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organismo a antfgenos (por ejemplo, infecciones virales, patogenos intracelulares y celulas tumorales) y tiene como resultado una secrecion de FN-gamma y la consiguiente activacion de los LTC. Alternativamente, los linfocitos Th implicados como linfocitos auxiliares en la activacion de linfocitos B son linfocitos Th2. Es conocido que los linfocitos Th2 se activan en respuesta a bacterias y parasitos, y pueden mediar en la respuesta inmunitaria adaptativa del organismo (por ejemplo, produccion de IgE y activacion eosinofila) mediante la secrecion de IL-4 e IL-5. El tipo de respuesta inmunitaria esta condicionada por las citocinas producidas en respuesta a la exposicion al antfgeno y las diferencias en las citocinas secretadas por los linfocitos Th1 y Th2 pueden ser el resultado de las diferentes funciones biologicas de estos dos subconjuntos.

Como resultado de su implicacion en la regulacion de la respuesta inmunitaria, se ha demostrado que los TLR juegan un papel en la patogenesis de muchas enfermedades, incluyendo enfermedades autoinmunitarias, infecciosas e inflamatorias (Papadimitraki et al. J. Autoimmun. 29: 310-18; Sun et al. (2007) Inflamm. Allergy Drug Targets 6:223-35; Diebold (2008) Adv. Drug Deliv. Rev. 60:813-23; Cook et al. (2004) Nat. Immunol. 5:975-79; Tse and Horner (2008) Semin. Immunopathol. 30:53-62; Tobias and Curtiss (2008) Semin. Immunopathol. 30:23-27; Ropert et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:41-51; Lee et al. Semin. Immunopathol. 30:3-9; Gao et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:29-40; Vijay-Kumar et al. (2008) Semin. Immunopathol. 30:11-21). El documento WO 2005/072290 se refiere a los procedimientos y kits para tratar, reducir o prevenir afecciones autoinmunitarias como la artritis reumatoide mediante la administracion a un mamffero que necesite el agente que module el nivel de expresion o la actividad biologica del receptor de tipo Toll 9 (TLR-9). WO 2007/038720 describe la capacidad de algunos oligonucleotidos para modificar el perfil de los ligandos de TLR, como los ligandos de TLR7, TLR8 y TLR9. El documento US 2009/0087388 revela las composiciones del oligonucleotido inmunorregulador (IRO) y su utilizacion para la inhibicion y/o supresion de las respuestas inmunitarias mediadas por TLR.

Mientras que la activacion de los TLR esta implicada en generar una respuesta inmunitaria, una estimulacion descontrolada del sistema inmunitario a traves de los TLR puede agravar algunas enfermedades en sujetos inmunocomprometidos. Dicha estimulacion descontrolada puede contribuir tambien a trastornos autoinmunitarios o inflamatorios.

Por tanto, es necesario una mejora en los enfoques para el tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias.

Breve sumario de la invencion

En el contexto de la presente invencion se ha descubierto que determinados compuestos oligonucleotidos inmunorreguladores (IRO), que son antagonistas de TLR potencian la actividad de agentes antiinflamatorios que actuan inhibiendo TNF-a, y, por tanto, permitiendo el uso de tales inhibidores de TNF-a a bajas dosis para mitigar sus indeseables efectos secundarios. Estos IRO tienen una o mas modificaciones qufmicas en la secuencia que flanquea a un motivo inmunoestimulador y/o en un motivo oligonucleotfdico que serfa inmunoestimulador de no ser por la modificacion.

Por tanto, la invencion proporciona un compuesto IRO para su utilizacion en un procedimiento para el tratamiento terapeutico de un mamffero que padece una enfermedad que presenta un componente autoinmunitario o inflamatorio, procedimiento que comprende administrar al mamffero un compuesto IRO que presenta la estructura

5'-Nm-NaN2N1CGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

CG es un motivo oligonucleotfdico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotfdico de pirimidina, que es un nucleotido de pirimidina que presenta una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotfdico de purina, el cual es un nucleotido de purina que tiene una base que no es guanina o adenina y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido;

N1-N3 en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico siempre que al menos un N1-N3 sea un derivado nucleotfdico o un enlace nucleotfdico que suprima la actividad del motivo oligonucleotfdico;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico; Nm y Nm, en cada aparicion, es independientemente un nucleotido, un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina,

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timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o un enlace no nucleotfdico; y se establece ademas que el compuesto contiene menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos;

en el que el motivo oligonucleotfdico podrfa ser inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico; en el que m es un numero desde 0 a aproximadamente 30 en combinacion con un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a en una cantidad farmaceuticamente eficaz. Dichas enfermedades incluyen, entre otras, cancer, un trastorno autoinmunitario, inflamacion de las vfas respiratorias, trastornos inflamatorios, enfermedades infecciosas, malaria, enfermedad de Lyme, infecciones oculares, conjuntivitis, trastornos de la piel, psoriasis, escleroderma, enfermedad cardiovascular, arterioesclerosis, sfndrome de fatiga cronica, sarcoidosis, rechazo al trasplante, alergia, asma y enfermedades causadas por un patogeno. Los trastornos autoinmunitarios preferidos incluyen, entre otros, lupus eritematoso, esclerosis multiple, diabetes mellitus de tipo I, sfndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide, choque septicemico, alopecia universal, encefalomielitis diseminada aguda, enfermedad de Addison, espondilitis anquilosante, sfndrome de anticuerpos antifosfolfpidos, anemia hemolftica autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria, penfigoide ampolloso, enfermedad de Chagas, enfermedad pulmonar obstructiva cronica, enfermedad celfaca, dermatomiositis, endometriosis, sfndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, sfndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, hidradenitis supurativa, purpura trombocitopenica idiopatica, cistitis intersticial, morfea, miastenia gravis, narcolepsia, neuromiotonfa, penfigo, anemia perniciosa, polimiositis, cirrosis biliar primaria, esquizofrenia, sfndrome de Sjogren, arteritis de la temporal ("arteritis de celulas gigantes"), vasculitis, vitiligo, vulvodinia y granulomatosis de Wegener. Los trastornos inflamatorios preferidos incluyen, entre otros, inflamacion de las vfas respiratorias, asma, enfermedades autoinmunitarias, inflamacion cronica, prostatitis cronica, glomerulonefritis, enfermedad de Behqet, hipersensibilidades, enfermedad intestinal inflamatoria, lesion de reperfusion, artritis reumatoide, rechazo al trasplante, colitis ulcerosa, uveitis, conjuntivitis y vasculitis.

La invencion proporciona ademas un compuesto IRO para su utilizacion en un procedimiento para prevenir una enfermedad o trastorno que tiene un componente autoinmunitario o inflamatorio en un mamffero con riesgo de desarrollar tal enfermedad o trastorno, procedimiento que comprende la administracion a un mamffero de un compuesto IRO que tiene la estructura

5'-Nm-N3N2NiCGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

CG es un motivo oligonucleotfdico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotfdico de pirimidina, el cual es un nucleotido de pirimidina que tiene una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotfdico de purina, el cual es un nucleotido de purina que tiene una base que no es guanina o adenina y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico; Nm y Nm, en cada aparicion, es independientemente un nucleotido, un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o un enlace no nucleotfdico; y se establece ademas que el compuesto contiene menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos;

en el que el motivo oligonucleotfdico podrfa ser inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico; donde m es un numero desde 0 a aproximadamente de 30 y un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a en una cantidad farmaceuticamente eficaz. Dichas enfermedades incluyen, entre otras, cancer, un trastorno autoinmunitario, inflamacion de las vfas respiratorias, trastornos inflamatorios, enfermedades infecciosas, malaria, enfermedad de Lyme, infecciones oculares, conjuntivitis, trastornos de la piel, psoriasis, escleroderma, enfermedad cardiovascular, arterioesclerosis, sfndrome de fatiga cronica, sarcoidosis, rechazo al trasplante, alergia, asma y enfermedades causadas por un patogeno en un mamffero. Los trastornos autoinmunitarios preferidos incluyen, entre otros, lupus eritematoso, esclerosis multiple, diabetes mellitus de tipo I, sfndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide, choque septicemico, alopecia universal, encefalomielitis diseminada aguda, enfermedad de Addison,

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espondilitis anquilosante, sindrome de anticuerpos antifosfolfpidos, anemia hemolitica autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria, penfigoide ampolloso, enfermedad de Chagas, enfermedad pulmonar obstructiva cronica, enfermedad celfaca, dermatomiositis, endometriosis, sindrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, sindrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, hidradenitis supurativa, purpura trombocitopenica idiopatica, cistitis intersticial, morfea, miastenia gravis, narcolepsia, neuromiotonfa, penfigo, anemia perniciosa, polimiositis, cirrosis biliar primaria, esquizofrenia, sindrome de Sjogren, arteritis de la temporal ("arteritis de celulas gigantes"), vasculitis, vitiligo, vulvodinia y granulomatosis de Wegener. Los trastornos inflamatorios preferidos incluyen, entre otros, inflamacion de las vfas respiratorias, asma, enfermedades autoinmunitarias, inflamacion cronica, prostatitis cronica, glomerulonefritis, enfermedad de Behget, hipersensibilidades, enfermedad intestinal inflamatoria, lesion de reperfusion, artritis reumatoide, rechazo al trasplante, colitis ulcerosa, uveitis, conjuntivitis y vasculitis.

En una forma de realizacion, el compuesto IRO usado de acuerdo a la presente invencion comprende al menos dos oligonucleotidos unidos por un enlazador no nucleotfdico en sus extremos 3' en el que el enlazador no nucleotfdico puede estar unido al 3'hidroxilo, al azucar funcionalizado o a la base nitrogenada funcionalizada, en el que al menos un oligonucleotido presenta la estructura

5'-Nm-N3N2NiCGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que tiene una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico, siempre que al menos un N1-N3 sea un derivado nucleotfdico o un enlace no nucleotfdico que suprima la actividad del motivo oligonucleotfdico;

en el que el motivo oligonucleotfdico podrfa ser inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico; en el que m es un numero desde 0 a a aproximadamente 30. En una forma de realizacion preferida, el enlazador no nucleotfdico que une al menos dos oligonucleotidos se selecciona del grupo que consiste en Glicerol (1,2,3-Propanotriol), 1,2,4-Butanotriol, 2- (hidroximetil)-1,3-propanodiol, 2-(hidroximetil)-1,4-butanodiol, 1,3,5-Pentanotriol, 1,1,1-Tris(hidroximetil)etano, 1,1,1- Tris(hidroximetil)nitrometano, 1,1,1-Tris(hidroximetil)propano, 1,2,6-Hexanotriol, 3-Metil-1,3,5-pentanotriol, 1,2,3- Heptanotriol, 2-Amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, N-[Tris(hidroximetil)metil]acrilamida, cis-1,3,5- Ciclohexanotriol, Cis-1,3,5-Tri(hidroximetil)ciclohexano, 3,5-Di(hidroximetil)fenol, 1,3,5-Triidroxil-benceno, 3,5Di(hidroximetil)benceno, 1,3-Di(hidroxietoxi)-2-hidroxil-propano, 1,3-Di(hidroxipropoxi)-2hidroxil-propano, 2- Desoxi-D-ribosa, 1,2,4-Triidroxil-benceno, D-Galactal, 1,6-anhidro-S-D-Glucosa, Acido 1,3,5-Tris(2-hidroxietil)- cianurico, Acido galico, 3,5,7-Trihidroxiflavona, 4,6-Nitropirogalol, Etilenglicol, 1,3-Propanodiol, 1,2-Propanodiol, 1,4- Butanodiol, 1,3-Butanodiol, 2,3-Butanodiol, 1,4-Butanodiol, 1,5-Pentanodiol, 2,4-Pentanodiol, 1,6Hexanodiol, 1,2- Hexanodiol, 1,5-Hexanodiol, 2,5-Hexanodiol, 1,7-Heptanodiol, 1,8-Octanodiol, 1,2-Octanodiol, 1,9-Nonanodiol, 1,12- Dodecanodiol, Trietilenglicol, Tetraetilenglicol, 2-(1-Aminopropil)-1,3-propanodiol, o 1,2-Didesoxirribosa. Preferentemente, el enlazador no nucleotfdico que une al menos dos oligonucleotidos es glicerol.

En algunas formas de realizacion, el derivado nucleotfdico de pirimidina es 2'desoxitimidina, 1-(2'-desoxi-U-D- ribofuranosilo)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina, 2'-didesoxi5-halocitosina, 2'-didesoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, arabinocitidina sustituida en 2'desoxi-2', arabinocitidina sustituida en 2'-O, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi- N4alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina.

En algunas formas de realizacion, el derivado nucleotfdico de purina es 2'-desoxi-7deazaguanosina, 2'-desoxi-6- tioguanosina, arabinoguanosina, arabinoguanosina sustituida en 2'-desoxi-2', arabinoguanosina sustituida en 2'-O, 2'-desoxiinosina.

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En algunas formas de realizacion, la enfermedad que tiene un componente autoinmunitario o inflamatorio es artritis reumatoide, artritis psoriasica, psoriasis, uveitis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn, sarcoidosis, colitis o cancer.

En algunas formas de realizacion preferidas, el compuesto IRO y el agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a se coadministran con una o mas vacunas, antfgenos, anticuerpos, agentes citotoxicos, alergenos, antibioticos, oligonucleotidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, peptidos, protefnas, vectores de terapia genica, vacunas de ADN, adyuvantes, inhibidores de cinasas, agentes antivirales, farmacos antipaludicos, moleculas coestimuladoras o sus combinaciones.

El TNF (al que se hace referencia asimismo como TNF-a en la presente memoria) es producido por el sistema inmunitario del organismo y los individuos que padecen enfermedades inmunitarias, por ejemplo, artritis reumatoide, artritis idiopatica juvenil, espondilitis anquilosante, artritis reumatoide y psiorasis en placa tienen cantidades excesivas de TNF en sus cuerpos. En este sentido, la coadministracion de un compuesto IRO con un agente antiinflamatorio que inhiba la actividad TNF-a podrfa utilizarse para tratar o prevenir enfermedades que tengan un componente autoinmunitario y/o inflamatorio.

Entre las formas de realizacion de un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a que podrfan ser utiles en combinacion con un IRO estan incluidas etanercept (Enbrel®), infliximab (Remicade®) y adalimumab (Humira®). Una forma en la que el cuerpo humano se protege frente a la enfermedad es aumentando el flujo sanguineo hacia la parte afectada del organismo. Este aumento de flujo sanguineo permite la infiltracion de celulas inmunitarias y la produccion de citocinas proinflamatorias y quimiocinas, lo que se traduce en inflamacion. Una de las citocinas implicadas en este proceso inflamatorio es TNF-a. Estos inhibidores de TNF-a se unen a TNF-a y ayudan a prevenir la actividad proinflamatoria mediada por esta molecula. La inhibicion de esta actividad proinflamatoria ayuda a inhibir enfermedades inflamatorias, incluyendo entre otras, artritis reumatoide, artritis idiopatica juvenil, espondilitis anquilosante y psiorasis en placa.

En algunas formas de realizacion preferidas, la ruta de administracion es parenteral, por la mucosa, oral, sublingual, transdermica, topica, mediante inhalacion, intranasal, mediante aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, mediante pistola genica, parche dermico o en forma de colirio o colutorio.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 representa la puntuacion de la enfermedad en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra la capacidad de los antagonistas IRO de TLR7 y TLR9 de potenciar la actividad de un inhibidor de TNF.

La figura 2 representa inflamacion y erosion osea en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra la capacidad del antagonista IRO de TLR7 y TLR9 para mejorar o potenciar la actividad antiinflamatoria de un inhibidor de TNF, resultando, de forma significativa, en menor perdida osea en las articulaciones artrfticas.

La figura 3 representa perdida de cartflago en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra la capacidad del antagonista IRO de TLR7 y TLR9 para mejorar o potenciar la actividad antiinflamatoria de un inhibidor de TNF, conservando, de forma significativa el tejido cartilaginoso en las articulaciones artrfticas.

La figura 4 representa hinchazon en las patas traseras de ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra la capacidad del antagonista IRO de TLR7 y TLR9 para mejorar o potenciar la actividad antiinflamatoria de un inhibidor de TNF, resultando en una disminucion significativa de la inflamacion en las articulaciones artrfticas.

La figura 5 representa la respuesta del anticuerpo Th2 en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra la capacidad del antagonista IRO de TLR7 y TLR9 para mejorar o potenciar la supresion a la respuesta del anticuerpo Th2 por un inhibidor de TNF.

La figura 6 representa la respuesta del anticuerpo Th1 en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e ilustra que los inhibidores de TNF tienen un efecto limitado sobre la respuesta al anticuerpo Th1, mientras que el antagonista IRO de TLR7 y TLR9 tiene la capacidad de suprimir la respuesta al anticuerpo Th1, incluso en presencia de un inhibidor de TNF.

La figura 7 representa la respuesta inmunitaria de tipo Th1 (por ejemplo, IFN-y) en ratones afectados de artritis de forma experimental por inyeccion intradermica de colageno bovino tipo II/CFA, de acuerdo con el ejemplo 2 e

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ilustra que los inhibidores de TNF tienen un efecto limitado sobre la respuesta inmunitaria al Th1, mientras que el antagonista IRO de TLR7 y TLR9 tiene la capacidad de suprimir la respuesta al anticuerpo Th1.

Descripcion detallada de las formas de realizacion preferidas

La presente invencion se refiere al tratamiento o la prevencion de enfermedades que tienen un componente autoinmunitario o inflamatorio. Los oligonucleotidos inmunorreguladores (IRO) utilizados en la presente invencion como antagonistas de TLR potencian la actividad de agentes antiinflamatorios que actuan como inhibidores de TNF- a, por tanto permitiendo el uso de tales inhibidores de TNF-a a bajas dosis para mitigar sus indeseables efectos secundarios. Estos IRO tienen secuencias unicas que inhiben o suprimen la senalizacion mediada por el TLR en respuesta a ligandos de TLR endogenos y/o exogenos o agonistas. Las referencias citadas en la presente memoria reflejan el nivel de conocimiento en este campo. Cualquier conflicto entre el contenido de las citadas referencias y la presente memoria deben resolverse en favor de esta ultima.

La invencion puede utilizarse en aplicaciones de inmunoterapia, entre otras, el tratamiento del cancer, trastornos inmunitarios, asma, alergias respiratorias, alergias alimentarias, alergias de la piel, lupus eritematoso sistemico (LES), artritis, pleuresfa, infecciones cronicas, enfermedades inflamatorias, sfndrome intestinal inflamatorio, sepsis e infecciones bacterianas, parasitarias y virales, en humanos adultos y pediatricos y aplicaciones veterinarias. Los compuestos IRO combinados con agentes antiinflamatorios que inhiben TNF-a pueden ser usados en combinacion, por ejemplo, con vacunas de ADN, antfgenos, anticuerpos, agentes antivirales, farmacos antipaludicos (por ejemplo, cloroquina e hidroxicloroquina) y alergenos, y en combinacion con agentes quimioterapicos (tanto en quimioterapia tradicional como en la moderna terapia dirigida) y/o oligonucleotidos antisentido para la prevencion y el tratamiento de enfermedades.

El termino "oligonucleotido" generalmente se refiere a un polinucleosido que comprende una pluralidad de unidades nucleosfdicas enlazadas. Dichos oligonucleotidos pueden obtenerse a partir de fuentes de acidos nucleicos existentes, incluyendo ADN genomico o ADNc, pero se producen preferentemente mediante procedimientos sinteticos. En las formas de realizacion preferidas, cada unidad de nucleosido puede comprender varias modificaciones qufmicas y sustituciones comparado con oligonucleotidos salvajes, incluyendo, entre otras, base nucleosfdica modificada y/o unidad de azucar modificada. Los ejemplos de modificaciones qufmicas conocidas por los expertos en la materia se describen, por ejemplo, en Uhlmann et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; "Protocols for Oligonucleotides and Analogs" In Synthesis and Properties & Synthesis and Analytical Techniques (Agrawal, ed., Humana Press, Totowa, USA, 1993); Hunziker et al. (1995) Mod. Syn. Methods 7:331-417; and Crooke et al. (1996) Ann. Rev. Pharm. Tox. 36:107-29. Los restos nucleosidos pueden acoplarse entre si mediante cualquiera de los numerosos enlaces internucleosidos conocidos. Dichos enlaces internucleosidos incluyen de manera no limitativa fosfodiester, fosforotioato, fosforoditioato, alquilfosfonato, alquilfosfonotioato, fosfotriester, fosforamidita, siloxano, carbonato, carboalcoxi, acetamidato, carbamato, morfolino, borano, tioeter, fosforamidato en forma de puente, metilenfosfonato en forma de puente, fosforotioato en forma de puente, y enlaces internucleosidos de sulfona. El termino "oligonucleotido" comprende tambien polinucleosidos que presentan uno o mas enlaces internucleosidos estereoespecfficos (por ejemplo, enlaces (Rp)-o (SP)fosforotioato, alquilfosfonato o fosfotriester). Como se utiliza en la presente memoria, se pretende expresamente que los terminos "oligonucleotido" y "dinucleotido" incluyan polinucleosidos y dinucleosidos que presenten cualquiera de dichos enlaces internucleosidos, tanto si el enlace comprende, como si no, un grupo fosfato. En determinadas formas de realizacion preferidas, estos enlaces internucleosidos pueden ser enlaces fosfodiester, fosforotioato, o fosforoditioato, o sus combinaciones.

El termino "ribonucleosido sustituido en 2'" o "arabinosido sustituido en 2" incluye generalmente ribonucleosidos o arabinonucleosidos en los que el grupo hidroxilo en la posicion 2' del resto de la pentosa se sustituye para producir un ribonucleosido sustituido en 2' o ribonucleosido sustituido en 2'-O. En determinadas formas de realizacion, dicha sustitucion es con un grupo hidrocarbilo inferior que contiene 1-6 atomos de carbono saturados o no saturados, con un atomo de halogeno, o con un grupo arilo que tiene 6-10 atomos de carbono, en el que dicho hidrocarbilo, o un grupo arilo puede estar no sustituido o puede estar sustituido, por ejemplo, con grupos halo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, acilo, aciloxi, alcoxi, carboxilo, carboalcoxi, o amino. Los ejemplos de ribonucleosidos sustituidos en 2'-O o arabinosidos o sustituidos en 2'-O incluyen, entre otros, 2'-amino, 2'-fluoro, 2'-alilo, 2'-O-alquilo y 2'propargilo ribonucleosidos o arabinosidos, 2'-O-metilrribonucleosidos o 2'-Ometilarabinosidos y 2'-O- metoxietoxirribonucleosidos o 2'-O-metoxietoxiarabinosidos.

El termino " 3' ", cuando se utiliza direccionalmente, se refiere generalmente a una region o posicion de un polinucleotido u oligonucleotido situado en 3' (descendente) respecto de otra region o posicion del mismo polinucleotido u oligonucleotido.

El termino " 5' ", cuando se usa direccionalmente, se refiere generalmente a una region o posicion de un polinucleotido u oligonucleotido situado en 5' (ascendente) respecto de otra region o posicion del mismo polinucleotido u oligonucleotido.

El termino "aproximadamente" significa generalmente que el numero exacto no es crftico. De esta manera, el numero de restos nucleosidos en los oligonucleotidos no es crftico, y los oligonucleotidos que tienen uno o dos

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restos nucleosidos menos, o de uno a varios restos nucleosidos adicionales, se consideran equivalentes de cada una de las formas de realizacion descritas anteriormente.

El termino "adyuvante" se refiere generalmente a una sustancia que, cuando se anade a un agente inmunogeno como una vacuna o antfgeno, aumenta o potencia una respuesta inmunitaria contra el agente en el hospedador receptor tras su exposicion a la mezcla.

El termino "agonista" se refiere generalmente a una sustancia que se une a un receptor de una celula e induce una respuesta. Dicha respuesta puede ser un aumento en la actividad mediada por el receptor. Un agonista a menudo imita la accion de sustancias de origen natural, como un ligando.

El termino "antagonista" o "inhibidor" se refiere generalmente a una sustancia que se puede unir a un receptor, pero que no produce una respuesta biologica tras la union. El antagonista o inhibidor puede bloquear, inhibir o atenuar la respuesta mediada por el agonista y puede competir con el agonista por la union al receptor. Dicha actividad antagonista o inhibitoria puede ser reversible o irreversible.

Los terminos "agente antiinflamatorio que inhibe TNF" o "agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a" se refieren generalmente a una sustancia que tiene la capacidad de reducir la inflamacion al inhibir la interaccion entre TNF y su receptor. Los ejemplos de dichos agentes antiinflamatorios incluyen, entre otros, los inhibidores de TNF etanercept (Enbrel®), infliximab (Remicade®), y adalimumab (Humira®).

El termino "inflamacion de las vfas respiratorias" generalmente incluye, entre otras, asma.

El termino "alergeno" se refiere generalmente a un antfgeno o porcion antigenica de una molecula, usualmente una protefna, que estimula una respuesta alergica tras exposicion a un sujeto. Normalmente el sujeto es alergico al alergeno como se indica, por ejemplo, mediante la prueba de roncha y eritema o cualquier procedimiento conocido en la tecnica. Se dice que una molecula es un alergeno aunque unicamente un pequeno subconjunto de sujetos presente una respuesta inmunitaria alergica tras su exposicion a la molecula.

El termino "alergia" se refiere generalmente a una respuesta inmunitaria inapropiada caracterizada por inflamacion e incluye, entre otras, alergia alimentaria y alergias respiratorias.

El termino "antfgeno" se refiere generalmente a una sustancia que es reconocida y se une selectivamente a un anticuerpo o a un receptor de antfgenos de los linfocitos T, dando como resultado la induccion de una respuesta inmunitaria. Los antfgenos pueden incluir, pero no limitarse a peptidos, protefnas, nucleosidos, nucleotidos y sus combinaciones. Los antfgenos pueden ser naturales o sinteticos e inducen generalmente una respuesta inmunitaria que es especffica de cada antfgeno.

El termino "agente antiviral" se refiere generalmente a un agente que tiene la capacidad de matar virus, reprimir su replicacion, union celular u otras funciones esenciales, y por tanto, inhibir su capacidad de multiplicarse y reproducirse. Dichos agentes pueden actuar estimulando las defensas celulares frente a los virus.

El termino "trastorno autoinmunitario" se refiere generalmente a trastornos en los que el antfgeno "propio" sufre el ataque del sistema inmunitario.

El termino "enfermedad mediada por TLR" o "trastorno mediado por TLR" significa generalmente cualquier afeccion patologica en la que la activacion de uno o mas TLR es un factor contribuyente. Dichas afecciones incluyen, entre otras, un trastorno autoinmunitario, inflamacion de las vfas respiratorias, trastornos inflamatorios, enfermedad infecciosa, trastornos de la piel, alergia, asma y enfermedades producidas por un patogeno.

El termino "fisiologicamente aceptable" se refiere generalmente a un material que no interfiere con la eficacia de un compuesto IRO y que es compatible con un sistema biologico, como una celula, cultivo de celulas, tejido u organismo. Preferentemente, el sistema biologico es un organismo vivo, como un mamffero.

El termino "portador" comprende generalmente cualquier excipiente, diluyente, carga, sal, tampon, estabilizante, solubilizante, aceite, lfpido, vesfcula que contiene lfpidos, microesferas, encapsulamiento liposomico, u otro material bien conocido en la materia para la utilizacion en formulaciones farmaceuticas. Debe apreciarse que las caracterfsticas del portador, excipiente, o diluyente dependeran de la ruta de administracion para una aplicacion concreta. La preparacion de formulaciones farmaceuticamente aceptables que contienen estos materiales se describe en, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990).

El termino "coadministracion" se refiere generalmente a la administracion de por lo menos dos sustancias diferentes suficientemente proximas en el tiempo para modular una respuesta inmunitaria. La coadministracion se refiere a la administracion simultanea, asf como a un orden separado temporalmente hasta una separacion de varios dfas, de al menos dos sustancias diferentes en cualquier orden, tanto en una dosis unica como en dosis separadas.

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El termino "complementario" significa generalmente que presenta la capacidad de hibridarse con un acido nucleico. Dicha hibridacion es normalmente el resultado del establecimiento de enlaces de hidrogeno entre cadenas complementarias, preferentemente para formar pares de bases de Watson-Crick o Hoogsteen, aunque otras modalidades de enlaces de hidrogeno, asf como de apilado de bases, pueden conducir tambien a la hibridacion.

El termino "enfermedad o trastorno que tiene un componente autoinmunitario o inflamatorio" significa una afeccion que tenga uno o mas sfntomas que resulten en su totalidad o en parte de una respuesta inmunitaria frente a un antfgeno propio o de una inflamacion.

El termino una "cantidad eficaz" o una "cantidad suficiente" se refiere generalmente a una cantidad suficiente para influir en un efecto biologico deseado, como resultados beneficiosos. De esta manera, una "cantidad eficaz" o "cantidad suficiente" dependera del contexto en el que se esta administrando. En el contexto de administrar una composicion que module una respuesta inmunitaria a un antfgeno coadministrado, una cantidad eficaz de un compuesto IRO y un antfgeno es una cantidad suficiente para conseguir la modulacion deseada en comparacion con la respuesta inmunitaria obtenida cuando el antfgeno se administra solo. Una cantidad eficaz puede administrarse en una o mas administraciones.

El termino "en combinacion con" significa generalmente, en el tratamiento de una enfermedad o trastorno en un paciente, la administracion de un compuesto IRO y un agente util para tratar la enfermedad o trastorno que no reduce el efecto inmunomodulador del compuesto iRo. Dicho tratamiento combinado puede incluir tambien mas de una unica administracion de un compuesto IRO y/o independientemente un agente. La administracion del compuesto IRO y el agente puede ser mediante la misma ruta o diferente.

El termino "individuo" o "sujeto" o "mamffero" se refiere generalmente a seres humanos, primates no humanos, ratas, ratones, gatos, perros, caballos, ganado, vacas, cerdos, ovejas y conejos.

El termino "inhibidor de cinasa" generalmente se refiere a moleculas que antagonizan o inhiben la senalizacion celular dependiente de la fosforilacion o las rutas de crecimiento en una celula. Los inhibidores de la cinasa pueden ser de origen natural o sintetico e incluyen pequenas moleculas administrables por via oral como productos terapeuticos. Los inhibidores de la cinasa tienen la capacidad de inhibir rapida y especfficamente la activacion de las moleculas de cinasa dirigidas. Las protefnas de cinasas son objetivos deseables para los farmacos, en parte porque regulan una amplia variedad de vfas de senalizacion y crecimiento e incluyen muchas protefnas diferentes. En este sentido, tienen un gran potencial en el tratamiento de enfermedades que implican senalizacion de cinasas, entre ellas el cancer, enfermedades cardiovasculares, trastornos inflamatorios, diabetes, degeneracion macular y trastornos neurologicos. Ejemplos de inhibidores de cinasa incluyen sorafenib (Nexavar®), Sutent®, dasatinib, Dasatinib™, Zactima™, Tykerb™ y STI571.

El termino "nucleosido" generalmente se refiere a compuestos que consisten en un azucar, normalmente ribosa o desoxirribosa y una base purfnica o pirimidfnica.

El termino "nucleotido" generalmente se refiere a un nucleosido que comprende un grupo fosfato unido a un azucar.

Como se utiliza en la presente memoria, el termino "nucleosido de pirimidina" se refiere a un nucleosido en el que el componente de base del nucleosido es una base de pirimidina (por ejemplo, citosina (C) o timina (T) o uracilo (U)). De forma similar, el termino "nucleosido de purina" se refiere a un nucleosido en el que el componente de base del nucleosido es una base de purina (por ejemplo, adenina (A) o guanina (G)).

Los terminos "analogo" o "derivado" se pueden intercambiar para referirse generalmente a un nucleotido o nucleosido de purina y/o pirimidina que presenta una base y/o azucar modificado. Una base modificada es una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo. Un azucar modificado es cualquier azucar que no sea ribosa o 2'-desoxirribosa y puede utilizarse en el esqueleto de un oligonucleotido.

El termino "inhibicion" o "supresion" se refiere generalmente a una disminucion en la respuesta o diferencia cualitativa en la respuesta, que puede surgir por otro lado, de la provocacion y/o estimulacion de la respuesta.

El termino "enlazador no nucleotfdico" se refiere generalmente a cualquier enlace o resto que se pueda unir o estar unido a un oligonucleotido por medio de un enlace distinto de los que contengan fosforo. Preferentemente, dicho enlazador tiene de aproximadamente 2 angstroms a aproximadamente 200 angstroms de longitud.

El termino "enlace nucleotfdico" generalmente se refiere a un enlace 3'-5' directo que conecta directamente los grupos hidroxilo 3' y 5' de dos nucleosidos a traves de un enlace que contenga fosforo.

El termino "motivo oligonucleotfdico" se refiere generalmente a una secuencia oligonucleotidica, incluyendo un dinucleotido. Un "motivo oligonucleotfdico que podrfa ser inmunoestimulador de no ser por una o mas modificaciones" significa un motivo oligonucleotfdico que es inmunoestimulador en un oligonucleotido parental, pero

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no en un oligonucleotido derivado, en el que el oligonucleotido derivado se basa en el oligonucleotido parental pero presenta una o mas modificaciones que reducen o eliminan la inmunoestimulacion.

Los terminos CpG, C*pG, C*pG* y CpG* se refieren a motivos oligonucleotfdicos que son inmunoestimuladores y comprenden una citosina o un analogo de citosina y una guanina o un analogo de guanina.

El termino "tratamiento" se refiere generalmente a un enfoque previsto para obtener un resultado beneficioso o deseado, que puede incluir el alivio de los sfntomas, o el retraso o la mejora en la progresion de una enfermedad.

El termino “IRO” se refiere a un compuesto oligonucleotido inmunorregulador que es un antagonista de uno o mas TLR, en el que el compuesto comprende un motivo oligonucleotfdico y al menos una modificacion, en el que el motivo oligonucleotfdico podrfa ser inmunoestimulador (por ejemplo, CpG no metilado) de no ser por una o mas modificaciones que suprimen la actividad del motivo oligonucleotfdico, siempre que el compuesto contenga menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos. Dichas modificaciones pueden estar en el terminal 5' del oligonucleotido, en una secuencia flanqueando el motivo oligonucleotfdico y/o en el motivo oligonucleotfdico. Estas modificaciones resultan en un compuesto IRO que reprime la estimulacion inmunitaria modulada por TLR. Dichas modificaciones pueden tener lugar en las bases, residuos de azucar y/o esqueleto de fosfato de los nucleotidos/nucleosidos que flanquean el motivo oligonucleotfdico o en el motivo oligonucleotfdico.

En las formas de realizacion preferidas, cuando la modificacion es una alquilacion 2' o alcoxilacion, entonces la modificacion no esta en posicion 5' adyacente al motivo oligonucleotfdico, cuando la modificacion es un enlace internucleosfdico no cargado, entonces la modificacion no esta en posicion 5' adyacente al motivo oligonucleotfdico y cuando la modificacion es una alquilacion 3' o alcoxilacion, entonces la modificacion no esta en posicion 5' o 3' adyacente al motivo oligonucleotfdico.

En las formas de realizacion preferidas, el compuesto IRO no es un oligonucleotido antisentido.

En determinadas formas de realizacion preferidas de la invencion, los compuestos IRO pueden comprender al menos dos oligonucleotidos unidos mediante un enlace covalente nucleotfdico, o un enlazador no nucleotfdico en sus extremos 5'-, 3'-o 2'-o por un azucar funcionalizado o una base hidrogenada funcionalizada a traves de un enlazador no nucleotfdico o un enlace nucleotfdico. Dichos compuestos IRO pueden ser lineales o ramificados. Como ejemplo no limitativo, el enlazador puede unirse al hidroxilo 3'. En dichas formas de realizacion, el enlazador comprende un grupo funcional que se une al hidroxilo 3' por medio de un tipo de enlace basado en fosfato, por ejemplo, fosfodiester, fosforotioato, fosforoditioato, metilfosfonato o enlaces no basados en fosfato. Los sitios posibles de conjugacion del ribonucleotido se indican a continuacion, en la Formula I, en la que B representa una base heterocfclica y en la que una flecha senalando a P indica cualquier union al fosforo.

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Formula I

En algunas formas de realizacion, el enlazador no nucleotfdico es una molecula pequena, macromolecula o biomolecula, incluyendo de manera no limitativa polipeptidos, anticuerpos, lfpidos, antfgenos, alergenos y oligosacaridos. En algunas formas de realizacion diferentes, el enlazador no nucleotfdico es una molecula pequena. En el contexto de la invencion, una molecula pequena es un resto organico que presenta un peso molecular inferior a 1.000 Da. En algunas formas de realizacion, la molecula pequena tiene un peso molecular inferior a 750 Da.

En algunas formas de realizacion, la molecula pequena es un hidrocarburo alifatico o aromatico, cualquiera de los cuales puede incluir opcionalmente, tanto en la cadena lineal enlazando los oligorribonucleotidos o agregados a esta, uno o mas grupos funcionales incluyendo de manera no limitativa hidroxi, amino, tiol, tioeter, eter, amida, tioamida, ester, urea, o tiourea. La molecula pequena puede ser cfclica o acfclica. Los ejemplos de enlazadores de molecula pequena incluyen, aminoacidos, hidratos de carbono, ciclodextrinas, adamantano, colesterol, haptenos y antibioticos. Sin embargo, para describir el enlazador no nucleotfdico, no se pretende que el termino "molecula pequena" incluya un nucleosido.

En algunas formas de realizacion, el enlazador no nucleotfdico es un enlazador de alquilo o un enlazador de amino. El enlazador de alquilo puede ser ramificado o no ramificado, cfclico o acfclico, sustituido o no sustituido, saturado o no saturado, quiral, aquiral o mezcla racemica. Los enlazadores de alquilo pueden presentar de 2 a 18 atomos de

carbono. En algunas formas de realizacion, dichos enlazadores de alquilo presentan entre 3 y 9 atomos de carbono. Algunos enlazadores de alquilo incluyen uno o mas grupos funcionales incluyendo de manera no limitativa hidroxi, amino, tiol, tioeter, eter, amida, tioamida, ester, urea y tioeter. Dichos enlazadores de alquilo pueden incluir de manera no limitativa enlazadores de 1,2-propanodiol, 1,2,3-propanotriol, 1,3-propanodiol, trietilenglicol 5 hexaetilenglicol, polietilenglicol (por ejemplo, [-O-CH2-CH2-]n (n= 1-9)), enlazadores de metilo, enlazadores de etilo, enlazadores de propilo, enlazadores de butilo, o enlazadores de hexilo. En algunas formas de realizacion, dichos enlazadores de alquilo pueden incluir peptidos o aminoacidos.

En algunas formas de realizacion, el enlazador no nucleotfdico puede incluir de manera no limitativa los presentados 10 en la Tabla 2.

Tabla 2: Enlazadores no nucleotfdicos representativos

Enlazador no nucleotfdico N.°: Composicion qufmica

1: Glicerol (1,2,3-Propanotriol)

2: 1,2,4-Butanotriol

3: 2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol

4: 2-(hidroximetil)-1,4-butanodiol

5: 1,3,5-Pentanotriol

6: 1,1,1-Tris(hidroximetil)etano

7: 1,1,1-Tris(hidroximetil)nitrometano

8: 1,1,1-Tris(hidroximetil)propano

9: 1,2,6-Hexanotriol

10: 3-Metil-1,3,5-pentanotriol

11: 1,2,6-Metil-1,3,5-pentanotriol

12: 1,2,3-Heptanotriol

13: 2-Amino-2-(hidroximetil)-1,3propanodiol

14: N-[Tris(hidroximetil)metil]acrilamida

15: cis-1,3,5-Ciclohexanotriol

16: Cis-1,3,5-Tri(hidroximetil)ciclohexano

17: 1,3,5-Trihidroxil-benceno

18: 3,5-Di(hidroximetil)fenol

19: 1,3,5-Di(hidroximetil)benceno

20: 1,3-Di(hidroxietoxi)-2-hidroxil-propano

21: 1,3-Di(hidroxipropoxi)-2-hidroxilpropano

22: 2-Desoxi-D-ribosa

23: 1,2,4-Trihidroxil-benceno

24: D-Galactal

25: 1,6-anhidro-p-D-Glucosa

26: Acido 1,3,5-T ris(2-hidroxietil)-cianurico

27: Acido galico

28: 3,5,7-Trihidroxiflavona

29: 4,6-Nitropirogalol

30: Etilenglicol

31: 1,3-Propanodiol

32: 1,2-Propanodiol

33: 1,4-Butanodiol

33: 1,3-Butanodiol

34: 2,3-Butanodiol

35: 1,4-Butanodiol

36: 1,5-Pentanodiol

37: 2,4-Pentanodiol

38: 1,6-Hexanodiol

39: 1,2-Hexanodiol

40: 1,5-Hexanodiol

41: 2,5-Hexanodiol

42: 1,7-Heptanodiol

43: 1,8-Octanodiol

44: 1,2-Octanodiol

45: 1,9-Nonanodiol

46: 1,12-Dodecanodiol

47: Trietilenglicol

48: Tetraetilenglicol

49: Hexaetilenglicol

50: 2-(1-Aminopropil)-1,3-propanodiol

51: 1,2-Didesoxirribosa

En algunas formas de realizacion, el enlazador de molecula pequena es glicerol o un homologo de glicerol de la formula HO-(CH2)o-CH(OH)-(CH2)p-OH, en la que o y p independientemente son enteros de 1 a aproximadamente 6, de 1 a aproximadamente 4, o de 1 a aproximadamente 3. En algunas formas de realizacion diferentes, el enlazador 5 de molecula pequena es un derivado de 1,3-diamino-2-hidroxipropano. Algunos de dichos derivados presentan la formula HO-(CH2)m-C(O)NH-CH2-CH(OH)-CH2-NHC(O)-(CH2)m-OH, en la que m es un entero de 0 a aproximadamente 10, de 0 a aproximadamente 6, de 2 a aproximadamente 6, o de 2 a aproximadamente 4.

Algunos enlazadores no nucleotfdicos permiten la union de mas de dos oligonucleotidos. Por ejemplo, el enlazador 10 de molecula pequena glicerol presenta tres grupos hidroxilo a los cuales se pueden unir covalentemente oligonucleotidos. Por lo tanto, algunos IRO comprenden dos o mas oligonucleotidos unidos a un oligonucleotido o a un enlazador no nucleotfdico. Dichos IRO se denominan "ramificados".

En determinadas formas de realizacion, los compuestos IRO pueden comprender al menos dos oligonucleotidos no 15 unidos covalentemente, como unidos por interacciones electrostaticas, interacciones hidrofobas, interacciones de apilamiento n, enlaces de hidrogeno, o sus combinaciones. Los ejemplos no limitativos de tales enlaces no covalentes incluyen el apareamiento de bases de Watson-Crick, apareamiento de bases de Hoogsteen y apilamiento de bases.

20 En la Tabla 3 se muestran algunas maneras en las que pueden unirse dos o mas oligonucleotidos.

Tabla 3: Formulas IV -XI de oligorribonucleotidos

imagen2

5

10

15

20

25

30

imagen3

En determinadas formas de realizacion, los nucleosidos de pirimidina de los oligonucleotidos inmunorreguladores utilizados en la invencion presentan la estructura (//):

en la que:

imagen4

(//)

D es un donador de enlace de hidrogeno;

D' se selecciona entre el grupo que consiste en hidrogeno, donador del enlace de hidrogeno, aceptor del enlace de hidrogeno, grupo hidrofilo, grupo hidrofobo, grupo electroatrayente y grupo electrodonador;

A es un enlace de hidrogeno aceptor o un grupo hidrofilo;

A' se selecciona entre el grupo que consiste en aceptor del enlace de hidrogeno, grupo hidrofilo, grupo hidrofobo, grupo electroatrayente y grupo electrodonador;

X es carbono o nitrogeno; y

S' es un anillo de azucar de pentosa o hexosa, o un analogo de azucar o un azucar modificado.

En determinadas formas de realizacion, el anillo de azucar se deriva con un resto fosfato, un resto fosfato modificado, u otro resto enlazador adecuado para enlazar el nucleosido de pirimidina con otro nucleosido o analogo de nucleosido.

En algunas formas de realizacion, los enlaces de hidrogeno donadores incluyen de manera no limitativa -NH-, -NH2, -SH y -OH. Los enlaces de hidrogeno aceptores preferidos incluyen de manera no limitativa C=O, C=S, y los atomos de nitrogeno del anillo de un heterociclo aromatico, por ejemplo, N3 de citosina.

5

10

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35

40

45

50

En algunas formas de realizacion, (II) es un derivado nucleosfdico de pirimidina. Los ejemplos de derivados nucleosfdicos de pirimidina incluyen de manera no limitativa 5-hidroxicitosina, 5-hidroximetilcitosina, N4- alquilcitosina, N4-etilcitosina, arabinoC, 5-OH-dC, N3-Me-dC y 4-tiouracilo. Las modificaciones qufmicas incluyen asimismo de manera no limitativa analogos de timina y uracilo. En algunas formas de realizacion, el resto azucar S' en (II) es un derivado de azucar. Derivados de azucar adecuados incluyen, entre otros, trehalosa o derivados de trehalosa, hexosa o derivados de hexosa, arabinosa o derivados de arabinosa.

En determinadas formas de realizacion, los nucleosidos de purina de los oligonucleotidos reguladores inmunologicos utilizados en la invencion presentan la estructura (III):

imagen5

(III)

en la que:

D es un donador de enlace de hidrogeno;

D' se selecciona entre el grupo que consiste en hidrogeno, donador del enlace de hidrogeno y grupo hidrofilo;

A es un enlace de hidrogeno aceptor o un grupo hidrofilo;

X es carbono o nitrogeno;

cada L se selecciona independientemente de entre el grupo que consiste en C, O, N y S y

En determinadas formas de realizacion, el anillo de azucar se derivatiza con un resto fosfato, un resto fosfato modificado, u otro resto enlazador adecuado para enlazar el nucleosido de pirimidina con otro nucleosido o analogo de nucleosido.

En algunas formas de realizacion, los enlaces de hidrogeno donadores incluyen de manera no limitativa -NH-, -NH2, -SH y -OH. En algunas formas de realizacion, los enlaces de hidrogeno aceptores incluyen de manera no limitativa C=O, C=S, -NO2 y los atomos de nitrogeno del anillo de un heterociclo aromatico, por ejemplo, N1 de guanina.

En algunas formas de realizacion, (III) es un derivado nucleosfdico de purina. Los ejemplos de derivados nucleosfdicos de purina incluyen de manera no limitativa analogos de guanina tales como 7-deaza-G, 7-deaza-dG, ara-G, 6-tio-G, inosina, Iso-G, loxorribina, TOG(7-tio-8oxo)-G, 8-bromo-G, 8-hidroxi-G, 5-aminoformicina B, oxoformicina, 7-metil-G, 9-pclorofenil-8-aza-G, 9-fenil-G, 9-hexil-guanina, 7-deaza-9-bencil-G, 6-cloro-7- deazaguanina, 6-metoxi-7-deazaguanina, 8-aza-7-deaza-G(PPG), 2-(dimetilamino)guanosina, 7-metil-6- tioguanosina, 8-benciloxiguanosina, 9-deazaguanosina y 1-(B-D-ribofuranosilo)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina, o 1- (2'-desoxi-p-D-ribofuranosilo)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina. Las modificaciones qufmicas incluyen asimismo de manera no limitativa analogos de adenina tales como 9-bencil-8-hidroxi-2-(2-metoxietoxi)adenina, 2-amino-N2-O-, metiladenosina, 8-aza-7-deaza-A, 7-deaza-A, vidarabina, 2-aminoadenosina, N1-metiladenosina, 8-azaadenosina, 5yodotubercidina y N1-Me-dG. En algunas formas de realizacion, el resto azucar S' en (III) es un derivado de azucar. definido en la Formula II.

En determinadas formas de realizacion de la invencion, el acido nucleico regulador inmunologico comprende una secuencia de acido nucleico que contiene al menos un B-Ldesoxinucleosido o un 3'-desoxinucleosido.

En algunas formas de realizacion de la invencion, el oligonucleotido inmunorregulador comprende una secuencia de acido nucleico que contiene al menos un dinucleotido seleccionado de CpG, C*pG, C*pG* y CpG*, en el que C es citosina o 2'-desoxicitidina, G es guanosina o 2' desoxiguanosina, C* es 2'-desoxitimidina, 1-(2'-desoxi-l3-D- ribofuranosilo)-2oxo-7-deaza-8-metil-purina, 2'-didesoxi-5-halocitosina, 2'-didesoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, arabinocitidina sustituida en 2'-desoxi-2', arabinocitidina sustituida en 2'-O, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi-N4-

alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina, u otros analogos de nucleosidos de pirimidina, G* es 2'-desoxi-7- deazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, arabinoguanosina sustituida en 2'-desoxi-2', arabinoguanosina sustituida en 2'-O, 2'-desoxiinosina, u otros analogos de nucleosidos de purina, y p es un enlace internucleosfdico seleccionado entre el grupo que consiste en fosfodiester, fosforotioato y fosforoditioato y en el que 5 la actividad de al menos un dinucleotido es regulada por la secuencia flanqueadora.

Las secuencias de IRO especfficos dentro de estas estructuras generales incluyen, entre otras, las que se muestran en la Tabla 4a.

10 Tabla 4a:

IRO/N° ID SEC:: Secuencia

5: 5'-CT AT CT GACGTT CT CT GT -3'

7: 5'-CT AT CT GACGTT CT CT GT -3'

17: 5'-CT AT CT GACG1TT CT CT GT -3'

37: 5'-CT AT CT GACG4TT CT CT GT -3'

39: 5'-CT AT CT GAC4GTT CT CT GT -3'

41: 5'-CT AT CT GAC5GTT CT CT GT -3'

43: 5'-CT AT CT GAC6GTT CT CT GT -3'

45: 5'-CT AT CT GACG5TT CT CT GT -3'

47: 5'-CT AT CT GAC7GTT CT CT GT -3'

64: 5'-CT AT CTAACGTT CT CT GT-3'

67: 5'-CTATCTAACG-,TTCTCTGT-3'

22: 5'-CT AT CT GAmCGTT CT CT GT -3'

9: 5'-CT AT CT GUCGTT CT CT GT -3'

10: 5'-CTATCTGUCGTTCTCTGT-3'

19: 5'-CTATCTGUCG1TTCTCTGT-3'

38: 5'-CTATCTGU CG4TT CTCTGT-3'

40: 5'-CTATCTGUC4GTTCTCTGT-3'

42: 5'-CTATCTGUCsGTTCTCTGT-3'

44: 5'-CTATCTGUC6GTTCTCTGT-3'

46: 5'-CTATCTGU CG5TT CTCTGT-3'

48: 5'-CTATCTGUCyGTTCTCTGT-3'

66: 5'-CT AT CTAUCGTT CT CT GT -3'

69: 5'-CTATCTAUCG-,TTCTCTGT-3'

65: 5'-CT AT CT AGCGTT CT CT GT -3'

68: 5'-CT AT CT AGCG1TT CT CT GT -3'

23: 5'-CT AT CT GmACGTT CT CT GT -3'

24: 5'-CT AT CT GmAmCGTT CT CT GT-3'

25: 5'-CT AT CT GAC2GTT CT CT GT -3'

27: 5'-CT AT CT GT C2GTT CT CT GT-3'

33: 5'-CT AT CT GAC3GTT CT CT GT -3'

35: 5'-CT AT CT GT C3GTT CT CT GT-3'

26: 5'-CT AT CT GACG2TT CT CT GT -3'

28: 5'-CT AT CT GTCG2TT CT CT GT-3'

34: 5'-CT AT CT GACG3TT CT CT GT -3'

36: 5'-CT AT CT GTCG3TT CT CT GT-3'

21: 3'-TCTTGCAGTCT-X2-TCTGACGTTCT-3'

52: 5'-CCT ACT AGCGTX1CTCATC-3'

53: 5'-CCT ACT AGCGX1TCTCATC-3'

54: 5'-CCT ACT AG3CGTT CT CAT C-3'

55: 5'-TCCATGA1 CGTTCCT GATGC-3'

56: 5'-CT AT CT GAC2G2TT CT CT GT-3'

57: 5'-C2T2A2T2C2T2G2A2C2G2T2T2C2T2C2T2G2T2-3'

29: 5'-CTATCTGAX1 GTTCTCTGT-3'

30: 5'-CT AT CT GACX1TT CT CT GT-3'

31: 5-CTATCTGTX1 GTTCTCTGT-3'

32: 5'-CT AT CT GT CX1TTCTCTGT-3'

61: 5'-CT AT CT AGCGTX1 CTCTGT-3'

62: 5'-CT AT CT AGCGX1TCTCTGT-3'

63: 5'-CT AT CT AGCGX1X1 CT CT GT -3'

58: 5'-CT AT CT GACGTX3CT CT GT -3'

59: 5'-CT AT CT GACGX3T CT CT GT -3'

60: 5'-CT AT CT GACGX3X3CT CT GT -3'

5

10

15

20

25

IRO/N° ID SEC:: Secuencia

70: 5'-CT AT CT AGCGTX3CT CT GT -3'

71: 5'-CT AT CT AGCGX3T CT CT GT -3'

72: 5'-CT AT CT AGCGX3X3CT CT GT -3'

74: 5'-CT AT CTGACGTT CT CT GT -3'

76: 5'-CCT ACT AG6CGTT CT CAT C-3'

77: 5'-TCCAT GACGU1TCCT GATGC-3'

78: 5'-CT AT CT GX2CGTT CT CT GT -3'

79: 5'-CT AT CTX2ACGTT CT CT GT-3'

80: 5'-CT AT CTU2ACGTT CT CT GT-3'

81: 5'-CTATCTGU2CGTTCTCTGT-3'

82: 5'-CT AT CT GACGX2T CT CT GT -3'

83: 5'-CT AT CT GACGTX2CT CT GT -3'

84: 5'-CT AT CT GX3CGTT CT CT GT -3'

85: 5'-CT AT CTX3ACGTT CT CT GT-3'

86: (5'-TCTGACGTTCT)2X2

87: (5'-T CT GACG1TT CT)2X2

88: (5'-TCTGACG4TTCT)2X2

89: (5'-TCTCTGACGTT)2X2

90: 5'-T CT GACG1TT CT-X3-T GACCGGT CA-3'

91: (5'-TCTGUCGTTCT)2X2

92: (5'-TCTGUCG1TTCT)2X2

93: (5'-TCTGACG4TTCT)2X2

94: (5'-TCTGACG1TT)2X2

95: 5'-T CT GACG1TT CT-X3-T CAACCACACA-3'

96: 5'-CTATCTGACG1TTCTCUGU-3'

97: 5'-CTATCTGUCG1TTCTCUGU-3'

98: (5'-UGUCG1TTCT)2X2

99: (5'-UGACG1TTCT)2X2

Subrayado G, A o U = 2'-OMe; Subrayado T = 3'-OMe; Ai = 3'-OMe; Gi=7-deaza-dG; m= PMe; A2, T2, C2, y G2 = B- L-desoxi nucleosido; Xi = abasico; X2 = enlazador de glicerol, X3 = enlazador-C3; C3 y G3 = 3'-desoxi-nude6sido; G4 = araG; C4 = araC; C5 = 5-OH-dC; G6 = N2Me-dG; C6 = 1-(2'-desoxi-p-D-ribofuranosilo)-2-oxo-7-deaza-8-metil- purina; G5 = NI-Me-dG; C7 = N3-Me-dC; Ui=3'-OMe; U2=dU

Las secuencias de los oligonucleotidos control pueden incluir las que se muestran en la Tabla 4b. Tabla 4b:

N° ID SEC:: Secuencia

1: 5'-CT AT CT GACGTT CT CT GT -3'

2: 5'-CT AT CT GTCGTT CT CT GT -3'

3: 5'-T CT GACG1TT CT-X2-T CTTG1CAGTCT-5'

4: 5'-CT AT CT CACCTT CT CT GT-5'

6: 5'-CTATCT GACG UUCTCTGT-3'

49: 5'-CT AT CT AGCGTJCT CT GT -3'

50: 5'-CT AT CT AGCGJT CT CT GT -3'

51: 5'-CT AT CT AGCGTTCT CT GT -3'

75: 5'-CT AT CT GACG1UUCT CT GT -3'

Subrayado U = 2'-OMe; Subrayado T = 3'-OMe; G1=7-deaza-dG; X2 = enlazador de glicerol

En algunas formas de realizacion, cada uno de los oligonucleotidos presentan de aproximadamente 6 a aproximadamente 35 restos nucleosidos, preferentemente de aproximadamente 9 a aproximadamente 30 restos nucleosidos, y mas preferentemente de aproximadamente 11 a aproximadamente 23 restos nucleosidos. En algunas formas de realizacion, los oligonucleotidos presentan aproximadamente de 6 a aproximadamente 18 restos nucleosidos.

En la presente memoria se describen las formulaciones farmaceuticas que incluyen un compuesto IRO, como se ha descrito anteriormente, en combinacion con un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a y un transportador fisiologicamente aceptable.

En la presente memoria tambien se describen los procedimientos para inhibir o reprimir la induccion de una

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

respuesta autoinmunitaria o inflamatoria en un mamffero, procedimiento que comprende la administracion a un mamffero de un compuesto IRO como se describe en la presente memoria en combinacion con un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a. En las formas de realizacion preferidas, el compuesto IRO y el agente antiinflamatorio se administran a un mamffero que necesita inmunosupresion.

A este respecto, un compuesto IRO puede suprimir una respuesta inmunitaria a otro ligando de TFR o agonista de TLR. La activacion de una respuesta inmunitaria basada en TLR por medio de un agonista de TLR o ligando de TLR (por ejemplo, un oligonucleotido inmunomodulador) puede ser suprimida/inhibida por la preadministracion o postadministracion simultanea de un compuesto IRO y tal supresion/inhibicion puede ser mantenida durante un largo perfodo de tiempo (por ejemplo, dfas) tras la administracion. Esta propiedad beneficiosa tiene una ventaja excepcional para la prevencion y/o el tratamiento de una enfermedad o trastorno. Por ejemplo, la aplicacion de algunos agonistas de TLR durante el curso de tratamiento de la enfermedad puede causar una estimulacion inmunitaria no deseada que un compuesto IRO podrfa suprimir/inhibir. La administracion del IRO de forma simultanea, previa a la administracion y/o posterior a la administracion del agonista de TLR puede ofrecer beneficios terapeuticos del agonista del TLR, mientras se suprimen/inhiben el/los efecto(s) secundarios no deseados. Ademas, la preadministracion de un compuesto IRO podrfa prevenir una respuesta inmunitaria (por ejemplo, una reaccion alergica) a una subsiguiente o posterior provocacion de un agonista del TLR.

La administracion de un compuesto IRO en combinacion con un agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a puede realizarse mediante cualquier via adecuada, incluyendo de manera no limitativa administracion parenteral, por la mucosa, oral, sublingual, transdermica, topica, mediante inhalacion, intranasal, mediante aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, mediante pistola genica, parche dermico o en forma de colirio o colutorio. La administracion de las composiciones terapeuticas puede llevarse a cabo usando procedimientos a dosificaciones y durante periodos de tiempo eficaces para reducir los sfntomas o marcadores indirectos de la enfermedad. Cuando se administra sistemicamente, la composicion terapeutica se administra preferentemente en una dosificacion suficiente para conseguir un nivel en sangre de un compuesto IRO de aproximadamente 0,0001 micromolar a aproximadamente 10 micromolar. Para una administracion localizada, pueden ser eficaces concentraciones mucho mas bajas que esta, y se pueden tolerar concentraciones mucho mas altas. Preferentemente, la dosificacion total de un compuesto IRO varfa de aproximadamente 0,001 mg por paciente por dfa a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por dfa. Puede ser deseable administrar de forma simultanea o secuencial una cantidad terapeuticamente eficaz de una o mas de las composiciones terapeuticas a un individuo en un unico episodio de tratamiento.

El compuesto IRO puede unirse opcionalmente a uno o mas alergenos y/o antfgenos (propios o extranos), una protefna inmunogena, tal como hemocianina de lapa californiana (KLH), subunidad B de la toxina del colera, o cualquier otra protefna transportadora inmunogena. Se puede usar tambien un compuesto IRO en combinacion con otros compuestos (por ejemplo, adyuvantes) incluyendo de manera no limitativa agonistas del TLR (por ejemplo, agonistas TLR2 y agonistas TLR9), adyuvante incompleto de Freund, KLH, monofosforil lfpido A (MPL), alumbre y saponinas, incluyendo QS-21 e imiquimod, o sus combinaciones.

Los procedimientos descritos en la presente memoria son utiles para estudios modelo del sistema inmunitario. Los procedimientos son tambien utiles para el tratamiento profilactico o terapeutico de una enfermedad humana o animal. Por ejemplo, los procedimientos son utiles para aplicaciones de vacunas pediatricas y veterinarias.

Los patogenos incluyen bacterias, parasitos, hongos, virus, viroides y priones. Los virus preferidos incluyen virus de ADN o ARN como, entre otros, virus de ADN bicatenarios (por ejemplo, virus del Herpes, Poxvirus, Hepadnavirus), virus de ADN monocatenarios (por ejemplo, Parvovirus), virus de ARN monocatenarios (por ejemplo, Picornavirus, Togavirus, Ortomixovirus y Rabdovirus) y los presentados en la Tabla 5. La administracion puede llevarse a cabo como se ha descrito anteriormente

Tabla 5:

Virus:: Tipo:

Citomegalovirus: ADNbc

Virus de la hepatitis A: ARNmc

Virus de la hepatitis B: ADNbc

Virus de la hepatitis C: ARNmc

Virus de la hepatitis delta: ARNmc

Virus de la hepatitis E: ARNmc

Virus de herpes simple: ADNbc

Virus de inmunodeficiencia humana: ARNmc

Virus del papiloma humano: ADNbc

Influenzavirus A: ARNmc

Influenzavirus B: ARNmc

Influenzavirus C: ARNmc

Virus de la fiebre por garrapatas de Colorado: dsRNA

5

10

15

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25

30

35

Virus del dengue: ARNmc

Virus del ebola: ARNmc

Virus Coxsackie A: ARNmc

Enterovirus 71 (EV71): ARNmc

Virus de la varicela zoster: ADNbc

Virus de Lassa: ADNbc

Virus de Marburgo: ARNmc

Virus de Epstein-Barr / Virus del herpes humano 4: ADNbc

Norovirus: ARNmc

Rotavirus: dsRNA

Virus JC: ADNbc

Virus de la rabia: ARNmc

Coronavirus asociado al SARS: ARNmc

Virus variola: dsRNA

Virus sincicial respiratorio humano: ARNmc

Adenovirus: ADNbc

Metapneumovirus humano: ARNmc

Virus del Nilo Occidental: ARNmc

Virus de la fiebre amarilla: ARNmc

Picornavirus: ARNmc

Virus del sarampion: ARNmc

Virus de las paperas: ARNmc

Virus de la polio: ARNmc

Virus de la rubeola: ARNmc

Virus de la encefalitis iaponesa: ARNmc

Virus Chandipura: ARNmc

Virus de la encefalitis de St. Louis: ARNmc

Virus de la encefalomielitis equina oriental: ARNmc

Virus de la encefalitis equina occidental: ARNmc

Virus de la encefalits equina venezolana: ARNmc

Un "paciente con riesgo de desarrollar una enfermedad o trastorno" es un paciente que ha sido expuesto a un agente etiologico o a otro factor ambiental que causa la enfermedad o trastorno, tanto si los sfntomas de la enfermedad han empezado a manifestarse, como si no lo han hecho.

En cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria, el compuesto IRO mas el agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a pueden suministrarse en combinacion con cualquier otro agente util para tratar la enfermedad o afeccion que no disminuya el efecto inmunomodulador del compuesto IRO o del agente antiinflamatorio que inhibe TNF-a. En cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria, el agente util para tratar la enfermedad o afeccion incluye, entre otros, una o mas vacunas, antfgenos, anticuerpos, agentes citotoxicos, alergenos, antibioticos, oligonucleotidos antisentido, agonistas del TLR, antagonistas del TLR, peptidos, protefnas, vectores de terapia genica, vacunas de ADN, adyuvantes, agentes antivirales, farmacos antipaludicos (por ejemplo, cloroquina e hidroxicloroquina), o inhibidores de cinasas para aumentar la especificidad o magnitud de la respuesta inmunitaria, o moleculas coestimuladoras como citocinas, quimiocinas, ligandos de protefna, factores transactivadores, peptidos y peptidos que incluyen aminoacidos modificados. Por ejemplo, en el tratamiento del cancer, se contempla que el compuesto IRO pueda administrarse con uno o mas compuestos quimioterapicos, agentes terapeuticos dirigidos y/o anticuerpos monoclonales. Alternativamente, el agente puede incluir vectores de ADN que codifican antfgenos o alergenos. En estas formas de realizacion, los compuestos IRO pueden actuar de diversas maneras como adyuvantes y/o producir efectos inmunomoduladores directos.

Se pretende que los ejemplos siguientes ilustren de manera adicional determinadas formas de realizacion ejemplificativas de la invencion, y no se pretende que limiten el alcance de la misma. Por ejemplo, en los siguientes ejemplos se muestran ligandos de TLR representativos, pero no limitan el alcance de los ligandos que actuan como antagonistas para los IRO utilizados en la invencion.

Ejemplo 1

Sfntesis de oligonucleotidos que contienen restos inmunorreguladores

Todos los IRO fueron sintetizados de acuerdo a procedimientos estandares (vease p.ej., la publicacion de patente US n° 2004/0097719).

Los oligonucleotidos fueron sintetizados en escala 1 pM utilizando un sintetizador de ADN automatico (Expedite 8909; PerSeptive Biosystems, Framingham, Mass.), siguiendo los procedimientos de sfntesis lineal o sfntesis paralela (vease p.ej., figuras 5 y 6 de la publicacion de patente US n° 2004/0097719).

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Las desoxirribonucleosido fosforamiditas se obuvieron de (Aldrich-Sigma, St Louis, Mo). 1',2'-dideoxirribosa fosforamidita, propil-1-fosforamidito, 2-desoxiuridina fosforamidita, 1,3-bis-[5-(4,4'-dimetoxitritil)pentilamidil]-2- propanol fosforamidita y metil fosforamidita se obtuvieron de Glen Research (Sterling, Va.). p-L-2'- desoxirribonucleosido fosforamidita, a-2'-desoxirribonucleosido fosforamidita, mono-DMT-glicerol fosforamidita y di- DMT-glicerol fosforamidita se obtuvieron de ChemGenes (Willmington, Mass.). (4Aminobutilo)-1,3-propanodiol fosforamidita se obtuvo de Clontech (Palo Alto, Calif.). Arabinocitidina fosforamidita, arabinoguanosina, arabinotimidina y arabinouridina se obtuvieron de Reliable Pharmaceutical (St. Louis, Mo.). Arabinoguanosina fosforamidita, arabinotimidina fosforamidita y arabinouridina fosforamidita fueron sintetizados en Idera Pharmaceuticals, Inc. (Cambridge, Mass.) (Noronha et al. (2000) Biochem. 39:7050-62).

Todas las nucleosido fosforamiditas se caracterizaron por espectros de RMN de 31P y 1H. Los nucleosidos modificados se incorporaron en sitios especfficos usando ciclos de acoplamiento normales. Despues de la sfntesis, los oligonucleotidos se desprotegieron usando hidroxido de amonio concentrado y se purificaron por HPLC de fase inversa, seguido de dialisis. Los compuestos purificados en forma de sal de sodio se liofilizaron antes de su utilizacion. La pureza se sometio a ensayo por CGE y MALDI-TOF MS.

Ejemplo 2

Los antagonistas de TLR7 y TLR9 en combinacion con inhibidores de TNF-a tratan la artritis de forma eficaz

Se indujo artritis en ratones DBA/1 por inyeccion intradermica (i.d) de colageno bovino tipo II (CII)/CFA el dfa 0 y CII/IFA el dfa 21.

Los ratones se dividieron en seis grupos (n=8). El tratamiento comenzo el dfa 28, cuando la mitad de los ratones mostraba sfntomas de artritis (puntuacion 1) Los antagonistas TLR7 y TRL9 (antagonistas TLR) o Enbrel (inhibidor de TNF-a ) o la combinacion de ambos agentes se administro a los ratones una vez cada 3 dfas hasta el dfa 46 (total de 7 dosis). Los ratones de los Grupos 1, 2 y 3 recibieron 1,25, 2,5 y 5 mg/kg del antagonista del TLR por inyeccion subcutanea (s.c.), respectivamente, ademas de 5 mg/kg del inhibidor de TNF-a; los ratones del Grupo 4 recibieron 5 mg/kg del antagonista del TLR por inyeccion subcutanea (s.c.); los ratones del Grupo 5 recibieron 5 mg/kg del inhibidor de TNF-a i.p.; los ratones del Grupo 6 recibieron un vehfculo (PBS) s.c.

Puntuaciones clfnicas. Los sfntomas de artritis fueron monitorizados en todos los ratones cada tres dfas a partir del dfa 21. Los sfntomas de artritis se puntuaron como 0: sin inflamacion en las patas; 1: patas con inflamacion en al menos un dedo; 2: inflamacion en la totalidad de la pata; 3: patas con deformidades o anquilosis. Se puntuo cada una de las cuatro patas, con una puntuacion maxima de 12 para cada raton. Los datos mostrados en la figura 1 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es mas eficaz que tratar y prevenir la progresion de la artritis con cada agente por separado. De forma mas global, estos datos demuestran que la combinacion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para prevenir la progresion de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias.

Supresion de la inflamacion en las articulaciones. El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y los tejidos de las articulaciones de las patas traseras se prepararon, fijaron y tineron con hematoxilina y eosina, y en el tejido de la articulacion se evaluaron histologicamente los leucocitos y la erosion osea. Los datos mostrados en la figura 2 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a es mas eficaz para prevenir la inflamacion de las articulaciones y la erosion osea resultante que con cada agente por separado. De forma mas global, estos datos demuestran que la combinacion de un antagonista del TLR con un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir la inflamacion de las articulaciones, la erosion osea y la progresion de la enfermedad. Supresion de perdida de cartflago. El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y los tejidos de las articulaciones de las patas traseras se prepararon, fijaron y tineron con Safranina O, y con la histologfa del tejido de la articulacion se evaluo la perdida de cartflago. Los datos mostrados en la figura 3 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a es mas eficaz para prevenir la perdida de cartflago que con cada agente por separado. De forma mas global, estos datos demuestran que la combinacion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir la perdida de cartflago y la progresion de la enfermedad.

Inflamacion en las patas traseras. El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y se evaluo y puntuo la inflamacion de las patas traseras (Grado 0 (sin hinchazon) a Grado 3 (hinchazon severa)). Los datos mostrados en la figura 4 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a es mas eficaz para prevenir la inflamacion del tejido que con cada agente por separado. De forma mas global, estos datos demuestran que la combinacion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir la inflamacion del tejido y la progresion de la enfermedad.

Produccion de anticuerpos IgG1 (tipo Th2). El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y el suero se recogio y analizo para determinar la concentracion de anticuerpos IgG1 (tipo Th2). Los datos mostrados en la figura 5 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a inhibe de forma eficaz la produccion de anticuerpos IgG1, y que la combinacion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a es mas

eficaz para suprimir la produccion de anticuerpos IgG1 que con cada agente por separado. De forma mas global, estos datos demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir la produccion de anticuerpos IgG1 (tipo Th2) y la progresion de la enfermedad.

5 Produccion de anticuerpos IgG2a (tipo Th1). El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y el suero se recogio y analizo para determinar la concentracion de anticuerpos IgG2a (tipo Th1). Los datos presentados en la figura 6 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a inhibe de forma eficaz la produccion de anticuerpos IgG2a (tipo Th1), y que el antagonista del TLR es el agente que causa la reduccion de anticuerpos IgG2a. De forma mas global, estos datos demuestran que la administracion de un 10 antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir la produccion de anticuerpos IgG2a (tipo Th2) y la progresion de la enfermedad.

Produccion de IFN-y / Respuesta inmunitaria. El dfa 58, los ratones fueron sometidos a eutanasia y el suero se recogio y analizo para determinar la concentracion de IFN-y (citocina tipo Th1) como indicador de la respuesta 15 inmunitaria de tipo Th1. Los datos mostrados en la figura 7 demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un inhibidor de TNF-a inhibe de forma eficaz IFN-y (una citocina tipo Th1) y que el antagonista del TLR es el agente que causa la reduccion de IFN-y (respuesta inmunitaria de tipo Th 1). De forma mas global, estos datos demuestran que la administracion de un antagonista del TLR mas un agente inhibidor de TNF-a es util para inhibir IFN-y (respuesta inmunitaria de tipo Th1) y la progresion de la enfermedad.

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REIVINDICACIONES

1. Compuesto IRO para la utilizacion en un procedimiento para tratar terapeuticamente un mamffero que presenta una enfermedad que presenta un componente autoinmunitario o inflamatorio, comprendiendo dicho procedimiento administrar al mamffero un compuesto IRO que presenta la estructura

5'-Nm-N3N2NiCGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

CG es un motivo oligonucleotfdico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotfdico de pirimidina que es un nucleotido de pirimidina que presenta una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotfdico de purina que es un nucleotido de purina que presenta una base que no es guanina o adenina y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido;

N1-N3 en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico siempre que por lo menos un N1-N3 sea un derivado nucleotfdico o un enlace no nucleotfdico que suprima la actividad del motivo oligonucleotfdico;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico;

Nm y Nm, en cada aparicion, es independientemente un nucleotido, derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o un enlace no nucleotfdico;

y siempre que ademas el compuesto contenga menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos;

en el que el motivo oligonucleotfdico serfa inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico;

en el que m es un numero desde 0 a aproximadamente 30

en combinacion con un agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-a en una cantidad farmaceuticamente eficaz.
2. Compuesto IRO para la utilizacion en un procedimiento para prevenir una enfermedad o un trastorno que presenta un componente autoinmunitario o inflamatorio en un mamffero con riesgo de desarrollar dicha/o enfermedad o trastorno, comprendiendo dicho procedimiento administrar al mamffero un compuesto IRO que presenta la estructura

5'-Nm-N3N2NiCGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

CG es un motivo oligonucleotfdico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotfdico de pirimidina que es un nucleotido de pirimidina que presenta una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotfdico de purina que es un nucleotido de purina que presenta una base que no es guanina o adenina y/o un azucar que no es ribosa o 2'desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido;

N1-N3 en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico, siempre que por lo menos un N1-N3 sea un derivado nucleotfdico o un enlace no nucleotfdico que suprima la actividad del motivo oligonucleotfdico;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o

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un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico;

Nm y Nm, en cada aparicion, es independientemente un nucleotido, un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o un enlace no nucleotfdico;

y siempre que ademas el compuesto contenga menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos;

en el que el motivo oligonucleotfdico serfa inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico;

en el que m es un numero desde 0 a aproximadamente 30

y un agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-a en una cantidad farmaceuticamente eficaz.
3. Compuesto IRO para la utilizacion segun la reivindicacion 1 o 2, comprendiendo el compuesto IRO por lo menos dos oligonucleotidos unidos por un enlazador no nucleotfdico en sus extremos 3' en el que el enlazador no nucleotfdico puede estar unido al 3'hidroxilo, azucar funcionalizado o base nitrogenada funcionalizada, en el que por lo menos un oligonucleotido presenta la estructura

5'-Nm-NaN2NiCGN1N2N3-Nm -3':

en el que:

CG es un motivo oligonucleotfdico que es CpG, C*pG, C*pG* o CpG*, en el que C es citosina, C* es un derivado nucleotfdico de pirimidina que es un nucleotido de pirimidina que presenta una base que no es citosina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, G es guanosina, y G* es un derivado nucleotfdico de purina que es un nucleotido de purina que presenta una base que no es guanina o adenina y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico, siempre que por lo menos un N1-N3 sea un derivado nucleotfdico o un enlace no nucleotfdico que suprima la actividad del motivo oligonucleotfdico;

N1-N3, en cada aparicion, es independientemente i) un nucleotido, ii) un derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o iii) un enlace no nucleotfdico;

Nm y Nm, en cada aparicion, es independientemente un nucleotido, derivado nucleotfdico que es un nucleotido de purina o pirimidina que presenta una base que no es guanina, citosina, adenina, timina o uracilo y/o un azucar que no es ribosa o 2'-desoxirribosa y puede estar presente en el esqueleto de un oligonucleotido, o enlace no nucleotfdico;

y siempre que ademas el compuesto contenga menos de 3 nucleotidos de guanosina consecutivos;

en el que el motivo oligonucleotfdico serfa inmunoestimulador de no ser por el derivado nucleotfdico o el enlace no nucleotfdico que suprime la actividad del motivo oligonucleotfdico;

en el que m es un numero desde 0 a aproximadamente 30.
4. Compuesto IRO para la utilizacion segun la reivindicacion 3, en el que el enlazador no nucleotfdico que enlaza dichos por lo menos dos oligonucleotidos se selecciona de entre el grupo que consiste en glicerol (1,2,3- propanotriol), 1,2,4-butanotriol, 2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, 2-(hidroximetil)-1,4-butanodiol, 1,3,5-pentanotriol, 1,1,1-tris(hidroximetil)etano, 1,1,1-tris(hidroximetil)nitrometano, 1,1,1-tris(hidroximetil)propano, 1,2,6-hexanotriol, 3- metil-1,3,5-pentanotriol, 1,2,3-heptanotriol, 2-Amino-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, N-

[tris(hidroximetil)metil]acrilamida, cis-1,3,5-ciclohexanotriol, cis-1,3,5-tri(hidroximetil)ciclohexano, 3,5- di(hidroximetil)fenol, 1,3,5-trihidroxil-benceno, 3,5-di(hidroximetil)benceno, 1,3-di(hidroxietoxi)-2-hidroxil-propano,

1.3- di(hidroxipropoxi)-2-hidroxil-propano, 2-desoxi-D-ribosa, 1,2,4-trihidroxil-benceno, D-galactal, 1,6-anhidro-U-D- glucosa, acido 1,3,5-tris(2-hidroxietil)-cianurico, acido galico, 3,5,7-trihidroxiflavona, 4,6-nitropirogalol, etilenglicol,

1.3- propanodiol, 1,2-propanodiol, 1,4-butanodiol, 1,3-butanodiol, 2,3-butanodiol, 1,4-butanodiol, 1,5-pentanodiol, 2,4-

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pentanodiol, 1,6-hexanodiol, 1,2-hexanodiol, 1,5-hexanodiol, 2,5-hexanodiol, 1,7-heptanodiol, 1,8-octanodiol, 1,2- octanodiol, 1,9-nonanodiol, 1,12-dodecanodiol, trietilenglicol, tetraetilenglicol, 2-(1-aminopropil)-1,3-propanodiol, o

I, 2-didesoxirribosa.
5. Compuesto IRO para la utilizacion segun la reivindicacion 4, en el que el enlazador no nucleotfdico que enlaza dichos por lo menos dos oligonucleotidos es el glicerol (1,2,3-propanotriol)
6. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el derivado nucleotfdico de pirimidina es 2'-desoxitimidina, 1-(2'-desoxi-l3-D-ribofuranosilo)-2-oxo-7-deaza-8-metil-purina, 2'- didesoxi-5-halocitosina, 2'-didesoxi-5-nitrocitosina, arabinocitidina, arabinocitidina sustituida en 2'-desoxi-2', arabinocitidina sustituida en 2'-O, 2'-desoxi-5-hidroxicitidina, 2'-desoxi-N4-alquil-citidina, 2'-desoxi-4-tiouridina.
7. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el derivado nucleotfdico de purina es 2'-desoxi-7-deazaguanosina, 2'-desoxi-6-tioguanosina, arabinoguanosina, arabinoguanosina sustituida en 2'-desoxi-2', arabinoguanosina sustituida en 2'-O, 2'-desoxiinosina.
8. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 3 a 7, en el que uno de los oligonucleotidos presenta la secuencia seleccionada de entre TCTGACGTTCT (SEC ID n°: 86), TCTGACG1TTCT (SEC ID n°: 87), TCTGACG4TTCT (SEC ID n°: 88), TCTCTGACGTT (SEC ID n°: 89), TCTGUCGTTCT (SEC ID n°: 91), TCTGUCG1TTCT (SEC ID n°: 92), TCTGACG4TTCT (SEC ID n°: 93), TCTGACG1TT (SEC ID n°: 94), UGUCG1TTCT (SEC ID n°: 98) y UGACG1TTCT (SEC ID n°: 99).
9. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, siendo el compuesto IRO seleccionado de entre

5'-(TCTGACGTTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 86-3'-X2-3'-SEC ID n°: 86-5'),

5'-(TCTGACG-iTTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 87-3'-X2-3'-SEC ID n°: 87-5'),

5'-(TCTGACG4TTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 88-3'-X2-3'-SEC ID n°: 88-5'),

5'-(TCTCTGACGTT)2X2 (5'-SEC ID n°: 89-3'-X2-3'-SEC ID n°: 89-5'),

5'-(TCTGUCGTTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 91-3'-X2-3'-SEC ID n°: 91-5'),

5'-(TCTGUCG1TTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 92-3'-X2-3'-SEC ID n°: 92-5'),

5'-(TCTGACG4TTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 93-3'-X2-3'-SEC ID n°: 93-5'),

5'-(TCTGACG1TT)2X2 (5'-SEC ID n°: 94-3'-X2-3'-SEC ID n°: 94-5'),

5'-(UGUCG-iTTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 98-3'-X2-3'-SEC ID n°: 98-5') y 5'-(UGACG-iTTCT)2X2 (5'-SEC ID n°: 99-3'-X2-3'-SEC ID n°: 99-5').
10. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el compuesto IRO y el agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-a se administran en combinacion con una o mas vacunas, antfgenos, anticuerpos, agentes citotoxicos, alergenos, antibioticos, oligonucleotidos antisentido, agonistas de TLR, antagonistas de TLR, peptidos, protefnas, vectores de terapia genica, vacunas de ADN, adyuvantes, agentes antivirales o moleculas coestimuladoras.

II. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la ruta de administracion del compuesto IRO y el agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-a es independientemente parenteral, suministro por la mucosa, oral, sublingual, transdermica, topica, inhalacion, intranasal, aerosol, intraocular, intratraqueal, intrarrectal, vaginal, mediante pistola genica, parche dermico o en forma de colirio o colutorio.
12. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el agente antiinflamatorio que inhibe el TNF-a es etanercept, infliximab o adalimumab.
13. Compuesto IRO para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la enfermedad que presenta un componente autoinmunitario o inflamatorio es artritis reumatoide, artritis de psoriasis, psoriasis, uveitis, espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn, sarcoidosis, colitis o cancer.