ES2617982T3

ES2617982T3 - Procalcitonina para la prognosis de eventos adversos

Info

Publication number: ES2617982T3
Application number: ES10745669.1T
Authority: ES
Inventors: Joachim Struck; S. J. L. Bakker
Original assignee: BRAHMS GmbH
Current assignee: BRAHMS GmbH
Priority date: 2009-08-28
Filing date: 2010-08-27
Publication date: 2017-06-20
Anticipated expiration: 2030-08-27
Also published as: JP5827229B2; US20190227081A1; US11835531B2; EP2470910B1; US20120149131A1; CN102472752A; DK2470910T3; EP2470910A1; JP2013503329A; WO2011023813A1; HK1169165A1; CN102472752B

Abstract

Un procedimiento ex vivo, para determinar el riesgo incrementado, de un sujeto aparentemente sano, el cual tenga un valor de base de referencia, del nivel de la PCT < 0,1 ng / ml, de una forma preferible, un humano, en cuanto al hecho de que éste sufra de un evento adverso, cuando el citado sujeto, se encuentra exento de infecciones bacterianas, lo cual significa que, el nivel de la PCT, no se encuentra incrementado por encima del rango normal, significando ello que, el nivel de la PCT, en plasma, no se encuentra incrementado por encima de un valor de 0,25 ng / ml, y en donde, el citado sujeto, no muestra ningún síntoma, que podría permitir la diagnosis de una enfermedad infecciosa, procedimiento éste, el cual comprende: - determinar el nivel de la procalcitonina (PCT) o un fragmento de ésta, en una muestra del citado sujeto, en donde, la citada muestra, se selecciona de entre grupo consistente en sangre, en suero, y en plasma - determinar el hecho de si, el citado sujeto, tiene un riesgo incrementado para sufrir de un evento adverso, basado en el citado nivel de la PCT, en donde, unos niveles de la PCT elevados, son de un valor de pronóstico, para predecir el hecho de si, el sujeto en cuestión, se encuentra en riesgo de sufrir de un evento adverso, en el futuro, en donde, se predice un riesgo dentro de un transcurso de tiempo de 6 meses a 10 años, y en donde, el citado evento adverso, no se trata de un evento causado por evento agudo inducido por un factor exógeno y / o un trauma inducido por un factor exógeno, y en donde, los siguientes sujetos, se excluyen del grupo de sujetos aparentemente sanos: - neonatos comprendidos dentro de una edad que va desde un día hasta 3 días, y - pacientes post-quirúrgicos, en donde, la cirugía, se haya llevado a cabo dentro de los últimos 7 días, y - pacientes post-traumáticos y personas las cuales hayan experimentado dicho trauma, dentro de los últimos 7 días, y en donde, el evento adverso, se elige de entre el grupo consistente en los eventos cardíacos, en los eventos cardiovasculares, en los eventos cerebrovasculares, en la mortalidad cardiovascular, en la diabetes, en la mortalidad por cáncer, y en la muerte, y en donde, el citado sujeto, se encuentra en riesgo de sufrir del citado evento adverso, cuando el nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,015 ng / ml.

Description

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DESCRIPCION

Procalcitonina para la prognosis de eventos adversos Sector de la invencion

La presente invencion, pertenece al sector de los diagnosticos clmicos. De una forma particular, la presente invencion, se refiere a la determinacion del nivel de procalcitonina (PCT), en una muestra, derivada de un fluido corporal de sujeto, en donde, el fluido corporal en cuestion, consiste en sangre, en suero o en plasma.

Antecedentes y trasfondo de la invencion

La procalcitonina (PCT), es conocida, como un biomarcador, el cual refleja la presencia y la gravedad de infecciones bacterianas sistemicas, es decir, la sepsis (Assicot et al., Lancet 1993; 341: 515 - 8; Muller et al., Crit Care Med 2000; 28 : 977 - 83.; Harbarth et al., Am J Respir Crit Care Med 2001; 164: 396 - 402; Becker et al., Crit Care Med 2008; 36:941 - 52; Becker et al., J Clin Endocrinol Metab 2004; 89 :1512 - 25; Nobre et al., Am J Respir Crit Care Med 2008; 177: 498 - 505; Christ -Crain et al., Lancet 2004; 363: 600 - 7; Stolz et al., Chest 2007;131: 9 -19; Christ - Crain et al., Am J Respir Crit Care Med 2006;174 : 84 - 93; Briel et al., Arch Intern Med 2008; 168: 2000 - 7; discusion 7 - 8).

Durante las infecciones bacterianas, las concentraciones de la PCT en plasma, se encuentran, de una forma tfpica, a un nivel por encima de los 0,25 ng / ml. En un tiempo mas reciente, y mediante la utilizacion de tecnologfas que permiten una mayor sensibilidad de los ensayos, se ha encontrado el hecho de que, en diversas infecciones de una indole no grave, las concentraciones de la PCT, pueden elevarse a los rangos de concentracion superiores, o incluso por encima de estos, pero, no obstante, por debajo de la concentracion la cual se ha conocido que se encuentra asociada con las infecciones bacterianas las cuales requieren un tratamiento antibacteriano. De una forma adicional, se ha encontrado que, estas concentraciones de la PCT, se encentran asociadas con una prognosis no favorable, para estos pacientes.

Estas enfermedades, incluyen a la enfermedad de las arterias coronarias, y a los smdromes coronarios. Existen unicamente dos publicaciones, las cuales describen las concentraciones cuantitativas de la PCT, en individuos sanos (vease, a dicho efecto, (Morgenthaler et al., Clin Chem 2002, 48: 788 - 790; Morgenthaler et al., Clin Lab 2002, 48: 263 - 270). Sin embargo, no obstante, se desconoce el hecho de si, unas concentraciones relativamente elevadas de la PCT, en individuos sanos, pueden encontrarse relacionadas con la aparicion o futuros eventos adversos. La posibilidad de predecir los eventos adversos futuros, para los individuos los cuales se encuentran aparentemente sanos, al presentarse, es importante, puesto que, el reconocimiento temprano de riesgo, es un requisito previo para proceder a tomar medidas, las cuales puedan ayudar en la prevencion o evitacion de desarrollar eventos adversos.

Asf, de este modo, es un objeto de la presente invencion, el establecer un vinculo de union entre los niveles de la PCT en la poblacion aparentemente sana (asintomatica), y la prognosis de los eventos adversos.

Resumen de la invencion

La presente invencion, se basa en el sorprendente descubrimiento consistente en el hecho de que, los niveles de la PCT, en las muestras procedentes de sujetos asintomaticos, los cuales, posteriormente, han sufrido de un evento adverso, se encuentran incrementados, con relacion a los niveles de la PCT, en las muestras procedentes de sujetos asintomaticos, los cuales no sufriran de un evento adverso, de una forma estadfsticamente relevante.

La presente invencion, se refiere a un procedimiento in vitro, en concordancia con la reivindicacion 1, de este documento de solicitud de patente, para la prognosis de un sujeto asintomatico, en cuanto al hecho de que, este, experimente un evento adverso. El procedimiento en cuestion, comprende: En primer lugar, se proceder a determinar el nivel de procalcitanina (PCT) o de fragmentos de esta, en una muestra procedente de un sujeto. En segundo lugar, se proceder a correlacionar el nivel de procalcitonina, o fragmentos de esta, con el riesgo de que un sujeto sufra de un evento adverso.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion, se refiere a un procedimiento, en concordancia con la reivindicacion 1, de este documento de solicitud de patente, para determinar el riesgo de que, un sujeto aparentemente sano, sufra de un evento adverso, o para determinar la presencia o la ausencia de un riesgo incrementado, de un sujeto aparentemente sano, en cuanto al hecho de que este sufra de un evento adverso, en el futuro. Asf, de este modo, se procede a determinar el riesgo de que acontezcan eventos adversos, para el sujeto en cuestion, durante un penodo de tiempo comprendido dentro de unos margenes que van desde los aproximadamente 6 meses, hasta los aproximadamente 10 anos. El

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procedimiento en cuestion, comprende las siguientes etapas: Se procede a la obtencion de una muestra, procedente del sujeto en cuestion. En segundo lugar, se proceder a determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o de un fragmento de esta, en la muestra en cuestion. En tercer lugar, se procede a determinar el riesgo de un sujeto, en cuanto al hecho de que este experimente un evento adverso, en base al nivel de la PCT, o bien, se procede a determinar el riesgo en cuanto al hecho consistente en que, el sujeto tenga un riesgo incrementado de sufrir de un evento adverso, en base al citado nivel de PCT.

El termino “riesgo”, tal y como este se utiliza aqrn, en este documento de solicitud de patente, se refiere a la probabilidad, para un sujeto, de que este sufra, en el futuro, de un determinado evento adverso.

“Sujeto”, tal y como este termino se utiliza aqrn, en este documento de solicitud de patente, se refiere a un ser humano, o a un organismo no humano. De una forma adicional, se prefiere el hecho de que, el sujeto en cuestion, se encuentre exento de infracciones bacterianas (sintomaticas), en el momento en el cual se ha procedido a la obtencion de la muestra del sujeto, procedente del sujeto en cuestion. Esta accion, asegura el hecho consistente en que, los niveles de la PCT, no se encuentren incrementados, por encima del rango normal, en el sujeto en cuestion.

Asf, por lo tanto, el sujeto en cuestion, se somete a test de ensayo, en cuanto a lo referente a las infecciones bacterianas, previamente a llevar a cabo el procedimiento de la presente invencion.

El sujeto “aparentemente sano”, tal y como se entiende en este documento de solicitud de patente, se encontrara asf mismo, tambien, exento de cualesquiera tipo de enfermedades no infecciosas, es decir que, el sujeto en cuestion, no muestre ningun tipo de smtomas, los cuales podnan permitir una diagnosis de una enfermedad no infecciosa. El termino “enfermedad no infecciosa”, tal y como este se utiliza aqrn, en este documento de solicitud de patente, se refiere a enfermedades tales como la hipertension, las enfermedades ortopedicas, tales como la osteoporosis, y las enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer. Se conoce el hecho de que, la concentracion de la PCT, se encuentra incrementada en los neonatos, debido al trauma post-natal. Asf, por lo tanto, los neonatos, se encuentran excluidos de las reivindicaciones. Los neonatos, en concordancia con las definiciones de las presentes invenciones, son de una forma preferible, los ninos recien nacidos con una edad comprendida dentro de unos margenes los cuales van desde 1 dfa, hasta los 10 dfas, siendo dicha edad, de una forma preferible, de 3 dfas. Es tambien conocido el hecho de que, las concentraciones de la PCT, se encuentran incrementadas, en los pacientes, despues de una intervencion quirurgica, tal como, por ejemplo, despues de un trasplante de organos, tal como el consistente en un trasplante de corazon, en un trasplante de pulmon, en un trasplante de rinon, en una cirugfa cardfaca. Asf, de este modo, los pacientes, despues de una intervencion quirurgica, tal como, por ejemplo, despues de un trasplante de organos, tal como el consistente en un trasplante de corazon, en un trasplante de pulmon, en un trasplante de rinon, en una cirugfa cardfaca, se encuentran excluidos del grupo de personas sanas, si la cirugfa se ha llevado a cabo dentro de los ultimos siete dfas, excluyendose, de una forma preferible, los pacientes post-quirurgicos, en los cuales, la intervencion quirurgica, se ha llevado a cabo dentro de los ultimos catorce dfas. En otra forma de presentacion, en concordancia con la presente invencion, se encuentran excluidos los pacientes postquirurgicos, los cuales hayan sufrido una intervencion quirurgica, en los ultimos dos meses. De una forma preferencial, se encuentran excluidos los pacientes y las personas postraumaticas, los cuales hayan sufrido el trauma en cuestion, dentro de los ultimos 14 dfas, de una forma preferible, dentro de los ultimos 7 dfas.

El termino “muestra”, tal y como este se utiliza aqrn, en este documento de solicitud de patente, se refiere a un fluido corporal, el cual se ha obtenido para los propositos de una diagnosis, de una prognosis, o de una evaluacion, de un sujeto de interes, tal como el consistente en un paciente. La muestra en cuestion, se selecciona de entre la sangre, el suero, o y el plasma. De una forma adicional, una persona experta en el arte especializado de la tecnica, se dara cuenta del hecho consistente en que, algunas muestras de ensayo, se analizaran de una forma mas sencilla, rapida y sencilla, siguiendo un procedimiento de fraccionamiento o purificacion, tal como, por ejemplo, una separacion de del sangre entera, convirtiendola en componentes de suero o plasma.

Asf, de este modo, en concordancia con la presente invencion, la muestra, se selecciona de entre el grupo consistente en una muestra de sangre, en una muestra de suero, o en una muestra de plasma, o en un extracto de cualesquiera de las anteriormente mencionadas muestras. De una forma preferible, la muestra en cuestion, se trata de una muestra de sangre, tratandose esta, de una forma mayormente preferible, de una muestra de suero o de una muestra de plasma.

En la presente invencion, el termino “prognosis”, significa una prediccion de como, es decir, de que forma, progresara la condicion medica de un sujeto (tal como por ejemplo, de un paciente). Esta accion, puede incluir una estimacion de la posibilidad de que le acontezca un evento adverso, al paciente en cuestion.

Un “evento adverso”, o un resultado adverso, tal y como este se utiliza en la presente invencion, se definira como un evento o un resultado, el cual comprometa la salud de un individuo. En concordancia con la presente invencion, un evento adverso, se selecciona de entre el grupo que comprende a un evento cardfaco, a un evento cardiovascular, a un evento cerebrovascular, a un cancer, a la diabetes, y la muerte, debido a la totalidad de las causas. Un evento adverso, no significa un evento agudo inducido por un factor exogeno y / o un trauma inducido por un factor

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exogeno. El trauma inducido por un factor exogeno, incluye a aquellos los cuales pueden estar provocados por accidentes, tales como, por ejemplo, los consistentes en los accidentes de coche. Los traumas inducidos por factores exogenos, se excluyen, por lo tanto, del grupo de los factores adversos.

Un evento cardfaco, tal y como este se utiliza aqm, en este documento de solicitud de patente, se define como la suma de los siguientes eventos: el infarto agudo de miocardio (Codigo de ICD = 410) - [ICD = Clasificacion Internacional de las Enfermedades - (de sus siglas en idioma ingles, correspondientes a International Classification of Diseases) -] , la cardiopatfa isquemica (Codigo de ICD = 411), y los siguientes procedimientos: injerto de revascularizacion coronaria o angiopatfa coronaria transluminal percutanea.

Un evento cerebrovascular, tal y como este se define aqm, en este documento de solicitud de patente, es la suma de cualesquiera de los siguientes eventos: oclusion o estenosis de las arterias precerebrales (codigo de ICD = 433) o de las arterias cerebrales (codigo de ICD = 434).

La mortalidad vascular, se ha definido como la muerte, debida a un evento cardfaco o a un evento cerebrovascular. Los eventos cardiovasculares totales, se han definido como siendo la suma de los eventos cardfacos, de los eventos cerebrovasculares y de la mortalidad cardiovascular.

Tal y como se ha mencionado anteriormente, arriba, en este documento de solicitud de patente, en el contexto de las protemas o peptidos, el termino “fragmento”, se refiere a protemas o peptidos mas pequenos, los cuales son susceptibles de poderse de protemas o peptidos mas pequenos, los cuales, por consiguiente, comprenden una secuencia de las protemas o peptidos mas grandes. Tales tipos de fragmentos, son susceptibles de poderse derivar de protemas o peptidos mas grandes, mediante la soponificacion de uno o mas de los enlaces de peptidos.

La procalcitonina, en el contexto de la presente invencion, se refiere, de una forma preferible, a un peptido, el cual abarca a los residuos de aminoacidos 1 - 116, 2 - 115, o 3 - 116, o a fragmentos de estos. Asf, de este modo, la longitud de los fragmentos de procalcitonina, debenan tener por lo menos 12 o 15 aminoacidos, teniendo estos, de una forma preferible, mas de 50 aminoacidos, y de una forma mas preferible, mas de 100 o de 110 aminoacidos.

La PCT, puede comprender modificaciones post-traduccionales, tales como las consistentes en la glicosilacion, en la liposidacion, o en derivatizacion. La PCT, en sf misma, es un precursor de la calcitonina y de la catacalcina. La secuencia de aminoacidos de la PCT 1 - 116, se proporciona en la SEQ ID NO. 1.

El termino “nivel”, en el contexto de la presente invencion, se refiere a la concentracion (de una forma preferible, a la concentracion expresada en peso / volumen - p / v) de la PCT (o de un fragmento / precursor de esta), en una muestra, la cual se ha tomado de un sujeto.

La determinacion (o la medicion, o la deteccion) del nivel de la PCT, o de un fragmento, o de un precursor de esta, o de un fragmento de dicho precursor de esta, se lleva a cabo mediante la utilizacion de un procedimiento de deteccion y / o de un ensayo de diagnostico, de la forma la cual se explica abajo, a continuacion, en la parte que sigue de este documento de solicitud de patente.

Tal y como se menciona aqm, en este documento de solicitud de patente, un “ensayo”, o un “ensayo de diagnostico”, puede ser de cualquiera de los tipos los cuales se aplican en sector de los diagnosticos. Tal tipo de ensayo, puede estar basado en la union de un analito a ser detectado, a una o mas sondas de captura, con una determinada afinidad. En cuanto a lo concerniente a la interaccion entre las moleculas de captura y las moleculas de interes, la afinidad constante, de una forma preferible, es mayor de un valor de 108 M-1.

En el contexto de la presente invencion, las “moleculas de captura”, son moleculas la cuales pueden utilizarse para unirse a las moleculas diana, o a las moleculas de interes, a saber, los analitos (es decir, en el contexto de la presente invencion el peptido cardiovascular o los peptidos cardiovaculares), procedentes de una muestra. Las moleculas de captura, deben entonces conformarse o modelarse de una forma adecuada, de ambas formas, espacialmente, y en terminos de los rasgos distintivos o las caractensticas superficiales, tales como los consistentes en la carga superficial, en la hidrofobicidad, en la hidrofilicidad, en la presencia o la ausencia de los donantes y / o aceptores de Lewis, para unirse o enlazarse, de una forma espedfica, a las moleculas de interes. En virtud de lo anteriormente expuesto, el enlace o union, puede estar mediatizado, por ejemplo, mediante interacciones de enlaces ionicos, de van - der - Waals, de pi - pi, de sigma - pi, hidrofobicos o de hidrogeno, o una combinacion de dos o mas de las anteriormente mencionadas interacciones, entre las moleculas de captura y las moleculas diana, o las moleculas de interes. En el contexto de la presente invencion, las moleculas de captura, se seleccionan, de una forma preferible, de entre el grupo que comprende a una molecula de acido nucleico, a una molecula de hidrato de carbono, o una molecula de RNA, a una protema, a un anticuerpo, o a una glicoprotema. De una forma preferible, las moleculas de captura, son anticuerpos, incluyendo a los fragmentos de estos, con una suficiente afinidad a la molecula diana o la molecula de interes, y estas incluyen a los anticuerpos recombinantes, o los fragmentos de los anticuerpos recombinantes, asf como tambien a los derivados qmmicamente y / o bioqmmicamente modificados, de dichos anticuerpos o fragmentos de una cadena variante, con una longitud de por le menos 12 aminoacidos de esta.

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Los procedimientos preferidos de deteccion, comprenden a los inmunoensayos de varios formatos, tales como, por ejemplo, los consistentes en los radioinmunoensayos (RIA - [de sus siglas en idioma ingles), en los inmunoensayos de quimioluminiscencia y fluorescencia, en los inmunoensayos unidos a enzimas (ELISA), en las series de perlas basadas en la tecnologfa Luminex, en los ensayos de microseries de protemas, y en formatos rapidos de tests de ensayo.

La determinacion del nivel de PCT, se lleva a cabo, de una forma preferible, mediante la utilizacion de un anticuerpo (policlonal o, de una forma preferible, monoclonal), de una forma particular, mediante la utilizacion de un anticuerpo, el cual se una, una forma espedfica, a la porcion de catacalcina de la PCT, o a la porcion de calcitonina de la PCT.

Los ensayos, pueden consistir en ensayos homogeneos, o en ensayos heterogeneos, y ensayos competitivos y ensayos no competitivos. En una forma particular de presentacion, en concordancia con la presente invencion, el ensayo, se trata de un ensayo en la forma de un ensayo sandwich, el cual es un inmunoensayo no competitivo, en donde, la molecula a ser detectada y / o cuantificada, se encuentra unida a un primer anticuerpo y a un segundo anticuerpo. El primer anticuerpo, puede encontrarse unido a una fase solida, tal como, por ejemplo, la consistente en una perla, en una superficie de un pozo u otro recipiente, en una astilla, o en una cinta, y el segundo anticuerpo, es un anticuerpo, el cual se encuentra marcado, por ejemplo, mediante una tintura o colorante, mediante un radioisotopo, o mediante una porcion reactiva o catalfticamente activa. La cantidad de anticuerpo marcado, unido al analito, se mide, entonces, mediante un procedimiento apropiado. La composicion y los procedimientos involucrados con “ensayos del tipo sandwich”, se encuentran bien establecidos y estos se conocen bien, por parte de aquellas personas expertas en el arte especializado de la tecnica. (Vease, a dicho efecto, Immunoassay Handbook, - Manual de los inmunoensayos -, Ed. David Wild, Elsevier LTD, Oxford; 3a Edicion (Mayo del 2005), ISBN - 13: 978 -

0080445267; Hultschig C et al., Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb; 10 (1): 4 -10. PMID: 16376134.)

En una forma particularmente preferida de presentacion, en concordancia con la presente invencion, el ensayo, comprende dos moleculas de captura, de una forma preferible, anticuerpos, los cuales se encuentran ambos presentes, como dispersiones, en una mezcla de reaccion, en forma lfquida, en donde, un primer componente de marcaje, se encuentra unido a la primera molecula de captura, en donde, el citado primer componente de marcaje en cuestion, es parte de un sistema de marcaje, basado en una extincion por fluorescencia o por quimioluminiscencia, o amplificacion, y un segundo componente de marcaje, del citado sistema de marcaje, se

encuentra unido a la segunda molecula de captura, de tal forma que, despues de la union de ambas moleculas de

captura, al analito, se genera un senal susceptible de ser medida, la cual permite la deteccion de los complejos sandwich formados, en la solucion la cual comprende la muestra.

De una forma incluso mas preferida, en concordancia con la presente invencion, el citado sistema de marcaje, comprende criptatos de tierras raras, o quelatos de tierras raras, en combinacion con una tintura o colorante fluorescente o una tintura o colorante quimioluminiscente, de una forma particular, una tintura o colorante del tipo consistente en la cianina.

En el contexto de la presente invencion, los ensayos basados en fluorescencia, comprenden el uso de tinturas o colorantes, las cuales pueden seleccionarse, por ejemplo, de entre el grupo que comprende a los FAM (5-or 6- carboxifluorescema in), VIC, NED, Fluorescema, Isotiocianato de Fluorescema (FITC), IRD - 700 / 800, tinturas o colorantes de Cianina, tales como los consistentes en los CY3, CY5, CY3.5, CY5.5, Cy7, el Xanteno, la 6-Carboxi- 2’,4’,7’,4,7-hexaclorofluorescema (HEX), TET, la Carboxi-4’,5’-dicloro-2’,7’-dimetodifluorescema (JOE), la N,N,N’,N’- Tetrametil-6-carboxirodamina (TAMRA), la 6-Carboxi-X-rodamina (ROX), la 5-Carboxirodamina-6G (R6G5), la 6- carboxirodamina-6G (RG6), la Rodamina, el Verde de Rodamina, el Rojo de Rodamina, la Rodamina 110, las tinturas o colorantes de BODIPY, tales como los consistentes en los BODIPY TMR, el Verde de Oregon, las cumarinas, tales como la consistente en la Umbeliferona, las Benzimides, tales como la Hoechst 33258; la fenantridinas, tales como el Rojo de Texas, el Amarillo de Yakima, el Fluor Alexar, PET, el bromuro de etidio, las tinturas o colorantes de acridinio, las tinturas o colorantes de Carbazol, las tinturas o colorantes de Fenoxazina, las tinturas o colorantes de Porfirina, las tinturas o colorantes de Polimetina, y por el estilo. En el contexto de la presente invencion, los ensayos basados en quimioluminiscencia, comprenden el uso de tinturas o colorantes, basados en los principios los cuales se describen por parte de Kirk-Othmer, en Encyclopedia of chemical technology, - La enciplopedia de la tecnologfa qmmica -, 4a Edicion, Editor Ejecutivo, J. I. Kroschwitz; Editor, M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, 1993, volumen 15, paginas 518 - 562, incluyendo a las citas de las paginas 551 - 562. Las tinturas o colorantes preferidos, son los esteres de acridinio.

En el procedimiento de la presente invencion, pueden aplicarse diversas formas de determinacion de un riesgo incrementado de que, un sujeto aparentemente sano, sufra de un evento adverso. El procedimiento en cuestion, puede involucrar la comparacion del nivel de PCT, en el sujeto en cuestion, con un valor predeterminado para la PCT, en una poblacion comparable. Este valor, puede ser el consistente en un valor de corte, tal como por ejemplo, el valor de la mediana, o el valor medio, de un percentil correspondiente a un valor de 75, de 90, de 95 o de 99, de una poblacion. De una forma alternativa, puede utilizarse un rango, en donde, por ejemplo, la poblacion sometida a test de ensayo, se divida de una forma igual o de una forma desigual, en grupos (tal como, por ejemplo, un grupo de

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bajo riesgo, un grupo de riesgo medio, o un grupo de alto riesgo), o en cuartiles, correspondiendo, el cuartil mas bajo, a los individuos con el riesgo mas bajo, y correspondiendo, el cuartil mas alto, a los individuos con el riesgo mas alto.

El valor predeterminado, puede variar, entre las poblaciones particulares seleccionadas, en dependencia de determinados factores, tales como los consistentes en la edad, en la genetica, en los habitos, en la etnicidad, o por el estilo.

De una forma preferible, la determinacion del riesgo, se realiza mediante la utilizacion de las siguientes alternativas:

- comparar el nivel determinado de la PCT o del fragmento de la PCT, con la mediana del nivel de la PCT o de los fragmentos de esta, en un conjunto de muestras predeterminadas, procedentes de una poblacion de sujetos aparentemente sanos, o

- comparar el nivel determinado de la PCT o del fragmento de la PCT, con un cuantil del nivel de la PCT, o de los fragmentos de esta, en un conjunto de muestras predeterminadas, procedentes de una poblacion de sujetos aparentemente sanos, o

- realizar calculos, basados en un analisis de riesgo proporcional, basado en el modelo de Cox, o basados en calculos del mdice de riesgo, tal como los consistente en el fndice de Reclasificacion Neta (NRI, - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a Net Reclassification Index] -), o en el fndice de Discriminacion Integrado (IDI - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes de Integrated Discrimination Index] -).

En otra forma de presentacion, en concordancia con la presente invencion, la razon de momios o probabilidades, o el cociente de riesgos, son los que se utilizan para medir un test de ensayo de capacidad para medir el resigo o diagnosis de una enfermedad.

En el caso de la razon de momios o de probabilidades, un valor de 1, indica el hecho de que, un resultado positivo, es igualmente probable, entre sujetos, en vamos grupos, los grupos de “enfermos”, y los grupos de “control”; un valor mayor de 1, indica el hecho de que, un resultado positivo, es mas probable, en el grupo de enfermos; y un valor de menos de 1, indica el hecho de que, un resultado positivo, es mas probable, en el grupo de control. En determinadas formas de presentacion, en concordancia con la presente invencion, los marcadores y / o los paneles de marcadores, se seleccionan, de una forma preferible, para exhibir una razon de momios o probabilidades, de por lo menos aprox. 1,5, o mas, o aproximadamente 0,75 o menos, siendo, esta, de una forma mas preferible, de por lo menos aprox. 2, o mas, o aprox. 0,5 o menos, de una forma todavfa mas preferible, de por lo menos aprox. 3, o mas o aprox. 033, o menos, de una forma aun todavfa mas preferible, de por lo menos aprox. 4, o mas o aprox. 0,25, o menos, de una forma aun todavfa mas preferible, de por lo menos aprox. 5, o mas, o aprox. 0,2, o menos, y de la forma mayormente preferible, de por lo menos aprox. 10, o mas o aprox. 0,1, o menos. El termino “aproximadamente” (o “aprox.”), en este contexto, se refiere a + / -5 %, de una medicion dada.

En el caso de una razon o cociente de riesgo, un valor de 1, indica el hecho de que, el riesgo relativo de un punto final (tal como, por ejemplo, un punto final, consistente en la muerte), es igual en ambos grupos, el grupo de “enfermos”, y el grupo de “control”; un valor mayor de 1, indica el hecho de que, el riesgo, es mayor en el grupo de enfermos; y un valor de menos de 1, indica el hecho de que, el riesgo, es mayor en el grupo de control. En determinadas formas de presentacion, en concordancia con la presente invencion, los marcadores y / o los paneles de marcadores, se seleccionan, de una forma preferible, para exhibir una razon de momios o de probabilidades, de por lo menos aprox. 1,1, o mas, o aproximadamente 0,91 o menos, siendo, esta, de una forma mas preferible, de por lo menos aprox. 1,25 o mas, o aprox. 0,8 o menos, de una forma mas preferible, de por lo menos aprox. 1,5, o mas o aprox. 0,67, o menos, de una forma todavfa mas preferible, de por lo menos aprox. 2, o mas o aprox. 0,5, o menos, y de la forma mayormente preferible, de por lo menos aprox. 2,5, o mas o aprox. 0,4, o menos. El termino “aproximadamente” (o “aprox.”), en este contexto, se refiere a + / -5 %, de una medicion dada.

Tal y como puede verse, por ejemplo, asf mismo, tambien, en la tabla 6, los presentes inventores, fueron capaces de establecer unos valores de corte, para los niveles de la PCT, los cuales son indicativos, para los sujetos, de que estos sufran de un determinado evento adverso, en el futuro. De una forma general, un sujeto, puede determinarse como encontrandose en riesgo de sufrir de un evento adverso, cuando el nivel de PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,015 ng / ml con respecto al suero, siendo dicho nivel, de una forma preferible, de por lo menos 0,02 ng / ml.

De una forma espedfica, se determina que el sujeto se encuentra en un riesgo incrementado de sufrir de un evento cardfaco, o de un evento cardiovascular, cuando, el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,0155 ng / ml, con respecto al suero. El sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de sufrir un evento cardiovascular, o en riesgo de muerte, debido a causas cardiovasculares, cuando el determinado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,0215 ng / ml. El sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de morir de cancer, cuando el citado nivel de la PCT, en una

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muestra de suero, es de por lo menos 0,0155 ng / ml. El sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de morir de cancer, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,0155 ng / ml. El sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de morir, cuando el determinado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,0205 ng / ml, y se determina como encontrandose en riesgo de sufrir de diabetes, cuando el nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,0185 ng / ml.

Se prefiere el hecho de que, en el procedimiento de la presente invencion, se determine por lo menos un parametro adicional y que este se utilice, para determinar el riesgo, o el riesgo incrementado, de sufrir de un evento adverso. Tal tipo de parametro adicional, puede ser en consistente en un parametro clmico, en un parametro de laboratorio (tal como, por ejemplo, el consistente en un parametro bioqmmico) y / o un parametro generico.

Los niveles umbrales para la estratificacion de los sujetos, en diferentes grupos (categonas), pueden ejecutarse, por ejemplo, procediendo a agrupar una poblacion de pacientes de referencia, en concordancia con su nivel de PCT, en determinados cuantiles, tal como, por ejemplo, cuantiles consistentes en tertiles, en cuartiles, en quintiles, o incuso en concordancia con percentiles apropiados. Para cada uno de los cuantiles o grupos por encima y por debajo de determinados percentiles, las razones de momios o de probabilidades, pueden calcularse comparando el riesgo, para por ejemplo un resultado adverso, a saber, un “efecto desfavorable” o un riesgo incrementado, tal como, por ejemplo, en terminos de tasa de supervivencia. En un escenario de este tipo, una razon de momios o de probabilidades, (HR - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a hazard ratio] -), por encima de un valor de 1, indica un riesgo menor. Una HR (razon de momios o de probabilidades) de aprox. 1 (tal como, por ejemplo, de + / - 0,1), indica el hecho de que no existe un riesgo elevado para el grupo particular de pacientes. Mediante la comparacion de una HR situada entre ciertos cuantiles de pacientes, los unos con los otros, y con la HR de la poblacion total de pacientes, es posible el identificar a aquellos cuantiles de pacientes, los cuales tienen un riesgo elevado y un riesgo incrementado, y asf, de este modo, estratificar a los sujetos, en concordancia con la presente invencion.

La sensibilidad y la especificidad de un test de ensayo de diagnostico y / o de prognosis, depende de mas de unicamente la “calidad” analftica del test de ensayo, dependiendo estas, asf mismo, tambien, de la definicion de en que constituye un resultado anormal. En la practica, las curvas caractensticas operativas del receptor (curvas ROC - [ROC, de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a Operating Characteristic curves] -), se calculan, de una forma tfpica, procediendo a esquematizar, graficamente, el valor de una variable, con respecto a su frecuencia relativa, en poblaciones “normales” (es decir, en poblaciones de pacientes aparentemente sanas), y en poblaciones “enfermas” (es decir, en poblaciones de sujetos los cuales estan sufriendo de infecciones bacterianas). Para cualquier tipo de marcador en particular, una distribucion de niveles de marcadores, para sujetos con una enfermedad, o para sujetos sin una enfermedad, probablemente, se solapara. Bajo unas condiciones de este tipo, un test de ensayo, no distingue, en absoluto, a los pacientes normales, con respecto a los pacientes enfermos, o a los pacientes los cuales se encuentran con un riesgo incrementado con respecto a aquellos que no tienen un riesgo incrementado, con un porcentaje del 100 % de exactitud, y asf, de este modo, el area de solapamiento, indica allf en donde, el test de ensayo, no puede distinguir una poblacion normal, con respecto a una poblacion enferma; los que tienen un riesgo incrementado, con respecto a aquellos que no lo tienen. Se selecciona un valor de umbral (o valor de lfmite), por encima del cual (o por debajo del cual, en dependencia de, de que forma, un marcador cambia, con la enfermedad), el test de ensayo, se considera como siendo anormal, o por debajo del cual, el test de ensayo, se considera como siendo normal. El area la cual se encuentra bajo la curva ROC (curva caractenstica operativa del receptor), representa una medida de la probabilidad de que, una medicion percibida, permita una identificacion o condicion correcta. Las curvas ROC, pueden utilizarse incluso cuando, los resultados del test de ensayo, no proporcionan necesariamente un numero preciso o exacto. Siempre y cuando sea posible el proceder a clasificar los resultados, se puede crear una curva ROC. Asf, por ejemplo, los resultado de un test de ensayo, en muestras de “enfermedad”, las muestras pueden clasificarse en concordancia con el grado (tal como, por ejemplo, 1 = reducido o bajo, 2 = normal, y 3 = alto). Esta clasificacion, puede correlacionarse con los resultados de la poblacion “normal”, y la curva ROC, creada. Estos procedimientos, son bien conocidos, en el arte especializado de la tecnica (vease, a dicho efecto, Handley et al., 1982, Radiology, - Radiologfa -, 143: 29 - 36). De una forma preferible, se selecciona un valor de umbral o valor lfmite, para proporciona un area de la curva ROC, la cual sea superior a aproximadamente 0,5, siendo esta, de una forma mas preferible, mayor de aprox. 0,7, de una forma todavfa mas preferible, de aprox. 0,8, de una forma incluso todavfa mas preferible, mayor de aprox. 0,85, y de la forma mayormente preferible, mayor de aprox. 0,9. El termino “aproximadamente” (o “aprox.”), en este contexto, se refiere a + / - 5 %, de una medicion dada.

El eje horizontal de una curva ROC, representa (1 - especificidad), el cual se incrementa, con la tasa de falsos positivos. El eje vertical de la curva, representa la sensibilidad, la cual se incrementa, con la tasa de positivos ciertos o verdaderos. Asf, de este modo, para un valor de corte seleccionado, el valor de (1 - especificidad), puede determinarse, y puede obtenerse un valor correspondiente de sensibilidad. El area bajo la curva ROC, es una medida de la probabilidad de que, el nivel del marcador medido, permitira una correcta identificacion de una enfermedad o condicion. Asf, de este modo, la curva ROC, puede usarse para determinar la efectividad del test de ensayo.

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La razon de momios o de probabilidades, es una medida del tamano del efecto, el cual describe la fuerza de asociacion o no independencia entre dos valores de datos binarios (tal como, por ejemplo, el factor de relacion o razon de probabilidades de que acontezca un evento, en un grupo negativo en un test de ensayo, con respecto a las probabilidades de que este acontezca, en el grupo positivo del test de ensayo).

El valor predictivo positivo (PPV - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a positve predictive value] -), o tasa de precision, es la proporcion de los pacientes con resultados positivos del test de ensayo, los cuales se encuentran correctamente diagnosticados y / o pronosticados. Este refleja la probabilidad de que, un test de ensayo positivo, refleje la condicion subyacente para la cual se este realizando el test de ensayo en cuestion. El valor predictivo o pronosticado negativo (NPV - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a negative predictive value] -), es la proporcion de pacientes, con unos resultados de test de ensayo negativos, los cuales se encuentran correctamente diagnosticados y / o pronosticados. La precision o exactitud total, es el porcentaje de la totalidad de pacientes correctamente clasificados mediante el test de ensayo en cuestion.

De una forma espedfica, puede seleccionarse por lo menos un parametro clmico, de entre el grupo consistente en el genero (es decir, entre el genero masculino, o el genero femenino), en la edad, en la presion sangumea sistolica, en la presion sangumea sistolica, en la presion sangumea diastolica, en el mdice de masa corporal, en el penmetro de la cintura, en el factor de relacion o cociente cintura - cadera, y en el habito de fumar.

De una forma particular, debido al hecho de que, los niveles de la PCT, son significativamente diferentes, entre los hombres, y las mujeres (vease, a dicho efecto, por ejemplo, la Tabla 2), el genero de un sujeto, es un parametro, el cual debe ser tomado en consideracion, cuando se procede a realizar el procedimiento de la invencion.

El por lo menos un parametro de laboratorio, puede seleccionarse de entre el grupo consistente en la concentracion de la glucosa en la sangre o en el plasma, en ayunas, en los trigliceridos, en la concentracion del colesterol, en la concentracion del colesterol HDL y de las subfracciones de este, en la concentracion del colesterol LDL y las subfracciones de este, en la cistema C, en la insulina, en la CRP, en los peptidos natriureticos del tipo A y del tipo B, asf como, tambien, en los precursores y en los fragmentos de estos, incluyendo a las ANP, proANP, NT-proANP, MR-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP, GDF15, ST2, la procalcitonina y fragmentos de esta, la pro-adrenomedulina y fragmentos de esta, incluyendo a las ADM, PAMP, MR-proADM, CT-proADM, pro-Endotelina-1 y fragmentos de esta, incluyendo a las CT-proET-1, NTproET-1, la big endotelina 1, y la Endotelina-1.

El por lo menos un parametro genetico, se selecciona, de una forma preferible, de entre el grupo consistente en los poliformismos nucleotidos individuales (SNPs - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a single nucleotide polymorphisms] -), y en las mutaciones.

El procedimiento de la presente invencion, proporciona informacion sobre un posible riesgo incrementado, para un sujeto, de que este sufra de un evento adverso, de la forma la cual se ha descrito anteriormente, arriba, y aqrn, en este documento de solicitud de patente. En base a esta informacion, pueden tomarse medidas de prevencion, con objeto de evitar el hecho de que se produzca un evento adverso, en el sujeto en cuestion. Las medidas de prevencion, pueden ser, por ejemplo, las consistentes en tomar una medicina apropiada, en seguir restricciones dieteticas, en hacer ejercicio, en seguir una supervision medica, y otras.

En un aspecto adicional de la presente invencion, esta se refiere al uso de un procedimiento, de la forma la cual se ha descrito anteriormente, arriba y aqrn, en este documento de solicitud de patente, para determinar un riesgo incrementado, para un sujeto aparentemente sano, de que este sufra de un evento adverso.

De una forma adicional, la revelacion de la presente invencion, se refiere al uso de un equipo, a modo de “kit”, el cual comprende uno o mas anticuerpos, dirigidos contra la PCT, o un precursor de esta, o un fragmento de esta, para la prognosis, de un sujeto asintomatico, en cuanto al hecho de que este experimente un evento adverso, a saber, es decir, para realizar un procedimiento, de la forma la cual se encuentra descrita aqrn, en este documento de solicitud de patente.

Ejemplos

Poblacion de estudio y diseno

La poblacion de estudio, se obtuvo de procedencia del estudio de la Prevencion de la enfermedad renal y vascular en el estado final (PEVEND - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a Prevention of Renal and Vascular Endstage Disease] -). El estudio PREVEND, se diseno para investigar, de una forma prospectiva, el curso natural de la albuminuria, y se relacion con la enfermedad renal y cardiovascular, en un amplio cohorte extrafdo de la poblacion general (de una edad comprendida dentro de unos margenes situados entre los 28 anos de edad y los 75 anos de edad), de la ciudad de Groningen, Pafses Bajos. Los detalles sobre el diseno del estudio, sobre la seleccion, y sobre los procedimientos, han sido publicados en otros sitios (vease, a dicho efecto, Hillege et al., Circulation 2002, 106:

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1777 - 1782; Hillege et al., J Intern Med 2001, 249: 519 - 526; Mahmoodi et al., JAMA 2009, 301: 1790 - 1797). El estudio PREVEND, fue aprobado por parte del comite local de eticas medicas de la Universidad de Medicina consistente en la “University Medical Center” de Groningen, y este se adecuo a los principios subrayados en la Declaracion de Helsinki. La totalidad de los participates en el estudio, proporcionaron su consentimiento a la informacion, y su beneplacito, por escrito en cuanto a lo referente a su participacion en el estudio.

Mediciones

Los participates en el estudio, experimentaron dos visitas externas, ambulatorias, con objeto de evaluar los factores demograficos, antropometricos, y de riesgo cardiovascular. Estos completaron un cuestionario de indole demografica, sobre su historial en enfermedad cardiovascular (CVD - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a Cardiovascular disease] -), sobre los habitos de fumar, sobre el historial de la familia, en cuanto a lo referente a la CVD, sobre el consumo de alcohol, y sobre la medicacion, previamente a la primera visita. Los participates, fueron investigados, en cuanto a lo referente al nivel de colesterol total, al nivel de HDL colesterol (colesterol de lipoprotema de alta densidad (HDL - [de sus factores, en idioma ingles, correspondientes a high - density liproprotein] -), al nivel de trigliceridos, al nivel de presion sangumea medido, a la creatinina en suero, y a la diabetes mellitus. La diabetes mellitus, se definio en concordancia con las directrices de la American Diabetes Association (Asociacion Americana de la Diabetes), con un valor de la glucosa en plasma, en ayunas, de > 7,0 mmol / l, (> 126 mg / dl), o el uso de una medicacion antidiabetica. De una forma adicional, la informacion sobre la medicacion, se substancio, mediante el uso de los datos sobre dispensacion de las farmacias, procedentes de la totalidad de la comunidad de farmacias existentes en la ciudad de Groningen.

Como punto de referencia, la CDV (enfermedad cardiovascular), se definio mediante el historial de eventos cardiovasculares mayores, previos (a saber, infarto de miocardio, accidente cardiovascular), el historial de la angioplastia coronaria y / o cirugfa de bypass (de derivacion), el mdice (de presion) tobillo / brazo, de menos de 0,9, o la presencia de un modelo QS basado en la clasificacion de Minnesota (a saber, codigos 1. y 1.2). Los individuos con CDV, en la presentacion, fueron excluidos del estudio. Los individuos con diabetes, en la presentacion, fueron excluidos del estudio. Los individuos con diabetes, en la presentacion, fueron excluidos del estudio. Los individuos con un nivel de creatinina en suero > 132 pmol / l, se consideraran como teniendo una disfuncion renal, y estos se excluyeron del estudio. El numero total de individuos, susceptibles de poder ser elegidos, para el estudio, era de n = 5313. Asf, de este modo, la poblacion investigada, en este estudio, era una poblacion representativa, de una poblacion no enferma, representativa de la poblacion sana general.

En el momento de la inclusion, se procedio a extraer una muestra de sangre, de cada uno de los individuos, para llevar a cabo la realizacion de las mediciones de laboratorio (vease, posteriormente, mas abajo, en este documento de solicitud de patente).

La poblacion investigada, se siguio, durante un transcurso de tiempo de diez anos, y se procedio a registrar la incidencia de varios puntos finales. Los puntos finales del estudio, se trataban de eventos cerebrovasculares incidentes, de la mortalidad cardiovascular, de los eventos cardiovasculares totales, de la diabetes incidente, de la mortalidad por cancer, y de la mortalidad total. Un evento cardfaco, se defima como la suma de uno cualquiera de los siguientes eventos: infarto agudo de miocardio (codigo de ICD, 410), enfermedad cardfaca isquemica, subaguda, (codigo ICD, 411), y los siguientes procedimientos: injerto de derivacion (bypass) de la arteria coronaria, o angioplastia coronaria transluminal, percutanea. Un evento cerebrovascular, se definio como la suma de uno cualquiera de los siguientes eventos: estenosis de las arterias precerebrales (codigo ICD, 433), o de las arterias cerebrales (codigo ICD, 434). La mortalidad cardiovascular, se definio como la suma de eventos cardfacos, de eventos cerebrovasculares, y de mortalidad cardiovascular. La diabetes, se definio en concordancia con las directrices de la American Diabetes Assotiation (Asociacion Americana de la Diabetes), como un nivel de glucosa en plasma, correspondiente a un nivel de > 7,0 mm / l, (> 126 mg / dl), o el uso de medicacion antidiabetica. La mortalidad por cancer, se definio como la muerte, debida a cancer. La mortalidad, se definio como la muerte, por cualquier causa.

La informacion (sobre la hospitalizacion), para la morbilidad cardiovascular, se obtuvo de procedencia de PRISMANT, el registro holandes de diagnosis de altas hospitalarias. Los datos, se codificaron en concordancia con la International Classification of Diseases, (Clasificacion Internacional de Enfermedades), 9a revision, y la clasificacion de intervenciones. En el caso en el que, una persona, se hubiese trasladado a un destino desconocido, entonces, la fecha en la cual la persona se elimino del registro municipal, se utilizo como una fecha censora. Los datos sobre la mortalidad, se recibieron del registro municipal, y la causas de la muerte, se recibieron del registro municipal, y la causa de la muerte, se obtuvo vinculando el numero de certificados de muerte, a las causas primarias de la muerte, o se codifico, mediante el Dutch Central Bureau of Statistics (Oficina Central Holandesa de Estadfsticas.

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Ensayo de laboratorio

Como punto de referencia, se procedio a extraer muestras de sangre, despues de haber estado en ayunas durante el transcurso de toda la noche, y estas se introdujeron en un tubo enfriado, el cual contema EDTA. Las muestras en cuestion, estas se centrifugaron, inmediatamente, a 1500 g y a una temperatura de 4 °C, durante un transcurso de tiempo de 10 minutos y, los sobrenadantes, se almacenaron en alfcuotos, a una temperatura de - 80 °C, para su uso adicional posterior. Se procedio a medir la PCT, des siguiente modo: se llevo a cabo un ensayo sandwich, ultrasensible, para la PCT (BRAHMS PCT LIA sensitive) (Morgenthaler et al., Clin Chem 2002; 48: 788 - 90), en el cual se utiliza un anticuerpo dirigido contra la porcion catacalcina de la PCT, como una fase solida, y un anticuerpo dirigido contra la porcion calcitonina de la PCT, como anticuerpo marcado (BRAHMS AG, Henningdorf, Alemania). Se procedio a utilizar la PCT Recombinante, en varias concentraciones, como calibrador. Se utilizo un volumen de muestra de 100 pl.

Analisis estadistico

Las estadfsticas descriptivas como punto de referencia de las variables continuas, se reportaron como media ± desviacion estandar (SD - [de sus siglas, en idioma ingles] -), y como media con percentiles 25 y 75, cuando se procedfa a sesgar la distribucion de los datos. Las variables categoricas, se presentaron como numeros y porcentajes. Se procedio a utilizar un test de ensayo x2, para someter a test de ensayo las diferencias entre los grupos, para las categonas variables. Los datos continuos, se compararon mediante la utilizacion de un test de ensayo de Student, o un test de ensayo de clasificacion de Mann - Whitney, si la variable, no se distribrna normalmente, en concordancia con el test de ensayo de kolmogoroy - Smirnov. Para someter a test de ensayo el valor de prediccion o pronostico de la PCT, para la incidencia de eventos, se procedio a filtrar, de una forma separada, modelos de riesgo proporcional, de Cox, con el desarrollo de varios eventos, los cuales se han registrado, como las variables dependientes. Debido al hecho de la existencia de una distribucion sesgada, se procedio a aplicar una transformacion logantmica (log 2) de la PCT, en un analisis de regresion de Cox, para computar los factores de relacion o cocientes de riesgo (HR), e intervalos de confianza (CIs) por duplicado, de los niveles de la PCT. Unos valores de P, de 0,05 o menos, procedentes de los tests de ensayo de dos lados (de dos colas), se consideraron como siendo estadfsticamente satisfactorios. De una forma adicional, se procedio a calcular los factores de relacion o cocientes de riesgo, para los segundo a quinto quintil de la PCT, en comparacion con el primer quintil. La totalidad de los analisis estadfsticos, se llevaron a cabo via los paquetes de software informatico consistentes en los Statistical Package for Social Sciences version 16, - Pack estadistico para ciencias sociales, version 16 y (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA) y en el software informatico S-PLUS (Insightful Corp., Seattle, Washington, USA).

Resultados

Las caractensticas de las referencias de base del estudio de la poblacion, se encuentran recopiladas en la Tabla 1.

La Tabla 2, muestra los niveles de las referencias de base de los niveles de la PCT (para la totalidad de los niveles), y los niveles de las referencias de base de los niveles de la PCT (para los niveles correspondientes a unos valores <0,1 ng / ml), estratificados por generos).

Los analisis, se llevaron a cabo mediante muestras, las cuales conteman unos niveles de la PCT, correspondientes a un valor < 0,1 ng / ml, y mediante muestras, las cuales conteman unos niveles de la PCT, los cuales eran asf mismo, tambien, mayores de un valor de 0,1 ng / ml. Se encontro asf mismo, tambien, el hecho consistente en que, el valor de pronostico de la PCT, era esencialmente el mismo, para ambas de estas muestras.

Los niveles de la PCT, eran significativamente diferentes, entre los hombres y las mujeres (vease, a dicho efecto, la Tabla 2), para la totalidad del grupo de estudio (P < 0,001), asf como, tambien, para los sujetos con unos valores de la PCT < 0,1 ng / ml (P < 0,001).

Las tablas 3 y 4, muestran los factores de relacion o cocientes de riesgo, los cuales describen un riesgo incrementado para desarrollar un evento, de la forma la cual se encuentra indicada, por duplicacion de las concentraciones de la PCT. Asf, por ejemplo, un factor de relacion o cociente de riesgo correspondiente a un valor de 2,23 para la mortalidad cardiovascular, significa el hecho de que, un individuo, con una concentracion de la PCT de, digamos, 0,030 ng / ml, tiene un factor de relacion o cociente de riesgo correspondiente a un valor doble, de morir de complicaciones cardiovasculares, que el factor de relacion o cociente de riesgo que tiene un individuo el cual tiene una concentracion de la PCT, correspondiente a un valor de 0,015 ng / ml.

La Tabla 3, muestra unos factores de relacion o cocientes de riesgo (correspondientes a un 95 % CI) (CI = intervalo de confianza - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a confidence interval]-), para la prediccion o pronostico de eventos cardiovasculares, asf como tambien de la mortalidad por cancer, por evento cardiovascular, y

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La Tabla 4, muestra unos factores de relacion o cocientes de riesgo (correspondientes a un 95 % CI), para la prediccion o pronostico de eventos cardiovasculares, as^ como tambien de la mortalidad por cancer, por evento cardiovascular, y de muerte total, en el caso de unos niveles de la PCT (todos y < 0,1 ng / ml, respectivamente), estratificados por generos.

La Tabla 5, muestra unos factores de relacion o cocientes de riesgo (correspondientes a un 95 % CI), para la prediccion o pronostico de desarrollar una Diabetes del tipo 2, en una poblacion asintomatica, en el caso de unos niveles de la PCT (todos y < 0,1 ng / ml, respectivamente).

La Tabla 6, muestra los valores de corte y la AUC ROC (Area bajo la curva de caractensticas operativas del receptor. Para la realizacion de este analisis, se excluyo la totalidad de la poblacion investigada, para la cual, los niveles de la PCT eran de un valor > 0,1 ng / mol. Para cada tipo de evento, se procedio a calcular el area bajo la curva de caractensticas operativas del receptor (AUC ROC - [de sus siglas, en idioma ingles, correspondientes a Area under the receiver operator characteristics curve] -). Los valores optimos de corte, se definieron como el producto matematico mas alto de la sensibilidad y de la especificidad, los cuales podnan alcanzarse, para cada tipo de evento, cuando se procediera a someter a tests de ensayo, posibles valores de corte. Para aquellas personas expertas en el arte especializado de la tecnica, esta claro el hecho de que podnan considerarse como “optimos”, otros valores de corte, en dependencia de si, la sensibilidad, la especificidad y el valor positivo de prediccion o prognosis, o el valor negativo de prediccion o prognosis, son importantes, en la aplicacion particular.

La Tabla 7, muestra los eventos adversos, en concordancia con quintiles de la PCT. De entre la totalidad de la poblacion investigada, se excluyeron, del analisis, los valores de la PCT, correspondientes a unos niveles > 0,1 ng / ml. La poblacion, se separo en quintiles de concentracion de la PCT. Se muestran, en la tabla, para los varios tipos de eventos, el numero de casos y la proporcion por quintiles (en porcentaje). El factor de relacion o cociente de riesgo, para el desarrollo de cada tipo de evento, se calculo mediante los quintiles Q2 a Q3, mediante la comparacion con los quintiles Q1. El analisis para el tipo de evento consistente en la diabetes, se muestra de una forma separada, con respecto a los otros eventos, debido al hecho de que, el numero de personas, las cuales no pudieron seguirse para este tipo de evento, era mas reducido que el correspondiente para otros tipos de eventos. Los numeros de individuos por quintil, no son perfectamente iguales, debido al hecho de una alta frecuencia de valores para individuos, a estas concentraciones de la PCT, separando los quintiles, los cuales tuvieron que atribuirse bien ya sea a quintil superior o al quintil inferior, a esta concentracion.

Tomados en su conjunto, los resultados obtenidos, muestran el hecho consistente en que, los elevados niveles de la PCT, en sujetos asintomaticos, son de un valor de pronostico, para la prediccion de si, un sujeto, se encuentra en riesgo de sufrir de un evento adverso, en el futuro.

TABLAS

Tabla 1:

N° de participantes: 5313

Edad - anos: 47,3 ± 12

N° de hombres - (%): 2375 (44,7)

indice de masa corporal - Kg / m2: 25,8 ± 4,1

Penmetro de la cintura - cm: 86,9 ± 12,7

Presion sangumea sistolica - mm Hg: 122,1 ± 18,2

Presion sangumea diastolica - mm Hg: 70,8 ± 9,4

Colesterol -mm / l: 5,6 ± 1,1

HDL - colesterol - mmol / l: 1,3 ± 0,4

Tabla 2:

Niveles de la PCT (todos): como puntos de referencia, en ng / ml (n = 5313)

Hombres ( n = 2353 ): Mujeres ( n = 2960 ) Valor de P*

0,018 (0,015 -0,022): 0,014 (0,012-0,017) < 0,0001

Niveles de la PCT (< 0,1 ng / ml) como puntos de referencia, en: ng / ml (n = 5292)

Hombres ( n = 2337 ): Mujeres ( n = 2955 ) Valor de P*

0,018 (0,015 -0,022): 0,014 (0,012-0,017) < 0,0001

*Calculado mediante la utilizacion de un test de ensayo U de Mann: -Whitney

PCT (todos) al nivel del punto de referencia ( n = 5313 )

Eventos cardfa- cos ( n = 98 ): Eventos cere- brovascuales ( n = 61) Mortalidad cardiovacular ( n = 30 ) Total de eventos cardiovasculares ( n = 172) Mortalidad por cancer ( n = 91) Total mortalidad (n = 148 )

1,53 ( 1,26 -1,87 ): 1,50 ( 1,15-1,96 ) 1,52 ( 1,04 -2,20 ) 1,52 ( 1,31 - 1,77 ) 1,53 ( 1,24 -1,89 ) 1,55 ( 1,32 -1,81 )

PCT ( < 0,1 ng / ml ) al nivel del punto de referencia ( n = 5292 )

Eventos cardfa- cos ( n = 98 ): Eventos cere- brovascuales ( n = 61) Mortalidad cardiovacular ( n = 30 ) Total de eventos cardiovasculares ( n = 172) Mortalidad por cancer ( n = 89 ) Total mortalidad (n = 146 )

2,33 ( 1,65 -3,30 ): 2,18 ( 1,40 -3,40 ) 2,23 ( 1,18 -4,18 ) 2,78 ( 1,75 -2,96 ) 1,79 ( 1,20 -2,65 ) 2,07 ( 1,55 -2,78 )

5 Tabla 4:

PCT (todos) en hombres, al nivel del punto de referencia ( n = 2353 )

Eventos cardfa-: Eventos cere- Mortalidad Total de eventos Mortalidad Total mortalidad

cos: brovascuales cardiovacular cardiovasculares por cancer

( n = 46 ): ( n = 30) ( n = 17) ( n = 85 ) ( n = 41 ) ( n = 73 )

1,51: 1,41 0,91 1,40 1,95 1,75

( 1,01 -2,26 ): ( 0,82 -2,42) ( 0,33-2,46 ) ( 1,02- 1,93 ) ( 1,44 -2,66 ) ( 1,34-2,29 )

PCT (todos) en mujeres, al nivel del punto de referencia ( n = 2960 )

cos: brovascuales cardiovacular cardiovasculares por cancer

( n = 52 ): ( n = 31) ( n = 13 ) ( n = 87 ) ( n = 50 ) (n = 75

1,55: 1,53 1,67 1,56 1,28 1,43

( 1,23 -1,94): ( 1,13-2,09 ) ( 1,17-2,37 ) ( 1,31 - 1,85 ) ( 0,84- 1,93 ) ( 1,12-1,83 )

PCT ( < 0,1 ng / ml ) en hombres, al nivel del punto de: referencia ( n = 2337 )

cos: brovascuales cardiovacular cardiovasculares por cancer

( n = 46 ): ( n = 30) ( n = 17 ) ( n = 85 ) ( n = 40 ) ( n = 72 )

2,04: 1,80 1,20 1,79 2,29 2,08

( 1,18 -3,50 ): ( 0,90 -3,60 ) ( 1,12 -1,29 ) ( 1,18 -2,71 ) ( 1,31 -4,01 ) ( 1,35 -3,19 )

PCT ( < 0,1 ng / ml ) en mujeres, al nivel del punto de referencia ( n = 2960 )

cos: brovascuales cardiovacular cardiovasculares por cancer

( n = 52 ): ( n = 31) ( n = 13 ) ( n = 87 ) ( n = 49 ) (n = 74

2,93: 2,67 1,14 2,98 1,54 2,12

( 1,81-4,72 ): ( 1,44-4,97 ) ( 1,07 -1,21 ) ( 2,06-4,29 ) ( 0,83-2,85 ) ( 1,36 -3,30 )

Tabla 5:

PCT (todos) al nivel del punto de referencia

Todos los participates: Hombres Mujeres

( 123 / 4206 ): ( 62 / 1870 ) ( 61 / 2336 )

1,78 ( 1,44-2,20 ): 1,61 ( 1,13 -2,30 ) 2,18 ( 1,48 -3,21 )

Niveles de la PCT (< 0,1 ng / ml) al nivel del punto de referencia

Todos los participates: Hombres Mujeres

( 121 /4193 ): ( 60 / 1859 ) ( 61 / 2334 )

2,11 ( 1,51 -2,95 ): 1,43 ( 0,84 -2,44 ) 3,25 ( 2,00 -5,30 )

10

Tabla 6:

Tipo de evento: Concentracion optima de corte de la PCT ( ng / ml ) Area bajo la curva de caracteristicas operativas del receptor ( AUC ROC )

Eventos cardfacos: 0,0155 0,634

Eventos cardiovasculares: 0,0215 0,628

Mortalidad cardiovascular: 0,0215 0,640

Total de eventos cardiovasculares: 0,0155 0,635

Mortalidad por cancer: 0,0155 0,585

Total mortalidad: 0,0205 0,610

Diabetes: 0,0185 0,627

5

Tabla 7

: Q1 Q2 Q3 Q4 Q5

N° de sujetos: 1045 1069 958 1214 1006

Rango de procal- citonina ( ng / ml): 0,007 -0,012 0,013 -0,014 0,015 -0,016 0,017 -0,020 0,021 -0,098

Total mortalidad

N° de casos ( % ): 12 ( 1,1 ) 28 ( 2,6 ) 23 ( 2,4 ) 34 ( 2,8 ) 49 ( 4,9 ) <0,001

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 2,32 ( 1,18 -4,57 ) 2,12 ( 1,06 -4,27 ) 2,47 ( 1,28 -4,78 ) 4,35 ( 2,32 -8,19 )

Total mortalidad cardiovascular

N° de casos ( % ): 1 ( 0,1 ) 5 ( 0,5 ) 7 ( 0,7 ) 6 ( 0,5 ) 11 ( 1,1 ) <0,007

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 4,98 (0,58 -42,62) 7,76 (0,95 -63,11) 5,25 (0,63 -43,58) 11,75 (1,52 -91,04)

Mortalidad por cancer

N° de casos ( % ): 11 ( 1,1 ) 15 ( 1,4 ) 14 ( 1,5 ) 23 ( 1,9 ) 26 ( 2,6 ) <0,004

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 1,36 ( 0,62-2,96 ) 1,41 ( 0,64-3,11 ) 1,83 ( 0,89-3,75 ) 2,52 ( 1,25-5,11 )

Eventos cardfacos

N° de casos ( % ): 8 ( 0,8 ) 12 ( 1,1 ) 20 ( 2,1 ) 24 ( 2,0 ) 34 ( 3,4 ) <0,001

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 1,50 ( 0,61 -3,68 ) 2,79 ( 1,23 -6,34 ) 2,65 ( 1,19 -5,90 ) 4,60 ( 2,13 -9,93 )

Eventos cerebrovasculare s

N° de casos ( % ): 6 ( 0,6 ) 10 ( 0,9) 8 ( 0,8 ) 14 ( 1,2 ) 23 ( 2,3 ) <0,001

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 1,66 ( 0,60-4,57 ) 1,48 ( 0,51 -4,27 ) 2,05 ( 0,79 -5,32 ) 4,13 ( 1,68-10,15)

Total eventos cardiovasculares

N° de casos ( % ): 13 (1,2 ) 25 ( 2,3) 33 ( 3,4 ) 40 ( 3,3 ) 61 ( 6,1 ) <0,001

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 1,93 ( 0,98 -3,76 ) 2,83 ( 1,49-5,38 ) 2,72 ( 1,45-5,08 ) 5,10 ( 2,80-9,29 )

5

10

15

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25

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35

40

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: Q1 Q2 Q3 Q4 Q5

N° de personas: 845 834 745 978 791

Rango de procalcitonina ( ng/ml ): 0,007 -0,012 0,013-0,014 0,015 -0,016 0,017 -0,020 0,021 -0,098

Diabetes

N° de casos ( % ): 13 (1,5 ) 16 ( 1,9 ) 21 ( 2,8 ) 27 ( 2,8 ) 44 ( 5,6 ) <0,001

Razon de riesgo ( 95 % CI ): 1,0 1,25 ( 0,60 -2,62 ) 1,86 ( 0,92 -3,73 ) 1,82 ( 0,93 -3,54 ) 3,770 ( 2,01 -7,05 )

SEQUENCIA

1 APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV QDYVQMKASE LEQEQEREGS

51 SLDSPRSKRC GNLSTCMLGT YTQDFNKFHT FPQTAIGVGA PGKKRDMSSD

101 LERDHRPHVS MPQNAN

SEQ ID NO:1 (secuencia de aminoacidos de la PCT):

Listado de secuencias

< 110 > Brahms GmbH

< 120 > Procalcitonina para la prognosis de eventos adversos

< 130 > B60545PCT

< 150 > EP 09011073.5

< 151 > 2009-08-28

< 160 > 1

< 170 > PatentIn version 3.3

<210 > 1

< 211 >116

< 212 > PRT

< 213 > Homo sapiens

< 400 > 1

Claims

5

10

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25

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40

45

50

55

60

REIVINDICACIONES

1. - Un procedimiento ex vivo, para determinar el riesgo incrementado, de un sujeto aparentemente sano, el cual tenga un valor de base de referencia, del nivel de la PCT < 0,1 ng / ml, de una forma preferible, un humano, en cuanto al hecho de que este sufra de un evento adverso, cuando el citado sujeto, se encuentra exento de infecciones bacterianas, lo cual significa que, el nivel de la PCT, no se encuentra incrementado por encima del rango normal, significando ello que, el nivel de la PCT, en plasma, no se encuentra incrementado por encima de un valor de 0,25 ng / ml, y en donde, el citado sujeto, no muestra ningun smtoma, que podna permitir la diagnosis de una enfermedad infecciosa, procedimiento este, el cual comprende:

- determinar el nivel de la procalcitonina (PCT) o un fragmento de esta, en una muestra del citado sujeto, en donde, la citada muestra, se selecciona de entre grupo consistente en sangre, en suero, y en plasma

- determinar el hecho de si, el citado sujeto, tiene un riesgo incrementado para sufrir de un evento adverso, basado en el citado nivel de la PCT, en donde, unos niveles de la PCT elevados, son de un valor de pronostico, para predecir el hecho de si, el sujeto en cuestion, se encuentra en riesgo de sufrir de un evento adverso, en el futuro, en donde, se predice un riesgo dentro de un transcurso de tiempo de 6 meses a 10 anos, y

en donde, el citado evento adverso, no se trata de un evento causado por evento agudo inducido por un factor exogeno y / o un trauma inducido por un factor exogeno, y en donde, los siguientes sujetos, se excluyen del grupo de sujetos aparentemente sanos:

■ neonatos comprendidos dentro de una edad que va desde un dfa hasta 3 dfas, y

■ pacientes post-quirurgicos, en donde, la cirugfa, se haya llevado a cabo dentro de los ultimos 7 dfas, y

■ pacientes post-traumaticos y personas las cuales hayan experimentado dicho trauma, dentro de los ultimos 7 dfas, y

en donde, el evento adverso, se elige de entre el grupo consistente en los eventos cardfacos, en los eventos cardiovasculares, en los eventos cerebrovasculares, en la mortalidad cardiovascular, en la diabetes, en la mortalidad por cancer, y en la muerte, y

en donde, el citado sujeto, se encuentra en riesgo de sufrir del citado evento adverso, cuando el nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de por lo menos 0,015 ng / ml.
2. - El procedimiento de la reivindicacion 1, en donde, la PCT, tiene la secuencia de aminoacidos la cual se muestra como la SEQ ID NO. 1.
3. - El procedimiento de la reivindicacion 1 o 2, en donde, el citado fragmento de PCT, comprende (contiene)

- por lo menos 12 aminoacidos, de una forma preferible, mas de 50 aminoacidos, de la forma mayormente preferible, mas de 100 aminoacidos, o

- los aminoacidos 2 a 116, o 3 a 116, de la secuencia de aminoacidos, mostrada como la SEQ ID NO: 1.
4. - El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 3, en donde, el citado nivel de determinacion, se lleva a cabo mediante la utilizacion de ensayo de diagnostico, de una forma preferible, un inmunoensayo.
5. - El procedimiento de las reivindicaciones 1 a 4, en donde, la determinacion del riesgo, se lleva a cabo mediante:

- comparar el nivel determinado de la PCT o del fragmento de la PCT, con la mediana del nivel de la PCT o de los fragmentos de esta, en un conjunto de muestras predeterminadas, procedentes de una poblacion de sujetos aparentemente sanos, o

- comparar el nivel determinado de la PCT o del fragmento de la PCT, con un cuantil del nivel de la PCT, o de los fragmentos de esta, en un conjunto de muestras predeterminadas, procedentes de una poblacion de sujetos aparentemente sanos, o

- realizar calculos, basados en un analisis de riesgo proporcional, basado en el modelo de Cox, o basados en calculos del mdice de riesgo, tal como los consistente en el fndice de Reclasificacion Neta (NRI), o en el fndice de Discriminacion Integrado (IDI).
6. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 5, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en riesgo de sufrir de un evento adverso, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, o en una muestra

5

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15

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45

de plasma, es de un valor de por lo menos 0,015 ng / ml, de una forma preferible, de por lo menos un valor de 0,02 ng / ml.
7. - El procedimiento de la reivindicacion 1a 6, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de sufrir de un evento cardfaco, o de un evento cardiovascular, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de un valor de por lo menos 0,0155 ng / ml.
8. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 7, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de sufrir de un evento cerebrovascular, o de morir, debido a una causa cardiovascular, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de un valor de por lo menos 0,0215 ng / ml.
9. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 8, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de morir de cancer, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de un valor de por lo menos 0,0155 ng / ml.
10. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 9, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de morir, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de un valor de por lo menos 0,0205 ng / ml.
11. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 10, en donde, el citado sujeto, se determina como encontrandose en un riesgo incrementado de sufrir de diabetes, cuando el citado nivel de la PCT, en una muestra de suero, es de un valor de por lo menos 0,0185 ng / ml.
12. - El procedimiento de la reivindicacion 1 a 11, el cual comprende, de una forma adicional, el determinar

- un parametro clmico, el cual se selecciona de entre el grupo consistente en el genero, en la edad, en la presion sangumea sistolica, en la presion sangumea diastolica, en el mdice de la masa corporal, en el penmetro de la cintura, en el factor de relacion o cociente (de la presion) tobillo / brazo, y del habito de fumar; o

- un parametro de laboratorio, el cual se selecciona de entre el grupo consistente en la concentracion de la glucosa en la sangre o en el plasma, en ayunas, en los trigliceridos, en la concentracion del colesterol, y en la concentracion del colesterol HDL y de las subfracciones de este, en la concentracion del colesterol LDL y las subfracciones de este, en la cistema C, en la insulina, en la CRP, en los peptidos natriureticos del tipo A y del tipo B, asf como, tambien, en los precursores y en los fragmentos de estos, incluyendo a las ANP, proANP, NT-proANP, MR-proANP, BNP, proBNP, NT-proBNP, GDF15, ST2, la procalcitonina y fragmentos de esta, la pro-adrenomedulina y fragmentos de esta, incluyendo a las ADM, PAMP, MR-proADM, CT-proADM, pro-Endotelina-1 y fragmentos de esta, incluyendo a las CT-proET-1, NTproET-1, la big Endotelina 1, y la Endotelina-1; o

- un parametro generico, el cual se selecciona de entre el grupo consistente en los poliformismos nucleotidos individuales, (SNP), y mutaciones, de una forma particular, relacionados con la herencia de la diabetes o diabetes hereditaria.
13. - Uso de un procedimiento, de las reivindicaciones 1 a 12, para determinar un riesgo incrementado, de que un sujeto aparentemente sano, sufra de un evento adverso.