ES2606543T3 - Composiciones para uso en marcaje de seguridad - Google Patents

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ES2606543T3 ES10716821.3T ES10716821T ES2606543T3 ES 2606543 T3 ES2606543 T3 ES 2606543T3 ES 10716821 T ES10716821 T ES 10716821T ES 2606543 T3 ES2606543 T3 ES 2606543T3
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Jason Brown
Bas Reichert
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Selectamark Security Systems PLC
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Abstract

Una composición de marcaje de seguridad incluyendo: una pluralidad de primeros oligómeros de nucleótidos sintéticos idénticos; y una pluralidad de segundos oligómeros de nucleótidos sintéticos idénticos que son diferentes de los primeros oligómeros de nucleótidos sintéticos, donde cada uno de los primeros oligómeros de nucleótidos sintéticos incluye una primera secuencia de bases de unión de iniciador, una primera secuencia de identificación de tres a siete bases de longitud, y una segunda secuencia de bases de unión de iniciador, estando dispuesta la primera secuencia de identificación entre las secuencias de unión de iniciador primera y segunda, donde cada uno de los segundos oligómeros de nucleótidos sintéticos incluye una tercera secuencia de bases de unión de iniciador, una segunda secuencia de identificación de tres a siete bases de longitud, y una cuarta secuencia de bases de unión de iniciador, estando dispuesta la segunda secuencia de identificación entre las secuencias de unión de iniciador tercera y cuarta, donde la primera secuencia de identificación es diferente de la segunda secuencia de identificación, y donde información acerca del propietario de la composición la proporcionan las secuencias de identificación primera y segunda usando una base de datos que conecta información acerca del propietario de la composición con las secuencias de identificación primera y segunda.

Description

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DESCRIPCION
Composiciones para uso en marcaje de seguridad Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a composiciones conteniendo nucleotidos sinteticos, metodos de fabricar dichas composiciones, uso de las composiciones en marcaje de seguridad de propiedad y/o para marcar un ladron o agresor, y metodos de detectar tal composicion en una persona o propiedad y analizar la composicion para determinar el origen de la composicion y/o informacion acerca del propietario de la propiedad.
Antecedentes de la invencion
Las composiciones conteniendo nucleotidos sinteticos para uso en marcaje de seguridad de propiedad y/o para marcar un ladron o agresor son conocidas en la tecnica. De hecho, el solicitante de la presente invencion ya ha desarrollado y comercializado varios productos conteniendo tales composiciones. Algunos ejemplos de los productos del Solicitante de la presente invencion que utilizan tales composiciones se explican a continuacion.
El kit de marcaje de propiedad SelectaDNARTM incluye un bote de adhesivo que puede ser aplicado a propiedad usando un aplicador con el fin de marcar la propiedad con una composicion unica que puede ser rastreada hasta el propietario en el caso de que la propiedad sea robada por un ladron y luego recuperada por la polida. Cada bote de adhesivo contiene una composicion de ADN unica y tambien varios miles de micropuntos dispersados por todo el adhesivo. Cada micropunto contiene un codigo de registro unico y un numero de telefono o direccion de Internet de base de datos. Un proveedor de servicios mantiene una base de datos que enlaza cada codigo de registro unico con detalles del propietario de la propiedad, por ejemplo, nombre, direccion y/o numero de telefono del propietario. Estos detalles pueden ser obtenidos cuando un propietario de la propiedad compra el kit de marcaje de seguridad e introducidos en la base de datos. Esta base de datos, o una segunda base de datos, tambien contiene informacion acerca de la composicion de ADN unica que esta enlazada al codigo de registro o directamente a los detalles del propietario. El adhesivo tambien contiene un material fluorescente que emite luz visible bajo luz UV con el fin de que el marcaje adhesivo en la propiedad sea localizado facilmente por la polida.
Cuando un artfculo de propiedad robado es recuperado por la polida, se puede utilizar una lampara UV para localizar el marcaje adhesivo en la propiedad. Con una lupa se puede localizar un micropunto dentro del marcaje adhesivo y el codigo de registro unico y se puede leer un numero de telefono o direccion de Internet de base de datos. La polida puede llamar por telefono entonces al numero de telefono de la base de datos y un operador de la base de datos puede usar el codigo de registro unico para proporcionar detalles del propietario de la propiedad de tal manera que la polida pueda contactar con el propietario y devolver la propiedad. Si la polida no puede localizar un micropunto en el marcaje adhesivo, entonces se puede quitar una pequena muestra del adhesivo y enviar a un laboratorio para analisis con el fin de obtener informacion acerca de la composicion de ADN unica dispersada por todo el adhesivo. Esta informacion puede ser usada despues para identificar el propietario usando la base de datos. Una pegatina u otra marca en la propiedad pueden indicar un numero de telefono o direccion de Internet que la polida puede usar para contactar con el operador de base de datos en la ausencia de micropuntos.
Dicho kit proporciona asf dos metodos posibles de rastrear el propietario de la propiedad robada, mediante los micropuntos o mediante la composicion de ADN unica. Sin embargo, el solicitante de la presente invencion contempla naturalmente que uno de estos metodos pueda ser usado por sf mismo. De hecho, para algunas aplicaciones puede no ser apropiado proporcionar micropuntos en una composicion de marcaje de seguridad. Por ejemplo, puede no ser apropiado proporcionar micropuntos en composiciones que hayan de ser expulsadas como un aerosol para marcar un ladron o agresor puesto que tales micropuntos pueden bloquear la boquilla de dispensacion y/o quitarse facilmente.
Tal es el caso de la DNA PERSONAL ALARM del Solicitante de la presente solicitud que no usa micropuntos. Este producto incluye una alarma personal de mano en forma de un recipiente presurizado que contiene una composicion que incluye una composicion de ADN unica y un material fluorescente del tipo usado en el kit de marcaje de seguridad previamente descrito. Como se ha descrito en relacion al kit de marcaje de seguridad, un proveedor de servicios lleva una base de datos que enlaza la informacion acerca de cada composicion de ADN unica con detalles de los propietarios de las alarmas personales. Si un propietario es atacado, puede pulverizar sobre su agresor usando la alarma personal. Posteriormente, si es aprehendido, se puede utilizar una lampara UV para localizar la composicion de ADN en el agresor. Se puede tomar una pequena muestra de la composicion y enviarla a un laboratorio para analisis al objeto de obtener informacion acerca de la composicion de ADN unica. Esta informacion puede ser usada posteriormente para identificar el propietario de la alarma personal usando la base de datos. Como tal, al agresor se le puede vincular irrefutablemente con el ataque sufrido por el propietario de la alarma personal, se puede devolver cualquier propiedad robada, y la informacion puede ser usada para asegurar un veredicto de culpabilidad.
Otro uso de composiciones contenido ADN sintetico es en un sistema de seguridad de edificios, en particular en
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puntos de entrada como puertas y ventanas. Un sistema de seguridad de un edificio que dispensa un fluido para disuadir y/o identificar a los intrusos se describe en la anterior Solicitud de Patente, GB0804493-5 propiedad del Solicitante de la presente solicitud. En esta solicitud anterior se describe que una formulacion especialmente util incluye un marcador/identificador de ADN, un trazador UV/material fluorescente, un propulsor, y opcionalmente un solvente que puede ser organico, por ejemplo, un alcohol, o acuoso. Como sucede con dicho kit de marcaje de seguridad y alarma personal, un proveedor de servicios lleva una base de datos que enlaza la informacion acerca de cada composicion de ADN unica con detalles de los propietarios del sistema de seguridad. Si entra un ladron en un edificio, el sistema de seguridad pulveriza sobre el intruso la composicion de ADN. Posteriormente, si es aprehendido, se puede usar una lampara UV para localizar la composicion de ADN en el intruso. Se puede tomar una pequena muestra de la composicion y enviarla a un laboratorio para analisis al objeto de obtener informacion acerca de la composicion de ADN unica. Esta informacion puede ser usada posteriormente para identificar el propietario del edificio usando la base de datos. Como tal, el intruso puede ser vinculado irrefutablemente con el robo de tal manera que cualquier propiedad robada pueda ser devuelta y la informacion puede ser usada para asegurar un veredicto de culpabilidad.
Un problema que el solicitante de la presente invencion ha identificado con productos actuales en el mercado es que el ADN sintetico de propiedad que usan requiere equipo BiotageRTM especial para analizar el ADN en lugar del equipo Sanger de uso mas comun. El Solicitante de la presente invencion ha observado que sena una gran ventaja comercial habilitar el uso de equipo Sanger estandar a causa de su amplia disponibilidad y uso. Esto permitina al Solicitante de la presente invencion vender productos, como el kit de marcaje de seguridad antes descrito, la alarma personal y el sistema de seguridad para edificios a distribuidores del extranjero. El uso de BiotageRTM limita seriamente las oportunidades comerciales porque es muy diffcil hallar laboratorios que: (1) tengan el equipo; y (2) deseen realizar el analisis a nivel comercial. Ademas, el Solicitante de la presente invencion considera que las fuerzas de polida del extranjero desean realizar el analisis de ADN en su propio pafs por razones practicas, poltticas y/o legales y no desean depender de equipo de propiedad situado en un pafs extranjero.
Otro problema que el solicitante de la presente invencion ha identificado es que las composiciones de ADN sinteticas usadas en productos actuales no estan optimizadas para las aplicaciones de marcaje de seguridad aqrn descritas. En particular, el solicitante de la presente invencion considera que las cadenas de ADN individuales en las composiciones actuales son excesivamente largas. En general, cuanto mas largas son las cadenas de ADN, mas costosas son de fabricar y mas costosas son de analizar.
Una finalidad de la presente invencion es resolver los problemas antes descritos.
Resumen de la invencion
Segun un primer aspecto de la presente invencion se facilita una composicion incluyendo: una pluralidad de primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos; y una pluralidad de segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos que son diferentes de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos, donde cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una primera secuencia de bases de union de iniciador, una primera secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una segunda secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la primera secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador primera y segunda, donde cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una tercera secuencia de bases de union de iniciador, una segunda secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una cuarta secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la segunda secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta, donde la primera secuencia de identificacion es diferente de la segunda secuencia de identificacion, y donde informacion acerca del propietario de la composicion es proporcionada por las secuencias de identificacion primera y segunda usando una base de datos que conecta informacion acerca del propietario de la composicion con las secuencias de identificacion primera y segunda.
La composicion es una composicion de marcaje de seguridad, tfpicamente (aunque no exclusivamente) adecuada para marcar la propiedad y/o personas. La propiedad podna ser propiedad probablemente en peligro de ser perdida o robada, y las personas podnan ser delincuentes tal como ladrones, asaltantes y otros atacadores, o podnan ser otros individuos que podnan beneficiarse del marcaje de seguridad, tal como soldados. Los oligomeros se forman de modo que se puedan relacionar facilmente con el propietario de la composicion, usando una base de datos. Asf, las secuencias de identificacion primera y segunda se pueden relacionar con el propietario de la composicion mediante una base de datos. La base de datos contiene informacion acerca del propietario de la composicion y conecta esta informacion con las secuencias de identificacion primera y segunda. Asf, la informacion acerca del propietario se puede obtener a partir de la identificacion de las secuencias de identificacion primera y segunda en la composicion.
Proporcionando dos oligomeros de nucleotidos sinteticos diferentes en la composicion, los oligomeros se pueden hacer mas cortos, pero proporcionando todavfa una variacion suficientemente grande para identificar de forma unica cada composicion. Por ejemplo, si ambos oligomeros tienen una secuencia de identificacion de tres bases de longitud, entonces hay (43)2 combinaciones posibles, es decir, 4096. Si ambos oligomeros tienen una secuencia de identificacion de siete bases de longitud, entonces hay (47)2 combinaciones posibles, es decir, 2.684 x 108. El
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solicitante considera que este rango de combinaciones es suficiente para asegurar que las composiciones usadas en marcaje de seguridad de propiedad y/o para marcar un ladron o agresor sean identificables de forma unica. La ventaja de usar una secuencia de identificacion mas corta es que los oligomeros de nucleotidos seran mas baratos y mas faciles de fabricar y tambien mas baratos y mas faciles de analizar. La desventaja es que el numero de variaciones unicas es limitado. Por ejemplo, si se usa el extremo mas bajo del rango reivindicado (es decir, tres bases en cada secuencia de identificacion), entonces despues de producir y vender 4096 productos, los productos adicionales duplicaran identificadores previos. Este rango mas bajo sera util para productos que probablemente tendran un numero de ventas bajo. Alternativa o adicionalmente, los identificadores se pueden regionalizar geograficamente, por pafs por ejemplo, de tal manera que los identificadores puedan ser reutilizados en regiones diferentes. Otras agrupaciones pueden ser posibles con el fin de permitir la reutilizacion de secuencias de identificacion.
A pesar de las posibilidades anteriores de reutilizacion de combinaciones de identificacion, sena claramente deseable proporcionar identificadores completamente unicos en todo el mundo. Consiguientemente, se prefiere que una o ambas secuencias de identificacion primera y segunda tengan al menos cuatro bases. Si ambos oligomeros tienen una secuencia de identificacion de cuatro bases de longitud, entonces hay (44)2 combinaciones posibles, es decir, 65536, que puede ser suficiente para productos de gama alta de bajo volumen de ventas como los sistemas de seguridad domesticos.
Igualmente, es improbable que muchos productos se vendan en un volumen suficiente para que se requieran 2.684 x 108 variaciones posibles. Consiguientemente, para la mayona de las aplicaciones sera preferible que una o ambas secuencias de identificacion primera y segunda tengan seis bases o menos. Si ambos oligomeros tienen una secuencia de identificacion de seis bases de longitud, entonces hay (46)2 combinaciones posibles, es decir, 1.678 x 107.
Si se requiere gran numero de variaciones unicas, es posible proporcionar oligomeros de nucleotidos adicionales mas bien que incrementar la longitud de las secuencias de identificacion. Consiguientemente, la composicion puede incluir un tercer oligomero de nucleotido, teniendo el tercer oligomero de nucleotido una tercera secuencia de identificacion flanqueada por lugares de union de iniciador. Tambien se puede utilizar cuatro o mas oligomeros de nucleotidos de tal manera que la longitud de las secuencias de identificacion se pueda reducir manteniendo al mismo tiempo un rango suficiente de variaciones unicas. Naturalmente, como alternativa, o adicionalmente, a anadir mas oligomeros, si se requiere un mayor numero de variaciones unicas, entonces la longitud de las secuencias de identificacion de los oligomeros en la composicion se puede incrementar de manera que sea mas grande que siete bases de longitud. Sin embargo, esto tambien aumentara el costo en terminos de fabricacion y analisis.
Las secuencias de union de iniciador a ambos lados de las secuencias de identificacion son necesarias para amplificar y secuenciar los oligomeros de nucleotidos. Segun algunas realizaciones, las secuencias de union de iniciador primera y segunda son diferentes una de otra. Igualmente, segun algunas realizaciones, las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta son diferentes una de otra. Ademas, segun algunas realizaciones, las secuencias de union de iniciador primera y segunda son diferentes de las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta.
Segun realizaciones de las presentes invenciones, cada una de las secuencias de union de iniciador puede ser identica o complementaria de una porcion de un iniciador PCR estandar (reaccion en cadena de la polimerasa), en particular una porcion terminal en la region 3' de un iniciador PCR. Segun algunas realizaciones, las secuencias de union de iniciador primera y tercera son identicas a porciones de secuencias de iniciador estandar usadas en amplificacion y secuenciacion Sanger. Segun algunas realizaciones, las secuencias de union de iniciador segunda y cuarta son complementarias de porciones de secuencias de iniciador estandar usadas en amplificacion y secuenciacion Sanger.
Es preferible mantener cortas las secuencias de union de iniciador para facilitar la fabricacion de los oligomeros. Sin embargo, los secuenciadores estandar son menos exactos para oligomeros mas cortos. El Solicitante de la presente invencion ha observado que las secuencias de union de iniciador cortas pueden ser usadas para los oligomeros si, durante la amplificacion, se usan secuencias de iniciador mas largas para alargar los oligomeros antes de la amplificacion y la secuenciacion. Como tales, las secuencias de union de iniciador primera, segunda, tercera y cuarta pueden tener una longitud en el rango de 5 a 40 bases, mas preferiblemente de 10 a 30 bases, muy preferiblemente de 15 a 20 bases. Estas secuencias de union de iniciador son de longitud suficiente para enlazar fiablemente con iniciadores mas largos antes de la amplificacion estandar usando una reaccion en cadena de la polimerasa.
Con el fin de mantener los oligomeros de nucleotidos lo mas cortos posible, se prefiere que cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos conste solamente de la primera secuencia de union de iniciador, la primera secuencia de identificacion, y la segunda secuencia de union de iniciador. Igualmente, se prefiere que cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos conste solamente de la tercera secuencia de union de iniciador, la segunda secuencia de identificacion, y la cuarta secuencia de union de iniciador.
Las composiciones segun realizaciones de la presente invencion pueden incluir mas componentes como se describe
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en la seccion de Antecedentes. Por ejemplo, las composiciones pueden incluir micropuntos, material fluorescente, adhesivo, grasa, gel, un solvente organico o acuoso, y/o un propulsor. Segun una realizacion, la composicion incluye un adhesivo en el que los oligomeros estan dispersados. Segun otra realizacion, la composicion incluye un solvente que hace que la composicion se pueda pulverizar. Segun esta realizacion, se puede facilitar un recipiente presurizado para contener la composicion, incluyendo el recipiente una boquilla para pulverizar la composicion. Segun otras realizaciones, la composicion incluye una grasa o un gel en el que los oligomeros estan dispersados.
Segun algunas realizaciones, la composicion puede incluir ademas una pluralidad de partfculas o moleculas que proporcionan una firma optica. Por ejemplo, las multiples partfculas o moleculas pueden proporcionar un rango de propiedades refractivas que pueden ser exploradas y usadas para identificar la composicion. Segun realizaciones, se puede dispersar nanopartfculas, tal como polvo de ceramica inorganica, en la composicion. Un rango de polvos proporciona un rango de firmas opticas distintas que puede ser usado para identificar la composicion. El rango de firmas opticas unicas sera normalmente mas pequeno que el rango de secuencias de nucleotidos diferentes. Como tal, la firma optica puede no identificar de forma unica cada composicion diferente en la practica. Sin embargo, tal firma optica puede ser util para identificar un fabricante de las composiciones, un proveedor, una fuente y/o un lote de composiciones.
A la luz de lo anterior, es evidente que las composiciones segun realizaciones de la presente invencion pueden proporcionar un rango en cascada de diferentes componentes y metodos de identificacion. En un nivel superior, la composicion puede tener un color espedfico, por ejemplo, un color azul bajo luz fluorescente. Esto puede servir para identificar una comparua que utilice dicho color. Sin embargo, a medida que entren mas compares en este campo, es probable que algunas comparuas terminen usando el mismo color fluorescente para sus composiciones de identificacion. Se puede facilitar un segundo nivel de identificacion por medio de micropuntos que identifiquen mas exactamente la fuente de las composiciones. Sin embargo, si una muestra de la composicion no contiene un micropunto, entonces se necesitan otros medios para identificar la fuente de la composicion. Asf se puede facilitar un tercer nivel de identificacion por medio de una firma optica usando una pluralidad de moleculas o nanopartfculas opticamente activas dispersadas en la composicion para identificar la fuente de la composicion. Finalmente, se facilita un cuarto nivel de identificacion por medio de las secuencias de identificacion de nucleotidos para identificar de forma exacta y unica cada composicion individual. Tal rango en cascada de metodos de identificacion proporciona un rango de diferentes niveles de identificacion con el fin de asegurar que la identificacion sea exitosa. Ademas, la identificacion de nivel superior es rapida y barata de realizar sin equipo excesivamente complejo o caro que permite a los individuos o a las fuerzas de polida identificar una fuente central de una composicion. Asf se puede centralizar el analisis de nucleotidos mas complejo y lento.
Las composiciones se fabricaran normalmente formando los oligomeros de nucleotidos y luego dispersandolos en un medio adecuado para despliegue, por ejemplo, como un adhesivo, grasa, gel o pulverizacion. Las composiciones se cargaran despues en recipientes adecuadamente codificados y se hara un registro para enlazar cada recipiente codificado con su codigo de nucleotido. Cuando se venda a un cliente, se tomaran detalles del cliente junto con el codigo del recipiente comprado. Asf, los detalles del cliente pueden unirse al codigo de nucleotido en una base de datos como se ha descrito en la seccion de Antecedentes.
Segun realizaciones de la presente invencion, los oligomeros de nucleotidos pueden incluir ADN o ARN. Se prefiere ADN por ser mas estable. Los oligomeros de nucleotidos pueden ser de cadena unica o doble. Los oligomeros de nucleotidos de cadena unica son preferibles segun algunas aplicaciones porque son mas baratos de fabricar. Sin embargo, aunque los oligomeros de cadena doble son mas caros de fabricar, tienen la caractenstica ventajosa de que son mas estables que los oligomeros de cadena unica. Consiguientemente, en algunas aplicaciones pueden ser preferibles los oligomeros de cadena doble.
Segun otro aspecto de la presente invencion se facilita una pluralidad de recipientes de la composicion. Cada recipiente es identificable por una combinacion unica de las secuencias de identificacion primera y segunda. Los recipientes pueden estar agrupados en lotes, donde el primer identificador es para identificar el lote al que pertenece un recipiente y el segundo identificador es para identificar de forma unica cada recipiente dentro de dicho lote.
Segun otro aspecto de la invencion se facilita un kit de marcaje de seguridad, incluyendo el kit:
(1a) una composicion de marcaje de seguridad incluyendo una pluralidad de primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos; y una pluralidad de segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos que son diferentes de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos,
donde cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una primera secuencia de bases de union de iniciador, una primera secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una segunda secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la primera secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador primera y segunda,
donde cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una tercera secuencia de bases de union de iniciador, una segunda secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una cuarta
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secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la segunda secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta,
donde la primera secuencia de identificacion es diferente de la segunda secuencia de identificacion;
donde la informacion acerca del propietario de la composicion la facilitan las secuencias de identificacion primera y segunda usando una base de datos que conecta informacion acerca del propietario de la composicion con las secuencias de identificacion primera y segunda; y/o
(1b) un recipiente presurizado que aloja la composicion de (a), e incluyendo ademas al menos uno de un solvente y un propulsor, incluyendo el recipiente presurizado una boquilla para pulverizar dicha composicion; y
(2) instrucciones para registrar la propiedad del kit en una base de datos.
Segun otro aspecto de la presente invencion, la composicion se usa en marcaje de seguridad de propiedad y/o para marcar un ladron o agresor.
Segun otro aspecto de la presente invencion, se facilita un metodo de determinar un propietario de una composicion como se describe aqm, incluyendo el metodo: tomar una muestra de la composicion; reaccionar uno o ambos oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo con iniciadores que se unen con las secuencias de union de iniciador primera y segunda y/o tercera y cuarta para aumentar la longitud de uno o ambos oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo; amplificar uno o ambos oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo usando una reaccion en cadena de la polimerasa; secuenciar los oligomeros de nucleotidos sinteticos amplificados para identificar la primera y/o segunda secuencia de identificacion; y consultar una base de datos para comparar la primera y/o segunda secuencia de identificacion identificada con informacion acerca del propietario de la composicion.
Los iniciadores pueden incluir secuencias de iniciador que son secuencias de iniciador estandar usadas en amplificacion y secuenciacion Sanger. Los iniciadores son mas largos que las secuencias de union de iniciador con el fin de mejorar la exactitud de secuenciacion. Por ejemplo, los iniciadores pueden tener una longitud en el rango de 50 a 200 bases, preferiblemente de 50 a 100 bases.
Breve descripcion de los dibujos
Para una mejor comprension de la presente invencion y para mostrar como se puede poner en practica, ahora se describiran realizaciones de la presente invencion a modo de ejemplo solamente con referencia a los dibujos acompanantes, en los que:
La figura 1 representa una ilustracion esquematica de oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo segun una realizacion de la presente invencion.
La figura 2 representa una ilustracion esquematica de un metodo de determinar un propietario de una composicion segun una realizacion de la presente invencion.
Y la figura 3 representa una ilustracion esquematica de un metodo usado para alargar y amplificar uno de los oligomeros de nucleotidos segun una realizacion de la presente invencion.
Descripcion detallada de las realizaciones preferidas de la invencion
Las composiciones de la presente invencion incluyen una mezcla de dos oligomeros de nucleotidos sinteticos diferentes. Se ilustran ejemplos en la figura 1. El primer oligomero de nucleotido sintetico 2 incluye una secuencia de union de iniciador 4, una secuencia de union de iniciador 6, y una secuencia de identificacion 8 dispuesta entre las secuencias de union de iniciador. El segundo oligomero de nucleotido sintetico 10 es de estructura similar al primer oligomero e incluye una secuencia de union de iniciador 12, una secuencia de union de iniciador 14, y una secuencia de identificacion 16 dispuesta entre las secuencias de union de iniciador.
Las secuencias de identificacion se usan para identificar la composicion. Las secuencias de identificacion de los dos oligomeros son diferentes y juntas proporcionan un codigo unico para la composicion. Las secuencias de identificacion tienen de tres a siete bases, preferiblemente de 4 a 6 bases. Las secuencias de union de iniciador son identicas o complementarias de porciones de secuencias de iniciador estandar usadas para amplificar el oligomero durante el analisis.
La figura 2 representa un metodo de analizar una composicion incluyendo una mezcla de dos oligomeros de nucleotidos sinteticos diferentes 2, 10 como se ha descrito anteriormente en relacion a la figura 1.
Se toma una muestra de la composicion y se afslan los oligomeros de nucleotidos. Los oligomeros de nucleotidos
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son alargados despues usando iniciadores y luego son amplificados usando una reaccion en cadena de la polimerasa. Una caractenstica clave es que los iniciadores son mas largos que las secuencias de union de iniciador de los oligomeros de nucleotidos 2, 10. Consiguientemente, los oligomeros de nucleotidos se incrementan en longitud como se ilustra en el paso A de la figura 2. Los oligomeros extendidos conservan la misma longitud de secuencia de identificacion 8, 16 pero tienen secuencias de iniciador mucho mas largas 18, 20, 22, 24 en comparacion con las secuencias de union de iniciador originales 4, 6, 12, 14. Estos oligomeros extendidos son amplificados en numero usando una reaccion en cadena de la polimerasa como se ilustra en el paso B y luego son secuenciados como se ilustra en el paso C. Los oligomeros mas largos pueden ser secuenciados usando metodos de secuenciacion estandar. En contraposicion, sena diffcil secuenciar exactamente los oligomeros mas cortos usando metodos estandar. Finalmente, en el paso D se usa una base de datos para comparar las secuencias identificadas con informacion acerca del propietario de la composicion.
La figura 3 representa con mas detalle un metodo usado para alargar y amplificar uno de los oligomeros de nucleotidos. Como antes, el oligomero de nucleotido sintetico 2 incluye una primera secuencia de union de iniciador 4, una segunda secuencia de union de iniciador 6, y una secuencia de identificacion 8 dispuesta entre las secuencias de union de iniciador.
En el paso 1, se une un iniciador PCR 30 a la segunda secuencia de union de iniciador 6. El iniciador PCR 30 tiene una porcion terminal 32 en su extremo 3' que es complementaria de la segunda secuencia de union de iniciador 6 para union. El iniciador PCR 30 tambien tiene un lugar de union de iniciador 34 para amplificacion de secuenciacion Sanger en una posicion distinta de la porcion terminal 32. En este caso, el lugar de union de iniciador 34 esta en el extremo 5' del iniciador PCR 30 e incluye una secuencia correspondiente a un iniciador de secuencia inversa.
En el paso 2, la secuencia de iniciador PCR 30 se extiende usando el oligomero de nucleotido sintetico 2 como una plantilla con el fin de formar una secuencia extendida 40 incluyendo porciones 36 y 38 que son complementarias de la primera secuencia de union de iniciador 4 y la secuencia de identificacion 8 del oligomero de nucleotido sintetico original 2.
En el paso 3, se une un segundo iniciador PCR 42 a la porcion 36 de la secuencia extendida 40. El segundo iniciador PCR 42 tiene una porcion terminal 44 en su extremo 3' que es complementaria de la porcion 36 de la secuencia extendida 40. Dado que la porcion 36 es complementaria de la primera secuencia de union de iniciador 6, la porcion terminal 44 del segundo iniciador 42 es identica a la primera secuencia de union de iniciador original 4.
El segundo iniciador PCR 42 tambien tiene un lugar de union de iniciador 46 para amplificacion de secuenciacion Sanger en una posicion distinta de la porcion terminal 44. En este caso, el lugar de union de iniciador 46 esta en el extremo 5' del iniciador PCR 42 e incluye una secuencia correspondiente a un iniciador de secuencia directa.
En el paso 4, el segundo iniciador PCR 42 se extiende usando la secuencia extendida 40 como una plantilla con el fin de formar una secuencia extendida final 48 incluyendo una porcion 50 que es complementaria de la porcion 38 y por ello identica a la secuencia de identificacion 8 del oligomero de nucleotido sintetico original 2. La secuencia extendida final 48 incluye asf una secuencia de un iniciador de secuencia directa 46, una secuencia de un iniciador de secuencia inversa 52, y una secuencia 50 identica a la secuencia de identificacion 8 del oligomero de nucleotido sintetico original 2.
En el paso 5, la secuencia extendida final 48 es amplificada en numero usando amplificacion PCR. El producto de amplificacion puede ser secuenciado entonces usando los lugares de iniciador de secuencia directa e inversa.
Se puede utilizar los mismos pasos del metodo para amplificacion y secuenciacion de un segundo oligomero de nucleotido en la composicion usando un tercer y un cuarto iniciador PCR. En este caso, si los iniciadores PCR primero y segundo alojan los mismos lugares de union de iniciador de secuencia que los iniciadores PCR tercero y cuarto respectivamente, los oligomeros de nucleotidos deberan ser amplificados y secuenciados por separado. Alternativamente, si los iniciadores PCR primero y segundo tienen diferentes lugares de union de iniciador de secuencia a los iniciadores PCR tercero y cuarto respectivamente, los oligomeros de nucleotidos pueden ser amplificados en una reaccion. Sin embargo, el analisis de secuenciacion todavfa debera ser realizado por separado.
Las composiciones y los metodos de la presente invencion permiten utilizar oligomeros de nucleotidos cortos para identificar de forma unica las composiciones al mismo tiempo que permiten utilizar equipo estandar para secuenciar los oligomeros extendiendo la longitud de los oligomeros durante las etapas iniciales de amplificacion.
Aunque esta invencion se ha mostrado y descrito en particular con referencia a realizaciones preferidas, los expertos en la tecnica entenderan que se puede hacer varios cambios en la forma y el detalle sin apartarse del alcance de la invencion definido por las reivindicaciones anexas.

Claims (14)

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    REIVINDICACIONES
    1. Una composicion de marcaje de seguridad incluyendo:
    una pluralidad de primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos; y
    una pluralidad de segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos que son diferentes de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos,
    donde cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una primera secuencia de bases de union de iniciador, una primera secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una segunda secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la primera secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador primera y segunda,
    donde cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una tercera secuencia de bases de union de iniciador, una segunda secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una cuarta secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la segunda secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta,
    donde la primera secuencia de identificacion es diferente de la segunda secuencia de identificacion, y
    donde informacion acerca del propietario de la composicion la proporcionan las secuencias de identificacion primera y segunda usando una base de datos que conecta informacion acerca del propietario de la composicion con las secuencias de identificacion primera y segunda.
  2. 2. Una composicion segun la reivindicacion 1, donde la primera secuencia de identificacion tiene una longitud en el rango de cuatro a seis bases.
  3. 3. Una composicion segun la reivindicacion 1, donde la segunda secuencia de identificacion tiene una longitud en el rango de cuatro a seis bases.
  4. 4. Una composicion segun cualquier reivindicacion precedente, donde las secuencias de union de iniciador primera y segunda son diferentes de las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta.
  5. 5. Una composicion segun alguna de las reivindicaciones 1 a 3, donde las secuencias de union de iniciador primera y segunda son identicas a las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta.
  6. 6. Una composicion segun cualquier reivindicacion precedente, donde las secuencias de union de iniciador primera y segunda son diferentes,
    y/o donde las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta son diferentes,
    y/o donde cada una de las secuencias de union de iniciador primera, segunda, tercera y cuarta tiene una longitud en el rango de 5 a 40 bases, mas preferiblemente en el rango de 10 a 30 bases, muy preferiblemente en el rango de 15 a 20,
    y/o donde cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos consta de la primera secuencia de union de iniciador, la primera secuencia de identificacion, y la segunda secuencia de union de iniciador,
    y/o donde cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos consta de la tercera secuencia de union de iniciador, la segunda secuencia de identificacion, y la cuarta secuencia de union de iniciador,
    y/o donde la composicion incluye ademas uno o mas de un adhesivo, un material fluorescente, una pluralidad de micropuntos, un solvente, un propulsor, una grasa y un gel.
  7. 7. Un recipiente presurizado que aloja una composicion segun la reivindicacion 6, incluyendo la composicion al menos uno de un solvente y un propulsor, incluyendo el recipiente presurizado una boquilla para pulverizar dicha composicion.
  8. 8. Una pluralidad de recipientes, incluyendo cada recipiente una composicion segun alguna de las reivindicaciones 1 a 6, donde cada recipiente es identificable por una combinacion unica de las secuencias de identificacion primera y segunda.
  9. 9. Una pluralidad de recipientes segun la reivindicacion 8, incluyendo una pluralidad de lotes de recipientes, donde el primer identificador es para identificar el lote al que pertenece un recipiente y el segundo identificador es para identificar de forma unica cada recipiente dentro de dicho lote.
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  10. 10. Un kit de marcaje de seguridad, incluyendo el kit:
    (la) una composicion de marcaje de seguridad incluyendo una pluralidad de primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos;
    y una pluralidad de segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos identicos que son diferentes de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos, donde cada uno de los primeros oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una primera secuencia de bases de union de iniciador, una primera secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una segunda secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la primera secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador primera y segunda,
    donde cada uno de los segundos oligomeros de nucleotidos sinteticos incluye una tercera secuencia de bases de union de iniciador, una segunda secuencia de identificacion de tres a siete bases de longitud, y una cuarta secuencia de bases de union de iniciador, estando dispuesta la segunda secuencia de identificacion entre las secuencias de union de iniciador tercera y cuarta, donde la primera secuencia de identificacion es diferente de la segunda secuencia de identificacion;
    donde informacion acerca del propietario de la composicion la facilitan las secuencias de identificacion primera y segunda usando una base de datos que conecta informacion acerca del propietario de la composicion con las secuencias de identificacion primera y segunda; y/o
    (lb) un recipiente presurizado que aloja la composicion de (a), e incluyendo ademas al menos uno de un solvente y un propulsor, incluyendo el recipiente presurizado una boquilla para pulverizar dicha composicion; y
    (2) instrucciones para registrar la propiedad del kit en una base de datos.
  11. 11. Un kit segun la reivindicacion 10, donde la composicion de seguridad es una composicion como la definida en alguna de las reivindicaciones 1-6, y/o el recipiente presurizado es un recipiente como el definido en alguna de las reivindicaciones 7-9.
  12. 12. Uso de una composicion como la definida en alguna de las reivindicaciones 1-6, de un recipiente presurizado como el definido en la reivindicacion 7, o de un kit como el definido en alguna de las reivindicaciones 10 a 11, en el marcaje de seguridad de propiedad y/o una persona.
  13. 13. Un metodo de determinar un propietario de una composicion como la definida en alguna de las reivindicaciones 1-6, de un recipiente presurizado como el definido en la reivindicacion 7, o de un kit como el definido en alguna de las reivindicaciones 10 a 11, incluyendo el metodo:
    tomar una muestra de la composicion de seguridad;
    reaccionar uno o ambos de los oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo con iniciadores que se unen a las secuencias de union de iniciador primera y segunda y/o tercera y cuarta para aumentar la longitud de uno o ambos de los oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo;
    amplificar uno o ambos de los oligomeros de nucleotidos sinteticos primero y segundo usando una reaccion en cadena de la polimerasa;
    secuenciar los oligomeros de nucleotidos sinteticos amplificados para identificar la secuencia de identificacion primera y/o segunda; y
    consultar una base de datos para comparar la primera y/o segunda secuencia de identificacion identificada con informacion acerca del propietario de la composicion.
  14. 14. Un metodo segun la reivindicacion 13, donde los iniciadores tienen una longitud en el rango de 50 a 200 bases, mas preferiblemente en el rango de 50 a 100 bases.
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