BRPI1013692B1 - Composição de marcação de segurança, recipiente pressurizado, pluralidade de recipientes, kit de marcação de segurança, uso dos mesmos, e, método de determinar um detentor de uma composição, recipiente pressurizado ou kit - Google Patents

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Abstract

composição de marcação de segurança, recipiente pressurizado, pluralidade de recipientes, kit de marcação de segurança, uso dos mesmos, e, método de determinar um detentor de uma composição, recipiente pressurizado ou kit uma composição que compreende: uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético primários idênticos; e uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético secundários idênticos que são diferentes dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador de bases, uma primeira sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma segunda sequência de ligação de iniciador de bases, a primeira sequência identificadora sendo disposta entre a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários compreende uma terceira sequência de ligação de iniciador de bases, uma segunda sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma quarta sequência de ligação de iniciador de bases, a segunda sequência identificadora sendo disposta entre a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador, e em que a primeira sequência identificadora é diferente da segunda sequência identificadora. ,

Description

COMPOSIÇÃO DE MARCAÇÃO DE SEGURANÇA, RECIPIENTE PRESSURIZADO, PLURALIDADE DE RECIPIENTES, KIT DE MARCAÇÃO DE SEGURANÇA, USO DOS MESMOS, E, MÉTODO DE DETERMINAR UM DETENTOR DE UMA COMPOSIÇÃO, RECIPIENTE PRESSURIZADO OU KIT
Campo da invenção [1] A presente invenção diz respeito a composições contendo nucleotídeo sintético, métodos de fabricar as ditas composições, uso das composições em marcação de segurança de propriedade e/ou para marcar um ladrão ou agressor, e métodos de detectar uma tal composição em uma pessoa ou propriedade e analisar a composição para determinar a origem da composição e/ou informação a cerca do dono da propriedade.
Fundamentos da invenção [2] As composições contendo nucleotídeo sintético para o uso em marcação de segurança de propriedade e/ou para marcar um ladrão ou agressor são conhecidas na técnica. De fato, o presente requerente já desenvolveu e comercializou diversos produtos contendo tais composições. Alguns exemplos dos produtos do presente requerente que utilizam tais composições são debatidos abaixo.
[3] O kit que marca propriedade SelectaDNARTM compreende um pote de adesivo que pode ser aplicado à propriedade usando um aplicador de modo a marcar a propriedade com uma composição única que pode ser rastreado de volta para o dono no evento da propriedade ser roubada por um ladrão e depois recuperada pela polícia. Cada pote de adesivo contém uma composição de DNA única e também diversos milhares de micropontos dispersos por todo o adesivo. Cada microponto contém um código de registro único e um número de telefone ou de endereço na internet da base de dados. Uma base de dados é mantida por um fornecedor de serviço que liga cada código de registro único aos detalhes do dono da propriedade, por exemplo
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 9/31 / 17 nome, endereço e/ou número de telefone do dono. Estes detalhes podem ser obtidos quando um dono da propriedade adquire o kit de marcação de propriedade e registrou-se na base de dados. Esta base de dados, ou uma segunda base de dados, também contêm informação a cerca da composição de DNA única que é ligada ao código de registro ou diretamente aos detalhes do dono. O adesivo também contém um material fluorescente que emite luz visível sob luz UV de modo a permitir que a marcação do adesivo na propriedade seja facilmente localizada pela polícia.
[4] Quando um item roubado de propriedade é recuperado pela polícia uma lâmpada de UV pode ser utilizada para localizar a marcação do adesivo na propriedade. Usando uma lente de aumento um microponto pode ser localizado dentro da marcação do adesivo e o código de registro único e um número de telefone da base de dados ou endereço da internet pode ser lido. A polícia pode depois telefonar o número de telefone da base de dados e um operador da base de dados pode usar o código de registro único para fornecer detalhes do dono da propriedade tal que a polícia possa contatar o dono e retornar a propriedade. Se a polícia não puder localizar um microponto na marcação do adesivo então uma pequena amostra do adesivo pode ser removido e enviado a um laboratório para análise para se obter informação a cerca da composição de DNA única dispersa por todo o adesivo. Esta informação pode ser depois usada para identificar o dono usando a base de dados. Um rótulo gomado ou outra marcação na propriedade pode indicar um número de telefone ou endereço da internet que a polícia possa usar para contatar o operador da base de dados na ausência de qualquer um dos micropontos.
[5] O kit anteriormente mencionado fornece assim dois métodos possíveis para localizar o dono de propriedade roubada, por intermédio dos micropontos ou por intermédio da composição de DNA única. Entretanto, é naturalmente considerado pelo presente requerente que cada um destes
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 10/31 / 17 métodos possam ser usados por si mesmos. De fato, para algumas aplicações pode não ser apropriado fornecer micropontos em uma composição de marcação de segurança. Por exemplo, pode não ser apropriado fornecer micropontos em composições que devam ser expelidas como um aerossol para marcar um ladrão ou agressor visto que tais micropontos podem bloquear o bocal de dispensa e/ou ser facilmente retirado por lavagem.
[6] Tal é o caso para o DNA PERSONAL ALARM do presente requerente que não usa micropontos. Este produto compreende um alarme pessoal manual na forma de um recipiente pressurizado que abriga uma composição que compreende uma composição de DNA única e um material fluorescente do tipo usado no kit de marcação de propriedade anteriormente descrito. Como descrito em relação ao kit de marcação de propriedade, uma base de dados é mantida por um fornecedor de serviço que liga a informação a cerca de cada composição de DNA única aos detalhes dos donos dos alarmes pessoais. Se um dono é atacado ele pode pulverizar o seu agressor usando o alarme pessoal. Subsequentemente, se apreendido, uma lâmpada UV pode ser utilizada para localizar a composição de DNA no agressor. Uma pequena amostra da composição pode ser removida e enviada a um laboratório para análise para se obter informação a cerca da composição de DNA única. Esta informação pode ser depois usada para identificar o dono do alarme pessoal usando a base de dados. Como tal, o agressor pode ser indiscutivelmente ligado ao ataque no dono do alarme pessoal, qualquer propriedade roubada pode ser retornada, e a informação usada para garantir uma condenação.
[7] Já um outro uso de composições contendo DNA sintético é na construção de sistema de segurança, particularmente em pontos de entrada tais como portas e janelas. Uma construção de sistema de segurança que dispensa um fluido para desencorajar e/ou identificar um invasor é descrito no pedido de patente mais antigo do próprio presente requerente, GB0804493.5. Neste pedido mais antigo está descrito que uma formulação particularmente
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 11/31 / 17 útil compreende um marcador/ identificador de DNA, um traçador de UV/material fluorescente, um propelente, e opcionalmente um solvente que pode ser orgânico, por exemplo um álcool, ou aquoso. Como com o kit de marcação de propriedade e alarme pessoal anteriormente mencionado, uma base de dados é mantida por um fornecedor de serviço que liga informação a cerca de cada composição de DNA única aos detalhes dos donos do sistema de segurança. Se uma construção é quebrada por um arrombador, o sistema de segurança pulveriza o invasor com a composição de DNA. Subsequentemente, se apreendido, uma lâmpada de UV pode ser utilizada para localizar a composição de DNA no invasor. Uma pequena amostra da composição pode ser removida e enviada a um laboratório para análise para se obter informação a cerca da composição de DNA única. Esta informação pode ser depois usada para identificar o dono da construção usando a base de dados. Como tal, o invasor pode ser indiscutivelmente ligado ao arrombamento tal que qualquer propriedade roubada possa ser retornada e a informação usada para garantir uma condenação.
[8] Um problema que o presente requerente identificou com os produtos correntes no mercado é que o DNA sintético patenteado usado neles requer equipamento BiotageRTM especial para analisar o DNA ao invés do equipamento Sanger mais habitualmente usado. O presente requerente constatou que haveria uma grande vantagem comercial possibilitar o uso do equipamento Sanger padrão por causa da sua ampla disponibilidade e uso. Isto possibilitaria o presente requerente vender produtos, tais como o kit de marcação de propriedade, alarme pessoal e construção sistema de segurança anteriormente descritos aos distribuidores no exterior. O uso de BiotageRTM seriamente limita oportunidades comerciais porque é muito difícil encontrar labs que igualmente: (1) têm o equipamento; e (2) estejam dispostos a analisar em um nível comercial. Além disso, o presente requerente considera que as forças policiais estrangeiras desejarão realizar a análise de DNA no seu
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 12/31 / 17 próprio país por razões práticas, políticas e/ou legais e não desejariam contar com equipamento patenteado localizado em um país estrangeiro.
[9] Um outro problema que o presente requerente identificou é que as composições de DNA sintético usadas em produtos correntes não são otimizadas para as aplicações de marcação de segurança aqui descritas. Em particular, o presente requerente acredita que os filamentos de DNA individuais nas composições correntes são excessivamente longas. No geral, quanto mais longos os filamentos de DNA, mais caros eles são para fabricar e mais caros eles são para analisar.
[10] É um objetivo da presente invenção solucionar os problemas descritos acima.
Sumário da Invenção [11] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção é fornecida uma composição que compreende: uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético primários idênticos; e uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético secundários idênticos que são diferentes dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador de bases, uma primeira sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma segunda sequência de ligação de iniciador de bases, a primeira sequência identificadora sendo disposta entre a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários compreende uma terceira sequência de ligação de iniciador de bases, uma segunda sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma quarta sequência de ligação de iniciador de bases, a segunda sequência identificadora sendo disposta entre a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador, e em que a primeira sequência identificadora é diferente da segunda sequência identificadora.
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 13/31 / 17 [12] A composição é uma composição de marcação de segurança, tipicamente (mas não exclusivamente) adequada para marcar propriedade e/ou pessoas. A propriedade poderia ser propriedade provável de estar em perigo de ser perdida ou roubada, e a pessoa poderia ser criminosos tais como ladrões, assaltantes e outros agressores, ou poderia ser outros indivíduos que beneficiar-se-iam da marcação de segurança, tais como soldados. Os oligômeros são construídos de modo que eles pudessem ser facilmente relacionados ao dono da composição, usando uma base de dados. Assim a primeira e segunda sequências identificadoras são relacionáveis ao dono da composição por intermédio de uma base de dados. A base de dados contém informação sobre o dono da composição e conecta esta informação com a primeira e segunda sequências identificadoras. Assim a informação sobre o dono pode ser obtida da identificação da primeira e segunda sequências identificadoras na composição.
[13] Fornecendo-se dois oligômeros de nucleotídeo sintético diferentes na composição, os oligômeros podem ser feitos mais curtos embora ainda forneçam uma variação grande o bastante para identificar unicamente cada composição. Por exemplo, se ambos os oligômeros têm uma sequência identificadora de três bases no comprimento, então existem (43)2 combinações possíveis, isto é, 4096. Se ambos os oligômeros têm uma sequência identificadora de sete bases no comprimento, então existem (47)2 combinações possíveis, isto é, 2,684 x 108. O requerente considera que esta faixa de combinações é suficiente para garantir que as composições usadas em marcação de segurança de propriedade e/ou para marcar um ladrão ou agressor serão unicamente identificável. A vantagem de usar uma sequência identificadora mais curta é que os oligômeros de nucleotídeo serão mais baratos e mais fáceis para fabricar e também mais barato e mais fácil para analisar. A desvantagem é que o número de variações únicas é limitado. Por exemplo, se a extremidade mais baixa da faixa reivindicada é usada (isto é,
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 14/31 / 17 três bases em cada sequência identificadora) então depois de produzir e vender 4096 produtos, qualquer outro produto duplicará identificadores anteriores. Esta faixa mais baixa será útil para produtos que são prováveis de ter um número baixo de vendas. Alternativamente, ou adicionalmente, os identificadores podem ser geograficamente regionalizados, por país por exemplo, tal que os identificadores possam ser reutilizados em regiões diferentes. Outros agrupamentos podem ser possíveis de modo a permitir a reutilização de sequências identificadoras.
[14] A despeito das possibilidades acima para reutilizar combinações identificadoras, seria claramente desejável fornecer identificadores mundiais completamente únicos. Consequentemente, é preferido que uma ou ambas da primeira e segunda sequências identificadoras tivessem pelo menos quatro bases. Se ambos os oligômeros têm uma sequência identificadora de quatro bases no comprimento, então existem (44)2 combinações possíveis, isto é, 65536, que podem ser suficiente para produtos de volume de venda baixo de finalidade elevada tais como sistemas de segurança residenciais.
[15] Similarmente, é improvável que muitos produtos venderão em volume suficiente que 2,684 x 108 variações possíveis serão requeridas. Consequentemente, para a maioria das aplicações será preferível se uma ou ambas da primeira e segunda sequências identificadoras tenha seis bases ou menos. Se ambos os oligômeros têm uma sequência identificadora de seis bases no comprimento, então existem (46)2 combinações possíveis, isto é, 1,67 8 x 107.
[16] Se um grande número de variações únicas é requerido, é possível fornecer oligômeros de nucleotídeo adicionais ao invés de aumentar o comprimento das sequências identificadoras. Consequentemente, a composição pode compreender um terceiro oligômero de nucleotídeo, o terceiro oligômero de nucleotídeo tendo uma terceira sequência identificadora
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 15/31 / 17 flanqueada pelos sítios de ligação de iniciador. Quatro ou mais oligômeros de nucleotídeo também podem ser utilizados tal que o comprimento das sequências identificadoras pode ser reduzido enquanto ainda mantém uma faixa suficiente de variações únicas. Naturalmente, como uma alternativa, ou além disso, adicionar outros oligômeros, se um número grande de variações únicas é requerido então o comprimento das sequências identificadoras dos oligômeros na composição pode ser aumentado de modo a ser maior do que sete bases no comprimento. Entretanto, isto também aumentará o custo em termos de fabricação e análise.
[17] A sequência de ligação de iniciadores em cada um dos lados das sequências identificadoras é requerida para amplificar e sequenciar os oligômeros de nucleotídeo. De acordo com certas formas de realização, a primeira e segunda sequências de ligação de iniciadores são diferentes entre si. Similarmente, de acordo com certas formas de realização a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador são diferentes entre si. Além disso ainda, de acordo com certas formas de realização a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador são diferentes da terceira e quarta sequências de ligação de iniciador.
[18] De acordo com as formas de realização da presente invenção, cada uma das sequências de ligação de iniciador pode ser idêntica ou complementar a uma porção de um iniciador da PCR padrão (reação da cadeia da polimerase), particularmente uma porção terminal na região 3' de um iniciador de PCR. De acordo com certas formas de realização, a primeira e terceira sequências de ligação de iniciador são idênticas às porções de sequências de iniciador padrão usadas na amplificação e sequenciamento de Sanger. De acordo com certas formas de realização, a segunda e quarta sequências de ligação de iniciador são complementares às porções de sequências de iniciador padrão usadas na amplificação e sequenciamento de Sanger.
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 16/31 / 17 [19] É preferido que as sequências de ligação de iniciador devam ser mantidas curtas para facilidade de fabricação dos oligômeros. Entretanto, sequenciadores padrão são menos precisos para oligômeros mais curtos. O presente requerente constatou que as sequências de ligação de iniciador curtas podem ser usadas para os oligômeros se, durante a amplificação, sequências iniciadoras mais longas são usadas para encompridar os oligômeros antes da amplificação e sequenciamento. Como tal, a primeira, segunda, terceira e quarta sequências de ligação de iniciador podem cada uma ter um comprimento na faixa de 5 a 40 bases, mais preferivelmente de 10 a 30 bases, o mais preferivelmente de 15 a 20 bases. Estas sequências de ligação de iniciador são de comprimento suficiente para confiavelmente ligarem-se aos iniciadores mais longos antes da amplificação padrão usando uma reação da cadeia da polimerase.
[20] De modo a manter os oligômeros de nucleotídeo tão curtos quanto possível, é preferido que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários consista apenas da primeira sequência de ligação de iniciador, da primeira sequência identificadora, e da segunda sequência de ligação de iniciador. Similarmente, é preferido que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários consista apenas da terceira sequência de ligação de iniciador, da segunda sequência identificadora, e da quarta sequência de ligação de iniciador.
[21] As composições de acordo com as formas de realização da presente invenção podem compreender outros componentes como descrito na seção de fundamentos. Por exemplo, as composições podem compreender micropontos, material fluorescente, adesivo, graxa, gel, um solvente orgânico ou aquoso, e/ou um propelente. De acordo com uma forma de realização, a composição compreende um adesivo em que os oligômeros são dispersos. De acordo com uma outra forma de realização a composição compreende um solvente que torna a composição pulverizável. De acordo com esta forma de
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 17/31 / 17 realização, um recipiente pressurizado podem ser fornecido para alojar a composição, o recipiente compreendendo um bocal para pulverizar a composição. De acordo com outras formas de realização, a composição compreende uma graxa ou gel em que os oligômeros são dispersos.
[22] De acordo com certas formas de realização, a composição pode compreender ainda uma pluralidade de partículas ou moléculas que forneçam uma assinatura ótica. Por exemplo, a pluralidade de partículas ou moléculas pode fornecer uma faixa de propriedades refrativas que podem ser escaneadas e usadas para identificar a composição. De acordo com formas de realização, a nanopartícula tal como um pó cerâmico inorgânico pode ser dispersa na composição. Um faixa de pós diferentes fornecem uma faixa de assinaturas óticas distintas que podem ser usadas para identificar a composição. A faixa de assinaturas óticas únicas no geral será menor do que a faixa de sequências de nucleotídeo diferentes. Como tal, a assinatura ótica pode não rotular de modo único cada composição diferente na prática. Entretanto, uma tal assinatura ótica pode ser útil para identificar um fabricante das composições, um fornecedor, uma fonte e/ ou lote de composições.
[23] Considerando-se o acima, está evidente que as composições de acordo com as formas de realização da presente invenção podem fornecer uma faixa progressiva de componentes e métodos de identificação diferentes. Em um nível de topo, a composição pode ter uma cor específica, por exemplo uma cor azul sob luz fluorescente. Isto pode servir para identificar uma companhia que usa esta cor. Entretanto, conforme mais companhias entram neste campo, é provável que certas companhias acabarão usando a mesma cor fluorescente para as suas composições identificadoras. Um segundo nível de identificação pode ser fornecido por intermédio dos micropontos que identificam a fonte das composições mais precisamente. Entretanto, se uma amostra da composição não contêm um microponto então algum outro meio é requerido para identificar a fonte da composição. Um terceiro nível de
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 18/31 / 17 identificação pode ser assim fornecido por meio de uma assinatura ótica usando uma pluralidade de moléculas ou nanopartículas opticamente ativas dispersada na composição para identificar a fonte da composição. Finalmente, um quarto nível de identificação é fornecido por via das sequências identificadoras de nucleotídeo para precisa e unicamente identificar todas as composições individuais. Uma tal faixa progressiva de métodos de identificação fornece uma faixa de níveis diferentes de identificação de modo a garantir que a identificação será bem sucedida. Além disso, a identificação de nível de topo é fabricada rápido e barato para realizar sem equipamento excessivamente complexo ou caro possibilitando que indivíduos ou forças policiais identifiquem uma fonte central para uma composição. A análise de nucleotídeo mais complexa e demorada pode ser assim centralizada.
[24] As composições no geral serão fabricadas pela formação dos oligômeros de nucleotídeo e depois dispersando-os em um meio adequado para aplicação, por exemplo como um adesivo, graxa, gel ou pulverização. As composições serão depois carregadas em recipientes adequadamente codificados e um registro feito para ligar cada recipiente codificado ao seu código de nucleotídeo. Quando vendido a um cliente, detalhes da personalização são tiradas junto com o código do recipiente adquirido. Assim, os detalhes do comprador podem ser vinculados ao código de nucleotídeo em uma base de dados como descrita na seção fundamentos.
[25] De acordo com as formas de realização da presente invenção, os oligômeros de nucleotídeo podem compreender DNA ou RNA. O DNA é preferido visto que o mesmo é mais estável. Os oligômeros de nucleotídeo podem ser de filamento único ou de filamento duplo. Os oligômeros de nucleotídeo de filamento único são preferidos de acordo com algumas aplicações porque eles são mais baratos para fabricar. Entretanto, embora os oligômeros de filamento duplo sejam mais caros para fabricar eles têm a característica vantajosa de que eles são mais estáveis do que os oligômeros de
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 19/31 / 17 filamento único. Consequentemente, em algumas aplicações oligômeros de filamento duplo podem ser preferidos.
[26] De acordo com um outro aspecto da presente invenção uma pluralidade de recipientes da composição é fornecida. Cada recipiente é identificável por uma única combinação da primeira e segunda sequências identificadoras. Os recipientes podem ser agrupados em lotes, em que o primeiro identificador é para identificar o lote ao qual um recipiente pertence e o segundo identificador é para identificar de modo único cada recipiente dentro do dito lote.
[27] De acordo com um outro aspecto da invenção um kit de marcação de segurança é fornecido, o kit compreendendo:
(1a) uma composição de marcação de segurança que compreende uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético primários idênticos; e uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético secundários idênticos que são diferentes dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador de bases, uma primeira sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma segunda sequência de ligação de iniciador de bases, a primeira sequência identificadora sendo disposta entre a primeira e segunda sequências de ligação de iniciadores, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários compreende uma terceira sequência de ligação de iniciador de bases, uma segunda sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma quarta sequência de ligação de iniciador de bases, a segunda sequência identificadora sendo disposta entre a terceira e quarta sequências de ligação de iniciadores, em que a primeira sequência identificadora é diferente da
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 20/31 / 17 segunda sequência identificadora; e/ou (1b) um recipiente pressurizado que abriga a composição de (a), e que compreende ainda pelo menos um de um solvente e um propelente, o recipiente pressurizado compreendendo um bocal para pulverizar a dita composição; e (2) instruções para registrar a posse do kit em uma base de dados.
[28] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, a composição é usada em marcação de segurança de propriedade e/ou para marcar um ladrão ou agressor.
[29] De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de determinar um dono de uma composição como aqui descrito, o método compreendendo: tirar uma amostra da composição; reagir um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético com iniciadores que se ligam à primeira e segunda e/ou terceira e quarta sequências de ligação de iniciador para aumentar o comprimento de um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético; amplificar um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético usando uma reação da cadeia da polimerase; sequenciar os oligômeros de nucleotídeo sintético amplificados para identificar a primeira e/ou segunda sequências identificadoras; e consultar uma base de dados para comparar a primeira e/ou segunda sequências identificadoras identificadas com a informação a cerca do dono da composição.
[30] Os iniciadores podem compreender sequências iniciadoras que são sequências de iniciador padrão usadas na amplificação e sequenciamento de Sanger. Os iniciadores são mais longos do que as sequências de ligação de iniciador de modo a melhorar a precisão do sequenciamento. Por exemplo, os iniciadores podem ter um comprimento na faixa de 50 a 200 bases, preferivelmente de 50 a 100 bases.
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Descrição Resumida dos Desenhos [31] Para um melhor entendimento da presente invenção e para mostrar como a mesma pode ser executada, as formas de realização da presente invenção serão agora descritas apenas por via de exemplo com referência aos desenhos anexos, em que:
A Figura 1 mostra uma ilustração esquemática do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético de acordo com uma forma de realização da presente invenção;
A Figura 2 mostra uma ilustração esquemática de um método de determinar um dono de uma composição de acordo com uma forma de realização da presente invenção; e
A Figura 3 mostra uma ilustração esquemática de um método usado para encompridar e amplificar um dos oligômeros de nucleotídeo de acordo com uma forma de realização da presente invenção.
Descrição Detalhada das Formas de Realização Preferidas da Invenção [32] As composições da presente invenção compreendem uma mistura de dois oligômeros de nucleotídeo sintético diferentes. Os exemplos são ilustrados na Figura 1. O primeiro oligômero de nucleotídeo sintético 2 compreende uma sequência de ligação de iniciador 4, uma sequência de ligação de iniciador 6, e uma sequência identificadora 8 disposta entre as sequências de ligação de iniciador. O segundo oligômero de nucleotídeo sintético 10 é similar em estrutura ao primeiro oligômero e compreende uma sequência de ligação de iniciador 12, uma sequência de ligação de iniciador 14, e uma sequência identificadora 16 disposta entre as sequências de ligação de iniciador.
[33] As sequências identificadoras são usadas para identificar a composição. As sequências identificadoras dos dois oligômeros são diferentes e juntos fornecem um único código para a composição. As sequências
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 22/31 / 17 identificadoras têm três a sete bases, preferivelmente de 4 a 6 bases. As sequências de ligação de iniciador são idênticas ou complementares às porções de sequências de iniciador padrão usadas para amplificar o oligômero durante a análise.
[34] A Figura 2 mostra um método de analisar uma composição que compreende uma mistura de dois oligômeros de nucleotídeo sintético diferentes 2, 10 como descritos acima em relação à Figura 1.
[35] Uma amostra da composição é tirada e os oligômeros de nucleotídeo são isolados. Os oligômeros de nucleotídeo são depois encompridados usando iniciadores e depois amplificados usando uma reação da cadeia da polimerase. Uma característica chave é que os iniciadores são mais longos do que as sequências de ligação de iniciador dos oligômeros de nucleotídeo 2, 10. Consequentemente, os oligômeros de nucleotídeo são aumentados no comprimento como ilustrado na Etapa A da Figura 2. Os oligômeros prolongados retêm o mesmo comprimento da sequência identificadora 8, 16 mas têm sequências iniciadoras muito mais longas 18, 20, 22, 24 quando comparada com as sequências de ligação de iniciador originais 4, 6, 12, 14. Estes oligômeros prolongados são amplificados em número usando uma reação da cadeia da polimerase como ilustrado na Etapa B e depois sequenciados como ilustrado na Etapa C. Os oligômeros mais longos podem ser sequenciados usando métodos de sequenciamento padrão. Ao contrário, seria difícil sequenciar os oligômeros mais curtos com precisão usando métodos padrão. Finalmente, na Etapa D uma base de dados é usada para comparar as sequências identificadas com a informação a cerca do dono da composição.
[36] A Figure 3 mostra em mais detalhes um método usado para encompridar e amplificar um dos oligômeros de nucleotídeo. Como antes, o oligômero de nucleotídeo sintético 2 compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador 4, uma segunda sequência de ligação de iniciador 6, e
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 23/31 / 17 uma sequência identificadora 8 disposta entre as sequências de ligação de iniciador.
[37] Na Etapa 1, um iniciador de PCR 30 é ligado à segunda sequência de ligação de iniciador 6. O iniciador de PCR 30 tem uma porção de terminal 32 na sua extremidade 3' que é complementar à segunda sequência de ligação de iniciador 6 para ligação a esta. O iniciador de PCR 30 também tem um sítio de ligação de iniciador 34 para a amplificação de sequenciamento Sanger em uma posição outra que não a porção de terminal 32. Neste caso, o sítio de ligação de iniciador 34 está na extremidade 5' do iniciador de PCR 30 e compreende uma sequência que corresponde a um iniciador de sequência reversa.
[38] Na Etapa 2, a sequência de iniciador de PCR 30 é prolongada usando o oligômero de nucleotídeo sintético 2 como um padrão de modo a formar uma sequência prolongada 40 que compreende porções 36 e 38 que são complementares à primeira sequência de ligação de iniciador 4 e à sequência identificadora 8 do oligômero de nucleotídeo sintético original 2.
[39] Na Etapa 3, um segundo iniciador de PCR 42 é ligado à porção 36 da sequência prolongada 40. O segundo iniciador de PCR 42 tem uma porção de terminal 44 na sua extremidade 3' que é complementar à porção 36 da sequência prolongada 40. Visto que a porção 36 é complementar à primeira sequência de ligação de iniciador 6, então a porção de terminal 44 do segundo iniciador 42 é idêntica à primeira sequência de ligação de iniciador original 4.
[40] O segundo iniciador de PCR 42 também tem um sítio de ligação de iniciador 46 para a amplificação de sequenciamento Sanger em uma posição outra que não a porção terminal 44. Neste caso, o sítio de ligação de iniciador 46 está na extremidade 5' do iniciador de PCR 42 e compreende uma sequência que corresponde a um iniciador de sequência avançado.
[41] Na Etapa 4, o segundo iniciador de PCR 42 é prolongado
Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 24/31 / 17 usando a sequência prolongada 40 como um padrão de modo a formar uma sequência prolongada final 48 que compreende a porção 50 que é complementar à porção 38 e assim idêntica à sequência identificadora 8 do oligômero de nucleotídeo sintético original 2. A sequência prolongada final 48 compreende assim uma sequência de um iniciador de sequência avançado 46, uma sequência de um iniciador de sequência reverso 52, e uma sequência 50 idêntica à sequência identificadora 8 do oligômero de nucleotídeo sintético original 2.
[42] Na Etapa 5, a sequência prolongada final 48 é amplificada em número usando a amplificação pela PCR. O produto da amplificação pode ser depois sequenciado usando os sítios de iniciador de sequenciamento avançado e reverso.
[43] Asa mesmas etapas de método podem ser utilizadas para a amplificação e sequenciamento de um segundo oligômero de nucleotídeo na composição usando um terceiro e quarto iniciador de PCR. Neste caso, se o primeiro e segundo iniciadores de PCR abrigam os mesmos sítios de ligação de iniciador de sequenciamento como o terceiro e quarto iniciadores de PCR respectivamente, os oligômeros de nucleotídeo devem ser amplificados e sequenciados separadamente. Alternativamente, se o primeiro e segundo iniciadores de PCR abrigam sítios de ligação de iniciador de sequenciamento diferentes para o terceiro e quarto iniciadores de PCR respectivamente, os oligômeros de nucleotídeo podem ser amplificados em uma reação. Entretanto, a análise de sequenciamento ainda deve ser realizado separadamente.
[44] As composições e métodos da presente invenção permitem que oligômeros de nucleotídeo curtos sejam utilizados para identificar de modo único as composições enquanto possibilitam que equipamento padrão seja utilizado para sequenciar os oligômeros pela extensão do comprimento dos oligômeros durante os estágios iniciais de amplificação.

Claims (18)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composição de marcação de segurança, caracterizada pelo fato de que compreende:
    uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético primários idênticos; e uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético secundários idênticos que são diferentes dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador de bases, uma primeira sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma segunda sequência de ligação de iniciador de bases, a primeira sequência identificadora sendo disposta entre a primeira e a segunda sequências de ligação de iniciador, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários compreende uma terceira sequência de ligação de iniciador de bases, uma segunda sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma quarta sequência de ligação de iniciador de bases, a segunda sequência identificadora sendo disposta entre a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador, em que a primeira sequência identificadora é diferente da segunda sequência identificadora, e em que a informação sobre o dono da composição é fornecida por meio da primeira e da segunda sequências identificadoras usando uma base de dados que conecta a informação sobre o dono da composição à primeira e à segunda sequências identificadoras, em que a composição de marcação de segurança compreende ainda um ou mais de um adesivo, um material fluorescente, uma pluralidade de micropontos, um solvente, um propelente, uma graxa e/ou um gel.
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  2. 2 / 5
    2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a primeira sequência identificadora tem um comprimento na faixa de quatro a seis bases.
  3. 3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a segunda sequência identificadora tem um comprimento na faixa de quatro a seis bases.
  4. 4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador são diferentes da terceira e quarta sequências de ligação de iniciador.
  5. 5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador são idênticas com a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador.
  6. 6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador são diferentes.
  7. 7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador são diferentes.
  8. 8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a primeira, segunda, terceira e quarta sequências de ligação de iniciador cada uma têm um comprimento na faixa de 5 a 40 bases, mais preferivelmente na faixa de 10 a 30 bases, o mais preferivelmente na faixa de 15 a 20 bases.
  9. 9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários consiste da primeira sequência de ligação de iniciador, da primeira sequência identificadora, e da segunda
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    3 / 5 sequência de ligação de iniciador.
  10. 10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários consiste da terceira ligação de iniciador, da segunda sequência identificadora, e da quarta sequência de ligação de iniciador.
  11. 11. Recipiente pressurizado que abriga uma composição como definida na reivindicação 1, a composição compreendendo pelo menos um de um solvente e um propelente, o recipiente pressurizado caracterizado pelo fato de que compreende um bocal para pulverizar a dita composição.
  12. 12. Pluralidade de recipientes, caracterizada pelo fato de que cada recipiente compreende uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, em que cada recipiente é identificável por uma combinação única da primeira e segunda sequências identificadoras.
  13. 13. Pluralidade de recipientes de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que compreende uma pluralidade de lotes de recipientes, em que o primeiro identificador é para identificar o lote ao qual um recipiente pertence e o segundo identificador é para identificar de modo único cada recipiente dentro do dito lote.
  14. 14. Kit de marcação de segurança, o kit caracterizado pelo fato de que compreende:
    (1a) uma composição de marcação de segurança que compreende uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético primários idênticos; e uma pluralidade de oligômeros de nucleotídeo sintético secundários idênticos que são diferentes dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético primários compreende uma primeira sequência de ligação de iniciador de bases, uma primeira sequência identificadora de três a sete bases no
    Petição 870190075012, de 05/08/2019, pág. 28/31
    4 / 5 comprimento, e uma segunda sequência de ligação de iniciador de bases, a primeira sequência identificadora sendo disposta entre a primeira e segunda sequências de ligação de iniciador, em que cada um dos oligômeros de nucleotídeo sintético secundários compreende uma terceira sequência de ligação de iniciador de bases, uma segunda sequência identificadora de três a sete bases no comprimento, e uma quarta sequência de ligação de iniciador de bases, a segunda sequência identificadora sendo disposta entre a terceira e quarta sequências de ligação de iniciador, em que a primeira sequência identificadora é diferente da segunda sequência identificadora, em que a informação sobre o dono da composição é fornecida por meio da primeira e da segunda sequências identificadoras usando uma base de dados que conecta a informação sobre o dono da composição à primeira e à segunda sequências identificadoras; e/ou (1b) um recipiente pressurizado que abriga a composição de (a), e que compreende ainda pelo menos um de um solvente e um propelente, o recipiente pressurizado compreendendo um bocal para pulverizar a dita composição; e (2) instruções para registrar a posse do kit em uma base de dados.
  15. 15. Kit de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a composição de segurança é uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, e/ou o recipiente pressurizado é um recipiente como definido em qualquer uma das reivindicações de 11 a 13.
  16. 16. Uso de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, de recipiente pressurizado como definido na reivindicação 11, ou de um kit como definido na reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de ser na marcação de segurança de propriedade, e/ou
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    5 / 5 de uma pessoa.
  17. 17. Método de determinar um detentor de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, de recipiente pressurizado como definido na reivindicação 11 ou de um kit como definido na reivindicação 14 ou 15, o método caracterizado pelo fato de que compreende:
    tirar uma amostra da composição de segurança;
    reagir um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético com iniciadores que se ligam à primeira e segunda e/ou terceira e quarta sequências de ligação de iniciador para aumentar o comprimento de um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético;
    amplificar um ou ambos do primeiro e segundo oligômeros de nucleotídeo sintético usando uma reação da cadeia da polimerase;
    sequenciar os oligômeros de nucleotídeo sintético amplificados para identificar a primeira e/ou segunda sequência identificadora; e consultar uma base de dados para comparar a primeira e/ou segunda sequências identificadoras identificadas com a informação a cerca do dono da composição.
  18. 18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que os iniciadores têm um comprimento na faixa de 50 a 200 bases, mais preferivelmente na faixa de 50 a 100 bases.
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