ES2599478T3 - Composición de aditivo alimentario - Google Patents

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Abstract

Una composición de aditivo alimentario que comprende un microorganismo de alimentación directa (DFM) en combinación con una fitasa que deriva de Citrobacter spp., en la que la fitasa comprende un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 99,1% de igualdad con aminoácidos 23-433 de SEC ID Nº 1 o 2, y en la que el microorganismo de alimentación directa comprende una bacteria de una o más de las siguientes especies: Bacillus subtilis, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus rhamnosus y sus combinaciones.

Description

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Nombre del producto
Empresa Microorganismo(s) Ingredientes simbióticos
Proflora®
Alpharma Inc. Bacillus subtilis cepa QST 713 β-mos β-manan oligosacáridos y β-glucanos
CSI®
Danisco A/S cepa Bacillus
Sorbiflore®
Danisco Animal Nutrition Lactobacillus rhamnosus y Lactobacillus farciminis
Animavit®
KRKA Bacillus subtilis
En una realización adecuada el DFM puede ser Enviva Pro®. Enviva Pro® está disponible comercialmente de Danisco A/S y es una combinación de Bacillus cepa 2084 nº de acceso NRRI B-50013, Bacillus cepa LSSA01 nº de acceso NRRL B-50104 y Bacillus cepa 15A-P4 ATCC nº de acceso PTA-6507 (como muestra la patente de EEUU 7.754.469).
5 Preferentemente el DFM que se usa según la presente invención es un microorganismo que generalmente se reconoce como seguro y, que preferentemente está aprobado como GRAS.
Una persona experta enseguida apreciará especies y/o cepas específicas de microorganismos de los géneros descritos en la presente memoria que se usan en alimentación y/o industrias agrarias y que generalmente se consideran adecuadas para consumo animal.
10 Preferentemente, el DFM usado según la presente invención es uno que es adecuado para consumo animal.
Ventajosamente, donde el producto es un alimento o una composición de aditivo alimentario, el DFM viable debería permanecer eficaz a lo largo de la fecha “límite de venta” o “de caducidad” del producto durante la que el alimento o la composición de aditivo alimentario se ofrece para venta al consumidor. Los periodos de tiempo deseados y la vida útil variará de alimento a alimento y los expertos en la técnica reconocerán que el tiempo de vida útil variará con el
15 tipo de alimento, el tamaño del alimento, temperaturas de almacenamiento, condiciones de procesado, material de envasado y equipamiento de envasado.
En algunas realizaciones es importante que el DFM sea tolerante al calor, es decir sea termotolerante. Este es el caso particular cuando el alimento se hace pellets. Por tanto en una realización el DFM puede ser un microorganismo termotolerante, tal como una bacteria termotolerante, incluyendo por ejemplo Bacillus spp.
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En algunas realizaciones puede ser preferente que el DFM sea una bacteria que produce esporas, tal como Bacilli,
p. ej., Bacillus spp. Bacilli son capaces de formar endosporas estables cuando las condiciones de crecimiento son desfavorables y son muy resistentes al calor, pH, humedad y desinfectantes.
En una realización el DFM según la presente invención puede ser una cepa inhibidora (o una cepa antipatógena). En una realización se puede usar el siguiente ensayo “ensayo DFM” para determinar la adecuación de un microorganismo para ser un DFM. Para evitar la duda en una realización un DFM seleccionado como una cepa inhibidora (o un DFM antipatógeno) según el “ensayo DFM” mostrado en la presente memoria es un DFM adecuado para usar según la presente invención, es decir en la composición de aditivo alimentario según la presente invención.
Ensayo DFM:
Cada tubo se sembró con un patógeno representativo de un grupo representativo
Se añadió el sobrenadante de un DFM potencial que creció aeróbicamente o anaeróbicamente a los tubos sembrados y se incubaron.
Tras la incubación, se midió para cada patógeno la densidad óptica (DO) de los tubos control y tratado con sobrenadante.
Las colonias de cepas (DFM potencial) que produjeron una DO más baja comparado con el control se clasificaron como una cepa inhibidora (o un DFM antipatógeno).
El ensayo DFM según se usa en la presente memoria se explica en más detalle en la patente de EEUU 2009/0280090.
Preferentemente el patógeno representativo usado en el ensayo es uno (o más) de los siguientes: Clostridium, tal como Clostridium perfringens y/o Clostridium difficile, y/o E. coli y/o Salmonella spp y/o Campylobacter spp. En una realización preferente el ensayo se lleva a cabo con uno o más de Clostridium perfringens y/o Clostridium difficile y/o
E. coli, preferentemente Clostridium perfringens y/o Clostridium difficile, más preferentemente Clostridium perfringens.
En una realización el DFM de la presente invención es preferentemente un antipatógeno.
El término “antipatógeno” como se usa en la presente memoria significa que el DFM tiene un efecto (p. ej., un efecto negativo) de un patógeno.
En una realización para determinar si un DFM es un antipatógeno según la presente invención se puede usar el ensayo DFM mencionado anteriormente. Un DFM se considera que es un antipatógeno o un DFM antipatógeno si se clasifica como una cepa inhibidora en el ensayo DFM mencionado anteriormente, particularmente cuando el patógeno es Clostridium perfringens.
En una realización el DFM antipatógeno puede ser una o más de las siguientes bacterias:
Bacillus subtilis cepa 2084 nº de acceso NRRL B-50013,
Bacillus subtilis cepa LSSAO1 nº de acceso NRRL B-50104,
Bacillus subtilis cepa 15A-P4 ATCC nº de acceso PTA-6507,
Bacillus subtilis cepa 3A-P4 ATCC nº de acceso PTA-6506, y
Bacillus subtilis cepa BS27 ATCC nº de acceso NRRL B-50105. Para evitar la duda estas cepas están disponibles y son referidas en la patente de EEUU 7.754.459 B.
En una realización el DFM usado según la presente invención no es Lactobacillus gasseri BNR 17 cepa con nº de acceso KCTC 10902BP como se muestra en la patente WO2008/016214.
Preferentemente el DFM no es un microorganismo inactivado.
En una realización el DFM como se usa en la presente memoria es una composición que comprende uno o más microorganismos DFM según se describe en la presente memoria. La composición adicionalmente puede comprender las enzimas de la presente invención. La composición puede alimentar a un animal como un microbio de alimentación directa (DFM). Se pueden añadir uno o más vehículo(s) u otros ingredientes al DFM. El DFM se puede presentar en formas físicas variadas, por ejemplo, como una cobertura, como un concentrado soluble en agua para usar como un empapador líquido o para añadir a un sustituto de leche, cápsula de gelatina o geles. En una realización de la forma de cobertura, se añade producto de fermentación liofilizado a un vehículo tal como suero, maltodextrina, sacarosa, dextrosa, piedra caliza (carbonato cálcico), cáscaras de arroz, cultivo de levadura, almidón seco, y/o aluminio silicato de sodio. En una realización del concentrado soluble en agua para un empapador líquido
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o complemento de sustituto de leche, se añade el producto de fermentación liofilizado a un vehículo soluble en agua, tal como suero, maltodextrina, almidón seco, aluminio silicato de sodio, y se añade un líquido para formar el empapador o el complemento a leche o un sustituto de leche. En una realización de la forma de cápsula de gelatina, se añade el producto de fermentación liofilizado a un vehículo, tal como suero, maltodextrina, azúcar, piedra caliza (carbonato cálcico), cáscaras de arroz, cultivo de levadura, almidón seco, y/o aluminio silicato de sodio. En una realización, la bacteria y el vehículo están incluidos en una cápsula de gelatina degradable. En una realización de la forma de geles, el producto de fermentación liofilizado se añade a un vehículo, tal como aceite vegetal, sacarosa, dióxido de silicio, polisorbato 80, propilén glicol, hidroxianisol butilato, ácido cítrico, etoxiquina, y/o colorantes artificiales para formar el gel.
El DFM(s) opcionalmente se puede administrar con una formulación seca de aditivos que incluyen pero no es limitante sustratos de crecimiento, enzimas, azúcares, hidratos de carbono, extractos y micro-ingredientes promotores de crecimiento. Los azúcares pueden incluir los siguientes: lactosa; maltosa; dextrosa; maltodextrina; glucosa; manosa; tagatosa; sorbosa; rafinosa; y galactosa. Los azúcares están de 50-95%, bien individualmente o en combinación. Los extractos pueden incluir levaduras o fermentación de levaduras secas solubles de 5-50%. Los sustratos de crecimiento pueden incluir: tripticasa, de 5-25%; lactato de sodio, de 5-30%; y, Tween 80, de 1-5%. Los hidratos de carbono pueden incluir manitol, sorbitol, adonitol y arabitol. Los hidratos de carbono están de 5-50% individualmente o en combinación. Los micro-ingredientes pueden incluir los siguientes: carbonato de calcio, de 0,55,0%; cloruro de calcio de 0,5-5,0%; fosfato de dipotasio, de 0,5-5,0%; fosfato de calcio, de 0,5-5,0%; proteinato de manganeso, de 0,25-1,00%; y, manganeso, de 0,25-1,0%.
Para preparar DFM(s) descrito en la presente memoria, el cultivo(s) y vehículo(s) (cuando se usa) se puede añadir a una mezcladora de cintas o palas y mezclar durante aproximadamente 15 minutos, aunque el tiempo se puede aumentar o disminuir. Los componentes se combinan de modo que resulta una mezcla uniforme de los cultivos y vehículos. El producto final preferentemente es un polvo seco, fluyente. El DFM(s) o composición que lo comprende después se puede añadir a un alimento animal o una premezcla alimentaria, añadir al agua del animal, o administrar por otras vías conocidas en la técnica (preferentemente simultáneamente con las enzimas de la presente invención). Un alimento para un animal se puede complementar con uno o más DFM(s) descrito en la presente memoria o con una composición descrita en la presente memoria.
Por “una mezcla de al menos dos cepas”, se entiende una mezcla de dos, tres, cuatro, cinco, seis, o incluso siete cepas. En algunas realizaciones de una mezcla de cepas, las proporciones pueden variar de 1% a 99%. Otras realizaciones de una mezcla de cepas son de 25% a 75%. Realizaciones adicionales de una mezcla de cepas son aproximadamente 50% de cada cepa. Cuando una mezcla comprende más de dos cepas, las cepas pueden estar presentes en proporciones significativamente iguales o en proporciones diferentes en la mezcla.
El DFM se puede dosificar apropiadamente.
Las dosis apropiadas de DFM en el alimento pueden estar entre aproximadamente 1x103 UFC/g de alimento a aproximadamente 1x109 UFC/g de alimento, apropiadamente entre aproximadamente 1x104 UFC/g de alimento a aproximadamente 1x108 UFC/g de alimento, apropiadamente entre aproximadamente 7,5x104 UFC/g de alimento a aproximadamente 1x107 UFC/g de alimento.
En una realización el DFM se dosifica en el producto alimentario a más de aproximadamente 1x103 UFC/g de alimento, apropiadamente más de aproximadamente 1x104 UFC/g de alimento, apropiadamente más de aproximadamente 7,5x104 UFC/g de alimento.
Dosis apropiadas de DFM en la composición de aditivo alimentario pueden estar entre aproximadamente 1x105 UFC/g de composición a aproximadamente 1x1013 UFC/g de composición, apropiadamente entre aproximadamente 1x106 UFC/g de composición a aproximadamente 1x1012 UFC/g de composición, apropiadamente entre aproximadamente 3,75x107 UFC/g de composición a aproximadamente 1x1011 UFC/g de composición.
En una realización el DFM se dosifica en la composición de aditivo alimentario a más de aproximadamente 1x105 UFC/g de composición, apropiadamente más de aproximadamente 1x106 UFC/g de composición, apropiadamente más de aproximadamente 3,75x107 UFC/g de composición.
En una realización el DFM se dosifica en la composición de aditivo alimentario a más de aproximadamente 2x105 UFC/g de composición, apropiadamente más de aproximadamente 2x106 UFC/g de composición, apropiadamente más de aproximadamente 3,75x107 UFC/g de composición.
Como se usa en la presente memoria el término “UFC” significa unidades formadoras de colonias y es una medida de las células viables en las que una colonia representa un agregado de células que derivan de una única célula progenitor.
Fitasa
El ácido fítico (royo-inositol hexaquisfostato) es un constituyente importante en cereales, legumbres y cultivos oleaginosos. La forma de sal, fitato, es la mayor forma de almacenamiento de fósforo en esas plantas.
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apropiadamente menos de aproximadamente 15.000 FTU/g de composición, apropiadamente menos de aproximadamente 10.000 FTU/g de composición.
Se entenderá que según se usa en la presente memoria 1 FTU (unidad de fitasa) se define como la cantidad de enzima requerida para liberar 1 µmol de ortofosfato inorgánico a partir de un sustrato en un minuto bajo las condiciones de reacción definidas en la prueba de fitasa ISO 2009 – Una prueba estándar para determinar la actividad fitasa y 1 FTU se puede encontrar en International Standard ISO/DIS 30024: 1-17, 2009.
En una realización apropiada la enzima se clasifica usando la clasificación E.C. anterior, y la clasificación E.C. señala una enzima que tiene esa actividad cuando se prueba en el ensayo mostrado en la presente memoria para determinar 1 FTU.
Ventajas
Sorprendentemente se encontró que fitasas de Citrobacter (en particular fitasas de Citrobacter braakii y/o fitasas de Citrobacter freundii) en combinación con DFMs mejoran la resistencia del sujeto a enteritis necrótica, p. ej. que se puede ver una reducción de los puntos de lesión por ejemplo.
Lo que es particularmente sorprendente es que las fitasas de Citrobacter (p. ej. de Citrobacter braakii y/o de Citrobacter freundii) como se muestra anteriormente en la presente memoria mejoran la resistencia del sujeto a enteritis necrótica más que otras fitasas conocidas (p. ej. de organismos no-Citrobacter) conocidos en la técnica cuando se combinan con un DFM.
En una realización el efecto es incluso más pronunciado con la fitasa de Citrobacter braakii vendida como Ronozyme HiPhosTM según se muestra en la presente memoria comparado con fitasas de otros cepas de Citrobacter braakii (p.ej. fitasa de C. braakii de la cepa YH-15 – cuya secuencia se muestra en la presente memoria como SEC ID nº7)
– que fue completamente inesperado.
De nuevo si desear ser limitante de la teoría una sugerencia de cómo la combinación de fitasas de Citrobacter y DFMs proporcionan sorprendentemente mejores resultados comparado con otras fitasas y DFMs es que fitasas de
C. braakii tienen una actividad más alta a pH más bajos (p. ej. 3,5-4,5) comparado con otras fitasas de no-Citrobacter. Como la primera parte del tracto gastrointestinal (GI) de animales de granja monogástricos, p. ej., porcino o aves, tiene un pH bajo – las fitasas de C. braakii parecen tener más actividad en esta parte del tracto GI de modo que estas fitasas son capaces de liberar fósforo y otros nutrientes, tales como proteína, mucho más deprisa a partir de sustrato de fitasa comparado con algunas otras fitasas de no-Citrobacter. Esto es ventajoso de muchas maneras, incluyendo que es deseable actuar sobre la fitasa tan pronto como sea posible ya que tiene tendencia a formar complejos con otras sustancias tales como minerales y proteínas, particularmente a medida que el pH aumenta. Una vez que la fitasa forma complejos puede ser menos accesible a la rotura por las enzimas. Por tanto es deseable actuar sobre el sustrato de fitasa sobre el inicio del tracto GI cuando el pH es aún bajo. Sin embargo la rotura de la fitasa en la parte inicial del tracto GI significa que ahí puede haber menos fósforo disponible en el yeyuno y la parte más baja del tracto GI que puede tener un impacto negativo sobre la población de comensales de bacteria “buena” tal como el Lactobacilli (que se ha mostrado que tiene efectos beneficiosos tal como modulación inmune y la producción de ácidos orgánicos que bajan el pH intestinal). Este impacto negativo sobre bacteria “buena” residente puede dar como resultado que florezcan patógenos oportunistas – alterando el equilibrio global de bacterias en la tripa.
En relación con la presente invención, sorprendentemente se ha encontrado que el impacto negativo del uso de fitasas de C. braakii se puede solucionar combinando su uso con uno o más DFM. El DFM reestablece el equilibrio de bacterias en la tripa – llevando así a reducir el daño en la tripa debido a bacterias patógenas y a un rendimiento más alto del sujeto animal.
De nuevo si desear ser limitante de la teoría una sugerencia más de cómo la combinación de fitasas de Citrobacter y DFMs proporcionan sorprendentemente mejores resultados comparado con otras fitasas y DFMs es que fitasas de Citrobacter braakii tienen una actividad más alta a pH más bajos (p. ej. 3,5-4,5) comparado con otras fitasas de no-Citrobacter. Como la primera parte del tracto gastrointestinal (GI) tiene un pH bajo – las fitasas de C. braakii parecen tener más actividad en esta parte del tracto GI. Esto puede mejorar la digestión de proteína de un sujeto debido a que el fitato puede formar complejos uniéndose a proteínas. El resultado de este incremento inicial en la absorción de proteínas puede dar como resultado que el animal produzca menos ácido hidroclorhídrico (HCl) – esto puede tener un impacto negativo posterior en el tracto GI ya que puede incrementar el pH en la última parte del tracto GI. El incremento del pH en la última parte del tracto GI no es ventajoso ya que incrementa las oportunidades de que los patógenos sean capaces de establecerse en la tripa. Sorprendentemente los presentes inventores han encontrado que estos efectos negativos de usar fitasas de Citrobacter se pueden solucionar combinándolas con DFMs.
Sorprendentemente la 6-fitasa de la cepa C. braakii ATCC 51113 (con la secuencia de aminoácidos SEC ID nº1) tiene influencia incluso más positiva que incluso otras enzimas 6-fitasa de C. braakii tal como 6-fitasa de cepa C. braakii YH-15 (con la secuencia de aminoácidos SEC ID nº7).
Formulación del DFM con la enzima
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El DFM y las enzimas se pueden formular de cualquier manera apropiada para asegurar que la formulación comprende DFMs viables y una enzima activa.
En una realización el DFM y enzimas se pueden formular como un líquido, un polvo seco o un gránulo.
El polvo seco o gránulos se pueden preparar por medios conocidos por los expertos en la técnica, tal como, revestimiento en lecho fluidizado, revestimiento Wurster o por granulado en tambor (p. ej. granulado de alto cizallamiento), extrusión, revestimiento en bandeja o una mezcladora de microingredientes.
Para algunas realizaciones el DFM y/ la enzima(s) se pueden revestir, por ejemplo encapsular. Apropiadamente el DFM y enzimas se pueden formular con el mismo revestimiento o encapsulado en la misma cápsula. Alternativamente una o ambas enzimas se pueden formular con el mismo revestimiento o encapsulado en la misma cápsula y el DFM se podría formular en un revestimiento separado de una o ambas enzimas. En algunas realizaciones, tal como cuando el DFM es capaz de producir endosporas, el DFM se puede proporcionar sin ningún revestimiento. En tales circunstancias, las endosporas de DFM simplemente se pueden mezclar con una o ambas enzimas. En el último caso, las enzimas se pueden revestir, p. ej. encapsular, por ejemplo una o ambas enzimas se pueden revestir, p. ej. encapsular. Las enzimas se pueden encapsular como mezclas (es decir comprende una o ambas) de las enzimas o se pueden encapsular por separado, p. ej. como enzimas solas. En una realización preferente ambas enzimas se pueden revestir, p. ej. encapsular, juntas.
En una realización el revestimiento protege las enzimas del calor y se puede considerar un termoprotector.
En una realización la composición de aditivo alimentario se formula como un polvo seco o gránulos según se describe en la patente WO2007/044968 (referido como gránulos TPT) o la patente WO1997/016076 o la patente WO1992/012645 (cada una de las cuales se incorpora en la presente memoria como referencia).
En un aspecto un alimento de la presente invención comprende una composición alimentaria peletizada tratada con vapor que comprende un gránulo que comprende un centro y uno o más revestimientos. El centro puede ser un gránulo de sal o similar sobre el que se puede pulverizar una disolución de enzimas de modo que se forma una capa sobre él. El centro comprende uno o más compuestos activos, tal como al menos la fitasa y/o DFM de la presente invención. Al menos uno de los revestimientos puede ser un revestimiento de barrera a humedad. En algunas realizaciones al menos uno de los revestimientos comprende una sal. Para ciertas realizaciones, los gránulos son aproximadamente de 210 a 390 µm de tamaño. En algunas realizaciones, los gránulos pueden ser de hasta 450 µm
o más de tamaño o hasta 500 µm o más de tamaño. Ejemplos de tal realización se puede encontrar en las patentes WO 2006/034710, WO 00/01793, WO99/32595, WO 2007/044968, WO 00/47060, WO 03/059086, WO 03/059087, WO 2006/053564 y EEUU 2003/0054511.
Una sal preferente para el revestimiento de los pelets es una o más de las que se describen en la patente WO2006/034710. Ejemplos de sales preferentes para revestir los pelets incluyen una o más de: Na2SO4, NaCl, Na2CO3, NaNO3, Na2HPO4, Na3PO4, NH4CL, (NH4)2HPO4, NH4H2PO4, (NH4)2SO4, KCI, K2HPO4, KH2PO4, KNO3, K2SO4, KHSO4, MgSO4, ZnSO4 y citrato de sodio o sus mezclas. Para algunos aspectos, ejemplos de más sales preferentes para revestir los pelets incluyen uno o más sulfatos, tal como uno o más Na2SO4, (NH4)2SO4, K2SO4, KHSO4, MgSO4, ZnSO4 o sus mezclas. Para algunos aspectos, ejemplos de más sales preferentes para revestir los pelets incluyen uno o más Na2SO4, (NH4)2SO4 y MgSO4 o sus mezclas. Para algunos aspectos, una sal preferente para revestir los pelets es o incluye al menos Na2SO4.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo que comprende un centro, en el que el centro comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos comprende una barrera a humedad. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo, en el que el gránulo comprende un centro que comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos comprende una sal que es capaz de actuar como una barrera a humedad. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo, en el que el gránulo comprende un centro que comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos comprende uno o más de Na2SO4, NaCl, Na2CO3, NaNO3, Na2HPO4, Na3PO4, NH4CL, (NH4)2HPO4, NH4H2PO4, (NH4)2SO4, KCI, K2HPO4, KH2PO4, KNO3, K2SO4, KHSO4, MgSO4, ZnSO4 y citrato de sodio o sus mezclas. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo, en el que el gránulo comprende un centro que comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos comprende uno o más sulfatos, tal como
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uno o más Na2SO4, (NH4)2SO4, K2SO4, KHSO4, MgSO4, ZnSO4 o sus mezclas. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo, en el que el gránulo comprende un centro que comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos comprende uno o más Na2SO4, (NH4)2SO4 y MgSO4 o sus mezclas. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En ciertos aspectos el alimento de la presente invención comprende un gránulo, en el que el gránulo comprende un centro que comprende al menos una fitasa y/o DFM según la presente invención, y en el que el centro se reviste con uno o más revestimientos, en el que al menos uno de los revestimientos es o incluye al menos Na2SO4. El gránulo puede ser un gránulo tratado con vapor. El gránulo puede ser un gránulo peletizado tratado con vapor.
En una realización la composición de aditivo alimentario se puede formular como un gránulo para composiciones alimentarias que comprenden: un centro; un agente activo; y al menos un revestimiento, el agente activo del gránulo retiene al menos 50% de actividad, al menos 60% de actividad, al menos 70% de actividad, al menos 80% de actividad después de las condiciones seleccionadas de una o más de a) un proceso de peletizar alimento, b) un proceso de pretratamiento del alimento con vapor caliente, c) almacenamiento, d) almacenamiento como un ingrediente en una mezcla sin peletizar, y e) almacenamiento como un ingrediente en una mezcla base de alimento
o un premezcla de alimento que comprende al menos un compuesto seleccionado de trazas de minerales, ácidos orgánicos, azúcares reducidos, vitaminas, cloruro de colina, y compuestos que dan como resultado una mezcla base de alimento o un premezcla de alimento un ácido o básico.
En relación al gránulo al menos un revestimiento puede comprender un material hidratante húmedo que constituya al menos 55% p/p del gránulo; y/o al menos un revestimiento puede comprender dos revestimientos. Los dos revestimientos pueden ser un material hidratante húmedo y un revestimiento barrera a humedad. En algunas realizaciones el revestimiento hidratante húmedo puede estar entre 25% y 60% p/p del gránulo y el revestimiento barrera a humedad puede estar entre 2% y 15% p/p del gránulo. El revestimiento hidratante húmedo se puede seleccionar a partir de sales inorgánicas, sacarosa, almidón, y maltodextrina y el revestimiento barrera a humedad se puede seleccionar a partir de polímeros, gomas, suero y almidón.
El gránulo se puede producir usando un proceso de peletizar alimentos y el proceso de pretratamiento del alimento se puede llevar a cabo entre 70ºC y 95ºC durante varios minutos, tal como entre 85ºC y 95ºC.
En una realización la composición de aditivo alimentario se puede formular como un gránulo para alimentación animal que comprende: un centro; un agente activo, el agente activo del gránulo retiene al menos 80% de actividad después de almacenamiento y después del proceso de peletizar con vapor caliente donde el gránulo es un ingrediente; un revestimiento de barrera a humedad; un revestimiento hidratante húmedo que es al menos 25% p/p del gránulo, el gránulo tiene una actividad del agua de menos de 0,5 antes del proceso de peletizar con vapor caliente.
El gránulo puede tener un revestimiento de barrera a humedad seleccionado de polímeros y gomas y el material hidratante húmedo puede ser una sal inorgánica. El revestimiento hidratante húmedo puede estar entre 25% y 45% p/p del gránulo y el revestimiento de barrera húmeda puede estar entre 2% y 10% p/p del gránulo.
El gránulo se puede producir usando un proceso de peletizar con vapor caliente que se puede llevar a cabo entre 85ºC y 95ºC durante varios minutos.
En algunas realizaciones el DFM (p. ej. endosporas de DFM por ejemplo) se pueden diluir usando un diluyente, tal como polvo de almidón, piedra caliza o similar.
En una realización, la composición es un líquido adecuado para consumo preferentemente tal líquido para consumo contiene uno o más de los siguientes: un tampón, sal, sorbitol y/o glicerol.
En otra realización la composición aditiva alimentaria se puede formular aplicando, p. ej. pulverizando, la enzima(s) sobre un sustrato vehículo, tal como trigo molido por ejemplo.
En una realización la composición de aditivo alimentario según la presente invención se puede formular como una premezcla. A modo sólo de ejemplo la premezcla puede comprender uno o más componentes alimentarios, tal como uno o más minerales y/o uno o más vitaminas.
En una realización el DFM y/o enzimas para usar en la presente invención se formulan con al menos un vehículo fisiológicamente aceptable seleccionado a partir de al menos uno de maltodextrina, piedra caliza (carbonato cálcico), ciclodextrina, trigo o un componente de trigo, sacarosa, almidón, Na2SO4, Talco, PVA, sorbitol, benzoato, sorbiato, glicerol, sacarosa, propilén glicol, 1,3-propano diol, glucosa, parabenos, cloruro sódico, citrato, acetato, fosfato, calcio, metabisulfito, formato y sus mezclas.
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Ingrediente
Fase de puesta (%)
Vitaminas y microminerales de aves
0,6
A modo sólo de ejemplo la especificación de dieta para gallinas ponedoras puede ser como se describe en la siguiente tabla:
Especificación de dieta
Proteína cruda (%)
16,10
Energía metabolizable de ave (kcal/kg)
2.700
Lisina (%)
0,85
Metionina (%)
0,42
Metionina + cisteína (%)
0,71
Treonina (%)
0,60
Calcio (%)
3,85
Fósforo disponible (%)
0,42
Sodio (%)
0,16
A modo sólo de ejemplo un producto alimentario para pavos puede comprender uno o más de los ingredientes listados en la siguiente tabla, por ejemplo en los porcentajes que se dan en la tabla siguiente:
Ingredientes
Fase 1 (%) Fase 2 (%) Fase 3 (%) Fase 4 (%)
Trigo
33,6 42,3 52,4 61,6
Maíz DDGS
7,0 7,0 7,0 7,0
Harina de soja 48%CP
44,6 36,6 27,2 19,2
Harina de semilla de colza
4,0 4,0 4,0 4,0
Aceite de soja
4,4 4,2 3,9 3,6
L-lisina HCl
0,5 0,5 0,4 0,4
DL-metionina
0,4 0,4 0,3 0,2
L-treonina
0,2 0,2 0,1 0,1
Sal
0,3 0,3 0,3 0,3
Piedra caliza
1,0 1,1 1,1 1,0
Fosfato dicálcico
3,5 3,0 2,7 2,0
Vitaminas y microminerales de aves
0,4 0,4 0,4 0,4
A modo sólo de ejemplo la especificación de dieta para pavos puede ser como se describe en la siguiente tabla:
Especificación de dieta
Proteína cruda (%)
29,35 26,37 22,93 20,00
Energía metabolizable de ave (kcal/kg)
2.850 2.900 2.950 3.001
Calcio (%)
1,43 1,33 1,22 1,02
Fósforo disponible (%)
0,80 0,71 0,65 0,53
Sodio (%)
0,16 0,17 0,17 0,17
Lisina dig (%)
1,77 1,53 1,27 1,04
Metionina dig (%)
0,79 0,71 0,62 0,48
Metionina + cisteína dig (%)
1,12 1,02 0,90 0,74
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Preferentemente la fitasa listada en estas realizaciones preferentes es la enzima Ronozyme HiPhos™ o tiene un aminoácido que tiene al menos 98,6% de identidad con aminoácidos 23-433 de SEC ID nº 1 o SEC ID Nº 2.
En una combinación preferente de la composición de aditivo alimentario que comprende una combinación de la fitasa que es la enzima Ronozyme HiPhos™ o tiene un aminoácido que tiene al menos 98,6% de identidad con aminoácidos 23-433 de SEC ID nº 1 o SEC ID nº2 con un DFM, preferentemente el DFM se selecciona a partir del grupo que consiste en Envivo Pro®, Calsporin®, Clostat®, Gallipro®, GalliproMax®, Proflora®, CSI®, Sorbiflore® y Animavit®.
En una realización la composición de aditivo alimentario comprende una combinación de la fitasa con la enzima Ronozyme HiPhos™ o tiene un aminoácido que tiene al menos 98,6% de identidad con aminoácidos 23-433 de SEC ID nº 1 o SEC ID nº2 con un DFM en la que DFM se selecciona del grupo que consiste en bacterias de uno o más de las siguientes especies: Bacillus subtilis, Lactobacillus farciminis, Lactobacillus rhamnosus y sus combinaciones.
En una combinación preferente de la composición de aditivo alimentario comprende una combinación de la fitasa derivable, preferentemente deriva de, un Citrobacter seleccionado del grupo que consiste en: Citrobacter braakii, p. ej. Citrobacter braakii ATCC 51113; Citrobacter freundii, p. ej. C. freundii NCIMB 41247; Citrobacter amalonaticus, p. ej. Citrobacter amaloriaticus ATCC 25405 o Citrobacter amalonaticus ATCC 25407; Citrobacter gillenii, p. ej. Citrobacter gillenii DSM 13694; Citrobacter intermedius, Citrobacter koseri, Citrobacter murliniae, Citrobacter rodentium, Citrobacter sedlakii, Citrobacter werkmanii y Citrobacter youngae con un DFM seleccionado del grupo que consiste en Enviva Pro®, Calsporin ®, Clostat®, Gallipro®, GalliproMax®, Gallipro®Tect®, Poultry star®, Protexin®, Proflora®, Ecobiol®, Ecobiol® Plus, Fortiflora®, BioPlus2B®, Lactiferm®, CSI®, Yea-Sac®, Biomin IMB52®, Biomin C5®, Biacton®, Oralin E1707®, Probios-pioneer PDFM®, Sorbiflore®, Animavit®, Bonvital®, Levucell SB 20®, Levucell SC 0 & SC10®, ME Bactocell ActiSaf® (antiguamente BioSaf®), Miya-Gold®, Fecinor, Fecinor Plus®, InteSwine®, BioSprint®, Provita®, PepSoyGen-C®, Toyocerin®, y TOYOCERIN®.
Combinación con otros componentes
El DFM y enzimas para usar en la presente invención se puede usar en combinación con otros componentes. Así, la presente invención también se refiere a combinaciones. El DFM en combinación con una fitasa de Citrobacter (p. ej. una fitasa de Citrobacter braakii o fitasa de Citrobacter freundii) se puede referir en la presente memoria como “la composición de aditivo alimentario de la presente invención”.
La composición de aditivo alimentario comprende una composición de aditivo alimentario de la presente invención (o uno o más de sus constituyentes) y otro componente que es adecuado para consumo animal y es capaz de proporcionar un beneficio médico o fisiológico al consumidor.
En una realización el “otro componente” puede ser uno o más de otras enzimas alimentarias.
Enzimas adicionales adecuadas para usar en la presente invención pueden ser una o más de las enzimas seleccionadas del grupo que consiste en: amilasas, xilanasas y/o proteasas.
En una realización el “otro componente” no es otra enzima u otro DFM.
Los componentes pueden ser prebióticos. Los prebióticos típicamente son hidratos de carbono no digestibles (oligo
o poligosacáridos) o un azúcar alcohol que no se degrada o se absorbe en el tracto digestivo superior. Los prebióticos conocidos usados en productos comerciales y útiles según la presente invención incluyen inulina (fructo oligosacárido, o FOS) y transgalacto oligosacáridos (GOS o TOS). Prebióticos adecuados incluyen palatino oligosacárido, soja oligosacárido, alginato, xantana, pectina, goma garrofín (LBG), inulina, goma guar, galacto oligosacárido (GOS), fructo oligosacárido (FOS), almidón no degradable, lactosacarosa, lactulosa, lactilol, maltitol, maltodextrina, polidextrosa (esto es, Litesse®), lactilol, lactosacarosa, soja oligosacáridos, palatinosa, isomalto oligosacáridos, gluco oligosacáridos y xilo oligosacáridos, fragmentos de pectina, fibras alimentarias, manan oligosacáridos.
Fibras alimentarias pueden incluir polisacáridos no de almidón, tales como arabiloxilanos, celulosa y muchos otros componentes de plantas, tales como dextrinas resistentes, inulina, lignina, ceras, quitinas, pectinas, beta glucanos y oligosacáridos.
En una realización la presente invención se refiere a la combinación de la composición de aditivo alimentario según la presente invención (o uno o más de sus constituyentes) con un prebiótico. En otra realización la presente invención se refiere a una composición de aditivo alimentario que comprende (o esencialmente consiste o consiste en) un DFM en combinación con una fitasa de Citrobacter y un prebiótico.
El prebiótico se puede administrar simultáneamente (p. ej. mezclar juntos o suministrar simultáneamente por la misma o diferente ruta) o secuencialmente (p. ej. la misma o diferente ruta) con la composición de aditivo alimentario (o sus constituyentes) según la presente invención.
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Otros componentes de las combinaciones de la presente invención incluyen polidextrosa, tal como Litesse®, y/o una maltodextrina y/o lactitol. Estos otros componentes opcionalmente se pueden añadir a la composición de aditivo alimentario para asistir en el proceso de secado y ayudar a la supervivencia de DFM.
Otros ejemplos de otros componentes adecuados incluyen uno o más de: espesantes, agentes gelificantes, emulsionantes, ligantes, modificantes de cristal, edulcorantes (que incluyen edulcorantes artificiales), modificadores reológicos, estabilizantes, antioxidantes, tintes, enzimas, transportes, vehículos, excipientes, diluyentes, agentes lubricantes, agentes saborizantes, materia colorante, agentes de suspensión, desintegrantes, ligantes de granulado, etc. Estos otros componentes pueden ser naturales. Estos otros componentes se pueden preparar usando técnicas químicas y/o enzimáticas.
En una realización el DFM y/o enzima se puede encapsular. En una realización la composición de aditivo alimentario y/o DFM y/o enzimas se formula(n) como un polvo seco o granulado según se describe en la patente WO2007/044968 (referidos como gránulos TPT).
En una realización preferente el DFM y/o enzima para usar en la presente invención se pueden usar en combinación con uno o más lípidos.
Por ejemplo, el DFM y/o enzima para usar en la presente invención se puede usar en combinación con uno o más micelas de lípidos. La micela de lípido puede ser una micela simple o un complejo de micelas de lípidos.
La micela de lípidos puede ser un agregado de moléculas orientadas de sustancias anfipáticas, tal como un lípido y/o un aceite.
Como se usa en la presente memoria el término “espesante o agente gelificante” se refiere a un producto que evita la separación decelerando o evitando el movimiento de partículas, o bien gotas de líquidos inmiscibles, aire o sólidos insolubles. El espesamiento se da cuando moléculas individuales hidratadas causan un incremento de la viscosidad, haciendo más lenta la separación. Le gelificación se da cuando las moléculas hidratadas se unen para formar una red tridimensional que atrapa las partículas, que las inmoviliza.
El término “estabilizante” como se usa en la presente memoria se define como un ingrediente o combinación de ingredientes que evita que un producto (p. ej. un producto alimentario) cambie con el tiempo.
El término “emulsionante” como se usa en la presente memoria se refiere a un ingrediente (p. ej. un producto alimentario) que evita la separación de emulsiones. Las emulsiones son dos sustancias inmiscibles, una presente en forma de gotas, contenida en la otra. Las emulsiones pueden consistir en aceite en agua, donde la gota o fase dispersa es aceite y la fase continua es agua; o agua en aceite, donde el agua es la fase dispersa y la fase continua es aceite. Las espumas, que son gas en líquido, y suspensiones, que son sólido el líquido, también se pueden estabilizar por el uso de emulsionantes.
Como se usa en la presente memoria el término “ligante” se refiere a un ingrediente (p. ej. un ingrediente alimentario) que liga el producto junto a través de una reacción física o química. Durante “gelificación” por ejemplo, se absorbe agua, proporcionando un efecto ligante. Sin embargo, los ligantes pueden absorber otros líquidos, tal como aceites, manteniéndolos con el producto. En el contexto de la presente invención los ligantes típicamente se deberían usar es productos sólidos o de baja humedad por ejemplo productos de panadería; pastas, donuts, pan u otros.
“Transportes” o “vehículos” significa materiales adecuados para la administración de DFM y/o enzimas e incluyen cualquier material conocido en la técnica tal como, por ejemplo, cualquier líquido, gel, disolvente, diluyente líquido, solubilizante, o similar, que es no tóxico y que no interactúa con cualquier componente de la composición de una manera nociva.
La presente invención proporciona un método para preparar una composición de aditivo alimentario que comprende mezclar un DFM y una fitasa de Citrobacter con al menos un vehículo fisiológicamente aceptable seleccionado de al menos uno de maltodextrina, piedra caliza (carbonato cálcico), ciclodextrina, trigo o un componente de trigo, sacarosa, almidón, Na2SO4, Talco, PVA, sorbitol, benzoato, sorbiato, glicerol, sacarosa, propilén glicol, 1,3-propano diol, glucosa, parabenos, cloruro sódico, citrato, acetato, fosfato, calcio, metabisulfito, formato y sus mezclas.
Ejemplos de excipientes incluyen uno o más de: celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dibásico de calcio, glicina, almidón, azúcar de leche y polietilén glicol de alto peso molecular.
Ejemplos de desintegrantes incluyen uno o más de; almidón (preferentemente almidón de maíz, patata o tapioca), almidón glicolato de sodio, croscarmelosa sódica y ciertos complejos de silicato.
Ejemplos de ligantes de granulación incluyen uno o más de: polivinil pirrolidona, hidroxi propil metil celulosa (HPMC), hidroxi propil celulosa (HPC), sacarosa, maltosa, gelatina y acacia.
Ejemplos de agente lubricantes incluyen uno o más de: estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato gliceril y talco.
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Tabla 1. Diseño experimental del ejemplo 1
Tratamiento
Desafiado a Clostridium perfringens Fitasa DFM
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No Ninguna Ninguno
2
Si Ninguna Ninguno
3
Si Ninguna Bacillus DFM1
4
Si Ninguna Lactobacillus DFM2
5
Si Ronozyme P®3 500 FTU/kg Ninguno
6
Si Citrobacter fitasa A4 500 FTU/kg Ninguno
7
Si Citrobacter fitasa B5 500 FTU/kg Ninguno
8
Si Ronozyme P® 500 FTU/kg Bacillus DFM
9
Si Citrobacter fitasa A 500 FTU/kg Bacillus DFM
10
Si Citrobacter fitasa B 500 FTU/kg Bacillus DFM
11
Si Ronozyme P® 500 FTU/kg Lactobacillus DFM
12
Si Citrobacter fitasa A 500 FTU/kg Lactobacillus DFM
13
Si Citrobacter fitasa B 500 FTU/kg Lactobacillus DFM
1 "Bacillus DFM" -es Enviva Pro ® que es una combinación de Bacillus subtilis cepa Bs2084, LSSAO1 y 15AP4, proporcionado por Danisco A/S y se dosifica a 150,000 UFC/g de alimento. 2 "Lactobacillus DFM" -es Sorbiflore® que es una combinación Lactobacillus rhamnosus y Lactobacillus farciminis, proporcionado por Danisco Animal Nutrition y se dosifica a 350,000 UFC/g de alimento. 3 "Ronozyme P®" es una 6-fitasa de Peniphora lycii expresada en Aspergillus oryzae – cuya secuencia de aminoácidos se da en la presente memoria como SEC ID nº 8. (Esto es una 6-fitasa "no-Citrobacter") 4 Citrobacter A fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa ATCC 51113. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 1. 5 Citrobacter B fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa YH-15. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 7.
Se toman los pesos de las aves por corral al inicio del estudio, día 23, día 35, y al final (día 42). El corral es la unidad de medida. Las raciones de los broiler se dan como alimento de masa. Las raciones cumplen o exceden los estándares NRC (tabla 2). La mezcladora se descarga para evitar contaminación cruzada de las raciones. Todos los alimentos de los tratamientos se mezclan usando mezcladora Davis S-20. Las muestras se recogen de cada ración de tratamiento desde el comienzo, mitad, y fin de cada lote y se combinan para confirmar actividad de enzimas y presencia de DFM en el alimento.
Tabla 2. Composición de la ración experimental del ejemplo 1.
Ingrediente (%) Inicio (0 a 21 días) Crecimiento (21 a 35 días) Finalización (35 a 42 días)
Maíz
53,62 57,87 59,82
Maíz DDGS
10,00 10,00 10,00
Harina de soja 49% CP
26,93 23,97 21,36
Ampro 55
5,00 5,00 5,00
Aceite de soja
2,07 0,91 1,74
Lisina
0,24 0,24 0,24
DL-metionina
0,21 0,19 0,18
L-treonina
0,01 0,01 0,01
33
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imagen24
imagen25
Tratamiento
Fitasa DFM Nivel P disponible Nivel Ca
13
Citrobacter fitasa B 500 FTU/kg Lactobacillus DFM -0,17 -0,16
1 "Bacillus DFM" -es Enviva Pro ® que es una combinación de Bacillus subtilis cepa Bs2084, LSSAO1 y 15AP4, proporcionado por Danisco A/S y se dosifica a 150,000 UFC/g de alimento. 2 "Lactobacillus DFM" -es Sorbiflore® que es una combinación Lactobacillus rhamnosus y Lactobacillus farciminis, proporcionado por Danisco Animal Nutrition y se dosifica a 350,000 UFC/g de alimento. 3 "Ronozyme P®" es una 6-fitasa de Peniphora lycii expresada en Aspergillus oryzae – cuya secuencia de aminoácidos se da en la presente memoria como SEC ID nº 8. (Esto es una 6-fitasa "no-Citrobacter") 4 Citrobacter A fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa ATCC 51113. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 1. 5 Citrobacter B fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa YH-15. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 7.
Tabla 2. Composición de ración experimental del ejemplo 2.
Inicial
Crecimiento Terminación
PC
NC PC NC PC NC
Maíz
59,54 62,20 60,10 63,30 61,24 64,50
Harina de soja
34,35 33,90 32,80 32,20 31,41 30,80
Bentonita de sodio
- 0,28 - - - -
Fosfato dicálcico
2,14 1,17 1,87 0,91 1,72 0,76
Piedra caliza fina
1,162 1,32 0,94 1,10 0,91 1,08
Sal fina
0,38 0,38 0,38 0,38 0,38 0,38
L-lisina HCl
0,34 0,34 0,16 0,16 0,015 0,01
DL-metionina
0,17 0,16 0,12 0,11 0,09 0,08
Treonina
0,09 0,07 0,01 - - -
Premezcla vit-min
0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20
Aceite de soja
1,62 - 3,46 1,66 4,03 2,22
Proteína cruda
22,00 22,00 21,00 21,00 20,34 20,3
EMA aves (MJ/KG)
12,6 12,4 13,2 12,9 13,4 13,1
Lisina-disp
1,31 1,30 1,12 1,11 0,99 0,97
Metionina
0,51 0,50 0,45 0,44 0,41 0,40
Treonina
0,94 0,92 0,83 0,82 0,80 0,80
Calcio
1,05 0,89 0,9 0,74 0,85 0,69
Fósforo (disp.)
0,50 0,33 0,45 0,28 0,42 0,25
Fósforo (tot)
0,77 0,60 0,72 0,54 0,68 0,51
Las aves reciben alimento ad-libitum adecuado al tratamiento desde el día 0 al 42. Enzimas y DFM se suministran por Danisco en las mezclas y niveles adecuados para todos los tratamientos experimentales. Los corrales se colocan en las instalaciones para no tener contacto directo para evitar contaminación de raciones. La ración de crecimiento se sustituye por la ración de terminación el día 21, y la ración de crecimiento se sustituye por la ración de terminación el día 35. En cada cambio de ración, los comederos se quitan de los corrales en bloque, se pesan, se vacían, y se rellenan con la ración de tratamiento adecuada. El último día del estudio se pesa el alimento. Los corrales se comprueban diariamente para mortalidad. Cuando un ave se sacrifica o se encuentra muerto, se anota el día y el peso (kg) al eliminarlo.
37
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Tratamiento
Fitasa DFM Nivel P disponible Nivel Ca
13
Citrobacter fitasa B 500 FTU/kg Lactobacillus DFM 0,474 0,73
1 "Bacillus DFM" -es Enviva Pro ® que es una combinación de Bacillus subtilis cepa Bs2084, LSSAO1 y 15AP4, proporcionado por Danisco A/S y se dosifica a 150,000 UFC/g de alimento. 2 "Lactobacillus DFM" -es Sorbiflore® que es una combinación Lactobacillus rhamnosus y Lactobacillus farciminis, proporcionado por Danisco Animal Nutrition y se dosifica a 350,000 UFC/g de alimento. 3 "Ronozyme P®" es una 6-fitasa de Peniphora lycii expresada en Aspergillus oryzae – cuya secuencia de aminoácidos se da en la presente memoria como SEC ID nº 8. (Esto es una 6-fitasa "no-Citrobacter") 4 Citrobacter A fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa ATCC 51113. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 1. 5 Citrobacter B fitasa – es una 6-fitasa de Citrobacter braakii cepa YH-15. La secuencia de aminoácidos de esta enzima se da en la presente memoria como SEC ID nº 7.
Las raciones de los broiler se dan como alimento de masa. Las raciones cumplen o exceden los estándares NRC (tabla 2). La mezcladora se descarga para evitar contaminación cruzada de las raciones. Todos los alimentos de los tratamientos se mezclan usando mezcladora Davis S-20. Las muestras se recogen de cada ración de tratamiento desde el comienzo, mitad, y fin de cada lote y se combinan para confirmar actividad de enzimas y presencia de DFM en el alimento.
Tabla 2. Composición de ración experimental del ejemplo 3.
Ingrediente
Control positivo Control negativo
Maíz
55,67 57,06
Harina de soja, 48%
37,60 37,35
Aceite de soja
2,56 2,13
L-lisina HCl
0,16 0,16
DL-metionina
0,28 0,28
L-treonina
0,07 0,07
Sal
0,38 0,38
Piedra caliza
0,81 0,81
Fosfato dicálcico
1,87 1,17
Premezcla 1 vitaminas/trazas minerales
0,30 0,30
Óxido de titanio
0,30 0,30
Análisis calculado
Materia seca
88,9 88,8
Proteína cruda
23,0 23,0
EM (MJ/kg)
12,7 12,7
EM (kcal/kg)
3.025 3.025
Calcio
0,90 0,73
P disponible
0,45 0,33
Sodio
0,18 0,18
Lisina dig.
1,21 1,21
Metionina dig.
0,60 0,60
Metionina + cistina dig.
0,86 0,86
Treonina dig.
0,76 0,76
39
imagen27

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  1. imagen1
    imagen2
    imagen3
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