ES2585580T3 - Péptidos novedosos antienvejecimiento y composición cosmética y/o farmacéutica que los contiene - Google Patents

Abstract

Compuesto peptídico de fórmula general siguiente (I): R1-X1-X2-Ser-Pro-Leu-Gln-X3-X4-R2 en la cual, X1 representa una cisteína, una metionina, o es igual a cero X2 representa una serina, una treonina, o es igual a cero, X3 representa una alanina, una glicina, una isoleucina, una leucina, una prolina, una valina o es igual a cero, X4 representa una asparagina, una glutamina, o es igual a cero. R1 representa la función amina primaria del aminoácido N-terminal, libre o sustituida por un grupo protector que puede seleccionarse de entre un grupo acetilo, un grupo benzoílo, un grupo tosilo o un grupo benciloxicarbonilo, R2 representa el grupo hidroxilo de la función carboxilo del aminoácido C-terminal, libre o sustituida por un grupo protector que puede seleccionarse de entre una cadena alquilo de C1 a C20, o un grupo NH2, NHY o NYY en el que Y representa una cadena alquilo de C1 a C4, estando constituida dicha secuencia de fórmula general (I) por 4 a 8 residuos de aminoácidos.

Description

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Protocolo

[0049] Los estudios ex vivo por inmunomarcado han permitido demostrar la expresión de las proteínas Clock y Per-1 en muestras de piel. Las muestras de piel humana se ponen en cultivo en la interfaz aire/líquido. El péptido 5 SEQ ID n.º 1 diluido a 1 % (a partir de una solución 10-4M) se aplica de forma tópica en dichas muestras durante 48 h, 2 veces cada 24 h.

[0050] Las muestras de piel no tratadas por el péptido SEQ ID n.º 1 sirven de control. Las muestras de piel se fijan con formaldehído 10 % y se incluyen en parafina. Se realizan cortes de 3 µm con micrótomo. El inmunomarcado 10 se efectúa tras un desparafinado y un desenmascaramiento de los sitios antigénicos.

[0051] El inmunomarcado para la proteína Clock se efectúa por medio de un anticuerpo (ABcam) diluido 1/250 y un anticuerpo secundario 1/50 acoplado a un fluorocromo.

15 [0052] El inmunomarcado para la proteína Per-1 se efectúa por medio de un anticuerpo policlonal (Cosmobio) diluido 1/100 y un anticuerpo secundario 1/50 acoplado a un fluorocromo.

[0053] Los portaobjetos se montan entonces en un medio adecuado y se observan con microscopio de epifluorescencia (Nikon Eclipse E600). 20 Resultados:

[0054] Los resultados obtenidos muestran que las pieles tratadas con el péptido SEQ ID n.º 1 expresan una cantidad de proteína Clock muy superior a la de las pieles sin tratar.

25 [0055] Del mismo modo, se muestra que las pieles tratadas con el péptido SEQ ID n.º 1 expresan una cantidad de proteína Per-1 superior a la de las pieles no tratadas.

[0056] La evaluación semicuantitativa del marcado se efectúa por observación microscópica y se resume en la 30 siguiente tabla.

Sin tratar

Tratado con péptido SEQ ID n.°1 diluido a 1 %

Marcado proteína Clock

+/ ++

Marcado proteína PER-1

+ +

Conclusión:

35 [0057] El péptido SEQ ID n.º 1 permite aumentar la cantidad de las proteínas Clock y Per-1 en las biopsias de piel.

Ejemplo 3: Demostración del efecto activador del péptido SEQ ID n.º 1 en la expresión de la proteína Clocky Per-1 en biopsias de piel en el envejecimiento

40 [0058] Se ha realizado un estudio del efecto activador del péptido SEQ ID n.º 1 mediante la evaluación de la expresión de las proteínas Clock y Per-1 en modelos de piel, envejecidos artificialmente en cultivo. El análisis se ha llevado a cabo tras 62 h y 134 h de cultivo.

Protocolo

45 [0059] Los estudios ex vivo por inmunomarcado han permitido demostrar la expresión de las proteínas Clock y Per-1 en muestras de piel envejecidas en cultivo. Las muestras de piel humana se ponen en cultivo en la interfaz aire/líquido durante 62 h y 134 h. El péptido SEQ ID n.º 1 diluido a 1 % (a partir de una solución 10-4M) se aplica de forma tópica en dichas muestras 2 veces al día durante el tiempo del experimento.

50 [0060] Las muestras de piel no tratadas por el péptido SEQ ID n.º 1 sirven de control. Las muestras de piel se fijan con formaldehído 10 % y se incluyen en parafina. Se realizan cortes de 3 µm con micrótomo. El inmunomarcado se efectúa tras un desparafinado y un desenmascaramiento de los sitios antigénicos. El inmunomarcado para la proteína Clock se efectúa por medio de un anticuerpo (ABcam) diluido 1/250 y un anticuerpo secundario 1/50

55 acoplado a un fluorocromo.

[0061] El inmunomarcado para la proteína Per-1 se efectúa por medio de un anticuerpo policlonal (Cosmobio) diluido 1/100 y un anticuerpo secundario 1/50 acoplado a un fluorocromo.

60 [0062] Los portaobjetos se montan entonces en un medio adecuado y se observan con microscopio de epifluorescencia (Nikon Eclipse E600).

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Claims (1)

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