ES2581385T3 - Uso de congéneres de ibogamina para tratar la obesidad - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** en la que n es de 0 a 8; R1 es CH2OH, CH(OH)R5, CH2OR5, CO2R5, C(O)NH2, C(O)NHR5, C(O)NR5R6, C(O)NHNH2, C(O)NHNHR5, C(O)NHNR5R6, C(O)NR NH2, C(O)NR5NHR6, C(O)NR5NR6R7, C(O)NHNH(C(O)R5), C(O)NHNR5(C(O)R6), C(O)NR5NH(C(O)R6), C(O)NR5NR6(C(O)R7), CN, o C(O)R5; R2 es H, alquilo no sustituido o sustituido, YH, YR8, YR8R9, YR8YR9YR10, YC(O)R8, C(O)YR8, C(O)NH2, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NH2, NHR8, NR8R9, NHC(O)R8, o NR8C(O)R9; R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, halógenos, alquilo no sustituido o sustituido, OH, OR10, NH2, NHR10, NR10R11, NHC(O)R10, o NR10C(O)R11; R5, R6, R7, R8, R9, R10, y R11 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, alquilo sustituido, arilo no sustituido y arilo sustituido; R12 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, y alquilo sustituido; e Y es O, o S; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; para su uso en la prevención de la obesidad inducida por grasa o sacarosa en un sujeto.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

DESCRIPCION

Uso de congeneres de ibogamina para tratar la obesidad Financiacion gubernamental

La presente invencion se realizo con la financiacion de la beca DA 016283 del National Institute on Drug Abuse. El gobierno federal tiene determinados derechos sobre la invencion.

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a congeneres de ibogamina para uso en la prevencion de la obesidad inducida por grasa o sacarosa.

Antecedentes de la invencion

La obesidad, una fuente de morbilidad significativa y mortalidad creciente en la poblacion de Estados Unidos, esta entre los problemas de salud publica principales en el pafs. Actualmente, la epidemia de obesidad y trastornos asociados no muestra signo de disminucion y amenaza con revertir las mejoras en las estadfsticas de salud estadounidenses conseguidas por reducciones en la morbilidad cardiovascular. Vease Yach, D., y col., Nat. Med., 12: 62-66 (2006). Es innecesario decir que, como es evidente, los beneficios de la perdida de peso son tanto medicos como cosmeticos, y como la mayona de pacientes obesos son excelentes candidatos de tratamientos farmacologicos. Vease Yach, D., y col., Nat. Med., 12: 62-66 (2006). A pesar de los muchos esfuerzos y de la demanda cntica de agentes seguros y eficaces, existen solo unos pocos agentes actualmente homologados por la FDA y disponibles para el uso clmico en pacientes obesos. Vease Bray, G.A., y col., Pharmacol. Rev., 59: 151-184 (2007).

Existen considerables evidencias de que un aumento en el consumo de azucar y de bebidas con sustancias edulcorantes puede conducir a la obesidad en seres humanos. Vease Bray, G.A., y col., Am. J. Clin. Nutr., 79: 537543 (2004) y Bray, G.A., y col., Am. J. Clin. Nutr., 55: 151S-154S (1992). Por tanto, se desarrollaron algunos modelos animales basados en el consumo de fluidos de sabores agradables para evaluar los diferentes aspectos de un comportamiento de alimentacion excesiva y la obesidad. Vease Speakman, J., y col., Obes. Rev., 8 Supl. 1: 5561 (2007). Por ejemplo, se han aplicado modelos de captacion de azucar intermitentes para estudiar el comportamiento de atracones compulsivos (vease Avena, N.M., y col., Neurosci. Biobehav. Rev., (2007)), aunque se han usado modelos de captacion de azucar continuos para evaluar las dinamicas del peso corporal y su regulacion hormonal (vease Bock, B.C., y col., Physiol Behav., 57: 659-668 (1995)). Adicionalmente, se ha utilizado anteriormente la administracion operativa de sacarosa y otras soluciones dulces para evaluar los aspectos de apetencia y motivacion de los comportamientos alimenticios anomalos. Vease Sclafani, A., Physiol Behav., 87: 734744 (2006) y Sclafani, A., y col., Physiol Behav., 79: 663-670 (2003).

La dopamina mesolfmbica esta cnticamente implicada en la mediacion de recompensas alimenticias (vease Berridge, K.C., Neurosci. Biobehav. Rev., 20: 1-25 (1996)), la saciedad y la expresion del comportamiento motor de la ingesta. Vease Berthoud, H.R., Neurosci. Biobehav. Rev., 26: 393-428 (2002). La ingestion de sacarosa o sacarina mostraron aumentar la liberacion de dopamina en el nucleo accumbens (vease Glick, S.D., y col., Eur. J. Pharmacol., 537: 94-98 (2006); Mark, G.P., y col., Brain Res., 551: 308-310 (1991); y Rada, P., y col., Neuroscience, 134: 737-744 (2005)), mientras que el cese de la captacion cronica de glucosa precipito una disminucion de tipo abstinencia de la liberacion de la dopamina similar a la observada en ratas dependientes de morfina. Vease Colantuoni, C., y col., Obes. Res., 10: 478-488 (2002). Las similitudes entre las consecuencias neuroqmmicas y conductuales de un consumo excesivo de azucar y farmacos adictivos conducen al concepto de "adiccion de azucar". Vease Avena, N.M., y col., Neurosci. Biobehav. Rev., (2007).

18-Metoxicoronaridina (18-MC), un agente antiadictivo potencial y un antagonista selectivo de los receptores a3p4 nicotmicos, se ha mostrado anteriormente que atenua la liberacion de dopamina inducida por morfina sensibilizada en el nucleo accumbens de las ratas con las que se experimento con morfina. Adicionalmente, el pretratamiento sistemico con 18-MC ha mostrado reducir la autoadministracion intravenosa de morfina y otros farmacos (vease Glick, S.D., y col., Brain Res., 719: 29-35 (1996) y Glick, S.D., y col., Neuroreport, 11: 2013-2015 (2000)) y aliviar algunos signos agudos derivados de la abstinencia de opio en ratas. Vease Rho, B., y col., Neuroreport, 9: 12831285 (1998). Dado el significativo papel de la dopamina en el comportamiento alimenticio compulsivo y en el desarrollo de la obesidad, los estudios actuales experimentaron evaluar los efectos de 18-MC sobre una autoadministracion operativa de sacarosa, el consumo de fluidos de sabores agradables, asf como la ganancia de peso en ratas.

La presente invencion se dirige a superar las deficiencias en la tecnica.

El documento US 2003/0199496 describe una composicion farmaceutica que comprende un antagonista del receptor a3p4 nicotmico eficaz para disminuir la sensacion de placer derivada del cerebro debida al aumento de dopamina en el centro de recompensa del placer del cerebro asociado normalmente con la administracion de un analgesico del agonista opioide, un relajante muscular, una medicacion anticonvulsiva, un farmaco ansiolftico, una anfetamina, un

5

10

15

20

25

30

35

40

45

estimulante del sistema nervioso central, un tetrahidrocannanbinol, o este asociado con un comportamiento de autorrefuerzo o placentero de otra manera.

Sumario de la invencion

La presente invencion se refiere a un compuesto que tiene la formula:

imagen1

en el que n es de 0 a 8; R1 es CH2OH, CH(OH)R5, CH2OR5, CO2R5, C(O)NH2, C(O)NHR5, C(O)NR5R6. C(O)NHNHR5, C(O)NHNR5R6, C(O)NR5NH2, C(O)NR5NHR6, C(O)NR5NR6R7,

C(O)NHNR5(C(O)R6), C(O)NR5NH(C(O)R)6, C(O)NR5NR6(C(O)R7), CN, o C(O)R5; R2 es H sustituido, YH, YR8 YR8R9, YR8YR9YR10, YC(O)R8, C(O)YR8, C(O)NH2, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NH2, NHR' NHC(O)R8, o NR8C(O)R9; R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste

halogenos, alquilo no sustituido o sustituido, OH, OR , NH2, NHR

R7, R

NR10R11

C(O)NHNH2, C(O)NHNH(C(O)R5), alquilo no sustituido o

" NR8R9, en

grupo que consiste en H, NHC(O)Rr°, o NR10C(O)R11; R5, R6

R9, R10, y R11 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en alquilo no sustituido, alquilo sustituido, arilo no sustituido y arilo sustituido; R12 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, y alquilo sustituido; e Y es O, o S; y las sales farmaceuticamente aceptable de los mismos, para uso en la prevencion de la obesidad inducida por grasa o sacarosa en un sujeto.

Existen solo unos pocos tratamientos farmacologicos disponibles para la obesidad, y todos tienen eficacia limitada. Aunque los estimulantes similares a anfetaminas (por ejemplo, metanfetamina, fentermina, dietilpropion), todas las catecolaminas liberadoras, son eficaces supresores del apetito, son numerosos los efectos secundarios (incluyendo la adiccion), y se produce tolerancia a la anorexia en algunas semanas; ademas, la maxima perdida de peso es modesta (10-15 lb) (4,5 kg-6,75 kg) y usualmente se pierde pronto despues que se interrumpe el farmaco. La fenilpropanolamina, el unico miembro de este grupo que estaba disponible desde hace tiempo sin receta (homologado por la FDA en 1939), tema una potencia estimulante menor, pero se retiro del mercado en 2000 debido a la toxicidad cardiovascular en mujeres. Aunque estructuralmente relacionado con las anfetaminas, fenfluramina y su enantiomero activo dexfenfluramina son no estimulantes y liberan serotonina; aunque fenfluramina estuvo disponible durante casi 25 anos, ambos farmacos se retiraron del mercado en 1997 debido a la toxicidad cardiaca y pulmonar. Sibutramina, introducida en 1997, inhibe la recaptacion de norepinefrina, serotonina, y, en menor medida, dopamina. Su eficacia no es mejor que los viejos agentes y su uso es limitado debido a su tendencia a inducir o exacerbar la hipertension. De forma mas reciente, rimonabant, un agente que bloquea los receptores CB1 cannabinoides, se ha usado como un supresor del apetito en algunos pafses europeos; sin embargo, debido a que un efecto muy comun es una grave depresion, la FDA ha indicado que rimonabant no se homologana probablemente en este pafs. Orlistat, el unico agente diferente disponible para el tratamiento de la obesidad, bloquea las lipasas gastrointestinales y reduce por tanto la absorcion de los acidos grasos; sin embargo, su eficacia a largo plazo es limitada, siendo similar a la de los supresores del apetito. Claramente, se necesitan nuevos y mejores agentes antiobesidad, y 18-MC puede ser el primero de una nueva generacion de dichos agentes.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 es una grafica que muestra el efecto de 18-metoxicoronaridina (18-MC) una autoadministracion operativa de sacarosa y agua como porcentaje del valor inicial. n=6/grupo. *, * p< 0,005 frente solucion salina, Ensayo de Newman-Keuls.

Las Figuras 2A-C muestra graficos de barra que comparan el valor inicial promedio, tras la inyeccion, y la recuperacion del consumo de sacarosa (Figura 2a), agua (Figura 28), y consumo total (Figura 2C) de diferentes dosis de mg/kg de 18-MC en un experimento con dos botellas de agua/sacarosa. *, p<0,05, frente a valor inicial, de los ensayos de LSD.

Las Figuras 3A-C muestra graficos de barra que comparan el valor inicial promedio, tras la inyeccion, y la recuperacion del consumo de sacarina (Figura 3A), agua (Figura 38), y el consumo total (Figura 3C) de diferentes dosis de mg/kg de 18-MC en un experimento de dos botellas de agua/sacarina. *, p<0,05, frente al valor inicial, de los ensayos de LSD.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Las Figuras 4A-C muestra graficos de barra que comparan el valor inicial promedio, tras la inyeccion, y la recuperacion del consumo de solucion salina (Figura 4A), agua (Figura 48), y el consumo total (Figura 4C) de diferentes dosis de mg/kg de 18-MC en un experimento de dos botellas de agua/solucion salina. *, p<0,05, frente al valor inicial, de los ensayos de LSD.

La Figura 5 muestra un grafico de barras que compara el valor inicial promedio, tras la inyeccion, y la recuperacion del consumo de agua para diferentes dosis de mg/kg de 18-MC en un control de dos botellas de agua/agua. *, p<0,05, frente al valor inicial, de los ensayos de LSD.

La Figura 6 muestra un grafico de pesos promedio de ratas en 22 dfas de tratamiento en un vehnculo acuoso, agua-18-MC, vehnculo de sacarosa, y grupos de sacarosa 18-MC. *, p<0,05, vehnculo de sacarosa frente a sacarosa-18-MC; de los ensayos de lSd.

La Figura 7 muestra un grafico de supresion dependiente de la dosis de la respuesta de la sacarosa en comparacion con agua. Se adiestro a ratas que pesaban aproximadamente 250 g a autoadministrarse sacarosa al 15 % (presion 0,01 ml/bar) o agua (presion 0,01 ml/bar) durante sesiones de ensayo de una hora diaria. 18-MC (40 mg/kg, por via i.p.), administrado 15 minutos antes de la sesion, disminuyo significativamente (p<0,02) respondiendo a la sacarosa no teniendo ademas efecto sobre la respuesta del agua. N= 6/grupo.

La Figura 8 es un grafico que muestra los efectos de la infusion local de 18-MC en la airngdala basolateral sobre la autoadministracion de metanfetamina y la respuesta de la sacarosa. Los valores iniciales de las infusiones de metanfetamina promediaron (±S.E.M.) 20,2±0,9 mientras que los valores iniciales de respuesta para la sacarosa promediaron (±S.E.M.) 27,1±2,1. Cada punto de datos representa el porcentaje promedio (±S.E.M.) del valor inicial de 6-9 ratas. (*= p<0,05-0,01).

La Figura 9 es un grafico que muestra los efectos de 18-MC (10, 20, 40 mg/kg por via i.p.) sobre el consumo de sacarosa. Cada barra representa el consumo promedio en 24 horas de una solucion de sacarosa al 5 % expresada como porcentaje del valor inicial (±S.E.M.). *= p<0,05.

La Figura 10 es un grafico que muestra los efectos de 18-MC (20 mg/kg por via i.p.) sobre la ganancia de peso de las ratas. Las flechas indican el comienzo y el final del tratamiento con 18-MC. *= p<0,05, vehfculo-agua, agua-18-MC, sacarosa-18-MC frente a vehfculo-sacarosa.

La Figura 11 es un grafico que muestra los efectos de la administracion repetida de 18- MC (20 mg/kg por via i.p. durante 14 dfas) en los depositos de grasa del cuerpo (promedio ± SEM). *= p<0,05. En el dfa septimo despues de la ultima inyeccion de 18-MC, se sometio a eutanasia a los animales en camaras de CO2 y se decapitaron. Se llevaron a cabo las necropsias para eliminar las almohadillas de grasa ovaricas, renales e inguinales.

La Figura 12 es un grafico que muestra los efectos de 18-MC (20 mg/kg por via i.p.) sobre la ganancia de peso de las ratas. Cada punto de datos representa el peso diario (g, ± S.E.M.) de las ratas que tienen acceso a una dieta con un alto contenido de grasas (HF) o un bajo contenido de grasas (LF) y agua, y se trataron con 18 MC o vehfculo. La barra negra indica la duracion del tratamiento con 18-MC = <0,05, 18-MC frente a vehfculo.

Descripcion detallada

La presente invencion se refiere a un compuesto que tiene la formula:

imagen2

en el que n es de 0 a 8; R1 es CH2OH, CH(OH)R5, CH2OR5, CO2R5, C(O)NH2, C(O)NHR5, C(O)NR5R6, C(O)NHNH2,

C(O)NHNH(C(O)R5),

C(O)NHNHR5, C(O)NHNR5R6, C(O)NR5NH2, C(O)NR5NHR6, C(O)NR5NR6R7,

C(O)NHNR5(C(O)R6), C(O)NR5NH(C(O)R6), C(O)NR5NR6(C(O)R7), CN, o C(O)R5; R2 es H, alquilo no sustituido o sustituido, YH, YR8, YR8R9, YR8YR9YR10, YC(O)R8, C(O)YR8, C(O)NH2, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NH2, NHR8, NR8R9, NHC(O)R8, o NR8C(O)R9; R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, halogenos alquilo no sustituido o sustituido, OH, OR10, NH2, NHR10, NR10R11, NHC(O)R10, o NR10C(O)R11; R5, R6, R7, R8, R9, R10, y R11 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, alquilo sustituido, arilo no sustituido y arilo sustituido; R12 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, y alquilo sustituido; e Y es O, o S; y las sales farmaceuticamente aceptable de los mismos, para su uso en la prevencion de la obesidad inducida por grasa o sacarosa en un sujeto.

El termino obesidad implica un exceso de tejido adiposo. En este contexto, la obesidad se ve mejor como cualquier grado de adiposidad en exceso que da lugar a un riesgo elevado. La distincion entre individuos normales y obesos

5

10

15

20

25

30

35

40

45

puede ser solo aproximada, pero el riesgo elevado impartido por la obesidad es probablemente continuo con el aumento de la adiposidad. Sin embargo, en el contexto de la presente invencion, los individuos con un mdice de masa corporal (IMC=peso corporal en kilogramos dividido por el cuadrado de la altura en metros) por encima de 25 son para considerarse como obesos. Cuando la captacion de energfa excede el gasto de energfa, las calonas en exceso se almacenan en el tejido adiposo, y si este equilibrio positivo neto se prolonga, da como resultado la obesidad, es decir, existen dos componentes para equilibrar el peso, y una anomalfa sobre cualquiera de ellos (captacion o gasto) puede dar lugar a la obesidad.

Determinadas realizaciones de la presente invencion se refieren a compuestos para el uso como se definen en el presente documento que tienen la formula:

imagen3

En determinadas realizaciones, R1 se selecciona entre el grupo que consiste en un alcohol, un eter, un ester, una amida, una hidrazida, un cianuro, o una cetona. Los alcoholes adecuados incluyen CH2OH CH(OH)R5, los eteres adecuados incluyen aquellos que tienen las formulas CH2OR5, y los esteres adecuados incluyen aquellos que tienen las formulas CO2R5 Las amidas pueden estar no sustituidas, tales como C(O)NH2, monosustituidas, tales como, C(O)NHR5, o disustituidas, tales como C(O)NR5R6. Las hidrazidas adecuadas incluyen las hidrazidas no sustituidas, que tienen la formula C(O)NHNH2, hidrazidas no sustituidas, que tienen las formulas C(O)NHNHR5 o C(O)NR5NH2, hidrazidas disustituidas, que tienen las formulas C(O)NHNR5R6 o C(O)NR5NHR6, o hidrazidas trisustituidas, que tienen las formulas C(O)NR5NR6R7. Las hidrazidas pueden contener tambien una funcionalidad en el nitrogeno terminal, tales como las hidrazidas que tienen las formulas C(O)NHNH(C(O)R5), C(O)NHNR5(C(O)R6), C(O)NR5NH(C(O)R6), o C(O)NR5NR6(C(O)R7). Las cetonas adecuadas son aquellas donde R1 es C(O)R5

R5, R6, y R7 puede ser cualquiera de H, alquilo no sustituido, tales como, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, secbutilo, terc-butilo, n-pentilo, sec-pentilo, y neo-pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, dodecilo, dodecilo, y similares, o sustituidos con cualquiera de numerosos sustituyentes conocidos, tales como sulfo, carboxi, ciano, halogeno (por ejemplo, fluor, cloro), hidroxi, alquenilo (por ejemplo, alilo, 2-carboxi-alilo), alcoxi (por ejemplo, metoxi, etoxi), arilo (por ejemplo, fenilo, p-sulfofenilo), ariloxi (por ejemplo, feniloxi), carboxilato (por ejemplo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo), aciloxi (por ejemplo, acetiloxi), acilo (por ejemplo, acetilo, propionilo), y otros conocidos por los expertos en la materia. Ademas, los alquilos sustituidos incluyen arilalquilos, tales como 2-fenilet- 1-ilo, 2-fenilprop-1 -ilo, bencilo, y arilalquilos que soportan sustituyentes en el anillo aromatico, tal como 2-(5- clorofenil)prop-1-il, N-piperidino, N-pirrolidino, y N-morfolino. Cada uno de R5, R6, y R7 pueden ser iguales o diferentes y la combinacion se selecciona principalmente teniendo en cuenta el efecto de sustitucion sobre la solubilidad en agua y la compatibilidad biologica, aunque puede considerarse otros factores, tales como la disponibilidad de los materiales de partida y la facilidad de smtesis en la seleccion.

Los esteres adecuados incluyen ester de etilo, ester de bencilo, esteres de dialquilaminoalquilo, y, preferentemente, ester de metilo. Las amidas pueden ser, por ejemplo, N-metilamida, N-etilamida, N,N-dimetilamida, N,N-dietilamida, N-metil-N-etilamida, y los peptidos derivados de aminoacidos y sus esteres o amidas. R2 puede ser tambien una hidrazida, tal como N1,N1-dimetilhidrazida, N1,N11-dimetilhidrazida, o preferentemente, hidrazida no sustituida.

El esqueleto de ibogamina puede estar no sustituido en la posicion C20 (tal como en el caso de la desetilcoronairidina), o puede estar sustituida en la posicion C20 con un alquilo o, preferentemente, un alquilo derivatizado. La cadena de alquilo, representada en la formula anterior por (CH2)n, puede tener de cero a ocho carbonos, inclusive, tal como metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, y octilo, y es preferentemente etilo. La cadena de alquilo se derivatiza con R2 en el carbono terminal de la cadena de alquilo (o, en el caso donde n es cero, en el carbono C20). R2 se selecciona entre el grupo que consiste en un hidrogeno, un alquilo sustituido o no sustituido, un hidroxilo, un eter, un tiol, un tioeter, una amina, o un derivado de acido o tioacido. En los casos donde n es cero, R2 es preferentemente H o alquilo sustituido o no sustituido. Los ejemplos ilustrativos de alquilos sustituidos o no sustituidos adecuados incluyen aquellos dados para R5, R6, y R7, anteriormente. Los eteres y tioeteres adecuados que tienen las formulas OR8 y SR8, respectivamente. Las aminas adecuadas incluyen aminas no sustituidas (NH2), aminas monosustituidas (NHR8), o aminas disustituidas (NR8R9). Los acidos o derivados de tioacidos pueden tener las formulas OC(O)R8, SC(O)R8, C(O)NH2, C(O)SR8, C(O)OR8, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NHC(O)R8, o NR8C(O)R9. En cada uno de los anteriores, R8 y R9 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

entre el grupo que consiste en alquilo sustituido o no sustituido, los ejemplos de los cuales son iguales que aquellos dados para R5, R6, y R7, anteriormente. De manera ilustrativa, los eteres y tioeteres adecuados incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi, metoxietoximetil eter (OCH2OCH2CH2OCH3), metiltio, etiltio, dimetilaminoalcoxi, y acetales azucarados, tales como glucosidos. Los derivados de amina adecuados incluyen metilamino, etilamino, propilamino, butilamino, pentilamino, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, dibutilamino, metiletilamino, metilpropilamino, metilbutilamino, etilpropilamino, etilbutilamino, propilbutilamino, pirrolidino, piperidino, y morfolino. Los acidos o derivados de tioacidos pueden ser, por ejemplo, OC(O)CH3, OC(O)CH2CH3, OC(O)(CH2)2CH3, OC(O)(CH2)3CH3, OC(O)(CH2)4CH3, OC(O)(CH2)5CH3, OC(O)(CH2)6CH3, OC(O)(CH2)io, CH3, OC(O)(CH2)i2CH3, SC(O)CH3, SC(O)CH2CH3, SC(O)(CH2)2CH3, SC(O)(CH2)3CH3, SC(O)(CH2)4CH3,

SC(O)(CH2)6CH3, SC(O)(CH2)ioCH3, SC(O)(CH2)i2CH3, SC(O)(CH2)2oCH3, NHC(O)CH3,

NHC(O)(CH2)2CH3, NHC(O)(CH2)3CH3, NHC(O)(CH2)ioCH3, NHC(O)(CH2)i2CH3,

NHC(O)(CH2)2oCH3, N(CH3)C(O)CH3, N(CH3)C(O)CH2CH3, N(CH3)C(O)(CH2)2CH3, N(CH3)C(O)(CH2)3CH3,

N(CH3)C(O)(CH2)ioCH3. N(CH3)C(O)(CH2)i2CH3, N(CH3)C(O)(CH2)2oCH3, y los esteres y amidas derivados de aminoacidos y amidas de aminoacidos.

SC(O)(CH2)2oCH3,

SC(O)(CH2)5CH3,

NHC(O)CH2CH3,

R3 y R4 pueden ser iguales o pueden ser diferentes. Cada uno se pueden seleccionar entre hidrogeno, haluro (tal

como fluoruro, cloruro, bromuro, y yoduro), alquilo, hidroxi, eter, o amina. El alquilo puede estar sustituido o no

sustituido y se ilustra por los alquilos sustituidos o no sustituidos utilizados para ilustrar R5, R6, y R7. Los eteres

adecuados tienen las formulas OR1° y las aminas adecuadas incluyen aminas no sustituidas (NH2), aminas io J io 11 io 11

monosustituidas (NHR ), o aminas disustituidas (NR R ). En cada uno de los anteriores, R y R pueden ser

iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en alquilo sustituido o no sustituido, los ejemplos

de los cuales son iguales que aquellos dados para R5, R6, y R7, anteriormente. De manera ilustrativa, R3, R4, o R3 y

R4 pueden metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, pentoxi, metoxietoximetil eter (OCH2OCH2CH2OCH3), metilamino, etilamino,

propilamino, butilamino, pentilamino, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, dibutilamino, metiletilamino,

metilpropilamino, metilbutilamino, etilpropilamino, etilbutilamino, propilbutilamino, y arilalquilo, tal como bencilo.

Ademas, los sustituyentes R3 y R4 pueden unirse mediante un alquileno, tal como metileno o etileno, para formar un

anillo de cinco o seis miembros, tal como cuando R3 y R4, juntos, son -OCH2O-, -OCH2CH2O-, -NHCH2O-, -

NHCH2CH2O-, -NHCH2NH-, y -NHCH2CH2NH-.

R12 puede ser un hidrogeno, un alquilo sustituido, tal como un arilalquilo, o un alquilo no sustituido. Los alquilos no sustituidos y sustituidos adecuados incluyen aquellos utilizados para ejemplificar R5, R6, y R7, anteriormente.

Los ejemplos ilustrativos de compuestos para uso en la presente invencion son los siguientes:

18-hidroxicoronaridina;

18-hidroxivoacangina;

18-hidroxiconofaringina;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogamina;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogama;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogalina;

16-hidroximetil-18-hidroxiibogamina;

16-hidroximetil-18-hidroxiibogama;

16-hidroximetil-18-hidroxiibogalina;

18-metoxicoronaridina;

18-metoxivoacangina;

18-metoxiconofaringina;

16-etoxicarbonil-18-metoxiibogamina;

16-etoxicarbonil-18-metoxiibogama;

16-etoxicarbonil-18-metoxiibogalina;

16-hidroximetil-18-metoxiibogamina;

16-hidroximetil-18-metoxiibogama;

16-hidroximetil-18-metoxiibogalina;

18-benciloxicoronaridina;

18-benciloxivoacangina;

18-benciloxiconofaringina-16-etoxicarbonil-18-benciloxiibogamina;

16-etoxicarbonil-18-benciloxiibogama;

16-etoxicarbonil-18-bencloxiibogalina;

18-hidroxicoronaridinalaurato;

18-hidroxivoacanginalaurato;

18-hidroxiconofaringinalaurato;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogaminalaurato;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogamalaurato;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogalinalaurato;

18-hidroxicoronaridinaacetato;

18-hidroxivoacanginaacetato;

18-hidroxiconofaringinaacetato;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogaminaacetato;

16-etoxicarbomM8-hidroxiibogamaacetato;

16-etoxicarbonil-18-hidroxiibogalineacetato;

18-hidroxicoronaridinametoxietoximetileter;

5 18-hidroxivoacanginametoxietoximetileter;

18-hidroxiconofaringinametoxietoximetileter;

16-etoxicarbomM8-hidroxiibogaminametoxietoximetileter;

16-etoxicarbomM8-hidroxiibogamametoxietoximetileter;

16-etoxicarbomM8-hidroxiibogalmametoxietoximetileter;

10 y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Particularmente preferidos son los compuestos que tienen las formulas:

imagen4

15

imagen5

imagen6

y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Tal como se usa en el presente documento, las sales farmaceuticamente aceptables son las sales no toxicas que 5 pueden emplear los expertos en la materia para el uso in vivo. Las sales farmaceuticamente aceptables son las sales formadas con acidos inorganicos, tales como acido clortndrico, acido sulfurico, acido mtrico, y acido fosforico, bicarbonatos metalicos, tales como bicarbonato de sodio, fosfatos monometalicos, tales como fosfato monosodico, y fosfatos dimetalicos, tales como fosfato disodico. Las sales pueden formarse tambien mediante reaccion con acidos organicos, tales como acidos carboxflicos o acidos sulfonicos. Los acidos carboxflicos adecuados incluyen acido 10 acetico, propionico, glicolico, lactico, piruvico, malonico, succmico, fumarico, malico, tartarico, citrico, ciclamico, ascorbico, maleico, hidroximaleico, dihidroximaleico, benzoico, fenilacetico, acido 4-aminobenzoico, antran^lico, cinamico, salic^lico, 4-aminosalidlico, 2-fenoxibenzoico, 2-acetoxibenzoico, y acido mandelico. Los acidos sulfonicos adecuados son, por ejemplo, acido metanosulfonico, etanosulfonico, y acido p-hidroxietano-sulfonico.

Como reconoceran los expertos en la materia, los compuestos de la presente invencion tienen cuatro centros de 15 carbono quirales en el esqueleto de ibogamina. Tal como se usa en el presente documento, un "compuesto" de la presente invencion incluye compuestos que tienen las formulas anteriormente mencionadas sin tener en cuenta la estereoqmmica en estos centros quirales. De acuerdo con ello, "compuesto" incluye compuestos que son racemicos, asf como aquellos que son opticamente puros con respecto al C20. Ademas, los "compuestos" de la presente invencion incluyen aquellos que son racemicos y aquellos que son opticamente puros con respecto a los tres 20 carbonos quirales cabeza de puente.

Los compuestos de la presente invencion se pueden sintetizar usando la metodologfa de la Patente de Estados Unidos n.° 6,211.360 de Glick y col.

Como se describe en Bornmann (vease Bornmann, y col., J. Org. Chem., 57:1752 (1992) haciendo reaccionar un butanal 3-sustituido-3-(1,3-dioxolan-2-ilo) adecuado que tiene la formula:

imagen7

en el que n es de 0 a 8; R2 es H, alquilo no sustituido o sustituido, YH, YR8, YR8R9, YR8YR9YR10, YC(O)R8, C(O)YR8, C(O)NH2, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NH2, NHR8, NR8R9, NHC(O)R8, o NR8C(O)R9; R8 y R9 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en alquilo no sustituido o sustituido; e Y es O S con una indoloazepina 5 que tiene la formula:

imagen8

en la que R1 es CO2R5, C(O)NH2, C(O)NHR5, C(O)NR5R6, C(O)NHNH(C(O)R5), C(O)NHN(C(O)R5)R6, C(O)NHNR5R6, C(O)NR5NH(C(O)R6), C(O)NR5NR6(C(O)R7) o C(O)NR5NR6R7; R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, halogenos, alquilo no sustituido o sustituido, OH, OR10, NH(C(O)R10), 10 NR10(C(O)R11) o NRR; R5, R6, R7, R10, y R son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste

en H, alquilo no sustituido o sustituido; y R12 se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo sustituido con H, y alquilo sustituido, en condiciones eficaces para formar un producto de condensacion que tenga la formula:

imagen9

Normalmente, se disuelven cantidades equimolares de los dos reactivos en un disolvente organico y se mantienen a 15 temperature ambiente durante 0,5 a 72 horas, preferentemente durante 16 horas. Los disolventes adecuados

incluyen disolventes alcoholicos, tales como metanol, etanol, isopropanol, y n-butanol; disolventes que contienen

5

10

15

20

25

esteres, tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; disolventes de eteres tales como tetrahidrofurano, diglima, y dioxano; hidrocarburos clorados, tales como cloruro de metileno, cloroformo, y tetracloruro de carbono; hidrocarburos aromaticos, tales como benceno, tolueno, y xileno; acetonitrilo; piridina; y dimetilformamida. Preferentemente, se selecciona un disolvente en el que ambos reactivos son sustancialmente solubles. Se prefiere particularmente metanol.

Despues que se ha completado la reaccion, el producto de condensacion se trata en un disolvente adecuado con una cantidad equivalente de un arilalquilo adecuado que contiene un grupo saliente bueno, tal como un tosilato de arilalquilo, un mesilato de arilalquilo, o un haluro de arilalquilo, preferentemente bromuro de bencilo, durante 0,5 a 72 horas, preferentemente 16 horas, a 50 C a 120 C., preferentemente a la temperatura de reflujo del disolvente. Los disolventes adecuados incluyen alcanos inferiores, tales como pentano, hexano, o eter de petroleo; disolventes de hidrocarburos aromaticos, tales como benceno, tolueno, y xileno; alcoholes, tales como metanol, etanol, isopropanol, y n-butanol; y disolventes de eter, tales como eter de dietilo, diglima, o tetrahidrofurano.

El tratamiento del producto, con una base de Lewis soluble organica, preferentemente trietilamina, produce un acrilato de enamina transitorio que tiene la formula:

imagen10

Los disolventes tfpicos para el tratamiento de bases incluyen disolventes alcoholicos, tales como metanol, etanol, isopropanol, y n-butanol; disolventes de cetonas, tales como acetona, metil etil cetona, y ciclopentanona; disolventes que contienen esteres, tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; disolventes de eteres, tales como tetrahidrofurano, diglima, y dioxano; hidrocarburos clorados, tales como cloruro de metileno, cloroformo, y tetracloruro de carbono; acetonitrilo; piridina; y dimetilformamida. Preferentemente, se selecciona un disolvente en el que ambos reactivos son sustancialmente solubles. Se prefiere particularmente metanol. El tratamiento con bases se puede llevar a cabo a cualquier temperatura desde la temperatura ambiente al punto de ebullicion del disolvente, pero se efectua ventajosamente con calentamiento ligero, preferentemente de 50 C a 70 C durante de 1 a 10 horas.

El acrilato de enamina transitorio cicla espontaneamente para producir un derivado de versatilina que tiene la formula:

imagen11

Como alternativa, el derivado de versatilina se puede preparar de acuerdo con el procedimiento descrito por Kuehne. Vease Kuehne, y col., J. Org. Chem., 58:4147 (1993). En resumen, el butanal 3-sustituido-3-(1,3-dioxolan-2-ilo) se trata con un derivado de N-arilalquilo que tiene la formula:

imagen12

5 donde R13 es un arilalquilo, tal como bencilo. Los disolventes adecuados para la reaccion incluyen disolventes aromaticos, tales como benceno, tolueno, y xileno; disolventes que contienen esteres, tales como acetato de etilo y acetato de isopropilo; disolventes de eteres, tales como tetrahidrofurano, diglima, y dioxano; hidrocarburos clorados, tales como cloruro de metileno, cloroformo, y tetracloruro de carbono; acetonitrilo; piridina; y dimetilformamida. Se prefiere particularmente tolueno. La reaccion se lleva a cabo normalmente a una temperatura de 100 C a 120 C 10 preferentemente a reflujo.

Sin tomar en consideracion la ruta utilizada en su preparacion, el derivado de versatilina se convierte a continuacion en una cleveamina que tiene la formula: mediante reduccion con, por ejemplo, borohidruro de sodio en un disolvente acido, preferentemente acido acetico. La reduccion se efectua calentando, preferentemente a una temperatura entre 80 C y 110 C, mas preferentemente entre 85 C y 95 C.

15

imagen13

La reduccion, preferentemente la reduccion catalftica utilizando H2 sobre un catalizador de paladio/carbono, seguido por el tratamiento con alcohol acido, preferentemente con acido clorhndrico en metanol, seguido por la adicion de una base, tal como hidroxido de amonio, da como resultado una enamina que tiene la formula:

imagen14

5

10

15

20

25

30

35

40

45

La enamina se calienta a continuacion, preferentemente a entre 80 C y 120 C durante 4 a12 horas en un disolvente adecuado, para producir un compuesto de la presente invencion que tiene la formula 1:

imagen15

Los disolventes adecuados incluyen disolventes aromaticos, tales como benceno, tolueno, y xileno: disolventes de eteres, tales como tetrahidrofurano, diglima, y dioxano; hidrocarburos clorados, tales como cloruro de metileno, cloroformo, y tetracloruro de carbono; acetonitrilo; piridina; y dimetilformamida. Se prefiere particularmente tolueno. Como alternativa, el compuesto de la presente invencion se puede preparar almacenando la enamina a vado o en una atmosfera inerte, tal como argon o nitrogeno, durante al menos 12 horas, preferentemente 4 dfas a 6 dfas.

Como alternativa a la utilizacion de butanal 3-sustituido-(1,3-dioxolan)-2-ilo), donde R2 es hidroxi, se pueden preparar tambien compuestos de la presente invencion que transportan un resto hidroxialquilo C18 (1 (R2=OH)) mediante reduccion del ester de alquilo C18 correspondiente (tal como, 1 (R2=COOR 5)), por ejemplo, con un equivalente semimolar de hidruro de aluminio litio o con hidruro de diisobutilaluminio. Los compuestos que transportan el resto alcoxialquilo (1 (R2=OR5)) pueden igualmente prepararse a partir de los correspondientes esteres (1 (R2=COOR5)), tales como mediante reduccion con LiAlHVAlCh. De una manera similar, puede ser ventajoso preparar compuestos de la presente invencion que tengan aminas basicas (tales como 1 (R2=NH2 o R2=NHR8)) a partir de las amidas correspondientes (tales como 1 (R2=NHC(O)R8 o R2=NR8C(O)R9)) mediante hidrolisis con una solucion acuosa de acido mas bien que comenzando con el butanal 3-sustituido-(1,3-dioxolan)-2-ilo) que contiene la amina. La conversion de amida a amina puede efectuarse tambien mediante procedimientos convencionales, tales como con hidruro de diisobutilaluminio en un eter, preferentemente tetrahidrofurano ("THF") para dar una amina sustituida. De nuevo, este procedimiento alternativo es particularmente ventajoso cuando n es menos de tres.

Los compuestos que tienen sustituyentes de hidroxi o alcoximetilo C16 se preparan mediante reduccion del correspondiente ester C16, tal como con LiAlH4/THF al hidroximetilo C16 o con LiAlHVAlCh al alcoximetilo C16. La reduccion de las amidas C16 con LiAlH4 proporcionaffa las aminas C16. Se pueden preparar hidrazidas C16 que contienen nitrogenos basicos (tales como 1 (R1=C(O)NHNH2, C(O)NHNR5, C(O)NR5NH2, o C(O)NR5NHR6) a partir de los correspondientes carbamatos de hidrazida, normalmente carbamato de f-butilo, mediante hidrolisis con acidos.

Posteriormente a la preparacion, el compuesto de la presente invencion puede opcionalmente purificarse mediante recristalizacion, utilizando la extraccion del disolvente, por ejemplo, un equipo de extraccion Soxhlet, cromatograffa, tal como HPLC o cromatograffa en columna convencional, u otros procedimientos de purificacion convencionales. Ademas, antes de, o posterior a, o como una ayuda en el aislamiento, los compuestos de la presente invencion pueden convertirse en la sal de adicion de acido, tal como poniendo en contacto una solucion del compuesto con un acido adecuado.

La preparacion de los materiales de partida del butanal 3-sustituido-(1,3-dioxolan-2-ilo) se consiguen mediante procedimientos convencionales. Normalmente, estos reactivos se preparan mediante oxidacion de un ester 2- sustituido-4-hidroxibuffrico. El ultimo puede obtenerse mediante alquilacion de un ester alilmalonico con un haluro de alquilo y una base (por ejemplo, alcoxido de sodio) seguido por decarboalcoxilacion con LiCl, la hidroboracion con diborano o con un complejo de borano dimetilsulfoxido, y la oxidacion con peroxido de hidrogeno e hidroxido de sodio. La oxidacion del ester 4-hidroxi-2-sustituido butanoico e consigue con dimetil sulfoxido y cloruro de oxalilo. El aldetffdo resultante esta protegido, preferentemente como su acetal con etilenglicol. La reduccion de la funcion ester, tal como con LiAlH4, se sigue por la oxidacion del alcohol resultante con dimetilsulfoxido y cloruro de oxalilo.

El material de partida de la indoloazepina, con el cual se hace reaccionar el butanal, se prepara normalmente mediante procedimientos que se han desarrollado bien en la tecnica. Vease Kuehne, y col., J. Org. Chem., 43:3705 (1978); Kuehne, y col., J. Org. Chem., 44:1063 (1979); Kuehne, y col., J. Org. Chem., 45:3259 (1980); Kuehne, y col., J. Org. Chem., 50:919 (1985); y Kuehne, y col., J. Org. Chem., 56:513 (1991). En resumen, el material de partida de la indoloazepina se puede preparar mediante condensacion de triptamina con 3-cloropiruvato de metilo. La carbolina resultante se calienta en piridina para proporcionar una indoloazepina insaturada (uretano vimlogo). La ultima se reduce con cianoborohidruro de sodio.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Cuando se usa la ruta alternativa a la preparacion de derivados de versatilina, la N-bencilindoloazepina sustituida adecuadamente se prepara mediante alquilacion de la N-H indoloazepina anterior con bromuro de bencilo y carbonato de sodio. Como alternativa, pueden prepararse indoloazepinas con sustituyentes en el anillo aromatico mediante la smtesis de indoles de Fischer a partir de las fenilhidrazinas y las N-bencil-4-piperidonas, seguido por reaccion con hipoclorito de t-butilo y malonato de dimetil talio, y, a continuacion, con cloruro de litio.

Los compuestos de la presente invencion son utiles en sujetos en tratamiento, tales como mairnferos que incluyen seres humanos, para la obesidad administrando los compuestos a dichos sujetos en una cantidad eficaz. Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar solos o en combinacion con transportadores o diluyentes o farmaceuticamente adecuados. Los ingredientes del diluyente o del transportador deben de seleccionarse de tal manera que no disminuyan los efectos terapeuticos de los compuestos de la presente invencion.

Los compuestos de la presente invencion se pueden administrar por via oral, topica, parenteral, por ejemplo, subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, mediante instilacion intranasal, o mediante aplicacion a las membranas mucosas, tales como, a las de la nariz, garganta, y a los bronquios. Se pueden administrar solos o con transportadores farmaceuticos adecuados, y pueden estar en forma solida o lfquida, tal como, comprimidos, capsulas, polvos, soluciones, suspensiones, o emulsiones. Los ejemplos de administracion parenteral son la administracion intraventricular, intracerebral, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, rectal, y subcutanea y administracion subcutanea.

Las formas farmaceuticas adecuadas para el uso oral incluyen comprimidos, polvos dispersables, granulos, capsulas, suspensiones, jarabes, y elfxires farmaceuticamente aceptables. Los diluyentes y transportadores de comprimidos incluyen, por ejemplo, carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, y talco. Los comprimidos pueden contener tambien agentes de granulacion y disgregantes tales como almidon y acido algmico, agentes de union tales como almidon, gelatina, y acacia, y agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, acido estearico, y talco. Los comprimidos pueden estar sin revestir o pueden estar revestidos mediante tecnicas conocidas para retrasar la disgregacion y la absorcion. Los diluyentes y transportadores inertes que se pueden usar en capsulas incluyen, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio, y caolm. Las suspensiones, jarabes, y elfxires pueden contener excipientes convencionales, por ejemplo, metilcelulosa, tragacanto, alginato sodico; agentes humectantes, tales como lecitina y estearato de polioxietileno; y conservantes, por ejemplo, etil-p-hidroxibenzoato. Las formas farmaceuticas adecuadas para la administracion parenteral incluyen soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, y similares. Pueden fabricarse en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse o dispersarse en medio inyectable esteril inmediatamente antes de su uso. Pueden contener agentes suspensores o dispersantes conocidos en la tecnica.

Se apreciara que la cantidad preferida real del compuesto de la presente invencion utilizado variara de acuerdo con el compuesto concreto, la composicion particular formulada, y el modo de aplicacion. Los expertos en la materia tendran en cuenta muchos factores que modifican la accion; por ejemplo, peso corporal, sexo, dieta, momento de administracion, la via de administracion, tasa de excrecion, estado del hospedador, combinaciones de farmacos, sensibilidades y gravedades de la reaccion y gravedad de la enfermedad. La administracion se puede llevar a cabo de forma continua o periodica comprendida en la dosis maxima tolerada. Los expertos en la tecnica pueden discernir las velocidades de aplicacion optimas para un conjunto de condiciones dado utilizando ensayos de administracion de la dosificacion convencionales a la vista de las anteriores directrices. Preferentemente el compuesto se administra en una dosis de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 80 mg/kg, preferentemente 10 a 40 mg/kg, de masa del sujeto. Preferentemente, esta dosis del compuesto se administra una vez al dfa.

La presente invencion se ilustra ademas mediante los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo 1 * Animales

Ratas Sprague-Dawley hembras que no han recibido tratamiento anteriormente (230-270 g; Taconic, Germantown, NY) se alojaron individualmente y se mantuvieron en un ciclo de 12 h de luz normal (encendido/apagado a las 7 a.m./ 7 p.m.) en la sala del animalario. Para todos los experimentos, el alimento (pienso normal) y el agua se proporcionaron ad libitum. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con la "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (National Academy of Sciences, 1996).

Ejemplo 2 - Farmacos

18-MC (Albany Molecular Research, Albany, NY) se disolvio en NaH2PO4 0,01 M (vehnculo). Sacarosa (5 %, 15 % o 30%, p/vol, MP Biomedicals, Inc., Solon, OH), sacarina de sodio hidratada (0,1 %, p/vol, Sigma, San Luis, MO), y cloruro de sodio (0,6 %, p/vol, Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) se disolvieron en agua.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ejemplo 3 * Procedimiento operativo de autoadministracion de sacarosa

Se sometieron las ratas a privacion de agua durante 23 h de tal manera que la configuracion de la respuesta de la presion de la barra podna llevarse a cabo adiestrando a las ratas a presionar la barra para el agua. A continuacion, en las ratas que no se han visto privadas, el ensayo de autoadministracion de sacarosa por via oral comenzo con una sesion nocturna de 16 h seguida por sesiones diarias de 1 h, 5 dfas (lunes-viernes) una semana. Se dejo acceder a las ratas a dos palancas montadas a 15 cm de la pared delantera de cada camara de ensayo operativa (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Una respuesta sobre cualquiera de las dos palancas produjo una retirada de sacarosa (solucion al 15 %; 0,01 ml) en un programa FR1 TO 20 (relacion fija 1 con 20 s de tiempo de espera). Despues que las velocidades de autoadministracion de sacarosa se estabilizaron (±20 % de variacion de un dfa al siguiente a lo largo de 5 dfas), usualmente despues de 2 semanas de ensayo, se administro 18-MC (10-40 mg/kg) o vehnculo por via i.p. 15 minutos antes de la sesion de ensayo. Cada rata recibio normalmente dos o tres tratamientos diferentes (en orden aleatorizado) separados al menos una semana.

Ejemplo 4 - Consumo de Kquido sabroso

En el primer dfa del experimento, las partes superiores de jaulas regulares se sustituyeron con partes superiores de jaulas hechas a medida que conteman las palancas metalicas de dos botellas de vidrio graduadas de 100 ml (Lab Products Inc., Seaford, dE); las botellas se colocaron aproximadamente con 5,18 cm (2 pulgadas) de separacion. Se dejaron diferentes grupos de ratas 19 h (3,30 p.m.-10,30 a.m.) de acceso ilimitado a agua y sacarosa al 5 %, agua y sacarina al 0,1 %, agua y solucion salina al 0,6 %, o agua y agua. Las concentraciones se seleccionaron de acuerdo con los informes anteriores utilizando paradigmas similares para la bebida de dos botellas. Vease Dess, N.K., Physiol Behav., 69: 247-257 (2000) y Warwick, Z.S. y col., Physiol Behav 60: 711-715 (1996), que se ha incorporado por referencia en su totalidad al presente documento. Los animales se mantuvieron con pienso normal durante estas sesiones. Las botellas con fluidos sabrosos se retiraron al final de las sesiones de 19 h, pero el agua y el pienso siguieron siempre disponibles. Se registro sobre una base diaria el consumo de fluidos sabrosos y el agua durante las sesiones para cuatro sesiones consecutivas: dos sesiones de valores iniciales, una sesion de tratamiento y una sesion despues del tratamiento. Se establecieron los valores iniciales de los niveles de consumos de los fluidos durante las dos sesiones iniciales; inmediatamente antes de la tercera sesion, se inyecto a los animales 18 MC (10, 20, o 40 mg/kg por via i. p.) o vehnculo. Para tener en cuenta posibles preferencias de lados de las ratas, los lados de las botellas se cambiaron diariamente; los animales que expresaban fuertes preferencias por los lados durante las sesiones iniciales se excluyeron de analisis adicional. Cada animal se utilizo durante cuatro semanas, recibiendo tres dosificaciones diferentes de 18-MC y vehnculo en orden aleatorio.

Ejemplo 5 - Paradigma de ganancia de peso: animales que beben sacarosa

Se mantuvieron los animales con pienso y agua de forma regular durante la duracion del experimento (tres semanas). En el primer dfa del experimento, los animales recibieron una botella adicional que contema una solucion de sacarosa al 30 % que siguio estando disponible durante las siguientes tres semanas; los lados de las botellas se cambiaron diariamente. Los pesos corporales de las ratas se registraron diariamente durante las siguientes dos semanas inmediatamente antes de la administracion de 18-MC (20 mg/kg, por via i.p.) o el vehnculo. Tras la ultima inyeccion de 18-MC, los pesos se controlaron durante una semana mas.

Ejemplo 6 - Paradigma de ganancia de peso: animales que beben agua

Se dejo a los animales un acceso ilimitado a pienso y agua de forma regular y se inyectaron diariamente con 18-MC (20 mg/kg, i.p.) o vehnculo durante dos semanas. Se registraron los pesos corporales inmediatamente antes de las inyecciones y se registraron tambien durante una semana mas tras el cese del tratamiento de 18-MC.

Ejemplo 7 - Analisis estadistico

Se analizaron los datos operativos de la administracion mediante ANOVA bilateral con retirada (sacarosa frente a agua) y dosis de 18-MC como los factores principales. Los posteriores ensayos post hoc (Newman-Keuls) compararon los efectos de 18-MC con el valor inicial.

Se compararon los niveles promedio del consumo de fluido (ml) durante las primeras dos sesiones (valor inicial), asf como el consumo durante la sesion posterior a la inyeccion y la sesion de recuperacion, mediante ANOVA bilateral utilizando el tratamiento y la sesion como factores principales; este analisis fue seguido por un ANOVA monolaterales para cada grupo de tratamiento y ensayos post-hoc cuando fue adecuado.

Para el experimento de ganancia de peso, los datos de los cuatro grupos de tratamiento de los dfas 1-21 se analizaron usando ANOVA bilaterales, con el tratamiento y el tiempo como factores principales. Adicionalmente, los datos durante las dos primeras semanas y la ultima semana para el vehnculo acuoso, agua-18-MC y sacarosa 18- MC se analizaron por separado utilizando ANOVA bilateral, con el tratamiento y el tiempo como factores principales. Los ensayos comparativos post-hoc (ensayos de LSD de Fisher) se llevaron a cabo cuando fue adecuado.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ejemplo 8 -18 MC reduce la autoadministracion operativa de sacarosa

El analisis de los datos operativos de autoadministracion revelo una interaccion significativa de retirada x 18-MC (F3,20= 4.30, P<0,02). Los ensayos post-hoc mostraron que solo un efecto fue significativo: una dosis de 40 mg/kg de 18-MC redujo la respuesta operativa de la sacarosa (p<0,005). Vease la Figura 1.

Ejemplo 9 - 18-MC reduce el consumo de sacarosa

Los niveles basales promedio de consumo de solucion de sacarosa al 5 % (ml) en el vehnculo- y los grupos tratados con 18-MC- (10, 20 y 40 mg/kg) fueron como sigue, respectivamente: 76,4 + 6,2; 85,9 + 6,2; 82,3 + 7,3; 82,4 ± 6,5 (vease la Figura 2A). Los niveles basales promedio de consumo de agua (ml) en el mismo grupo fueron como sigue, respectivamente: 6,7 + 1,3; 7,9 + 1,8; 6,2 + 1,1; 8,6 ±1,7 (vease la Figura 28). No se produjeron diferencias significativas entre los niveles iniciales de consumo de glucosa o agua entre los cuatro grupos de tratamiento (para la sacarosa: F3,47 = 0,38, P>0,77; para agua: F3,47 = 0,52, P>0,67). Veanse las Figuras 2A-C.

El valor global del ANOVA del consumo de sacarosa revelo un importante efecto significativo de la sesion (efecto de la sesion: F2,94 =18,35, P<0,00001). Un analisis adicional de la ingesta de sacarosa en cada grupo de tratamiento sugirio que el consumo de sacarosa permaneda constante entre las sesiones del grupo que recibio la inyeccion de vehfculo, pero se habfa reducido significativamente en todos los grupos tratados con 18-Mc (para el vehfculo: F2,30 =0,23, P>0,79; para 10 mg/kg: F 2,18 =8,60, P<0,002; para 20 mg/kg: F2,20 =4,66, P<0,02; para 40 mg/kg: F2,26 =7,91, P<0,002). Tal como se muestra en la Figura 2A, todos los ratones que recibieron una inyeccion de 18-MC disminuyeron sus niveles de ingesta de sacarosa durante la sesion de 19 horas inmediatamente despues del tratamiento, en comparacion con sus niveles iniciales; la ingesta de sacarosa volvio al nivel inicial despues de la sesion de recuperacion (pruebas post-hoc). Vease la Figura 2A.

El analisis del nivel del consumo de agua para los mismos animales indico que los niveles de ingesta de agua permanecieron estables en las sesiones para los animales tratados (efecto de la sesion: F2,94 =0,82, P>0,44; Interaccion tratamiento x sesion: F6,94 =0,86, P>0,53; vease la Figura 28).

Los datos de consumo de fluido total se muestran en la Figura 2C. El ANOVA revelo un efecto principal significativo sobre la sesion y una interaccion tratamiento x sesion (efecto de la sesion: F2,94 =20,73, P<0,00001; Interaccion tratamiento x sesion: F6,94 =2,25, P<0,05). Los analisis posteriores para cada grupo de tratamiento mostraron que el consumo total se redujo durante las sesiones posteriores a la inyeccion en comparacion con los niveles iniciales en todos los grupos que recibieron 18-MC, mientras que el consumo se mantuvo constante en el grupo pretratado con el vehfculo (ANoVa para el grupo del vehfculo: F2,30 =0,42, P>0,66; para 10 mg/kg: F2,18 =7,79, P<0,004; para 20 mg/kg: F2,18 =6,23, P<0,008; para 40 mg/kg: F2,26 =9,03, P<0,001; pruebas post hoc). Vease la Figura 2C.

Ejemplo 10 - 18-MC reduce el consumo de sacarina

Los niveles iniciales de consumo de lfquido (ml) en ratas tratadas con vehfculo y 18-MC (10, 20, y 40 mg/kg) fueron los siguientes para sacarina y agua, respectivamente: 54,2 + 10,9; 60,3 + 10,4; 41,1 + 6,7; 62,6 ± 8,9 y 9,8 ± 2,0; 6,1 + 1,1; 8,9 + 2,2; 7,3 ± 1,8 (veanse las Figuras 3A-B). Los niveles de sacarina o agua no fueron significativamente diferentes entre todos los grupos de tratamiento (para la sacarina: F3,32=1,01, P>0,40; para agua: F3,32 =1,08, P>0,37). Veanse las Figuras 3A-C.

El analisis del consumo de sacarina mediante ANOVA revelo un efecto principal significativo de la sesion y una interaccion tratamiento x sesion significativa (efecto de la sesion: F2,64 =32,61, P<0,00001; interaccion sesion x tratamiento: F6,64 =4,26, P <0,001). Un analisis adicional de cada grupo de tratamiento indico que todas las dosificaciones de 18-MC dieron como resultado una ingesta de sacarina significativamente inferior durante las sesiones posteriores a la inyeccion en comparacion con la ingesta inicial (para 10 mg/kg: F2,16= 21,97, P<0,00003; para 20 mg/kg: F2,14= 7,67, P<0,006; para 40 mg/kg: F2,16= 15,97, P<0,0002; pruebas post hoc; veanse las Figuras 3A). De manera interesante, el grupo tratado con la dosis inferior del farmaco (es decir, 10 mg/kg) tambien tuvo una ingesta reducida durante la sesion de recuperacion. El consumo de sacarina en el grupo tratado con vehfculo permanecio inalterado entre las sesiones (F2,18= 0,35, P<0,71).

El analisis del consumo de agua entre las sesiones para los mismos animales mostro que no se alteraba por el pretratamiento con 18-MC (efecto de la sesion: F2,64= 2,10, P>0,13; Interaccion tratamiento x sesion: F6,64= 2,20, P>0,06; veanse las Figuras 3B).

El ANOVA bilateral del consumo total de fluidos de este estudio revelo un efecto significativo y principal de la sesion y una interaccion tratamiento x sesion significativa (efecto de la sesion: F2,64= 29,89, P<0,00001; Interaccion tratamiento x sesion: F6,64= 2,94, P<0,01). Tal como se muestra en la Figura 3C, la administracion de 18-MC redujo el consumo de sacarina durante las 19 posteriores a la inyeccion para todos los grupos de tratamiento (para 10 mg/kg: F2,16= 9,57, P<0,002; para 20 mg/kg: F2,14= 7,32, P<0,007; para 40 mg/kg: F2,16= 14,44, P<0,0002; pruebas post hoc). Adicionalmente, el efecto de la dosis inferior de 18-MC (es decir, 10 mg/kg) permanecio significativa durante la sesion de recuperacion. El consumo total de fluido del grupo pretratado con vehfculo permanecio constante entre las sesiones (F2,18= 1,89, P>0,20).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ejemplo 11 - 18-MC reduce el consumo de suero salino

Los niveles iniciales de consumo de Ifquido (ml) en ratas tratadas con vehnculo y 18-MC (10, 20 y 40 mg/kg) fueron los siguientes para suero salino y agua, respectivamente: 34,1 + 3,8; 37,2 + 4,0; 43,0 + 6,8; 46,3 ± 7,3 y 12,3 ± 2,0; 8,7 + 1,1; 10,6 + 2,1; 12,0 ± 3,3 (veanse las Figuras 4A-B). Los niveles de suero salino o agua no fueron significativamente diferentes entre todos los grupos de tratamiento (para el suero salino: F3,48=1,02, P>0,39; para agua: F348 =0,63, P>0,60). Veanse las Figuras 4A-C.

El analisis del consumo de suero salino mediante ANOVA revelo un efecto principal significativo de la sesion y una interaccion tratamiento x sesion significativa (efecto de la sesion: F2,96= 9,41, P<0,0002; Interaccion tratamiento x sesion: F6,96= 2,90, P<0,01). El analisis del efecto de la sesion para cada grupo de tratamiento mostro que el consumo de suero salino era reducido (en comparacion con el valor inicial) en los grupos tratados con 20 y 40 mg/kg de 18-MC, pero permanecio inalterado para los grupos pretratados con 10 mg/kg de 18-MC y vehnculo (para 20 mg/kg: F2,20= 8,20, P<0,003; para 40 mg/kg: F2,22= 9,91, P<0,001; para 10 mg/kg: F2,28= 0,92, P>0,41; para el vehnculo: F2,26= 0,24, P>0,79). Tal como se muestra en la Figura 4A, los efectos de 20 y 40 mg/kg de 18-MC fueron significativos durante la 19 h posteriores a la inyeccion; y el efecto de la dosis mayor de 18-MC tambien fue significativo durante la sesion de recuperacion (pruebas post hoc).

El consumo de agua de las mismas ratas no fue diferente entre las sesiones para todos los grupos de tratamiento (efecto de la sesion: F2,96= 0,04, P>0,96; Interaccion tratamiento x sesion: F6,96= 1,57, P>0,16).

El analisis del consumo de fluido total en este estudio revelo un efecto principal significativo de la sesion y una interaccion tratamiento x sesion significativa (efecto de la sesion: F2,96= 20,63, P<0,0001; Interaccion tratamiento x sesion: F6,96= 4,16, P<0,001). Los ANOVA monolaterales adicionales para cada grupo de tratamiento mostro que el consumo de fluido total se redujo significativamente en los grupos pretratados con 20 y 40 mg/kg de 18-MC, mientras que permanecio inalterada en los animales que recibieron inyecciones de 10 mg/kg de 18-MC y vehfculo (para 20 mg/kg: F2,20= 10,63, P<0,001; para 40 mg/kg: F2,22= 20,50, P<0,0001; para 10 mg/kg: F2,28= 2,15, P>0,13; para el vehfculo: F2,26= 0,71, P>0,50). Como es evidente de la Figura 4C, el efecto de 20 mg/kg de 18-MC fue significativo solamente durante la sesion posterior a la inyeccion, mientras que el efecto de la dosis mayor de 18-MC tambien fue significativo durante la sesion de recuperacion (pruebas post hoc).

Ejemplo 12 - 18-MC (40 mg/kg i.p.) reduce la ingesta de agua

Los niveles iniciales de consumo de agua (ml) en ratas tratadas con vehfculo y 18-MC (10, 20 y 40 mg/kg) fueron los siguientes, respectivamente: 26,9 + 1,7; 26,0 + 1,2; 23,8 + 1,4; 25,6 ± 1,6 (vease la Figura 5). Los niveles de ingesta de agua no fueron significativamente diferentes entre todos los grupos de tratamiento (F3,44 =0,78, P>0,51). Vease la Figura 5.

El analisis del consumo de agua en este estudio revelo un efecto significativo de la interaccion sesion x tratamiento (interaccion tratamiento x sesion: F6,88= 3,21, P<0,007). Los ANOVA monolaterales adicionales para cada grupo de tratamiento mostro que el consumo de agua total se redujo significativamente en el grupo tratado con 40 mg/kg de 18-MC, mientras que permanecio inalterado para el resto de grupos de tratamiento (para 40 mg/kg: F2,22= 15,57, P<0,00006; para el vehnculo: F2,22= 2,46, P>0,11; para 10 mg/kg: F2,22= 1,14, P>0,34; para 20 mg/kg: F2,22= 2,34, P>0,12, Figura 5).

Ejemplo 13 -18-MC reduce el aumento de peso corporal inducido por sacarosa

Los pesos promedio de las ratas antes de iniciar el tratamiento (dfa 1) en los grupos agua-vehfculo, agua-18-MC, sacarosa-vehfculo y sacarosa-18-MC fueron los siguientes, respectivamente (g ± SEM): 243,0 + 4,6; 245,3 + 4,6; 255,1 + 3,6; 254,9 + 3,4. Los pesos promedio el dfa 1 no fueron significativamente diferentes entre los grupos de tratamiento (F3,24= 2,49, P>0,09). Vease la Figura 6.

El analisis de los datos para todos los grupos de tratamiento para el periodo de observacion de tres semanas completo revelo un efecto importante del tratamiento y una interaccion tratamiento x tiempo significativa (efecto del tratamiento: F3,24 =4,47, P<0,01; interaccion tratamiento x tiempo: F60,480= 3,85, P<0,00001). Un analisis adicional revelo que los animales que bebfan sacarosa pretratados con 18-MC (40 mg/kg i.p.) tuvieron pesos corporales significativamente inferiores en comparacion con los animales tratados con vehfculo para todos los puntos temporales de observacion salvo el primero (efecto del tratamiento: F-i,-m= 6,33, P<0,025; interaccion tratamiento x tiempo: F20.280= 5,60, P<0,00001; pruebas post hoc). Adicionalmente, durante las dos semanas de tratamiento, los pesos promedio de las ratas del primer grupo no difirieron significativamente de aquellas tratadas con vehfculo o tratadas con 18-MC mantenidas con agua (efecto del tratamiento: F2,17 =0,08, P>0,92). Estos resultados indican que 18-MC reduce el peso corporal de los animales que consumen una solucion con alto contenido en calonas, mientras que no tiene efectos en marnfferos que siguen una dieta normal (efecto del tratamiento: F-i,10= 0,001, P>0,97). Tras finalizar el tratamiento, los pesos del grupo tratado con 18-MC que bebfa sacarosa no fueron significativamente diferentes de aquellos tratados con vehfculo tanto en el grupo tratado con vehfculo o el grupo tratado con 18-MC mantenido con agua, lo que indica que la recuperacion del aumento de peso en el grupo tratado con 18-MC que bebfa sacarosa no se produjo durante una semana mas (efecto del tratamiento: F2,17= 0,93, P>0,41; interaccion tratamiento x tiempo: F-i2,102= 0,56, P>0,87).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

La presente invencion desvela los efectos del tratamiento con 18-MC (18-metoxicoronaridina), un antagonista selectivo de los receptores nicotmicos a3p4, sobre la autoadministracion de sacarosa, consumo de fluidos sabrosos y aumento del peso corporal inducido por sacarosa. Las soluciones sometidas a ensayo en los estudios de consumo con dos botellas fueron sacarosa al 5 %, que es sabrosa y nutritiva, asf como sacarina al 0,1 % y suero salino al 0,6%, que tambien son muy sabrosos para las ratas, pero no son nutritivos. Vease Fregly, M.J., y col., Physiol Behav., 51: 915-918 (1992); Hausmann, M., "The Behavior of Albino Rats in Choosing Foods: II. Differentiation Between Sugar and Saccharin" pp. 419-428 (1933); Stefurak, T.L., y col., Behav. Neurosci., 106: 125-139 (1992); y Warwick, Z.S. y col., Physiol Behav., 60: 711-715 (1996).

De forma coherente con los informes anteriores (vease Fregly, M.J., y col., Physiol Behav., 51: 915-918 (1992); Hausmann, M., "The Behavior of Albino Rats in Choosing Foods: II. Differentiation Between Sugar and Saccharin" pp. 419-428 (1933); Hayward, M.D., y col., Pharmacol. Biochem. Behav., 85: 601-611 (2006); y Stewart, R.B. y col., Alcohol Clin. Exp. Res., 18: 375-381 (1994), en condiciones basales, los tres fluidos sabrosos se prefirieron al agua; sin embargo, la sacarosa se consumio con mas avidez que las otras dos disoluciones. En su conjunto, las dos dosificaciones mas elevadas de 18-MC (es decir, 20 y 40 mg/kg i.p.) redujeron significativamente el consumo de los tres lfquidos sabrosos sin afectar el consumo de agua de dichos animales. La dosis mas baja del farmaco fue eficaz para reducir el consumo de los dos lfquidos dulces (es decir, sacarosa y sacarina) y no tuvo efecto sobre el consumo de agua en los mismos grupos de ratas. A pesar de no producirse cambios en el consumo de agua en los grupos anteriores, se redujo el consumo total de fluido. La falta de compensacion con agua pudo deberse al hecho de que la ingesta de fluidos del anima superaba ampliamente los requisitos fisiologicos mientras se bebfa sacarosa, sacarina, o suero salino. Consistente con esta explicacion, en un experimento de control (vease la Figura 5), los animales no consumieron mas de 25 ml de agua para el mismo periodo de 19 horas; que es mucho menos que su consumo de soluciones de sacarosa, sacarina o suero salino en las mismas condiciones (veanse las Figuras 2-4). Tomados en su conjunto, estos hallazgos sugieren que 18-MC reduce el consumo de fluidos sabrosos independientemente de su valor calorico.

No se produjo aparentemente una respuesta de 18-MC dependiente de la dosis sobre el consumo de sacarina y sacarina para el intervalo de dosis estudiadas, lo que sugiere un techo de 10 mg/kg. Para el consumo de suero salino, el techo aparecio a 20 mg/kg. Los aparentes efectos duraderos de los dos tratamientos (veanse las Figuras 3A-4A) durante la sesion de recuperacion se pueden deber probablemente al efecto de la 18-hidroxicoronaridina, un metabolico activo presente en el plasma en condiciones bajas. Vease Glick, S.D., y col., CNS Drug Rev., 5: 27-42 (1999) y Zhang, W., y col., Drug Metab Dispos., 30: 663-669 (2002).

Como se mencionado anteriormente, el efecto del 18-MC sobre el consumo de agua solamente se evaluo con un paradigma experimental identico. La dosis mas alta de 18-MC redujo el consumo de agua, mientras que las otras dos dosis no tuvieron un efecto significativo (vease la Figura 5). Dicho efecto de 18-MC sobre el consumo de agua no aparecio cuando estaba presente la eleccion de otro fluido sabroso (veanse las Figuras 2-4). Esta discrepancia se puede explicar por el hecho de que los niveles iniciales de consumo de agua ya eran muy bajos en los ultimos grupos. Sin embargo, el experimento de control mostro que habfa una selectividad de al menos cuatro veces de 18- MC para reducir el consumo de sacarosa y de sacarina con respecto al agua. De forma importante, 18 MC no tuvo efecto sobre el consumo de agua en el paradigma de autoadministracion (vease la Figura 1), de forma coherente con informes anteriores del laboratorio de los investigadores. Vease Glick, S.D., y col., Brain Res., 719: 29-35 (1996) y Glick, S.D., y col., Psychopharm., 139: 274-280 (1998).

El mecanismo de los efectos de 18-MC sobre el consumo de fluidos sabrosos puede implicar una alteracion en la percepcion del sabor, o cambios en la recompensa mediada por neurotransmisores centrales. Por ejemplo, 18-MC podna potenciar la expresion de celulas gustducina-IR sobre las celulas de las papilas gustativas (vease Wong, G.T. y col., Nature, 381: 796-800 (1996)), y aumentar de esta forma la sensibilidad de la lengua a los estfmulos dulces reduciendo la ingesta de sacarosa y sacarina. Se habfa demostrado anteriormente que la exposicion a la nicotina afectaba las mismas celulas y aumentaba el apetito por sustancias saladas y dulces en animales y seres humanos. Vease Jias, L.M., y col., Pharmacol. Biochem. Behav., 35: 489-491 (1990); Sato, K., y col., "Sensitivity of Three Loci on the Tongue and Soft Palate to Four Basic Tastes in Smokers and Non-Smokers" pp. 74-82 (2002); y Tomassini, S. y col., Neuroscience, 147: 803-810 (2007). Como alternativa, 18-MC podna bloquear los receptores nicotmicos situados en el nucleo del tracto solitario, una estructura del tallo cerebral responsable del reconocimiento de las calidades basicas del sabor en las ratas. Vease Dhar, S., y col., Am. J. Physiol Regul. Integr. Comp Physiol, 279: R132-R140 (2000) y Roussin, A.T., y col., J. Neurophysiol. (2007). Este efecto podna aumentar la sensibilidad al sabor dulce o salado y reducir el consumo de fluidos sabrosos. 18-MC tambien podna atenuar directamente la liberacion de dopamina inducida por sacarosa en el nucleus accumbens (vease Di Chiara, G., Eur. J. Pharmacol., 375: 13-30 (1999)) y atenuar la recompensa de sacarosa, evitando de esta forma una ingesta excesiva de las sustancias sometidas a ensayo. El efecto de 18-MC sobre la autoadministracion de sacarosa en el presente estudio (vease la Figura 1) es coherente con esta premisa. Dicho efecto se pudo conseguir mediante el antagonismo de los receptores nicotmicos a3p4 situados en el nucleo de la ruta habenulo-interpeduncular, conocida por mediar los efectos del 18-MC autoadministrado de la morfina y la sensibilizacion inducida por morfina de la ruta mesolfmbica. Vease Glick, S.D., y col., Psychopharmacology (Berl), 139: 274-280 (1998); Quick, M.W., y col., Neuropharmacology, 38: 769-783 (1999). 18-Methoxycoronaridine acts in the medial habenula to attenuate opioid reward and mesolimbic dopamine sensitization to morphine. Vease Glick, S.D., y col., Europ. J. Pharmacol., 537:94-98 (2006) y Taraschenko, O.D., y col., Synapse, 61: 547-560 (2007).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Estudios anteriores con acceso intermitente a sacarosa mostraron que las ratas mantenidas con pienso normal tendfan a disminuir su ingesta de pienso para compensar el exceso de ingesta calorica derivada de la solucion de sacarosa; este ajuste puede dar como resultado pesos corporales inalterados en un experimento. Vease Avena, N.M., y col., Neuroscience, 122: 17-20 (2003) y Colantuoni, C., y col., Obes. Res., 10: 478-488 (2002). Por tanto, para caracterizar mejor los efectos de 18-MC sobre el aumento de peso, se puso a disposicion una solucion de sacarosa muy concentrada de forma continua durante las tres semanas de experimento. La inyeccion diaria de 18- MC (20 mg/kg i.p. durante dos semanas) atenuo el aumento de peso inducido por sacarosa en ratas con pienso normal, mientras que no tuvo efectos sobre el peso corporal de ratas mantenidas con agua y pienso. En estos experimentos no se evaluaron la ingesta de alimento o de sacarosa; sin embargo, puesto que la ingesta de alimento es un determinante principal del peso corporal, se puede pensar que 18-MC disminuyo el consumo de pienso junto con la atenuacion de la ingesta de sacarosa. El mecanismo de este efecto aun debe determinarse, y puede implicar la alteracion mediada por el receptor nicotmico de complejos sistemas homeostasicos de gasto de energfa en el cerebro y en la periferia. Vease Jo, Y.H., y col., J. Neurobiol., 53: 618-632 (2002). Por ejemplo, los efectos posteriores del antagonismo de 18-MC en los receptores nicotmicos a3p4 podna imitar esta exposicion prolongada a la nicotina y la desensibilizacion inducida por nicotina de estos receptores. Vease Alkondon, M., y col., J. Pharmacol. Exp. Ther., 313: 740-750 (2005) y Giniatullin, R., y col., Trends Neurosci., 28: 371-378 (2005). Dado que la anorexia inducida por nicotina esta vinculada al bajo peso corporal en fumadores y animales expuestos a la nicotina, 18-MC podna reducir el peso corporal por un mecanismo similar. Vease Blaha, V., y col., Acta Medica. (Hradec, Kralove), 41: 167-173 (1998) y Bray, G.A., Int. J. Obes. Relat Metab Disord., 24 Supl. 2: S8-17 (2000). Los posibles sitios de accion de 18-MC pueden incluir el nucleo del tracto solitario, el area postrema, y los ganglios parasimpaticos del tracto gastrointestinal. Estas zonas expresan niveles elevados de receptores nicotmicos a3p4 y se sabe que estan implicadas en el comportamiento de alimentacion. Vease Berthoud, H.R., Neurosci. Biobehav. Rev., 26: 393- 428(2002); Di Angelantonio, S., y col., Eur. J. Neurosci., 17: 2313-2322 (2003); Jo, Y.H., y col., J. Neurobiol., 53: 618-632 (2002); y Nguyen, H.N., y col., J. Pharmacol. Exp. Ther., 307: 1090-1097 (2003).

En conclusion, la administracion sistemica aguda de 18-MC reduce la autoadministracion de sacarosa y reduce la ingesta ad libitum de sacarosa, sacarina, y suero salino. Adicionalmente, la administracion repetida de 18-MC reduce el aumento de peso inducido por sacarosa en ratas. Aunque los mecanismos precisos de estos efectos no estan claros en este momento, 18-MC se merece mas atencion como tratamiento potencial de la obesidad.

Ejemplo 14- 18-MC inhibe la respuesta operativa a la sacarosa

Basandose en los estudios con animales, usando modelos bien establecidos, se ha demostrado que 18-MC tiene el potencial de tratar con exito varias formas de dependencia de sustancias (por ejemplo, cocama, heroma, alcohol, y tabaquismo). 18-MC reduce de una forma dependiente de la dosis la autoadministracion de morfina en ratas. Estos efectos son selectivos, ya que las mismas dosis de 18-MC no afectan la respuesta por el agua, un reforzador no farmacologico. Otros estudios demostraron que 18-MC tambien disminuye la autoadministracion de cocama, metanfetamina y nicotina en ratas. Otros estudios se han ampliado al efecto "antiadictivo" de 18-MC respecto a la ingesta oral de etanol. En todos los casos, estos efectos duran al menos 24 horas. Es importante resaltar que 18-MC no tiene efectos motores a ninguno de estos tiempos.

A diferencia de 18-MC, ibogaina y otros muchos congeneres alcaloides de iboga (aproximadamente 30 analizados) disminuyen la respuesta tanto por el agua como por los farmacos. Y es precisamente esta especificidad unica la que condujo al desarrollo y al estudio de 18-MC. Por tanto, datos importantes respaldan el uso de la respuesta al refuerzo con agua como un control de los efectos no espedficos del tratamiento (de hecho, varios agentes fueron mas eficaces para suprimir la respuesta al agua que a los farmacos). Sin embargo, se decidio eventualmente adoptar un nuevo control usando ratas saciadas que respondfan a una solucion dulce que contema sacarina (0,151,2 % p/v) o sacarosa (10-20 % p/v); los valores iniciales de un dfa para otro demostraron ser mucho mas variables con sacarina que con sacarosa, y se selecciono la sacarosa. Tasas de respuesta para 10, 15, y 20 % de sacarosa abarcaron el intervalo de la mayona de tasas de autoadministracion y, para una dosis (20 mg/kg, i.p.) que disminuyo significativamente la autoadministracion del farmaco en un 40-80 % (dependiendo del farmaco), 18-MC no tuvo efecto significativo (disminucion del 10-20%) sobre la respuesta a la sacarosa. Sin embargo, estudios posteriores realizados de forma mas estricta mostraron que, a una dosis mayor (40 mg/kg, por via i.p.), 18-MC indudablemente disminuyo la respuesta a la sacarosa (vease la Fig. 7).

Ejemplo 15 - la administracion de 18-MC en el tegumento dorsolateral o basolateral de la amigdala disminuye la respuesta operativa por la sacarosa

Aunque la habenula media y el nucleo interpeduncular son las regiones del cerebro que tienen las mayores concentraciones de receptores nicotmicos a3p4, se han localizado cantidades moderadas de estos receptores en el area tegmental ventral, en la airngdala basolateral, y el tegmento dorsolateral (nucleos caudal pedunculopontino y laterodorsal tegmental). El tegmento dorsolateral contiene los cuerpos celulares de las neuronas colinergicas que se proyectan hacia el area tegmental ventral y ya se ha demostrado que esta implicado en la autoadministracion de farmacos. La airngdala basolateral tambien se ha implicado ampliamente en los fenomenos relacionados con las recompensas, y se ha asociado tanto con estimulantes como a sacarosa. De acuerdo con ello, para investigar adicionalmente sitios cerebrales que medien los efectos de 18-MC sobre la autoadministracion de farmacos, se determino si la administracion local de 18-MC en el tegmento dorsolateral o en la airngdala basolateral alterana la

5

10

15

20

25

30

35

40

45

autoadministracion de farmacos, puesto que ya se habfan examinado otros tres sitios. Como se hizo anteriormente, se utilizo sacarosa (15 %) como reforzador no farmacologico de control. Anteriormente, la administracion local de 18- MC o habfa tenido ningun efecto sobre la respuesta a la sacarosa independientemente de si se habfa infundido a la habenula media, nucleo interpeduncular, o area tegmental ventral. Sin embargo, aunque la administracion local de 18-MC en el tegmento dorsolateral no tuvo ningun efecto sobre la autoadministracion de morfina o metanfetamina, el mismo tratamiento con 18-MC disminuyo la respuesta a la sacarosa. Los sustratos neurales para los efectos de 18- MC sobre la autoadministracion de morfina y sacarosa parecen ser diferentes de forma evidente, aunque ambos implican receptores nicotmicos a3p4. De manera interesante, la administracion local de 18-MC en la airngdala basolateral disminuyo tanto la autoadministracion de metanfetamina como la respuesta a la sacarosa (vease la Fig. 8), por tanto, como se ha indicado anteriormente, parece haber algunas caractensticas comunes entre los sustratos neurales de las recompensas con estimulares y sacarosa.

Ejemplo 16- 18-MC disminuye la ingesta oral de sacarosa, evita el aumento de peso inducido por sacarosa, y reduce (o evita el aumento de) los depositos de grasa

Tal como se ha descrito anteriormente, 18-MC sistemico puede disminuir la respuesta operativa por la glucosa, y la administracion local de 18-MC en el segmento dorsolateral tambien puede hacerlo. Estos hallazgos, que no se habfan previsto, condujeron a la investigacion de la posibilidad de que 18-MC pudiera ser util en la disminucion de la ingesta de sustancias dulces de estar disponibles ad libitum junto con pienso normal de rata. Las ratas con oportunidad de elegir entre beber sacarosa (15%) o agua mostraron una fuerte preferencia (70-80 %) por la sacarosa. La Figura 9 muestra que, en las 24 horas posteriores a la administracion, 18-MC (10-40 mg/kg, i.p.) disminuyo la ingesta de sacarosa; mientras que o se observaron efectos sobre la ingesta de agua. El hecho de que los efectos fueran similares para todo el intervalo de dosis estudiado sugiere que la ingesta de sacarosa ad libitum es bastante sensible a 18-MC, pero que existe un techo (10 mg/kg) por encima del cual ya no se produce un efecto adicional (y supuestamente, el efecto esta relacionado con la dosis en un intervalo de 0 a 10 mg/kg). El posible efecto de 18-MC sobre la ingesta de sacarosa con consecuencias en termino de la regulacion del peso corporal se analizo en un estudio posterior. Las ratas que tuvieron un acceso ilimitado a sacarosa (30 %) durante dos semanas aumentaron excesivamente de peso, coherente con otros estudios de obesidad inducida mediante sacarosa. Tal como se muestra en la Figura 10, el tratamiento diario con 18-MC (20 mg/kg) evito completamente el aumento de peso excesivo atribuible a la ingesta de glucosa y, como se muestra en la Figura 11, 18-MC tambien disminuyo los depositos de grasa de las ratas. 18-MC no tuvo efectos sobre el publicamente disponibles de ratas "normales" que solo dispoman de agua. Los datos sugieren que 18-MC debena ser util para tratar la obesidad en seres humanos.

Ejemplo 17- 18-MC evita el aumento de peso excesivo inducido por una dieta rica en grasa

La aparicion de obesidad en ratas mantenidas con una dieta rica en grasa es quizas el modelo animal mas utilizado de obesidad inducida por la dieta. De acuerdo con ello, se evaluaron los efectos de 18-MC (20 mg/kg, i.p. durante dos semanas) sobre el aumento de peso en ratas mantenidas con dietas de alto contenido de grasa (HF) o bajo contenido en grasa (LF) ((45 kcal % de grasa vs. 10 kcal % de grasa; Research Diets Inc.). Tal como se muestra en la Figura 12, el tratamiento diario con 18-MC (20 mg/kg) evito completamente el aumento de peso excesivo atribuible a la dieta rica en grasa. 18-MC tambien disminuyo significativamente, en aproximadamente un 35 %, los pesos de los depositos de grasa en ratas HF pero no en ratas LF.

Una investigacion anterior establecio que 18-MC reduce el efecto de refuerzo de farmacos adictivos. Esto parecen estar mediados por 18-MC que actua como un antagonista no competitivo en los receptores a3p4 de la habenula media y el nucleo interpeduncular. 18-MC tambien reduce la respuesta operativa por la sacarosa, un efecto que parece estar mediado por la accion en el tegumento dorsolateral y airngdala basolateral. De forma coherente con los datos operativos, 18-MC reduce la ingesta de sacarosa oral ad libitum y, cuando se administra diariamente durante dos semanas, 18-MC bloquea el aumento de peso excesivo atribuible a la ingesta de sacarosa. De manera similar, la administracion diaria de 18-MC durante dos semanas bloquea tambien el excesivo aumento de peso inducido por una dieta rica en grasa. Estos y otros datos sugieren que 18-MC puede ser util en la modulacion del apetito y el tratamiento de la obesidad.

Claims (13)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de formula:

   imagen1

   en la que

   n es de 0 a 8;

   R1 es CH2OH, CH(OH)R5, CH2OR5, CO2R5, C(O)NH2, C(O)NHR5, C(O)NR5R6, C(O)NHNH2, C(O)NHNHR5, C(O)NHNR5R6, C(O)NR NH2, C(O)NR5NHR6, C(O)NR5NR6R7, C(O)NHNH(C(O)R5), C(O)NHNR5(C(O)R6), C(O)NR5NH(C(O)R6), C(O)NR5NR6(C(O)R7), CN, o C(O)R5;

   R2 es H, alquilo no sustituido o sustituido, YH, YR, YR8R9, YR8YR9YR10, YC(O)R8, C(O)YR8, C(O)NH2, C(O)NHR8, C(O)NR8R9, NH2, NHR8, NR8R9, NHC(O)R8, o NR8C(O)R9;

   R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, halogenos, alquilo no sustituido o sustituido, OH, OR10, NH2, NHR10, NR10R11, NHC(O)R10, o NR10C(O)R11;

   R, R, R, R, R, R , y R son iguales o diferentes y se seleccionan entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, alquilo sustituido, arilo no sustituido y arilo sustituido;

   R12 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo no sustituido, y alquilo sustituido; e Y es O, o S;

   o una de sus sales farmaceuticamente aceptables;

   para su uso en la prevencion de la obesidad inducida por grasa o sacarosa en un sujeto.
2. 2. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el sujeto es un ser humano, o en el que R3 y R4 son H, o en el que R12 es H.
3. 3. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que R1 es CO2R5, preferentemente en el que R5 es CH3.
4. 4. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que R1 es CH2OH.
5. 5. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que n es 2 y R2 es YR8, opcionalmente en el que Y es O, y, opcionalmente, en el que R8 es CH3, o en el que R8 es cH2Ph.
6. 6. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que R8 es CH2OCH2CH2OCH3.
7. 7. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que n es 2 y R2 es YH, preferentemente en el que Y es O.
8. 8. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que n es 2 y R2 es YC(O)R8, opcionalmente en el que Y es O y, opcionalmente, en el que R8 es (CH2)mCH3 y en el que m es de 0 a 20, tal como en el que m es 10.
9. 9. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen2

   o

   en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen3

   o

   en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen4

   5 o

   en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen5

   10

   o

   en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen6

   o

   en el que el compuesto tiene la formula:

   imagen7
10. 10. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es para una administracion seleccionada entre grupo que consiste en la admimstracion por via oral, topica, parenteral, subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, instilacion intranasal, aplicacion a membranas mucosas, intraventricular, por via

    5 intracerebral, rectal, y combinaciones de las mismas.
11. 11. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es para su administracion en forma de una composicion que comprende un trasportador farmaceuticamente aceptable.
12. 12. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que dicho uso comprende:

    una dosis eficaz del compuesto para su administracion.

    10 13. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 12, en el que dicha dosis eficaz comprende de 10 a

    40 mg/kg del compuesto.
13. 14. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en el que dicho uso comprede: la dosis del compuesto una vez al dfa para administracion.