ES2575530T3 - Procedimiento para unir dos superficies entre sí usando una proteína polifenólica bioadhesiva e iones peryodato - Google Patents

Abstract

Procedimiento para revestir una superficie que comprende las etapas de: a) proporcionar una composición bioadhesiva que consiste en una solución acuosa de una proteína polifenólica bioadhesiva, proteína que comprende 30-300 aminoácidos y consiste esencialmente en repeticiones de péptidos enlazadas en tándem que comprenden 3-15 residuos aminoácidos, donde al menos un 3 % y preferiblemente un 6- 30 % de los residuos aminoácidos de dicha proteína polifenólica bioadhesiva son DOPA; b) proporcionar una preparación que comprende iones peryodato; c) mezclar dicha composición bioadhesiva y preparación que comprende iones peryodato de modo que los iones peryodato constituyan al menos 1,80 mmol/g de la composición final; d) (i) aplicar la mezcla a la superficie a revestir, o (ii) aplicar dicha composición y dicha preparación que comprende iones peryodato secuencialmente, sin ningún orden específico, a la superficie a revestir, mezclando de este modo la composición bioadhesiva y la preparación que comprende iones peryodato; e) dejar dicha superficie durante un tiempo suficientemente largo para que se produzca el curado.

Description

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DESCRIPCION

Procedimiento para unir dos superficies entre si usando una protelna polifenolica bioadhesiva e iones peryodato

La presente invencion se refiere a un procedimiento para unir dos superficies entre si o revestir una superficie, que comprende las etapas de proporcionar una composition bioadhesiva que consiste en una protelna polifenolica bioadhesiva derivada de un mejillon que forma bisos, mezclar la protelna bioadhesiva con una cantidad elevada de iones peryodato oxidantes no enzimaticos antes de o simultaneamente al aplicar la composicion a las superficies que se van a unir entre si o a la superficie a revestir. Las superficies se unen a continuation y se dejan durante un tiempo suficientemente largo para permitir que se produzca el curado, de forma alternativa la superficie revestida por la composicion se deja durante un tiempo suficientemente largo para permitir que se produzca el curado. La invencion puede proporcionarse como un kit de partes que comprende la solution de protelna bioadhesiva y una preparation que comprende una sal peryodato.

Antecedentes de la invencion

La union de diferentes estructuras es vital en una amplia diversidad de procesos. No obstante, esto se asocia con frecuencia con problemas de naturaleza diferente dependiendo de que estructuras se van a unir.

Areas que son particularmente problematicas son la adhesion en el campo medico y la adhesion de componentes de tamano muy pequeno, tales como las micro- y nano-tecnicas. En el campo medico, ejemplos de cuando deben usarse adhesivos para adherir material biologico incluyen reparar organos lacerados o con lesiones de otro tipo, en especial huesos rotos y retinas y corneas desprendidas. Los procedimientos dentales tambien requieren con frecuencia la adhesion de unas partes con otras, tales como durante la reparation de caries, sellados permanentes y cirugla periodontal. Es muy importante en aplicaciones biomedicas de un adhesivo y composicion de revestimiento usar componentes biologicamente aceptables y degradables, que ademas no induzcan, per se o debido a contamination, ninguna reaction inflamatoria o toxica. Ademas, el adhesivo debe poder unirse a estructuras que se van a unir unas con otras en un ambiente humedo. En la industria electronica, un problema particular hoy en dla es que los componentes que van a unirse unos con otros son de tamano muy pequeno, y la cantidad de adhesivo que es posible usar es muy pequena. Por tanto, se requieren adhesivos que proporcionan alta resistencia adhesiva incluso con cantidades muy pequenas de adhesivo. Ademas, para usos no medicos, se prefiere un adhesivo que no sea irritante, no sea alergeno, no sea toxico y sea respetuoso con el medio ambiente, en contraste con lo que muchos de los adhesivos usados habitualmente hoy en dla normalmente son.

Las protelnas polifenolicas, aisladas preferentemente de mejillones, son conocidas por actuar como adhesivos. Ejemplos de tales protelnas pueden encontrarse, por ejemplo, en el documento US 4.585.585. Su amplio uso como adhesivos se ha visto entorpecido por problemas relacionados con la purification y caracterizacion de las protelnas adhesivas en cantidades suficientes. Ademas, en su mayorla, cuando se usan las protelnas bifenolicas como adhesivos, el pH tiene que elevarse hasta neutro o ligeramente basico (normalmente hasta 5,5 a 7,5) con el fin de facilitar la oxidation y curado de las protelnas. Sin embargo, este curado es lento y da como resultado una baja resistencia adhesiva y por tanto se anaden habitualmente oxidantes, cargas y agentes de reticulacion para disminuir el tiempo de curado y obtener un adhesivo mas fuerte.

La protelna adhesiva de mejillon (MAP) se forma en una glandula en la base los mejillones que forman bisos, tales como el mejillon azul comun (Mytilus edulis). El peso molecular de la MAP de Mytilus edulis es de aproximadamente 130.000 Dalton y se ha descrito que consiste en 75-80 secuencias muy relacionadas de repeticiones de peptidos. La protelna se caracteriza ademas por sus muchas repeticiones del tipo del factor de crecimiento de la epidermis. Tiene una proportion inusualmente alta de aminoacidos que contienen hidroxidos tales como la hidroxiprolina, serina, treonina, tirosina y el aminoacido inusual 3,4-dihidroxi-L-fenilalanina (Dopa) as! como lisina. Puede aislarse ya sea a partir de fuentes naturales o producirse biotecnologicamente. El documento US 5.015.677, as! como el documento US 4.585.585, describe que la MAP tiene propiedades adhesivas muy fuertes despues de oxidacion y polimerizacion, por ejemplo, por medio de la actividad de la enzima tirosinasa, o despues del tratamiento con reactivos bifuncionales.

MAP se conocla con anterioridad por ser util como una composicion adhesiva, por ejemplo, para propositos oftalmologicos. Robin et al., Refractive and Corneal Surgery, vol. 5, paginas. 302-306, y Robin et al., Arch. Ophthalmol., vol. 106, paginas. 973-977, describen ambos adhesivos basados en MAP que contienen un polimizador enzimatico. El documento US 5.015.677 describe tambien a un adhesivo basado en MAP que contiene un agente de reticulation y opcionalmente una sustancia de carga y un tensioactivo. Agentes de reticulation preferidos de acuerdo con el documento US 5.015.677 son agentes de oxidacion enzimatica tales como catecol oxidasa y tirosinasa, pero algunas veces pueden usarse tambien agentes de reticulacion qulmica tales como glutaraldehldo y formaldehldo. Ejemplos de cargas son protelnas, tales como caselna, colageno y albumina, y pollmeros que contienen restos carbohidrato, tales como quitosan y hialuronano. El documento US 5.030.230 se refiere tambien a un bioadhesivo que contiene MAP, tirosinasa de hongo (agente de reticulacion), SDS (dodecil sulfato de sodio, un tensioactivo) y colageno (carga). El bioadhesivo se utiliza para adherir una protesis de cornea a la pared del ojo.

El documento EP-A-343 424 describe el uso de una protelna adhesiva de mejillon para adherir una muestra que

contiene tejido, celula o acido nucleico a un sustrato durante condiciones de hibridacion de acido nucleico, donde la protelna adhesiva de mejillon, a pesar de las rigurosas condiciones encontradas durante la hibridacion, proporciono adherencia. El documento US-A-5.817.470 describe el uso de protelna adhesiva de mejillon para inmovilizar un ligando a un soporte solido para inmunoensayo ligado a enzima. La protelna adhesiva de mejillon tambien se ha 5 usado en composiciones cosmeticas para potenciar la adherencia a unas y piel (documento WO 88/05654).

En el documento WO 01/44401 se usan peroxido de hidrogeno, iones nitroprusiato e iones peryodato como agente oxidante en una composicion que comprende una protelna polifenolica aislada de mejillones que forman bisos y un pollmero que comprende grupos carbohidrato, tales como heparina, condroitln sulfato, quitosan y hialuronano.

Un problema importante asociado con composiciones bioadhesivas conocidas basadas en MAP, a pesar de las 10 propiedades superiores de la MAP per se, es que algunos constituyentes, en particular los agentes de reticulacion usados en la actualidad, pueden perjudicar y/o irritar al tejido vivo y causar reacciones toxicas e inmunologicas. Los agentes de reticulacion qulmica, tales como glutaraldehldo y formaldehldo, son generalmente toxicos para seres humanos y animales, y es altamente inapropiado anadir tales agentes a un tejido sensible, tal como el ojo. Enzimas, tales como la catecol oxidasa y la tirosinasa, son protelnas, y las protelnas son generalmente reconocidas como 15 posibles alergenos, especialmente en el caso en que ellas se originen de una especie diferente a la del paciente. Debido a sus capacidades oxidantes y de hidrolisis, estas tambien pueden perjudicar al tejido sensible.

Por lo tanto, existe una necesidad de nuevas composiciones adhesivas, tanto para aplicaciones medicas como para otras aplicaciones, que proporcionen una adhesion fuerte con pequenas cantidades de adhesivo, que sean sencillas de usar y que no provoquen reacciones toxicas y alergicas.

20 Sumario de la invencion

La presente invencion se refiere a un procedimiento para unir dos superficies entre si o revestir una superficie, que comprende las etapas de proporcionar una composicion bioadhesiva que consiste en una protelna polifenolica bioadhesiva derivada de un mejillon que forma bisos, mezclar la protelna bioadhesiva con una preparation que contiene iones peryodato, de forma que la concentration final de iones peryodato en la composicion final sea al 25 menos 1,80 mmol/g de composicion final, antes de aplicar la composicion a las superficies que se van a unir entre si o a la superficie a revestir. Las superficies se unen a continuation y se dejan durante un tiempo suficientemente largo para permitir que se produzca el curado, o se deja curar la superficie revestida durante un tiempo suficientemente largo. La invencion puede proporcionarse como un kit de partes que comprende la solution de protelna bioadhesiva y una preparacion que comprende una sal peryodato. Puesto que las composiciones 30 proporcionadas son no toxicas y presumiblemente no alergenas, la invencion es especialmente adecuada para su uso en aplicaciones medicas para adherencia o revestimiento de tejidos biologicos. Ademas, puesto que se proporcionan resistencias adhesivas muy fuertes usando las composiciones de la presente invencion, tambien es particularmente util para aplicaciones en las que solo puedan usarse cantidades muy pequenas de adhesivos, incluyendo superficies no biologicas. La invencion puede proporcionarse en forma de un kit de partes que 35 comprende la solucion de MAP y una preparacion de iones peryodato.

Definiciones

Como se describe en el presente documento, los terminos “protelna polifenolica”, “protelna adhesiva de mejillon” o “MAP” se refieren a una protelna bioadhesiva derivada de mejillones que forman bisos o que se produce de forma recombinante. Ejemplos de tales mejillones son los mejillones de los generos Mytilus, Geukensia, Aulacomya, 40 Phragmatopoma, Dreissenia y Brachiodontes. Protelnas adecuadas se han descrito en una diversidad de publicaciones, por ejemplo, los documentos US-A-5.015.677, US-A-5.242.808, US-A-4.585.585, US-A-5.202.236, US-A-5.149.657, USA-5.410.023, WO 97/34016 y US-A-5.574.134, Vreeland et al., J. Physiol., 34: 1-8, y Yu et al., Macromolecules, 31: 4739-4745. Ellas incluyen aproximadamente 30-300 residuos aminoacidos y esencialmente consisten en unidades de peptidos enlazadas en tandem que comprenden 3-15 residuos aminoacidos, 45 opcionalmente separadas por medio de una secuencia de acoplamiento de 0-10 aminoacidos. Un rasgo caracterlstico de tales protelnas es una cantidad comparativamente alta de residuos de lisina cargados positivamente, y en particular el aminoacido inusual DOPA (L-3,4-dihidroxifenilalanina). Una protelna polifenolica adecuada para su uso en la presente invencion tiene una secuencia de aminoacidos en la cual al menos un 3 % y preferiblemente un 6-30 % de los residuos aminoacidos son DOPA. Unos pocos ejemplos de las unidades peptldicas 50 tlpicas se presentan mas abajo. Sin embargo, es importante observar que las secuencias de aminoacidos de estas protelnas son variables y que el ambito de la presente invencion no queda limitado a las secuencias ejemplificadas mas abajo, ya que un experto se dara cuenta de que protelnas fenolicas bioadhesivas de diferentes fuentes, incluyendo las producidas de forma recombinante, pueden ser consideradas como equivalentes:

a) Val-Gly-Gly-DOPA-Gly-DOPA-Gly-Ala-Lys

55 b) Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-diHyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys

c) Thr-Gly-DOPA-Gly-Pro-Gly-DOPA-Lys

d) Ala-Gly-DOPA-Gly-Gly-Leu-Lys

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e) Gly-Pro-DOPA-Val-Pro-Asp-Gly-Pro-Tyr-Asp-Lys

f) Gly-Lys-Pro-Ser-Pro-DOPA-Asp-Pro-Gly-DOPA-Lys

g) Gly-DOPA-Lys

h) Thr-Gly-DOPA-Ser-Ala-Gly-DOPA-Lys

i) Gln-Thr-Gly-DOPA-Val-Pro-Gly-DOPA-Lys

j) Gln-Thr-Gly-DOPA-Asp-Pro-Gly-Tyr-Lys

k) Gln-Thr-Gly-DOPA-Leu-Pro-Gly-DOPA-Lys

El termino “superficie” se interpretara de forma amplia y puede comprender practicamente cualquier superficie. La eleccion de la superficie no es crltica para la presente invencion. Ejemplos de superficies para las cuales la invencion es especialmente adecuada incluyen superficies no biologicas tales como superficies de vidrio, plastico, ceramica y metalicas, etc., y superficies biologicas, que comprenden lana y diferentes tejidos tales como piel, hueso, diente, el ojo, cartllago, etc.

“Tiempo suficientemente largo” significa un perlodo de tiempo suficientemente largo para permitir el curado de la composition bioadhesiva. El curado es con frecuencia inmediato y tlpicamente el perlodo de tiempo requerido para curar varla de 5 segundos a una hora.

“Preparation que comprende iones peryodato” significa una preparation oxidante no enzimatica que comprende iones peryodato de cualquier sal que comprenda tales iones peryodato, tales como NaIO4, KIO4, RuIO4, etc. La preparacion puede ser una solution acuosa que comprende la sal peryodato o una preparacion que comprende la sal solida.

Description detallada de la invencion

El objeto de la presente invencion es proporcionar una composicion adhesiva para su uso para unir dos superficies entre si o revestir una superficie. Las composiciones proporcionadas en la invencion pueden usarse en principio para unir cualesquiera superficies entre si o revestir cualquier superficie. No obstante, las composiciones de acuerdo con la presente invencion son particularmente utiles cuando se necesitan composiciones adhesivas o de revestimiento que no sean toxicas, no irriten o no sean alergenas, o que puedan usarse en ambientes humedos. Ademas, las composiciones de la presente invencion son utiles cuando se requiere una adhesion fuerte incluso con pequenas cantidades de adhesivo. Otras ventajas con las composiciones proporcionadas en la presente invencion son su solubilidad en agua, el evitar disolventes organicos usados habitualmente en composiciones adhesivas y de revestimiento, que estas se producen de forma biologica y que son inocuas para el medio ambiente.

Los unicos componentes requeridos de la presente invencion son la protelna polifenolica y los iones peryodato. Cuando se han usado con anterioridad protelnas polifenolicas, se ha considerado necesario anadir otros componentes, tales como cargas y agentes oxidantes, con el fin de conseguir resistencia adhesiva suficientemente fuerte y habitualmente el pH se eleva hasta un valor neutro o ligeramente basico. El autor de la presente invencion ha demostrado que puede proporcionarse una adhesion muy fuerte, comparable a la resistencia adhesiva proporcionada usando las composiciones de MAP usadas habitualmente, usando una solucion de la protelna MAP y mezclando dicha protelna MAP con una preparacion de iones peryodato de modo que la concentration de iones peryodato en la composicion final sea al menos 1,80 mmol/g.

Los iones peryodato pueden proporcionarse mediante una preparacion de una solucion acuosa que comprende cualquier sal adecuada que comprenda tales iones, tales como NaIO4, KIO4, RuIO4, etc., solos o en diferentes combinaciones y proporciones. De forma alternativa, la preparacion que comprende la sal o sales peryodato puede estar directamente disuelta en la solucion de MAP.

Preferiblemente, la concentracion de MAP de la presente invencion es superior a 10 mg/ml. Mas preferiblemente, la concentracion de la solucion de MAP es superior a 20 mg/ml. De forma tlpica, la concentracion varla de 20 a 50 mg/ml.

Un objeto preferido de la presente invencion es proporcionar una composicion adhesiva o de revestimiento para aplicaciones medicas, por ejemplo, para la union de componentes biologicos y/o no biologicos a estructuras biologicas, un objeto para el cual la protelna MAP por si misma es idonea, puesto que es no toxica y biodegradable. No obstante, los agentes de oxidation enzimatica anadidos habitualmente a las composiciones de MAP con el fin de obtener reticulation y oxidacion pueden conducir a irritation y reacciones alergicas y estas composiciones de MAP son por tanto no optimas para aplicaciones medicas. Debido a la falta de tales componentes en la presente invencion, las composiciones de la presente invencion son particularmente adecuadas para la union de superficies biologicas entre si o a componentes biologicos o no biologicos. Por las razones anteriores, las composiciones de la presente invencion son particularmente utiles para revestir materiales usados en aplicaciones medicas o tejidos biologicos.

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Debido a la resistencia adhesiva muy elevada proporcionada con cantidades muy pequenas de las composiciones de la presente invencion, un campo preferido de aplicacion para el cual las composiciones son particularmente adecuadas para la union de superficies no biologicas tales como superficies de vidrio, plastico, ceramica y metalicas. Esto es particularmente util en las micro- y nano-tecnicas electronicas, optica, etc., para la adhesion o revestimiento de, por ejemplo, biosensores, microchips, celulas solares, telefonos moviles, etc., puesto que para estas aplicaciones solo pueden usarse cantidades muy pequenas de adhesivo. Las composiciones de la presente invencion tambien son adecuadas para revestir superficies no biologicas.

Las composiciones de la presente invencion tambien son utiles para la union de celulas, enzimas, anticuerpos y otras muestras biologicas a superficies.

De acuerdo con un aspecto de la invencion la solucion de MAP se mezcla con una preparacion que comprende iones peryodato de modo que la concentracion final de iones peryodato en la composicion sea al menos 1,80 mmol/g de composicion final. La mezcla se aplica a continuacion a al menos una de las superficies a unir entre si o a la superficie a revestir. De forma alternativa, la solucion de MAP y la preparacion que comprende iones peryodato se aplican por separado, sin ningun orden especlfico, a al menos una de las superficies, que se van a unir entre si, o a la superficie a revestir. La solucion de MAP puede aplicarse tambien a una de las superficies que se van a unir entre si mientras que la preparacion que comprende iones peryodato se aplica a la otra. Si dos superficies se van a unir entre si estas se juntan seguidamente. Finalmente, las superficies unidas o revestidas se dejan durante un tiempo suficientemente largo para permitir el curado. El tiempo necesario para el curado dependera, por ejemplo, de las superficies unidas o revestidas, y la cantidad y la composicion adhesiva. No obstante, con frecuencia, el curado es inmediato y el perlodo de tiempo de 5 segundos a una hora es tlpicamente suficiente para que se produzca el curado.

Preferiblemente, la concentracion final de iones peryodato en la composicion bioadhesiva de acuerdo con la presente invencion es al menos 1,90 mmol/g de composicion final, y mas preferiblemente al menos 2,00 mmol/g de composicion final.

Un 40 % en peso de NaIO4 en la composicion bioadhesiva final equivale a 1,86 mmol/g en la composicion final. No obstante, pueden conseguirse buenas resistencias adhesivas con tan solo un 10 % en peso de NalO4.

La presente invencion puede proporcionarse como un kit de partes util en un procedimiento para unir superficies entre si o revestir superficies, que comprende la solucion de MAP, una preparacion solida o llquida que comprende los iones peryodato y opcionalmente al menos un dispositivo, tal como una jeringa, para aplicar las composiciones a las superficies que se van a unir o revestir. Preparaciones y concentraciones preferidas de iones peryodato, intervalos de concentracion de la solucion de MAP, tiempos de curado y superficies a unir o revestir para el uso de este kit son como se han descrito antes.

Ejemplo 1

Con el fin de determinar la resistencia adhesiva usando las composiciones de la presente invencion, se determino la resistencia adhesiva entre placas de vidrio y tejido biologico (musculo de ganado vacuno y cerdo). La solucion de MAP (en acido cltrico 0,01 M) de Biopolymer Products of Sweden AB, Alingsas, Suecia) se aplico a una placa de vidrio (75x25x2 mm), a continuacion se aplico el agente oxidante no enzimatico NaIO4 a la placa de vidrio y se mezclo cuidadosamente con la solucion de MAP sobre la placa de vidrio, antes de colocar el tejido biologico (de aproximadamente 40x15x4 mm de tamano) sobre la placa de vidrio y fijar con una pinza. La menor cantidad de NaIO4 (3-6 % en peso de la composicion final vease la Tabla 1-3) se uso para comparacion. La muestra se dejo curar a continuacion bajo agua (35 °C) durante 5 min o 1 hora (vease la Tabla 1 y 2) o bajo condiciones secas a temperatura ambiente durante 1 min (vease la Tabla 3).

Para medir la resistencia adhesiva despues de curar, se retiro la pinza de la muestra y se unio la muestra a una balanza de resorte mediante la placa de vidrio. Se tiro del tejido biologico hasta que se desprendio de la placa de vidrio y se determino la fuerza necesaria para esto (Tabla 1-3).

El area de adhesivo entre la placa de vidrio y el tejido biologico fue de aproximadamente 0,3-0,4 cm2 como promedio, pero vario de 0,1-0,8 cm2.

Como puede apreciarse en las Tablas 1-3, se obtiene un aumento sustancial en la resistencia adhesiva, cuando se usa la cantidad mas alta de iones peryodato oxidantes no enzimaticos de acuerdo con la presente invencion.

Muestra

Concentracion de MAP (mg/ml) Cantidad de MAP (Mg) Concentracion de NaIO4 (M) Cantidad de NaIO4 (Ml) % NaIO4 en la composicion final (en peso) Resistencia del adhesivo (g)

1

20 60 0,01 2 6 90

2

20 60 0,1 2 42 150

5

10

15

20

25

Tabla 1. Resistencia adhesiva entre placa de vidrio y tejido biologico con curado durante 5 min bajo agua a 35 °C.

Muestra

Concentracion de MAP (mg/ml) Cantidad de MAP (^g) Concentracion de NaIO4 (M) Cantidad de NaIO4 (Ml) % NaIO4 en la composicion final (en peso) Resistencia del adhesivo (g)

1

23 69 0,01 2 3 120

2

24 60 0,1 2 42 185

Tabla 2. Resistencia adhesiva entre placa de vidrio y tejido biologico con curado durante 1 hora bajo agua a 35 °C.

Muestra

Concentracion de MAP (mg/ml) Cantidad de MAP (Mg) Concentracion de NaIO4 (M) Cantidad de NaIO4 (Ml) % NaIO4 en la composicion final (en peso) Resistencia del adhesivo (g)

1

24 60 0,01 1,5 5 25

2

22 66 0,1 3 49 110

3

24 60 0,5 1,5 73 125

4

22 66 0,5 3 83 110

Tabla 3. Resistencia adhesiva entre placa de vidrio y tejido biologico con curado durante 1 min bajo condiciones secas a temperatura ambiente

Ejemplo 2

Se comparo la resistencia adhesiva obtenida empleando las composiciones de la presente invencion con la resistencia obtenida usando un adhesivo epoxldico comun.

Se unieron dos placas de vidrio entre si usando bien una solucion de MAP y una elevada cantidad del agente oxidante no enzimatico NaIO4. La solucion de MAP (en acido cltrico 0,01 M), de Biopolymer Products of Sweden AB, Alingsas, Suecia) se aplico a una placa de vidrio (75x25x2 mm), a continuacion se aplico el agente oxidante no enzimatico NaIO4 a la placa de vidrio y se mezclo cuidadosamente con la solucion de MAP sobre la placa de vidrio, antes de colocar una segunda placa de vidrio sobre la primera y fijar las placas de vidrio entre si con una pinza. El area de adhesivo entre las placas de vidrio cubierta fue como promedio de 0,5-0,7 cm2 (con una variacion de 0,3-1,0 cm2). Se dejaron curar las placas a temperatura ambiente durante 72 horas antes de determinar la resistencia a la cizalladura (vease la Tabla 4). Para comparacion se determino la resistencia adhesiva entre placas de vidrio empleando adhesivo epoxldico comun (Bostic AB, Helsingborg, Suecia) (10 mg).

Para la determinacion de la resistencia a la cizalladura la longitud de agarre fue de 75 mm y la velocidad del cabezal en cruz fue de 3,0 mm/min.

La resistencia adhesiva obtenida usando las composiciones de la presente invencion dio como resultado resistencias adhesivas muy fuertes. Como comparacion, se incluye la resistencia adhesiva obtenida empleando aproximadamente 250 veces mas de un pegamento epoxldico comun (vease la Tabla 4). Por tanto pueden obtenerse resistencias adhesivas muy fuertes con cantidades muy pequenas de adhesivo cuando se usan las composiciones de la presente invencion.

Muestra

Concentracion de MAP (mg/ml) Cantidad de MAP (Mg) Concentracion de NaIO4 (M) Cantidad de NaIO4 (Ml) % NaIO4 en la composicion final (en peso) Cantidad de pegamento epoxldico (mg) Resistencia del adhesivo (N)

1

20 40 0,1 1,5 44 - 141

2

20 40 0,1 1,5 44 - 119

3

- - - - - 10 380

Tabla 4. Resistencia adhesiva entre placas de vidrio con curado durante 72 horas bajo condiciones secas a temperatura ambiente

Claims (9)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   REIVINDICACIONES

   1. Procedimiento para revestir una superficie que comprende las etapas de:

   a) proporcionar una composicion bioadhesiva que consiste en una solucion acuosa de una protelna polifenolica bioadhesiva, protelna que comprende 30-300 aminoacidos y consiste esencialmente en repeticiones de peptidos enlazadas en tandem que comprenden 3-15 residuos aminoacidos, donde al menos un 3 % y preferiblemente un 630 % de los residuos aminoacidos de dicha protelna polifenolica bioadhesiva son DOPA;

   b) proporcionar una preparacion que comprende iones peryodato;

   c) mezclar dicha composicion bioadhesiva y preparacion que comprende iones peryodato de modo que los iones peryodato constituyan al menos 1,80 mmol/g de la composicion final;

   d) (i) aplicar la mezcla a la superficie a revestir, o (ii) aplicar dicha composicion y dicha preparacion que comprende iones peryodato secuencialmente, sin ningun orden especlfico, a la superficie a revestir, mezclando de este modo la composicion bioadhesiva y la preparacion que comprende iones peryodato;

   e) dejar dicha superficie durante un tiempo suficientemente largo para que se produzca el curado.
2. 2. Procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que el procedimiento comprende ademas una etapa entre la etapa d) y la etapa e) en la que las dos superficies se unen entre si.
3. 3. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que la concentracion de iones peryodato en la composicion final es al menos 1,90 mmol/g.
4. 4. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que la concentracion de iones peryodato en la composicion final es al menos 2,00 mmol/g.
5. 5. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la concentracion de la protelna polifenolica bioadhesiva en la composicion bioadhesiva esta en el intervalo de 10-50 mg/ml.
6. 6. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la superficie a revestir es una superficie biologica.
7. 7. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la superficie a revestir es una superficie no biologica.
8. 8. Kit para revestir una superficie segun el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, comprendiendo dicho kit:

   a) una composicion bioadhesiva que consiste en una solucion acuosa de una protelna polifenolica bioadhesiva, protelna que comprende 30-300 aminoacidos y consiste esencialmente en repeticiones de peptidos enlazadas en tandem que comprenden 3-15 residuos aminoacidos, donde al menos un 3 % y preferiblemente un 6-30 % de los residuos aminoacidos de dicha protelna polifenolica bioadhesiva son DOPA, y

   b) una preparacion que comprende iones peryodato.
9. 9. Kit segun la reivindicacion 8 que comprende ademas un(os) dispositivo(s) para aplicar una cantidad especificada de la solucion de la protelna bioadhesiva y la preparacion que comprende iones peryodato a la superficie que se va a revestir.