ES2558875T3

ES2558875T3 - Composición anticonceptiva

Info

Publication number: ES2558875T3
Application number: ES07718599.9T
Authority: ES
Inventors: Thomas David Mccarthy
Original assignee: Starpharma Pty Ltd
Current assignee: Starpharma Pty Ltd
Priority date: 2006-03-22
Filing date: 2007-03-21
Publication date: 2016-02-09
Anticipated expiration: 2027-03-21
Also published as: AU2007229268B2; WO2007106944A1; EP1996209A1; CN101405010B; AU2007229268A1; JP5322918B2; US8193248B2; CN101405010A; CA2640978C; JP2009530316A; EP1996209B1; US20090275507A1; EP1996209A4; CA2640978A1

Abstract

Un método no terapéutico para reducir selectivamente o evitar la concepción en un animal hembra, que incluye un humano, incluyendo dicho método la administración al animal de una cantidad eficaz de una composición anticonceptiva que comprende: una cantidad eficaz de un compuesto dendrímero que incluye uno o más grupos terminales de ácido naftil disulfónico, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del compuesto dendrímero; y un vehículo, excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto dendrímero se selecciona entre un compuesto de Fórmula I, II o III**Fórmula** en las que R representa un grupo de Fórmula IV:**Fórmula** o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Composicion anticonceptiva Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a una composicion anticonceptiva y a un metodo no terapeutico para evitar la gestacion y, en particular, al uso de compuestos dendnmeros que incluyen grupos terminales de acido naftil disulfonico.

Antecedentes de la invencion

Los espermicidas son uno de una serie de metodos anticonceptivos conocidos en el estado de la tecnica. El espermicida mas popular contiene Nonoxinol-9 (N9) como principio activo. Sin embargo, el N9 no proporciona al usuario protection frente a las infecciones de transmision sexual (ITS), tales como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus del herpes simple (VHS) y otros patogenos microbianos y vmcos. De hecho, el N9, que es un espermicida basado en detergentes, puede tener en realidad efectos adversos en la prevention de las ITS. Aunque tales detergentes actuan alterando las membranas del VIH y del VHS, tambien pueden comprometer la barrera vaginal natural y aumentar de forma significativa la susceptibilidad a la infection.

La solicitud de patente internacional n°. PCT/AU02/00407 (WO 02/079299), de los presentes solicitantes, divulga una clase de dendnmeros (macromoleculas altamente ramificadas con una envoltura definida de grupos terminales cationicos o polianionicos) que se ha demostrado que exhiben un rango de actividades antimicrobianas y antivmcas con una toxicidad minima.

Por ejemplo, los dendnmeros de polilisina, poliamidoamina (PAMAM), poli(eterhidroxilamina) (PEHAM) y polipropilenimina, que incluyen los compuestos representados por las siguientes Formulas I a III y que tienen grupos terminales de acido naftil disulfonico, se ha demostrado que exhiben actividad antimicrobiana, particularmente actividad antivmca.

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en las que R representa un grupo de Formula IV:

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Por tanto, seria un avance significativo en la tecnica si se pudiera proporcionar un compuesto anticonceptivo como alternativa a los espermicidas que incluyen el N9 actualmente conocido en la tecnica, que no tenga efectos adversos en la prevencion o la transmision de las ITS.

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Sumario de la invencion

Los solicitantes han descubierto de modo sorprendente que determinados compuestos dendrimeros con grupos terminales de acido naftil disulfonico, ademas de exhibir propiedades antimicrobianas, pueden actuar tambien como 15 anticonceptivos.

En un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un metodo no terapeutico para reducir selectivamente o evitar la concepcion en un animal hembra, que incluye un humano, incluyendo dicho metodo la administracion al animal de una cantidad eficaz de una composicion anticonceptiva que comprende:

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una cantidad eficaz de un compuesto dendrimero que incluye uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico, o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del compuesto dendrimero; y un vehiculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto dendrimero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III

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5 en las que R representa un grupo de Formula IV:

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o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En un aspecto adicional de la presente invencion, se proporciona un dispositivo profilactico que comprende una cantidad eficaz de una composition anticonceptiva que comprende un compuesto dendrimero que comprende uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico; o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, del compuesto dendrimero; y un vehiculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo; y caracterizado por que la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie del dispositivo profilactico y es compatible con el mismo, en el que el compuesto dendrimero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III, o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otro aspecto adicional de la presente invencion, se proporciona un dispositivo profilactico que comprende una composicion anticonceptiva que comprende una cantidad anticonceptiva y antimicrobiana de un compuesto dendrimero que comprende uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico; o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, del compuesto dendrimero; y un vehiculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo; y caracterizado por que la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie del dispositivo profilactico y es compatible con el mismo, y en el que el compuesto dendrimero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III, o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

Description detallada de las realizaciones

Tal y como se usa en el presente documento, en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones, las formas en singular "un" y "una" y "el" y "la" incluyen los referentes en plural, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

El termino "comprende" (o sus variantes gramaticales), tal y como se usa en el presente documento, en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones, es equivalente al termino "incluye" y no debe interpretarse como que excluye otros elementos o caracteristicas.

Las composiciones que contienen compuestos dendrimeros con grupos terminales de acido naftil disulfonico tal y como se describen en el presente documento muestran una actividad anticonceptiva inesperada. Mediante la expresion "actividad anticonceptiva", tal y como se usa en el presente documento, en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones, los presentes autores se refieren a una actividad que evita o reduce la posibilidad de que un animal hembra llegue a gestar o a parir.

La actividad anticonceptiva de una composicion en general puede ser conferida por una serie de mecanismos.

El N9, por ejemplo, es espermicida, y destruye los espermatozoides para evitar que fertilicen los ovulos. Las composiciones anticonceptivas no espermicidas pueden actuar modificando el medio de la vagina. Por ejemplo, una composicion hipertonica puede dar como resultado el espesamiento del moco cervical, previniendo o impidiendo de este modo la entrada de los espermatozoides en el cuello uterino. Otras composiciones pueden formar una matriz cuando se ponen en contacto con el eyaculado en la vagina, que atrapa los espermatozoides y limita igualmente su capacidad para alcanzar el cuello uterino. Manteniendo el entorno acido en la vagina puede contribuir tambien a la inactivation de los espermatozoides, particularmente despues de la eyaculacion cuando el pH de la vagina aumenta desde aproximadamente 4 hasta un medio de neutro a ligeramente basico mas compatible con los espermatozoides.

De modo alternativo, una composicion anticonceptiva puede inducir la perdida del acrosoma. Los acrosomas contienen enzimas que permiten la penetration de los espermatozoides en los ovulos. De modo similar, se requiere la enzima hialuronidasa para dispersar las celulas foliculares que rodean a los ovulos, permitiendo de este modo la penetracion de los espermatozoides. Como tales, las composiciones que pueden inhibir esta enzima pueden tener actividad anticonceptiva.

Las mismas composiciones anticonceptivas de la invencion presentan adicionalmente actividad antimicrobiana. Mediante la expresion "actividad antimicrobiana", tal y como se usa en el presente documento, en esta memoria

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descriptiva y en las reivindicaciones, los presentes autores se refieren a una composicion, o a componentes de la misma, que destruye o inhibe el crecimiento de microbios tales como bacterias, virus, hongos y parasitos.

En el metodo no terapeutico descrito en el presente documento, preferentemente la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie de un dispositivo profilactico y es compatible con el mismo.

El compuesto dendrlmero puede estar presente en la composicion anticonceptiva en cualquier cantidad adecuada, suficiente para evitar la gestacion. Preferentemente, el compuesto dendrlmero esta presente en la composicion en una cantidad de aproximadamente un 0,5 % a un 70 % en peso, basado en el peso total de la composicion. Mas preferentemente, el compuesto dendrlmero esta presente en una cantidad de aproximadamente un 1 % a un 50 % en peso, mas preferentemente, de un 1 % a un 30 % en peso, basado en el peso total de la composicion.

Las sales de adicion de base farmaceuticamente aceptables adecuadas de los compuestos dendrlmeros descritos en el presente documento incluyen, si bien no se limitan a las mismas, sales metalicas tales como sales de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc, as! como sales organicas preparadas a partir de aminas organicas tales como la N,N"-dibenciletilendiamina, la cloroprocalna, la dietanolamina, la etilendiamina, la diciclohexilamina, la meglumina, la (N-metilglucamina) y la procalna, y aminas cuaternarias tales como la colina y las sales de sulfonio y fosfonio.

Las composiciones anticonceptivas usadas en el metodo no terapeutico de la presente invencion pueden ser una composicion topica, preferentemente proporcionada en forma de una espuma, un gel, una crema, una pellcula o similares. Los vehlculos, excipientes y diluyentes farmaceuticamente aceptables adecuados para su uso en las composiciones anticonceptivas descritas en el presente documento pueden incluir todos y uno o mas de cualquiera de los disolventes convencionales, medios de dispersion, cargas, vehlculos solidos, soluciones acuosas, recubrimientos, vehlculos adecuados para administracion topica, otros agentes antimicrobianos, agentes de retardo o de potenciacion de la absorcion e isotonicos, agentes de retardo o de potenciacion de la actividad, para sustancias farmaceuticamente activas, y son bien conocidos en la tecnica. Se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edicion, Mack Publishing Company, Pennsylvania, EE.UU. A no ser que algun vehlculo, excipiente o diluyente sea incompatible con el principio activo, se contempla el uso de los mismos en la composicion anticonceptiva de la presente invencion.

Los vehlculos adecuados para administracion topica incluyen emulsiones de aceite en agua y de agua en aceite, vaselina blanca, vaselina hidrofila, emulsiones de lanolina, polietilenglicoles, manteca de cacao, mucoadhesivos, agentes gelificantes, agentes de tamponado, aceites emolientes (por ejemplo, aceites solubles en agua que incluyen, por ejemplo, el polietilenglicol), un gel lubricante (que incluye, por ejemplo, el agua, el propilenglicol, la hidroxietil celulosa, el acido benzoico y el hidroxido de sodio), un aceite soluble en agua (que incluye, por ejemplo, la glicerina, el propilenglicol, el Polyquaternium # 5, el metil parabeno y el propil parabeno), una crema (que incluye, por ejemplo, el alcohol bencllico, el alcohol cetearllico, esteres de cetilo, cera, el octildodecanol, el polisorbato 60, el agua purificada, y el monoestearato de sorbitan), y similares.

Preferentemente, los vehlculos, excipientes y/o diluyentes incluyen uno o mas del grupo que consiste en hidroxido de sodio, aceites solubles en agua, mucoadhesivos, agentes gelificantes, agentes de tamponado, agentes lubricantes, propilenglicol, glicerina y agua.

Mas preferentemente, los vehlculos, excipientes y/o diluyentes incluyen uno o mas del grupo que consiste en hidroxido de sodio, aceites solubles en agua, Carbopol®, propilenglicol, glicerina, hidroxietil celulosa y agua. Mas preferentemente, incluyen hidroxido de sodio, EDTA disodico dihidrato, metil parabeno, propil parabeno, Carbopol® 971P, propilenglicol, glicerina y agua purificada en combination.

En una realization preferente, la composicion anticonceptiva cuando es soportada sobre una superficie de un dispositivo profilactico puede exhibir tambien actividad antimicrobiana. Preferentemente, la actividad antimicrobiana es frente a los microbios que causan las infecciones de transmision sexual (ITS). La composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion se puede administrar en una cantidad suficiente para la prevention de las infecciones de transmision sexual. Esta cantidad puede depender de la infection de transmision sexual particular que se desea prevenir, y de los parametros del paciente individual que incluyen la edad, la condition flsica, la estatura, el peso y el o los tratamientos concurrentes. Estos factores son bien conocidos por los expertos en la materia y pueden ser abordados con tan solo la experimentation rutinaria.

Las causas comunes de las ITS incluyen, si bien no se limitan a los mismos, los virus del papiloma, Chlamydia trachomatis, Candida Albicans, Trichomonas vaginalis, los virus del herpes simple (VHS), el citomegalovirus (CMV), Neisseria gonorrhoeae, el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), Treponema pallidum, los virus de la hepatitis B y C (VHB y VHC), Calymmato bacterium granulomatis, Haemophilus ducreyi, Sarcoptes scabeie, Phthirus pubis, Mycoplasma, Gardnerella vaginalis.

Preferentemente, la actividad antimicrobiana es antivlrica, exhibiendo actividad contra los virus de transmision sexual que incluyen el VIH, el VHS, el VHC, el VHB, el virus del papiloma humano (VPH) y el CMV.

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La composition anticonceptiva usada en el metodo no terapeutico de la presente invention se puede administrar en cualquier momento, es decir, antes y/o durante y/o despues de la relation sexual, si bien preferentemente antes y/o durante la relation sexual.

El dispositivo profilactico puede ser de cualquier tipo adecuado. Se pueden usar un condon, un capuchon cervical, un diafragma anticonceptivo, una esponja vaginal, un dispositivo intrauterino, un pesario o similares. Se prefiere un condon.

El compuesto dendrlmero se pone en contacto con una superficie del dispositivo profilactico de cualquier manera adecuada. Por ejemplo, una o mas de las superficies del dispositivo profilactico se pueden recubrir o impregnar con el compuesto dendrlmero. El compuesto dendrlmero se puede unir covalentemente a una o mas superficies del dispositivo profilactico.

La cantidad de composition anticonceptiva administrada puede estar en el intervalo de 0,1 a 10 g, preferentemente de 0,5 a 8 g, mas preferentemente de 1 a 5 g.

Otras caracterlsticas de la presente invention seran evidentes a partir de los siguientes Ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo 1- Preparation de una composition anticonceptiva (3 % p/p de principio activo).

Tabla 1 - Ingredientes para una composition anticonceptiva del 3 % p/p

Ingrediente: Monografla Cantidad por lote (kg)

Excipientes

Hidroxido de sodio NF: NF 0,1443

EDTA disodico dihidrato USP: USP 0,010

Metil parabeno NF: NF 0,018

Propil parabeno NF: NF 0,002

Carbopol® 971 P NF: NF 0,500

Propilenglicol USP: USP 0,100

Glicerina USP: USP 0,100

Agua purificada I: USP 1,804

Agua purificada II: USP 8,370

Principios activos farmaceuticos

SPL7013: 0,339

Protocolo

. El equipo se esteriliza y se enjuaga antes de la fabrication.

i. En una jarra de acero inoxidable se disuelve hidroxido de sodio, NF, en agua purificada.

ii. En un recipiente de acero inoxidable, se anade EDTA disodico dihidrato, USP, a agua purificada y se agita con un mezclador de alto cizallamiento hasta que se disuelve.

iv. Se anaden metil parabeno y propil parabeno, NF, de uno en uno y se mezclan hasta que se dispersan totalmente.

v. Se anade lentamente Carbopol® 971 P, NF, y la mezcla se agita hasta que el Carbopol® 971 P, NF, se dispersa totalmente y se forma un gel homogeneo.

vi. Se anaden propilenglicol, USP, y glicerina, USP, al recipiente y la solution se mezcla hasta que el contenido esta totalmente dispersado.

vii. Se anade solution de hidroxido de sodio de la etapa ii hasta que el pH sea superior a 4,0.

viii. Se anade el SPL7013 en una cantidad apropiada calculada para dar un gel del 3 % p/p.

ix. Se anade solution de hidroxido de sodio de la etapa ii hasta que se alcance el pH deseado, por ejemplo, 4,5 o 5,0.

x. Tras la medicion del pH, se anade agua purificada hasta el volumen y la solution se mezcla hasta que se dispersen todos los ingredientes y se forme un gel homogeneo.

xi. Se mide el rendimiento bruto.

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Ejemplo 2 - Estudio de la actividad espermicida

Para evaluar la actividad espermicida de la composicion anticonceptiva de la presente invencion se llevo a cabo el ensayo de Sander-Cramer modificado. Este ensayo determina la concentracion minima eficaz (CME) para inmovilizar a los espermatozoides.

Se prepararon diluciones en serie a la mitad a partir de soluciones madre al 2 % (para compuestos solubles en agua) o al 4 % (para compuestos insolubles en agua). Se mezclaron 250 pl de cada dilucion con 50 ml de una muestra de semen normal que contenla 60 x 106 de espermatozoides moviles/ml. Se evaluo la normalidad de las muestras de semen con la ayuda de un sistema CASA (Hamilton-Thorne, IVOS; Beverly, MA). El semen y las allcuotas de compuesto se examinaron microscopicamente mientras se incubaban a temperatura ambiente durante 30 segundos. Cuando se encontro algun espermatozoide movil, bien en el examen inicial o bien despues de una incubacion de una hora, esa dilucion se etiqueto como "fallo". Se calculo la CME para un compuesto dado usando la dilucion mayor que inducla la inmovilizacion total de los espermatozoides. Se usaron de 6 a 10 muestras de semen para obtener resultados mas fiables. Se ensayaron el N9 (CEM = ~ 0,1-0,2 mg/ml) y los disolventes como control. Los compuestos que muestran una CEM inferior a 1 mg/ml poseen una potente actividad inmovilizadora de los espermatozoides.

Resultado y conclusion

La composicion de la presente invencion se etiqueto como "fallo" y no se establecio una CEM.

Parece ser que la actividad anticonceptiva de la composicion de la presente invencion no proviene de una actividad espermicida. La actividad espermicida del agente de control N9 se debe a las propiedades citotoxicas de este agente. Por tanto, la falta de actividad espermicida de la composicion anticonceptiva sugiere que es diferente del N9 y que no sera citotoxica en humanos.

Ejemplo 3- Eficacia anticonceptiva en conejos

El eyaculado normal del conejo blanco de Nueva Zelanda contiene aproximadamente 2-3 x 108 espermatozoides el cual, si se libera mediante una canula en el area cervicovaginal, proporciona aproximadamente 5000 dosis de fecundacion5o (DF50) Una dosis de fecundacion50, tal y como se usa en el presente documento, se define como la cantidad de espermatozoides que lleva a que un 50 % de una poblacion dada de conejas queden prenadas. Por el contrario, el eyaculado humano proporciona menos de 1 DF50. Por consiguiente, para que sea mas relevante para la prediction de la eficacia anticonceptiva en humanos, tanto el agente de ensayo como los espermatozoides deben liberarse en el area cervicovaginal, y el numero total de espermatozoides liberados debe reducirse.

El protocolo en conejos se uso para ensayar una serie de formulaciones, incluyendo un gel placebo de hidroxilcelulosa (HEC). Los sujetos de ensayo se dividieron segun se muestra en la tabla 2.

Tabla 2 - Numero de conejos implicados en el estudio

Material de ensayo: Numero de conejos

Hidroxietilcelulosa (HEC) - (composicion de control inactiva): 11

Principio activo en HEC: 8

Principio activo en la formulacion de acuerdo con el Ejemplo 1: 8

Se prepararon conejas de Nueva Zelanda (~ 7 lb = ~ 3 kg) mediante inyeccion subcutanea de 100 UI de gonadotropina corionica humana (0,1 ml; Sigma) usando una aguja de calibre 30 en una jeringa de 1 ml. La formulation de ensayo (2 ml) se deposito en el area cervicovaginal de las conejas usando una canula flexible de tubo de Tygon unida a una jeringa de 5 ml. Se reunio esperma fresco de conejo obtenido de 2 conejos y se diluyo en serie a 1/5 con plasma seminal de conejo. Cinco minutos despues de administrar la formulacion de ensayo, se depositaron 0,5 ml de semen diluido (0,1 ml de semen diluido con 0,4 ml de plasma seminal) en la misma region del area cervicovaginal que la formulacion de ensayo. La dosis inseminada proporciono ~ 10 DF50 que es suficiente para producir una media de 7 embriones por conejo.

La eficacia anticonceptiva se determino sacrificando los animales 15 dlas despues de la insemination, extrayendo y diseccionando los cuernos del utero para determinar si el animal estaba o no prenado y, en el caso de los animales prenados, contando el numero de embriones implantados.

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Resultados

Tabla 3 - Resultados del estudio de la eficacia anticonceptiva

Material de ensayo: Numero de conejos prenados Valor p con respecto al grupo de control con gel placebo de HEC* Numero total de embriones en todos los conejos. Valor p con respecto al grupo de control con gel placebo de HECA

HEC: 9 de 11 Valor Ref. 79 embriones Valor Ref.

Principio activo en HEC: 2 de 8 0,024 2 embriones 0,005

Principio activo en la formulacion de acuerdo con el Ejemplo 1: 2 de 8 0,024 13 embriones 0,03

* Prueba exacta de Fisher de dos colas APrueba de Mann-Whitney para datos no pareados de dos colas

Por tanto, el principio activo en HEC o la formulacion del Ejemplo 1 mostraban efectos anticonceptivos significativos en el modelo de conejo cuando se comparaban con el gel placebo de HEC. Los efectos anticonceptivos comparativos del principio activo en HEC o la formulacion del Ejemplo 1 no diferlan de modo significativo.

Una vez finalizados los ensayos anteriores, se efectuaron observaciones piloto para estimar la duracion de la eficacia anticonceptiva y los resultados se resumen en la tabla siguiente:

Tabla 4 - Duracion de la eficacia anticonceptiva

Tiempo en el que se libero la dosis de inseminacion tras la aplicacion del agente de ensayo: Animales del control de HEC; (5 de 5 prenados; 37 embriones) Principio activo en HEC Principio activo en la formulacion de acuerdo con el Ejemplo 1

6 horas: 0 de 1 prenados 0 embriones

22-24 horas: 0 de 1 prenados 0 embriones 0 de 1 prenados 0 embriones

48 horas: 1 de 3 prenados 13 embriones

7 dlas: 2 de 2 prenados 16 embriones

Combinando estos resultados piloto se demuestra que las formulaciones con principio activo en HEC, o de acuerdo con el Ejemplo 1, eran anticonceptivos altamente eficaces ~ 24 horas tras su aplicacion. Un analisis estadlstico de los datos de la Tabla 4 basado en el analisis de las gestaciones o del numero de embriones mostraba (i) gestaciones: p = 0,05 mediante la prueba exacta de Fisher de dos colas. (ii) embriones: p = 0,016 mediante la prueba de Mann-Whitney no parametrica para datos no pareados, de dos colas. Asimismo, los resultados a las 48 horas y a los 7 dlas sugieren rotundamente que este efecto anticonceptivo es irreversible.

Conclusion

La composicion de la presente invencion, formulada en HEC o de acuerdo con el Ejemplo 1, muestra efectos anticonceptivos significativos en el modelo de conejo cuando se libera 5 minutos antes de la inseminacion artificial (Tabla 3) y tambien cuando se libera ~ 24 horas antes de la inseminacion (Tabla 4).

Ejemplo 4 - Estudio para evaluar el efecto de la composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion sobre la susceptibilidad al VHS-2

El estudio se llevo a cabo para detectar los efectos adversos potenciales de la composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion, midiendo la susceptibilidad de los ratones a la infeccion con el virus del herpes simple tipo 2 (VHS-2), el virus que causa mas comunmente el herpes genital. Esto era importante ya que las composiciones espermicidas, tales como el N9, se ha sugerido que pueden comprometer la barrera vaginal natural y aumentar significativamente la susceptibilidad a las infecciones iTs en general.

El modelo de transmision vaginal del VHS-2 en ratones fue usado por Richard Cone en la Universidad Johns Hopkins Baltimore, EE.UU., para evaluar las toxicidades asociadas a los espermicidas y a otras composiciones anticonceptivas que podrlan llevar a una susceptibilidad a patogenos tales como el VHS-2.

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Metodos Modelo de raton:

Antes de evaluar la susceptibilidad, ratones CF-1 hembra (Harlan, Indianapolis, IN, EE.UU.) de 6-8 semanas de vida se trataron con progestina (Depo Provera®, acetato de medroxiprogesterona) para aumentar la susceptibilidad al VHS-2, y para conseguir una mayor uniformidad de los ratones en terminos de susceptibilidad que la de los ratones en diferentes etapas del ciclo de celo.

Inoculo virico:

Cepa G de VHS-2, 5 x 108 Dl50CC/ml.

Procedimientos:

Se administraron 20 pl de una composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion a la vagina, seguido de la administracion, 12 horas mas tarde, de un inoculo de dosis baja de VSH-2 (0,1 DI50) en 10 pl de medio Bartels. Los animales de control recibieron 20 pl de PBS en lugar del producto de ensayo.

El inoculo se libero 12 horas despues de la aplicacion del producto de ensayo ya que experimentos previos (Referencia: Cone RA, Hoen TE, Wang XX & Moench TR. Microbicidal Detergents Increase HSV Susceptibility in Mice Without Causing Visible Epithelial Defects. Resumen # 02421, "Microbicides 2004" Conferencia, Londres, RU; Marzo 2004) mostraron que este era el tiempo en el que se producla la susceptibilidad maxima a la infeccion por el VHS-2 tras la administracion del N9.

En este estudio, un total de 40 ratones recibieron una composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion y un total de 40 ratones recibieron PBS.

Resultados

Solo 1 de los 40 ratones tratados con una composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion llego a infectarse con el VHS-2. Por el contrario, 7 de los 40 ratones del grupo de control llegaron a infectarse. En otras palabras, no hubo un aumento de la susceptibilidad que sigue a la administracion de la composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion.

En estudios previos, 29 de los 42 animales tratados con N9, 20 de los 30 animales tratados con el ingrediente espermicida 1, y 25 de los 41 animales tratados con el ingrediente espermicida 2, llegaron a infectarse.

Para determinar la susceptibilidad relativa de los ratones en estudios previos, dos grupos de ratones de control se trataron con PBS por cada grupo de ratones tratados con el producto de ensayo. Un grupo de control se inoculo con 0,1 Dl 50, mientras que el otro se inoculo con 10 DI50. La fraccion de animales infectados en cada grupo de control se uso para construir un grafico de dosis - respuesta (fraccion infectada frente a log DI), trazando una interpolation lineal entre los puntos de dosis alta y baja. La fraccion de ratones infectados en el grupo de ensayo se represento a continuation sobre este grafico para determinar la DI eficaz del inoculo de dosis baja en este grupo de ensayo. La susceptibilidad relativa se definio como la DI eficaz del inoculo de dosis baja suministrada a los ratones de ensayo dividida por la DI suministrada a los animales de control.

Los animales tratados con N9 fueron 29,7 veces mas susceptibles a la infeccion por el VHS-2 que los animales de control (p < 0,001, prueba de Fisher exacta prueba t bilateral), mientras que los animales tratados con los ingredientes espermicidas 1 y 2 fueron 29,1 (p < 0,001) y 17,5 (p < 0,001) veces mas susceptibles, respectivamente.

Conclusion

La composicion anticonceptiva de acuerdo con la presente invencion no parece que lleve a un aumento de la susceptibilidad en el modelo de raton de infeccion por el VHS-2. Este estudio indica que la composicion anticonceptiva no es citotoxica y sugiere que sera segura para su uso en humanos. El N9 y otros microbicidas espermicidas pueden llevar a un aumento de la susceptibilidad. (Referencia: Cone RA, Hoen TE, Wang XX & Moench TR. Microbicidal Detergents Increase HSV Susceptibility in Mice Without Causing Visible Epithelial Defects. Resumen # 02421, "Microbicides 2004" Conferencia, Londres, RU; Marzo 2004).

Ejemplo 5 - Estudio de compatibilidad con condones de un gel de Carbopol® con un 3 % p/p de principio activo

Determinados ingredientes de las formulaciones vaginales pueden comprometer la integridad del condon. Este metodo se uso para determinar el efecto de la composicion de la presente invencion sobre los condones.

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Los condones masculinos envasados individualmente, fabricados con latex de caucho natural y para un solo uso cumplen unos requisitos minimos determinados especificados en la designacion ASTM: metodo de ensayo D 349297 (Sociedad americana para pruebas y materiales, Especificacion estandar para anticonceptivos de caucho, condones masculinos). El metodo de ensayo se disena para asegurar que los condones sean de calidad consistente. Se determinaron los siguientes parametros para los condones tratados y sin tratar: presion de estallido, volumen de estallido, longitud, grosor y anchura. Si la composicion compromete los condones, se espera que la presion y el volumen de estallido sean menores. La longitud de los condones tambien puede verse afectada.

Para todos los ensayos, los condones se extrajeron de sus envases individuales y se desenrollaron. Empleando un pincel suave, se recubrio toda la longitud de cada condon con una formulacion en gel de la composicion de la presente invencion. Los condones individuales se depositaron sobre una bandeja revestida y se incubaron a 37 °C y a una humedad relativa del 90 % durante no menos de una hora. Despues de cada periodo de incubacion, y antes del ensayo, se elimino el exceso de gel de los condones empleando un trapo seco no abrasivo. Cada condon tratado se ensayo en orden secuencial para determinar la presion y el volumen de estallido por aire. A efectos comparativos, se obtuvieron los datos de referencia llevando a cabo un ensayo analogo sobre condones sin tratar y sobre condones tratados con gel placebo que no tenia ningun principio activo farmaceutico.

Los datos para estos experimentos se dan en la tabla 5.

Tabla 5 - Presiones y volumenes de estallido por aire de condones de latex tras su exposicion a la composicion _____________________ anticonceptiva durante no menos de una hora__________________________

Tipo de condon: Lote de condon Volumen de estallido medio, l (n = 80) Cambio observado


: Basal Placebo Tratado con SPL7013 Base - Placebo Base - Tratado Placebo - Tratado

Latex, no lubricado: 1 42,8 (2,4) 43,7 (2,7) 45,4 (2,6) 0,9 (0,3) 2,6 (0,2) 1,7 (-0,1)

2: 44,0 (2,6) 44,6 (2,2) 45,6 (3,5) 0,6 (-0,4) 1,6 (0,9) 1,0 (1,3)

3: 43,9 (2,1) 44,0 (2,5) 44,7 (5,4) 0,1 (0,4) 0,8 (3,3) 0,7 (2,9)

Latex, lubricado con silicona: 1 40,7 (3,1) 42,5 (3,5) 42,6 (4,0) 1,8 (0,4) 1,9 (0,9) 0,1 (0,5)

2: 42,0 (3,2) 42,2 (3,3) 44,1 (2,6) 0,2 (0,1) 2,1 (-0,6) 1,9 (-0,7)

3: 42,1 (3,7) 44,5 (3,1) 43,9 (3,0) 2,4 (-0,6) 1,8 (-0,7) -0,6 (-0,1)

Latex, lubricante a base de agua: 1 43,4 (2,8) 42,3 (4,2) 43,5 (4,2) -1,1 (1,4) 0,1 (1,4) 1,2 (0,0)

2: 45,3 (2,7) 44,6 (3,7) 45,1 (4,0) -0,7 (1,0) -0,2 (1,3) 0,5 (0,3)

3: 44,1 (3,1) 42,5 (2,8) 44,5 (4,2) -1,6 (-0,3) 0,4 (1,1) 2,0 (1,4)

Tipo de condon: Lote de condon Presion de estallido media, kPa (n = 80) Cambio observado

Latex, no lubricado: 1 2,0 (0,1) 1,9 (0,1) 1,9 (0,1) -0,1 (0,0) -0,1 (0,0) 0,0 (0,0)

2: 2,1 (0,1) 2,0 (0,1) 2,0 (0,1) -0,1 (0,0) -0,1 (0,0) 0,0 (0,0)

3: 2,0 (0,1) 1,9 (0,1) 1,9 (0,1) -0,1 (0,0) -0,1 (0,0) 0,0 (0,0)

Latex, lubricado con silicona: 1 1,6 (0,1) 1,6 (0,1) 1,6 (0,1) 0,0 (0,0) 0,0 (0,0) 0,0 (0,0)

2: 1,7 (0,1) 1,6 (0,1) 1,7 (0,1) -0,1 (0,0) 0,0 (0,0) 0,1 (0,0)

3: 1,6 (0,1) 1,5 (0,1) 1,5 (0,1) -0,1 (0,0) -0,1 (0,0) 0,0 (0,0)

Latex, lubricante a base de agua: 1 2,1 (0,1) 2,1 (0,2) 2,0 (0,2) 0,0 (0,1) -0,1 (0,1) -0,1 (0,0)

2: 2,2 (0,1) 2,2 (0,1) 2,2 (0,2) 0,0 (0,0) 0,0 (0,1) 0,0 (0,1)

3: 2,1 (0,1) 2,1 (0,1) 2,1 (0,2) 0,0 (0,0) 0,0 (0,1) 0,0 (0,1)

Ademas de ensayar la presion y el volumen de estallido por aire, se investigo tambien la resistencia a la traccion de los condones tras el tratamiento con la formulacion en gel de la composicion de la presente invencion. Para estos ensayos, los condones se extrajeron de sus envases individuales y se desenrollaron. Se recortaron del condon piezas de ensayo del material del condon de acuerdo con la norma ISO 4074:2002 y las piezas se dispusieron sobre una bandeja revestida. Las piezas de ensayo recortadas del condon eran todas piezas de ensayo recubiertas con gel, dispuestas en una bandeja forrada e incubadas a 37 °C y a una humedad relativa del 90 % durante no menos

de una hora. Despues del periodo de incubacion, y antes del ensayo, se elimino el exceso de lubricante de las piezas de muestra con alcohol isopropilico y se dejaron secar por completo las piezas de ensayo. Se determino la resistencia a la traccion de las piezas de ensayo de acuerdo con el procedimiento especificado en la norma ISO 4074:2002.

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Los datos obtenidos de estos ensayos se proporcionan en la tabla 6.

Tabla 6 - Propiedades de resistencia a la traccion y elongacion de piezas textiles de latex de condon tras su _____________exposicion a la composicion anticonceptiva durante no menos de una hora._____________

Tipo de condon: Lote de condon Resistencia a la traccion, N Cambio observado


: Basal Placebo Tratado con SPL7013 Base - Placebo Base - T ratado Placebo - Tratado

Latex, no lubricado: 1 83 79 78 -4 -5 -1

2: 84 81 79 -3 -5 -2

3: 85 83 80 -2 -5 -3

Latex, lubricado con silicona: 1 49 49 45 0 -4 -4

2: 52 50 47 -2 -5 -3

3: 59 45 49 -14 -10 +4

Latex, lubricante a base de agua: 1 92 87 89 -5 -3 +2

2: 97 86 90 -11 -7 +4

3: 83 79 83 -4 0 +4

Tipo de condon: Lote de condon % Elongacion Cambio observado

Latex, no lubricado: 1 898 841 845 -57 -53 +4

2: 891 834 837 -57 -54 +3

3: 896 847 846 -49 -50 -1

Latex, lubricado con silicona: 1 814 813 798 -1 -16 -15

2: 801 807 794 +6 -7 -13

3: 831 795 808 -36 -23 + 13

Latex, lubricante a base de agua: 1 825 828 837 +3 + 12 +9

2: 833 821 836 -12 +3 + 15

3: 807 803 815 -4 +8 + 12

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Resultados

La integridad de los condones sobre los que se extendieron las composiciones anticonceptivas y una composicion de placebo, tal y como se midio mediante las propiedades de estallido por aire y la resistencia a la traccion, no se vio 15 comprometida por las composiciones anticonceptivas.

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Un metodo no terapeutico para reducir selectivamente o evitar la concepcion en un animal hembra, que incluye un humano, incluyendo dicho metodo la administration al animal de una cantidad eficaz de una composition anticonceptiva que comprende:

una cantidad eficaz de un compuesto dendrlmero que incluye uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico, o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del compuesto dendrlmero; y un vehlculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto dendrlmero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III

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imagen2

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15

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en las que R representa un grupo de Formula IV:

imagen3

o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. Un metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la sal farmaceuticamente aceptable es una sal metalica seleccionada de entre el grupo que consiste en una o mas sales de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc; una sal organica seleccionada de entre el grupo que consiste en la N,N"-dibenciletilendiamina, la cloroprocaina, la dietanolamina, la etilendiamina, la diciclohexilamina, la meglumina, la (N-metilglucamina) y la procaina; o una sal seleccionada de entre una o mas del grupo que consiste en una amina cuaternaria, una sal de sulfonio y una sal de fosfonio.

3. Un metodo de acuerdo con cualquier reivindicacion anterior, en el que el compuesto dendrimero esta presente en la composicion en una cantidad de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 70 % en peso, basado en el peso total de la composicion.

4. Un metodo de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie de un dispositivo profilactico y es compatible con el mismo.

5. Un dispositivo profilactico que comprende una cantidad eficaz de una composicion anticonceptiva que comprende un compuesto dendrimero que comprende uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico; o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, del compuesto dendrimero; y un vehiculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo; y caracterizado por que la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie del dispositivo profilactico y es compatible con el mismo, en el que el compuesto dendrimero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III

imagen4

imagen5

en las que R representa un grupo de Formula IV:

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imagen6

o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.

6. Un dispositivo profilactico que comprende una composicion anticonceptiva que comprende una cantidad 10 anticonceptiva y antimicrobiana de un compuesto dendrimero que comprende uno o mas grupos terminales de acido naftil disulfonico; o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, del compuesto dendrimero; y un vehiculo, excipiente y/o diluyente farmaceuticamente aceptable del mismo; y caracterizado por que la composicion anticonceptiva es soportada sobre una superficie del dispositivo profilactico y es compatible con el mismo, en el que el compuesto dendrimero se selecciona entre un compuesto de Formula I, II o III

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imagen8

5 en las que R representa un grupo de Formula IV:

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o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo.