ES2555867T3 - Un método de luminiscencia para detectar un analito en una muestra líquida y sistema de análisis - Google Patents

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ES2555867T3 ES12152363.3T ES12152363T ES2555867T3 ES 2555867 T3 ES2555867 T3 ES 2555867T3 ES 12152363 T ES12152363 T ES 12152363T ES 2555867 T3 ES2555867 T3 ES 2555867T3
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Abstract

Un método de luminiscencia para medir la presencia y concentración de un analito en una muestra líquida, comprendiendo el método a) marcar el analito con un marcador capaz de efectuar luminiscencia tras la aplicación de energía de excitación, en el que los datos de referencia (142), que son descriptivos de la desintegración de luminiscencia de la luminiscencia que se va a efectuar por el marcador, se almacenan en una memoria electrónica (140), b) aplicar la energía de excitación para provocar la luminiscencia, c) realizar una medición resuelta en el tiempo de la luminiscencia durante un periodo de tiempo para la adquisición de una señal de medición, d) leer los datos de referencia de la memoria electrónica, e) comparar la señal de medición con la desintegración de luminiscencia descrita por los datos de referencia, f) generar una señal de salida que es indicativa de la presencia y concentración del analito en la muestra líquida usando la señal de medición, g) en el caso de que haya una falta de coincidencia de la señal de medición y la desintegración de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generar una señal de error, en el que los datos de referencia son descriptivos de una ley lineal que relaciona la amplitud máxima de la luminiscencia con un nivel de luminiscencia alcanzado después de un periodo de desintegración predefinido, comprendiendo el método además - determinar la amplitud máxima de la señal de medición, - usar los datos de referencia para calcular el nivel esperado de luminiscencia después del tiempo de desintegración predefinido, - comparar el nivel esperado y la señal de medición al tiempo de desintegración predefinido para determinar si existe la falta de coincidencia.

Description

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DESCRIPCION
Un metodo de luminiscencia para detectar un analito en una muestra Uquida y sistema de analisis Campo de la invencion
La presente invencion se refiere al campo de la deteccion de un analito en una muestra lfquida efectuando luminiscencia, tal como usando un inmunoensayo de luminiscencia y un sistema de analisis respectivo.
Antecedentes y tecnica relacionada
Se han desarrollado numerosos metodos y sistemas para la deteccion y cuantificacion de analitos de interes en sustancias bioqmmicas y biologicas. Los metodos y sistemas que son capaces de medir cantidades traza de microorganismos, productos farmaceuticos, hormonas, virus, anticuerpos, acidos nucleicos y otras protemas son de gran valor para los investigadores y medicos.
Una parte de la tecnica muy sustancial se ha desarrollado basandose en las reacciones de union bien conocidas, por ejemplo, reacciones antigeno-anticuerpo, tecnicas de hibridacion de acido nucleico y sistemas protema-ligando. El alto grado de especificidad en muchos sistemas de union bioqmmicos y biologicos ha conducido a muchos metodos de ensayo y sistemas valiosos en investigacion y diagnostico. Tfpicamente, la existencia de un analito de interes esta indicada por la presencia o ausencia de una "etiqueta" observable fijada a uno o mas de los materiales de union.
Se han desarrollado tecnicas de ensayo quimioluminiscente, donde una muestra que contiene un analito de interes se mezcla con un reactante marcado con una etiqueta quimioluminiscente. La mezcla reactiva se incuba y alguna porcion del reactante marcado se une al analito. Despues de la incubacion, la concentracion de la etiqueta en cualquiera o ambas fracciones puede determinarse por tecnicas quimioluminiscentes. El nivel de quimioluminiscencia determinado en una o ambas fracciones indica la cantidad de analito de interes en la muestra biologica.
Las tecnicas de ensayo electroquimioluminiscentes (ECL) son una mejora respecto a las tecnicas quimioluminiscentes. Proporcionan una medicion sensible y precisa de la presencia y concentracion de un analito de interes. En tales tecnicas, la muestra incubada se expone a un electrodo de trabajo controlado potenciostatica o galvanostaticamente para activar la luminiscencia. En el entorno qrnmico apropiado, tal electroquimioluminiscencia se activa mediante una tension o corriente impresa sobre el electrodo de trabajo en un momento particular y de una manera particular. Se mide la luz producida por la etiqueta e indica la presencia o cantidad de analito. Para una descripcion mas completa de tales tecnicas de ECL, hagase referencia, por ejemplo, a la Patente de Estados Unidos n.° 5.238.808 y el documento WO86/02734.
El documento US 6.881.536 muestra un metodo de ensayo de union espedfica basado en un fenomeno luminiscente en el que una materia en forma de micropartfculas inertes se une espedficamente a uno de los reactantes de union del sistema de ensayo.
El documento US 6.599.473 B1 divulga un analisis de la reaccion de union electroquimioluminiscente (ECL-BBA).
El documento WO 2005/040759 A describe un aparato y un metodo para detectar un analito diana en una muestra formando un complejo fluorescente que comprende el analito diana y una sonda, en el que la desintegracion de fluorescencia y/o en la vida util cambia tras la formacion del complejo. El aparato comprende una fuente de luz pulsatil y un digitalizador para medir la desintegracion fluorescente y/o la vida util del fluoroforo en el complejo.
El documento US 2011/293154 A describe un metodo para caracterizar una muestra por formacion de imagenes de microscopfa de fluorescencia que incluye detectar la intensidad de fluorescencia de una manera resuelta en el tiempo despues de desactivar la radiacion de excitacion para establecer una funcion de desintegracion, que representa la desintegracion de la intensidad de fluorescencia con el tiempo, para una multiplicidad de pfxeles, comparando las funciones de desintegracion asociadas con los pfxeles con al menos una funcion de desintegracion de referencia para establecer un valor de error para uno o mas pfxeles, estando el valor de error asociado con un pixel que es una medida para una desviacion de la funcion de desintegracion asociada con el pixel a partir de la funcion de desintegracion de referencia y generar una imagen de la muestra usando los valores de error.
De acuerdo con ECL-BBA se produce un complejo detectable, cuya concentracion constituye una medida del resultado analftico buscado. Una sustancia de marcado (etiqueta) capaz de efectuar una reaccion ECL se acopla a un reactivo de union espedfica lejos del analito, por ejemplo un anticuerpo. Las especies que comprenden las sustancias de marcado y el reactivo de union se designan como conjugados de etiquetado.
Cuando una sustancia de este tipo se somete a un potencial electrico adecuado en un electrodo de trabajo voltametrico, emite luz que puede medirse fotograficamente. Una segunda sustancia electroqmmicamente activa,
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designada co-reactando, normalmente contribuye a esta reaccion. En la practica, principalmente un complejo de rutenio (rutenio-tris [bipiridilo] se usa como etiqueta para ECL en combinacion con TPA (tripropilamina) como co- reactando. Las dos sustancias electroqmmicamente activas se oxidan ambas tras la aplicacion de tension al electrodo. La perdida posterior de un proton convertira la TPA en una especie fuertemente reductora. La reaccion redox posterior lleva la etiqueta para ECL a un estado excitado desde el cual vuelve al estado inicial con la emision de un foton. La reaccion ECL-etiqueta preferentemente es una reaccion circular, de manera que una molecula de un solo marcador emite una pluralidad de fotones despues de la aplicacion de una tension al electrodo. Las moleculas del complejo ECL marcadas caractensticas para el analisis se fijan a micropartfculas magneticas (perlas). En la practica, se usan perlas de poliestireno magnetizadas que tienen un diametro de tfpicamente 2 a 3 micrometros. La fijacion se efectua mediante un par de parejas de union bioqmmica espedficas. El par estreptavidina biotina ha resultado particularmente ventajoso. Las perlas se recubren con estreptavidina, a las cuales se unira un anticuerpo biotinilado.
Las perlas con el complejo marcado unido se introducen en la celula de medicion de un aparato de medicion. La celula esta equipada con electrodos que son necesarios para generar el campo electrico requerido para desencadenar la reaccion ECL. Las perlas se dirigen sobre la superficie del electrodo de trabajo en el campo magnetico de un iman dispuesto por debajo del electrodo de trabajo. Puesto que esto tfpicamente ocurre en celulas de flujo a traves con fluidos de muestra que fluyen continuamente, la deposicion magnetica de las perlas se designa como "captura". Un potencial electrico requerido para desencadenar la reaccion ECL se aplica despues al electrodo de trabajo y la luz de luminiscencia resultante se mide usando un detector optico adecuado. La intensidad de la luz de luminiscencia se mide para la concentracion del numero de anticuerpos etiquetados acoplados a las perlas en la superficie del electrodo de trabajo que, a su vez, es una medida de la concentracion del analito en la muestra. El calibrado permite realizar calculos de la concentracion buscada a partir de la senal de luminiscencia medida.
Se ha analizado y descrito en la bibliograffa una pluralidad de diferentes variaciones de este tipo de metodo ECL- BBA.
Sumario de la invencion
La invencion proporciona un metodo de luminiscencia mejorado para medir la presencia y concentracion de un analito en una muestra lfquida y un sistema de analisis de acuerdo con las reivindicaciones independientes. Las realizaciones de la invencion se dan en las reivindicaciones dependientes.
De acuerdo con la invencion se mide la presencia y concentracion de un analito en una muestra lfquida marcando el analito con un marcador capaz de efectuar luminiscencia tras la aplicacion de energfa de excitacion, en el que los datos de referencia que son descriptivos de la desintegracion de luminiscencia de la luminiscencia que se va a efectuar por el marcador se almacenan en una memoria electronica, aplicando la energfa de excitacion para provocar la luminiscencia, realizando una medicion resuelta en el tiempo de la luminiscencia durante un periodo de tiempo para adquisicion de una senal de medicion, leyendo los datos de referencia a partir de la memoria electronica, comparando la senal de medicion con la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generando una senal de salida que es indicativa de la presencia del analito en la muestra lfquida usando la senal de medicion, y en el caso de una no coincidencia de la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generar una senal de error.
Un "analito" como se entiende en este documento es un componente de la muestra lfquida que se va a analizar, por ejemplo moleculas de diversos tamanos, protemas, metabolitos y similares.
Una "muestra lfquida" como se entiende en este documento abarca una muestra biologica tal como cualquier clase de tejido o fluido corporal que se ha derivado de un ser humano o cualquier otro organismo. En particular, una muestra biologica puede ser una muestra de sangre, suero, plasma, orina, lfquido cefalorraqrndeo o saliva, o cualquier derivado de los mismos.
El termino "luminiscencia" como se entiende en este documento abarca cualquier clase de luminiscencia tal como luminiscencia inducida por radiacion, quimioluminiscencia y electroquimioluminiscencia, en particular ECL-BBA.
La expresion "inmunoensayo de luminiscencia" como se entiende en este documento abarca cualquier inmunoensayo que produzca una senal optica, es decir, una senal de luminiscencia, que indica la presencia de un analito particular en una muestra lfquida.
El punto de partida de la presente invencion es el sorprendente descubrimiento de que la aplicacion de energfa de excitacion para provocar la luminiscencia puede provocar tambien una senal de interferencia en casos raros. Sorprendentemente, tal senal de interferencia tiene una caractenstica de desintegracion que difiere de la desintegracion de la senal de luminiscencia espedfica que se origina del marcador. La senal interferente puede superponerse sobre la senal de luminiscencia producida por el inmunoensayo de luminiscencia y, por tanto, puede conducir a un resultado de medicion de fallo.
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Las realizaciones de la presente invencion son particularmente ventajosas puesto que este descubrimiento se utiliza para identificar la presencia de una senal de interferencia en la senal de medicion. Si se detecta la presencia de la senal de interferencia, puede generarse una senal de error para informar a un usuario de que la senal de salida que se proporciona en base a la senal de medicion puede ser erronea y puede indicar la presencia de un analito que, de hecho, no esta presente en la muestra lfquida o una concentracion erronea del analito en la muestra lfquida.
Las realizaciones de la invencion son particularmente ventajosas puesto que puede identificarse una senal de interferencia no deseada que esta provocada intencionadamente por la aplicacion de energfa de excitacion y que, de lo contrario, conducina a un resultado de medicion de fallo. Por ejemplo, el componente de la senal de interferencia esta provocado por alguna propiedad ffsica y/o qmmica de las sustancias que estan presentes en la celula de medicion.
Se ha descubierto que la aparicion de tal senal de interferencia es extremadamente rara. No obstante, la identificacion segura de una senal de medicion de fallo que resulta de la superposicion de una senal de interferencia es crucial para evitar un mal diagnostico en tales casos extremadamente raros. Tales senales de interferencia indeseada pueden estar provocadas por la presencia de sustancias autoluminiscentes dentro de la celula de medicion.
Por ejemplo, en casos raros las moleculas autoluminiscentes pueden estar contenidas en una muestra lfquida del paciente en una concentracion que es suficientemente alta para provocar que la senal de interferencia con una potencia de senal sustancial tras la aplicacion de la energfa de excitacion, conduciendo asf a una senal de medicion de fallo. Tal concentracion de moleculas autoluminiscentes puede estar causada por alguna condicion especial, enfermedad rara o patologfa del paciente.
De acuerdo con la invencion, los datos de referencia que describen la degradacion de luminiscencia de la senal de luminiscencia causada por el marcador son descriptivos de una ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la senal de luminiscencia con un nivel de luminiscencia de la senal de luminiscencia alcanzado despues de un tiempo de desintegracion predefinido. Esto se basa en el sorprendente descubrimiento de una relacion lineal de la amplitud maxima de la senal de luminiscencia y el nivel de luminiscencia restante alcanzado despues de un tiempo de desintegracion predefinido. Si una senal de interferencia esta provocada por la aplicacion de la energfa de excitacion, la senal de interferencia se superpone a la senal de luminiscencia de manera que la senal de medicion resultante tiene un tiempo de desintegracion que no satisface esta ley lineal. Esto posibilita detectar la presencia de la senal de interferencia en la senal de medicion.
De acuerdo con las realizaciones de la invencion, se almacena un conjunto de datos de referencia para una pluralidad de analitos e inmunoensayos de luminiscencia. Cada conjunto de datos de referencia es descriptivo de una ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la luminiscencia con un nivel de luminiscencia alcanzado despues de un tiempo de desintegracion que es espedfico para un inmunoensayo que se usa para detectar el analito. Esto esta basado en el sorprendente descubrimiento de que tal ley lineal existe independientemente del inmunoensayo espedfico que se utilice para la deteccion del analito y que esta ley lineal es espedfica para un inmunoensayo de luminiscencia dado. En otras palabras, la relacion entre la amplitud maxima y el nivel de senal restante despues de un tiempo de desintegracion dado siempre es lineal, pero la ordenada y la pendiente de la ley lineal es espedfica para el inmunoensayo de luminiscencia. Las realizaciones de la invencion pueden ser aplicables a diversas clases de tecnicas de luminiscencia, incluyendo quimioluminiscencia y electroquimioluminiscencia, en particular ECL-BBA.
En otro aspecto la presente invencion se refiere a un sistema de analisis para medir la presencia y concentracion de un analito en una muestra lfquida como se define en la reivindicacion 13.
El sistema de analisis comprende una incubadora para recibir un lfquido que comprende el analito y un marcador para marcar el analito, siendo el marcador capaz de efectuar luminiscencia tras la aplicacion de energfa de excitacion, una memoria electronica que almacena datos de referencia que son descriptivos de la desintegracion de luminiscencia de la luminiscencia que se va a efectuar por el marcador, un componente de activacion para aplicar la energfa de excitacion para provocar la luminiscencia, un componente de adquisicion para medicion resuelta en el tiempo de la luminiscencia durante un periodo de tiempo, siendo el componente de adquisicion operativo para proporcionar una senal de medicion, un componente de procesamiento de datos que es operativo para leer los datos de referencia a partir de la memoria electronica, comparar la senal de medicion con la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generar una senal de salida que es indicativa de la presencia del analito en la muestra lfquida usando la senal de medicion, generando, en el caso de una falta de coincidencia de la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, una senal de error.
De acuerdo con las realizaciones de la invencion el tiempo de incubacion puede acortarse y la capacidad de produccion del sistema de analisis, por tanto, puede mejorarse. Esto se debe al hecho de que no es necesario realizar la incubacion hasta que se alcanza un estado de equilibrio. En contraste, un tiempo de incubacion relativamente corto puede ser suficiente para la formacion de un numero relativamente pequeno de intercalaciones que contribuyen a la senal de luminiscencia. Esto se debe a que la senal de luminiscencia producida por las intercalaciones puede ser relativamente debil en comparacion con la senal de interferencia cuando las realizaciones
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de la invencion posibilitan detectar con seguridad la presencia de una senal de interferencia en la senal de medicion, incluso aunque la senal de luminiscencia sea relativamente debil.
De acuerdo con las realizaciones de la invencion se utiliza un inmunoensayo de luminiscencia de intercalacion o de tipo competitivo.
Breve descripcion de los dibujos
En las siguientes realizaciones la invencion se describe con mayor detalle a modo de ejemplo, haciendo solo
referencia a los dibujos, en los que:
La Fig. 1 es un diagrama de bloques de una realizacion de un sistema de analisis de la invencion,
la Fig. 2 es un diagrama que es ilustrativo de la tecnica ECL-BBA,
la Fig. 3 es un diagrama de bloques de otra realizacion de un sistema de analisis que comprende un componente robotico,
la Fig. 4 es un diagrama de flujo que es ilustrativo de una realizacion de un metodo de la invencion,
la Fig. 5 es ilustrativa de la desintegracion de luminiscencia de una senal de luminiscencia que tiene diversas
amplitudes,
la Fig. 6 es un diagrama que es ilustrativo de la ley lineal que relaciona la amplitud maxima de las senales de luminiscencia representadas en la Fig. 5 con un nivel de senal del luminiscencia restante alcanzado despues de un tiempo de desintegracion t,
la Fig. 7 es ilustrativa de las caractensticas de desintegracion de una senal de interferencia sin la presencia de una senal de luminiscencia espedfica para el analito para diversas amplitudes de la senal de interferencia,
la Fig. 8 es ilustrativa de la ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la senal de interferencia con un nivel de senal alcanzado despues de un tiempo de desintegracion t,
la Fig. 9 es ilustrativa de las caractensticas de desintegracion de las senales de luminiscencia y las senales de interferencia,
la Fig. 10 es ilustrativa de una senal de luminiscencia sin una senal de interferencia superpuesta en comparacion con una senal de medicion que es el resultado de la superposicion de una senal de luminiscencia y una senal de interferencia,
la Fig. 11 es ilustrativa de las leyes lineales espedficas para el ensayo que relaciona la amplitud maxima de la senal de luminiscencia con un nivel de senal de luminiscencia alcanzado despues de un tiempo de desintegracion t desde la senal de activacion.
Descripcion detallada
A lo largo de la siguiente descripcion de realizaciones de la invencion los elementos iguales o identicos se designaran con numeros de referencia identicos.
La Fig. 1 muestra un sistema de analisis 100 para detectar un analito en una muestra lfquida. El sistema de analisis 100 comprende una incubadora 102 para recibir un lfquido 104 que es una mezcla de una alfcuota de la muestra lfquida y un marcador para marcar el analito, tal como un inmunoensayo de luminiscencia.
El sistema de analisis 100 comprende un deposito 106 que contiene el co-reactante de la reaccion electroqmmica que provoca la luminiscencia. La incubadora 102 y el deposito 106 estan acoplados a una celula de medicion 108 del sistema de analisis por un sistema de tubenas 110 a traves del cual una porcion del lfquido 104 y el co-reactante puede fluir hacia la celula de medicion 108.
La celula de medicion 108 comprende un cuerpo de la celula 112 que tiene un conducto 114 para recibir una porcion del lfquido 104 y del co-reactante a traves del sistema de tubenas 110. La celula de medicion 108 tiene un componente magnetico 116, tal como un iman permanente, para proporcionar un campo magnetico en la celula de medicion. El componente magnetico 116 puede acoplarse a un accionador 118 para hacer girar el componente magnetico 116 hacia y desde el conducto 114 para conectar o desconectar el campo magnetico dentro del conducto.
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El componente magnetico 116 esta situado por debajo de un electrodo de trabajo 120 que esta acoplado a una fuente de tension 122. Se forma un area de excitacion 124 en el conducto 114 dentro del campo magnetico provocado por el componente magnetico 116 sobre el electrodo de trabajo 120.
La luminiscencia provocada en el area de excitacion 124 por la aplicacion de la energfa de excitacion, es decir, la aplicacion de un pulso de activacion voltaico sobre el electrodo de trabajo 120, se mide mediante un sensor optico, tal como un fotomultiplicador 126. El sensor optico es sensible dentro de un cierto intervalo de frecuencia, de manera que proporciona una senal de medicion a la cual puede contribuir una senal de interferencia, tal como una senal de luminiscencia causada por moleculas autoluminiscentes que pueden estar presentes en la celula de medicion, con la condicion de que la luminiscencia este dentro del intervalo de frecuencia del sensor.
El fotomultiplicador 126 esta situado enfrente del area de excitacion 124 sobre una ventana formada por contraelectrodos 128 del electrodo de trabajo 120 a traves de los cuales los fotones de luminiscencia y cualquiera de los fotones de interferencia provocados por la energfa de excitacion chocan sobre el fotomultiplicador 126. Se proporciona una senal de medicion resuelta en el tiempo resultante 130 desde el fotomultiplicador 126 a una unidad de control 132 del sistema de analisis 100.
Despues de que se haya realizado una medicion el lfquido contenido dentro del conducto 114 se retira a un recipiente de residuos lfquidos 134 y la celula de medicion 108 se regenera para una adquisicion posterior de una senal de medicion.
La unidad de control 132 esta acoplada a la fuente de tension 122 para controlar la fuente de tension 122 para aplicar la senal de inicio al electrodo de trabajo 120. La unidad de control 132 esta acoplada tambien al accionador 118 para controlar el accionador 118 para conectar y desconectar el campo magnetico moviendo el iman permanente de forma correspondiente.
Ademas, la unidad de control 132 puede acoplarse a una "unidad de succion", es decir, una bomba 136 para extraer una porcion del lfquido 104 de la incubadora 102 y una porcion del co-reactante del deposito 106 asf como para retirar el lfquido de la celula de medicion 108 y la regeneracion de la celula de medicion. Ademas, la unidad de control 132 puede acoplarse a los componentes roboticos adicionales tales como una estacion de pipeteado (cf. realizacion de la Fig. 3).
La celula de medicion 108 puede adaptarse para realizar ECL-BBA usando diversos inmunoensayos de luminiscencia.
Por ejemplo, el lfquido 104 puede contener una mezcla de una alfcuota de la muestra lfquida, partfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, anticuerpos biotinilados y anticuerpos rutenilados para formar lo que se denomina "intercalado" mientras que el co-reactante contenido en el deposito 106 es tripropilamina. Por tanto, las partfculas magneticas 138 con una etiqueta unida fluyen dentro del conducto 114. Las partfculas magneticas 138 se inmovilizan sobre el electrodo de trabajo 120 cuando el campo magnetico esta conectado. A continuacion, se aplica un pulso de activacion sobre el electrodo de trabajo 120 para provocar la electroquimioluminiscencia de acuerdo con la tecnica ECL-BBA.
La unidad de control 132 tiene una memoria electronica 140 para almacenar datos de referencia 142 que describen la degradacion de luminiscencia de una senal de medicion valida sin una senal de interferencia superpuesta. Estos datos de referencia son espedficos para el inmunoensayo de luminiscencia que se utiliza para la deteccion del analito.
En la realizacion considerada en este caso los datos de referencia 142 se almacenan en una tabla de consulta o tabla de base de datos. Los datos de referencia comprenden un conjunto de datos de referencia para cada inmunoensayo de luminiscencia soportado por el sistema de analisis 100. Por ejemplo, para cada inmunoensayo soportado se almacenan dos coeficientes a y b, asf como un tiempo t, en la memoria 140. Los coeficientes a y b describen una ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la senal de luminiscencia con un nivel de luminiscencia alcanzado despues de un tiempo de desintegracion t. Almacenar el tiempo de desintegracion t como parte de los datos de referencia puede ser superfluo si el tiempo de desintegracion t considerado es siempre el mismo.
La unidad de control 132 tiene al menos un procesador electronico 144 para ejecutar los modulos de programacion 146 y 148. El procesador 144 ejecuta el modulo de programa 146 para la adquisicion de la senal de medicion 130 mientras que el procesador 144 ejecuta el modulo de programa 148 para la evaluacion de la senal de medicion adquirida 130.
La unidad de control 132 tiene una interfaz 150 para acoplar una pantalla 152 u otra interfaz hombre-maquina a la unidad de control 132. La interfaz 150 puede implementarse como un interfaz de usuario grafico para mostrar una ventana 154 para una seleccion de usuarios de uno de los inmunoensayos de luminiscencia soportados por el sistema de analisis 100 asf como una ventana 156 para mostrar un resultado del analisis.
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El resultado del analisis realizado por el sistema de analisis 100 puede producirse como datos tabulares como se representa en la Fig. 1, en la que la columna A indica el analito se va a detectar y la columna C indica la concentracion del analito que se ha detectado. La columna E sirve para indicar si la concentracion detectada puede ser erronea, tal como mostrando una marca u otra senal o sfmbolo de aviso, tal como un signo de interrogacion o exclamacion rojo.
Durante el funcionamiento un usuario selecciona uno de los inmunoensayos de luminiscencia soportados por el sistema de analisis 100 introduciendo una seleccion respectiva en la ventana 154. El analisis de la muestra lfquida se inicia por ejecucion del modulo de programa 146, de manera que la bomba 136 esta controlada para transportar una parte del lfquido 104 y del co-reactivo al conducto 114.
A continuacion, el accionador 118 se controla para llevar el iman permanente a una posicion tal que su campo magnetico se aplique al conducto 114 para inmovilizacion de las partfculas magneticas con sus etiquetas unidas sobre el electrodo de trabajo 120. A continuacion, la fuente de tension 122 se controla para aplicar el pulso de activacion sobre el electrodo de trabajo para excitacion de la luminiscencia, de manera que se obtiene como resultado la senal de medicion 130.
La senal de medicion 130 se adquiere muestreando la salida del fotomultiplicador 126 durante un periodo de tiempo dado, tal como 2 segundos despues de la aplicacion del pulso del disparador por la fuente de tension 122, para medicion resuelta en el tiempo de la luminiscencia.
Las muestras de datos que constituyen la senal de medicion 130 se almacenan dentro de la memoria 140 de la unidad de control 132 y el modulo de programa 148 se inicia para evaluacion de la senal de medicion 130 adquirida. Por ejecucion del modulo de programa 148 se determina la amplitud de la senal de medicion 130. A continuacion, el modulo de programa 148 realiza un acceso de lectura a los datos de referencia 142 leyendo los coeficientes a y b del inmunoensayo seleccionado por el usuario asf como el tiempo t.
Mediante la ley lineal descrita por a y b el nivel de senal esperada alcanzado por la senal de medicion 130 despues del tiempo t se calcula y se compara con el nivel de senal real de la senal de medicion 130 despues de ese tiempo t. En caso de que no haya coincidencia, es decir, si el nivel de senal real de la senal de medicion 130 es un margen predefinido por debajo o por encima del nivel de senal esperado, se detecta una falta de coincidencia y, por tanto, la presencia de una senal de interferencia superpuesta.
A continuacion, se determina la concentracion C del analito, si la hubiera, en el lfquido por el modulo de programa 148 mediante la senal de medicion 130 y la concentracion C determinada se marca mediante una senal de error E si se ha detectado una falta de coincidencia. A continuacion, la bomba 136 se controla por la unidad de control 132 para retirar el lfquido del conducto 114 y se regenera la celula de medicion 108.
La Fig. 2 es ilustrativa del "intercalado" que se forma dentro de la incubadora 102 y al que se aplica el pulso de activacion dentro del area de excitacion 124 en el electrodo de trabajo 120. En la realizacion considerada en este caso, cada una de las partfculas magneticas 138 tiene un diametro de aproximadamente 2,8 micrometros. La partfcula magnetica 138 se une a un anticuerpo biotinilado 156 del inmunoensayo que se elige dependiendo del analito 160 que se va a detectar. Un complejo de rutenio (rutenio-tris [bipiridilo]) unido a un anticuerpo 162, que se elige dependiendo del analito 160, se utiliza como un marcador luminiscente en la realizacion considerada en este caso.
Tras la aplicacion del pulso de activacion voltaica se induce una reaccion electroqmmica con la tripropilamina de acuerdo con la tecnica ECL-BBA de manera que se provoca luminiscencia.
La Fig. 3 muestra una realizacion adicional del sistema de analisis 100. El sistema de analisis 100 tiene un rotor 164 para recibir receptaculos, tal como tubos de muestra, donde cada tubo de muestra contiene una muestra lfquida. El rotor 164 puede mantener un numero de tubos de muestra para proporcionar acceso aleatorio a un pipeteador 176.
El sistema de analisis 100 tiene un segundo rotor 166 para recibir los receptaculos 168 que contienen micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los receptaculos 170 que contienen anticuerpos biotinilados y los receptaculos 172 que contienen anticuerpos rutenilados. El segundo rotor puede implementarse como un disco de reactivos, como se muestra en la Fig. 3, para proporcionar acceso del pipeteador 176 a los diversos reactivos contenidos en los receptaculos 168, 170 y 172.
El sistema de analisis 100 tiene un componente robotico para proporcionar una mezcla a la incubadora 102. En la realizacion considerada en este caso, la unidad de control 132 controla el componente robotico y comprende una estacion de pipeteado 174 que tiene el pipeteador 176.
Durante el funcionamiento la unidad de control 132 controla el pipeteador 176 para extraer una alfcuota de la muestra lfquida de uno de los tubos de muestra sostenidos por el rotor 164 y extraer porciones de las partfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los anticuerpos biotinilados y los anticuerpos rutenilados de los
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receptaculos 168, 170 y 172, respectivamente, para proporcionar la mezcla que despues se pone en la incubadora 102 para incubacion durante una cantidad de tiempo predeterminada, tal como de 9 a 27 min.
La unidad de control 132 controla la "succion", por ejemplo la bomba 136 (cf. Fig. 1), de manera que la mezcla lfquida fluye desde la incubadora 102 hasta el conducto 114 de la celula de medicion 108 junto con el co-reactante, es decir tripropilamina. A continuacion, la unidad de control 132 controla el accionador 118 (cf. Fig. 1) para conectar el campo magnetico y despues la fuente de tension 122 para aplicar el pulso de activacion voltaica.
La senal de medicion 130 resultante se adquiere por la unidad de control 132 muestreando la salida del fotomultiplicador 126.
En caso de que la senal de error se genere por el modulo de programa 148 (cf. Fig. 1) se realiza una re-ejecucion para intentar una adquisicion correcta de la senal de medicion 130 sin una senal de interferencia superpuesta. Esto se realiza por limpieza y regeneracion de la celula de medicion 108, seguido de una ejecucion repetida de la secuencia completa empezando con la extraccion de otra alfcuota de la muestra lfquida que se va a analizar.
La Fig. 4 muestra un diagrama de flujo respectivo. En la etapa 200 el pipeteador del sistema de analisis funciona para proporcionar la mezcla de una alfcuota de la muestra lfquida que se va a analizar, las micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los anticuerpos biotinilados y los anticuerpos rutenilados. Esta mezcla se incuba durante un periodo de tiempo predefinido en la etapa 202 antes de que se transporte junto con tripropilamina (TPA) a la celula de medicion en la etapa 204.
En la etapa 206, el campo magnetico se intercambia de manera que las micropartfculas magneticas unidas se atraen hacia el electrodo de trabajo en el area de excitacion 124 (cf. Fig. 1). En la etapa 208 se aplica un potencial electrico al electrodo de trabajo para proporcionar un pulso de activacion que provoca la luminiscencia. En la etapa 210 la luminiscencia resultante se mide durante un periodo de tiempo dado, tal como muestreando la senal de salida proporcionada por el fotomultiplicador. En casos raros una senal de interferencia tambien esta provocada por el pulso de activacion. En tal caso raro la senal de medicion resulta de la superposicion de la senal de luminiscencia y la senal de interferencia.
En la etapa 212 se determina la amplitud maxima, es decir, el nivel de senal maximo, de la senal de medicion adquirida y en la etapa 214 se lee un conjunto de datos de referencia a partir de la memoria electronica del sistema de analisis. El conjunto de datos de referencia especifica una ley lineal que relaciona una amplitud maxima medida con un nivel de senal restante esperado despues de un tiempo de desintegracion predefinido t.
En la etapa 216 se calcula el nivel de senal esperado despues del tiempo t usando el conjunto de datos de referencia y la amplitud medida de la senal de medicion. En la etapa 218 se determina si hay una falta de coincidencia entre el nivel de senal esperado y el nivel de senal real de la senal de medicion despues del tiempo t existente. Si este es el caso, se genera una senal de error en la etapa 220 que se produce junto con el resultado de la medicion en la etapa 222. Si no ocurre falta de coincidencia, el control pasa directamente de la etapa 218 a la etapa 222. El resultado de medicion, es decir, la presencia y concentracion del analito, se obtiene de la senal de medicion usando una informacion de calibrado apropiada, tal como se conoce de la tecnica anterior.
La Fig. 5 muestra diversas senales de medicion 130 que se adquieren en un intervalo de tiempo de 2 segundos desde el pulso de activacion a t=0 segundos. Las senales de medicion mostradas en la Fig. 5 son senales de luminiscencia que no tienen una senal de interferencia superpuesta.
La Fig. 6 muestra un diagrama que se obtiene de las senales de medicion representadas en la Fig. 5 que relaciona la amplitud ("senal maxima") de las senales de medicion con el nivel de senal restante en el tiempo t. Como resulta evidente a partir de la Fig. 6 hay una ley lineal que relaciona la amplitud de la senal de luminiscencia con el nivel de senal restante despues del tiempo t, donde se dan tres curvas ejemplares en la Fig. 6 para los tiempos de desintegracion t-i=385 milisegundos, t2=885 milisegundos y t3=1385 milisegundos.
La Fig. 7 muestra otro conjunto de senales de medicion que se han adquirido sin la presencia de un marcador y, de esta manera, sin una senal de luminiscencia. De esta manera, las senales de medicion representadas en la Fig. 7 son senales de interferencia puras que no estan causadas por un marcador. La Fig. 7 muestra el nivel de senal de cada senal de interferencia que empieza con el pulso de activacion con el tiempo. Como se muestra en la Fig. 7, las senales de interferencia que estan provocadas por el pulso de activacion tienen tambien una desintegracion de senal caractenstica que, sin embargo, es diferente de las senales de luminiscencia representadas en la Fig. 5, puesto que la desintegracion de senal es mas lenta para la senal de interferencia.
La Fig. 8 es un diagrama basado en los datos mostrados en la Fig.7 analoga a la Fig. 6. Como resulta evidente de la Fig. 8, la relacion entre las amplitudes de las senales de interferencia con la senal restante despues de un tiempo dado tambien es de una naturaleza lineal.
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Las Figs. 9a a 9d muestran diagramas que ilustran las diferentes caractensticas de desintegracion de luminiscencia con el tiempo de una senal de luminiscencia 176 que se origina del marcador y de una senal de interferencia 178 que tambien esta provocada por la energfa de excitacion, por ejemplo el pulso de activacion voltaica, pero tiene otro origen, tal como una impureza. Como es evidente a partir de la Fig. 9, la desintegracion de la senal de la senal de interferencia 178 es mas lenta en comparacion con la senal de luminiscencia 176, independientemente de las amplitudes de senal en el tiempo t=0.
Cada una de las Figs. 10a y 10b muestra una senal de luminiscencia 176 que se ha medido usando los inmunoensayos para la deteccion de los analitos Troponina T y CEA, respectivamente.
La senal de superposicion 180 que se representa tambien en las Fig. 10a y b tiene aproximadamente la misma amplitud que la senal de luminiscencia 176 y consiste en la superposicion de una senal de luminiscencia 176 con la senal de interferencia 178. Como es evidente a partir de las Figs. 10a y b, la senal de superposicion 180 tiene una caractenstica de desintegracion mas lenta en comparacion con la senal de luminiscencia 176, debido a la senal de interferencia superpuesta 178.
Las diferentes caractensticas de desintegracion de la senal de luminiscencia 176 y la senal de superposicion 180 posibilitan identificar una medicion de fallo que es el resultado de la excitacion no solo de la senal de luminiscencia 176 sino tambien de una senal de interferencia 178. Esto posibilita identificar una senal de superposicion 180 que contiene un error, de manera que el resultado de medicion respectivo puede ignorarse y puede realizarse una re- ejecucion.
La Fig. 11a ilustra la relacion lineal entre la amplitud de una senal de luminiscencia 176 en el tiempo t=0 cuando se aplica la energfa de excitacion y el nivel de senal restante despues de un tiempo de desintegracion t para tiempos de desintegracion t-i, t2 y t3. La Fig. 11a muestra esta ley lineal para el inmunoensayo de Troponina T mientras que las Fig. 11b y c muestran esta relacion lineal para los inmunoensayos CEA y CA 15-3. Como resulta evidente a partir de las Figs. 11a, b y c al menos las pendientes de las relaciones lineales son espedficas para el ensayo y la relacion tal cual siempre es de una naturaleza lineal.
Troponina T CEA
tiempo de desintegracion t[ms] despues del pulso
385 = 885 = 1385 = 385 = 885 = 1385 =
de activacion
t1 t2 t3 t1 t2 t3
a
1,27 1,63 1,96 1,42 1,53 2,03
b
0,33 0,16 0,10 0,29 0,14 0,08
La tabla anterior muestra conjuntos de datos de referencia de esta ley lineal para los inmunoensayos de troponina T y CEA. Cada conjunto de datos de referencia comprende el coeficiente a y b para los tiempos t1, t2 y t3 donde a es la ordenada y b es la pendiente, de manera que el nivel de senal restante y despues de un tiempo de desintegracion t dado se calcula como y=a+bx donde x es la amplitud de la senal medida en el tiempo t=0, es decir, el tiempo cuando se aplica la energfa de excitacion.
Para determinar una falta de coincidencia entre la senal de medicion real y la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia se determina la amplitud de la senal de medicion y se calcula el nivel de senal restante esperado, tal como el tiempo t1, que produce el nivel de senal restante esperado y para ese tiempo t1. Si el nivel de senal restante real de la senal de medicion difiere mas que un margen predefinido del nivel de senal esperado, se identifica una falta de coincidencia y, por tanto, la presencia de una senal de interferencia 178.
Lista de numeros de referencia

Sistema de analisis 100

Incubadora 102

Lfquido 104

Deposito 106

Celula de medicion 108

Un sistema de tuberias 110

Cuerpo de la celula 112

Conducto 114

Componente magnetico 116

Accionador 118

Electrodo de trabajo 120

Fuente de tension 122

Area de excitacion 124

Fotomultiplicador 126

Contraelectrodo 128

Senal de medicion 130
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Unidad de control
Recipiente
Bomba
Partfcula
Memoria
Datos de referencia
Procesador
Modulo de programa
Modulo de programa
Interfaz
Pantalla
Ventana
Ventana
Anticuerpo biotinilado Analito
Anticuerpo rutenilado
Rotor
Rotor
Receptaculos Receptaculos Estacion del pipeteado Senal de luminiscencia Senal de interferencia Senal de superposicion
132
134
136
138
140
142
144
146
148
150
152
154
156
158
160
162
164
166
170
172
174
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Claims (18)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un metodo de luminiscencia para medir la presencia y concentracion de un analito en una muestra Ifquida, comprendiendo el metodo
    a) marcar el analito con un marcador capaz de efectuar luminiscencia tras la aplicacion de ene^a de excitacion, en el que los datos de referencia (142), que son descriptivos de la desintegracion de luminiscencia de la luminiscencia que se va a efectuar por el marcador, se almacenan en una memoria electronica (140),
    b) aplicar la energfa de excitacion para provocar la luminiscencia,
    c) realizar una medicion resuelta en el tiempo de la luminiscencia durante un periodo de tiempo para la adquisicion de una senal de medicion,
    d) leer los datos de referencia de la memoria electronica,
    e) comparar la senal de medicion con la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia,
    f) generar una senal de salida que es indicativa de la presencia y concentracion del analito en la muestra lfquida usando la senal de medicion,
    g) en el caso de que haya una falta de coincidencia de la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generar una senal de error,
    en el que los datos de referencia son descriptivos de una ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la luminiscencia con un nivel de luminiscencia alcanzado despues de un periodo de desintegracion predefinido, comprendiendo el metodo ademas
    - determinar la amplitud maxima de la senal de medicion,
    - usar los datos de referencia para calcular el nivel esperado de luminiscencia despues del tiempo de desintegracion predefinido,
    - comparar el nivel esperado y la senal de medicion al tiempo de desintegracion predefinido para determinar si existe la falta de coincidencia.
  2. 2. El metodo de luminiscencia de la reivindicacion 1, comprendiendo los datos de referencia conjuntos de datos de referencia para una pluralidad de analitos, teniendo cada analito un conjunto de datos de referencia asignado y que comprende ademas
    - recibir una senal que es indicativa de uno de los analitos que se van a detectar en la muestra lfquida,
    - seleccionar uno de los conjuntos de datos de referencia de los datos de referencia que estan asignados al analito indicado por la senal recibida, y
    - usar el conjunto de datos de referencia seleccionado para realizar la comparacion entre la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por el conjunto de datos de referencia.
  3. 3. El metodo de luminiscencia de la reivindicacion 1 o 2, que comprende ademas asignar la senal de error a la senal de salida y mostrar la senal de salida y la senal de error asignada como datos tubulares.
  4. 4. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la senal de salida esta etiqueta como senal de error.
  5. 5. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende ademas, en respuesta a la senal de error, realizar una re-ejecucion repitiendo la ejecucion de al menos las etapas b) a g).
  6. 6. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la energfa de excitacion se aplica aplicando energfa electrica, energfa de radiacion y/o energfa qmmica.
  7. 7. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, siendo el marcador capaz de efectuar electroquimioluminiscencia, en el que una sustancia electroqmmicamente activa contribuye a una reaccion de electroquimioluminiscencia con el marcador resultante en la luminiscencia.
  8. 8. El metodo de luminiscencia de la reivindicacion 7, que comprende ademas
    - llevar a cabo una secuencia de reaccion que comprende al menos una reaccion de union bioqmmica espedfica para formar un complejo como resultado de la presencia del analito en la muestra lfquida, comprendiendo el complejo el marcador y estando unido dicho complejo ademas a una micropartfcula magnetica (138),
    - llevar a cabo un ciclo de deteccion en una celula de medicion que tiene un electrodo de trabajo (120) para la determinacion de la presencia de dicho analito, comprendiendo dicho ciclo de deteccion una etapa de captura durante la cual el complejo entra en contacto con el electrodo de trabajo (120) de tal manera que dicha micropartfcula se ve atrafda por el campo magnetico de un componente magnetico (116) situado en el lado del electrodo de trabajo orientado hacia el lado contrario de la muestra, depositandose de esta manera sobre la superficie de dicho electrodo de trabajo orientado hacia la muestra, y aplicar un potencial al electrodo de trabajo para
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    iniciar la reaccion de electroquimioluminiscencia del marcador, provocando la sustancia electroqmmicamente activa la luminiscencia del marcador para determinar asf la presencia de un analito en la muestra lfquida.
  9. 9. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, siendo el marcador un complejo de rutenio y siendo tripropilamina la sustancia electroqmmicamente activa.
  10. 10. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la luminiscencia se mide usando un sensor optico (126), y en el que la senal de medicion se adquiere muestreando una senal de salida del sensor optico.
  11. 11. El metodo de luminiscencia de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende ademas
    - mezclar una porcion de la muestra lfquida con micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, anticuerpos biotinilados y anticuerpos rutenilados,
    - incubar la mezcla que comprende el analito, las micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los anticuerpos biotinilados y los anticuerpos rutenilados en una incubadora (102), de manera que se forma una intercalacion,
    - transportar una porcion de la mezcla de la incubadora a una celula de medicion y transportar tripropilamina a la celula de medicion,
    - aplicar un campo magnetico a la celula de medicion para adhesion magnetica de las micropartfculas magneticas a un electrodo de trabajo de la celula de medicion antes de la aplicacion de la energfa de excitacion.
  12. 12. El metodo de luminiscencia de la reivindicacion 11, en el que la mezcla de incuba durante una cantidad de tiempo predeterminada sin alcanzar un estado de equilibrio antes de que la porcion de la mezcla se transporte a la celula de medicion para realizar la medicion resuelta en el tiempo.
  13. 13. Un sistema de analisis para medir la presencia y concentracion de un analito en una muestra lfquida que comprende
    - una incubadora (102) para recibir un lfquido (104) que comprende el analito y un marcador para marcar el
    analito,
    siendo capaz el marcador de efectuar luminiscencia tras la aplicacion de la energfa de excitacion,
    - una memoria electronica (140) que almacena datos de referencia que son descriptivos de la desintegracion de luminiscencia de la luminiscencia que va a efectuar el marcador,
    - un componente de activacion (122) para aplicar energfa de excitacion para provocar la luminiscencia,
    - un componente de adquisicion (126) para realizar una medicion resuelta en el tiempo de la luminiscencia durante un periodo de tiempo, siendo operativo el componente de adquisicion para proporcionar la senal de medicion,
    - un componente de procesamiento de datos (144) que es operativo para
    • leer los datos de referencia de la memoria electronica,
    • comparar la senal de medicion con la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia,
    • generar una senal de salida que es indicativa de la presencia y concentracion del analito en la muestra lfquida usando la senal de medicion,
    • en caso de una falta de coincidencia de la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia, generar una senal de error,
    en el que los datos de referencia son descriptivos de una ley lineal que relaciona la amplitud maxima de la luminiscencia con un nivel de luminiscencia alcanzado despues de tiempo de desintegracion predefinido y el componente de procesamiento de datos es operativo para comparar la senal de medicion con la desintegracion de luminiscencia descrita por los datos de referencia realizando las etapas de
    - determinar la amplitud maxima de la senal de medicion,
    - usar los datos de referencia para calcular un nivel esperado de luminiscencia despues del tiempo de desintegracion predefinido usando la amplitud maxima,
    - comparar el nivel esperado y la senal de medicion en el tiempo de desintegracion predefinido para determinar si existe una falta de coincidencia.
  14. 14. El sistema de analisis de la reivindicacion 13, comprendiendo los datos de referencia un conjunto de datos de referencia para una pluralidad de analitos, teniendo cada analito un conjunto de datos de referencia asignado, y que comprende ademas una interfaz (150) para recibir una senal que es indicativa de uno de los analitos que se quiere detectar en la muestra lfquida, siendo operativo el componente de procesamiento de datos para seleccionar uno de los conjuntos de datos de referencia de los datos de referencia que estan asignados al analito indicado por la senal recibida y para usar el conjunto de datos de referencia seleccionado para realizar la comparacion entre la senal de medicion y la desintegracion de luminiscencia descrita por el conjunto de datos de referencia.
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  15. 15. El sistema de analisis de la reivindicacion 14, siendo cada conjunto de datos de referencia descriptivo de una ley lineal espedfica para el ensayo que es descriptiva de la desintegracion de luminiscencia.
  16. 16. El sistema de analisis de la reivindicacion 14 o 15, siendo cada conjunto de datos de referencia descriptivo de un nivel de senal esperado de la senal de medicion a un intervalo de tiempo predefinido despues de la aplicacion de la energfa de excitacion como una funcion de la amplitud maxima de la senal de medicion.
  17. 17. El sistema de analisis de cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, que comprende ademas un primer receptaculo (168) que contiene micropartfculas magneticas (138) recubiertas con estreptavidina, un segundo receptaculo (170) que contiene anticuerpos biotinilados (156), un tercer receptaculo (172) que contiene anticuerpos rutenilados (162), un componente robotico (176) para proporcionar una mezcla que comprende una porcion de la muestra lfquida, las micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los anticuerpos biotinilados, y el anticuerpo rutenilado a la incubadora, de manera que se forma en la incubadora una intercalacion que comprende el analito, las micropartfculas magneticas recubiertas con estreptavidina, los anticuerpos biotinilados y los anticuerpos rutenilados, un componente de transporte (110, 136) para transportar una porcion de la mezcla de la incubadora a una celula de medicion y para transportar tripropilamina a la celula de medicion, un componente magnetico (116) para proporcionar un campo magnetico en la celula medicion para la adhesion magnetica de las micropartfculas magneticas, y un componente de control (132) para controlar el componente robotico, el componente de transporte, el componente magnetico, el componente de activacion y el componente de adquisicion, de manera que la mezcla se incuba en la incubadora durante una cantidad de tiempo predeterminada sin alcanzar un estado de equilibrio antes de que la porcion de la mezcla se transporte a la celula de medicion para realizar la medicion resuelta en el tiempo.
  18. 18. El sistema de analisis de la reivindicacion 17, siendo el componente de control operativo para realizar una re- ejecucion como respuesta a la senal de error, en el que el componente robotico se controla para proporcionar a la mezcla, otra porcion de la muestra lfquida para la re-ejecucion.
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