ES2539026T3 - Anticuerpos anti-T. cruzi y métodos de uso - Google Patents

Anticuerpos anti-T. cruzi y métodos de uso Download PDF

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Abstract

Un reactivo de inmunodiagnóstico que comprende uno o más anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de T. cruzi, en donde dicho uno o más anticuerpos son específicos para el polipéptido FP3 de T. cruzi del SEQ ID NO: 2, y en donde dichos uno o más anticuerpos se seleccionan del grupo que consiste en; (i) un anticuerpo quimérico que tiene una región VH que comprende una secuencia de aminoácidos como la mostrada en el SEQ ID NO: 12 y que tiene una región VL que comprende una secuencia de aminoácidos como la mostrada en el SEQ ID NO: 10; (ii) el anticuerpo quimérico expresado por la línea celular depositada en la Colección de Tejidos Tipo Americana con el Número de Acceso PTA-8136; y (iii) el anticuerpo expresado por la línea celular depositada en la Colección de Tejidos Tipo Americana con el Número de Acceso PTA-8139.

Description

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en las bases 1551-2021; un promotor se localiza en las bases 2023-2744; un péptido señal de la cadena pesada se localiza en las bases 2772-2828; un gen de VH se localiza en las bases 2829-3188; una IgG1 constante humana, z, no a se localiza en las bases 3189-4181; una poli A de SV40 se localiza en las bases 4213-4407; un promotor de SV40 se localiza en las bases 4678-5223; un DHFR murino se localiza en las bases 5251-5814; una poli A de TK se localiza en las bases 5841-6207; un intensificador se localiza en las bases 6235-6705; un promotor se localiza en las bases 6706-7427; un péptido señal kappa se localiza en las bases 7454-7519; un gen de VL se localiza en las bases 7520-7855; una cadena kappa constante humana se localiza en las bases 7856-8179; una poli A de SV40 se localiza en las bases 8192-8386; y un origen de pUC en las bases 8753-9426 (complementarias).
Descripción detallada
El alcance de la presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas. Otros aspectos de la descripción que no entran dentro del alcance de la presente invención definido por las presentes reivindicaciones se presentan con fines comparativos.
La presente descripción proporciona, entre otras cosas, métodos, análisis y kits para detectar o cuantificar antígenos de Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi. De acuerdo con una realización de la presente descripción, los anticuerpos recombinantes de la descripción, incluyendo los anticuerpos quiméricos, se unen específicamente a las regiones relevantes para el diagnóstico de proteínas de T. cruzi y por lo tanto son adecuados para su uso, por ejemplo, como reactivos de diagnóstico para la detección de T. cruzi, y/o como reactivos de normalización o reactivos de control positivo en los análisis parala detección de T. cruzi.
La presente descripción también proporciona por lo tanto un reactivo de inmunodiagnóstico que comprende uno o más anticuerpos recombinantes, incluyendo anticuerpos quiméricos, en donde cada anticuerpo es capaz de unirse específicamente a una región relevante para el diagnóstico de una proteína de T. cruzi. Los anticuerpos recombinantes pueden ser, por ejemplo, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, fragmentos de anticuerpos, y similares. En otra realización, el reactivo de inmunodiagnóstico comprende dos o más anticuerpos recombinantes, incluyendo anticuerpos quiméricos. Opcionalmente, los anticuerpos utilizados en el reactivo de inmunodiagnóstico son cada uno específicos para un proteína antigénica de T. cruzi diferente , de tal manera que el reactivo de inmunodiagnóstico es capaz de detectar una pluralidad de antígenos de T. cruzi. Opcionalmente, el reactivo de inmunodiagnóstico comprende al menos uno o más, o al menos dos o más, anticuerpos recombinantes específicos para los antígenos de T. cruzi seleccionados del grupo que consiste en un anticuerpo recombinante específico para el antígeno de Chagas FP3, un anticuerpo recombinante específico para el antígeno FP6 de Chagas, un anticuerpo recombinante específico para el antígeno FP10 de Chagas, y un anticuerpo recombinante específico para el antígeno FRA de Chagas. En otra realización más, el anticuerpo o los anticuerpos del reactivo de inmunodiagnóstico son nuevos anticuerpos monoclonales producidos por las líneas celulares de hibridoma y son específicos para los antígenos de T. cruzi seleccionados del grupo que consiste en un anticuerpo monoclonal específico para el antígeno FP3 de Chagas, un anticuerpo monoclonal específico para el antígeno FP6 de Chagas, un anticuerpo monoclonal específico para el antígeno FP10 de Chagas, y un anticuerpo monoclonal específico para el antígeno FRA de Chagas.
En una realización, la presente descripción proporciona el uso del reactivo de inmunodiagnóstico como un reactivo de normalización en un análisis de detección T. cruzi, por ejemplo, en lugar de suero humano. En este contexto, el reactivo de inmunodiagnóstico opcionalmente se puede utilizar, por ejemplo, para evaluar y normalizar el funcionamiento delos análisis de detección de T. cruzi actuales y futuros.
Éstos y realizaciones, características, aspectos, ilustraciones y ejemplos adicionales de la descripción se describen adicionalmente en las secciones que siguen. Salvo que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto normal en la técnica a la que pertenece esta descripción.
A. Definiciones
En la presentememoria, las formas singulares "un", "una", "uno" y "el" y "la" incluyen los referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Para la enumeración de los intervalos numéricos en la presente memoria, se contempla cada número intermedio con el mismo grado de precisión de forma explícita. Por ejemplo, para el intervalo de 6-9, se contemplan los números 7 y 8 además de 6 y 9, y para el intervalo de 6,0-7,0, se contemplan los números 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 y 7,0 de forma explícita.
a) Aproximadamente
Según se utiliza en la presente memoria, el término "aproximadamente" se refiere a aproximadamente una variación de +/-10% del valor establecido. Se debe entender que tal variación se incluye siempre en cualquier valor dado proporcionado en la presente memoria, se haga referencia ono a lamisma específicamente.
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Tabla 3: secuencia de polipéptido de FP3 (SEQ ID NO.: 2)
MAQLQQAENN ITNSKKEMTK LREKVKKAEK EKLDAINRAT KLEEERNQAY KAAHKAEEEK AKTFORLITF ESENINLKKR PNDAVSNRDK KKNSETAKTD EV
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El antígeno Pep2 (Kirchhoff y Otsu, 2004) es una proteína recombinante de secuencias repetidas de T. cruzi. FP6 y Tcf, polipéptidos de T. cruzi, tienen ambos el antígeno Pep2. La secuencia de polinucleótido (SEQ ID NO.: 3) y la secuencia de polipéptido (SEQ ID NO.: 4) semuestran en las Tablas 4 y 5, respectivamente.
Tabla 4: Secuencia de polinucleótido de Pep2 (SEQ ID NO.: 3)
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Tabla 5: Secuencia de polipéptido de Pep2 (SEQ ID NO: 4).
GDKPSPFGQA AAGDKPSPFG QA
10 El antígeno FP10 (Kirchhoff y Otsu, 2004) es otra proteína recombinante de secuencias repetidas de T. cruzi. Sus secuencias de polinucleótido (SEQ ID NO.: 5) y de polipéptido (SEQ ID NO.: 6) se muestran a continuación en las Tablas 6 y 7, respectivamente. La secuencia de aminoácidos del dominio I está subrayada en la Tabla 7, la secuencia de aminoácidos del dominio J está en cursiva en la Tabla 7, la secuencia de aminoácidos del dominio K
15 está en negrita en la Tabla 7 y la secuencia de aminoácidos del dominio L está con doble subrayado en la Tabla 7.
Tabla 6: Secuencia de polinucleótido de FP10 (SEQ ID NO.: 5)
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Tabla 7: Secuencia de polipéptido de FP10 (SEQ ID NO.: 6)
DPTYRFANHA FTLVASVTIH EVPSVASPLL GASLDSSGGK KLLGLSYDEK HQWQPIYGST PVTPTGSWEM GKRYHVVLTM ANKIGSVYID GEPLEGSGQT VVPDERTPDI SHFYVGGYGR SDMPTISHVT VNNVLLYNRQ LNAEEIRTLF LSQDLIGTEA HMGSSSG
SSAHGTPSIPVD
SSAHGTPSTPVD
SSAHGTPSTPVD
SSAHGTPSTPVD
SSAHGTPSTPVD
SSAHGKPSTPAD
SSAHSTPSTPAD
SSAHSTPSIPAD
SSAHSTPSAPAD
NGANGTV LILSTHDAYR PVDPSAYKRA LPOEEQEDVG PRHVDPDHFR STSTTHDAYR PVDPSAYKRA LPQEEQEDVG PRHVDPDHFR STTHDAYRPV DPSAYKRALP QEEOEDVGPR HVDPDHFRST STTHDAYRPV DPSAYKRALP QEEQEDVGPR HVDPDHFRST STTHDAYRPV DPSAYKRALP QEEQEDVGPR HVDPDHFRST THDAYRPVDP SAYKRALPQE EQEDVGPRHV DPDHFRS
El antígeno FRA es una secuencia de la proteína repetitiva flagelar (Lafaille, J. J., etc. 1989. Structure and expression of two Trypanosoma cruzi genes encoding antigenic proteins bearing repetitive epitopes. Mol Biochem Parasitol. 35:127-36), Acceso GenBank J04015, se muestra a continuación en la Tabla 8 (secuencia de polinucleótido, SEQ ID NO: 7) y 9 (secuencia de polipéptido; SEQ ID NO.: 8).
Tabla 8: Secuencia de polinucleótido de FRA (SEQ ID NO.: 7)
Tabla 9: Secuencia de polipéptido de FRA (SEQ ID NO: 8).
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Los ATC de los SEQ ID NO.: 2, 4, 6 y 8 se pueden sintetizar in vitro o expresar de forma recombinante a partir de
15 secuencias de polinucleótidos, tales como las sustancialmente similares a los SEQ ID NO.: 1, 3, 5 y 7. Debido a la redundancia en el código genético y la capacidad de los polipéptidos de los SEQ ID NO.: 2, 4, 6 y 8 para tolerar sustituciones, no se necesita que las secuencias sean idénticas para llevar a la práctica la descripción. Las identidades de las secuencias de polinucleótidos y de polipéptidos pueden variar entre aproximadamente 70% y aproximadamente 100% (especialmente de aproximadamente 90% a aproximadamente 97%), tal como
20 aproximadamente 70%, aproximadamente 75%, aproximadamente 80%, aproximadamente 81%, aproximadamente 82%, aproximadamente 83%, aproximadamente 84%, aproximadamente 85%, aproximadamente 86%, aproximadamente 87%, aproximadamente 88%, aproximadamente 89%, aproximadamente 90%, aproximadamente 91%, aproximadamente 92%, aproximadamente 93%, aproximadamente 94%, aproximadamente 95%, aproximadamente 96%, aproximadamente 97%, aproximadamente 98%, aproximadamente 99% y por supuesto,
25 aproximadamente 100%.
Los TCA se pueden sintetizar fácilmente in vitro utilizando química de polipéptidos. Por ejemplo, la síntesis de polipéptidos puede llevarse a cabo de una manera escalonada sobre un soporte en fase sólida utilizando un sintetizador de polipéptidos automático, tal como un Sintetizador de Péptidos Rainin Symphony, Sintetizador de 30 Péptidos Advanced Chemtech, un Sistema de Síntesis Argonaut Parallel, o un Sintetizador de Péptidos Applied
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Después de que el polipéptido deseado se ha sintetizado, la resina se somete a eliminación catalizada por álcali del grupo protector Fmoc restante. La resina acoplada a polipéptido se lava para eliminar la base y posteriormente se trata con ácido para eliminar cualquier grupo protector de la cadena lateral de aminoácidos y liberar la cadena polipeptídica del soporte de resina. Los ácidos útiles son ácidos fuertes, tales como ácido trifluoroacético (TFA) en presencia de captadores adecuados, tales como reactivo K [TFA: tioanisol:etanoditiol:fenol:agua (82,5:5:2,5:5:5)].
El polipéptido se separa posteriormente de la resina mediante filtración y opcionalmente se lava repetidamente con un disolvente adecuado, tal como DCM/DMF. El polipéptido se puede desalar opcionalmente a través de ultrafiltración utilizando una membrana con un corte de PM adecuado. El polipéptido puede ser precipitado de la disolución utilizando un disolvente adecuado, tal como metil t-butil éter o t-butiletileter frío, y el producto precipitado opcionalmente lavado con un disolvente adecuado, tal como éter frío y secado. El polipéptido se puede purificar adicionalmente utilizando un medio de cromatografía adecuado, tal como cromatografía hidrófoba utilizando una resina C18 y un sistema de tampón cromatográfico apropiado, tal como TFA/agua/acetonitrilo. La pureza del péptido opcionalmente se puede analizar por espectrometría de masas, tal como MALDI-MS, HPLC analítica, análisis de aminoácidos o secuenciación.
Alternativamente, los ATC de los SEQ ID NO.: 2, 4, 6, y 8 se pueden expresar de manera recombinante utilizando las secuencias de polinucleótidos de los SEQ ID NO.: 1, 3, 5 y 7 utilizando, por ejemplo, vectores de expresión. En los vectores de expresión, el ADN introducido se conecta operablemente a elementos, tales como promotores, que señalan la célula anfitriona para transcribir el ADN insertado. Algunos promotores son excepcionalmente útiles, tales como los promotores inducibles que controlan la transcripción génica en respuesta a factores específicos. Los ejemplos de los promotores inducibles incluyen aquellos que son específicos de tejido, que relegan la expresión a ciertos tipos de células, sensibles a esteroides (p. ej., glucocorticoides (Kaufman, R. J. 1990. Vectors used for expression in mammalian cells. Methods Enzymol. 185:487-511) y tetraciclina o reactivo de choque térmico. Algunos sistemas de represión bacterianos, tales como el operón lac, pueden ser explotados en células de mamíferos y animales transgénicos (Fieck, A., et al. 1992. Modifications of the E. coli lac repressor for expression in eukaryotic cells: effects of nuclear signal sequences on protein activity and nuclear accumulation. Nucleic Acids Res. 20:178591; Wyborski, D. L., L. C. DuCoeur, y J. M. Short. 1996). Parámetros que afectan al uso del sistema represor lac en células eucariotas y animales transgénicos. Environ Mol Mutagen. 28:447-58; Wyborski, D. L., y J. M. Short. 1991. Analysis of inducers of the E. coli lac repressor system in mammalian cells and whole animals. Nucleic Acids Res. 19:4647-53). Las tecnologías de ácido nucleico recombinante, la transfección a células y la expresión celular e in vitro se comentan adicionalmentemás adelante.
E. Anticuerpos recombinante
Los anticuerpos recombinantes de la presente descripción comprenden regiones de unión a antígeno derivadas de los dominios VH y/o VL de un anticuerpo nativo capaces de unirse específicamente a una proteína antigénica de T. cruzi. El anticuerpo recombinante puede ser, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal producido de manera recombinante, un fragmento de un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, una inmunoglobulina, de dominio dual variablemultiespecífica (DVD-Ig®) o estructura multivalente formada a partir de un fragmento de anticuerpo, o un anticuerpo bifuncional.
En una realización, opcionalmente, el anticuerpo recombinante es un anticuerpo que:
(1)
se une específicamente a una región relevante para el diagnóstico de un polipéptido de T. cruzi, en donde el polipéptido de T. cruzi es FRA y adicionalmente en donde dicho anticuerpo tiene al menos una constante de unión seleccionada del grupo que consiste en: una constante de velocidad de asociación (ka) entre aproximadamente 7,0 x 105 M-1s-1 y aproximadamente 7,0 x 106 M-1s-1, una constante de velocidad de disociación (Kd) entre aproximadamente 4,0 x 10-3s-1 y aproximadamente 3,0 x 10-1s-1 y una constante de disociación en equilibrio (KD) entre aproximadamente 5,7 x 10-10M y aproximadamente 4,3 x 10-7M;
(b)
se une específicamente a una región relevante para el diagnóstico de un polipéptido de T. cruzi, en donde el polipéptido de T. cruzi es Pep2 y adicionalmente en donde dicho anticuerpo tiene al menos una constante de unión seleccionada del grupo que consiste en: una constante de velocidad de asociación (ka) entre aproximadamente 1,0 x 106 M-1s-1 y aproximadamente 8,0 x 106 M-1s-1; una constante de velocidad de disociación (kd) entre aproximadamente 6,0 x 10-3s-1 y aproximadamente 4,0 x 10-2s-1 y una constante de disociación en equilibrio (KD) entre aproximadamente 7,5 x 10-10M y aproximadamente 4,0 x 10-8M;
(c)
se une específicamente a una región relevante para el diagnóstico de un polipéptido de T. cruzi, en donde el polipéptido de T. cruzi es FP10 y adicionalmente en donde dicho anticuerpo tiene al menos una constante de unión seleccionada del grupo que consiste en: (a) una constante de velocidad de asociación (ka) entre aproximadamente 5,0 x 104 M-1s-1 y aproximadamente 3,0 x 105 M-1s-1: (B) una constante de velocidad de disociación (kd) entre aproximadamente 1,0 x 10-4s-1 y aproximadamente 8,0 x 10-4s-1; y (c) una constante de disociación en equilibrio (KD) entre aproximadamente 3,3 x 10-10M y aproximadamente 1,6 x 10-8M;
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(d)
se une específicamente a una región relevante para el diagnóstico de un polipéptido de T. cruzi, en donde el polipéptido de T. cruzi es FP3 y adicionalmente en donde dicho anticuerpo tiene al menos una constante de unión seleccionada del grupo que consiste en: una constante de velocidad de asociación (ka) entre aproximadamente 2,0 x 105 M-1s-1 y aproximadamente 6,0 x 106 M-1s-1; una constante de velocidad de disociación (kd) entre aproximadamente 2,0 x 10-5s-1 y aproximadamente 8,0 x 10-4s-1; y una constante de disociación en equilibrio (KD) entre aproximadamente 3,3 x 10-12M y aproximadamente 4,0 x 10-9M; y
(e)
cualquier combinación de (a) -(d). En otra realización, opcionalmente, el anticuerpo recombinante es un anticuerpo quimérico que retiene la especificidad y la afinidad del anticuerpo monoclonal de ratón y reacciona en un formato de inmunoanálisis que mide inmunoglobulina humana. Opcionalmente, el anticuerpo quimérico de ratón-humano se dirige contra el antígeno FP3, FP6, FP10 o FRA. Opcionalmente, tal anticuerpo quimérico reacciona en un formato de inmunoanálisis existente incluyendo, pero no limitado a plataformas AxSYM®, Architect® y PRISM® de Abbott Laboratories.
La región de unión al antígeno abarcada por el anticuerpo recombinante puede incluir la secuencia de VH y/o VL completa del anticuerpo nativo, o puede comprender una o más porciones de la misma, tales como las CDR, junto con secuencias derivadas de uno o más de otros anticuerpos. En una realización, el anticuerpo recombinante comprende secuencias VH y VL completas del anticuerpo nativo.
El anticuerpo nativo del que derivan las regiones de unión al antígeno es generalmente un anticuerpo de vertebrados. Por ejemplo, el anticuerpo nativo puede ser un anticuerpo de roedor (p. ej., ratón, hámster, rata), un anticuerpo de pollo, un anticuerpo de conejo, un anticuerpo canino, un anticuerpo felino, un anticuerpo bovino, un anticuerpo equino, un anticuerpo porcino, un anticuerpo de simio (p. ej., chimpancé), o un anticuerpo humano. La fuente del anticuerpo se basa principalmente en la conveniencia. En una realización, el anticuerpo natural es un anticuerpo no humano.
El anticuerpo recombinante también puede incluir una o másregiones constantes, por ejemplo, las regiones CL, CH1, bisagra, CH2, CH3, y/o CH4, derivadas del mismo anticuerpo nativo o de un anticuerpo diferente. La región o las regiones constantes pueden derivar de un anticuerpo de una o varias especies de vertebrados, incluyendo, pero no limitadas a, las enumeradas anteriormente. En una realización, de la presente descripción, el anticuerpo recombinante comprende al menos una región constante. En otra realización, el anticuerpo recombinante comprende una o más regiones constantes que derivan de un anticuerpo humano. En una realización específica de la presente descripción, el anticuerpo recombinante comprende la región variable de un anticuerpo no humano unida a la región constante de un anticuerpo humano.
La región o las regiones constantes abarcadas por el anticuerpo recombinante pueden derivar de una o más clases de inmunoglobulinas o isotipos, por ejemplo para las regiones constantes derivadas de inmunoglobulinas humanas, la región constante puede derivar de una o más de una región constante de IgM, IgD, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 o IgE. Cuando la región constante comprende una región derivada de una cadena ligera de IgG, éste puede derivar de una cadena kappa o una cadena lambda. El anticuerpo recombinante puede comprender secuencias de más de una clase o isotipo. La selección de los dominios constantes concretos para optimizar la función deseada del anticuerpo recombinante se encuentra dentro del conocimiento práctico de la técnica. En una realización, de la presente descripción, el anticuerpo recombinante comprende uno o más dominios constantes derivados de una IgG. En otra realización, el anticuerpo recombinante comprende regiones de las cadenas tanto pesadas como ligeras de un dominio constante deIgG.
En una realización, de la presente descripción, las regiones de unión a antígeno derivan de un anticuerpo nativo que se une específicamente a un epítopo dentro de una región relevante para el diagnóstico de una proteína antigénica de T. cruzi.
En una realización específica de la presente descripción, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la totalidad o una porción de la secuencia de VH o VL como se expone en una cualquiera de los SEQ ID NO.: 10, 12, 14, 16, 18, 20, 26 o 28 (Véase la Tabla 12 a continuación; Véase la Tabla 11 a continuación para un resumen de los identificadores SEQ ID NO y las correspondientes descripciones de secuencia). En otra realización, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden regiones determinantes de complementariedad (CDR; es decir, CDR1, CDR2 y CDR3) de una secuencia VH o VL.
22
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Antígeno
Línea celular Polinucleótido VL Polipéptido VL Polinucleótido VH Polipéptido VH
FP3
HBFP3 9 10 11 12
FP6 (TcF/Pep2)
HBPep2 13 14 15 16
FP10
HBFP10 17 18 19 20
FRA
8-367-171 25 26 27 28

Tabla 12. Secuencias de Polipéptido de VH y VLilustrativas

Tabla 11. Compendio delos SEQ ID NO.: para cadenas VL y VH
SEQ ID NO.:
Secuencia VH o VL ATC
10
imagen21 VL FP3
12
imagen22 VH FP3
14
imagen23 VL FP6
16
imagen24 VH FP6
18
imagen25 VL FP10
20
imagen26 VH FP10
26
imagen27 VL FRA
28
imagen28 VH FRA
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En una realización, de la presente descripción, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a la totalidad o una porción de la secuencia de aminoácidos codificada por uno cualquiera de los SEQ ID NO.: 9, 11, 13 , 15, 17, 19, 25 o 27 (Véase la Tabla 13, a continuación). En otra realización, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden una 5 secuencia de ácido nucleico que codifica regiones determinantes de la complementariedad (CDR; es decir, CDR1, CDR2 y CDR3) de una secuencia VH o VL. En una realización específica, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden las CDR que tienen una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a las secuencias de aminoácidos codificadas por uno o más de los SEQ ID NO: 9 y 11;. uno o más de los SEQ ID NO.: 13 y 15; o uno o más de los SEQ ID NO.: 17 y 19; o uno o más de los SEQ ID NO.: 25 o 27 (Véase la Tabla 13, a
10 continuación).
En otra realización específica de la presente descripción, las regiones de unión a antígeno del anticuerpo recombinante comprenden una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de ácido nucleico sustancialmente idéntica a la totalidad o una porción de la secuencia expuesta en uno cualquiera de los SEQ ID
15 NO.: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 25 o 27.
Tabla 13: Secuencias de ácido nucleicoilustrativas que codifican secuencias VH y VL
SEQ ID NO.:
Secuencia VH o VL ATC
9
imagen29 VL FP3
imagen30
imagen31 imagen32 imagen33
11
imagen34 VH FP3
13
imagen35 VL FP6
15
imagen36 VH FP6
24
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SEQ ID NO.:
Secuencia VH o VL ATC
imagen37
imagen38 imagen39 imagen40
17
imagen41 VL FP10
imagen42
imagen43 imagen44 imagen45
19
imagen46 VH FP10
25
imagen47 VL FRA
27
imagen48 VH FRA
25
imagen49
imagen50
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  1. imagen1
    imagen2
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