ES2495790B2

ES2495790B2 - Composición bionematicida y método para elcontrol de nemátodos fitopatógenos utilizando lamisma.

Info

Publication number: ES2495790B2
Application number: ES201430112A
Authority: ES
Inventors: Paulo ESCOBAR VALDÉS; Eduardo DONOSO CUEVAS; Gustavo LOBOS PRATS
Original assignee: BIO INSUMOS NATIVA SpA
Current assignee: BIO INSUMOS NATIVA SpA
Priority date: 2013-01-30
Filing date: 2014-01-30
Publication date: 2016-11-24
Anticipated expiration: 2034-01-30
Also published as: PE20141942A1; BR102014002336A2; CL2013000307A1; ES2495790R1; ES2495790A2; US9468215B2; DOP2014000019A; MX2014001251A; MX348626B; CO7020175A1; US20140212376A1; CR20140060A; BR102014002336B1; UY35292A

Abstract

La invención se refiere a una composición bionematicida con acción de amplio espectro sobre nemátodos fitopatógenos pertenecientes los géneros Meloidogyne, Tylenchulus, Pratylenchus, Paratylenchus y Xiphinema entre otros, la cual se caracteriza por contener una o más cepas bacterianas formadoras de endosporas con actividad nematicida de Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765). La invención también se refiere a un método para el control de nemátodos fitopatógenos utilizando dicha composición.

Description

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incognita, en plantas de tomate en maceta, en comparación con el nematicida químico organofosforado de nombre comercial Furadan, a la dosis recomendada por el fabricante.

La Figura 7 es un gráfico, donde se aprecia el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de 2.5 g/l equivalente a 5 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional.

La Figura 8 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la población de Meloidogyne arenaria, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

La Figura 9 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la población de Pratylenchus sp., en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

La Figura 10 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional de Meloidogyne arenaria, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

La Figura 11 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional de Pratylenchus sp, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo en un suelo franco arenoso.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIÓN

En la presente invención, se entenderá por:

Nemátodos fitopatógenos: Aquellas eespecies de nemátodos que parasitan y se alimentan de plantas vivas, en las que producen una gran variedad de enfermedades.

Nematicida: Aquel agente con capacidad de matar nemátodos.

Bionematicida: Se refiere al agente, de origen biológico, con capacidad de matar nemátodos.

Biocontrolador: Organismos vivo con capacidad de disminuir la presencia o daño de plagas y enfermedades. Entre ellos se pueden encontrar animales, hongos, bacterias y virus.

Tasa intrínseca de reproducción: Tasa de incremento poblacional neta de los nematodos fitoparasitos.

Nodulación de raíces: Generación de crecimientos alterados y desordenados en raíces de plantas afectadas por nemátodos del genero Meloydogine.

Vehículo agronómicamente aceptable: Se refiere a cualquier excipiente apropiado para preparar y/o aplicar las composiciones bionematicidas de la invención.

5 EJEMPLOS DE REALIZACIÓN:

Ejemplo 1: Aislamiento de las cepas con actividad bionematicida a partir de suelos chilenos.

Para el aislamiento de las cepas, se tomaron muestras de suelos agrícolas y de ambientes silvestres desde extremo norte (Región de Parinacota), hasta Cochrane. Las muestras

10 fueron procesadas por métodos rutinarios para la extracción de nemátodos, los que fueron observados por microscopia óptica, seleccionándose aquellos que presentaran alteraciones en su cutícula (capa externa de piel). Estos se sembraron en medios selectivos para bacterias, a partir de los cuales estas se purificaron y posteriormente se cultivaron en forma aislada, para su evaluación.

15 Ejemplo 2: Preparación de la composición bionematicida.

La fórmula evaluada a nivel de campo, consistió en una mezcla de esporas obtenidas a partir de la fermentación en medio líquido de forma independiente de las cepas Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765), aisladas a partir de suelos

20 chilenos según el Ejemplo 1, y utilizando las mismas en proporciones iguales.

Los cultivos de cada cepa individual se monitorearon hasta alcanzar alrededor de un 70 – 90%, preferentemente un 80% de esporulación en el cultivo, cada cepa en cultivo, de forma individual; se secó por aspersión y aplicación de calor, sobre un portador apropiado (tal como caolín, talco, y similares) luego de lo cual, se realiza un conteo de población de

25 esporas viables a través de la siembra de diluciones seriadas en agar nutriente. Una vez obtenida las concentraciones reales de cada cultivo, en unidades formadoras de colonias (ufc) luego del proceso de secado, se prepara la mezcla final, añadiendo un sustrato inerte tal como zeolita, talco, caolinita o harinas vegetales, hasta alcanzar una concentración óptima de 1x108 ufc/g, o en su entorno. Esta mezcla se le denominó BFE.

30 Ejemplo 3: Evaluación de bacterias formadoras de esporas con actividad nematicida en condiciones in vivo, sobre 4 especies de nemátodos fitopatógenos.

En placas Petri con 10 ml de agua estéril, se agregaron 80 individuos de Meloidogyne incognita en estado J2, sobre los cuales se aplicaron los diferentes tratamientos, consistentes en las 3 cepas Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765) por separado, y la mezcla de las mismas (BFE), añadiendo 1 ml de una suspensión de esporas en una matriz de arcilla, a una concentración de 108 ufc/g de cada una de las cepas a distintas dosis (tratamientos con 0 (control), 0.5, 1, 1.5 y 3 g/l de la suspensión). Las placas se incubaron durante 72 horas en agitación, luego de lo cual se determinó la población de J2 sobrevivientes y se observó la presencia de endosporas adheridas a los estados juveniles de los nemátodos fitopatógenos.

El mismo procedimiento se realizó para los nemátodos Tylenchulus semipenetrans, utilizando en este caso 450 J2/placa y Pratylenchus sp, utilizando 120 J2 /placa.

Los resultados obtenidos a partir de estos experimentos se muestran en la Figura 1. Como se observa en las mismas, todas las cepas bacterianas, lograron reducir las poblaciones de los nemátodos ensayados de forma significativa, en comparación con el control sin tratamiento, observándose un claro efecto dependiente de la dosis. De manera sorprendente se observa que la mezcla de las cepas, logra disminuir, también de forma significativa y mostrando un efecto sinérgico, las poblaciones de los nemátodos fitopatógenos, diferenciándose de los tratamientos con las cepas utilizadas en forma aislada, en especial en las concentraciones más bajas.

Ejemplo 4: Control Meloidogyne incognita mediante una mezcla de bacterias con actividad nematicida (BFE), en comparación con hongos nematófagos, bajo condiciones controladas de suelo arenoso.

Plantas de tomate cv. Patrón® de 4 semanas de edad se trasplantaron a macetas de 8 litros, con un sustrato estéril compuesto por arena, compost, perlita y turba 2:1:1:1, generando un suelo de textura arcillosa.

Tres días antes del trasplante, cada maceta con el respectivo tratamiento se inoculo con 2000 huevos de Meloidogyne incognita.

Los tratamientos empleados se referencian en la siguiente Tabla 1:

Tabla 1

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Control positivo (+): Tratamiento testigo con solo aplicación de los nemátodos

Control negativo (-): Tratamiento testigo sin presencia de nemátodos o agente de control

Mezcla BFE: Aplicación de mezcla de bacterias nematicidas en una dosis de 1.5 g/l, equivalente a 3 kg/ha

Diterra ®: Producto disponible comercialmente obtenido a partir del hongo Myrothecium verrucaria. Dosis recomendada por el fabricante equivalente a 4 kg/ha

Micosplag: Producto disponible comercialmente, obtenido a partir de los controladores biológicos Metarhizium anisopliae cepa Cenicafe Ma 9236, Bauveria bassiana cepa Cenicafe Bb 9205 y Paecilomyces lilacinus Cenicafe Pl9301, en dosis de 300 g/ha.

Luego de transcurridas 8 semanas a partir de la aplicación de los tratamientos, se determinó la población de M. incognita desarrollada en cada maceta con su respectivo tratamiento utilizando para ello un Embudo de Baermann, determinando además el nivel de nodulación en las raíces, así como el peso aéreo y radicular de las plantas.

5 Se observó que la aplicación de la mezcla BFE, logró disminuir en forma significativa, el tamaño (Figura 2) y la tasa de crecimiento (Figura 3) de la población de Meloidogyne, diferenciándose significativamente, tanto del control positivo, así como de los productos biológicos comerciales empleados, encontrándose que solamente el tratamiento con BFE logra tasas negativas de crecimiento poblacional. Así mismo se logra una disminución

10 importante del porcentaje de nódulos (P/P) en el tratamiento con BFE, diferenciándose del control positivo, así como de los controladores biológicos comerciales (P< 0,01), y sin mostrar diferencias significativas con el control negativo, equivalente a un suelo sin nemátodos (Figura 4).

En cuanto al impacto sobre el desarrollo de las plantas, la mezcla BFE mostró niveles de

15 desarrollo vegetativo de las plantas similares a las condiciones de ausencia de nemátodos (control -), diferenciándose significativamente tanto del control + como de los productos comerciales (P< 0,05) (Figura 5).

Ejemplo 5. Control de Meloidogyne incognita por la mezcla de bacterias con actividad nematicida (BFE), en comparación con un nematicida químico, bajo condiciones controladas de suelo franco.

En este ensayo en campo se utilizó una población de Meloidogyne incognita identificada por cortes perineales obtenida del predio de Colin, empleándose también la misma variedad de tomate cv. María Italia.

Plantas de 4 semanas de edad se trasplantaron a macetas de 10 litros, con un sustrato estéril compuesto por arena, compost, perlita y turba 1:2:2:2, generándose un sustrato de textura franca, que se corresponde con un suelo con características intermedias entre arcilloso y arenoso.

Tres días antes del trasplante, cada maceta con su respectivo tratamiento se inoculó con 2000 individuos de Meloidogyne incognita en estado juvenil (J2), representando un nivel de infección medio alto

Los siguientes tratamientos se aplicaron inmediatamente después del trasplante.

-Control negativo (-): Solo suelo estéril

-Control positivo (+): Inoculación con nemátodos

-Mezcla BFE en dosis de 50 ml/planta, a una concentración de 2.5 g/litro (1x108 esporas/g). Equivalente a 5 kg/ha.

-Control químico, Furadan® 3 ml/100 ml/maceta, equivalente a la dosis comercial de 45 l/ha

Las aplicaciones de los tratamientos se realizaron inmediatamente después de trasplante, 2 horas después se inoculo cada planta, con 3000 J2 de M. incognita, esto representando un nivel de infección muy alto, con el objetivo de incrementar la exigencia sobre los productos y realizar una mejor evaluación de su eficacia.

Las evaluaciones se realizaron 12 semanas después de la aplicación de los diferentes tratamientos, consistentes en mediciones de la población y tasa de crecimiento poblacional. El índice de nodulación se calculó sobre la base de lo establecido en la siguiente Tabla 2.

Tabla 2

Índice de nodulación: Porcentaje

0: Sin presencia de nódulos

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Claims

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