ES2495790A2 - Composición bionematicida y método para el control de nemátodos fitopatógenos utilizando la misma. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a una composición bionematicida con acción de amplio espectro sobre nemátodos fitopatógenos pertenecientes los géneros Meloidogyne, Tylenchulus, Pratylenchus, Paratylenchus y Xiphinema entre otros, la cual se caracteriza por contener una o más cepas bacterianas formadoras de endosporas con actividad nematicida de Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765). La invención también se refiere a un método para el control de nemátodos fitopatógenos utilizando dicha composición.

Description

imagen1

COMPOSICIÓN BIONEMATICIDA Y MÉTODO PARA EL CONTROL DE NEMÁTODOS

FITOPATÓGENOS UTILIZANDO LA MISMA

DESCRIPCIÓN

La presente invención se relaciona con el campo de la biotecnología, y en particular se refiere a una composición bionematicida con acción de amplio espectro sobre nemátodos fitopatógenos que comprende una o más cepas bacterianas aisladas de suelos chilenos pertenecientes al género Bacillus, y al método de utilización de esta composición para la protección de las plantas contra el ataque de nemátodos.

Antecedentes de la Invención

Entre las plagas que afectan el sector agrícola y ganadero, los nemátodos son responsables de pérdidas considerables en muchos cultivos a escala mundial (Rojas, T.: "Análisis económico sobre diferentes alternativas de combate a nemátodos en el cultivo de arroz (Oryza sativa)". Alcances Tecnológicos, Rev. del Instituto Nacional de Innovación y Transferencia en tecnología agropecuaria. 1 (1): 21-24). Si añadimos que, además del daño directo que estos organismos ocasionan, muchas veces dejan puertas de acceso para el establecimiento de hongos, bacterias y virus, estos daños pudieran alcanzar magnitudes mayores.

Entre los nemátodos fitopatógenos, los del género Meloidogyne son considerados los de mayor importancia económica a nivel mundial por los daños que causan, caracterizados por una reducción notable de los rendimientos y el gran número de especies de plantas que atacan, que incluye la mayoría de los vegetales, viandas, frutales, ornamentales y flora arvense (Trudgill, D. L. y Blok, V. C.: "Apomictic polyphagous root-knot nematodes: exepcionally successful and damaging biotrophic root pathogens". Ann. Rev. Phytopathol.,

39: 53-77, 2001).

Aunque hoy se tiene claro el daño potencial que los nemátodos representan para la agricultura en general, todavía existen dificultades con relación a su control. Tradicionalmente se han usado diferentes alternativas de control dirigidas a reducir y/o eliminar las poblaciones de nemátodos (Berkelaar, E.: "Métodos de Manejo de Nemátodos". ECHO Notas de Desarrollo, 75: 1-6, 2002). Durante muchos años, se han empleado de manera irracional una amplia gama de nematicidas químicos, muchos de los cuales son biocidas de impacto negativo sobre los organismos beneficiosos presentes en el suelo. Asimismo, el impacto nocivo que estos causan a la salud humana y el ambiente en general, han limitado su uso a nivel mundial (Labrada, R. y Fornasari, L. (Eds): "Global Report on Validated Alternatives to the Use of Methyl Bromide for Soil Fumigation". FAO-UNEP, 86 p., 2001; Braga, R.; Labrada, R.; Fornasari, L. y Fratini, N. "Manual para la Capacitación de Trabajadores de Extensión y Agricultores -Alternativas al Bromuro de Metilo para la Fumigación de los Suelos". Unidad de Acción para el Ozono y la Energía, PNUMA-FAO, Roma, 74 p., 2003).

imagen2

El control biológico de plagas abarca el fortalecimiento del control natural, la introducción de especies no nativas y el uso de plaguicidas derivados de animales, plantas, hongos, bacterias y virus para prevenir, repeler, eliminar o bien reducir el daño causado por las plagas (Carballo, M. y Guaharay, F. (Eds.): "Control Biológico de Plagas Agrícolas". Serie Técnica, Manual Técnico Centro Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza, 53: 224, 2004).

No obstante su efectividad, los bioplaguicidas constituyen solamente un pequeño por ciento del mercado mundial de plaguicidas, aspecto al que cada se le está dando cada día más importancia, pues el uso de organismos biológicos constituye una alternativa más amigable con el ambiente y en el caso particular de los nemátodos parásitos de plantas, aunque numerosos microorganismos son sus antagonistas y constituyen el grupo principal de bioplaguicias, muy pocos de ellos están comercialmente disponibles, debido fundamentalmente a los resultados inconsistentes obtenidos en la producción masiva y aplicación de los mismos (Meyer, Susan y Roberts, D. P.: "Combinations of Biocontrol Agents for Management of Plant-Parasitic Nematodes and Soilborne Plant-Pathogenic Fungi". Journal of Nematology, 34(1):1–8, 2002).

Entre los principales grupos microbianos con potencialidades como agentes de control biológico de nemátodos se encuentran las bacterias y los hongos, destacándose entre ellos, Pasteuria penetrans (Thorne) Sayre y Starr Ciancio, A.; Carbonell, E. y Crozzoli, R. "Ecología y biodiversidad de Pasteuria spp., antagonistas naturales de nematodos fitoparasíticos". Fitopatología Venezolana, 11(1): 1-9, 1999; Rojas, M. T. y Marban-Mendoza, N.: "Pasteuria penetrans. Adherencia y parasitismo en Meloidogyne incognita y Meloidogyne arabicida". Nematropica, 29: 233-240, 1999; Giannakou, I. O.; Gowen, S. R. y Davies, K. G.: "Aspects on the attachment of Pasteuria penetrans on root-knot nematodes". Russian Journal of Nematology, 10: 25-31, 2002), Tsukamurella paurometabola (Steinhaus) cepa C924, recientemente registrado como el bionematicida HeberNem® (Cuadra, R. y BernalB.: "Lucha contra plagas y enfermedades. Alternativas apropiadas de la Agricultura Urbana". En: Curso de Agricultura Urbana, p. 121-139. Agencia Española de Cooperación Internacional-INIFAT. La Habana, 1997; Fernández, E.: "Susceptibilidad de variedades de papa (Solanum tuberosum, L.) ante poblaciones cubanas de Meloidogyne spp.". Fitosanidad, 3(3): 109-112, 1999; Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson (Jonathan, E I.; Arulmozhiyan, R.; Muthusamy, S. y Manuel, W. W.: "Field application of Paecilomyces lilacinus for the control of Meloidogyne incognita on betelvine, Piper betle". Nematol. Medit., 28(2): 131-133, 2000; Schenck, S.: "Control of Nematodes in Tomato with Paecilomyces lilacinus Strain 251". Hawaii Agriculture Research Center, Vegetable Report, (5): 5, 2004), del que se encuentran productos comerciales como: Biostat (Laverlam), Bioact, PL plus y Paecyl (Holland, R. J.: "PAECIL", 2001. http://www.ticorp.com.au/article1.htm. (consultado mayo 2004; 136. Holland, R. J.; Williams, K. L. y Khan, A.: "Infections of the interaction of Paecylomices lilacinus with Meloidoyne incognita". Nematology, 1: 131-139, 1999; 137. López, J. A.: "Control Biológico de Nematodos Parásitos de Plantas". En: Control Biológico de Plagas Agrícolas (Caraballo, M. y Guaharay, F. Eds): 185-200. Serie Técnica, Manual Técnico Centro Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza, 53, 2004; 138. Dong, L.

imagen3

Q. y Zhang, K. Q.: "Microbial control of plant-parasitic nematodes: a five party interaction". Plant Soil, 288: 31-45, 2006) y P. chlamydosporia (Goddard) Zare y W. Gams (ex Verticillium chlamydosporium Goddard) (Kerry, B. R.: "Exploitation of the Nematophagous Fungus Verticillium chlamydosporium Goddard for the Biological Control of Root-knot Nematodes (Meloidogyne spp.)". En: Fungi as Biocontrol Agents: Progress, Problems and Potential (Butt, T. M.; Jackson, C y. Magan, N, Eds). CABI International, Wallingford. Chapter 5: 155168, 2001), con la cepa IMI SD 187 de P. chlamydosporia var. catenulata se ha logrado una tecnología de reproducción masiva, transferible para el desarrollo de otros hongos como ACB, que ha permitido la obtención del producto bionematicida denominado KlamiC® (Hernández, M. A. y Hidalgo-Díaz, L.: "KlamiC: Bionematicida agrícola producido a partir del hongo Pochonia chlamydosporia var. catenulata". Rev. Protección Veg., 23(2): 131-134, 2008). Además, aparece como producto comercial de Valent Biosciences Corporation (ex Abbott Laboratories) el bionematicida DiTera( cuyo ingrediente activo lo constituyen el hongo Myrothecium verrucaria Ditm. y todos los productos (solubles y sólidos) resultados de su fermentación (Gullino, M. y Benuzzi, M.: "Mezzi biologici e prodotti di origine naturale per la difesa dai parassiti terricoli". Informatore Fitopatologico, 10: 51-57, 2003; 142. López, J. A.: "Control Biológico de Nematodos Parásitos de Plantas". En: Control Biológico de Plagas Agrícolas (Caraballo, M. y Guaharay, F. Eds): 185-200. Serie Técnica, Manual Técnico Centro Agronómico Tropical de Investigación y Enseñanza, 53, 2004).

imagen4

El estado de la técnica muestra un número cada vez mayor de documentos de patentes que se están publicando acerca de la utilización de bionematicidas para el control de estas plagas. Entre estos se pueden citar los siguientes:

-WO2007149817: COMBINATIONS OF BIOLOGICAL CONTROL AGENTS WITH A NEMATICIDAL SEED COATING, a nombre de UNIV CALIFORNIA;

-WO2012020014: NEMATOCIDAL COMPOSITION COMPRISING BACILLUS SUBTILIS AND BACILLUS LICHENIFORMIS, a nombre de CHR HANSEN AS;

-CN101054565: BIOLOGICAL CONTROL STRAIN CAPABLE OF PREVENTING AND CURING ROOT KNOT NEMATODE DISEASE FOR GREENHOUSE VEGETABLE, a nombre de UNIV NANJING AGRICULTURAL;

-CN101884326: PREPARATION AND APPLICATION TECHNOLOGY FOR WAXY BACILLUS SUSPENSION AGENT, a nombre de ZHIGAO ZHANG; XIAOGEN YIN;

-EP1046338: NEMATICIDE AGENT AND METHOD FOR THE BIO-CONTROL OF NEMATODES, a nombre del CENTRO DE INGENIERIA GENETICA Y BIOTECNOLOGIA;

-MX2010002412: STRAIN OF BACILLUS SUBTILIS FOR AGRICULTURAL USE, a nombre de ADNTES LAB SA DE C V;

-WO2011121408: BACTERIAL STRAINS AND A BIONEMATICIDE AND PLANT GROWTH STIMULATOR CONTAINING THEM, a nombre de PROBELTE SA.

-US20120003197: Bacillus isolates and methods of their use to protect against plant pathogens and virus transmission, a nombre de MONTANA STATE UNIVERSITY; y

-WO2012038480: Use of biological or chemical control agents for controlling insects and nematodes in resistant crops, a nombre de BAYER CROPSCIENCE AG; entre otros.

Si bien se puede concluir que es ampliamente conocida en el estado de la técnica la utilización de diferentes cepas bacterianas, y específicamente del género Bacillus, para el control de nemátodos en plantas, debe también tenerse en cuenta que la búsqueda de nuevas cepas contra estas plagas sigue siendo de gran interés para los agrónomos que se enfrentan a diario con la necesidad del control eficaz de los nemátodos en los cultivos de interés, empleando para ello agentes nematicidas que no sean tóxicos ni para las plantas a las cuales se aplican ni para los usuarios de los mismos.

imagen5

Sumario de la Invención

La presente invención tiene como objetivo proporcionar una composición bionematicida, destinada al control de nematodos fitopatógenos en plantas cultivadas agrícolas y forestales, ornamentales, de uso doméstico y plantas silvestres, la cual es activa principalmente frente de nemátodos de los géneros Meloidogyne, Tylenchulus, Pratylenchus, Paratylenchus y Xiphinema, entre otros.

La composición bionematicida de la invención se obtiene utilizando al menos una cepa perteneciente a un grupo de cepas bacterianas aisladas a partir de suelos chileno, y pertenecientes al género Bacillus, específicamente las bacterias Bacillus cereus cepa Peumo, depositada en el banco de cepas ARS USDA bajo el número de acceso NRRL B50767, Bacillus cereus cepa Bromelia, depositada en el banco de cepas ARS USDA bajo el número de acceso NRRL B-50766 y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla, depositada en el banco de cepas ARS USDA bajo el número de acceso NRRL B-50765, o los productos de fermentación de las mismas, y un vehículo agronómicamente aceptable.

En una modalidad preferida de la invención, la composición bionematicida presenta una o más de dichas cepa en forma de esporas.

En otra modalidad preferida, la composición bionematicida utiliza un excipiente agronómicamente aceptable que se selecciona del grupo que consiste de arcillas, caolín, talco, zeolita, agua, aceites vegetales y minerales parafínicos o no parafínicos.

La invención también se refiere a formulaciones de la composición bionematicida en forma de una cápsula, un cebo, un concentrado, una emulsión, una suspensión, una tableta, un gel, una pasta, un gel emulsionable, un granulado dispersable, un macro granulado, un micro granulado, un polvo, una solución u otra formulación apropiada para su aplicación.

Se prevé también como parte del concepto inventivo de la solución técnica propuesta, el uso de la composición para el control de diferentes nemátodos fitopatógenos.

Otro objeto de la presente invención involucra un método para el control de nemátodos fitopatógenos, en el cual primeramente se formula la composición bionematicida que comprende las mencionadas cepas, y posteriormente dicha formulación se aplica sobre las plantas o partes o semillas de las mismas, donde se desee realizar dicho control.

Las composiciones de la invención, que comprenden tanto las cepas en forma individual como sus posibles mezclas y formulaciones, permiten el control de plagas sin el uso de insecticidas químicos convencionales, las cuales, por sus características, no presenta restricciones ambientales y pueden utilizarse en producción agrícola, convencional, orgánica

imagen6

o ser utilizadas en cualquier otro sistema de certificación.

Breve descripción de las Figuras:

La presente invención y su importancia serán más evidentes a partir de los resultados que 5 se obtienen con la misma, y que se demuestran en los ejemplos de realización y se ilustran en las figuras que se acompañan, donde:

La Figura 1 es un gráfico, que muestra el efecto nematicida de las distintas cepas y su mezcla (BFE) en dosis de 0.5 a 3 g/l, sobre las poblaciones de estado juvenil (J2) de Tylenchulus semipenetrans, en condiciones in vitro, donde se observa que todas las cepas

10 poseen acción nematicida en dosis superiores a 0.5 g/l, proporcionando el tratamiento con la mezcla BFE, la mayor mortalidad a menores dosis.

La Figura 2 es un gráfico que muestra el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de

1.5 g/l equivalente a 3 kg/ha, sobre la población final del estado juvenil (J2) de Meolidogyne

incognita, en plantas de tomate en maceta, en comparación con productos disponibles 15 comercialmente, obtenidos a partir de hongos biocontroladores de nemátodos.

La Figura 3 es un gráfico, que muestra el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de

1.5 g/l, equivalente a 3 kg/ha sobre la tasa intrínseca de crecimiento (LN, población final/población inicial) de Meolidogyne incognita, en plantas de tomate en maceta, en comparación con productos disponibles comercialmente, obtenidos a partir de hongos

20 biocontroladores de nemátodos, donde se observa que la mezcla BFE es capaz de lograr tasas negativas de crecimiento poblacional.

La Figura 4 es un gráfico, que muestra el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de

1.5 g/l, sobre el porcentaje de raíces afectadas por nódulos de Meolidogyne incognita, en

plantas de tomate en maceta, en comparación con productos disponibles comercialmente, 25 obtenidos a partir de hongos biocontroladores de nemátodos.

La Figura 5 es un gráfico, que muestra el efecto de la BFE, sobre el peso aéreo y radicular de plantas de tomate cultivadas en maceta, bajo condiciones controladas, inoculadas con Meloidogyne incognita, donde se observa que el mismo constituye el único tratamiento que logra niveles de desarrollo vegetativo de las plantas, superiores al control positivo

30 (inoculado) y niveles de desarrollo similares a una condición sin nemátodos.

La Figura 6 es un gráfico, que muestra el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de

2.5 g/l equivalente a 5 kg/ha, sobre la población final, del estado juvenil (J2) de Meolidogyne incognita, en plantas de tomate en maceta, en comparación con el nematicida químico organofosforado de nombre comercial Furadan, a la dosis recomendada por el fabricante.

imagen7

La Figura 7 es un gráfico, donde se aprecia el efecto nematicida de la mezcla BFE en dosis de 2.5 g/l equivalente a 5 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional.

5 La Figura 8 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la población de Meloidogyne arenaria, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

La Figura 9 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la población de Pratylenchus sp., en plantas de tomate cultivadas en condiciones de

10 campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

La Figura 10 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional de Meloidogyne arenaria, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo, en un suelo franco arenoso.

15 La Figura 11 es un gráfico, que muestra el efecto de la mezcla BFE a una dosis de 3 kg/ha, sobre la tasa de crecimiento poblacional de Pratylenchus sp, en plantas de tomate cultivadas en condiciones de campo, con y sin el uso de bromuro de metilo en un suelo franco arenoso.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCIÓN

20 En la presente invención, se entenderá por:

Nemátodos fitopatógenos: Aquellas eespecies de nemátodos que parasitan y se alimentan de plantas vivas, en las que producen una gran variedad de enfermedades.

Nematicida: Aquel agente con capacidad de matar nemátodos.

Bionematicida: Se refiere al agente, de origen biológico, con capacidad de matar 25 nemátodos.

Biocontrolador: Organismos vivo con capacidad de disminuir la presencia o daño de plagas y enfermedades. Entre ellos se pueden encontrar animales, hongos, bacterias y virus.

Tasa intrínseca de reproducción: Tasa de incremento poblacional neta de los nematodos 30 fitoparasitos.

imagen8

Nodulación de raíces: Generación de crecimientos alterados y desordenados en raíces de plantas afectadas por nemátodos del genero Meloydogine.

Vehículo agronómicamente aceptable: Se refiere a cualquier excipiente apropiado para preparar y/o aplicar las composiciones bionematicidas de la invención.

5 EJEMPLOS DE REALIZACIÓN:

Ejemplo 1: Aislamiento de las cepas con actividad bionematicida a partir de suelos chilenos.

Para el aislamiento de las cepas, se tomaron muestras de suelos agrícolas y de ambientes silvestres desde extremo norte (Región de Parinacota), hasta Cochrane. Las muestras

10 fueron procesadas por métodos rutinarios para la extracción de nemátodos, los que fueron observados por microscopia óptica, seleccionándose aquellos que presentaran alteraciones en su cutícula (capa externa de piel). Estos se sembraron en medios selectivos para bacterias, a partir de los cuales estas se purificaron y posteriormente se cultivaron en forma aislada, para su evaluación.

15 Ejemplo 2: Preparación de la composición bionematicida.

La fórmula evaluada a nivel de campo, consistió en una mezcla de esporas obtenidas a partir de la fermentación en medio líquido de forma independiente de las cepas Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765), aisladas a partir de suelos

20 chilenos según el Ejemplo 1, y utilizando las mismas en proporciones iguales.

Los cultivos de cada cepa individual se monitorearon hasta alcanzar alrededor de un 70 – 90%, preferentemente un 80% de esporulación en el cultivo, cada cepa en cultivo, de forma individual; se secó por aspersión y aplicación de calor, sobre un portador apropiado (tal como caolín, talco, y similares) luego de lo cual, se realiza un conteo de población de

25 esporas viables a través de la siembra de diluciones seriadas en agar nutriente. Una vez obtenida las concentraciones reales de cada cultivo, en unidades formadoras de colonias (ufc) luego del proceso de secado, se prepara la mezcla final, añadiendo un sustrato inerte tal como zeolita, talco, caolinita o harinas vegetales, hasta alcanzar una concentración óptima de 1x108 ufc/g, o en su entorno. Esta mezcla se le denominó BFE.

30 Ejemplo 3: Evaluación de bacterias formadoras de esporas con actividad nematicida en condiciones in vivo, sobre 4 especies de nemátodos fitopatógenos.

imagen9

En placas Petri con 10 ml de agua estéril, se agregaron 80 individuos de Meloidogyne incognita en estado J2, sobre los cuales se aplicaron los diferentes tratamientos, consistentes en las 3 cepas Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765) por separado, y la mezcla de las mismas (BFE), añadiendo 1 ml de una suspensión de esporas en una matriz de arcilla, a una concentración de 108 ufc/g de cada una de las cepas a distintas dosis (tratamientos con 0 (control), 0.5, 1, 1.5 y 3 g/l de la suspensión). Las placas se incubaron durante 72 horas en agitación, luego de lo cual se determinó la población de J2 sobrevivientes y se observó la presencia de endosporas adheridas a los estados juveniles de los nemátodos fitopatógenos.

El mismo procedimiento se realizó para los nemátodos Tylenchulus semipenetrans, utilizando en este caso 450 J2/placa y Pratylenchus sp, utilizando 120 J2 /placa.

Los resultados obtenidos a partir de estos experimentos se muestran en la Figura 3. Como se observa en las mismas, todas las cepas bacterianas, lograron reducir las poblaciones de los nemátodos ensayados de forma significativa, en comparación con el control sin tratamiento, observándose un claro efecto dependiente de la dosis. De manera sorprendente se observa que la mezcla de las cepas, logra disminuir, también de forma significativa y mostrando un efecto sinérgico, las poblaciones de los nemátodos fitopatógenos, diferenciándose de los tratamientos con las cepas utilizadas en forma aislada, en especial en las concentraciones más bajas.

Ejemplo 4: Control Meloidogyne incognita mediante una mezcla de bacterias con actividad nematicida (BFE), en comparación con hongos nematófagos, bajo condiciones controladas de suelo arenoso.

Plantas de tomate cv. Patrón® de 4 semanas de edad se trasplantaron a macetas de 8 litros, con un sustrato estéril compuesto por arena, compost, perlita y turba 2:1:1:1, generando un suelo de textura arcillosa.

Tres días antes del trasplante, cada maceta con el respectivo tratamiento se inoculo con 2000 huevos de Meloidogyne incognita.

Los tratamientos empleados se referencian en la siguiente Tabla 1:

Tabla 1

imagen10

imagen11

Control positivo (+)

Tratamiento testigo con solo aplicación de los nemátodos

Control negativo (-)

Tratamiento testigo sin presencia de nemátodos o agente de control

Mezcla BFE

Aplicación de mezcla de bacterias nematicidas en una dosis de 1.5 g/l, equivalente a 3 kg/ha

Diterra ®

Producto disponible comercialmente obtenido a partir del hongo Myrothecium verrucaria. Dosis recomendada por el fabricante equivalente a 4 kg/ha

Micosplag

Producto disponible comercialmente, obtenido a partir de los controladores biológicos Metarhizium anisopliae cepa Cenicafe Ma 9236, Bauveria bassiana cepa Cenicafe Bb 9205 y Paecilomyces lilacinus Cenicafe Pl9301, en dosis de 300 g/ha.

Luego de transcurridas 8 semanas a partir de la aplicación de los tratamientos, se determinó la población de M. incognita desarrollada en cada maceta con su respectivo tratamiento utilizando para ello un Embudo de Baermann, determinando además el nivel de nodulación en las raíces, así como el peso aéreo y radicular de las plantas.

5 Se observó que la aplicación de la mezcla BFE, logró disminuir en forma significativa, el tamaño (Figura 2) y la tasa de crecimiento (Figura 3) de la población de Meloidogyne, diferenciándose significativamente, tanto del control positivo, así como de los productos biológicos comerciales empleados, encontrándose que solamente el tratamiento con BFE logra tasas negativas de crecimiento poblacional. Así mismo se logra una disminución

10 importante del porcentaje de nódulos (P/P) en el tratamiento con BFE, diferenciándose del control positivo, así como de los controladores biológicos comerciales (P< 0,01), y sin mostrar diferencias significativas con el control negativo, equivalente a un suelo sin nemátodos (Figura 4).

En cuanto al impacto sobre el desarrollo de las plantas, la mezcla BFE mostró niveles de

15 desarrollo vegetativo de las plantas similares a las condiciones de ausencia de nemátodos (control -), diferenciándose significativamente tanto del control + como de los productos comerciales (P< 0,05) (Figura 5).

imagen12

Ejemplo 5. Control de Meloidogyne incognita por la mezcla de bacterias con actividad nematicida (BFE), en comparación con un nematicida químico, bajo condiciones controladas de suelo franco.

En este ensayo en campo se utilizó una población de Meloidogyne incognita identificada por cortes perineales obtenida del predio de Colin, empleándose también la misma variedad de tomate cv. María Italia.

Plantas de 4 semanas de edad se trasplantaron a macetas de 10 litros, con un sustrato estéril compuesto por arena, compost, perlita y turba 1:2:2:2, generándose un sustrato de textura franca, que se corresponde con un suelo con características intermedias entre arcilloso y arenoso.

Tres días antes del trasplante, cada maceta con su respectivo tratamiento se inoculó con 2000 individuos de Meloidogyne incognita en estado juvenil (J2), representando un nivel de infección medio alto

Los siguientes tratamientos se aplicaron inmediatamente después del trasplante.

-Control negativo (-): Solo suelo estéril

-Control positivo (+): Inoculación con nemátodos

-Mezcla BFE en dosis de 50 ml/planta, a una concentración de 2.5 g/litro (1x108 esporas/g). Equivalente a 5 kg/ha.

-Control químico, Furadan® 3 ml/100 ml/maceta, equivalente a la dosis comercial de 45 l/ha

Las aplicaciones de los tratamientos se realizaron inmediatamente después de trasplante, 2 horas después se inoculo cada planta, con 3000 J2 de M. incognita, esto representando un nivel de infección muy alto, con el objetivo de incrementar la exigencia sobre los productos y realizar una mejor evaluación de su eficacia.

Las evaluaciones se realizaron 12 semanas después de la aplicación de los diferentes tratamientos, consistentes en mediciones de la población y tasa de crecimiento poblacional. El índice de nodulación se calculó sobre la base de lo establecido en la siguiente Tabla 2.

Tabla 2

Índice de nodulación

Porcentaje

0

Sin presencia de nódulos

imagen13

1

Entre 1-10% p/p de nódulos

2

Entre 11-30% p/p de nódulos

3

Entre 31-50% p/p de nódulos

4

Entre 51-70% p/p de nódulos

5

Entre < 70% p/p de nódulos

En este ensayo, se pudo apreciar, que la mezcla BFE logró reducir significativamente, tanto la población de Meloidgyne P<0,05 (Figura 6), como su tasa de crecimiento P< 0,05 (Figura 7), siendo incluso superior a la lograda por el nematicida químico Furadan. En cuanto al efecto sobre las raíces, se aprecia en la Figura 8, una reducción significativa de la

5 nodulación, P<0,01.

La siguiente Tabla 3 resume del efecto de la mezcla BFE sobre el índice de nodulación en plantas de tomate cultivadas en maceta, causados por Meolidogyne incognita, en comparación con el nematicida químico organofosforado de nombre comercial Furadan, a la dosis recomendada por el fabricante.

10 Tabla 3

Índice de Tratamiento nodulación

Control + 5,000 a

Control -0,000 c

Furadan 3,150 ab

BFE 1,430 c

Ejemplo 6. Evaluación de bacterias nematicidas sobre poblaciones del nemátodo fitoparásito Meloidogyne en tomate, en condiciones de campo en suelo franco arenoso.

15 Condiciones:

Predio La capilla Boco, Quillota.

Temporada 2010-2011 En el sector destinado al ensayo, se utilizó una zona sin bromuración y otra bromurada, lo que determinó los bloques del diseño, esto con el fin de comparar la eficacia del producto de la invención con el producto comercial con mayor eficiencia presente en el mercado actualmente.

imagen14

En cada bloque se realizaron los siguientes tratamientos.

T1: Control (sin aplicaciones)

T2: Pasteuria penetrans cepa 97 (Pp.97, el cual se empleó como control positivo con una agente bionematicida.

T3: Mezcla BFE 3 kg/ha

T4 Vydate ® (oxamilo) 500 ml/100 l , el cual se empleó como control positivo con un agente nematicida químico.

Las aplicaciones se realizaron con bomba de espalda, a través del bañando de las raíces.

Cada tratamiento constó de 5 repeticiones, empleándose 12 plantas para cada tratamiento.

Se determinaron las poblaciones iniciales (n° de juveniles por 250 g de suelo) de los nemátodos Meloidogyne arenaria y Pratylenchus sp., predominantes en el huerto, al momento de aplicar los tratamientos y al final en la cosecha.

Los datos obtenidos a partir del estudio realizado en las poblaciones de los nemátodos indican que tanto en los casos del uso de bromuro, como sin el uso de éste, los tratamientos con Pasteuria penetrans cepa 97 y la mezcla BFE, así como Vydate ®, lograron disminuir en forma significativa, las poblaciones de Meloidogyne arenaria, siendo el tratamiento con la mezcla BFE, el que presentó la mayor reducción de las poblaciones, mostrando diferencias significativas con respecto a los tratamientos químicos como biológicos.

Al comparar las poblaciones finales, con y sin el uso de bromuro, se aprecia interacción entre tratamientos y uso de bromuro (P <0,05), es interesante desatacar, que todos los tratamientos disminuyeron en forma significativa las poblaciones de nemátodos, superando incluso, la eficacia del bromuro, siendo el tratamiento con la mezcla BFE el que logra el mejor nivel de control en combinación con bromuro y que es capaz de lograr por sí misma, los mismos niveles de control que este, observándose el mismo comportamiento tanto para Meloydigyne como para Pratyolenchus, siendo este último el que siempre exhibió las mayores poblaciones.

imagen15

En este caso, la tasa de crecimiento sin bromuro (Figura 9), indica una clara tendencia a la disminución de las poblaciones de nemátodos.

Claims (6)

1. imagen1

   1.

   Una composición bionematicida, CARACTERIZADA porque comprende al menos dos cepas seleccionadas a partir del grupo que consiste de Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765), o los productos de fermentación de las mismas, y un vehículo agronómicamente aceptable.

2. 2.

   La composición de la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque dichas al menos dos cepas seleccionadas a partir del grupo que consiste de Bacillus cereus cepa Peumo (NRRL B-50767), Bacillus cereus cepa Bromelia (NRRL B-50766) y Bacillus thuringiensis cepa Anemophyla (NRRL B-50765), se encuentran en forma de esporas.

3. 3.

   La composición de la reivindicación 1, CARACTERIZADA porque dicho excipiente agronómicamente aceptable se selecciona del grupo que consiste de arcillas, caolín, talco, zeolita, agua, aceites vegetales y minerales parafínicos o no parafínicos.

4. 4.

   Una formulación que comprende la composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADA porque es en forma de una cápsula, un cebo, un concentrado, una emulsión, una suspensión, una tableta, un gel, una pasta, un gel emulsionable, un granulado dispersable, un macrogranulado, un microgranulado, un polvo o una solución.

5. 5.

   Uso de la composición de las reivindicaciones 1 a 3 o la formulación de la reivindicación 4, CARACTERIZADA porque sirve para el control de nemátodos fitopatógenos.

6. 6.

   Método para el control de nemátodos fitopatógenos, CARACTERIZADO porque comprende las etapas de:

   -formular la composición bionematicida de las reivindicaciones 1 a 3; y

   -aplicar dicha formulación sobre las plantas o partes o semillas de las mismas, donde se desee realizar el control.

   16